KR102515209B1 - 바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물 - Google Patents
바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
바실러스 코아귤런스를 포함하는 프로바이오틱-알코올 음료 조성물이 본 명세서에 제공되고, 여기서 바실러스 코아귤런스의 포자 또는 영양 세포는 양조 후에 포자 또는 영양 세포의 높은 회수성, 내성, 상용성 및 생존력을 보인다. 또한, 바실러스 코아귤런스를 포함하는 알코올 음료 조성물의 양조 방법이 제공되고, 발효 전, 발효 동안 또는 발효 후에 포자 또는 박테리아가 첨가된다.
Description
(관련 출원의 상호 참조)
본 출원은 2017년 9월 21일에 출원된 인도 가출원 번호 IN201741033477로부터 우선권을 주장하는 PCT 출원이다.
본 발명은 일반적으로 프로바이오틱스에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스를 포함하는 알코올 음료 조성물 및 상기 알코올 음료를 양조(brewing)하는 방법에 관한 것이다.
프로바이오틱스는 다양한 건강상의 이점을 제공한다. 이들은 위장 감염, 염증성 장 질환, 급성 및 만성 설사, 변비, 비정상적인 장 발효, 장내 세균 불균형(dysbiosis), 기능성 복통(functional abdominal pain), 유당 불내증(lactose intolerance), 알러지, 비뇨 생식기 감염, 낭성 섬유증(cystic fibrosis), 대사 장애, 다양한 암과 같은 다양한 질병의 효과적인 관리, 항생제 부작용 감소; 충치, 치주 질환 및 구강 악취의 예방과 같은 구강 건강, 좋은 장 환경 유지 및 유해 박테리아를 감소시켜 장내 세균총(intestinal flora)의 균형을 유지하기 위한 식이 보충제로 투여된다(Goldin BR (1998) Health benefits of probiotics, The British Journal of Nutrition 80(4):S203-7; Singh et al., (2013) Role of probiotics in health and disease: a review, JPMA. The Journal of the Pakistan Medical Association, 63(2):253-25).
과다한 알코올을 섭취하면 건강에 부작용이 있다는 사실에도 불구하고, 사교, 휴식 및 즐기기의 구실로 알코올 소비가 증가하고 있다. 알코올은 몇 가지 중요한 비타민을 포함하여 영양소의 장 흡수를 방해함으로써 장에 영향을 미친다. 또한, 연구에서 알코올은 장의 점막 면역 시스템을 상당히 조절하는 것이 보고되었다(Bode et al.,(2003) Effect of alcohol consumption on the gut, Best Practice & Research Clinical Gastroenterology; 17(4):575-592). 또한, 알콜 섭취는 장내 미생물총(gut microflora)을 변형시켜, 장내 미생물(gut microbe)이 전반적인 건강에 제공하는 유익한 효과를 무효화시킨다(Bob Roehr, 2016, Drinking Causes Gut Microbe Imbalance Linked to Liver Disease, The Scientific American, https://www.scientificamerican.com/article/drinking-causes-gut-microbe-imbalance-linked-to-liver-disease/, accessed 10 September 2018).
장내 미생물총에 대한 알코올의 효과를 역전시키기 위한 많은 노력이 있었다. 프로바이오틱 보충제는 장 미생물을 회복시키고, 알코올 유도된 간 손상 및 간 독성에 대해 살아 있는 효소를 개선시키는데 효과적인 것으로 밝혀졌다(Kirpich et al. (2008) Probiotics restore bowel flora and improve liver enzymes in human alcohol-induced liver injury: a pilot study; Alcohol; 42(8):675-682). 장내 미생물총에서 맥주 섭취에 대한 유해한 효과를 막기 위해 프로바이오틱스를 포함하는 맥주도 개발되었다(SG 10201702468S, PROBIOTIC SOUR BEER). 그러나, 프로바이오틱스를 갖는 알코올 음료를 개발하는 것은, 산성 조건의 존재가 프로바이오틱스의 성장 및 생존을 방해하기 때문에 어려운 작업이다. 또한, 유해한 조건을 유지하는 프로바이오틱의 성질은 프로바이오틱스를 함유하는 알코올 음료를 개발하는데 주요한 역할을 한다. 프로바이오틱스를 함유하는 알코올 음료의 개발에 적합한 프로바이오틱 균주를 찾는 산업적 요구가 여전히 충족되지 않고 있다. 본 발명은 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 포자 및 영양 세포(vegetative cell)의 회수성(recovery), 내성(tolerability), 상용성 및 생존력이 증가된 바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물 및 이를 양조하는 방법을 개시함으로써 상기 문제를 해결한다.
본 발명의 주요 목적은 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물을 개시하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물을 양조하는 방법을 개시하는 것이다.
본 발명은 상기 목적을 해결하고, 다른 관련 이점들을 제공한다.
본 발명은 포자 또는 박테리아의 형태로 바실러스 코아귤런스를 포함하는 알코올 음료 조성물을 개시하고, 상기 포자 또는 박테리아는 양조 후 포자 및 영양 세포의 높은 회수성, 내성, 상용성 및 생존력을 보인다. 또한, 본 발명은 바실러스 코아귤런스를 포함하는 알코올 음료 조성물을 양조하는 방법을 개시하고, 상기 포자 또는 박테리아는 발효 전, 발효 동안 또는 발효 후 단계에서 첨가된다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 본 발명의 원리를 예를 들어 설명하는 첨부 된 이미지와 관련하여 다음의 보다 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다.
도 1a는 음료의 양조 시에 맥아 제조 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 1b는 음료의 양조 시에 맥아 제조 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 2a는 음료의 양조 시에 홉 첨가 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 2b는 음료의 양조 시에 홉 첨가 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 3a는 음료의 양조 시에 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 3b는 음료의 양조 시에 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 4a는 음료의 양조 시에 2차 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 4b는 음료의 양조 시에 2차 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 5a는 음료의 양조 시에 탄산화 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 5b는 음료의 양조 시에 탄산화 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 6a는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 6b는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 7a는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 25 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 7b는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 25 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 8a는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 40 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 8b는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 40 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 1b는 음료의 양조 시에 맥아 제조 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 2a는 음료의 양조 시에 홉 첨가 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 2b는 음료의 양조 시에 홉 첨가 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 3a는 음료의 양조 시에 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 3b는 음료의 양조 시에 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 4a는 음료의 양조 시에 2차 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 4b는 음료의 양조 시에 2차 발효 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 5a는 음료의 양조 시에 탄산화 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 5b는 음료의 양조 시에 탄산화 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 6a는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 6b는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 단계에서 첨가되는 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 7a는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 25 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 7b는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 25 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
도 8a는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 40 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 안정성을 보여주는 그래프이다.
도 8b는 음료의 양조 시에 포장 및 저온 살균 후 탄산화 단계에서 첨가되는 40 ℃의 알코올 음료에서의 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스의 생존력 퍼센트를 보여주는 그래프이다.
가장 바람직한 양태에서, 본 발명은 포자 또는 박테리아의 형태로 바실러스 코아귤런스를 포함하는 알코올 음료 조성물을 개시하고, 상기 포자 또는 박테리아는 양조 후 포자 및 영양 세포의 높은 회수성, 내성, 상용성 및 생존력을 보인다. 관련 양태에서, 알코올 음료는 발효 또는 증류된다. 다른 관련 양태에서, 알코올 음료는 탄산화 및 비-탄산화된다.
또 다른 관련 양태에서, 발효된 알코올 음료는 맥주, 에일, 발리 와인(Barleywine), 비터 에일(Bitter ale), 브라운 에일(Brown ale), 캐스크 에일(Cask ale), 마일드 에일(Mild ale), 올드 에일(Old ale), 페일 에일(Pale ale), 스카치 에일(Scotch ale), 포터(Porter), 스타우트(Stout), 스탁 에일(Stock ale), 과일 맥주, 맥주, 라거(Lager), 페일 라거(Pale lager), 보크(Bock), 메르첸(Maerzen)/옥토버페스트 맥주, 필스너(Pilsener), 슈바르츠비어(Schwarzbier), 샤흐티(Sahti), 스몰 비어(Small beer), 위트 비어(Wheat beer), 윗비어(Witbier), 카우임(Cauim), 치차(Chicha), 사이다(Cider), 페리(Perry), 플럼 제르쿰(Plum jerkum), 데시 다루(Desi daru), 황주(Huangjiu), 이카린 리쿠어(Icariine Liquor), 카시리(Kasiri), 킬주(Kilju), 쿠미스(Kumis), 미드(Mead), 니하만치(Nihamanchi), 야자주(Palm wine), 파라카리(Parakari), 풀케(Pulque), 사쿠라(Sakura), 사케, 손티(Sonti), 떼빠체(Tepache), 티스윈(Tiswin), 톤토(Tonto), 와인(Wine), 강화 와인(Fortified wine), 포트(Port), 마데이라(Madeira), 마르살라(Marsala), 셰리주(Sherry), 베르무트 빈산토(Vermouth Vinsanto), 과일 와인(Fruit wine), 테이블 와인(Table wine), 상그리아(Sangria), 스파클링 와인, 및 샴페인으로 이루어진 군에서 선택되지만, 이에 한정되지 않는다.
다른 관련 양태에서, 증류된 알코올 음료는 스프리츠(Spirits), 압생트(Absinthe), 아크바비트(Akvavit), 에플 잭(Applejack), 아라크(Arak), 아라크주(Arrack), 아와모리(Awamori), 백주(Baijiu), 보로비츠카(Borovicka), 브랜디(Brandy), 아르마냑(Armagnac), 꼬냑(Cognac), 과일 브랜디(Fruit brandy), 오드비(Eau-de-vie) (프랑스), 스넵스(Schnapps) - 옵스트워서(Obstwasser) (독일), 다마신(Damassine), 힘베르가이스트(Himbeergeist), 키르시(Kirsch), 푸아르 윌리엄(Poire Williams), 윌리암(Williamine), 카샤사(Cachaca), 진(Gin), 담슨 진(Damson gin), 슬로 진(Sloe gin), 호리카(Horilka), 고량주(Kaoliang), 마오타이주(Maotai), 메탁사(Metaxa), 메스칼(Mezcal), 중성 주정(Neutral grain spirit), 오고고로(Ogogoro), 우조(Ouzo), 팔링카(Palinka), 피스코(Pisco), 포친(Poitin), 라키(Raki), 라키아(Rakia), 슬리보비츠(Slivovitz), 럼주(Rum), 쇼추(Shochu), 신가니(Singani), 소주(Soju), 데킬라(Tequila), 추이카(Tuica), 보드카(Vodka), 위스키(Whisky), 버번 위스키(Bourbon whiskey), 캐나다 위스키(Canadian whisky), 아이리쉬 위스키(Irish whiskey), 일본 위스키(Japanese whisky), 맹스 스프리츠(ManX Spirit), 라이 위스키(Rye whiskey), 스카치 위스키(Scotch whisky), 테네시 위스키(Tennessee whiskey), 및 리큐어(Liqueur)로 이루어진 군에서 선택되지만, 이에 한정되지 않는다.
다른 양태에서, 음료 조성물 중 알코올 함량은 1% 내지 43%이다.
일 양태에서, 바실러스 코아귤런스 균주는 바람직하게는 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)이고, 바실러스 코아귤런스 ATCC 31248 및 바실러스 코아귤런스 ATCC 7050으로부터 유래된 균주이고, 상기 바실러스 코아귤런스의 살아 있는 포자/영양 세포는 알코올 음료 내에 1 × 106 내지 1 × 1012 cfu의 농도로 존재한다.
다른 바람직한 양태에서, 알코올 음료 및 바실러스 코아귤런스를 함유하는 조성물은 위장 감염, 염증성 장 질환, 급성 및 만성 설사, 변비, 비정상적인 장 발효, 장내 세균 불균형(dysbiosis), 기능성 복통(functional abdominal pain), 유당 불내증(lactose intolerance), 알러지, 비뇨 생식기 감염, 낭성 섬유증(cystic fibrosis), 대사 장애, 다양한 암과 같은 질병으로 이루어진 군에서 선택되지만, 이에 한정되지 않는 질병의 치료적 관리, 항생제 부작용 감소; 충치, 치주 질환 및 구강 악취의 예방과 같은 구강 건강, 좋은 장 환경 유지 및 유해 박테리아를 감소시켜 장내 세균총의 균형을 유지하는데 사용된다.
다른 바람직한 양태에서, 본 발명은 바실러스 코아귤런스로 알코올 음료를 양조하는 방법이 개시되고, 상기 방법은,
a) 맥아 제조(Malting) 단계;
b) 담금(Mashing) 단계;
c) 여과 단계;
d) 주전자 끓임(Kettle boiling) 단계;
e) 홉(Hop) 첨가 단계;
f) 냉각 단계;
g) 효모로 발효시키는 단계;
h) 숙성 및 정화(Ageing and clarification) 단계;
i) 2차 발효 단계;
j) 탄산화(Carbonation)/비-탄산화(No carbonation) 단계;
k) 저온 살균 및 포장 단계;를 포함한다.
관련 측면에서, 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 발효 전, 발효 동안 또는 발효 후 단계에서 첨가된다. 다른 관련 측면에서, 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 단계 a)에서 발효 전 단계에서 첨가된다. 다른 관련 측면에서, 상기 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 단계 e)에서 발효 전 단계에서 첨가된다. 다른 관련 측면에서, 상기 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 단계 g)에서 발효 단계 동안에 첨가된다. 다른 관련 측면에서, 상기 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 단계 i)에서 2차 발효 단계 동안에 첨가된다. 다른 관련 측면에서, 상기 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 단계 j)에서 발효 후 단계에서 첨가된다. 다른 관련 측면에서, 상기 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 단계 k)에서 발효 후 단계에서 첨가된다.
또 다른 관련 측면에서, 상기 알코올 음료는 단계 i) 후에 60 ℃에서 저온 살균한 후, 바실러스 코아귤런스의 포자를 첨가한 후 탄산화/비-탄산화 단계가 이어진다.
다른 관련 측면에서, 상기 바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포는 발효 과정에 걸쳐 증가된 생존력 및 안정성을 보인다.
하기에 본 명세서에 포함되는 특정 실시예는 본 발명의 가장 바람직한 양태를 나타낸다.
실시예 1: 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스를 함유하는 알코올 음료 조성물
방법: 킹피셔(Kingfisher)에서 제조된 현지 시장에서의 맥주(비어) 샘플 및 맥도웰스 넘버원(McDowell's No.1)으로부터 위스키를 구했다. 마일드 라거(Mild lager), 라거, 및 스트롱 비어(strong Beer)에서의 알코올 함량은 각각 3.345%, 3.48% 및 4.81%였다. 위스키에서, 알코올 함량은 42.8%였다. 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856) (미국, 뉴저지 Sabinsa Corporation의 LactoSpore®로 시판되는)를 맥주 및 위스키에 첨가했다. 비어 샘플을 탄산화하고, 120 ml의 용기에 포장하고, 국제 의약품 규제 조화 위원회의 가이드라인(ICH 가이드라인 Q1A (R2) (ICH 2003))에 따라 안정성 연구를 실시했다. 샘플에 대한 설명은 시각 및 관능 방법에 기초하여 수행했다. 비중 및 pH는 각각 미국 약전 챕터 USP <841> 및 <791>에 따라 결정했다. 다른 호기성 미생물 수를 변형된 USP <61> 방법에 따라 시험했다. 효모 및 곰팡이 수, 대장균(Escherichia coli), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 및 살모넬라(Salmonella spp)를 USP 방법 챕터 <61> 및 <62>에 따라 시험했다. USP 챕터 <2021>에 따른 장내세균(Enterobacteriaceae) 시험 및 BAM, 챕터 4에 따른 대장균형(Coliform) 시험을 수행했다.
표 1 및 표 2는 표준 혼합 평판법(standard pour plate method)에 의해 측정된 알코올 음료에서의 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856) 포자의 회수성 및 내성을 개시한다.
[표 1] 표준 혼합 평판법에 의해 측정된 알코올 음료에서의 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856) 포자의 회수성 및 내성
맥주의 1회 제공량(Serving size)은 650 ml이고, 위스키의 1회 제공량은 100 ml이다. ND는 수행되지 않음을 의미한다.
[표 2] 유동 세포 분석법(Flow Cytometry)에 의해 측정된 알코올 음료에서의 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856) 포자의 회수성 및 내성
맥주의 1회 제공량은 650 ml이고, 위스키의 1회 제공량은 100 ml이다. ND는 수행되지 않음을 의미한다.
또한, 다양한 알코올 음료에서 프로바이오틱 조성물의 안정성을 측정하기 위해 실온에서 안정성 연구(25 ± 2 ℃, 60% ± 5% 상대 습도) 및 가속화 조건(40 ± 2 ℃, 65% ± 5% 상대 습도)을 수행했다. 표 3-10은 프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)을 함유하는 알코올 음료의 안정성 연구를 기재한다.
[표 3] 40 ± 2 ℃, 65% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-마일드 라거 비어의 안정성 연구
[표 4] 40 ± 2 ℃, 65% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-라거 비어의 안정성 연구
[표 5] 40 ± 2 ℃, 65% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-스트롱 라거 비어의 안정성 연구
[표 6] 40 ± 2 ℃, 65% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-위스키의 안정성 연구
[표 7] 25 ± 2 ℃, 60% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-마일드 라거 비어의 안정성 연구
[표 8] 25 ± 2 ℃, 60% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-라거 비어의 안정성 연구
[표 9] 25 ± 2 ℃, 60% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-스트롱 라거 비어의 안정성 연구
[표 10] 25 ± 2 ℃, 60% ± 5% 상대 습도에서 프로바이오틱-위스키(배치: FT/WHL/02)의 안정성 연구
알코올 음료(맥주 및 위스키)의 안정성 연구의 결과는, 프로바이오틱 군주 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 혼입이 실온(25 ± 2 ℃, 60% ± 5% 상대 습도) 및 가속화된 조건(40 ± 2 ℃, 65% ± 5% 상대 습도)에서 저장 시에 그 상용성 및 안정성을 암시하는 비중, pH 및 알코올 함량에 영향을 미치지 않는다는 것을 시사한다.
또한, 미생물 파라미터의 어떠한 유의미한 변화가 관측되지 않았으며, 이는 프로바이오틱 알코올 음료가 미생물 프로파일을 변화시키지 않음을 시사한다.
실시예 2: 프로바이오틱을 갖는 알코올 음료를 양조하는 방법
프로바이오틱 박테리아 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 다양한 방법이 여기에 개시된다.
방법 1: 발효 전 단계에서 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 맥아 제조 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 1]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 맥아 제조 단계에서 첨가될 때 증가된 안정성(도 1a) 및 생존력(도 1b)을 보이는 것을 나타낸다.
방법 2: 홉 첨가 단계에서, 발효 전 단계에서 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 홉 첨가 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 2]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 홉 첨가 단계에서 첨가될 때 증가된 안정성(도 2a) 및 생존력(도 2b)을 보이는 것을 나타낸다.
방법 3: 발효 동안 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 발효 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 3]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 발효 단계에서 첨가될 때 증가된 안정성(도 3a) 및 생존력(도 3b)을 보이는 것을 나타낸다.
방법 4: 2차 발효 단계 동안 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 2차 발효 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 4]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 2차 발효 단계에서 첨가될 때 증가된 안정성(도 4a) 및 생존력(도 4b)을 보이는 것을 나타낸다.
방법 5: 탄산화 단계에서, 발효 후 단계에서 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 탄산화 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 5]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 탄산화의 발효 후 단계에서 첨가될 때 증가된 안정성(도 5a) 및 생존력(도 5b)을 보이는 것을 나타낸다.
방법 6: 포장 및 저온 살균 단계에서, 발효 후 단계에서 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 포장 및 저온 살균 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 6]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 포장 및 저온 살균의 발효 후 단계에서 첨가될 때 증가된 안정성(도 6a) 및 생존력(도 6b)을 보이는 것을 나타낸다.
방법 7: 발효 후 단계에서 바실러스 코아귤런스의 첨가
하기 흐름도는 포장 및 저온 살균 단계에서 바실러스 코아귤런스를 첨가함으로써 알코올 음료를 양조하는 방법이 기재된다.
[흐름도 7]
바실러스 코아귤런스의 포자/영양 세포의 안정성 및 생존력을 시험했다. 결과는, 바실러스 코아귤런스가 발효 후 단계에서 첨가될 때 25 ℃ (도 7a) 및 40 ℃ (도 8a)에서 증가된 안정성 및 25 ℃ (도 7b) 및 40 ℃ (도 8b)에서 생존력을 보이는 것을 나타낸다.
상기 결과는, 바실러스 코아귤런스가 전체 발효 과정 동안 안정하고 살아 있으며, 알코올 음료와 함께 첨가되는 최초의 프로바이오틱인 것을 나타낸다.
본 출원에서 언급되는 수탁번호 SBC37-01 (MTCC 5856)을 보유한 생물학적 재료 바실러스 코아귤런스 SBC37-01의 기탁은 인도 찬디가르-160036 섹터 39-에이 CSIR-미생물 기술 연구소 미생물 표준균주 콜렉션 & 유전자 은행(MTCC)에서 2013년 9월 19일에 수행되었다.
본 발명은 바람직한 양태를 참조하여 기재되지만, 본 발명은 이에 제한되지 않는 것이 당업자에게 명백하게 이해될 것이다. 대신, 본 발명의 범위는 오직 첨부되는 청구항과 함께 해석되어야 한다.
Claims (18)
- 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)으로 알코올 음료를 양조(brewing)하는 방법으로서,
상기 방법은,
a) 맥아 제조(Malting) 단계;
b) 담금(Mashing) 단계;
c) 여과 단계;
d) 주전자 끓임(Kettle boiling) 단계;
e) 홉(Hop) 첨가 단계;
f) 냉각 단계;
g) 효모로 발효시키는 단계;
h) 숙성 및 정화(Ageing and clarification) 단계;
i) 2차 발효 단계;
j) 탄산화(Carbonation)/비-탄산화(No carbonation) 단계;
k) 저온 살균 및 포장 단계;를 포함하고,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자(spore)/영양 세포(vegetative cell)는 발효 전, 발효 동안 또는 발효 후 단계에서 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 삭제
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 단계 a)에서 발효 전 단계에서 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 단계 e)에서 발효 전 단계에서 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 단계 g)에서 발효 단계 동안에 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 단계 i)에서 2차 발효 단계 동안에 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 단계 j)에서 발효 후 단계에서 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 단계 k)에서 발효 후 단계에서 첨가되는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 알코올 음료는 단계 i) 후에 60 ℃에서 저온 살균한 후, 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자를 첨가한 후 탄산화/비-탄산화 단계가 이어지는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 포자/영양 세포는 발효 과정에 걸쳐 증가된 생존력 및 안정성을 보이는 것인, 알코올 음료를 양조하는 방법.
- 제1항에 기재된 방법에 의해 수득되는 알코올 음료 조성물로서,
포자 또는 박테리아 형태의 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)을 포함하고,
상기 포자 또는 박테리아는 양조 후 포자 및 영양 세포의 높은 회수성, 내성, 상용성 및 생존력을 보이는 것인, 알코올 음료 조성물.
- 제11항에 있어서,
상기 알코올 음료는 발효 또는 증류되고, 탄산화 및 비-탄산화되는 것인, 알코올 음료 조성물.
- 제11항에 있어서,
발효된 알코올 음료는 맥주, 에일, 발리 와인(Barleywine), 비터 에일(Bitter ale), 브라운 에일(Brown ale), 캐스크 에일(Cask ale), 마일드 에일(Mild ale), 올드 에일(Old ale), 페일 에일(Pale ale), 스카치 에일(Scotch ale), 포터(Porter), 스타우트(Stout), 스탁 에일(Stock ale), 과일 맥주, 맥주, 라거(Lager), 페일 라거(Pale lager), 보크(Bock), 메르첸(Maerzen)/옥토버페스트 맥주, 필스너(Pilsener), 슈바르츠비어(Schwarzbier), 샤흐티(Sahti), 스몰 비어(Small beer), 위트 비어(Wheat beer), 윗비어(Witbier), 카우임(Cauim), 치차(Chicha), 사이다(Cider), 페리(Perry), 플럼 제르쿰(Plum jerkum), 데시 다루(Desi daru), 황주(Huangjiu), 이카린 리쿠어(Icariine Liquor), 카시리(Kasiri), 킬주(Kilju), 쿠미스(Kumis), 미드(Mead), 니하만치(Nihamanchi), 야자주(Palm wine), 파라카리(Parakari), 풀케(Pulque), 사쿠라(Sakura), 사케, 손티(Sonti), 떼빠체(Tepache), 티스윈(Tiswin), 톤토(Tonto), 와인(Wine), 강화 와인(Fortified wine), 포트(Port), 마데이라(Madeira), 마르살라(Marsala), 셰리주(Sherry), 베르무트 빈산토(Vermouth Vinsanto), 과일 와인(Fruit wine), 테이블 와인(Table wine), 상그리아(Sangria), 스파클링 와인, 및 샴페인으로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 알코올 음료 조성물.
- 제11항에 있어서,
증류된 알코올 음료는 스프리츠(Spirits), 압생트(Absinthe), 아크바비트(Akvavit), 에플 잭(Applejack), 아라크(Arak), 아라크주(Arrack), 아와모리(Awamori), 백주(Baijiu), 보로비츠카(Borovicka), 브랜디(Brandy), 아르마냑(Armagnac), 꼬냑(Cognac), 과일 브랜디(Fruit brandy), 오드비(Eau-de-vie) (프랑스), 스넵스(Schnapps) - 옵스트워서(Obstwasser) (독일), 다마신(Damassine), 힘베르가이스트(Himbeergeist), 키르시(Kirsch), 푸아르 윌리엄(Poire Williams), 윌리암(Williamine), 카샤사(Cachaca), 진(Gin), 담슨 진(Damson gin), 슬로 진(Sloe gin), 호리카(Horilka), 고량주(Kaoliang), 마오타이주(Maotai), 메탁사(Metaxa), 메스칼(Mezcal), 중성 주정(Neutral grain spirit), 오고고로(Ogogoro), 우조(Ouzo), 팔링카(Palinka), 피스코(Pisco), 포친(Poitin), 라키(Raki), 라키아(Rakia), 슬리보비츠(Slivovitz), 럼주(Rum), 쇼추(Shochu), 신가니(Singani), 소주(Soju), 데킬라(Tequila), 추이카(Tuica), 보드카(Vodka), 위스키(Whisky), 버번 위스키(Bourbon whiskey), 캐나다 위스키(Canadian whisky), 아이리쉬 위스키(Irish whiskey), 일본 위스키(Japanese whisky), 맹스 스프리츠(ManX Spirit), 라이 위스키(Rye whiskey), 스카치 위스키(Scotch whisky), 테네시 위스키(Tennessee whiskey), 및 리큐어(Liqueur)로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 알코올 음료 조성물.
- 제11항에 있어서,
상기 알코올의 함량은 1% 내지 43%인 것인, 알코올 음료 조성물.
- 삭제
- 제11항에 있어서,
상기 바실러스 코아귤런스 SBC37-01 (MTCC 5856)의 살아 있는 포자는 알코올 음료 내에 1 × 106 내지 1 × 1012 cfu의 농도로 존재하는 것인, 알코올 음료 조성물.
- 제11항에 있어서,
상기 조성물은 위장 감염, 염증성 장 질환, 급성 및 만성 설사, 변비, 비정상적인 장 발효, 장내 세균 불균형(dysbiosis), 기능성 복통(functional abdominal pain)의 예방, 또는 유해 박테리아를 감소시켜 좋은 장 환경 유지에 유용한 것인, 알코올 음료 조성물.
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Legal Events
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| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
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| E902 | Notification of reason for refusal | ||
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