KR102164506B1

KR102164506B1 - 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102164506B1
Application number: KR1020190016224A
Authority: KR
Inventors: 김대익; 김동섭; 성낙윤; 한인준; 엄지; 박상윤; 박지현
Original assignee: 한국프라임제약주식회사
Priority date: 2019-02-12
Filing date: 2019-02-12
Publication date: 2020-10-13
Also published as: KR20200098288A

Abstract

본 발명은 미선나무 잎 추출물, 청각 추출물, 들깨 잎 추출물로 이루어진 천연추출복합물을 함유하여 피부 세포 재생 효과, 아토피성 피부염 억제 효과, 주름개선 및 미백 효과를 갖도록 한 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물에 관한 것으로, 이를 위해 본 발명은, 미선나무 잎 추출물 75.0 - 94.5중량%, 청각 추출물 0.5 - 5.0중량% 및 들깨 잎 추출물 5.0 - 20.0중량%로 구성되는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물을 제공한다.

Description

천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물{A cosmetic composition for skin regeneration containing a natural extract compound}

본 발명은 미선나무 잎 추출물, 청각 추출물, 들깨 잎 추출물로 이루어진 천연추출복합물을 함유하여 피부 세포 재생 효과, 아토피성 피부염 억제 효과, 주름개선 및 미백 효과를 갖도록 한 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질 중 콜라겐은 생체 단백질 중 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 피부, 뼈 및 치아에 포함되는 대부분의 유기 물질을 형성하는데, 특히 피부의 진피에 대부분이 존재한다. 콜라겐의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 결합력, 세포 접착의 지탱, 세포 분화의 유도 등이 있다. 따라서 콜라겐은 상처 치유에서도 중요한 역할을 담당하며, 손상된 상피에서 콜라겐의 합성을 촉진시키면 상처를 흉터 없이 신속하게 회복시킬 수 있다.

최근에는 콜라겐의 생성을 촉진시켜 피부를 재생시키기 위한 연구가 활발히 진행되고 있는데, 그 연구의 일환으로 한국 등록특허 제10-1337392호에 '돈지 및 죽염을 함유하는 피부재생용 조성물'이 개시되어 있다.

위 기술은 돈지 및 죽염을 유효성분으로 함유하여 피부와 관련된 질병에 효과적이고, 콜라겐 생성 촉진을 통해 피부 재생능을 갖도록 한 조성물에 관한 것이다.

그러나 위와 같은 기술은 인체에 대한 안전성 검증이 제대로 확보되지 않아 인체에 적용할 경우 부작용을 수반할 가능성이 대단히 높았으며, 특히 피부의 주름개선 또는 피부 미백과 같은 미용적 측면에서의 작동 인자가 존재하지 않아 관련 기작이 이루어지지 않음은 물론이고, 콜라겐 합성을 통한 피부 재생 기능마저도 치료 부위의 피부 조직이 소실되거나 특정 알레르기 질환을 앓고 있는 사용자에게는 치료와 관련된 효능 자체가 작동되지 않는 문제점이 발견되었다.

한국 등록특허 제10-1337392호(2013.11.29. 돈지 및 죽염을 함유하는 피부재생용 조성물) 한국 등록특허 제10-1355385호(2014.01.20. 피부재생용 펩타이드, 이를 포함하는 화장품 조성물 및 이를 이용한 피부재생 방법) 한국 공개특허 제10-2017-0025367호(2017.03.08. 피부 개선용 조성물)

따라서, 본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명의 목적은 상처 등으로 인해 소실되거나 노화에 의해 세포사한 피부조직을 효과적으로 재생시킴과 동시에 아토피성 피부염과 관련된 가려움증 완화, 항산화, 항염증 작용 및 주름개선과 피부 미백에 탁월한 효능을 나타내는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물을 제공함에 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 과제 해결 수단 구성은,
미선나무 잎 추출물, 청각 추출물, 들깨 잎 추출물로 구성되는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물에 있어서,
상기 미선나무 잎 추출물은, 미선나무 잎을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 70% 에탄올에 상기 분말체를 18:1 내지 22:1의 중량비율로 첨가하여 70 - 80℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조된 75.0 - 94.5중량%와,
상기 청각 추출물은, 청각을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 50% 에탄올에 상기 분말체를 22:1 내지 26:1의 중량비율로 첨가하여 80 - 90℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조된 0.5 - 5.0중량%와,

들깨 잎 추출물은, 들깨 잎을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 70% 에탄올에 상기 분말체를 16:1 내지 20:1의 중량비율로 첨가하여 70 - 80℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조된 5.0 - 20.0중량%로 이루어진다.

삭제

본 발명에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물은,

첫째, 상처 등으로 인해 소실되거나 노화에 의해 세포사한 피부조직을 효과적으로 재생시키고,

둘째, 아토피성 피부염과 관련된 가려움증 완화, 항산화, 항염증 작용 및 주름개선과 피부 미백에 탁월한 효능을 나타내며,

셋째, 미선나무 잎 추출물, 청각 추출물, 들깨 잎 추출물을 함유하여 조성된 조성물을 크림, 에센스, 팩 등 다양한 제형으로 활용할 수 있는 효과가 있다.

삭제

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 엘라스타아제(Elastase) 활성 억제효과를 나타낸 그래프.
도 2는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 콜라게나제(Collagenase) 활성 억제효과를 나타낸 그래프.
도 3은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 피부 표피세포에 대한 재생효과를 나타낸 그래프.
도 4는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 피부 진피세포에 대한 재생효과를 나타낸 그래프.
도 5는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 베타-헥소스 아미니다아제(β-hexosaminidase) 분비 억제효과를 나타낸 그래프.
도 6은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 항산화 효과를 나타낸 그래프.
도 7은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 미백효과를 나타내기 위한 티로시나아제(Tyrosinase) 활성 억제능을 나타낸 그래프.
도 8은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물의 염증 억제효과를 나타내기 위한 NO생성 억제능을 나타낸 그래프.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물에 대하여 상세하게 설명한다.

본 발명의 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물은, 미선나무 잎 추출물 75.0 - 94.5중량%, 청각 추출물 0.5 - 5.0중량% 및 들깨 잎 추출물 5.0 - 20.0중량%로 구성된다.

상기 미선나무 잎 추출물을 얻기 위한 대상체인 미선나무(Abeliophyllum distichum Nakai)는, 물푸레나무과의 식물로 열매의 모양이 둥근 부채를 닮아 미선나무라고 명명하고, 한국에서만 유일하게 서식하는 관목으로서 세계유일의 1속 1종의 천연기념물이다. 녹차의 약 10배에 달하는 폴리페놀 성분이 함유되어 있고, 항염작용, 항암작용, 항산화작용 등에 유의한 영향을 미치는 성분을 다량 보유하고 있는 것으로 알려지고 있다.

본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 미선나무 잎 추출물은 조성물 총 중량에 대해 75.0 내지 94.5중량%로 함유됨이 바람직하다. 상기 미선나무 잎 추출물이 94.5중량%를 초과할 경우 소망하고자 하는 기능적 작용, 이를테면 항염, 항산화 작용 등은 충분히 이루어지나 필요 이상으로 첨가됨으로 인해 비경제적이고, 75.0중량% 미만일 경우 그 함유량이 미미하여 소망하고자 하는 기능적 작용을 도모하기가 곤란하다.

상기 청각 추출물을 얻기 위한 대상체인 청각(Codium fragile)은, 온해성의 해조로서 세계 각지에 분포하며, 만구부의 간조선 직하부터 깊이 30㎝ 전후의 해저에까지 생육한다. 최근 청각의 효능에 관한 연구가 활발히 진행되어왔고, 그 유용성과 효과가 여러 논문을 통해 입증되어 왔다. 또한, 민간요법의 구충제로 이용되거나 배변활동 증진 및 혈액순환 개선, 비뇨기 질환 및 수종 치료에 이용되어 왔으며, 청각에는 항생 작용이 있는 아크릴산, 항응고 활성물질 등이 함유되어 있을 뿐 아니라, 항암 및 항돌연변이 효과와 면역 활성 등이 있는 것으로 밝혀졌다. 또한, 상기 청각은 콜라겐 형성에 필수적인 히드록시르톨린(hydroxyproline)을 유일하게 함유하고 있는데, 콜라겐은 인체 각 결합조직에 분포하는 중요한 단백질로서 조직 내의 콜라겐의 손상의 조직의 노화와 골 관절염, 골다공증 변인의 원인이 된다고 알려져 있다. 따라서 청각이 이러한 연골의 재생을 향상시킨다는 연구결과가 발표되어 청각의 유용성을 더욱 뒷받침해주고 있다.

본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 청각 추출물은 조성물 총 중량에 대해 0.5 내지 5.0중량%로 함유됨이 바람직하다. 상기 청각 추출물이 5.0중량%를 초과할 경우 필요 이상으로 첨가됨으로 인해 비경제적이고, 0.5중량% 미만일 경우 콜라겐의 형성에 필요한 히드록시르톨린의 함량이 미미하여 피부 재생작용이 원활하게 이루어지지 않는다.

상기 들깨 잎 추출물을 얻기 위한 대상체인 들깨(Perilla frutescens var. japonica HARA)는, 한국, 중국, 일본 등 아시아 지역에서 재배되고 있는 일년생 초본식물로서, 인체에 유용한 성분이 다량 함유되어 있다. 들깨의 종실에는 오메가-3 계열의 지방산인 리놀렌산(linolenic acid)이 다량 함유되어 있어 고혈압, 알레르기성 질환 등의 성인병을 일으키는 에이코사노이드(eicosanoid) 합성을 억제하는 기능이 탁월하다. 또한, 들깨 잎에는 식물성 정유로서 페릴라 알데히드(perillylaldehyde), 리모넨(limonene), 페릴라 케톤(perillaketon) 등이 함유되어 있다.

본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 들깨 잎 추출물은 조성물 총 중량에 대해 5.0 내지 20.0중량%로 함유됨이 바람직하다. 상기 들깨 잎 추출물이 20.0중량%를 초과할 경우 유지 성분이 많아져 제형이 바람직하지 못하고, 5.0중량% 미만일 경우 들깨 잎에 함유된 리놀렌산 등의 기능적 작용이 이루어지지 않는다.

본 발명의 추가 실시예에 따르면, 상기 미선나무 잎 추출물은, 미선나무 잎을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 70% 에탄올에 상기 분말체를 18:1 내지 22:1의 중량비율로 첨가하여 70 - 80℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조될 수 있다.

이때, 70% 에탄올에 미선나무 잎을 분쇄하여 된 분말체를 18:1 내지 22:1의 중량비율로 첨가하여 70 내지 80℃에서 3 내지 5시간 추출하는 것은, 미선나무 잎으로부터 유효성분이 파괴되지 않는 범위 내에서 상기 유효성분의 추출을 극대화하기 위함이며, 또한 추출시 온도가 80℃를 초과하면 항염증작용, 항산화작용과는 관계없는 물질까지도 다량 추출되어 결과적으로 미선나무 잎의 기능적 작용이 약화될 우려가 있으며, 70℃ 미만이면 추출수율이 극히 낮아지는 문제가 발생한다.

상기 미선나무 잎으로부터 유효성분을 추출하기 위한 추출방법은 70% 에탄올을 용매로 하는 용매추출법을 적용하는게 바람직하나, 이 외에도 열수추출법, 초임계추출법 등 이미 공지된 다양한 추출방법을 적용하는 것 또한 가능하다.

본 발명의 다른 추가 실시예에 따르면, 상기 청각 추출물은, 청각을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 50% 에탄올에 상기 분말체를 22:1 내지 26:1의 중량비율로 첨가하여 80 - 90℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조될 수 있다.

상기 다른 추가 실시예에 있어서, 50% 에탄올에 청각을 분쇄하여 된 분말체를 22:1 내지 26:1의 중량비율로 첨가하여 80 내지 90℃에서 3 내지 5시간 추출하는 것은, 청각으로부터 추출되는 유효성분이 파괴되지 않는 범위 내에서 상기 유효성분의 추출을 극대화하기 위함이며, 청각으로부터 추출물을 추출하기 위한 온도가 90℃를 초과하면 청각에 함유된 유효성분이 고온에 의해 소실될 우려가 있으며, 80℃ 미만이면 추출수율이 극히 낮아지는 문제가 발생할 수 있다.

상기 청각으로부터 유효성분을 추출하기 위한 추출방법은 50% 에탄올을 용매로 하는 용매추출법을 적용하는게 바람직하나, 이 외에도 열수추출법, 초임계추출법 등 이미 공지된 다양한 추출방법을 적용하는 것 또한 가능하다.

본 발명의 또 다른 추가 실시예에 따르면, 상기 들깨 잎 추출물은, 들깨 잎을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 70% 에탄올에 상기 분말체를 16:1 내지 20:1의 중량비율로 첨가하여 70 - 80℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조될 수 있다.

상기 또 다른 추가 실시예에 있어서, 70% 에탄올에 들깨 잎을 분쇄하여 된 분말체를 16:1 내지 20:1의 중량비율로 첨가하여 70 내지 80℃에서 3 내지 5시간 추출하는 것은, 들깨 잎에 함유된 리놀렌산 등과 같은 유효성분의 추출을 극대화하기 위함이며, 들깨 잎으로부터 추출물을 추출하기 위한 온도가 80℃를 초과하게 되면 페릴라 알데히드, 리모넨, 페릴라 케톤과 같은 식물성 정유까지 추출되게 되어 본 발명의 목적을 달성하기 어렵고, 70℃ 미만이면 추출수율이 극히 낮아져, 들깨 잎의 기능성 발휘가 곤란할 수 있다.

상기 들깨 잎으로부터 유효성분을 추출하기 위한 추출방법은 70% 에탄올을 용매로 하는 용매추출법을 적용하는게 바람직하나, 이 외에도 열수추출법, 초임계추출법 등 이미 공지된 다양한 추출방법을 적용하는 것 또한 가능하다.

한편, 미선나무 잎 추출물 75.0 - 94.5중량%, 청각 추출물 0.5 - 5.0중량% 및 들깨 잎 추출물 5.0 - 20.0중량%로 구성된 본 발명에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물은, 필요에 따라 연화제, 항산화제, 현탁화제, 발포제, 계면활성제, 정제수, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제 중에서 선택된 어느 하나 이상의 보조제를 더 포함할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물은 화장수, 수용성 리퀴드, 크림, 로션, 에센스, 파운데이션, 샴푸, 화장연고, 젤, 팩 등 용도에 따라 다양한 제형으로의 제조가 가능하다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.

[실시예 1] 미선나무 잎으로부터 유효물질 추출

1. 음건하여 잘게 부순 미선나무 잎 2㎏에 70% 에탄올 40ℓ를 넣고 75℃에서 4시간 동안 추출하였다.

2. 추출물을 여과지로 여과한 다음, 50℃에서 감압 하에 2ℓ까지 농축하였다.

3. 농축물을 동결건조기로 건조시켜서 최종적으로 미선나무 잎 추출물 1.02㎏을 수득하였다.

[실시예 2] 청각으로부터 유효물질 추출

1. 음건하여 잘게 부순 청각 1㎏에 50% 에탄올 24ℓ를 넣고 85℃에서 4시간 동안 추출하였다.

2. 추출물을 여과지로 여과한 다음, 50℃에서 감압 하에 추출물을 1ℓ까지 농축하였다.

3. 농축물을 동결건조기로 건조시켜서 최종적으로 청각 추출물 27g을 수득하였다.

[실시예 3] 들깨 잎으로부터 유효물질 추출

1. 음건하여 잘게 부순 들깨 잎 2㎏에 70% 에탄올 36ℓ를 넣고 75℃에서 4시간 동안 추출하였다.

2. 추출물을 여과지로 여과한 다음, 50℃에서 감압 하에 추출물을 2ℓ까지 농축하였다.

3. 농축물을 동결건조기로 건조시켜서 최종적으로 들깨 잎 추출물 430g을 수득하였다.

[실시예 4] 천연추출복합물 제조

상기 실시예 1 내지 3에서 수득한 미선나무 잎 추출물, 청각 추출물 및 들깨 잎 추출물을 하기 표 1에 나타낸 비율로 배합하여 본 발명에 따른 천연추출복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물(이하 '천연추출복합물')을 제조하였고, 이를 실험에 사용할 시료로 설정하였다.

NO	원료명	배합비율(%)
1	미선나무 잎 추출물	90
2	청각 추출물	1
3	들깨 잎 추출물	9

[실험예 1] 천연추출복합물 처리에 따른 주름개선 효과

1. 천연추출복합물의 Elastase 활성 억제능 평가

천연추출복합물의 주름개선 효과를 평가하기 위해 Elastase 활성 억제능을 확인하였다. 0.1M Tris-HCl buffer(pH 8.0)에 희석한 시료 220㎕에 2㎎/㎖ N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide 20㎕를 첨가하여 25℃ 조건에서 10분간 반응시켰다. 1㎍/㎖의 porcine pancreatic elastase(PPE) 20㎕를 첨가하여 25℃ 조건에서 20분 반응시킨 다음 얼음 위에서 반응을 종결시킨 후 microplate reader를 이용하여 405㎚에서 흡광도를 측정하였다. 아데노신을 양성대조구로 사용하였으며 Elastase 억제능은 천연추출복합물 처리구와 무처리구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

도 1을 참조하여 천연추출복합물의 Elastase 활성 억제능 평가 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 Elastase 활성 억제능이 높게 관찰되며, 농도 의존적인 Elastase 활성 억제능이 관찰되었다. 또한, 양성대조구인 Adenosine과 비교하여 볼 때 천연추출복합물 처리시 Elastase 활성 억제능이 높게 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 주름개선에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

2. 천연추출복합물의 Collagenase 활성 억제능 평가

천연추출복합물의 주름개선 효과를 평가하기 위해 Collagenase 활성 억제능을 확인하였다. 시료를 농도별로 희석한 후 Collagenase Activity Assay kit(Abcam)를 사용하여 측정하였다. Assay buffer 88㎕에 농도별로 희석한 시료 2㎕와 Collagenase 10㎕를 추가한 후 100㎕의 Collagenase Reaction Mix를 첨가하여 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 345㎚에서 흡광도를 측정하였다. 아데노신을 양성대조구로 사용하였으며 Collagenase 억제능은 천연추출복합물 처리구와 무처리구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

도 2를 참조하여 천연추출복합물의 Collagenase 활성 억제능 평가 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 Collagenase 활성 억제능이 높게 관찰되며, 농도 의존적인 Collagenase 활성 억제능이 관찰되었다. 또한, 양성대조구인 Adenosine과 비교하여 볼 때, 천연추출복합물 처리시 Collagenase 활성 억제능이 높게 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 주름개선에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 2] 천연추출복합물 처리에 따른 피부세포재생 효과

1. 천연추출복합물의 피부 표피세포 재생능 평가

천연추출복합물의 피부 표피세포 재생능을 평가하기 위해 in vitro scratch assay법을 이용하였다. HaCaT 세포(Keratinocytes)를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양한 후 well 당 1×10⁶ cell이 되도록 6 well plate에 분주한 후, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시켰다. Scratcher(SPL)를 이용하여 plate 중앙을 긁어주고 시료를 24시간 동안 처리한 후, 긁힌 면적의 감소를 %로 나타내었다.

도 3을 참조하여 천연추출복합물의 피부 표피세포 재생능 평가 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 피부 표피세포의 재생에 높은 효과가 있는 것으로 관찰되며, 농도 의존적인 피부 표피세포 재생 효과가 관찰되었다. 또한, 양성 대조구인 Adenosine과 비교하여 볼 때 높게 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 피부 표피세포의 재생능에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

2. 천연추출복합물의 피부 진피세포 재생능 평가

천연추출복합물의 피부 진피세포 재생능을 평가하기 위해 in vitro scratch assay법을 이용하였다. HDF세포(Human Dermal Fibroblast)를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양한 후 well 당 5×10⁵ cell이 되도록 6 well plate에 분주한 후, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시켰다. Scratcher(SPL)를 이용하여 plate 중앙을 긁어주고 시료를 7시간 동안 처리한 후, 긁힌 면적의 감소를 %로 나타내었다.

도 4를 참조하여 천연추출복합물의 피부 진피세포 재생능 평가 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때, 천연추출복합물의 처리는 피부 진피세포의 재생에 높은 효과가 있는 것으로 관찰되며, 농도 의존적인 피부 진피세포 재생 효과가 관찰되었다. 또한, 양성 대조구인 Adenosine과 비교하여 볼 때, 높게 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 피부 진피세포의 재생능에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 3] 천연추출복합물 처리에 따른 아토피성 피부염 억제 효과

천연추출복합물의 탈과립 억제효과를 평가하기 위해 β-hexosaminidase release assay를 이용하였다. RBL-2H3 세포(rat basophilic leukemia cell)를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양한 후 well 당 2×10⁴ cell이 되도록 96 well plate에 분주한 후, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시켰다. 각 well의 세포들을 Siraganian buffer(biosolution)로 2회 세척한 다음 각 well에 Siraganian buffer와 시료를 처리한 후 1시간 동안 배양하였다. 이후 PMA(50nM)와 A23187(1μM)의 자극하에서 3시간 동안 추가 배양하였다. 얼음 위에서 반응을 종결시킨 후 상층액 50㎕를 새로운 96 well plate에 옮기고 Pellet은 0.1% Triton X-100 200㎕를 넣고 녹인 후 50㎕를 옮겨주었다. 상층액과 Pellet이 담긴 96 well plate에 substate buffer(1mM 4-p-Nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide, 0.05M sodium citrate, pH 4.5) 50㎕를 넣고 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후, Stop solution(0.05M sodium carbonate buffer, pH 10) 100㎕를 넣어 반응을 종결시키고, microplate reader를 이용하여 405㎚에서 흡광도를 측정하였다. β-hexosaminidase 분비율은 상층액의 값을 상층액의 값과 Pellet의 값으로 나눠준 후 백분율로 나타내었다.

도 5를 참조하여 천연추출복합물의 아토피성 피부염 억제효과 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 β-hexosaminidase 분비 억제 효과가 높게 관찰되며, 농도 의존적인 효과가 관찰되었다. 또한, 양성 대조구인 Dexamethasone과 비교하여 볼 때, 높게 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 아토피성 피부염 억제 작용에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 4] 천연추출복합물 처리에 따른 항산화 효과

천연추출복합물의 항산화 효과를 평가하기 위하여 DPPH의 자유라디칼 소거능을 확인하였다. 메탄올에 용해한 200μM DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 200㎕에 희석한 시료를 50㎕ 첨가하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 405㎚에서 흡광도를 측정하였다. Ascrobic acid를 양성대조구로 사용하였으며 천연추출복합물 처리구와 무처리구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

도 6을 참조하여 천연추출복합물의 항산화 효과 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 DPPH의 자유라디칼 소거능을 증가시켜주며 농도 의존적인 효과가 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 항산화 작용에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 5] 천연추출복합물 처리에 따른 미백 효과

천연추출복합물의 미백 효과를 평가하기 위하여 Tyrosinase 활성 억제능을 확인하였다. 0.1M phosphate buffer(pH 6.5) 50㎕에 시료 50㎕와 100 unit/㎖ Tyrosinase 50㎕를 첨가하여 상온에서 5분간 반응시켰다. 1mM L-DOPA 100㎕를 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 475㎚에서 흡광도를 측정하였다. Arbutin을 양성대조구로 사용하였으며 Tyrosinase 저해활성은 천연추출복합물 처리구와 무처리구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

도 7을 참조하여 천연추출복합물의 미백 효과 결과를 분석하면, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 Tyrosinase 활성 억제능이 높게 관찰되며, 농도 의존적인 Tyrosinase 활성 억제능이 관찰되었다. 또한, 양성대조구인 Arbutin과 비교하여 볼 때 천연추출복합물 처리시 Tyrosinase 활성 억제능이 높게 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 미백 작용에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 6] 천연추출복합물 처리에 따른 항염 효과

천연추출복합물의 항염 효과를 평가하기 위해 NO생성 억제능을 확인하였다. 96 well plate에 RAW 264.7 세포(murine macrophages)를 2×10⁴ cell/well로 분주한 후 37℃, 5% CO₂ incubator에서 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 시료 처리와 동시에 염증유발 물질인 LPS를 1㎍/㎖의 농도로 24시간 동안 병용 처리한 후 상층액을 분리하였다. 분리된 배양 상층액에서 NO의 함량을 측정하였다. NO의 함량은 분리된 배양 상층액 100㎕에 동량의 Griess(Sigma) 시약을 처리하여 10분 동안 반응시킨 후 microplate reader를 이용하여 517㎚에서 흡광도를 측정하였다. 산화질소의 농도는 sodium nitrite(NaNO₂, Sigma)를 사용하여 얻은 표준 직선과 비교하여 산출하였다.

도 8을 참조하여 천연추출복합물의 항염 효과 결과를 분석하면, 개별소재와 천연추출복합물을 처리하였을 때 NO생성이 억제되는 결과가 관찰되었다. 또한, 개별소재 처리와 비교하여 볼 때 천연추출복합물의 처리는 NO생성 억제능이 증가하는 것으로 관찰되며, 농도 의존적인 NO생성 억제능이 관찰되는 것으로 보아, 본 발명에 따른 천연추출복합물은 항염증 작용에 유의한 효과가 있음을 확인할 수 있다.

Claims

미선나무 잎 추출물, 청각 추출물, 들깨 잎 추출물로 구성되는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물에 있어서,
상기 미선나무 잎 추출물은, 미선나무 잎을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 70% 에탄올에 상기 분말체를 18:1 내지 22:1의 중량비율로 첨가하여 70 - 80℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조된 75.0 - 94.5중량%와,
상기 청각 추출물은, 청각을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 50% 에탄올에 상기 분말체를 22:1 내지 26:1의 중량비율로 첨가하여 80 - 90℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조된 0.5 - 5.0중량%와,
들깨 잎 추출물은, 들깨 잎을 음건 후 분쇄하여 분말체를 형성하고, 70% 에탄올에 상기 분말체를 16:1 내지 20:1의 중량비율로 첨가하여 70 - 80℃에서 3 - 5시간 추출하여서 된 추출용액을 여과지로 여과한 다음, 여과된 여과액을 45 - 55℃에서 상기 여과액 전체 부피 대비 2 - 4% 부피에 이를 때까지 감압농축한 후 동결건조하여 제조된 5.0 - 20.0중량%로 구성된 것을 특징으로 하는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물.
삭제
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삭제
제1 항에 있어서,
상기 피부 재생용 화장료 조성물은,
연화제, 항산화제, 현탁화제, 발포제, 계면활성제, 정제수, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제 중에서 선택된 어느 하나 이상의 보조제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물.
제1 항에 있어서,
상기 피부 재생용 화장료 조성물은,
화장수, 수용성 리퀴드, 크림, 로션, 에센스, 파운데이션, 샴푸, 화장연고, 젤, 팩 중에서 선택된 어느 하나 이상의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 천연추출복합물을 함유하는 피부 재생용 화장료 조성물.