KR102006247B1

KR102006247B1 - 지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR102006247B1
Application number: KR1020150054307A
Authority: KR
Inventors: 김순하; 김형진; 박희술; 안서현; 송민호; 정효균
Original assignee: 주식회사 엘지화학
Priority date: 2014-04-18
Filing date: 2015-04-17
Publication date: 2019-08-01
Also published as: KR20150120877A; WO2015160213A1; ES2851006T3; MX369571B; MX2016013575A; BR112016024020A8; RU2664696C2; RU2016145066A; CN113967215A; CN106659722A; EP3132795B1; RU2016145066A3; EP3132795A1; BR112016024020A2; US9814726B2; JP2017511373A; US20170035776A1; EP3132795A4; JP6490097B2

Abstract

본 발명은 테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로서 함유하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 지방간, 간염증 및 간섬유화를 효과적으로 억제할 수 있으며, NAFLD, 특히 NASH의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

지방간 질환의 예방 또는 치료용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING FATTY LIVER DISEASES}

본 발명은 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 포함하는 지방간 질환, 특히 비알코올성 지방간염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

비음주자에게 발생하는 알코올성 간장애와 유사한 지방간을 포괄하는 모든 지방간 질환은 비알코올성 지방간 질환(non-alcoholic fatty liver disease: NAFLD)라 칭해진다. NAFLD 환자에서는 간의 지방산 합성이 항상 활성화되어 있으며, 지방산 합성의 활성화는 대사 증후군에 기인하는 지방간 형성에 관여하는 중요한 인자이다.

NAFLD는 일반적으로 예후 양호하다고 생각되는 단순성 지방간과, 단순성 지방간에 지속적으로 염증이나 섬유화가 동반되어 예후 불량으로 판단되고 있는 비알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis: NASH)으로 대별되며, NASH는 NAFLD 중증형의 한 형태라 할 수 있다.

현재까지 투 히트 이론(Two hit theory)은 NASH의 발병 및 진전의 주요 병리 기전으로 알려져 있다. 투 히트 이론이란, 생활 습관이나 유전적인 요인 등의 1차 히트(First hit)로 인하여 우선적으로 단순성 지방간이 생성되고, 지방간 상태에서 주로 유도되는 산화 스트레스나 염증성 사이토카인 등의 여러 요인이 2차 히트(Second hit)로 작용하여 NASH로 한 단계 더 병이 진전된다는 이론이다.

NASH 발병에 관여하는 요인 중 하나로 알려진 대사 증후군에 대한 치료는 매우 중요하며, 이런 측면에서 인슐린 저항성 개선제, 항산화제, 고지혈증 치료제, 간 비호약, 그리고 안지오텐신 II 수용체의 길항제 등 대사 증후군에 대한 억제 효과가 있는 약제 들이 임상적으로 시도되었다.

그러나, 현재까지 NASH 치료를 위한 임상적 증거를 지닌 약물에 대한 개발은 거의 이루어지고 있지 않고 있는 실정이다. 예를 들어, 인슐린 저항성 개선약인 피오그리타존(Pioglitazone)은 NASH 치료약으로서 매우 유망했지만 임상 3상에서 간섬유화에 대한 실제적인 개선 효과가 나타나지 않았을 뿐 아니라, 골절 리스크, 체중 증가, 심부전 악화 및 발증 등의 부작용 문제점으로 인하여 치료약으로서의 판정 기준을 명확하게 만족시키지 못하였다.

따라서, 비알코올성 지방간염의 예방 또는 치료에 대한 연구의 필요성이 절실히 요구되고 있다.

한편, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민은 미토콘드리아에 특이적인 세포괴사 억제제로서, 독소나 스트레스로 인한 세포사의 억제 효과, 세포 생존능력의 증대 효과, 항산화 및 항염증 효과를 동시에 나타내는 물질이다.

즉, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민은 세포괴사와 관련된 다양한 질환에 효과적이라고 알려져 있지만, 지방간 질환의 예방 및 치료, 그리고 대사증후군과 관련해서는 전혀 알려진 바 없으며, 이에 대한 연구도 전무한 상태이다.

본 발명자들은 NASH 동물모델에서 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 처리 시, NASH의 주된 병리 형태인 지방간, 간 염증 그리고 간섬유화를 효과적으로 개선시키는 것을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 NAFLD, 특히 NASH와 관련하여, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로 포함하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로서 함유하는 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

여기에서, 지방간 질환은 비알코올성 지방간 질환, 특히 비알코올성 지방간염 또는 단순성 지방간일 수 있으며, 본 발명에 따른 조성물은 간지방 축적을 억제하고, 지방간에서 유래되는 산화스트레스 또는 염증성 사이토카인을 억제하여 간염증 및 간섬유화를 억제하는 효과가 있다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명의 지방간 질환의 예방 또는 치료제는 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로서 함유한다.

본 발명에 있어서, 「지방간 질환」이란 간세포에 중성 지방이 침착하여 간 장애를 초래하는 질환을 총칭하고, 알코올성 간 장애 및 비알코올성 지방간 질환 (NAFLD)이 포함된다.

본 발명에 있어서, 「비알코올성 지방간 질환」이란, 비알코올성 지방간 및 비알코올성 간지방증과 동일한 의미이다. 비알코올성 지방간 질환에는, 비알코올성 지방간염(NASH) 및 단순성 지방간이 포함된다.

비알코올성 지방간 질환은, 예를 들면, 분명한 음주력이 없음에도 불구하고, 간 조직 소견은 알코올성 간 장애와 유사한 주로 대적성의 간지방 침착을 특징으로 하는 간 장애로, 예후 양호한 단순성 지방간과 진행성의 NASH를 포함하는 개념으로 정의된다. 또한, 비 알코올성 지방간 질환(NAFLD)은 이하와 같은 특징을 들 수 있다:

1. 분명한 음주력이 없다 (알코올량: 20 g 이하/일).

2. 바이러스성(HCV, HBV), 자기 면역성과 같은 성인(成因)이 명확한 만성 간질환은 인정하지 않는다.

3. 대사 증후군, 비만, 당뇨병, 고지혈증, 고혈압, 고요산혈증, 수면시 무호흡 증후군 등은 위험인자이다. 다중 위험인자를 갖는 예에서는 단순성 지방간 및 NASH의 가능성이 높아진다.

4. 지질 대사나 미토콘드리아 기능의 이상을 초래하는 다양한 질환이나 약제도 포함된다.

비알코올성 지방간염(NASH)은, 예를 들면, 이하와 같이 정의된다:

1. 마테오니(Matteoni, C.A., et al. 1999. Gastroenterology. 116:1413-1419)는 NAFLD를 4 형으로 분류하였는데, 1형은 단순성 지방간, 2형은 지방성 간염, 3형은 지방간 괴사(풍선 유사 변성을 수반함), 그리고 4형은 말로리체 내지는 섬유화를 수반하는 간세포 괴사(풍선 유사 변성을 수반함)를 의미한다. 장기 예후의 검토로부터 간경변으로의 진전이나 간 관련사의 빈도가 유의하게 높은 3형 및 4형을 비알코올성 지방성 간염(NASH)으로 한다.

2. 미국 간장학회의 싱글 토픽 컨퍼런스 2002(Single Topic Conference 2002, Neuschwander-Tetri, B.A., et al. 2003. Hepatology. 37:1202-1219)에서는 NASH의 필수 소견으로서 지방화(대적성 > 소적성, 소엽 중심부에 많음), 소엽내 염증(경증, 호중구나 단핵구 침윤), 간세포의 풍선-유사 변성(지방화 주변, 소엽 중심부에 많음)을 고려하여, NAFLD의 3형, 4형(Matteoni 분류)을 NASH로 하고 있다.

3. 브런트(Brunt, E.M., et al. 1999. Am. J. Gastroenterol. 94: 2467-2474)는 NASH의 진전 경과를 섬유화의 정도에 따라 4단계로 분류하였다. 단계 1: 소엽 중심부(구역 3), 단계 2: 1 + 문맥역, 단계 3: 가교 형성, 단계 4: 간경변.

본 발명에 있어서 「단순성 지방간」이란, 지방성 간질환 중 간세포의 지방 침착만이 보이고, 간세포의 괴사·염증이나 섬유화를 수반하지 않는 증례를 나타낸다.

본 발명에 따른 예방 또는 치료제를 적용하는 지방간 질환으로서는, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD)이 바람직하고, 단순성 지방간, 비알코올성 지방간염(NASH)이 특히 바람직하다.

위에 언급한 바와 같이, NASH의 발생·진전 기전으로 투 히트 이론이 많은 지지를 받고 있다. 투 히트 이론이란, 다음과 같은 발병 및 발전 기전에 의해 NASH가 한 단계 더 진전된다는 가설이다. 우선, 1차 히트로서 간지방의 축적 (지방간)이 발생하고, 2차 히트로서 지방간에서 유래되는 산화 스트레스나 염증성 사이토카인 등에 의해 간염증 및 간섬유화가 발병됨으로써 NASH가 더욱 발증, 진전한다.

본 발명에 따른 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 및 그의 약제학적으로 허용되는 염은, 1차 히트에 대하여 간지방 합성 활성과 간 트리글리세리드 함량을 억제함으로써 간지방의 축적을 억제함으로써 우선적으로 지방간을 제어한다. 또한, 2차 히트에 대하여 간장에 있어서의 지방 방울과 염증 세포의 침윤을 억제하고, 산화 스트레스 및 염증성 사이토카인을 억제함과 동시에 간 염증 관련 유전자 및 간 섬유화 관련 유전자의 발현을 억제함으로써 간염증 및 간섬유화를 억제한다. 이러한 작용기전에 의해, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 및 그의 약제학적으로 허용되는 염은 NASH의 발병·발전 기작을 효과적으로 차단할 수 있는 가능성이 높은 것으로 판단된다.

본 발명에 따른 지방간 질환의 예방 또는 치료제는 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하고, 필요에 따라 약리학적으로 허용되는 공지된 첨가제를 배합할 수 있다. 임의로 배합할 수 있는 첨가제로서는, 제형이나 투여 형태 등에 따라 변동하는데, 예를 들면 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 교미제, 착향제, 착색제 또는 감미제 등을 사용할 수도 있다.

또한, 본 발명에 따른 지방간 질환의 예방 또는 치료제는 약리학적으로 허용되는 각종 제제 형태로 사용할 수 있다. 이러한 형태로는, 예를 들어 캡슐제, 산제, 정제, 세립제, 과립제, 주사제, 액제, 연고제 또는 첩부제 등을 바람직하게 열거할 수 있다. 따라서, 본 발명의 지방간 질환의 예방 또는 치료제는 경구 투여나 비경구 투여의 형태로 환자에게 투여할 수 있다. 그 중에서도, 환자가 이용하기 쉬운 점을 고려하여, 경구제가 바람직하다.

본 발명에 따른 지방간 질환의 예방 또는 치료제에 있어서 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 투여량은 환자의 연령이나, 체중, 증상, 투여 경로 등에 따라 적절히 변경하는 것이 가능하다. 예를 들면 1일 투여량은 성인(60㎏) 기준 경구 투여에서는 약 1 ㎎∼1,000 ㎎, 바람직하게는 약 10 ㎎∼750 ㎎이고, 주사 형태에서는 약 0.3 ㎎∼200 ㎎이며, 하루 1회 내지 수 회에 나누어 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 지방간, 간염증 및 간섬유화를 효과적으로 억제할 수 있으며, NAFLD, 특히 NASH의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 TG 및 콜레스테롤 함량의 감소 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다(n = 10, p< 0.001 vs 용매).
도 2는 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 산화 스트레스 및 지방 산화 억제 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.
도 3은 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 감소된 미토콘드리아 호흡 체인의 활성을 향상시켜 주는 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.
도 4는 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 증가된 염증성 사이토카인의 발현 및 대식 세포의 활성을 감소시켜 주는 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.
도 5는 MCD(Methionine choline-deficient) 식이를 한 ob/ob 마우스에서 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시 간섬유화가 저해되는 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 이들 실시예에 의해 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민의 지방간 억제 작용(비만을 수반하는 지방간 모델을 이용한 평가)

실험동물은 6 주령의 수컷 ob/+ 대조용 마우스와 6 주령 C57BL/6J Lep(-/-) 수컷(ob/ob) 마우스를 Harlan(Indianapolis, IN)에서 구입하였다. 구입한 마우스들은 모두 표준 조건(25 ℃, 55 % 습도 그리고 12 시간 명암 사이클) 하에서 유지되었으며 정상적인 normal chow diet를 하였다. 30 마리의 마우스들을 3 군으로 분리하고, 1 군당 10 마리씩 할당하였다. 1 그룹은 10 마리의 C57BL/6J(ob/+ 대조군) 마우스를 포함하며, 2 그룹은 식염수를 처리한 10 마리의 ob/ob 마우스에 비히클을 처리한 군이며, 3 그룹은 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민(LGLS, 대전, 한국)을 1 일 1 회 20 ㎎/㎏ 용량으로 처리한 그룹이다. 식염수와 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 용액은 4 주 동안 경구투여 하였다. 처리 후에 동물을 마취하고 희생시킨 뒤 다음 분석을 위해 빠르게 떼어 보관하였다.

실시예 1-1: 비만 지방간 모델에서 간 세포 내에 축적되는 TG, 콜레스테롤 양의 축적 및 간 손상에 대하여 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 미치는 영향

도 1은 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 TG 및 콜레스테롤 함량의 감소 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다(n = 10, p< 0.001 vs 용매).

도 1에 나타난 바와 같이, 대조군 마우스(ob/+)에서의 간과 비교 시, ob/ob 비만 마우스는 간세포 중 60 % 정도의 지방 조직과 크고 작은 지방 방울들이 다량 축적되어 있음을 확인하였다. 이와 대조적으로, 20 ㎎/㎏으로 1 일 1 회 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 (Comp.)을 경구 투여한 비만 마우스에서는, H & E 염색법으로 확인한 결과 지방 조직이 현저히 줄어든 것이 관찰되었다. 또한 Oil-Red O가 염색된 면적은 비히클 (vehicle)을 처리한 그룹에 비해 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 마우스에서 현저히 감소된 것을 확인할 수 있었다. 혈청(serum)내 TG 레벨은 두 그룹 간 큰 차이가 나타나지 않은 반면(data not shown), 간 TG와 콜레스테롤 양은 본 발명의 화합물을 처리한 그룹에서 유의하게 감소되었다. 혈청 내의 ALT 및 AST 수치도 본 발명의 화합물을 처리한 그룹이 비히클을 처리한 그룹에 비해 감소된 것을 확인하였다.

실시예 1-2: 비만 지방간 모델에서 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 간에서의 산화 스트레스 및 지방 산화에 미치는 영향 평가

도 2는 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 산화 스트레스 및 지방 산화 억제 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.

도 2에 나타난 바와 같이, 산화 스트레스에 의한 DNA 손상을 대변하는 8-OHdG의 양이 ALT의 양과 유의적 상관성을 보였으며, 본 발명의 화합물을 처리한 ob/ob 마우스의 경우 8-OHdG 양성 간세포들의 숫자가 비히클 처리한 그룹에 비해 현저히 낮은 수치를 보였다. 또한, 미토콘드리아의 기능 장애에서 중요한 역할의 하는 3-NT(Nitrotyrosine) 레벨의 경우, ob/ob 마우스에서는 상당히 많이 증가해 있는 반면, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 처리 시에는 상당히 감소되는 것으로 나타났다. 그리고, NASH의 발병에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 산화 스트레스의 영향을 알아보기 위해 TBARS의 양을 측정한 결과, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 처리 시 유의한 감소가 관찰되었다.

즉, 도 2에서 보여주는 결과들은 본 발명에 따른 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 산화 스트레스와 단백질의 니트로화(nitration)를 효과적으로 차단시키는 효과가 있음을 말해준다.

실시예 1-3: (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 미토콘드리아 호흡 사슬에 미치는 영향 평가

(테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 미토콘드리아의 ROS 및 ROS에 의한 산화 손상을 저해한다는 이전 결과에 근거하여, 비히클과 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 ob/ob 마우스의 간에서 미토콘드리아 호흡 복합체의 발현과 OXPHOS 복합체에 대한 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민의 영향을 알아보았다.

도 3은 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 감소된 미토콘드리아 호흡 체인의 활성을 향상시켜 주는 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.

도 3의 A에서 확인되듯이, ob/+ 대조군 대비 ob/ob 마우스의 간 미토콘드리아 복합체 I, Ⅲ, Ⅳ 및 Ⅴ 발현이 현저하게 감소하였다. 그러나, 이들 미토콘드리아 복합체의 발현은 본 발명의 화합물을 처리한 ob/ob 마우스의 경우에는 대조군 수준으로 회복되었다. 또한, OXPHOS 복합체들을 BN-PAGE에 의해 분석한 결과, OXPHOS 복합체 I, Ⅲ, Ⅳ 및 Ⅴ가 ob/+ 대조군 마우스와 비교하여 ob/ob 마우스에서 현저하게 감소되어 있는 것을 확인하였다. 그러나, 4 주 동안 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 ob/ob 마우스의 경우에는 복합체의 결합이 향상된 것을 볼 수 있었다. 특징적으로, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 처리 시 미토콘드리아 호흡 사슬 복합체 I, Ⅲ, Ⅳ 및 Ⅴ의 활성은 유의하게 증가하였지만, 복합체 Ⅱ의 활성에는 큰 변화가 없었다.

즉, 도 3에서 보여주는 결과들은 본 발명에 따른 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 미토콘드리아 호흡 사슬 활성 및 미토콘드리아 활성을 향상시키는 것을 제시해 준다.

실시예 1-4: ob/ob 마우스 간에서 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 염증성 사이토카인 및 대식 세포(Kupffer cell) 활성에 미치는 영향 평가

염증 및 산화 스트레스는 NAFLD 및 NASH의 발병 및 진행의 결정적 요인들로 알려져 있다. 본 발명자들은 염증성 신호에 관련된 NF-κB, p38 그리고 JNK 1/2의 인산화를 면역 blot으로 분석하였다.

도 4는 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시, ob/ob 마우스에서 증가된 염증성 사이토카인의 발현 및 대식 세포의 활성을 감소시켜 주는 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.

도 4A에서 보듯이, 비히클을 처리한 ob/ob 마우스의 간에서는 인산화된 NF-κB, p65 및 p105의 발현이 증가하였으며, 또한 염증 마커인 p38과 JNK 1/2의 인산화 정도도 증가하였다. 반면, 본 발명의 화합물을 처리한 ob/ob 마우스의 경우에는 NF-κB p65, NF-κB p105, p38 그리고 JNK 1/2의 인산화가 유의하게 감소하였다. 이러한 결과들은 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민이 NAFLD 발병의 중요한 기전인 염증에 관여하는 신호 전달계를 효과적으로 저해함을 보여주는 것이다.

또한, 비히클 처리한 ob/ob 마우스는 간에서 TNF-α의 mRNA 발현이 현저히 증가한 반면, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 마우스에서는 TNF-α의 발현이 억제되었다. 간을 갈아서 채취한 샘플을 가지고 ELISA 분석을 한 결과, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 마우스의 경우 유의적으로 낮은 양의 TNF-alpha가 측정되었다(도 4B).

흥미롭게도, IL-6 mRNA의 양은 비히클과 본 발명의 화합물을 처리한 그룹 간에 차이가 나타나지 않았다. 또한, F4/80(도 4C)과 Cd68(도 4D) 면역 염색 결과, 비히클 처리한 ob/ob 마우스의 간에서 활성화된 다수의 대식세포들의 침윤이 관찰되었으나 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 경우에는 염증 반응이 감소되는 것이 확인되었다.

실시예 2: (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민의 간염증 및 간섬유화 억제 효능(비만을 수반하는 지방간염 모델을 이용한 평가)

간섬유화의 정도를 측정하기 위해 트리크롬 염색과 콜라겐 I의 발현을 측정, 분석하였다.

도 5는 MCD(Methionine choline-deficient) 식이를 한 ob/ob 마우스에서 본 발명의 화합물(20 ㎎/㎏/일) 투여 시 간섬유화가 저해되는 효과를 보여주는 사진 및 그래프이다.

도 5A 및 5B에 나타난 바와 같이, 메티오닌과 콜린이 결핍된 MCD 식이를 한 경우 ob/ob 마우스에서 간섬유화 진행에 많은 영향을 준다는 것이 확인되었다. 반면, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민을 처리한 군에서는 비히클 처리군 대비, 트리크롬 염색 강도 및 콜라겐 I의 발현이 저해되었다.

도 5C에 의해 확인되듯이, MCD 식이 ob/ob 마우스는 정상 식이를 취한 ob/ob 마우스에 비해 많은 양의 간 TG를 함유하는 것이 확인된 반면, (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 처리군의 간 TG의 양은 50 % 정도의 감소를 보였다(ob/ob MCD-비히클 400+/-80 ㎎/g 간, ob/ob MCD-Comp 210+/-20). 또한, 혈청 ALT 및 AST 양도 본 발명의 화합물 처리군에서 현저히 감소되었다.

그리고, 도 5D에서는 정상 식이를 한 ob/ob 마우스 대비, MCD 식이 ob/ob 마우스에서는 NF-κB p65, NF-κB p105, p38 및 JNK 1/2의 인산화가 많이 증가된 것을 보여준다. 반면, 본 발명의 화합물 처리 시, 이러한 섬유화 마커들의 인산화가 억제된 것이 확인되었다.

이러한 실험 결과는, ob/ob 마우스에서 MCD 식이를 통해 간에서의 염증 신호 및 간섬유화가 현저히 증가되지만, 본 발명의 화합물은 이러한 간섬유화로의 진행을 효과적으로 차단함으로써 간기능 향상을 촉진시킬 수 있는 NASH에 대한 잠정적인 치료 약제로 사용될 수 있음을 암시한다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민은 비만 지방간 모델에서 간 세포 내에 축적되는 TG, 콜레스테롤 양의 축적 및 간 손상을 억제하고, 간에서의 산화 스트레스 및 지방 산화를 차단하고, 미토콘드리아 호흡 사슬 활성 및 미토콘드리아 활성을 향상시키고, 염증성 사이토카인 및 대식 세포(Kupffer cell) 활성을 억제할 뿐 아니라, 비만을 수반하는 지방간염 모델에서 간염증 및 간섬유화를 억제하는 효능이 있다는 것이 확인되었다. 이에 따라, 본 발명의 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염은 지방간, 간염증 및 간섬유화를 효과적으로 억제할 수 있으며, NAFLD, 특히 NASH의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

Claims

(테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]아민 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효 성분으로서 함유하는 비알코올성 지방간염 (NASH)의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로서, 상기 비알코올성 지방간염은 세포 괴사를 수반하지 않으며, 간지방 축적, 및 지방간에서 유래하는 산화스트레스 또는 염증성 사이토카인에 의한 것인, 약제학적 조성물.
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제 1 항에 있어서, 간지방 축적을 억제하고; 지방간에서 유래되는 산화스트레스 또는 염증성 사이토카인을 억제하여 간염증 및 간섬유화를 억제하는 것을 특징으로 하는 비알코올성 지방간염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
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