KR101863739B1 - 치매를 예방하고/하거나 치료하기 위한 약물의 제조에서의 진세노사이드-rg3의 용도 및 약물 - Google Patents

치매를 예방하고/하거나 치료하기 위한 약물의 제조에서의 진세노사이드-rg3의 용도 및 약물 Download PDF

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Abstract

뇌 치매를 예방하고 치료하기 위한 약물 또는 건강 관리 제품의 제조에서의 진세노사이드-Rg3의 용도가 제공된다. 약물 또는 건강 관리 제품은 외부 제조물, 경구 제조물 및 진세노사이드-Rg3를 함유하는 주사액을 포함한다.

Description

치매를 예방하고/하거나 치료하기 위한 약물의 제조에서의 진세노사이드-RG3의 용도 및 약물{USE OF GINSENOSIDE-RG3 IN PREPARING MEDICINE FOR PREVENTING OR/AND TREATING DEMENTIA AND MEDICINE}
기술 분야
본 발명은 약물 분야에 속하는 진세노사이드 Rg3 약학적 제조물 및 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.
배경 기술
21세기에 진입하여, 집단이 노화함에 따라, 노인 치매의 이환율은 전 세계에서 해마다 증가하고 있다. 보고된 바에 따르면 전 세계에서 약 2000만명의 사람이 노인 치매로 고통받고 있으며, 이중 약 500-700만명의 사람이 중국에 존재한다. 노인 치매로 고통받다 사망하는 사람의 수는 심장병, 암 및 뇌졸중에 이어 네번째에 위치한다. 중국에서, 65세 초과인 사람의 치매의 이환율은 6-7%이고; 70세 초과인 사람의 치매의 이환율은 13-15%이고; 80세 초과인 사람의 치매의 이환율은 22-25%이고; 불행하게도, 노인 치매를 효과적으로 치료하고 예방하는 더 나은 방법이 존재하지 않는다.
노인 치매는 알츠하이머병(AD) 및 혈관 치매(VD)를 포함하며, 현대 의학은 AD의 발병기전을 알지 못하며, 이는 현재 진행성이고 신경변성인 질병인 것으로 간주된다. 그러나, VD는 뇌머리뼈 내부 출혈, 다발성 경색, 동맥경화증 뇌병증 급성 뇌 외상, 뇌 공간-점유 병변, 알콜 중독, 뇌 영양 결핍 및 대사 내분비 장애로부터 발생하는 다양한 치매이다.
노인 치매가 발생한다 하더라도, 초기 증상은 오로지 건망증, 및 계산 능력 및 언어 능력의 감각저하이며; 두번째 단계는 심각한 기억 상실, 방향 상실 및 적은 말수이며; 세번째 단계는 심각한 사고 능력 장애 및 모호한 방향감이다. 따라서, 노인 치매의 예방 및 치료 연구를 위해, 기억 및 지능 감퇴를 예방하는 것이 중요하며, 진세노사이드 Rg3는 기억을 개선시키고 노화를 지연시키는 유의한 효과를 가지며, 이는 또한 본 발명의 목적 중 하나이다.
현재, 많은 수의 의학 연구 자료는 노인 치매로 고통 받는 사람의 대뇌 피질 및 해마 콜린성 뉴런이 대부분 손실되고, 콜린성 전달 매체 아세틸 콜린(Ach)의 시냅스전 특이적 콜린성 표지 콜린 아세틸 트랜스페라제(ChAT)가 현저하게 감소되며, 이는 노인 치매의 병인 중 하나인 것을 증명하며, 따라서 뇌간의 망상체 오름그물 활성계의 기능을 증가시키고 Ach 합성을 촉진하는 방법이 노인 치매를 예방하고 치료하기 위한 효과적인 방법이다. 진세노사이드 Rg3는 뇌간의 망상체 오름그물 활성계의 기능을 효과적으로 활성화시킬 수 있고, Ach 합성을 촉진할 수 있고, 대뇌 혈류를 증가시킬 수 있고, 미세순환을 개선시킬 수 있으며, 따라서 노인 치매를 예방하고 치료하기 위해 이용될 수 있고, 이는 또한 본 발명의 두번째 목표이다.
현재, 치매를 예방하고 치료하기 위해 사용되는 약물은 주로 도네페질(donepezil), 리바스티그민(rivastigmine), 갈란타민(galantamine), 피라세탐(piracetam), 아니라세탐(aniracetam), 빈포세틴(vinpocetine), 니세르골린(nicergoline), 디하이드로에르고톡신(dihydroergotoxine), 휴페라인 A(huperaine A), 은행나무 잎 작용제, 뇌 단백질 가수분해물, 시티콜린(citicoline), 콜린에스테라제 억제제, 잔틴, 비스테로이드 항염증 약물, 에스트로겐 등을 주로 포함한다. 이들 약물은 특정한 경감 효과를 갖지만, 부작용이 커서, 이들의 전반적 사용이 제한된다.
노인 치매의 치료를 위한 중국 약물은 다음과 같다: 첫째로, 간 및 신장의 관점으로부터의 치료의 양태에서, 지황(Radix Rehmanniae Preparata), 산수유(Fructus Corni), 황정(Rhizoma Polygonati), 귀판(Carapax et Plastrum Testudinis), 아교(Colla Corii Asini), 구기자(Fructus Lycii), 녹용(Cornu Cervi Pantotrichu) 등과 같은 바디 에센스 및 골수 보충 처방약이 주로 채택되며; 둘째로, 점액질을 통한 치료의 양태에서, 울금(Radix Curcumae), 창포(Rhizoma Acori Tatarinowii), 원지(Radix Polygalae), 익지인(Fructus Alpiniae Oxyphyllae), 징셴 지아오낭(XINGSHEN JIAONANG) 등과 같은 습기를 제거하기 위해 비장의 활기를 돋구고, 점액질을 제거하고, 소생을 유도하고, 의식을 회복시키기 위한 처방약이 대부분 채택되며; 셋째로, 기체증(QI-stagnation) 및 울혈을 통한 치료의 양태에서, 당귀작약산(DANGGUI-SHAOYAO SAN), 보양환오탕(BUYANGHUANWU TANG), 통마이위지 단(TONGMAIYIZHI DAN) 등과 같은 기를 조절하고, 혈액 순환을 활성화시키고, 소생을 유도하고, 의식을 회복시키기 위한 처방약이 대부분 채택된다.
그러나, 이들 중국 약물은 개인마다 다른 차별적 치료를 기초로 하여 한의사에 의해 투여되는 것을 필요로 하고, 환자 단독에 의해 이용될 수 없는데, 이는 이들이 상기 중국 약물을 적절히 복용할 수 없기 때문이다. 본 발명의 천연 식물로부터 추출된 유효 성분 진세노사이드 Rg3는 높은 순도(80% 또는 80% 초과)를 갖고, 치료 효과에 있어서 독특하고, 제조된 제조물은 사용하기에 편리하고, 환자는 자가 반응에 따라 그들 자신에 의해 투여량을 조정할 수 있으며, 경피 흡수 후의 진세노사이드의 효과는 적당하며 지속된다.
인삼(Panax ginseng C. A. Mey.)은 두릅나무과의 다년생 약초로, 최고 등급으로 간주되며, 전통적인 중국 약물에 관한 중국 약학 고대 서적에서 "인삼(Radix Ginseng)은 주로 내부 장기를 보강하고, 마음과 신체를 평온하게 진정시키고, 정신을 안정시키고, 두려움으로 인한 두근거림을 경감시키고, 시력을 개선시키고, 의기를 앙양시키고, 지능에 이롭고, 체중을 감소시키고 장기간 동안 복용한 후에 수명을 연장시키는 효과를 갖는다"<Shen Nong's Herbal Classic>고 기재되어 있다. 현대 의학 연구 및 화학 연구소 분석은 진세노사이드라고 명명된 화학 물질이 인삼에 함유되어 있으며, 이는 인간의 중추신경계를 조절하고, 심장을 강화시키고, 피로에 견디고, 물질 대사를 조절하는 등의 명백한 효과를 가지며, 따라서 우수한 치료 효과가 신경계, 심혈관계, 내분비계 및 생식계의 다수의 질병에 영향을 미치는 것을 제시한다.
인삼은 중추신경계의 흥분 과정과 억제 과정의 균형을 조절할 수 있다. 인삼의 동물의 뇌 전기 활성에 대한 영향의 연구 결과는 인삼이 흥분과 억제의 2개의 신경 과정에 영향을 미치나, 주로 대뇌 피질의 흥분 과정을 강화시키는 것을 제시한다. 인삼이 동시에 억제 과정에 대해 작용한다는 사실로 인해, 억제가 집중되는 경향이 있고, 분화가 촉진되고, 더 많이 달성된다. 인삼은 신경 기능을 조절할 수 있고, 긴장에 의해 야기된 혼란된 신경 과정이 회복되는 것을 가능케 한다.
일부 보고는 인삼 추출물이 아니소딘(anisodine) 및 펜토바르비탈 소듐에 의해 야기된 불충분한 기억에 대한 길항작용 효과를 갖고, 또한 사이클로헥시미드 및 소듐 니트라이트에 의해 야기된 기억 강화 장애 및 40% 에틸 알콜에 의해 야기된 기억 재현 결핍을 개선시킬 수 있음을 암시한다. 인삼 줄기-잎 사포닌이 200 mg/kg, 100 mg/kg 및 50 mg/kg의 투여량으로 래트의 복강으로 주사되고, 아니소딘 효과에 대해 명백히 견딜 수 있고, 래트의 기억이 명백히 개선될 수 있고, 대뇌내 RNA가 명백히 증가될 수 있으나, DNA 및 단백질 함량에 대해서는 명백한 효과가 발생되지 않는다.
인삼은 또한 대뇌 혈류 및 대뇌 에너지 대사에 대해 명백히 영향을 미친다. 인삼 제조물은 토끼 뇌의 글루코스 섭취를 개선시킬 수 있고, 동시에 락트산, 피루브산 및 락트산/피루브산의 비를 감소시킬 수 있고, 글루코스의 이용을 무산소 대사 경로로부터 산소 대사로 이동하도록 할 수 있다. 인삼은 또한 대뇌 피질 내의 자유 무기 인을 25%까지 증가시킬 수 있다. 인삼 열매 사포닌은 뇌의 산소 흡수 능력을 개선시킬 수 있다. 전체 인삼 사포닌 및 전체 인삼 뿌리 사포닌 둘 모두는 대뇌 허혈/재관류 손상에 대한 보호를 갖는다. 요컨대, 인삼은 동물 뇌가 에너지 물질 글루코스를 더욱 합리적으로 이용하게 만들 수 있고, 산화를 이용하여 에너지를 발생시킬 수 있고, 학습, 기억 등과 같은 활동 사용을 위해 더 많은 ATP를 합성하도록 할 수 있다.
진세노사이드 Rg3는 천만 당 3부(3 parts per 10 million)로 5년 이상에 걸쳐 홍삼에만 함유되는 희귀 인삼 사포닌이며, 이는 인삼의 가장 정수의 성분이다. 진세노사이드 Rg3는 다양한 질병에 대해 개선 및 예방 효과를 가지며, 노인의 흔한 질병, 예를 들어, 심혈관 및 뇌혈관 질병, 관상동맥 심질환, 사지 아크라티아(acratia), 장애, 기억 장애에 대한 큰 치료 효과를 갖는다.
진세노사이드 Rg3는 인삼 글리콜 테트라사이클릭 트리테르페노이드 사포닌으로, 진세노사이드 Rg3는 더 큰 분자량(785.02)을 가지므로, 이의 지질 용해도 및 수용해도 둘 모두는 비교적 불충분하여 이의 경구 흡수 백분율을 약 10.28%로 만들고, 경구 제조물의 비교적 불충분한 흡수를 발생시키는 것이 실제 적용에서 밝혀졌고, 동물 약동학 실험의 결과는 천연 형태의 약물의 약 80%가 흡수되지 않고, 대변을 통해 배출되고, 약물이 신체 내에서 충분히 이용되지 않아, 이의 임상 치료 효과의 충분한 이용에 영향을 미침을 나타낸다. 따라서, 진세노사이드 Rg3는 국소 제조물로 제조되며, 이는 목 피부 및 뒤귓바퀴 점막을 통한 흡수에 의해 림프계에 직접 진입하며, 이는 혈액뇌장벽을 통해 흡수되어 대뇌 신경계에 대한 치료 효과가 달성되며, 더 나은 임상 치료 효과가 획득되고, 이는 약리학적 실험 및 임상 적용을 통해 추가로 입증된다.
용뇌(Borneolum Syntheticum): 자오 바오솅 등(Zhao Baosheng, et al.)에 의해 채택된 면역조직화학 염색 기술의 연구는 용뇌가 래트 뇌 미세혈관 EC 상에서 ICAM-1의 발현을 유도할 수 없으나, 뇌 외상 동안 백혈구 및 EC의 유착을 유의하게 감소시킬 수 있고, EC에 대한 보호 효과를 가짐을 제시하며, 연구에서 용뇌를 이용한 혈액뇌장벽의 개방 촉진이 ICAM-1과 관련이 없으며, 용뇌가 뇌 외상을 갖는 래트 뇌 조직에 대해 특정한 보호 효과를 갖는 것이 입증된다. 용뇌 파라핀 오일 용액 10, 13 mL·kg이 투여된 래트가 제 카올리 등(Ge Chaoli, et al.)에 의해 12개의 그룹으로 나뉘어지고, 이는 또한 샘플링 시점의 차이에 따라 각각의 그룹에 대해 1, 2, 4, 8, 24, 48시간으로 나뉘어지며, 대조군은 동등한 양의 파라핀 오일 용액이 투여된다. 2개 그룹의 래트가 희생되고, 뇌가 각각 상기 언급된 시점에서 획득되고, 투과전자현미경으로 관찰된다. 연구는 용뇌가 래트 대뇌 모세관 내피 세포 사이의 치밀이음부에 대해 유의한 영향을 미치고; 대조군과 비교하여, 세포간 치밀이음부 갭이 확장되고, 불연속이 되고, 구조에 있어서 축소되고, 4시간 동안 용뇌가 투여된 후, 변화가 발생하기 시작하여, 8시간째에 피크에 도달하고, 48시간에서 정상으로 회복하는 것을 제시하며, 이는 용뇌가 래트 혈액뇌장벽의 초미세구조를 가역적으로 변화시킬 수 있음을 나타낸다. 첸 얀밍(Chen Yanming)에 의해 제조된 전통 중국 약물 용뇌를 함유한 토끼 혈청은 양성 대조군 약물로서 베라파밀을 이용하며, MDCK(매딘-다비 개 신장) 및 HeLa(인간 자궁암) 세포주 둘 모두에 대해, 용뇌가 빈크리스틴에 의해 야기된 세포독성을 유의하게 증가시킬 수 있으며, 베라파밀과 유사한 효과를 갖는 것이 MTT 방법을 이용하여 관찰되고 밝혀졌으며, 이는 용뇌가 P-당단백질의 발현에 대해 유의한 억제 효과를 갖는 것을 예시한다. 용뇌를 이용한 혈액뇌장벽의 생리학적 개방의 촉진이 용뇌가 혈액뇌장벽에 진입한 후 용뇌와 P-당단백질의 친화성이 커지고, 결과로서, 용뇌가 세포 외로 펌핑되고, 따라서 P-당단백질과 적은 친화성을 갖는 혈관 활성 물질 5-HT가 세포 내에 축적되어 혈액뇌장벽의 개방을 촉진한다는 사실로 인한 것임을 제시하는 연구가 또한 존재한다.
때죽나무(Styrax): 래트는 설피리드 조합된 때죽나무 그룹 및 단일-사용 설피리드 그룹으로 나뉘어지고, 래트가 1주 동안 지속적으로 경구 약물을 복용한 후, 래트의 뇌 및 목 내에 프로브를 비치시키기 위한 수술이 수행되고, 1시간 동안 평형이 기다려지고, 래트의 우심방의 혈액에서의 투석액 및 대뇌내 해마 조직에서의 투석액이 혈액 미세투석 및 뇌 미세투석 방법 각각에 각각의 시점(30, 60, 90, 120, 150, 180분)에서 수거되고, 샘플 내의 설피리드의 함량이 역상 고성능 액체 형광 크로마토그램 시스템에 의해 검출되고, 뇌 및 혈액 내의 설피리드의 함량이 통계 방법에 의해 약물 투여 후에 비교된다. 결과로서, 설피리드 조합 때죽나무 그룹에서의 래트의 뇌 및 혈액 내의 설피리드의 농도는 단일-사용 설피리드 그룹에서의 농도보다 높고, 래트의 혈액 및 뇌 내의 설피리드의 농도비는 단일-사용 설피리드 그룹에서 1:0.2이고, 래트의 혈액 및 뇌 내의 설피리드의 농도비는 설피리드 조합 때죽나무 그룹에서 1:0.3로 상승되고, 단일-사용 설피리드 그룹과 비교되고, 설피리드 조합 때죽나무 그룹에서 뇌 내의 설피리드의 농도는 39%까지 상승되고, 혈액 내의 설피리드의 농도가 69%까지 상승되는 것이 명백하다. 이는 때죽나무가 래트의 뇌 및 혈액 내의 설피리드의 농도를 유의하게 증가시킬 수 있고, 때죽나무가 설피리드가 위장 장벽 및 혈액뇌장벽을 투과하는 것을 촉진시킬 수 있음을 나타낸다.
사향노루속(Moschus): 전문적인 실험은 정맥내 주사를 위해 50mg/kg이 사용되거나 측뇌실 주사를 위해 2.5mg/kg이 사용되는 사향노루속 수용액 또는 현탁액이 짧은 시간 동안 조용한 토끼 피질 뇌파도(EEG) 및 각성된 토끼 피질 뇌파도(EEG)를 비동기화시킬 수 있고, 동물의 일부가 대뇌 피질이 흥분될 수 있고, 피질 전기 활성이 향상될 수 있음을 나타내는 경계 상태에서 안절부절증 거동을 가지며; 사향노루속 수용액이 마취된 토끼에 대해 명백한 각성 효과를 갖고, 측뇌실 주사가 정맥내 주사보다 더욱 효과적임을 나타내며, 상기 상술에서 사향노루속이 혈액뇌장벽을 투과하여 중추신경계에 직접 작용할 수 있는 것으로 기재될 수 있다.
창포: 창포는 전통적인 소생 유도 방향성 약초 중 하나로, 사람들 사이에서 단독으로 사용되거나 광범위한 사용을 위해 다른 전통적인 중국 약물과 양립되며, 뇌병증을 치료하기 위해 주로 사용되고, 명확한 치료 효과를 가지며, 창포가 BBB에 대해 특정 효과를 갖는 것이 유도되었다. 휘발성 오일은 중국 약전 2005의 부록 I에 기재된 휘발성 오일 추출 방법 I을 채택함으로써 추출되며, 추출률은 약 1.58%이고, 오일 분리 수중 달임물은 1 g/ml로 농축된다. 휘발성 오일 샘플이 α-아사론, β-아사론, 구아이엔 및 아코레논을 함유하는 것을 검출하기 위해 가스 크로마토그래피-질량분광법(GC/MS)이 채택되며, 휘발성 오일을 복용한 래트의 뇌척수액이 동일 조건하에서 검출되고, 결과는 α-아사론 및 β-아사론이 BBB를 투과하여 뇌척수액에 진입할 수 있음을 제시한다. 오일 분리 수중 달임물 샘플 및 오일 분리 수중 달임물이 투여된 래트의 뇌척수액 샘플을 결정하기 위해 액체 크로마토그래피-질량분광법(HPLC/MS)이 채택되며, 3개의 화합물이 검출되고, 분자량은 각각 396, 452 및 339이며, 공지된 창포 화합물은 아직 그 안에 포함되지 않는다. 약물 투여 전 및 후의 래트의 대뇌 피질 BBB의 초미세구조가 투과전자현미경을 통해 관찰되며, 창포의 모든 추출된 부분이 BBB 내피 세포의 치밀이음부(TJ)가 느슨해지도록 할 수 있으나, BBB는 기본적으로 완전하며, 아직 파괴되지 않는 것이 발견될 수 있다. 용뇌는 창포의 추출된 부분의 에반스 블루(EB)의 BBB 통과에 대한 촉진 효과를 예비적으로 논의하기 위한 양성 약물로 사용되며, 즉, 뇌 내의 EB 함량은 BBB의 투과성을 반영하고, 통계 분석은 뇌 내의 EB 함량이 용뇌가 위를 채운 지 2.5시간 후에 블랭크 그룹의 것보다 현저히 높고(P<0.01), 11.7 g/kg의 창포 용량을 갖는 자가-투여 약물이 0.5 내지 2.5시간 내에 명백한 효과를 발생시키지 않는 것을 제시하며; 창포의 투여 시간은 연장되고, 5시간 후의 뇌 내의 EB 함량은 창포의 휘발성 오일 용량이 23.4 g/kg 및 11.7 g/kg인 경우에 블랭크 그룹의 것보다 현저히 높고(P<0.05), 용량 의존성이 존재하는 경향이 있고; 전체 용량이 11.7 g/kg인 경우, 5시간 후의 뇌 내의 EB 함량은 블랭크 그룹의 것보다 현저히 높다(P<0.01). 창포의 추출된 부분이 래트의 위에 채워지고 1주 후, 페니토인 소듐이 복강에 주사되고, 뇌 내의 페니토인 소듐의 농도를 검출하기 위해 HPLC 방법이 채택되며, 결과는 창포를 복용한 전체 그룹 동물의 뇌 내의 페니토인 소듐의 함량이 창포를 복용하지 않은 동물 그룹의 뇌 내의 것보다 높으나, 더 높은 농도(P<0.01)가 4시간 후에 여전히 유지되는 것을 제시한다. 뇌 조직 내의 5-하이드록시트립타민(5-HT)의 농도를 검출하기 위해 HPLC-ECD가 이용되며, 통계 분석은 블랭크 그룹과 비교하여, 휘발성 오일 그룹의 래트의 뇌 내의 5-HT의 함량이 증가되고(P<0.05), 창포 수중 달임물 그룹에서의 5-HT의 함량 및 전체 약물 그룹에서의 5-HT의 함량이 현저히 증가(P<0.01)되는 것을 제시한다. BBB 상의 P-당단백질에 대한 창포의 활성을 평가하기 위한 담체로서 제공하기 위해 HeLa 세포주가 적용되고, 창포의 일부(휘발성 오일, 수중 달임물 및 전체 약물)가 0.5시간 후에 빈크리스틴(VCR)의 세포독성을 명백히 강화시킬 수 있으며(P<0.01); 휘발성 오일 부분은 8시간 후에 VCR의 세포독성을 여전히 명백히 강화시킬 수 있고(P<0.01), 휘발성 오일의 약물 효과 유지 시간은 양성 약물 베라파밀(VER)의 것보다 명백히 더 길고(P<0.01); 양성 약물 및 창포의 일부는 24시간 후에 VCR의 세포독성에 대해 명백한 효과가 없다(P>0.05). 요컨대, 창포는 래트 BBB의 초미세구조에 영향을 미칠 수 있고, EB로의 BBB의 투과성을 강화시킬 수 있고, 뇌로 진입하는 CNS 약물 페니토인 소듐의 함량의 증가를 촉진시킬 수 있고, BBB를 활성화시키고 뇌로 약물을 유도하는 약리학적 작용을 갖는다. 작용 메커니즘 연구 결과는 창포에 의한 5-HT 함량 조절이 이의 BBB 투과성 증가 메커니즘 중 하나이고, 또한 창포가 또한 BBB 투과성 증가의 작용 메커니즘인 HeLa 세포막 상에서의 P-당단백질 약물의 세포외유출을 억제하는 매우 강한 효과를 갖는 것을 제시한다.
울금: 울금 내에 함유된 커큐민(curcumin)은 노인 치매를 억제하는 효과를 갖는다. 치매의 주요 원인은 아밀로이드 β의 꼬임이다. 커큐민은 꼬인 아밀로이드 β가 느슨해지는 것을 가능케 한다. 커큐민은 강력한 항산화제 및 항염증 화학 분자이고, 엄격하게 보호되어 있는 혈액뇌장벽을 투과하여 산화 독성을 갖는 산화물 및 구리 이온을 중화시킬 수 있으며, 이 이상으로, 커큐민은 염증을 야기시키는 세포 전사 인자(NF 카파 B)를 추가로 억제할 수 있다. 따라서, 커큐민은 뇌 조직을 보호하고 치매를 감소시키기 위한 주요 성분이다. 인도에서, 치매를 갖는 환자의 수는 다른 국가의 환자의 단지 10%이며, 커큐민의 기여는 간과될 수 없다.
발명의 내용
본 발명의 일차 목적은 치매를 예방하고/하거나 치료하는데 있어서의 20(R)-진세노사이드 Rg3의 성능 및 효과를 제공하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3의 새로운 약학적 용도, 즉, 치매를 치료하고, 조정하고, 경감시키기 위한 약물 또는 건강 식품에서의 새로운 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 진세노사이드 Rg3의 임상 사용 결함, 예를 들어, 불충분한 경구 흡수 및 불충분한 혈액뇌장벽 투과에 대해 진세노사이드 Rg3 국소 제조물을 제공하는 것이다. 본 발명의 진세노사이드 Rg3 국소 약물 제조물은 치매를 치료하기 위해, 특히 알츠하이머병을 치료하고 예방하기 위해 코의 양측, 목 및 귀 뒤의 피부 상에 직접 적용된다.
목적을 달성하기 위해, 한편으로, 본 발명은 치매를 예방하고/하거나 치료하기 위한 약물 또는 건강 관리 제품 제조에서의 20(R)-진세노사이드 Rg3의 용도를 제공하며, 치매는 알츠하이머병 및 혈관 치매, 바람직하게는 알츠하이머병이고, 약물은 20(R)-진세노사이드 Rg3 및 약학적으로 허용되는 담체로 구성된다.
특히, 약물은 인삼 오일, 천궁(Rhizoma Chuanxiong) 오일, 창포 오일, 사향노루속 오일 또는 울금 오일 중 하나 이상을 추가로 포함한다.
본 발명의 20(R)-진세노사이드 Rg3는 단독으로 또는 20(R)-진세노사이드 Rg3를 함유하는 약물 조성물의 형태로 치매를 예방하거나 치료하기 위해 이용될 수 있다.
본 발명의 약물은 경구, 설하, 경피, 근내, 피하, 점막피부 및 정맥내 방식에 의해 투여된다.
본 발명은 활성 성분으로 사용되는 20(R)-진세노사이드 Rg3를 갖는 치매를 예방하거나 치료하기 위한 약물 제조물, 및 상응하는 약학적 투여 형태를 제공한다. 약물 제조물은 활성 성분으로서 20(R)-진세노사이드 Rg3를 이용하고, 다른 약학적으로 허용되는 담체 성분을 포함하며, 20(R)-진세노사이드 Rg3의 함량은 80%와 동등하거나 이보다 크고, 바람직하게는 90%보다 높고, 추가로 바람직하게는 95%보다 높다.
본 발명의 약물은 경구 제조물, 주사액 및 국소 제조물의 형태로 제공된다. 경구 제조물은 정제, 캡슐, 환약, 분말, 과립, 시럽 또는 용액을 포함하고; 주사액은 주사 용액 또는 주사용의 동결건조된 분말을 포함하고; 국소 제조물은 크림, 연고, 스프레이, 에어로졸, 패치, 젤, 나리스틸라에(naristillae) 또는 찜질약을 포함한다.
본 발명의 약물은 정제, 캡슐, 환약, 분말, 과립, 시럽, 용액, 주사액, 스프레이, 에어로졸, 패치, 젤, 나리스틸라에 또는 찜질약의 형태로 제공되며, 즉, 약물 제조물은 정제, 캡슐, 환약, 분말, 과립, 시럽, 용액, 주사액, 스프레이, 에어로졸, 패치, 젤, 나리스틸라에, 찜질약 등을 포함하나, 상기 형태로 제한되지는 않는다.
다른 한편으로, 본 발명은 치매를 예방하고/하거나 치료하기 위한 20(R)-진세노사이드 Rg3를 함유하는 약물 또는 건강 관리 제품을 제공한다.
약물 또는 건강 관리 제품은 인삼 휘발성 오일, 사향노루속 휘발성 오일, 창포 휘발성 오일, 울금 휘발성 오일 또는 천궁 휘발성 오일 중 하나를 추가로 포함한다.
특히, 약물 또는 건강 관리 제품 내의 20(R)-진세노사이드 Rg3의 함량은 80% 이상이고, 바람직하게는 90%보다 높고, 추가로 바람직하게는 95%보다 높다.
본 발명자는 상당한 현대 과학 연구를 통해 약용 인삼으로부터 치매를 예방하고 치료하기 위한 활성 성분 20(R)-진세노사이드 Rg3를 추출하기 위해 진보된 분리 및 정제 기술을 이용하였고, 20(R)-진세노사이드 Rg3 및 이의 상응하는 약물 제조물에 대한 항-치매 약역학 및 약리학 연구를 수행하였고, 결과는 20(R)-진세노사이드 Rg3의 단량체가 명백한 약리 작용, 높은 항-치매 효능, 낮은 독성 또는 부작용 및 높은 안전성을 제공하며, 항-노화 및 항-치매를 위해 매우 효과적이고 낮은 독성의 약물이 제공되는 것을 제시한다.
치매를 예방하고 치료하기 위한 현존하는 약물과 비교하여, 본 발명은 하기 장점을 갖는다:
1. 본 발명은 공지된 화합물 20(R)-진세노사이드 Rg3의 새로운 약용 가치를 조사하며, 20(R)-진세노사이드 Rg3는 치매를 예방하고 치료하기 위해 이용될 수 있고, 치매를 예방하고 치료하기 위한 약물 또는 건강 식품으로 제조될 수 있고, 따라서 약용 인삼의 적용을 위한 새로운 분야를 개발한다.
2. 본 발명의 일련의 실험 연구는 20(R)-진세노사이드 Rg3가 치매를 예방하고 치료하는데 뛰어난 효능을 갖는 것을 입증한다. 진세노사이드 Rg3는 대뇌 피질의 AChE 양성 신경 섬유 밀도를 유의하게 개선시키고, 이는 진세노사이드 Rg3가 알츠하이머병을 갖는 대뇌내 콜린성 신경계에 대한 보호 효과를 갖는 것을 제시하며; 알츠하이머병을 갖는 래트 모델의 학습 및 기억에 대한 진세노사이드 Rg3 효과의 실험에서, 수중 미로에서 래트가 헤엄쳐 나오는 시간은 짧으며, 착오 시간이 더 짧은데, 이는 진세노사이드 Rg3가 알츠하이머병을 갖는 모델 래트의 학습 및 기억 능력을 명백히 개선시킬 수 있음을 의미하며; 진세노사이드 Rg3는 AD를 갖는 환자의 뇌척수액 내의 Aβ 함량을 감소시킬 수 있고, 진세노사이드 Rg3는 환자의 지능 및 기억을 효과적으로 개선시킬 수 있고, AD의 임상 치료에서 사용되는 경우 인지 기능 및 일상 생활 능력을 개선시킬 수 있다.
3. 본 발명의 20(R)-진세노사이드 Rg3는 강한 약리학적 효과를 갖고, 유의한 항-노화 효능, 신속한 작용, 적은 독성 또는 부작용 및 우수한 안전성을 가지며, 20(R)-진세노사이드 Rg3는 상습적으로 복용될 수 있고, 우수한 약용 전망을 갖는다.
4. 본 발명의 생성 물질은 공급원이 풍부하고, 비용이 저렴하고, 임상 사용에 있어서 안전하고, 제조 공정이 간단하며, 다양한 제조물로 제조될 수 있고, 적은 용량을 갖고, 사용하기 용이하고, 따라서 용이하게 보급된다.
도 1은 진세노사이드 Rg3 (A) 및 다이오신 (B)의 준-분자 이온 [M-H]-의 이차 풀-스캔 질량 스펙트럼을 제시한다;
도 2는 LC/MS/MS 방법에 의해 결정된 간 균질액 내의 진세노사이드 Rg3(채널 I, m/z 783.8 → 160.8) 및 내부 기준 다이오신(채널 II, m/z 867.5 → 721.5)의 통상적인 크로마토그램을 제시하며; 여기서 (A)는 래트의 블랭크 간 균질액이고; (B)는 래트의 블랭크 간 균질액에 2 ng/ml의 진세노사이드 Rg3 및 100 ng/ml의 내부 기준 다이오신을 첨가한 것이고; (C)는 래트에 10 mg/kg의 진세노사이드 Rg3를 경구 투여(10.8 ng/g)한 후의 뇌척수액 샘플이다.
구체예의 설명
본 발명의 약물의 이로운 효과는 하기 시험 예에 의해 추가로 예시되며; 이들 예는 본 발명의 약물의 약역학 시험을 포함한다.
시험 예 1. 알츠하이머병을 갖는 래트 모델의 대뇌내 콜린성 신경계에 대한 진세노사이드 Rg3의 보호 효과
1. 재료:
배치 번호(batch number) 20120316을 갖는 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 생산된 20(R)-진세노사이드 Rg3(순도>98%); 중국식품약품검정연구원(National Institute for Food and Drug Control of China)에 의해 제공된 기준 제품과 비교되고, HPLC에 의해 측정되고, 함량은 교정 값에 따르고, 측정된 값은 98.2%이다;
진세노사이드 Rg3는 적용 준비를 위해 구체예 7의 식 및 방법에 따라 국소 용도의 로션으로 제조되며; 로션의 시험 생산은 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 수행되고, 배치 번호는 20120425이다;
양성 약물: 배치 번호 20111215를 갖는 Shanghai Hongqi Pharmaceutical Factory에 의해 생산된 후퍼진 A(Huperzine A);
D-갈락토스: Shanghai Chemical Reagent No. 2 Factory에 의해 생산되며, 배치 번호는 20110607이다.
이보텐산(Ibotenic acid)(IBO), Sigma-Aldrich Co. LLC.에 의해 생산되며, 배치 번호는 20101224이다.
15개월령이고, 300-450 g의 체중을 갖는 60마리의 예비의 늙은(preliminary elder) 암컷 위스타(Wistar) 래트, 다롄 의과 대학(Dalian Medical University)의 실험 동물 센터로부터 구입하였고, 품질증명서 번호는 SCXK(13)2012-0003이다.
2. 방법 및 결과:
2.1. 방법
각각 300-500 g의 체중을 갖는 60마리의 위스타 래트가 각 그룹이 10마리를 갖도록 6개의 그룹으로 무작위로 나뉘어지고, 상기 그룹은 다양한 치료 방법에 따라 각각 예비의 늙은 정상 대조군, 예비의 늙은 AD 모델 그룹, 양성 약물 후퍼진 A 그룹, 및 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 국소 제조물 그룹으로 명명된다. 래트는 각각 4-5마리의 래트를 갖는 개별적 우리에서 사육되며, 자연광 및 임의의 음용수 및 사료가 제공된다. 예비의 늙은 정상 대조군에서 각각의 래트의 복강 및 그레인(grain)에 생리 식염수가 주사되고; 예비의 늙은 AD 모델 그룹, 양성 약물 후퍼진 A 그룹, 및 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 국소 제조물 그룹의 모든 래트에 갈락토스 복막내 주사 및 IBO 대뇌내 주사가 제공되고; 후퍼진 A 그룹 및 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 국소 제조물 그룹의 래트는 모델링을 위해 D-갈락토스 주사에 적용되는 한편, 각각의 그룹의 래트에는 후퍼진 A 0.3 mg/kg/d 및 진세노사이드 Rg3 10, 5, 2.5 mg/kg/d가 각각 제공된다. 진세노사이드 Rg3는 진세노사이드 Rg3 국소 제조물 그룹의 각각의 래트의 코의 양측에 적용된다. 모든 래트는 6주 동안 지속적으로 약물에 적용된 후, 대뇌내 양측 마이너르트(Meynert) 핵 주사가 수행된다. 마이너르트 핵 국소화에 대해서는 래트 대뇌 입체정위 도감이 참조되고, 국소화 좌표는 AP-0.8 mm, Late 2.6 mm 및 DV 8.2 mm이다. 대뇌내 주사 동안, 래트는 3% 펜토바르비탈 소듐(30 mg/kg)으로 마취된 후, 대뇌 입체정위 장치에 고정되고, 생리식염수 용해된 IBO(각각의 측면에 대해 5 ㎍의 IBO를 함유하는 1 ㎕ 주사) 또는 1 ㎕ 일반 식염수가 마이너르트 핵으로 천천히 주사되고, 각각의 측면은 5분 동안 주사되고, 바늘이 10분 동안 유지되고, 여기서 모든 래트는 모델링 후에 4% 파라포름알데하이드를 이용한 대뇌 관류에 적용된 후, 24시간 동안 고정되고, 뇌는 뇌 조직 블록이 가라앉을 때까지 수크로스 포스페이트 완충액에 두어지고, 블록은 인큐베이터에서 동결되고, 연속적으로 40 mm 두께로 섹션화된다. 섹션은 헤드린 등(Hedreen, et al.)에 의해 권장된 방법에 의해 아세틸콜린에스테라제(AChE) 조직화학 염색에 적용된다. AChE 양성 신경 섬유 밀도를 관찰하기 위해 전두엽, 두정엽, 후두엽 및 내후각 피질(층 II)뿐만 아니라 해마 형성체의 해마 CA1 영역 내의 일부, 예를 들어, 지향층(stratum oriens), 방사층(stratum radiatum), 소강층(stratum lacunosum)-분자층(stratum moleculare) 및 치아 이랑의 분자층이 관찰되고, AChE 양성 신경 섬유 밀도가 현미경에 대해 사용되는 마이크로미터를 이용하여 표준 격자를 이용한 양성 섬유의 다수의 교차점으로 계수된다.
2.2. 결과
래트에서의 피질 및 해마 형성체에 대한 아세틸콜린에스테라제 양성 신경 섬유 밀도 시험의 결과가 표 1 및 2에서 관찰되며, 모든 결과는 (X±S)로 표현되고, 일원분산분석이 SAS 6.11 통계 패키지를 이용하여 수행된다. 유의 수준은 0.05와 동등하다.
표 1. 래트 피질 AchE 양성 신경 섬유 밀도(X±S)
Figure 112016059948556-pct00001
표 1의 결과로부터, 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 그룹에서의 모든 부분에 대한 AChE 양성 신경 섬유 밀도는 모두 유의한 증가를 획득하며, 전두엽 및 후두엽 둘 모두에 대한 밀도는 모델 그룹 및 후퍼진 그룹에서의 것과 유의하게 상이(P<0.05 및 P<0.01)하며, 실질적으로 정상 수준으로 회복된다(정상 그룹의 것과 비교하여, P>0.05).
표 2. 래트 해마 형성체 AchE 양성 신경 섬유 밀도(X±S)
Figure 112016059948556-pct00002
표 2의 결과로부터, 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 그룹에서의 모든 부분에 대한 AChE 양성 신경 섬유 밀도는 모델 그룹에서의 것보다 높고, CA1 영역 내의 지향층, 방사층 및 치아 이랑의 분자층에 대한 밀도는 정상 그룹에서의 것과 유의하게 상이하지 않다(모두에 대해 P>0.05).
상기 시험 결과는 진세노사이드 Rg3가 알츠하이머병을 갖는 래트 모델의 대뇌내 콜린성 신경계를 보호할 수 있음을 제시한다.
시험 예 2. 알츠하이머병을 갖는 래트 모델의 학습 및 기억에 대한 진세노사이드 Rg3의 효과
1. 재료:
배치 번호 20120316을 갖는 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 생산된 20(R)-진세노사이드 Rg3(순도>98%); 중국약품생물제품검정소(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products of China)에 의해 제공된 기준 제품과 비교되고, HPLC에 의해 측정되고, 함량은 교정 값에 따르고, 측정된 값은 98.2%이다;
진세노사이드 Rg3는 예비품(spare)을 위해 구체예 17의 식 및 방법에 따라 경구 에멀젼(10 mg/ml)으로 제조되며; 경구 에멀젼의 시험 생산은 Dalian Fusheng Pharmaceutical Co., Ltd.에 의해 수행되고, 배치 번호는 20120320이다;
양성 약물. 배치 번호 20110607을 갖는 D-갈락토스(Shanghai Chemical Reagent No. 2 Factory에 의해 생산됨).
이보텐산(IBO), Sigma-Aldrich Co. LLC에 의해 생산되며, 배치 번호는 20101224이다.
6개월령이고, 180-250 g의 체중을 갖는 60마리의 예비의 늙은 암컷 위스타(Wistar) 래트, 다롄 의과 대학의 실험 동물 센터로부터 구입하였고, 품질증명서 번호는 SCXK(13)2012-0003이다.
2. 방법:
실험실의 안정적 조건하에서 1주일 동안 급식 후 수중 미로 예비-훈련이 수행되고, 유사한 체중 및 우수한 유연성을 갖는 60마리의 래트가 선택되고, 정상 대조군, 모의 수행된 대조군, 모델 대조군, 및 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 그룹(10, 5, 2.5 mg/kg/d)의 6개의 그룹으로 무작위로 나뉘어지며, 여기서 각각의 그룹은 10마리의 동물을 갖는다.
연속 6주 동안 하루에 1회로 5 mL/kg의 일반 식염수에 의해 제조된 0.96% D-갈락토스의 복막내 주사를 적용하는 몰딩(molding) 방법이 래트에 적용되어 모델 래트가 제조된다. 모의 수행된 대조군의 래트에 당량의 일반 식염수가 주사된다. 모델 대조군 및 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 그룹의 래트 그룹에 43일째에 시작하여 IBO가 두개내 주사되고, 각각의 측면에 1 μL의 IBO가 천천히 주사되고, 모의 수행된 그룹의 래트에 동일한 뇌 영역에 당량의 일반 식염수가 주사(연속 4주 동안)된다. 정상 대조군의 래트는 어떠한 처리도 없으며, 정상적으로 섭식하고 음용한다. 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 그룹의 래트에는 몰딩 동안 매일 진세노사이드 Rg3 경구 에멀젼이 위내 투여되고, 몰딩 후에 4w(주) 동안 투여된다.
각각의 그룹에서의 동물 행태학의 변화가 채널-타입 수중 미로 시험에 의해 시험되고, 막다른 끝에 진입하는 수 및 종점에 도달하는데 필요한 시간에 의해 래트의 학습 및 기억 능력이 평가된다. 모든 시험 결과는 평균 ± 표준편차로 표현되고, 그룹간 차이는 SPSS10.0 통계 패키지를 채택함으로써 분산 분석에 적용된다.
3. 결과:
시험 결과는 표 3에 제시된다.
표 3. 알츠하이머병을 갖는 래트 모델의 학습 및 기억에 대한 Rg3 경구 에멀젼의 효과(X±S)
Figure 112016059948556-pct00003
동물이 수중 미로 밖으로 헤엄쳐 나오는 시간이 짧고, 착오 시간이 적을수록, 동물의 학습 및 기억 능력이 더 크다. 표 3으로부터 관찰될 수 있는 바와 같이, 모델 그룹의 동물의 헤엄쳐 나오는 시간 및 착오 시간은 정상 그룹 및 모의 수행된 그룹의 것보다 명백히 더 많고, 고용량, 중간 용량 및 저용량의 진세노사이드 Rg3 그룹의 동물의 헤엄쳐 나오는 시간 및 착오 시간은 모델 그룹의 것보다 명백히 더 적으며, 이는 진세노사이드 Rg3가 모델 래트의 학습 및 기억 능력을 명백히 향상시킬 수 있음을 나타낸다.
시험 예 3. 알츠하이머병을 갖는 환자의 뇌척수액 β 아밀로이드 단백질 함량에 대한 진세노사이드 Rg3의 효과
3.1. 시험 재료:
배치 번호 20120316을 갖는 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 생산된 20(R)-진세노사이드 Rg3(순도>98%); 중국식품약품검정연구원에 의해 제공된 기준 제품과 비교되고, HPLC에 의해 측정되고, 함량은 교정 값에 따르고, 측정된 값은 98.2%이다;
진세노사이드 Rg3는 적용 준비를 위해 구체예 27의 식 및 방법에 따라 진세노사이드 Rg3 경구 용액(10 mg/ml)으로 제조되며; 진세노사이드 Rg3 경구 용액의 시험 생산은 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 수행되고, 배치 번호는 20120321이다;
양성 대조 약물, 도네페질(donepezil)(5mg*7, Eisai (China) Pharmaceutical Co., Ltd.).
3.2. 시험 방법:
36명의 환자는 모두 입원 환자이며, 진세노사이드 Rg3 경구용 액체 그룹 및 도네페질 그룹으로 무작위로 나뉘어지며, 각각의 그룹은 18명의 환자를 갖는다. 진세노사이드 Rg3 경구용 액체 그룹은 수면 전에 진세노사이드 Rg3 경구용 액체(10 mg/d)가 경구 투여되고; 도네페질 그룹은 수면 전에 5 mg/d의 도네페질이 경구 투여된다. 둘 모두의 그룹은 연속 12주 동안 약물을 복용한다. 2 ml의 뇌척수액이 요추 천자에 의해 수거되고, -80℃에 저장되고, 효소 결합 면역흡착 측정법(ELISA)을 이용하여 β-아밀로이드 단백질(Aβ) 함량이 결정된다. 스코어링하기 위해 개정된 하세가와 치매 척도(Hasegawa dementia scale)(HDS-R)가 이용되고, 치료 전 및 후의 스코어가 비교되며, 스코어의 증가는 유효성을 의미하고, 스코어의 무변화 또는 감소는 무효를 의미한다. 계수 데이터는 χ2 검정을 채택하고, 계수 데이터의 비교는 t-검정을 채택하고, 모든 데이터는 SPSS12.0 통계 소프트웨어를 채택함으로써 처리된다. 시험 결과는 표 4에 제시된다.
2개 그룹의 임상 치료 효과에 대한 분석. 진세노사이드 Rg3 경구용 액체 그룹의 임상 증상의 스코어에 있어서 증가된 환자의 수는 14이고, 스코어에 있어서 일정한 환자의 수는 3이고, 스코어에 있어서 감소된 환자의 수는 1이고, 따라서 유효율은 77.8%이다. 도네페질 그룹의 임상 증상의 스코어에 있어서 증가된 환자의 수는 13이고, 스코어에 있어서 일정한 환자의 수는 3이고, 스코어에 있어서 감소된 환자의 수는 2이고, 유효율은 72.2%이고, 2개의 그룹 사이에 유의한 차이는 없다(P>0.05).
표 4. 2개 그룹의 치료 전 및 후의 스코어 및 Aβ 함량의 비교(n=18, X±s)
Figure 112016059948556-pct00004
치료 전의 상황과 비교하여, 치료 후의 2개 그룹의 스코어는 명백히 증가되고(P<0.05), 진세노사이드 Rg3 그룹의 스코어는 유의하게 증가(P<0.05)되는 것이 표 4의 결과로부터 인지될 수 있다. 치료 후의 진세노사이드 Rg3 그룹의 Aβ 함량은 명백히 감소되고(P<0.05), 치료 후의 양성 약물 대조군의 Aβ 함량은 명백한 변화를 나타내지 않는다(P>0.05). 임상적 관찰은 AD의 임상 치료에서의 진세노사이드 Rg3의 적용이 환자의 지능 및 기억을 효과적으로 향상시킬 수 있고, 이들의 인지 기능 및 일상 생활 활동을 개선시킬 수 있음을 제시한다. 연구는 진세노사이드 Rg3가 AD를 갖는 환자의 뇌척수액에서 Aβ 함량을 감소시킬 수 있음을 나타낸다. 이는 AD를 치료하는 이의 작용 메커니즘 중 하나일 수 있다.
시험 예 4. 경증 또는 중등증의 알츠하이머병에 대한 진세노사이드 Rg3의 유 효성에 대한 임상 연구
1. 시험 재료:
배치 번호 20120316을 갖는 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 생산된 20(R)-진세노사이드 Rg3(순도>98%); 중국약품생물제품검정소에 의해 제공된 기준 제품과 비교되고, HPLC에 의해 측정되고, 함량은 교정 값에 따르고, 측정된 값은 98.2%이다;
진세노사이드 Rg3는 적용 준비를 위해 구체예 29의 식 및 방법에 따라 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에(10 mg/ml)으로 제조되며; 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에의 시험 생산은 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 수행되고, 배치 번호는 20120324이다.
2. 시험 방법:
경증 또는 중등증의 알츠하이머병을 갖는 89명의 환자가 하나는 진세노사이드 Rg3를 복용하는 그룹 및 나머지는 위약을 복용하는 그룹의 2개의 그룹으로 무작위로 나뉘어진다. Rg3를 복용하는 그룹은 46명의 환자가 존재하며, 이중 21명은 남성이고 25명은 여성이고, 58 내지 87(72.6±6.8)세 연령이며, 간이-정신 상태 검사(mini-mental state examination)(MMSE)에서 10 내지 24(17.8±2.3) 포인트로 스코어링되며; 위약을 복용하는 그룹은 43명의 환자가 존재하며, 이중 19명은 남성이고 24명은 여성이고, 57 내지 88(71.8±8.2)세 연령이며, MMSE에서 10 내지 24(18.2±2.7) 포인트로 스코어링된다. 성별, 연령 및 MMSE 스코어와 관련하여 진세노사이드 Rg3 그룹과 위약 그룹 사이에는 명백한 차이가 없다. 진세노사이드 Rg3를 복용하는 그룹의 환자는 연속 12주 동안 하루에 1회로 각각의 횟수 당 10 mg/ml로 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에를 이용한다.
위약을 복용하는 환자에 대해, 비내 투여에 사용되는 것이 위약이라는 것을 제외하고, 나머지는 진세노사이드 Rg3를 복용하는 환자에 의해 채택되는 것과 동일한 투여 방법에 따라 수행된다. 위약은 구체예 29에서 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에를 제조하기 위해 이용되는 방법에 따라 제조된다. 이에 대해, 진세노사이드 Rg3가 첨가되지 않는 것을 제외하고는, 나머지는 구체예 29와 동일하다.
진세노사이드 Rg3 나리스틸라에는 10 mg/ml의 농도를 가지며, 위약의 색, 특성, 맛 및 투여량은 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에의 것과 동일하다. 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에 및 위약은 연속 12주 동안 하루에 1회 적용된다. 시험은 약물 치료 전 및 후에 4주마다 1회 수행되고, 시험 방법은 다음과 같다:
(1) AD의 MMSE 스크리닝: 환자의 인지 기능(방향감, 기억, 연산 능력, 언어 능력, 시각-공간 세그먼트를 적용하는 능력 등) 검사; (2) 임상 치매 척도(CDR)을 이용한 환자의 치매 정도 검사; (3) 일상 생활 활동 척도(ADL)를 이용한 환자의 일상 생활 활동 검사.
시험 결과에 대해 SPSS 통계 소프트웨어가 채택된다. 치료 전 및 후에 T-검정이 채택되고, 이는 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에 그룹 및 위약 대조군에 대해서도 채택된다. 치료 전의 AD를 갖는 환자의 MMSE, CDR 및 ADL의 스코어링 결과에 대해, 표 5를 참조하라.
표 5. 치료 전 AD를 갖는 환자의 MMSE , CDR 및 ADL의 스코어링 결과(x±s, 포인트)
Figure 112016059948556-pct00005
12주 동안 Rg3 및 위약을 복용한 후의 AD를 갖는 환자의 MMSE, CDR 및 ADL의 스코어링 결과에 대해, 표 6을 참조하라.
표 6. 12주 동안 치료 후의 AD를 갖는 환자의 MMSE , CDR 및 ADL의 스코어링 결과(x±s, 포인트)
Figure 112016059948556-pct00006
인지 기능(MMSE에 의해 스코어링됨): 위약 대조군의 치료 효과는 치료 후 진세노사이드 Rg3 그룹이 위약 대조군과 비교하는 경우 이의 MMSE 스코어에 있어서 명백한 증가(P<0.01)를 제시하는 것을 나타내고; 치매 등급(CDR에 의해 스코어링됨): 치료 후, 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에 그룹은 위약 대조군과 비교하는 경우 이의 CDR 스코어에 있어서 유의한 감소(P<0.05)를 제시하고; 일상 생활 활동(ADL에 의해 스코어링됨: 치료 후, 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에 그룹은 위약 대조군, 및 치료 전의 상황과 비교하는 경우 이의 ADL 스코어에 있어서 매우 유의한 감소(P<0.01)를 제시하며, 치료 후의 ADL 스코어는 7.1 포인트까지 매우 명백히 감소된다(P<0.01).
요컨대, 진세노사이드 Rg3는 AD를 갖는 환자를 치료하고, AD를 갖는 환자의 경증 및 중등증의 인지 장애, 감소된 일상 생활 자기-관리 능력 및 치매의 정도를 경감시키기 위해 사용되는 안전하고 효과적인 약물이다.
시험 예 5. 경증 및 중등증의 알츠하이머병에 대한 진세노사이드 Rg3의 효과에 대한 임상 연구
1. 시험 재료:
배치 번호 20120316을 갖는 Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 생산된 20(R)-진세노사이드 Rg3(순도>98%); 중국약품생물제품검정소에 의해 제공된 기준 제품과 비교되고, HPLC에 의해 측정되고, 함량은 교정 값에 따르고, 측정된 값은 98.2%이다;
진세노사이드 Rg3는 적용 준비를 위해 구체예 29의 식 및 방법에 따라 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에(10 mg/ml)로 제조되며; 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에의 시험 생산은 Dalian Fusheng Pharmaceutical Co., Ltd.에 의해 수행되고, 배치 번호는 20120324이다.
2. 시험 방법:
경증 또는 중등증의 알츠하이머병을 갖는 99명의 환자, 이 중 47명은 남성이고, 52명은 여성이고, 모두 55 내지 85(73.5±7.6)세 연령이고, MMSE 스코어는 10~24(16.3±2.6) 포인트이다.
AD를 갖는 환자는 모두 하루에 1회로 각 횟수에서 10mg/ml로 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에를 이용하며, 이를 12주 동안 지속적으로 이용한다.
시험은 약물 치료 전 및 후에 4주마다 1회 수행되고, 약물 치료 방법은 다음과 같다:
(1) AD의 MMSE 스크리닝: 환자의 인지 기능(방향감, 기억, 연산 능력, 언어 능력, 시각-공간 세그먼트를 적용하는 능력 등) 검사; (2) 임상 치매 척도(CDR)을 이용한 환자의 치매 정도 검사; (3) 일상 생활 활동 척도(ADL)를 이용한 환자의 일상 생활 활동 검사.
시험 결과에 대해 SPSS 통계 소프트웨어가 채택된다. 치료 전 및 후에 T-검정이 채택되고, 이는 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에 그룹 및 위약 대조군에 대해서도 채택된다.
AD를 갖는 환자의 MMSE, CDR 및 ADL의 스코어링 결과에 대해, 표 7을 참조하라.
표 7. Rg3를 이용한 치료 전 및 후의 AD를 갖는 환자의 MMSE , CDR , ADL의 스 코어링 결과(x±s, 포인트)
Figure 112016059948556-pct00007
인지 기능(MMSE에 의해 스코어링됨): 12주 동안 치료 후의 효과는 유의하게 증가되고, MMSE 스코어는 3.5 포인트까지 증가되고(P<0.01), MMSE 스코어는 4주 동안 치료 후에 명백히 증가되었다(P<0.05). 치매의 정도(CDR에 의해 스코어링됨): 12주 동안 치료 후의 효과는 치료 전의 것과 비교하여 유의하게 감소되고, CDR 스코어는 0.6 포인트까지 감소된다(P<0.05). 일상 생활 능력(ADL에 의해 스코어링됨): 치료 후의 치료 효과는 치료 전의 것과 비교하여 명백히 감소되고, ADL 스코어는 7.1 포인트까지 감소된다(P<0.01).
요컨대, 진세노사이드 Rg3는 AD를 갖는 환자를 치료하고, AD를 갖는 환자의 경증 및 중등증의 인지 장애, 감소된 일상 생활 자기-관리 능력 및 치매의 정도를 경감시키기 위해 사용되는 안전하고 효과적인 약물이다.
본 발명은 하기 구체예에서 추가로 상세히 기재될 것이다.
구체예 1:
1. 하기 식에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g; 아존 2 g; 프로필렌 글리콜 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(65%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 프로필렌 글리콜을 에탄올(65%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(65%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 리니멘트(liniment)가 획득된다.
구체예 2:
1. 하기 식에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g; 아존 2 g; 폴리에틸렌 글리콜 400 10 ml; 및 적절한 양의 에탄올(70%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 폴리에틸렌 글리콜 400을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 혼합물(85 ml)을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(70%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 3:
1. 하기 식에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g; 아존 2 g; 폴리에틸렌 글리콜 600 10 ml; 및 적절한 양의 에탄올(70%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 폴리에틸렌 글리콜 600을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 혼합물(85 ml)을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(70%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 4:
1. 하기 식에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(63%) 2 g; 아존 2 g; 폴리에틸렌 글리콜 200 10 ml; 및 적절한 양의 에탄올(65%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 폴리에틸렌 글리콜 200을 에탄올(60%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(65%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 5
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(30%) 1 g, 글리세롤 2 g, 폴리에틸렌 글리콜 200 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(70%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 및 폴리에틸렌 글리콜 200을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(70%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 6
1. 하기 식에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 1 g; 중간-사슬 트리글리세라이드 20 g; 프로필렌 글리콜 10 ml; 포스파티드 20 g; 및 적절한 양의 주사용수;
2. 진세노사이드 Rg3, 중간-사슬 트리글리세라이드, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드를 적은 양의 주사용수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 주사용수를 100 ml로 보충하여 주사용 진세노사이드 Rg3 에멀젼이 획득된다.
본 발명의 구체예에서 사용되는 중간-사슬 트리글리세라이드, 즉, 데카노일/옥타노일-글리세라이드는 국내외에서 모두 수년의 적용에 따라 안전하고 신뢰성 있으며, 광범위한 적용 분야 및 사용 가치를 갖는 반합성 천연 기능성 지질이며, 이는 유럽 및 미국에서 MCT로 약어화된다. 생성물은 약물, 식품, 건강 관리 제품, 화장품 등에 광범위하게 적용될 수 있다.
구체예 7
1. 하기 식에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g; 아존 2 g; 인삼 오일 0.5 g; 프로필렌 글리콜 10 ml; 및 적절한 양의 에탄올(65%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 인삼 오일, 및 프로필렌 글리콜을 에탄올(65%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(65%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 8
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g; 아존 2 g; 울금 오일 1 g; 폴리에틸렌 글리콜 400 10 ml; 및 적절한 양의 에탄올(70%).
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 울금 오일, 및 폴리에틸렌 글리콜 400을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(70%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 9
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g, 아존 2 g, 사향노루속 오일 0.05 g, 폴리에틸렌 글리콜 600 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(70%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 사향노루속 오일, 및 폴리에틸렌 글리콜 600을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(70%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 10
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(63%) 2 g, 아존 2 g, 천궁 오일 0.2 g, 폴리에틸렌 글리콜 200 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(65%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 천궁 오일, 및 폴리에틸렌 글리콜 200을 에탄올(65%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(65%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 11
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(30%) 2 g, 글리세롤 2 g, 창포 오일 0.2 g, 폴리에틸렌 글리콜 200 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(70%).
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 창포 오일, 및 폴리에틸렌 글리콜 200을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(70%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 12
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 1 g, 중간-사슬 트리글리세라이드 20 g, 용뇌 0.5 g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 포스파티드 20 g, 및 적절한 양의 주사용수;
2. 진세노사이드 Rg3, 중간-사슬 트리글리세라이드, 보르네올, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드를 적은 양의 주사용수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 주사용수를 100 ml로 보충하여 주사용 진세노사이드 Rg3 에멀젼이 획득된다.
구체예 13
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g, 아존 2 g, 칼쿨루스 보비스 아르티파크투스(calculus bovis artifactus) 0.5 g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(65%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 칼쿨루스 보비스 아르티파크티티우스(calculus bovis artifactitius), 및 프로필렌 글리콜을 에탄올(65%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 50-55℃로 가열하고, 20(R)-진세노사이드 Rg3가 완전히 용해될 때까지 50-55℃의 온도를 유지시키면서 교반하고, 30분 동안 교반 후에 가열을 중지하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 에탄올(65%)을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 로션이 획득된다.
구체예 14
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 2 g, 아존 2 g, 때죽나무(styrax) 0.5 g, 폴리에틸렌 글리콜 400 10 ml, 및 적절한 양의 에탄올(70%);
2. 진세노사이드 Rg3, 아존, 때죽나무, 폴리에틸렌 글리콜을 에탄올(70%)에 첨가하며, 여기서 혼합 후의 전체 부피는 85 ml이다;
3. 500 ml 플라스크에 85 ml의 전체 부피를 갖는 혼합물을 첨가하고, 가열하고, 30분 동안 교반하여 혼합물을 용해시키고, 자연 냉각시키고, 70% 에탄올을 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 국소 제조물이 획득된다.
구체예 15
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 1 g, 대두유 20 g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 포스파티드 분말 20 g, 및 적절한 양의 증류수;
2. 진세노사이드 Rg3, 대두유, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드 분말을 적은 양의 증류수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 증류수를 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 경구 에멀젼이 획득된다.
구체예 16
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 1 g, 대두유(주사용) 50 g, 중간-사슬 트리글리세라이드 100 g;
2. 진세노사이드 Rg3(98%), 대두유, 중간-사슬 트리글리세라이드를 80-85℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시켜, 진세노사이드 Rg3 주사액이 획득된다.
구체예 17
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(98%) 1 g, 인삼 휘발성 오일 2 g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 천궁 오일 0.5 g, 포스파티드 20 g, 및 적절한 양의 증류수;
2. 진세노사이드 Rg3, 인삼 휘발성 오일, 프로필렌 글리콜, 천궁 오일 및 포스파티드를 적은 양의 증류수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 증류수를 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 경구 에멀젼이 획득된다.
구체예 18
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 85%) 1 g, 창포 오일 20 g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 포스파티드 분말 20 g, 및 적절한 양의 증류수;
2. 진세노사이드 Rg3, 창포 오일, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드 분말을 적은 양의 증류수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 콜로이드 밀(colloid mill)에 첨가하여 처리하고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 증류수를 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 경구 에멀젼이 획득된다.
구체예 19
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 63%) 1 g, 튤립 오일 10 g, 및 중간-사슬 트리글리세라이드 100 g;
2. 진세노사이드 Rg3, 튤립 오일, 및 중간-사슬 트리글리세라이드를 50-55℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시켜, 진세노사이드 Rg3 경구 액체가 획득된다.
구체예 20
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 30%) 1 g, 천궁 오일 10 g, 중간-사슬 트리글리세라이드 100 g;
2. 진세노사이드 Rg3, 천궁 오일, 중간-사슬 트리글리세라이드를 50-55℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시켜, 진세노사이드 Rg3 경구 액체가 획득된다.
구체예 21
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 사향노루속 오일 2 g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 포스파티드 20 g, 적절한 양의 증류수.
2. 진세노사이드 Rg3, 사향노루속 오일, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드를 적은 양의 증류수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 증류수를 100 ml로 보충하여 진세노사이드 Rg3 경구 에멀젼이 획득된다.
구체예 22
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 중간-사슬 트리글리세라이드 20 g, 사향노루속 오일 3g, 프로필렌 글리콜 10 ml, 포스파티드 20 g, 적절한 양의 주사용수.
2. 진세노사이드 Rg3, 중간-사슬 트리글리세라이드, 사향노루속 오일, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드를 적은 양의 주사용수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 주사용수를 100 ml로 보충하여 주사용 진세노사이드 Rg3 에멀젼이 획득된다.
구체예 23
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 중간-사슬 트리글리세라이드 20 g, 창포 오일 2 g, 폴리에틸렌 글리콜 100 10 ml, 포스파티드 20 g, 및 적절한 양의 주사용수.
2. 진세노사이드 Rg3, 중간-사슬 트리글리세라이드, 창포 오일, 프로필렌 글리콜, 및 포스파티드를 적은 양의 주사용수에 첨가하고, 65-70℃로 가열하고, 교반하여 진세노사이드 Rg3를 용해시키고, 균일하게 교반된 혼합물을 균질화기에 첨가하여 균질화시키고, 실온(15-25℃)으로 냉각시키고, 주사용수를 100 ml로 보충하여 주사용 진세노사이드 Rg3 에멀젼이 획득된다.
구체예 24
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 수크로스 50 g, 창포 오일 2 g, 덱스트린 100 g, 및 실리콘 디옥사이드 5 g;
2. 제형화된 양의 창포 오일, 및 실리콘 디옥사이드를 취하고, 균일하게 혼합하고; 실리콘 디옥사이드를 창포 오일에 완전히 흡착시키고; 진세노사이드 Rg3, 수크로스, 및 덱스트린을 첨가하고; 70% 에탄올로 과립화시키고, 체질하고, 65-70℃에서 건조시켜, 진세노사이드 Rg3 과립이 획득된다.
구체예 25
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 수크로스 50 g, 천궁 오일 2 g, 덱스트린 100 g, 및 실리콘 디옥사이드 3g;
2. 제형화된 양의 천궁 오일, 및 실리콘 디옥사이드를 취하고, 균일하게 혼합하고, 실리콘 디옥사이드를 천궁 오일에 완전히 흡착시키고; 진세노사이드 Rg3, 수크로스, 및 덱스트린을 첨가하고; 70% 에탄올로 과립화시키고, 체질하고, 65-70℃에서 건조시켜, 진세노사이드 Rg3 과립이 획득된다.
구체예 26
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 전분 100 g, 인삼 오일 3g, 미정질 셀룰로스 100 g, β-사이클로덱스트린 10 g, 및 활석 분말 1 g;
2. 제형화된 양의 β-사이클로덱스트린을 취하고, 100 ml의 물을 첨가하여 β-사이클로덱스트린을 용해시키고, 수조를 이용하여 70℃에서 온도를 유지시키고, 인삼 오일을 첨가하고, 30분 동안 혼합물을 교반하고; 용액을 획득하고, 냉각시키고, 침전물을 여과시켜 인삼 오일의 내포 화합물을 획득하고, 진세노사이드 Rg3, 전분, 및 미정질 셀룰로스를 첨가하고, 적절한 양의 에탄올을 이용하여 과립화시키고; 체질하고, 제분화시키고, 활석 분말을 첨가하고, 혼합을 수행하여, 진세노사이드 Rg3 정제가 획득된다.
구체예 27
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 수크로스 50 g, 천궁 오일 3g, β-사이클로덱스트린 10 g, 소듐 벤조에이트 2 g, 적절한 양의 증류수;
2. 제형화된 양의 β-사이클로덱스트린을 취하고, 물을 첨가하여 β-사이클로덱스트린을 용해시키고, 수조를 이용하여 70℃에서 온도를 유지시키고, 천궁 오일을 첨가하고, 30분 동안 혼합물을 교반하고; 용액을 획득하고, 냉각시키고, 침전물을 여과시켜, 천궁 오일의 내포 화합물이 획득된다. 진세노사이드 Rg3, 수크로스, 및 소듐 벤조에이트를 첨가하고, 증류수를 500 ml로 첨가하여 진세노사이드 Rg3 경구 액체가 획득된다.
구체예 28
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 사향노루속 오일 1 g, 90% 에탄올 10 ml, 글리세롤 5 g, 적절한 양의 F12/F114((프레온) 화합물의 분사제). 모든 원료 물질의 전체량은 100 g이다;
2. 제형화된 양의 진세노사이드 Rg3, 및 사향노루속 오일을 정확하게 칭량하고, 에탄올에 첨가하여 진세노사이드 Rg3 및 사향노루속 오일을 용해시키고, 이후 글리세롤을 첨가하고, 균일하게 혼합하여 용액을 제조하고, 용액을 에어로졸 용기에 서브패키징시키고, 밸브에 마운팅(mounting)시키고, 밀봉 캡을 빈틈없이 롤링시킨 후, 혼합된 분사제 F12/F114를 파일링(filing)시킨다.
구체예 29
1. 하기 비에 따라 원료 물질을 제조한다:
20(R)-진세노사이드 Rg3(순도 98%) 1 g, 천궁 오일 1 g, 에탄올(60%) 10 ml, 폴리에틸렌 글리콜 200 5 ml, 글리세롤 20 g, 및 적절한 양의 주사용수;
2. 진세노사이드 Rg3(1g), 및 천궁 오일(1 g)을 정확하게 칭량하고, 10 ml의 60% 에탄올, 5 ml의 폴리에틸렌 글리콜 200, 및 20 g의 글리세롤을 첨가하고, 혼합물을 저온에서 가열하고, 교반하여 혼합물을 용해시키고, 주사용수를 첨가하여 진세노사이드 Rg3 나리스틸라에가 획득된다.
본 발명의 구체예에서 사용되는 구멍-개방 약물(Orifice-opening medicinal), 예를 들어, 인삼(휘발성) 오일, 천궁(휘발성) 오일, 사향노루속(휘발성) 오일, 울금(휘발성) 오일, 창포(휘발성) 오일, 용뇌, 칼쿨루스 보비스 아르티파크투스, 튤립 오일 및 때죽나무는 본초 방향제를 이용하여 구멍을 개방시키고, 소생을 유도하는데 있어서 주로 효과적이고, 이는 뇌졸중 및 섬망과 같은 질병을 치료하기 위해 임상적으로 사용된다. 최근 수년의 연구에서 혈액뇌장벽(BBB)에 영향을 미침으로써 뇌 질병을 치료하는데 사용되는 소생 약물 유도에서, 소생-유도 약물 중 일부는 다른 약물의 투과성을 촉진할 수 있어, 이들 약물이 의식을 회복하는 소생을 유도하는 이들의 주요 작용 메커니즘을 발휘하는 것으로 밝혀졌고, 상기 메커니즘은 이들 약물의 수소음심경(heart meridian) 분포의 이론적 기초일 수 있는 것으로 추측된다. 예를 들어, 용뇌는 혈액뇌장벽 투과성을 개선시키고, 약물이 뇌 조직에 진입하는 것을 촉진시킬 수 있고, 소생-유도 약물, 예를 들어, 사향노루속, 벤조인 및 때죽나무는 생리학적 조건하에서 래트에 대한 혈액뇌장벽에 대한 약간의 개방 작용을 가지며, 약물이 뇌 조직에 진입하는 것을 촉진할 수 있다.
Rg3 제조물의 제조 동안, 성분, 예를 들어, 아존, 폴리에틸렌 글리콜, 에탄올 및 전통 중국 약물 휘발성 오일이 각각의 처방에 첨가되고, 이들 성분의 첨가는 혈액뇌장벽이 개방되는 것을 가능케 하여, Rg3가 뇌 조직에 진입하고 항-치매 작용을 발휘할 수 있으며, 본 발명은 또한 Rg3가 생리학적 조건하에서 래트의 뇌로 진입한 것을 다시 확인하기 위해 "구체예 30에서 투여시 혈액뇌장벽을 통해 흡수된 다양한 투여 형태의 진세노사이드 Rg3 약물에 대한 검출 시험"을 이용한다. 따라서, 본 발명에서 계획된 처방 및 과정 및 제조된 샘플 모두는 항-치매 작용을 갖는다.
본 발명의 구체예에서 이용된 인삼 오일은 Jiangxi Ji'an City Qingyuan District Hualong Spice Oil Co., Ltd.에서 구입하였고; 천궁 오일은 Jiangxi Ji'an City Senhai Spice Co., Ltd.로부터 구입하였고; 사향노루속 오일은 Jiangxi Baicao Pharmaceutical Co., Ltd.로부터 구입하였고; 창포는 Xi'an Ruiying Biotechnology Co., Ltd.로부터 구입하였고; 튤립 오일은 Jiangxi Bencao Natural Spice Oil Co., Ltd.로부터 구입하였고; 울금 오일은 Jiangxi Hengcheng Natural Spice Oil Co., Ltd.로부터 구입하였고; 인삼 휘발성 오일은 Jiangxi Huanqiu Natural Spice Co., Ltd.로부터 구입하였다.
인삼 오일은 주요 성분인 ≥ 11% 함량 및 ≤ 30 KOHmg/g 산 값의 에센셜 오일, 진세노사이드, 인삼 다당류, 휘발성 오일, 아미노산 및 폴리펩티드뿐만 아니라 β-엘레멘, β-구르주넨, β-파나센, α-파나센, 카리오필렌, β-파르네센 및 팔미트산을 포함하고; 인삼 휘발성 오일은 주요 성분인 약 40% 세스퀴테르펜, 및 산소 화합물 및 장쇄 알칸을 포함한다.
구체예 30. 투여시 혈액뇌장벽을 통해 흡수되는 다양한 투여 형태의 진세노사이드 Rg3 약물에 대한 검출 시험
1. 시험 재료
1.1. 동물
SD 래트, 50일령, 수컷, 약 260 g 체중, 깨끗한 동물, 다롄 의과 대학의 동물 실험 센터로부터 구입, 실험 동물 라이센스 번호: SCXK (Liao) 2004-0017.
1.2. 기구 및 시약
래트 뇌척수액 흡인 장치: 크고 작은 외과용 가위, 겸자, 지혈집게, 및 주사기(1 mL); 눈금 저울, 접시, 무균 솜뭉치, 아이오도퍼(iodophor), Angle Two 뇌 입체정위 장치(Paxinos Atlas USA Myneurolab company), 저속 치과 드릴(Grobet File Co.Of America Inc), 미세주입 펌프(American company of KD Scientific Inc), 및 10 μL 및 100 μL 미량주사기(American company of Hamilton Inc).
래트 뇌척수액 내의 Rg3 약물 함량을 측정하기 위한 기구: American company of Applied Biosystems Inc의 이온-분무 이온 공급원 및 Analysis 1.3 데이터 처리 시스템이 설비된 API 타입-4000 삼중 사중극자 질량분광계(triple quadrupole tandem mass spectrometer); Agilent 1100 고성능 액체 크로마토그래피 주입 펌프, 오토샘플러(autosampler), Agilent Technologies Co. Ltd. 크로마토그래피 컬럼 Nucleosil C18 컬럼(50*4.6 mm I.D., 5㎛ 입자 크기), Dalian Elite Analytical Instruments Co., Ltd.
1.3. 기구 및 약물
구체예 1-2, 구체예 6-14, 구체예 16-21 및 구체예 25-29에서 제조된 진세노사이드 Rg3 제조물.
2. 시험 방법
(1) 진세노사이드 Rg3의 다양한 투여 형태의 투여
1) 경구 투여: 진세노사이드 Rg3의 경구 제조물이 세척(lavage)에 의해 SD 래트에 제공되고, 모든 고 투여량, 중간 투여량 및 저 투여량 그룹의 약물은 각각 20, 10 및 5 mg/kg(상기 투여량은 Rg3의 순수한 투여량임)/bid이고, 각각의 투여량 그룹은 18마리의 래트를 갖는다;
2) 외부 투여: 진세노사이드 Rg3가 SD 래트에 제공되고, 외부 약물이 습기-제거 토퀴아오(Touqiao) 경혈 또는 코의 양측면, 목 및 귀 뒤에 적용되고, 모든 고 투여량, 중간 투여량 및 저 투여량 그룹의 약물은 각각 10, 5, 및 2.5 mg/kg(즉, Rg3의 양은 각각 10, 5 및 2.5 mg/kg임)/bid이고, 각각의 투여량 그룹은 18마리의 래트를 갖는다;
3) 주사에 의한 투여: 래트의 꼬리에서의 진세노사이드 Rg3의 정맥내 주사가 SD 래트에 제공되며, 여기서 고 투여량, 중간 투여량 및 저 투여량 그룹은 각각 6, 3, 1.5 mg/kg/bid이고, 각각의 투여량 그룹은 18마리의 래트를 갖는다.
(2) 래트 뇌척수액 흡인
4시간 동안 진세노사이드 Rg3의 다양한 제조물을 경구, 국소 및 주사 투여한 후에 래트 뇌척수액이 흡인된다. 래트 뇌척수액은 문헌[Improvement on a suction method of the rat cerebrospinal fluid. Journal of Hebei Medical University, 2010(31)2: 125-127]의 방법을 참조로 하는 직접적인 관찰하에서 척추경막을 난절(scarifying)하는 방법을 이용하여 흡인된다. 각각의 래트는 복막내 주사에 의한 10% 클로랄 하이드레이트로 마취되고, 뇌를 신체와 일직선으로 위치시키는 이어 로드(ear rod)와 앞니 로드(front tooth rod)에 의해 래트의 머리가 고정되고, 후두부 부위의 털이 깎여지고, 소독되고, 후방 정중선을 따라 종절개(약 2 cm)가 절개되고, 목(napex)의 등쪽 부분의 근육이 한쌍의 가위로 무디게 분리된다. 후두골 L에 부착된 가장 아래 층 근육이 출혈을 피하기 위해 메스의 뒷면에 의해 문질러지고, 환추후두 근막을 노출시킨 후에 상처가 증류수로 세척되고, 멸균 솜뭉치로 후세척이 수행되고, 척수경막이 메스로 0.3 cm까지 세로로 난절되고, 투명한 뇌척수액의 흐름이 관찰될 수 있고, 사전에 제조된 100 ㎕ 미량주사기(둥근 헤드)가 갈라진 틈에 배치되어 뇌척수액이 흡인되고, 각각의 래트가 2회로 각 흡인시 100 ㎕가 흡인되고; 각 투여량 그룹의 3마리의 래트의 뇌척수액이 균일하게 혼합되어 하나의 샘플로 제조되고, 6개의 생물학적 샘플이 각 투여량 그룹에서 제조된다.
진세노사이드 Rg3가 투여되지 않는 래트가 블랭크 대조군이다.
(3) 다양한 투여 형태로 투여되는 래트의 뇌척수액 내의 진세노사이드 Rg3 함량의 결정
래트 뇌척수액 내의 약물 농도는 LC/MS/MS 방법에 의해 결정된다.
약물:
진세노사이드 Rg3 기준 참조 물질, 중국약품생물제품검정소에서 구입되며, 배치 번호는 110804-200603이다.
진세노사이드 Rg3 원료 물질, Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co., Ltd.에 의해 생산되며, 배치 번호는 2012303이고, 함량은 진세노사이드 Rg3 기준 참조 물질의 HPLC 교정 후에 98.2%이다;
다른 진세노사이드 Rg3의 다양한 제조물에서의 고 투여량, 중간 투여량 및 저 투여량 진세노사이드 Rg3 그룹의 함량 결정 방법은 진세노사이드 Rg3 원료 물질의 교정 방법과 동일하고, 다양한 제조물의 진세노사이드 Rg3의 함량의 시험 결과는 시험 결과에 상세히 제시되어 있다.
시약:
아세토니트릴, 메탄올, 에틸 아세테이트는 모두 크로마토그래피 순수 시약이며, 각각 Thermo Fisher Scientific Inc. 및 Tianjin Kangke Deke Science 및 Technology Ltd.로부터 구입되며; 식염수 용액은 Shenyang Zhiying pharmaceutical plant로부터 구입된다.
조직 샘플 처리
흡인 후 200 ㎕의 뇌척수액을 취하고, 100 ㎕의 메탄올 용액, 100 ㎕의 내부 기준 용액(100 ng/ml의 다이오신 및 메탄올 용액) 및 0.5 ml의 물을 각각 첨가하고, 균일하게 혼합하고, 3 ml의 에틸 아세테이트를 첨가하고, 1분 동안 에딩(eddying)시키고, 10분 동안 진동시키고, 8분 동안 원심분리(4000 rpm)시키고, 상층액을 분리시키고, 40℃의 공기 흐름 하에서 블로우-건조시키고, 200 ㎕ 이동상 중에 잔여물을 용해시키고, 분석을 위해 20 ㎕를 취한다.
크로마토그래피 조건: 이동상은 메탄올-아세토니트릴-10 mmol/l 암모늄 아세테이트 용액(47.5:47.5:5, v/v)이고, 유량은 0.7 ml/분이고, 컬럼 온도는 실온이다.
질량 스펙트럼 조건: 이온 추진 전압: -3500 V; 소스 내의 가스 1(GS1, N2)의 압력: 30 p.s.i.; 가스 2(GS2, N2)의 압력: 30 p.s.i.; 커튼 가스(N2)의 압력: 15 p.s.i.; 충돌 가스(N2)의 압력: 3 p.s.i.; 소스 내의 온도: 500℃. 검출 모드: 음성 이온 검출; 스캐닝 방식: 반응 모니터링(MRM) 방식이 선택되고, 정성 분석을 위한 이온 반응은 각각 m/z 783.8 → m/z 160.8(진세노사이드 Rg3), m/z 867.5 → m/z 721.5(내부 기준, 다이오신)이다. 해당 이차 풀-스캔 질량 스펙트럼이 도 1에 제시된다.
방법의 특이성
약물이 투여되지 않고 또한 내부 기준 용액이 첨가되지 않고 이후에 100 ㎕ 메탄올이 추가로 첨가된 블랭크 래트의 뇌척수액이 취해지고, "조직 샘플 처리" 항목 하에서 평형이 수행되어 블랭크 샘플의 크로마토그램이 획득되고; 진세노사이드 Rg3 기준 참조 물질 용액(2 ng/ml) 및 내부 기준 용액(100 ng/ml)이 블랭크 래트 뇌척수액에 첨가되어 동일 작업에 따른 해당 크로마토그램이 획득되고; 투여 후의 래트의 뇌척수액 샘플의 크로마토그램이 동일 처리에 따라 획득된다.
도 2는 래트 뇌척수액의 블랭크 샘플, Rg3 기준 참조 물질을 첨가한 블랭크 샘플 및 내부 기준(다이오신) 용액 및 투여 후의 샘플의 크로마토그램을 제시한다.
결과는 조직 내의 내인성 물질이 진세노사이드 Rg3 및 내부 기준 다이오신의 결정을 방해하지 않는 것을 제시한다.
작업 곡선의 제조
블랭크 대조군의 래트 조직의 균질액 상층액 200 ㎕를 취하고, 진세노사이드 Rg3 참조 시리즈 용액 100 ㎕(200 ㎕의 상층액에 100 ㎕의 Rg3 참조 용액 첨가)를 첨가하여, 2, 4, 10, 20, 40, 100, 200 및 400 ng/g의 동등한 조직 농도를 갖는 조직 샘플을 제조한다. 100 ㎕ 메탄올의 첨가를 제외하고는, "조직 샘플 처리"의 기준하에서 작업하여 작업 곡선을 확립시킨다. 가로좌표 값으로서 분석물 농도를 취하고, 세로좌표 값으로서 분석물 대 내부 기준 스펙트럼의 피크 영역 비를 취함으로써 가중 최소 자승 방법으로 회귀 계산이 수행되어, 작업 곡선인 선형 회귀 식이 획득된다.
작업 곡선에 따르면, 진세노사이드 Rg3의 측정된 농도의 선형 범위는 2-400 ng/g이고, 최소점은 2 ng/g이다. 작업 곡선: y = 0.0014 + 0.0091x (r = 0.9992).
동시에, 고, 중간 및 저 농도의 품질 관리 샘플(QC 샘플)이 제조되고, 2-샘플 분석이 각 농도에 대해 수행된다. QC 샘플의 농도가 각 분석 배치의 작업 곡선에 따라 계산되고, 다양한 농도를 갖는 6개의 QC(전체 18개 샘플) 중 최대 2개 샘플이 이론 값의 15%를 초과(20%에서의 가장 낮은 포인트)하여 허용되고, 그렇지 않은 경우 이러한 배치 데이터는 수용되지 않는다.
다양한 제조물의 샘플 측정
각 분석 배치에 대한 작업 곡선을 제조하기 위해 "조직 샘플 처리"의 기준 하에서 작업이 수행되고, 투여된 래트의 뇌척수액 샘플의 측정된 결과가 표 8에 제시된다.
데이터 처리
각 투여된 래트의 뇌척수액에서의 약물 농도 데이터가 각각 제공되고, 평균 값 및 표준 편차가 계산된다.
표 8. 다양한 제조물에 대한 BBB 시험 동안 래트의 뇌척수액 내의 진세노사이드 Rg3의 함량
Figure 112016059948556-pct00008
Figure 112016059948556-pct00009
표 8의 측정 결과는 본 발명에 의해 개발된 다양한 투여 형태(통상적인 형태)의 진세노사이드 Rg3가 투여된 래트의 뇌척수액에서 측정된 진세노사이드 Rg3의 약물 농도를 통해, 본 발명의 다양한 투여 형태가 모두 혈액뇌장벽을 통해 뇌로 투과하여, 치료 효과를 가질 수 있음을 제시한다.

Claims (10)

  1. 치매를 예방하고/하거나 치료하기 위한 국소 제제(preparation)로서,
    유효성분으로 20(R)-진세노사이드 Rg3; 및
    인삼(Radix Ginseng) 휘발성 오일, 사향노루속(Moschus) 휘발성 오일, 창포(Rhizoma Acori Tatarinowii) 휘발성 오일, 울금(Radix Curcumae) 휘발성 오일 또는 천궁(Rhizoma Chuanxiong) 휘발성 오일 중 하나
    를 포함하는 국소 제제.
  2. 제 1항에 있어서, 치매가 알츠하이머병 또는 혈관 치매임을 특징으로 하는 국소 제제.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 국소 제제가 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함함을 특징으로 하는 국소 제제.
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 약물이 경피 방식으로 투여됨을 특징으로 하는 국소 제제.
  5. 삭제
  6. 제 1항에 있어서, 국소 제제가 크림, 연고, 스프레이, 에어로졸, 나리스틸라에(naristillae), 젤 또는 패치의 형태로 존재함을 특징으로 하는 국소 제제.
  7. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 20(R)-진세노사이드 Rg3의 함량이 80% 이상임을 특징으로 하는 국소 제제.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
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