KR101770336B1 - 잎새버섯의 속성 병 재배방법 - Google Patents

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본 발명은 잎새버섯의 병 재배방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 잎새버섯의 생육 특성에 기초하여 최적화한 병 재배조건을 확립함으로써 잎새버섯 생산기간을 10일 이상 단축시키면서 잎새버섯을 속성으로 생산할 수 있는 병 재배기술에 관한 것이다.
본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법은, 참나무 톱밥 95~99중량%와 밀기울 1~5중량%를 혼합하여 배지를 제조하는 제1단계; 제1단계에서 제조한 배지를 입구크기가 6.2±0.5cm인 850±50CC의 병에 0.75~0.8g/1cc 충진하는 제2단계; 배지가 충진된 재배용 병을 105±5℃에서 70±10분 1차 살균한 후 120±10℃에서 110±10분 2차 살균하는 제3단계; 재배용 병의 심부 온도가 10℃ 이하로 되도록 냉각하는 제4단계; 재배용 병에 잎새버섯 종균을 1~5g 접종하는 제5단계; 배양실에서 배양하되, 초기 10±2일은 25~30℃, 중기 10±2일 23~25℃, 후기 10±2일 20~22℃로 유지하는 한편, 초기 10±2일 이후에는 병을 각각 분리하여 빛을 쪼이면서 배양하는 제6단계; 생육실에서 생육시키되, 병마개를 제거한 후 초기 2±1일은 19±2℃, 그 이후 13±3일간은 17±2℃로 유지하는 한편 습도는 초기 4±1일은 90±5%, 중기 5±2일은 80±5%, 후기 6±2일은 60±5%로 하면서 생육시키는 제7단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.

Description

잎새버섯의 속성 병 재배방법{Method for Rapid Bottle Cultivation Grifola Frondosa}
본 발명은 잎새버섯의 병 재배방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 잎새버섯의 생육 특성에 기초하여 최적화한 병 재배조건을 확립함으로써 잎새버섯 생산기간을 10일 이상 단축시키면서 잎새버섯을 속성으로 생산할 수 있는 병 재배기술에 관한 것이다.
잎새버섯(Grifola frondosa)은 분류학적으로 민주름버섯목(Aphyllphorales), 구멍장이버섯과(Polyporaceae), 잎새버섯속(Grifola)에 속하는 버섯으로, 여름과 가을에 걸쳐 큰 활엽수의 지제부나 뿌리 주변에 다발로 발생하는 목재의 백색 부후성 버섯이다. 자실체는 1개의 큰 기부에서 생긴 몇 개의 작은 대가 다시 여러 개로 분지된 다량의 갓 집단으로 구성되며, 표면은 흑갈색 내지 회색이고 방사상의 섬유무늬가 있다.
잎새버섯은 향기가 좋은 식용버섯으로 특히 일본에서는 잎새버섯을 발견하면 좋아서 춤을 춘다하여 그 이름을 춤추는 버섯, 즉 마이타케(まいたけ)로 불리기도 한다. 구성성분으로는 유리아미노산 23종, Vitamin B1, B2, C, D 등이 알려졌으며 ergosterol 등의 sterol 종류와 면역활성촉진이 뛰어난 β-glucan 등이 다량 함유 되어있는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 다른 버섯의 β-glucan은 D-glucan들의 화학적 결합이 β-1, 4결합인데 비해, 잎새버섯은 β-1, 3결합 분지점에 β-1, 6결합 등의 구조를 하고 있다.
잎새버섯의 대표적인 약리작용은 면역증강 및 항암효과로 잎새버섯의 다당체에서 정제한 D-fraction은 beta 1, 6 가지를 갖는 β-1, 3-glucan으로 미국과 일본에서 상품화되어 있으며, 항고혈압, 항고지혈증 등 다양한 약리작용도 보고된 바 있다. 특히 잎새버섯의 균사체에서 추출한 β-glucan을 fibrosarcoma, L1210 leukemia 및 P388 leukemia 등의 암세포를 이식한 생쥐에 투여한 결과 항암활성뿐만 아니라 면역에 관여하는 자연살해세포(natural killer cell) 및 대식세포(macrophage)의 활성을 상승시켜 암을 저해하는데 효과를 나타냈으며, 이러한 연구를 바탕으로 잎새버섯의 다당류는 암세포를 억제하여 항암보조제로 1998년 미국 FDA승인을 획득해 현재 시판되고 있다. 또한 잎새버섯의 기능성 성분들은 AIDS의 원인균인 HIV에 대한 억제작용(Nanba 등 2000), 혈압강하(Choi 등 2001), 콜레스테롤 억제, cyclooxygenase 효소를 억제하는 항산화 작용, 혈당강하, 혈관내피세포의 성장 억제를 통한 신생혈관을 억제 등 많은 연구결과가 보고되었다.
위와 같이 잎새버섯의 상업적 이용이 늘고 약리활성 연구결과들이 늘면서 잎새버섯 재배농가도 늘고 있는 추세이다. 잎새버섯은 병 재배방법이 일반적인데, 관련 특허문헌으로는 특허 제10-0879722호가 있다. 특허 제10-0879722호는 배지 입병 후 금나노를 투여하여 금나노를 함유한 잎새버섯으로 재배하는 기술에 관한 것이다. 특허 제10-0879722호를 비롯하여 일반적인 잎새버섯 병 재배방법은 보통 40일 정도의 배양기간과 20일 정도의 생육기간이 소요된다.
대한민국특허등록 제10-0879722호
Fullerton SA, Samadi AA, Tortorelis DG, Choudhury MS, Mallouh C, Tazaki H, Konno S. 2000. Induction of apoptosis in human prostatic cancer cells with beta-glucan(Maitake mushroom polysaccharide). Mol Urol 4:7-13 Kim JH, Cha YJ, Shim MJ, Lee MW, Lee TS. 2011. Immunostimulating and antitumor effects of crude polysaccharides extracted from fruiting body of Grifola frandosa. Kor J Mycol 39:68-77 Kim SP, Choi YH, Kang MY, Nam SH. 2005. Effects of the extracts by extraction procedures from Hericium erinaceus on activation of macrophage. J Korean Soc Appl Biol Chem 48:285-291 Kodama N, Komuta K, Nanba H. 2002. Can maitake MD-fraction aid cancer patients? Altern Med Rev 7:236-239 Kodama N, Komuta K, Sakai N, Nanba H. 2002. Effects of D-Fraction, a polysaccharide from Grifola frondosa on tumor growth involve activation of NK cells. Biol Pharm Bull 25:1647-1650 Kodama N, Komuta K, Nanba H. 2003. Effect of Maitake(Grifola frondosa) D-fraction on the activation of NK cells in cancer patients. J Med Food 6:371-377 Kodama N, Murata Y, Nanba H. 2004. Administration of a polysaccharide from Grifola frondosa stimulates immune function of normal mice. J Med Food 7:141-145 Kodama N, Asakawa A, Inui A, Masuda Y, Nanba H. 2005. Enhancement of cytotoxicity of NK cells by D-Fraction, a polysaccharide from Grifola frondosa. Oncol Rep 13:497-502 Kodama N, Murata Y, Asakawa A, Inui A, Hayashi M, Sakai N, Nanba H. 2005. Maitake D-fraction enhances antitumor effects and reduces immunosuppression by mitomycin C in tumor-bearing mice. Nutrition 21:624-629 Lee JS, Park BC, Ko YJ, Choi MK, Choi HG, Yong CS, Lee JS, Kim JA. 2008. Grifola frondosa(maitake mushroom) water extract inhibits vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis through inhibition of reactive oxygen species and extracellular signal-regulated kinase phosphorylation. J Med Food 11:643-651 Lin JT, Liu WH. 2006. o-Orsellinaldehyde from the submerged culture of the edible mushroom Grifola frondosa exhibits selective cytotoxic effect against Hep 3B cells through apoptosis. J Agric Food Chem 54:7564-7569 Masuda Y, Murata Y, Hayashi M, Nanba H. 2008. Inhibitory effect of MD-Fraction on tumor metastasis: involvement of NK cell activation and suppression of intercellular adhesion molecule (ICAM)-1 expression in lung vascular endothelial cells. Biol Pharm Bull 31:1104-1108 Nanba H, Kodama N, Sbchar D, Turner D. 2000. Effects of Maitake(Grifola frondosa) glucan in HIV-infected patients. Mycosci 41:293-295 Nanba H, Kubo K. 1997. Effect of Maitake D-fraction on cancer prevention. Ann N Y Acad Sci 833:204-207 Suzuki I, Hashimoto K, Oikawa S, Sato K, Osawa M, Yadomae T. 1989. Antitumor and immunomodulating activities of a ? -glucan obtained from liquid-cultured Grifola frondosa. Chem Pharm Bull 37:410-413 Wu MJ, Cheng TL, Cheang SY, Lian TW, Wang L, Chiou SY. 2006. Immunomodulatory properties of Grifola frondosa in submerged culture. J Agric Food Chem 54:2906-2914 Choi HS, Cho HY, Yang HC, Ra KS, Suh HJ. 2001. Angiotensin l-converting enzyme inhibitor from Grifolaf rondosa. Food Res Intl 34:177-182 Deng G, Lin H, Seidman A, Fornier M, D'Andrea G, Wesa K, Yeung S, Cunningham-Rundles S, Vickers AJ, Cassileth B. 2009. A phase I/II trial of a polysaccharide extract from Grifola frondosa(Maitake mushroom) in breast cancer patients: immunological effects. J Cancer Res Clin Oncol 135:1215-1221 Fukuda K, Uematsu T, Hamada A, Ariya S, Komatsu N. 1975. The polysaccharide from Lampteromyces japonicus. Chem Pharm Bull 23:1955-1959) Ikekawa T, Uehara N, Maeda Y, Nankinishi M, Fukoka F. 1969. Antitumor activity of aqueous extracts of edible mushrooms. Cancer Res 29:734-735 Kwon SH, Kim CN, Kim CY, Kwon ST, Park KM, Hwangbo S. 2003. Antitumor activities of protein-bound polysaccharide extracted from mycelia of mushroom. Korean J Food Nutr 16:15-21 Matsuur H, Asakawa C, Kurimoto M, Mizutani J. 2002. Alpha-glucosidase inhibitor from the seeds of balsam pear(Momordica charantia) and the fruit bodies of Grifola frondosa. Biosci Biotechnol Biochem 66:1576-1578 Wasser SP, Weis AL. 1999. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycete mushroom: Current perspectives. Int J Med Mushrooms 1:47-50 Zhang Y, Mills GL, Nair MG. 2002. Cyclooxygenase inhibitory and antioxidant compounds from the mycelia of the edible mushroom Grifola frondosa. J Agric Food Chem 50:7581-7585
본 발명은 잎새버섯의 재배기간을 단축시키기 위해 개발된 것으로서, 잎새버섯 생산기간을 기존 병 재배방법보다 10일 이상 단축시키면서 잎새버섯을 속성으로 생산할 수 있는 잎새버섯 병 재배방법을 제공하고자 한다.
상기한 기술적 과제를 해결하기 위해 본 발명은, 참나무 톱밥 95~99중량%와 밀기울 1~5중량%를 혼합하여 배지를 제조하는 제1단계; 제1단계에서 제조한 배지를 입구크기가 6.2±0.5cm인 850±50CC의 병에 0.75~0.8g/1cc 충진하는 제2단계; 배지가 충진된 재배용 병을 105±5℃에서 70±10분 1차 살균한 후 120±10℃에서 110±10분 2차 살균하는 제3단계; 재배용 병의 심부 온도가 10℃ 이하로 되도록 냉각하는 제4단계; 재배용 병에 잎새버섯 종균을 1~5g 접종하는 제5단계; 배양실에서 배양하되, 초기 10±2일은 25~30℃, 중기 10±2일 23~25℃, 후기 10±2일 20~22℃로 유지하는 한편, 초기 10±2일 이후에는 병을 각각 분리하여 빛을 쪼이면서 배양하는 제6단계; 생육실에서 생육시키되, 병마개를 제거한 후 초기 2±1일은 19±2℃, 그 이후 13±3일간은 17±2℃로 유지하는 한편 습도는 초기 4±1일은 90±5%, 중기 5±2일은 80±5%, 후기 6±2일은 60±5%로 하면서 생육시키는 제7단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 잎새버섯의 속성 병 재배방법을 제공한다.
본 발명에 따르면 다음과 같은 효과를 기대할 수 있다.
첫째, 잎새버섯의 재배기간을 단축시킬 수 있기 때문에 재배비용을 절감할 수 있다.
둘째, 잎새버섯의 생육 특성에 기초하여 최적화한 병 재배조건을 확립하기 때문에 고품질의 잎새버섯을 안정적으로 생산할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 배지 제조단계 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 병입단계 사진이다.
도 3a와 도 3b는 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 바람직하게 이용하는 재배용 병과 병마개에 대한 사진이다.
도 4는 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 살균단계 사진이다.
도 5는 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 냉각단계 사진이다.
도 6은 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 접종단계 사진이다.
도 7은 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 접종단계에 이용하기 위한 종균 배양과정 사진이다.
도 8은 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 배양단계 사진이다.
도 9는 본 발명에 따른 잎새버섯의 속성 병 재배방법에서 생육단계 사진이다.
도 10a와 도 10b는 본 발명의 실시예에서 잎새버섯 재배하는 생육실 외부와 내부 사진이다.
본 발명은 잎새버섯의 속성 병 재배방법에 관한 것으로, 잎새버섯의 생육 특성에 기초하여 최적화한 병 재배조건을 확립한다는데 기술적 특징이 있다. 잎새버벗의 재배방법은 배지 제조, 병입, 살균, 냉각, 접종, 배양, 생육 단계로 이루어지며, 아래에서는 도면을 참조하여 각 단계별로 살펴본다.
1. 제1단계- 배지 제조
제1단계는 잎새버섯의 배지를 제조하는 단계이다(도 1). 배지는 참나무 톱밥 95~99중량%와 밀기울 1~5중량% 혼합하여 제조하며, 여기서 참나무 톱밥은 관수하면서 수시로 뒤집어 주어 공기를 유통함으로써 혐기성 발효가 일어나지 않도록 숙성시키는 것이 톱밥의 영양원 손실을 최소화할 수 있다.
참나무 톱밥은 2가지 입자크기로 준비하는 것이 바람직한데 0.5~1cm 입자크기 70~80중량%와 0.2~0.5cm 입자크기 20~30중량%를 혼합하는 것이다. 잎새버섯은 다른 버섯에 비하여 초기 활착이 비교적 느리지만, 일단 활착 후에는 균사 생육이 급속히 진행되어 균사체의 노화가 빨리 오는 특징이다. 이것을 방지하기 위해서 본 발명에서는 참나무 톱밥의 입자크기와 혼합비율을 최적화하였다. 참나무 톱밥의 큰 입자(0.5~1cm)와 작은 입자(0.2~0.5cm)를 각각 70~80중량%와 20~30중량%로 혼합하면 배지를 병에 충진할 때 입자 간 적당한 공극이 생겨 산소 공급이 용이해지면서 잎새버섯균의 활착, 발아 및 생육이 양호해진다.
2. 제2단계- 병입
제2단계는 병에 제1단계에서 제조한 배지를 충진하는 단계이다(도 2). 병에는 0.75~0.8g/1cc 정도 충진하는 것이 바람직한데, 더 많이 충진하면 배지 대비 산소공급이 부족하여 잎새버섯 균사의 생육이 억제되고 더 적게 충진하면 과잉의 산소공급에 의한 영양분의 산화와 오염 등으로 인해 잎새버섯의 생육이 저해된다.
잎새버섯 재배용 병은 850±50CC의 기준병을 사용하며, 더욱 바람직하게는 850CC 기준병을 사용한다(도 3a). 850CC에는 배지를 650±10g 정도 충진하면 적당하다. 병입구는 그 크기를 일반버섯 재배시 사용하는 병보다 줄여(약 0.6cm 정도) 6.2±0.5cm(바람직하게는 5.9cm)로 하는 것이 바람직한데, 이는 병 속으로 산소 공급을 적절하게 조절하게 함으로써 산소 과잉공급으로 유발되는 배지 표면 건조현상에 따른 종균 활착 지연 문제를 방지하기 위함이다. 더불어 병마개는 도 3b에서와 같이 그 중심부에 3±1cm 크기의 스폰지 필터를 부착하는 것이 바람직한데, 스폰지 필터는 미생물 오염을 방지하고 산소의 적절한 공급을 통해 배지 상층부의 건조를 막는 수분 조절 기능을 한다.
3. 제3단계- 살균
제3단계는 배지가 충진된 재배용 병을 살균하는 단계이다(도 4). 살균을 1,2차 두단계로 나눠 살균하는데, 105±5℃에서 70±10분 1차 살균한 후 120±10℃에서 110±10분 2차 살균한다. 참나무 톱밥은 재질이 강하여 온도차를 주면서 2단계로 충분히 살균해야 잎새버섯 생육에 필요한 영양분(포도당, cellobiose등) 생성과 살균 효과를 동시에 얻을 수 있다. 1차 열처리 살균에 의해 참나무 톱밥의 섬유소가 팽윤화가 일어나게 되고, 2차 열처리 살균에 의해 세균 및 곰팡이 등 모든 세균이 사멸됨과 동시에 섬유소에서 cellobiose, glucose 등으로 분해가 일어나 잎새버섯균의 영양분이 제공된다.
4. 제4단계- 냉각
제4단계는 재배용 병의 심부 온도가 10℃ 이하로 되도록 냉각하는 단계이다(도 5). 재배용 배지의 주원료는 참나무 톱밥이기 때문에 냉각되는 시간이 많이 소요되는데, 냉장실(5~8℃)에서 심부 온도가 10℃ 이하로 천천히 냉각시키면 된다. 10℃ 이상인 배지에 잎새버섯을 접종하면 균 활착이 느려지고, 배지에서 영양성분의 변화에 따른 이미, 이취가 발생하기 때문이다.
5. 제5단계- 접종
제5단계는 재배용 병에 잎새버섯 종균을 접종하는 단계이다(도 6). 이때 잎새버섯 종균은 계대배양을 3회 이상 하지 않은 활성이 강한 종균을 사용하는데(도 7), 3회 이상 계대배양한 버섯균은 종균 활착능력이 현저히 감소한다.
850±50CC의 기준병에 1~5g의 종균을 접종하는데, 이는 30~50g 정도의 종균을 접종하는 다른 버섯 재배에서보다 상당히 적은 양에 해당한다. 잎새버섯 종균을 많이 접종하면 배지 상층부에 노화된 버섯균이 우점하게 되어 활성에 강한 새로운 버섯의 발아 및 생육에 큰 지장을 주게 된다. 이에 따라 본 발명에서는 종균 투입량 감소에 의한 재배비용 절감과 접종시간 단축 등의 효과를 거둘 수 있다.
6. 제6단계- 배양
제6단계는 재배용 병에 접종한 종균을 활착시켜 발아시키는 배양단계이다(도 8). 초기 10±2일은 25~30℃, 중기 10±2일 23~25℃, 후기 10±2일 20~22℃로 유지하면서 실시하며, 초기 10±2일 이후에는 병을 각각 분리하여 빛을 쪼인다. 초기, 중기, 후기에 온도를 순차적으로 낮추는 것은 버섯균의 생육에 따른 배지 내부의 자체발열을 억제하여 버섯균의 노화를 지연시키기 위함이다. 또한 배양 10±2일째에 병을 분리시키는 것은 빛을 투과시켜 버섯균의 발아를 촉진하기 위함이다. 특히 본 발명에서는 병마개 중앙부에 3cm 가량의 작은 크기의 스폰지 필터가 부착되기 때문에, 스폰지 필터 옆 부분에서 빛의 투과를 좋게 하여 잎새버섯균의 발아를 촉진하게 된다.
7. 제7단계- 생육
제7단계는 제6단계에서 발아된 잎새버섯을 성장시키는 생육단계이다(도 9). 병마개를 제거한 후 초기 2±1일은 19±2℃, 그 이후 13±3일간은 17±2℃로 유지하며, 습도는 초기 4±1일은 90±5%, 중기 5±2일은 80±5%, 후기 6±1일은 60±5%로 한다. 이와 같이 초기, 중기, 후기에 따라 온도와 습도를 조절하는 것은 제6단계의 배양과정의 온도와 습도에 잘 적응하기 위함인데, 19±2℃에서 17±2℃로 온도를 천천히 낮추고 90±5%→80±5%→60%±5로 습도를 낮춰 적정한 생육환경을 조성해줌으로써 생육을 수확시기를 10~15일로 단축할 수 있다.
그리고 생육실의 높이는 일반 버섯 재배용보다 1~2m 높게 한다. 생육실의 높이를 1~2m 높게 하면 잎새버섯의 자실체 잎 형성에 좋은 영향을 준다. 일반 버섯은 줄기 위에 자실체 잎이 형성되는데 반해, 잎새버섯은 줄기 없이 바로 잎이 형성되기 때문에 냉온풍기의 바람 및 환기에 따른 바람의 영향을 받기 쉽다. 따라서 생육실의 높이를 1~2m 높게 하여 바람 영향을 최소화하면 고품질의 잎새버섯을 생산할 수 있다. 또한 생육실의 공기는 필터를 통과시켜 충분히 공급하는데, 가령 5분 공급, 2분 중지를 반복한다.
이하에서는 실시예에 의거하여 본 발명을 상세히 살펴본다. 다만, 아래의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이로써 한정되는 것은 아니다.
[실시예] 잎새버섯 재배
배지는 참나무 톱밥 97중량%와 밀기울 3중량%를 골고루 혼합하여 제조하며, 참나무 톱밥은 0.5×1cm 입자크기 75중량%와 0.2×0.5cm 입자크기 25중량%를 혼합한 것을 이용하였다(배지 제조, 도 1). 이어 제조한 배지를 850CC 병에 650g 충진하였다(병입, 도 2). 병은 입구가 5.9cm를 가지는 것을 이용하였으며, 병마개는 중심부에 3cm 크기의 스폰지 필터를 부착시켜 준비하였다(도 3a, 도 3b). 이어 배지가 충진된 재배용 병을 105℃에서 70분간 1차 살균한 후 121℃에서 110분간 2차 살균하였으며(살균, 도 4), 그리고 나서 재배용 병을 냉장실(5~8℃)에 넣어 심부 온도가 10℃ 이하로 내려갈 때까지 천천히 냉각시켰다(냉각, 도 5). 다음으로 재배용 병에 잎새버섯 종균을 3g 접종한 후 배양시켰는데(도 6, 도 8), 초기 10일은 25~30℃, 중기 10일 23~25℃, 후기 10일 20~22℃로 유지하였으며 그리고 초기 10일 이후에는 병을 각각 분리하여 빛을 쪼였다. 마지막으로 생육실로 옮겨 병마개를 제거한 후 초기 2일은 19℃, 그 이후 13일간은 17℃로 유지하되 습도는 초기 4일은 90%, 중기 5일은 80%, 후기 6일은 60%로 하면서 생육시켰다(도 9). 그 결과 도 9와 같은 잎새버섯이 재배되었다.
한편 생육실은 도 10a 및 도 10b와 같은데, 버섯생육 균상대는 6단x2열 규모(1단 높이: 60cm, 1열: 167cm x 19m)로 준비하고 1균상대에 144바구니(1바구니 16병 x 144바구니 = 2,304병, 바구니(16병)내 병간 거리는 1~2cm)를 설치하여 총 27,648병(=균상대 2,304병 x 6균상대 x 2열)을 설치하였다. 그리고 생육실 최상부 4.5m 위치에 공기 공조설비(0.5마력 모터)를 설치하여 필터를 통과한 공기를 5분 공급, 2분 정지를 반복하였다.

Claims (3)

  1. 잎새버섯을 재배하는 방법으로,
    0.5~1cm 입자크기 70~80중량%와 0.2~0.5cm 입자크기 20~30중량%를 혼합한 참나무 톱밥 95~99중량%와 밀기울 1~5중량%를 혼합하여 배지를 제조하는 제1단계;
    제1단계에서 제조한 배지를 입구크기가 6.2±0.5cm인 850±50CC의 병에 0.75~0.8g/1cc 충진하는 제2단계;
    배지가 충진된 재배용 병을 105±5℃에서 70±10분 1차 살균한 후 120±10℃에서 110±10분 2차 살균하는 제3단계;
    재배용 병의 심부 온도가 10℃ 이하로 되도록 냉각하는 제4단계;
    재배용 병에 잎새버섯 종균을 1~5g 접종하는 제5단계;
    배양실에서 배양하되, 초기 10±2일은 25~30℃, 중기 10±2일 23~25℃, 후기 10±2일 20~22℃로 유지하는 한편, 초기 10±2일 이후에는 병을 각각 분리하여 빛을 쪼이면서 배양하는 제6단계;
    생육실에서 생육시키되, 병마개를 제거한 후 초기 2±1일은 19±2℃, 그 이후 13±3일간은 17±2℃로 유지하는 한편 습도는 초기 4±1일은 90±5%, 중기 5±2일은 80±5%, 후기 6±2일은 60±5%로 하면서 생육시키는 제7단계;
    를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 잎새버섯의 속성 병 재배방법.
  2. 삭제
  3. 제1항에서,
    상기 제2단계는, 배지를 충진한 후 병 입구를 중심부에 3±1cm 크기의 스폰지 필터가 부착된 병마개로 덮으면서 실시하는 것을 특징으로 하는 잎새버섯의 속성 병 재배방법.
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