CN105838621A - 一种灰树花液体菌种的培养液以及培育方法 - Google Patents

一种灰树花液体菌种的培养液以及培育方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及一种灰树花液体菌种的培养液以及培育方法。本发明提供的灰树花液体菌种培养液主要由葡萄糖、黄豆粉、磷酸二氢钾、硫酸镁、消泡剂、助长剂和水组成。本发明提供的灰树花液体菌种培养液可以加快菌种的生长速度，提高菌种的活力和生命力，缩短灰树花的菌龄和生长周期。而且该培养液培养的液体菌种发育健壮，抗菌和抗病毒能力强，菌龄整齐，生长均匀，全面提高了灰树花液体菌种的质量和产量，降低生产成本。

Description

一种灰树花液体菌种的培养液以及培育方法
技术领域
本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及一种灰树花液体菌种的培养液以及培育方法。
背景技术
灰树花(Grifda frondosa)属于担子菌亚门层菌纲，非褶菌目多孔菌属，又名贝叶多孔菌、栗子菌、千佛菌、重菇、莲花菇、舞菇等。灰树花的子实体富含人体必需的氨基酸和维生素，具有较高的营养价值，而且其幼时肉质柔软，脆嫩味美，深受人们的喜爱。灰树花的子实体还含有β-葡聚糖，具有预防糖尿病、抗肿瘤和抗艾滋病病毒的作用，具有较高的药用价值。
由于自然界中野生灰树花的数量极少，并呈现逐年下降的趋势，其数量远远不能满足市场的需求。目前，灰树花的人工栽培方法普遍采用母种制作原种、再扩大制成栽培种的固体培育法，但是该固体培育法存在周期长、菌龄不整齐的缺点。由于液体发酵产生的液体菌种可以克服固体培养的缺陷，液体菌种接入固体培养基中进行培养时还具有流动快、分散性好、萌芽点多、发菌迅速、菌丝覆盖早的优点而逐渐取代灰树花固体培育法。
中国专利申请200910201986.8公开了一种灰树花液体菌种及用其栽培灰树花的方法，所述的灰树花的培养液配方由马铃薯、葡萄糖、玉米粉、麸皮浸提液和琼脂组成，其灰树花的栽培菌袋的原料由木屑、棉籽壳、麸皮、玉米粉、红糖、石膏和土组成。使用上述液态培养液培养灰树花可以加快菌种的生长速度，缩短发菌时间，显著的缩短灰树花的制作周期，而且采用液体菌种制作的菌袋菌丝发育健壮，菌龄整齐，便于后期的同期催蕾处理，促进灰树花的产业化生产。
中国专利申请201310267656.5公开了一种灰树花液体菌种培养及高产栽培的方法，所述斜面培养基的成分主要由马铃薯(去皮)、麦麸、葡萄糖、KH2PO4、MgSO4、蛋白胨、VB1和琼脂组成；所述液体种子培养基的成分主要由马铃薯(去皮)、葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4和VB组成；所述发酵培养基础培养基的成分主要由KH2PO4、VB、葡萄糖、蛋白胨、MgSO4组成。使用上述培养基培养灰树花可以大大缩短菌种的制种时间，提高菌种质量，降低菌种生产成本，提高子实体品质，具有很高的推广价值。
然而，采用上述液体培养基培养得到的灰树花液体菌种在栽培的过程容易感染病毒，尤其容易感染黄腐病毒，导致灰树花出现大规模的腐烂和黄化现象，严重影响灰树花的产量。
发明内容
为了解决现有技术中灰树花液体菌种培养存在的不足，本发明的目的在于提供一种生产成本低、生长周期短、菌种整齐、菌种覆盖率高和抗菌抗病毒能力强的灰树花液体菌种的培养液以及培育方法，以解决上述缺陷。
本发明提供了一种灰树花液体菌种的培养液，包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖72-80份、黄豆粉12-20份、磷酸二氢钾1-4份、硫酸镁1-5份、消泡剂0.05-0.1份、助长剂2-6份和水600-700份。
进一步地，所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖76-80份、黄豆粉16-20份、磷酸二氢钾1-3份、硫酸镁1-3份、消泡剂0.08-0.09份、助长剂3-5份和水620-700份。
进一步地，所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖78份、黄豆粉18份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.08份、助长剂4份和水650份。
进一步地，所述消泡剂为聚醚改性硅消泡剂。
进一步地，所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比4-6∶1-3组成。
进一步地，所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比5∶2组成。
另外，本发明还提供了一种灰树花液体菌种的培育方法，包括以下步骤：
S1斜面试管菌种的培养：将权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液装于试管中，接着将试管置于120-125℃下灭菌30-60min，冷却后于35-37℃培养箱内烘干，2-3天后将灰树花纯菌种接种到斜面试管的固体培养基上，并于20-22℃恒温条件下培养7-10天，得斜面试管菌种；
S2三角瓶菌种的培养：将权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液装于三角瓶中，接着将三角瓶置于120-125℃下灭菌30-60min，冷却后将步骤S1得到的斜面试管菌种菌丝分隔成长度为5-6mm的正方形小块接种于三角瓶中培养，并于20-22℃恒温条件下培养7-9天，得三角瓶液体菌种；
S3发酵罐菌种的培养：将权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液装于发酵罐中，灭菌后将发酵罐温度降至22-24℃，将步骤S2得到的三角瓶液体菌种接种于发酵罐中培养，在20-22℃恒温条件下培养7-10天，得发酵罐液体菌种；
S4栽培袋的制备：将栽培培养基装于多孔袋，灭菌2-3h，冷却后将步骤S3得到的发酵罐液体菌种接种于多孔袋中栽培，所述栽培培养基主要由玉米芯20-40％、木屑20-40％、田园土10-20％、玉米粉4-8％、麸皮14-20％、蔗糖0.5-2％和石膏0.5-2％组成；
S5菌丝培养：将步骤S4得到的多孔袋放于培养室中培养20-30天后，放入出菇室中培养22-25天，即得。
进一步地，所述步骤S4多孔袋中的含水量控制在63-65％，pH值为5.5-6.0。
进一步地，所述步骤S4中栽培培养基由玉米芯30％、木屑30％、田园土15％、玉米粉5％、麸皮18％、蔗糖1％和石膏1％组成。
进一步地，所述步骤S5培养室中多孔袋的袋间温度控制在24-26℃，袋间CO2含量控制在1000-3000ppm，所述培养室内的湿度控制在65-75％。
进一步地，所述步骤S5中出菇室的温度控制在15-20℃，CO2含量控制在800-1000ppm，湿度控制在85-99％。其中，所述菌丝恢复时期出菇室的湿度控制在97-99％，所述菌丝现蕾期出菇室的湿度控制在85-95％。
本发明提供的助长剂中的天麻素又称为天麻苷，其化学名称为：对羟甲基苯-β-D吡喃葡萄糖苷，其化学式为：C13H18O7，CAS号为：62499-27-8。天麻素是从兰科植物天麻的干燥根块提取得到，其具有较好的镇静和安眠作用，对神经衰弱、失眠、头痛症状有缓解作用。藻酸双酯钠的化学名称为藻酸丙脂硫酸酯钠，分子式为：C6H9O7Na，CAS号为：9005-38-3。藻酸双酯钠具有抗凝血、降血脂、改善微循环等作用，主要用于缺血性脑血管病，也用于高血脂症，对心血管系统的疾病也有一定的疗效。
本发明提供的栽培培养基中的木屑为阔叶树种的木屑，聚醚改性硅消泡剂的货号为：THIX-298医药消泡剂，购于烟台恒鑫化工科技有限公司。
本发明提供的由天麻素和藻酸双酯钠按一定重量比组成的助长剂，可以促进灰树花的生长速度，提高灰树花液体菌种的活力和生命力，缩短萌发时间，提高菌丝及胞外多糖的产量，提高菌株对发酵环境及后续栽培环境的适应性。经试验发现，使用本发明提供的灰树花液体菌种培养液培养灰树花可以大大缩短灰树花的菌种周期，其菌种周期为42-48天左右，同时也可以有效的促进灰树花对营养物质的吸收，其生物转化率在58％以上，更有利于灰树花的产业化生产。
进一步地，本发明提供的助长剂还可以提高灰树花液体菌种的抗菌、抗病毒能力，经试验发现，使用本发明提供的灰树花液体菌种培养液培养的灰树花液体菌种在栽培过程中，其子实体的黄腐病病发率在5％以内，可以大大的提高灰树花的产量，减少损失。
本发明提供的灰树花液体菌种培养液可以加快菌种的生长速度，提高菌种的活力和生命力，缩短灰树花的菌龄和生长周期。而且该培养液培养的液体菌种发育健壮，抗菌和抗病毒能力强，菌龄整齐，生长均匀，全面提高了灰树花液体菌种的质量和产量，降低生产成本。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有以下优势：
(1)本发明提供的灰树花液体菌种的培养液可以加快菌种的生长速度，提高菌种的活力和生命力，缩短灰树花的菌龄和生长周期；
(2)本发明提供的灰树花液体菌种的培养液可以提高灰树花液体菌种的抗菌抗病毒能力，尤其对黄腐病病毒具有较好的抵抗作用，可以有效的减少损失；
(3)本发明提供的灰树花液体菌种的培育方法成本低，栽培时间短，有利于该培育方法的产业化生产。
具体实施方式：
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
实施例1、
所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖72份、黄豆粉12份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.05份、助长剂2份和水600份；所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比4∶3组成。
所述灰树花液体菌种的培育方法：
S1斜面试管菌种的培养：将上述的灰树花液体菌种培养液装于试管中，接着将试管置于123℃下灭菌40min，冷却后于36℃培养箱内烘干，2天后将灰树花纯菌种接种到斜面试管中的固体培养基上，并于22℃恒温条件下培养10天，得斜面试管菌种；
S2三角瓶菌种的培养：将上述的灰树花液体菌种培养液装于三角瓶中，接着将三角瓶置于123℃下灭菌40min，冷却后将步骤S1得到的斜面试管菌种菌丝分隔成长度为5mm的正方形小块接种于三角瓶中培养，并于22℃恒温条件下培养9天，得三角瓶液体菌种；
S3发酵罐菌种的培养：将上述的灰树花液体菌种培养液装于发酵罐中，灭菌后将发酵罐温度降至22℃，将步骤S2得到的三角瓶液体菌种接种于发酵罐中培养，在22℃恒温条件下培养10天，得发酵罐液体菌种；
S4栽培袋的制备：将栽培培养基装于多孔袋，多孔袋中的含水量控制在65％，pH值为6.0，灭菌2h，冷却后将步骤S3得到的发酵罐液体菌种接种于多孔袋中栽培，所述栽培培养基由玉米芯30％、木屑30％、田园土15％、玉米粉5％、麸皮18％、蔗糖1％和石膏1％组成；
S5菌丝培养：将步骤S4得到的多孔袋放于培养室中培养25天后，所述多孔袋的袋间温度控制在25℃，袋间CO2控制在2000ppm，所述培养室内的湿度控制在70％；放入出菇室培养25天，所述出菇室的温度控制在18℃，CO2含量控制在800ppm，所述菌丝恢复时期出菇室的湿度控制在98％，所述菌丝现蕾期出菇室的湿度控制在90％，即得。
实施例2、
所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖78份、黄豆粉18份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.08份、助长剂4份和水650份；所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比5∶2组成。
所述灰树花液体菌种的培育方法与实施例1类似。
实施例3、
所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖80份、黄豆粉20份、磷酸二氢钾4份、硫酸镁5份、消泡剂0.1份、助长剂6份和水700份；所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比6∶1组成。
所述灰树花液体菌种的培育方法与实施例1类似。
对比例1、
所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖78份、黄豆粉18份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.08份、助长剂4份和水650份；所述助长剂为天麻素。
所述灰树花液体菌种的培育方法与实施例1类似。
与实施例2的区别在于，助长剂为天麻素。
对比例2、
所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖78份、黄豆粉18份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.08份、助长剂4份和水650份；所述助长剂为藻酸双酯钠。
所述灰树花液体菌种的培育方法与实施例1类似。
与实施例2的区别在于，助长剂为藻酸双酯钠。
对比例3、
所述灰树花液体菌种的培养液包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖78份、黄豆粉18份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.08份、助长剂4份和水650份；所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比1∶1组成。
所述灰树花液体菌种的培育方法与实施例1类似。
与实施例2的区别在于，助长剂中天麻素和藻酸双酯钠的重量比为1∶1。
试验例一、灰树花的菌种培育周期试验
1、试验材料：实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2和对比例3制备的灰树花液体菌种培养液。
2、试验方法：
将实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2和对比例3制备的灰树花液体菌种培养液，分别设置为实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比例1组、对比例2组和对比例3组，其中以不加助长剂的实施例2制备的灰树花液体菌种培养液作为对照组，将不同组的培养液在同一条件下培育灰树花菌种，观察灰树花的斜面试管菌种、三角瓶菌种、发酵罐菌种的菌种培养周期，并记录多孔袋长满菌丝的时间，另外计算灰树花的生物转化率，生物转化率(％)＝子实体鲜品产量(g)/培养料干重(g)×100％。
3、试验结果
试验结果如表1和表2所示。
表1 灰树花液体菌种的培养周期
表2 灰树花液体菌种的生物转化率
子实体鲜品产量(g) 栽培料干重(g) 生物转化率(％)
对照组 777.60 2250 34.56
实施例1组 1310.63 2250 58.25
实施例2组 1397.25 2250 62.10
实施例3组 1347.30 2250 59.88
对比例1组 871.20 2250 38.72
对比例2组 820.13 2250 36.45
对比例3组 955.13 2250 42.45
由上述表1和表2可知，使用实施例1-3制备的灰树花液体菌种培养液培养灰树花菌种的菌种周期为42-48天左右，生物转化率在58％以上，而对比例1和对比例2制备的灰树花液体菌种培养液培养灰树花菌种的菌种周期为在60天以上，生物转化率不到40％，说明本发明提供的由麻黄素和藻酸双酯钠按一定重量比组成的助长剂可以缩短灰树花的培育周期，提高灰树花液体菌种的生物转化率，更有利于产业化和规模化的生产。
试验例二、灰树花液体菌种的抗黄腐病毒的试验
1、试验材料：实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2和对比例3制备的灰树花液体菌种培养液。
2、试验方法：将实施例1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2和对比例3制备的灰树花液体菌种培养液，分别设置为实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比例1组、对比例2组和对比例3组，其中以不加助长剂的实施例2制备的灰树花液体菌种培养液作为对照组，将不同组的培养液在同一条件下培育灰树花菌种，观察灰树花子实体病斑情况，并计算灰树花子实体黄腐病发生率，其中灰树花子实体出现腐烂、萎缩、成酱状的现象评价为出现黄腐病，灰树花子实体黄腐病发生率＝灰树花子实体病斑个数/全部子实体总数。
3、试验结果：
试验结果如表3所示。
表3 灰树花子实体黄腐病发生情况
灰树花子实体黄腐病发生率(％)
对照组 34.35
实施例1组 3.30
实施例2组 3.44
实施例3组 3.52
对比例1组 22.24
对比例2组 28.76
对比例3组 15.22
由表3可知，使用本发明实施例1-3制备的灰树花液体菌种培养液培养的灰树花液体菌种在培育过程中黄腐病的发生率在5％以内，而使用对比例1和对比例2制备的灰树花液体菌种培养液培养的灰树花液体菌种在培育过程中黄腐病的发生率在20％以上，说明本发明提供的由麻黄素和藻酸双酯钠按一定重量比组成的助长剂可以提高灰树花的抗病毒能力，更有利于产业化和规模化的生产。

Claims (10)

1.一种灰树花液体菌种的培养液，其特征在于，包括如下组分及其重量份数：
葡萄糖72-80份、黄豆粉12-20份、磷酸二氢钾1-4份、硫酸镁1-5份、消泡剂0.05-0.1份、助长剂2-6份和水600-700份。
2.如权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液，其特征在于，包括如下组分及其重量份数：葡萄糖78份、黄豆粉18份、磷酸二氢钾2份、硫酸镁2份、消泡剂0.08份、助长剂4份和水650份。
3.如权利要求1或2所述的灰树花液体菌种的培养液，其特征在于，所述消泡剂为聚醚改性硅消泡剂。
4.如权利要求1或2所述的灰树花液体菌种的培养液，其特征在于，所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比4-6∶1-3组成。
5.如权利要求4所述的灰树花液体菌种的培养液，其特征在于，所述助长剂由天麻素和藻酸双酯钠按重量比5∶2组成。
6.一种灰树花液体菌种的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1斜面试管菌种的培养：将权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液装于试管中，接着将试管置于120-125℃下灭菌30-60min，冷却后于35-37℃培养箱内烘干，2-3天后将灰树花纯菌种接种到斜面试管的固体培养基上，并于20-22℃恒温条件下培养7-10天，得斜面试管菌种；
S2三角瓶菌种的培养：将权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液装于三角瓶中，接着将三角瓶置于120-125℃下灭菌30-60min，冷却后将步骤S1得到的斜面试管菌种菌丝分隔成长度为5-6mm的正方形小块接种于三角瓶中培养，并于20-22℃恒温条件下培养7-9天，得三角瓶液体菌种；
S3发酵罐菌种的培养：将权利要求1所述的灰树花液体菌种的培养液装于发酵罐中，灭菌后将发酵罐温度降至22-24℃，将步骤S2得到的三角瓶液体菌种接种于发酵罐中培养，在20-22℃恒温条件下培养7-10天，得发酵罐液体菌种；
S4栽培袋的制备：将栽培培养基装于多孔袋，灭菌2-3h，冷却后将步骤S3得到的发酵罐液体菌种接种于多孔袋中栽培，所述栽培培养基主要由玉米芯20-40％、木屑20-40％、田园土10-20％、玉米粉4-8％、麸皮14-20％、蔗糖0.5-2％和石膏0.5-2％组成；
S5菌丝培养：将步骤S4得到的多孔袋放于培养室中培养20-30天后，放入出菇室中培养22-25天，即得。
7.如权利要求6所述的灰树花液体菌种的培育方法，其特征在于，所述步骤S4多孔袋中的含水量控制在63-65％，pH值为5.5-6.0。
8.如权利要求6所述的灰树花液体菌种的培育方法，其特征在于，所述步骤S4中栽培培养基由玉米芯30％、木屑30％、田园土15％、玉米粉5％、麸皮18％、蔗糖1％和石膏1％组成。
9.如权利要求6所述的灰树花液体菌种的培育方法，其特征在于，所述步骤S5培养室中多孔袋的袋间温度控制在24-26℃，袋间CO2含量控制在1000-3000ppm，所述培养室内的湿度控制在65-75％。
10.如权利要求6所述的灰树花液体菌种的培育方法，其特征在于，所述步骤S5中出菇室的温度控制在15-20℃，CO2含量控制在800-1000ppm，湿度控制在85-99％。
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