KR101635082B1 - Tgr5 작용제 활성을 갖는 약학 조성물 또는 식품 조성물 - Google Patents

Tgr5 작용제 활성을 갖는 약학 조성물 또는 식품 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 부작용이 적어 안전하면서도 TGR5 작용제 활성이 뛰어난 약학 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것으로서, 상기 개망초, 조릿대, 편백, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대 및 초피씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함한다. 본 발명의 조성물은 당뇨 치료 또는 예방; 비만 치료 또는 예방; 신경세포 보호; 또는 소화 및 흡수 조절; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 등을 위한 약학 조성물 또는 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

TGR5 작용제 활성을 갖는 약학 조성물 또는 식품 조성물{Pharmaceutical or food composition having TGR5 agonist activity}
본 발명은 약학적 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이며, 더 구체적으로 본 발명은 체내 여러 조직의 세포막에 존재하는 TGR5와 결합하여 작용제(agonists)로 작용하는 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 특정 질병 또는 질환에 유용한 약학적 조성물 또는 식품 조성물에 관한 것이다.
G protein-coupled bile acid receptor 1 (GPBAR1), 혹은 Takeda G-protein-coupled receptor 5 (TGR5, GPBAR1, GPR131)는 간, 골격근육, 장, 갈색 지방조직, monocytes 등의 세포막에 존재하는 class A G-protein-coupled receptor (GPCR)이다(1. A.T. Londregan, D.W. Piotrowski, K. Futatsugi, J.S. Warmus et al., Discovery of 5-phenoxy-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamides as potent agonists of TGR5 via sequential combinatorial libraries. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 23 (2013) 1407-1411).
담즙산 및 담즙산 유도체 등은 TGR5와 결합하여 TGR5 작용제로 작용하는데, TGR5가 활성화되면 세포내 cAMP 농도를 증가시켜서 protein kinase A (PKA)의 활성을 증가시킨다. 이 PKA의 활성화는 TGR5가 존재하는 조직에 특이적으로 대사 및 포도당 및 에너지 항상성 등의 조절에 중요한 역할을 한다. 즉 장의 내분비 세포의 세포막에 존재하는 TGR5가 활성화되면 장 내분비 세포로부터는 glucagon-like peptide-1 (GLP-1)의 분비를 증가시키며 (Katsuma, S., Hirasawa, A., Tsujimoto, G. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005, 329, 386), 간세포의 세포막에 존재하는 TGR5가 활성화되면 간세포에서 endothelial nitric oxide synthase (eNOS) 및 nitric oxide의 생성을 증가시키며 (Kietel, V., Reinehr, R., Gatsios, P., Rupprecht, C., et al., Hepatology 2007, 45, 695), 갈색 지방 조직 및 골격 근육 조직의 세포막에 존재하는 TGR5가 활성화되면 갈색 지방 조직 및 골격 근육 조직에서는 type 2 iodothyronine deiodinase (D2)를 활성화시킨다 (Brufau, G., Bahr, M.J., Staels, B., Claudel, T., et al., Nutr. Metab. 2010, 7, 73).
이러한 효과들은 종합적으로 장내분비세포로부터의 GLP-1 분비를 매개로 하여 포도당 의존적 인슐린 분비를 증폭시키며 인슐린 유전자 발현 증진, 췌장 베타세포 증식 (proliferation) 증진 효과, 췌장 베타세포 생존 (survival) 증진 효과, 글루카곤 분비 저해 효과 등을 통하여 당뇨병을 치료할 수 있다. 또한 간세포에서 endothelial nitric oxide synthase (eNOS) 및 nitric oxide의 생성을 증가시켜 간질환을 치료할 수 있다. 또한 갈색 지방 조직 및 골격 근육 조직에서의 type 2 iodothyronine deiodinase (D2)의 활성화를 통해 비만을 치료할 수 있다.
상기 TGR5 활성화에 의해 장내분비세포로부터 분비되는 GLP-1은 췌장에서 포도당 의존적 인슐린 분비 자극, 인슐린 유전자 발현 증진, 췌장 베타세포 증식 증진 효과, 췌장 베타세포 생존 증진 효과, 글루카곤 분비 저해 효과, 혈당 강하 등을 통해 당뇨병 치료 효과를 나타내는데 관여하며, 위장이 비워지는 속도를 늦추고, 식욕을 억제하고, 포만감을 증진시키며 음식 섭취를 억제하는데 관여하여 비만 치료 효과를 나타내는데 관여하는 것으로 알려져 있다.
또한 상기 GLP-1은 국소 빈혈(ischemia)로부터 심장세포(cardiomyocytes) 보호 효과 및 심장마비 우려가 있는 환자의 심장기능 향상 효과를 통해 심장병 치료 효과를 나태고(Glucagon-like peptide-1 infusion improves left ventricular ejection fraction and functional status in patients with chronic heart failure. J. Card. Fail. (2006) 12: 694-699., Ban, K., et al ., Cardioprotective and vasodilatory actions of glucagon-like peptide-1 receptor are mediated through both glucagon-like peptide-1 receptor-dependent and -independent pathways. Circulation (2008) 117: 2340-2350. 참고), 췌장 및 소장에서 소화효소 분비를 증진시켜 효율적인 소화, 흡수 조절에 관여하는 것으로 알려져 있다.
또한, 상기 GLP-1은 동맥경화증 치료 효과 [Burgmaier M et al., Glucagon-like peptide-1 (GLP-1) and its split products GLP-1(9-37) and GLP-1(28-37) stabilize atherosclerotic lesions in apoe-/- mice. Atherosclerosis (2013) 231, 427-435], 뇌혈관 질환 및 신경세포 염증 치료 효과(Salcedo I et al., Neuroprotective and neurotrophic actions of glucagon-like peptide-1 (GLP-1): an emerging opportunity to treat neurodegenerative and cerebrovascular disorders. British Journal of Pharmacology (2012) 166, 1586-1599) 등을 통해 신경세포 보호 효과를 나타낼 수 있을 것으로 기대되고 있다.
상기 GLP-1은 G protein-coupled receptors(GPCRs)의 일종인 TGR5 및 GPR119의 활성화(Reimann, F., et al ., Glucose sensing in L cells: a primary cell study. Cell Metab. (2008) 8: 532-539; Lauffer, L.M., et al ., GPR119 is essential for oleoylethanolamide-induced glucagon-like peptide-1 secretion from the intestinal enteroendocrine L-cell. Diabetes (2009) 58:1058-1066. 참고) 또는 α-gustducin의 활성화(Jang, H.J., et al ., 2007. Gut expressed gustducin and taste receptors regulate secretion of glucagon-like peptide-1. Proceeding of the National Academy of Science 104, 1506915074. 참고)에 의해 분비가 촉진되는 것으로 알려져 있다. 특히, 갈색 지방조직(brown adipose tissue) 및 근육(muscle)에 발현된 G protein-coupled receptor(GPCR) TGR5(GPR131)의 활성화는 에너지 소비를 증가시켜서 비만 치료 효과를 보이며, 간질환 개선에 관련이 있는 것으로 알려져 있다(참고문헌 : Lieu T et al., GPBA: A G protein-coupled receptor for bile acids and an emerging therapeutic target for disorders of digestion and sensation. British Journal of Pharmacology (2013) in press).
또한, 상기 GLP-1은 장의 움직임 장애, 장 내의 액체 및 전해질 분비 장애를 치료할 수 있는 것으로 알려져 있다(Lieu T et al., GPBA: A G protein-coupled receptor for bile acids and an emerging therapeutic target for disorders of digestion and sensation. British Journal of Pharmacology DOI:10.1111/bph.12426).
전 세계적으로 당뇨병, 심혈관 질환 등과 같은 심각한 질병에 효과적인 약물을 개발하려는 노력이 꾸준히 이어져 오고 있다. 그러나, 효과가 매우 높으면서도 비만, 간독성, 부종과 같은 부작용이 적은 약물을 개발하는 것이 쉽지 않다.
한편, 비만의 예방 또는 치료를 위해 항비만 효과를 갖는 약물이 사용되고 있으나, 이러한 약물은 기름변이나 복부 팽만감, 어지러움, 구갈, 변비, 혈압상승 등과 같은 부작용을 유발하는 것으로 알려지면서 보다 안전하고 효력이 강한 천연 기능성 물질의 개발이 절실히 요구되고 있다.
따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 부작용이 적어 안전하면서도 TGR5 작용제 활성이 뛰어나 여러 가지 유용한 효능을 나타낼 수 있는 약학적 또는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
특히 본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는 항당뇨 효과; 항비만 효과; 신경세포 보호 효과; 또는 소화 및 흡수 조절 효과; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 중 어느 하나 이상의 효과를 나타내는 약학 조성물 또는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명이 이루고자 하는 또 다른 기술적 과제는 안전한 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 또는 식품 조성물의 유효한 양을 치료 또는 개선이 필요한 개체 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 개체 또는 환자에 있어 항당뇨 효과; 항비만 효과; 신경세포 보호 효과; 또는 소화 및 흡수 조절 효과; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 중 어느 하나 이상의 효과를 달성하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 개망초(Erigeron annuus), 조릿대(Sasa borealis (Hack.) Makino), 편백(Chamaecyparis obtusa) 열매, 피마자(Ricinus communis L.), 까마중(Solanum nigrum L.), 벼룩나물(Stellaria alsine var. undulata(Thunb.) Ohwi), 구릿대(Angelica dahurica B. et H.), 및 초피(Zanthoxylum piperitum A. P. DC.) 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하고, TGR5 작용제 활성을 가져, 결과적으로는 항당뇨 효과; 항비만 효과; 신경세포 보호 효과; 또는 소화 및 흡수 조절 효과; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 효과를 나타내는 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 오랫동안 사용되어 안전성이 입증된 천연물 중에서 개망초(Erigeron annuus), 조릿대(Sasa borealis (Hack.) Makino), 편백(Chamaecyparis obtusa) 열매, 피마자(Ricinus communis L.), 까마중(Solanum nigrum L.), 벼룩나물(Stellaria alsine var. undulata(Thunb.) Ohwi), 구릿대(Angelica dahurica B. et H.), 및 초피(Zanthoxylum piperitum A. P. DC.) 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 TGR5 작용제 활성이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에서의 '치료'란 유익하거나 바람직한 임상 결과를 얻기 위한 접근법으로서, 본 발명의 목적을 위해 유익하거나 바람직한 임상적 결과를 감지 가능하거나 가능하지 않거나를 불문하고, 또한 부분적이든 전체적이든 상관없이 증상의 완화, 질환 정도의 감소, 질환의 안정화된(즉, 더 나빠지지 않는) 상태, 질환 진행의 지연 또는 속도감소, 질환 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 치료는 치료가 수용되지 않는 경우에 예측되는 생존과 비교해서 연장된 생존을 의미하기도 하며, 하나의 질환의 병변이 발전되거나 변경되는 것을 예방하는 의도로 수행되는 중재이다. 따라서, 치료는 치료법적 치료 및 예방적인 차원의 것들 모두를 가리키며, 치료할 필요가 있는 것들은 이미 질환을 가지고 있는 상태 뿐만 아니라 질환이 예방되어야 할 상태를 포함한다.
본 명세서 사용된 ‘개선’이라 함은 본 발명의 조성물을 사용하기 전보다 본 발명의 조성물을 사용하고 난 후 증상의 완화 및 경감을 포함하는 넓은 의미로 사용된다.
개망초(Erigeron annuus)는 국화과 식물로, 한방에서는 장염으로 인한 설사와 발열증상, 잇몸의 염증 등에 효과가 있다고 알려져 있다.
조릿대(Sasa borealis (Hack.) Makino)는 대과 식물로 산죽이라고도 하며, 해열작용이 우수한 것으로 알려져 있다. 본 발명은 바람직하게는 조릿대의 잎을 사용할 수 있다.
편백(Chamaecyparis obtusa)은 측백나무과 식물로, 편백의 수피 또는 잎 부분은 다양한 용도로 활용되고 있으며, 특히 잎은 지혈작용이 우수한 것으로 알려져 있다. 본 발명의 목적상 편백나무 중에서 특히 편백나무의 열매를 이용하는 것이 바람직하다.
피마자(Ricinus communis L.)는 대극과 식물로, 아주까리라고도 하며, 염증을 제거하는데 탁월한 효과가 있음이 알려져 있다.
까마중(Solanum nigrum L.)은 가지과 식물로, 여름과 가을에 채취할 수 있으며, 중년 여성의 자궁 건강에 특히 효과가 있음이 알려져 있다.
벼룩나물(Stellaria alsine var. undulata(Thunb.) Ohwi)은 석죽과 식물로, 개미바늘이라고도 한다. 논둑이나 밭에서 흔히 자란다. 높이 15∼25cm로 털이 없고 밑에서 가지가 많이 갈라져서 퍼지기 때문에 커다란 포기로 자란 것처럼 보인다.
구릿대(Angelica dahurica B. et H.)는 산형과 식물로, 백지라고도 불리며, 피를 잘 돌게 하며 통증 완화에 우수한 효과가 있음이 알려져 있다. 특히 본 발명의 목적상 구릿대의 뿌리를 이용하는 것이 특히 바람직하다.
초피(Zanthoxylum piperitum A. P. DC.)는 운향과 식물로, 제습, 구충, 진통, 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 본 발명의 목적상 상기 초피는 초피 열매의 씨 부분을 이용하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 일 실시예에서는 개망초(Erigeron annuus), 조릿대(Sasa borealis (Hack.) Makino), 편백(Chamaecyparis obtusa) 열매, 피마자(Ricinus communis L.), 까마중(Solanum nigrum L.), 벼룩나물(Stellaria alsine var. undulata(Thunb.) Ohwi), 구릿대(Angelica dahurica B. et H.), 및 초피(Zanthoxylum piperitum A. P. DC.) 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 인슐린 유전자 발현 증가, 글루카곤 분비 저해 효과, 혈당강하 등의 효과를 나타낼 수 있음을 실험을 통해 밝혀내어 이들의 추출물의 당뇨병 예방 및 개선 효과에 대한 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 식욕 억제 효과를 가지고, 위장이 비워지는 속도를 늦추며, 포만감을 증진시킨다는 것을 실험을 통해 밝혀내어 이들 추출물의 식욕 억제를 통한 항비만 효과에 대한 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 췌장 및 소장에서 소화효소 분비를 증진시키고, 장 수축작용 및 운동성을 조절한다는 것을 실험을 통해 밝혀내어 이들 추출물의 소화 및 흡수 장애 개선 효과에 대한 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 심장근육으로 전달되는 혈류를 조절하여 심장근육세포를 보호하는 효과가 뛰어나다는 사실을 밝혀내어 이들 추출물의 심장질환 개선 효과에 대한 용도를 제공한다. 보다 구체적으로는 본 발명의 이들 추출물은 국소빈혈로부터 심장세포를 보호하고, 심장마비 우려가 있는 환자의 심장 기능 향상 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는, 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물에 의해 뇌의 Arcuate nucleus in hypothalamus(ARC)를 활성화시키고, 미주신경 (vagus nerves)을 활성화시킨다는 사실을 밝혀내어 이들 추출물의 신경보호 효과에 대한 용도를 제공한다. 보다 구체적으로는 본 발명의 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물은 신경변성(Neurodegenerative) 질환 및 뇌혈관(cerebrovascular) 질환을 치료하고, 신경세포 염증(Neuroinflammation)을 치료하고, 신경 조직 발생(Neurogenesis) 증진 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시예에서는 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물의 간질환 치료 또는 개선 효과에 대한 용도를 제공한다. 보다 구체적으로는 본 발명의 식물 추출물은 간 염증(Hepatic inflammation) 감소 효과, 장간 혈액순환(enterohepatic blood flow) 증진효과, 간 기능 개선 효과, cholestatic liver diseases 치료 효과, 소양병 (搔痒病; pruritus) 및 무통증 황달 (painless jaundice) 치료 효과, 장 기능 (intestinal functions) 개선 효과, 신경전달 반응 촉진 효과를 기대할 수 있다.
구체적으로 본 발명의 일 실시예에서는 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 GLP-1 분비를 자극한다는 것을 실험을 통해 밝혀내어 이들 추출물의 GLP-1 분비 자극 효과에 대한 용도를 제공한다.
본 발명의 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물은 본 발명이 속한 분야에서 통상적인 방법으로 추출해낸 추출물을 의미하며, 추출 후 분획, 분리, 여과 등의 방법으로 추가적으로 정제될 수 있다.
예를 들어, 본 발명에 따른 상기 식물 추출물은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용매 추출물 또는 이의 건조물일 수 있다. 상기 식물 추출물의 추출 시 추출 용매는 천연물 추출에 사용되는 용매이면 제한 없이 사용할 수 있으며, 예를 들어, 정제수; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜 등의 다가 알코올; 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들은 혼합 용매를 이용할 수 있으나, 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올과 같은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합 용매를 사용하는 것이 바람직하고, 정제수, 에탄올 또는 이들의 혼합용매를 사용하는 것이 더욱 바람직하며, 정제수와 에탄올의 혼합용매를 사용하는 것이 본 발명의 목적상 더욱 바람직하다.
상기 추출 용매의 양은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물 중량대비 10 내지 100배가 이용될 수 있고, 바람직하게는 20 내지 80배가 이용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 30 내지 50배가 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 식물 추출물을 추출하는 방법은 교반 추출, 냉침 추출, 열수 추출, 침지 추출, 초임계 추출, 아임계 추출, 고온 추출, 고압 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 가온하여 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하다. 추출 시 온도는 10 내지 30℃인 것이 바람직하고, 상기 추출 시간은 1일 내지 20일인 것이 바람직하며, 1 내지 5일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
더욱 구체적으로, 상기 식물들을 음건하여 분쇄한 후, 추출용매를 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 식물 분쇄물의 1 내지 20배 부피량 만큼 가하여 추출하고 나서, 선택적으로 (감압)농축, 건조 또는 정제 과정을 거쳐 제조할 수 있다. 보다 구체적으로, 전술한 방법과 같이 추출용매를 가하여 유효성분물질을 추출하되 (a) 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50 내지 100℃의 온도 조건에서 1 내지 20시간 가열하여 추출하거나, (b) 5 내지 37℃의 온도 조건에서 1 내지 15일간 침적시켜 유효성분을 추출할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 또 다른 실시예에 따르면, 상기 장 내분비세포 활성화를 위한 식물 추출물은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물의 분획물일 수 있다.
본 발명의 분획물은 상기 식물 추출물(바람직하게는 탄소수 1-4의 저급 알코올 추출물)을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 에틸 아세테이트와 같은 물보다 극성이 낮은 용매로 분획하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 헥산 또는 클로로포름을 이용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
특히, 본 발명에 따른 효과를 달성한다는 목적에서 본 발명에 따른 식물 추출물은 탄소수 1-4의 저급 알코올 추출물의 헥산 또는 클로로포름 분획물인 것이 바람직하다.
상기 분획물은 건조시키기 전의 액상 상태의 식물 추출물을 이용하거나 건조된 식물 추출물을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매 등 적당한 용매에 현탁 또는 용해시킨 후, 헥산, 클로로포름, 부탄올 또는 에틸 아세테이트와 같은 물보다 극성이 낮은 용매를 순차적으로 첨가하여 각각의 층을 분리한 다음 각 층을 감압 농축 및/또는 건조시켜 수득할 수 있다.
이때, 상기 감압 농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 발명에 따른 “건조”는 감압 건조, 진공 건조, 비등 건조, 분무 건조, 상온 건조 또는 동결 건조일 수 있으나, 동결 건조를 하는 것이 더욱 바람직하다. 다만 본 발명은 이러한 건조 방법에 한정되지 않는다.
본 발명은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물이 장 호르몬 및 신경펩타이드의 분비를 촉진시켜, 항당뇨 효과; 항비만 효과; 신경세포 보호 효과; 또는 소화 및 흡수 조절 효과; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 중 어느 하나 이상의 효과 등을 갖는 약학 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항당뇨 효과; 항비만 효과; 신경세포 보호 효과; 또는 소화 및 흡수 조절 효과; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 중 어느 하나 이상의 효과 등을 갖는 식품 조성물을 제공할 수 있다.
즉, 본 발명에 따른 상기 조성물은 의약품, 건강 보조 식품, 식품 첨가제, 사료 첨가제 등에 이용될 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
보다 구체적으로, 예를 들어, 산제는 본 발명의 추출물과 유당, 전분, 미결정셀룰로오스 등 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제를 단순 혼합함으로써 제조될 수 있다. 과립제는 본 발명의 추출물; 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제; 및 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필셀룰로오스 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 결합제를 혼합한 후, 물, 에탄올, 이소프로판올 등의 용매를 이용한 습식과립법 또는 압축력을 이용한 건식과립법을 이용하여 제조될 수 있다. 또한 정제는 상기 과립제를 마그네슘스테아레이트 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 활택제화 혼합한 후, 타정기를 이용하여 타정함으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물은 치료해야할 질환 및 개체의 상태에 따라 경구제, 주사제(예를 들어, 근육주사, 복강주사, 정맥주사, 주입(infusion), 피하주사, 임플란트), 흡입제, 비강투여제, 질제, 직장투여제, 설하제, 트랜스더말제, 토피칼제 등으로 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 투여경로에 따라 통상적으로 사용되고 비독성인, 약제학적으로 허용되는 운반체, 첨가제, 비히클을 포함하는 적당한 투여 유닛 제형으로 제제화될 수 있다. 일정 시간 동안 약물을 지속적으로 방출할 수 있는 데포(depot) 제형 또한 본 발명의 범위에 포함된다.
항당뇨 효과; 항비만 효과; 신경세포 보호 효과; 또는 소화 및 흡수 조절 효과; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 효과라는 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따른 식물 추출물은 매일 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 g/kg이 투여될 수 있으며, 약 0.01 mg/kg 내지 약 1 g/kg의 1일 투여 용량이 바람직하다. 그러나 상기 투여량은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물의 정제 정도, 환자의 상태(연령, 성별, 체중 등), 치료하고 있는 상태의 심각성 등에 따라 다양할 수 있다. 필요에 따라 편리성을 위하여 1일 총 투여량이 나누어지고 하루 동안 여러 번 나누어 투여될 수 있다.
본 발명의 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 식품 조성물로 사용하는 경우, 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 식품 조성물 중 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기 향미제는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
본 발명의 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물의 치료학적으로 유효한 양 또는 건강 개선을 위해 유효한 양을 치료 또는 상태 개선이 필요한 환자 또는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 당뇨 치료 또는 예방; 비만 치료 또는 예방; 신경세포 보호; 또는 소화 및 흡수 조절; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 방법을 제공한다.
즉, 본 발명은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물의 당뇨 치료 또는 예방; 비만 치료 또는 예방; 신경세포 보호; 또는 소화 및 흡수 조절; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 의약 또는 건강기능식품 용도를 제공한다.
본 발명은 본 발명은 개망초, 조릿대, 편백 열매, 피마자, 까마중, 벼룩나물, 구릿대, 및 초피 씨로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물의 당뇨 치료 또는 예방; 비만 치료 또는 예방; 신경세포 보호; 또는 소화 및 흡수 조절; 또는 간질환, 또는 심장병 개선 또는 치료 의약 또는 건강기능식품 용도를 제공한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물 또는 식품 조성물은 천연 추출물을 이용하여 부작용이 적고 안전하며, 당뇨병 예방 및 개선, 식욕 억제, 항비만, 심장질환 개선, 소화 및 흡수 장애 개선, 신경세포 보호 작용 또는 간질환 치료 또는 개선 효과가 탁월하다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실험방법
1. TGR5 활성 측정
1) 세포배양
CHO-K1세포는 ATCC (Mnassas, VA)로부터 분양받았으며 10% (v/v) 소 태아 혈청(FBS), 100U/mL 페니실린, 및 100μg/mL 스트렙토마이신을 함유한 Ham's F-12K 배지에 배양하였다.
2) TGR5 활성 측정
hTGR5 plasmid DNA는 G-protein-coupled bile acid receptor 1[Homo sapiens](GPBAR1, TGR5), transfection-ready DNA로서 transcript variant 3는 Origene 사로부터 구입하였으며 vector는 4.5Kb의 pCMV6-XL5이며 insert인 GPBAR1(TGR5)은 1.4 Kb이었다. TGR5 플라스미드를 얻기 위해 일단 100μg/mL 앰피실린(ampicillin)이 포함된 형질전환 E. coli에 증식시킨 후 Invitrogen Purelink(High pure filter maxiprep kit)를 이용하여 플라스미드를 얻었다. TGR5 발현 플라스미드 (pCMV6-XL5/TGR5) 400ng/well을 CHO-K1에 NeonTM (Invitrogen, Cergy Pontoise, France)을 이용하여 트렌스펙션한 후 72시간 후에 1시간 동안 시료를 처리하여 반응시킨 후 HTRF-cAMP dynamin kit(Cisbio International)를 이용하여 cAMP를 측정하였다.
2. NCI-H716 세포를 이용한 GLP-1 분비자극 실험
1) 세포배양
인체 유래 세포주인 NCI-H716 cells는 ATCC (the American Type Culture Collection (Manassas, VA))으로부터 구입하였다. 세포는 10% 소 태아 혈청(FBS), 2mM L-글루타민, 100IU/ml 페니실린, 100/ml 스트렙토마이신이 함유된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다.
2) 시료의 GLP-1 분비 작용 측정 방법
NCI-H716 세포를 2 x 105 cells/mL의 농도로 96-well plate에 3일간 배양하였다. 실험 당일, 세포는 phosphated buffered saline(PBS)로 수세과정을 거친 뒤, Krebs-Ringer bicarbonate buffer (KRB, 128.8mmol/l NaCl, 4.8mmol/l KCl, 1.2mmol/l KH2PO4, 1.2mmol/l MgSO4, 2.5 mmol/l CaCl2, 5mmol/l NaHCO3, 및 10mmol/l HEPES, 0.2% BSA, pH 7.4)에서 시료를 첨가하여 37℃에서 1시간 배양하였다. 1시간 배양 후 GLP-1 분석을 위하여 상층액을 취하고(100μL), GLP-1 활성 ELISA 키트(EGLP-35K, Millipore)에 의하여 분석하였다. GLP-1의 농도는 공급된 GLP-1 표준물질에 준하여 (pmole/mL) 계산되었으며, 결과는 시료의 자극에 의해 분비된 GLP-1의 농도를 대조군의 자극에 의해 분비된 농도와 비교하여 fold of control로 나타내었다.
3) 세포내 칼슘 농도 변화 측정 방법
세포내 칼슘의 변화를 살펴보기 위하여 형광-기반 에세이(Fluorescence-based assay) 방법을 이용하였다. 96-well plate에 4.0 x104 cells/well의 농도로 세포를 분취한 후 48 시간 후 Molecular device에서 구입한 칼슘-5 에세이 키트(Calcium-5 assay kit)를 사용하여 Fluorometric imaging plate reader (FLIPRTM)인 Flexstation III (Molecular Devices Co., Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 세포내 Ca2+ 농도를 측정하였다. 즉 시료를 주입한 후 120초간 칼슘이 염색되어 나오는 형광을 파장 488nm (excitation)과 525 (emmision)에서 측정하였으며, 결과는 최대 형광치(maximum fluorescent value) - 최소 형광치(minimum fluorescent value) = 상대 형광 단위(delta relative fluorescent units (ΔRFU))로 자동으로 계산되었다.
특정 성분이 GPCRs를 활성화시키면 GPCRs과 연결된 G protein complex (Gα-gustducin, Gα-transtducin, Gα14, Gβ3, Gβ1, Gγ13)가 활성화되고, 이는 phospholipase 를 활성화시켜서 type Ⅲ IP3-receptor를 활성화시키게 되고, 세포질 (cytoplasm) 내에 Ca2+ 농도의 증가를 일으키므로 상기 세포내 Ca2+ ion 농도 변화를 측정하는 방법을 통하여 GPCRs의 활성화를 측정할 수 있을 것으로 판단하였다.
또한, TRP channels이 활성화되면 세포막 바깥의 칼슘 이온이 세포내로 들어오게 되므로, 세포내 Ca2+ ion 의 농도를 측정함으로써 TRP channels의 활성화를 측정할 수 있을 것으로 생각된다.
4) cAMP 측정 방법
NCI-H716 세포주는 1 x 106 cells/mL의 농도로 24-well culture plate에 분취한 후 3일간 배양하였다. 실험 당일 시료와 함께 KRB 버퍼 안에서 37℃ in 5% CO2 배양기에서 배양되었으며, 반응된 배지는 제거하고 세포는 KRB 버퍼로 3회 수세과정을 거친 뒤 0.1N HCl 0.5mL을 넣고 150 rpm, 상온에서 20분간 반응시켰다. 반응된 세포는 1000g에서 10분 동안 원심분리 과정을 거쳐 상층액을 얻고 바로 효소 면역분석법(EIA, enzyme immunoassay)을 이용한 cyclic AMP kit를 이용하였다.
5) 결과
GLP-1과 cAMP의 농도는 EIA 방법에 따라 실시하였다. 세포내 칼슘 농도 변화는 상대 형광 단위(△RFU)로 표현하였다. 모든 값은 triplicate로 실험한 3회 반복 실험으로 mean ± S.E.M (n=9)으로 나타내었다. *p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001 vs control (대조군)
<실시예 1> 개망초 추출물
1. 개망초 추출물의 제조
뿌리를 제외한 전초 개망초는 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japan)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 개망초 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 개망초 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
음성 대조군 1.000 ± 0.144
개망초(50% 에탄올 추출) 10 μg/mL 1.407 ± 0.096
50 μg/mL 1.717 ± 0.399*
100 μg/mL 3.071 ± 0.358***
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.180
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 1에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 개망초 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다. 이로부터 본 발명의 개망초 추출물이 항비만 효과, 간질환 치료 효과, 심장병 치료 효과, 또는 소화기 질환 치료 효과를 나타낼 수 있을 것으로 생각된다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI - H716 세포에서 개망초 50% 에탄올 추출물의 GLP -1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.088
개망초(50% 에탄올 추출) 500 μg/mL 2.320± 0.481*
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 개망초(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 500 μg/mL 농도에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다. 이로써 개망초 50% 에탄올 추출물은 장에 발현된 TGR5를 활성화시켜서 GLP-1을 분비시킴으로써 위장이 비워지는 속도 늦추고, 식욕 억제, 포만감 증진 등을 매개로 하여 비만 치료 효과를 기대할 수 있다. 또한 Neurodegenerative and cerebrovascular disorders의 치료, Neuroinflammation 치료, Neurogenesis 증진효과 등의 Neuroprotective and neurotrophic actions을 기대할 수 있다.
3-2. NCI - H716 세포에서 개망초 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
개망초(50% 에탄올 추출) 500 μg/mL 30.927 ± 1.050**
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 3에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 개망초 50% 에탄올 추출물 500μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 개망초 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
3-3. NCI - H716 세포에서 개망초 50% 에탄올 추출물의 세포내 cAMP 증가 효과
시료 농도 세포내 cAMP 농도 변화
대조군 1.000 ± 0.101
개망초(50% 에탄올 추출) 500 μg/mL 3.067 ± 0.601*
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 3.962 ± 0.084***
10 μM 7.665 ± 1.375**
30 μM 13.823 ± 1.260***
상기 표 4에 나타난 바와 같이 대조군에 비해서 개망초(50% 에탄올 추출물)은 세포내 cAMP 증가에 효과가 있는 것으로 나타났다. 즉, GPCRs의 신호전달 분자의 하나인 cAMP 농도를 측정하여 개망초 추출물이 GLP-1 분비 증가에 영향을 미칠 것으로 생각된다.
<실시예 2> 조릿대잎(산죽잎) 추출물
1. 산죽잎 추출물의 제조
산죽잎 (뿌리를 제외한 전초)은 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japna)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 산죽잎 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 산죽잎 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
산죽잎(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.877 ± 0.358***
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 5에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 산죽잎 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI - H716 세포에서 산죽잎 50% 에탄올 추출물의 GLP -1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
산죽잎(50% 에탄올 추출) 250 μg/mL 2.761± 0.314**
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 6에 나타난 바와 같이, 산죽잎(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 250 μg/mL 농도 에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다.
3-2. NCI - H716 세포에서 산죽잎 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
산죽잎(50% 에탄올 추출) 250 μg/mL 34.149 ± 2.740***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 7에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 산죽잎 50% 에탄올 추출물 250 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 산죽잎 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
<실시예 3> 편백열매 추출물
1. 편백열매 추출물의 제조
편백나무의 열매는 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japna)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 편백열매 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 편백열매 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05,*p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
편백열매(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.502± 0.148*
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 8에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 편백열매 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI - H716 세포에서 편백열매 50% 에탄올 추출물의 GLP -1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
편백열매(50% 에탄올 추출) 250 μg/mL 2.725 ± 0.039***
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 9에 나타난 바와 같이, 편백열매(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 250 μg/mL 농도 에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다. 이로써 편백열매 50% 에탄올 추출물은 장에 발현된 TGR5를 활성화시켜서 GLP-1을 분비시킴으로써 췌장에서의 포도당 의존적 인슐린 분비 자극 증진, 인슐린 유전자 발현 증진, 췌장 베타세포 증식 (proliferation) 증진 효과, 췌장 베타세포 생존 (survival) 증진 효과, 글루카곤 분비 저해 효과 등을 매개로 한 당뇨병 치료 효과를 기대할 수 있다.
3-2. NCI - H716 세포에서 편백열매 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
편백열매(50% 에탄올 추출) 250 μg/mL 59.252 ± 2.284***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 10에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 편백열매 50% 에탄올 추출물 250 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 편백열매 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
<실시예 4> 피마자 (아주까리) 잎 추출물
1.파마자 추출물의 제조
피마자의 잎은 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japan)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 피마자 잎 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 피마자 잎 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, *p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
피마자(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 3.714± 0.827**
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 11에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 피마자 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI - H716 세포에서 피마자 50% 에탄올 추출물의 GLP -1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
피마자(50% 에탄올 추출) 250 μg/mL 2.820 ± 0.133***
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 12에 나타난 바와 같이, 피마자(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 250 μg/mL 농도 에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다.
3-2. NCI - H716 세포에서 피마자 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
피마자(50% 에탄올 추출) 250 μg/mL 41.731 ± 2.162**
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 13에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 피마자 잎 50% 에탄올 추출물 250 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 피마자 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
<실시예 5> 까마중 추출물
1. 까마중 추출물의 제조
까마중의 잎과 열매를 같이 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japna)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 까마중 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 까마중 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, *p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
까마중(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 4.274± 1.045*
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 14에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 까마중 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI - H716 세포에서 까마중 50% 에탄올 추출물의 GLP -1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
까마중(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 2.469 ± 0.173
250 μg/mL 4.172 ± 0.085
500 μg/mL 5.860 ± 0.132
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 15에 나타난 바와 같이, 편백열매(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 250 μg/mL 농도 에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다.
3-2. NCI - H716 세포에서 까마중 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
까마중(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 19.520 ± 2.249***
250 μg/mL 60.531 ± 6.728***
500 μg/mL 120.347 ± 3.425***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 16에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 까마중 50% 에탄올 추출물 250 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 까마중 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
3-3. NCI - H716 세포에서 까마중 50% 에탄올 추출물의 세포내 cAMP 증가 효과
시료 농도 세포내 cAMP 농도 변화
대조군 1.000 ± 0.101
까마중(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.920 ± 0.084**
250 μg/mL 2.620 ± 0.229***
500 μg/mL 6.470 ± 0.622***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 3.962 ± 0.084***
10 μM 7.665 ± 1.375**
30 μM 13.823 ± 1.260***
상기 표 17에 나타난 바와 같이 대조군에 비해서 까마중 50% 에탄올 추출물)은 세포내 cAMP 증가에 효과가 있는 것으로 나타났다. 즉, GPCRs의 신호전달 분자의 하나인 cAMP 농도를 측정하여 까마중 추출물이 GLP-1 분비 증가에 영향을 미칠 것으로 생각된다.
<실시예 6> 벼룩나물 추출물
1. 벼룩나물 추출물의 제조
벼룩나물은 뿌리를 제외한 전초를 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japna)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 벼룩나물 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 벼룩나물 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, *p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
벼룩나물(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 2.618± 0.311***
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 18에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 벼룩나물 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI-H716 세포에서 벼룩나물 50% 에탄올 추출물의 GLP-1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
벼룩나물(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.548 ± 0.081***
250 μg/mL 2.014 ± 0.219***
500 μg/mL 5.934 ± 0.094***
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 19에 나타난 바와 같이, 벼룩나물(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 100, 250, 500 μg/mL 농도에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다.
3-2. NCI-H716 세포에서 벼룩나물 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
벼룩나물(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 18.885 ± 2.298**
250 μg/mL 24.795 ± 1.033***
500 μg/mL 38.703 ± 1.445***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 20에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 벼룩나물 50% 에탄올 추출물 100, 250, 500 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 벼룩나물 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
<실시예 7> 백지(구릿대) 추출물
1. 백지(구릿대) 추출물의 제조
백지는 뿌리를 제외한 전초를 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japna)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화한 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 백지(구릿대) 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 백지(구릿대) 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞선 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, *p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
백지(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 4.055 ± 0.4851***
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 21에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 백지(구릿대) 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI-H716 세포에서 백지(구릿대) 50% 에탄올 추출물의 GLP-1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
백지(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.258 ± 0.072***
250 μg/mL 1.811 ± 0.036***
500 μg/mL 2.023 ± 0.032***
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 22에 나타난 바와 같이, 백지(구릿대)(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 100, 250, 500 μg/mL 농도 에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다.
3-2. NCI - H716 세포에서 백지( 구릿대 ) 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
백지(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 15.319 ± 0.984*
250 μg/mL 10.814 ± 0.852
500 μg/mL 26.727 ± 1.625***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 23에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 백지(구릿대) 50% 에탄올 추출물 500 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 벼룩나물 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.
<실시예 8> 초피씨 추출물
1. 초피씨 추출물의 제조
초피씨 (초피나무 열매)는 산채원(전남 화순군 북면 송단길 370-114)에서 구매하여 동결 건조시킨 후 분쇄기로 분쇄하여 시료 1g당 50 중량% 에탄올 40 mL을 가하고 상온에서 3일 간 추출하였다. 추출액은 여과지(Advantec No. 2, 4, Japan)를 사용하여 2회 여과하고 회전감압 농축기(B-480, Buchi, Switzerland)로 농축한 후 다시 동결건조를 한 후 분말화 것을 본 실험의 시료로 사용하였다.
2. TGR5 활성 측정
2-1. CHO-K1 세포에 hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서의 초피씨 50% 에탄올 추출물의 TGR5 활성 증진 효과
TGR5 플라스미드로 트렌스펙션된 CHO-K1 세포의 배양액에 초피씨 50% 에탄올 추출물을 1시간 동안 첨가하였다. TGR5 활성은 앞서 방법에서 언급했듯이 루시퍼레이즈 측정에 의해 평가되었으며 모든 값은 means± SEM으로 나타내었다. n=9. *p<0.05, *p<0.01, ***p<0.001 vs control(대조군)
시료 농도 (fold of control)
대조군 1.000 ± 0.144
초피씨(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.945 ± 0.230**
Lithocholic acid (LCA) 0.1 μM 1.536 ± 0.130
1.0 μM 2.777 ± 0.303***
5.0 μM 4.506 ± 0.413***
상기 표 24에 나타난 바와 같이, hTGR5를 트렌스펙션시킨 세포에서 초피씨 50% 에탄올 추출물에 의해 TGR5 활성이 증가하였다.
3. GLP-1 분비 증진 활성 측정
3-1. NCI-H716 세포에서 초피씨 50% 에탄올 추출물의 GLP-1 분비효과
시료 농도 GLP-1(fold of control)
대조군 1.000 ± 0.038
초피씨(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 1.168 ± 0.177**
250 μg/mL 1.981 ± 0.102***
500 μg/mL 2.697 ± 0.069***
Lithocholic acid (LCA) 100 μg/mL 1.282 ± 0.087*
250 μg/mL 2.172 ± 0.187**
500 μg/mL 4.025 ± 0.413***
상기 표 25에 나타난 바와 같이, 초피씨(50% 에탄올 추출물)은 NCI-H716 세포에서 100, 250, 500 μg/mL 농도 에서 GLP-1 분비효과가 있음을 알 수 있었다.
3-2. NCI - H716 세포에서 초피씨 50% 에탄올 추출물의 세포내 Ca 2 + 농도 변화
시료 농도 세포내 Ca2 + 농도 변화(ΔRFU)
대조군 9.181 ± 0.632
초피씨(50% 에탄올 추출) 100 μg/mL 13.746 ± 0.681
250 μg/mL 16.362 ± 0.539**
500 μg/mL 28.990 ± 2.188***
Lithocholic acid (LCA) 5 μM 10.647 ± 0.366**
10 μM 19.895 ± 0.509***
30 μM 56.615 ± 2.626***
표 26에 나타난 결과에 따르면, 세포에서 초피씨 50% 에탄올 추출물 250, 500 μg/mL은 대조군에 비하여 유의적으로 세포내 칼슘 농도를 증가시키는 것으로 나타났다. 초피씨 50% 에탄올 추출물은 세포 내 칼슘 농도를 증가시킴으로서 GLP-1 분비를 증가시켰을 것으로 생각되었다.

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  15. 벼룩나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 약학 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 벼룩나물 추출물은 TGR 5 작용제(agonist) 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  17. 벼룩나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 식품 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 벼룩나물 추출물은 TGR 5 작용제(agonist) 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
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