KR101607503B1

KR101607503B1 - 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물

Info

Publication number: KR101607503B1
Application number: KR1020150110078A
Authority: KR
Inventors: 하성해; 하은숙
Original assignee: 주식회사 유니솔브
Priority date: 2015-08-04
Filing date: 2015-08-04
Publication date: 2016-03-30

Abstract

본 발명은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물에서 이용되는 아이스플랜트 캘러스 추출물은 우수한 DPPH 자유라디칼 소거 활성, 티로시나아제 저해 활성 및 엘라스타제 저해 활성을 나타내므로, 항산화, 미백 및/또는 주름 개선용 조성물로서 유용하게 사용할 수 있다. 또한, 상기 아이스플랜트 캘러스 추출물은 독성 및 부작용이 없어 화장료, 약학적 또는 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

Description

아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물{Composition for anti-oxidant, skin whitening and improving wrinkle comprising Mesembryanthemum Crystallinum callus extract}

본 발명은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 화장료, 약학적 또는 식품 조성물에 관한 것이다.

피부는 노화가 일차적으로 나타나는 기관으로, 피부의 노화는 유전적 인자, 자외선에 노출 정도, 물리·화학적 스트레스에 의한 각종 활성산소 및 산화성 자유 라디컬 생성 증가 등 여러 요인에 의해 진행 속도 및 정도가 다르게 나타난다.

구체적으로, 자외선은 파장 영역에 따라 UV-A, UV-B, UV-C로 나누어지는데, 이 중 UV-B 파장의 자외선은 다른 광선에 비해 1,000배 이상의 화상 위험이 있기 때문에 급성 노출 시 피부 홍반, 열, 부종, 통증, 소양증 등이 일어나고, 그 후 피부에 기미, 검버섯 등과 같은 색소침착이 발생한다(이해준 등, 2006, 고려인삼학회지, 30:194-198.). 또한, 자외선은 피부 세포 내 활성 산소를 형성하고, 이에 따라 생성된 각종 활성 산소는 세포 내 단백질, 지질 또는 핵산 등을 손상시키거나, 콜라겐의 합성량 감소, 멜라닌 합성량 증가 및 금속단백분해효소(Matrix metalloproteinases, MMPs) 유전자 발현을 증가시켜 콜라겐, 엘라스틴 등의 세포외 기질(extra cellular matrix; ECM)을 분해하여 피부암, 색소침착 등을 비롯한 여러 만성 피부 질환과 피부노화를 일으킨다(Masake et al., 1995, Biochem. Biophys. Res. Commun., 206:474-479.; Barber et al., 1998, J. Biol. Chem., 273:18891-18897.; Brenneisen et al., 1998, J. Biol. Chem., 273:5279-5287.; Yasui and Sakurai, 2000, Biochem. Biophys. Res. Commun., 269:131-136.). 이에 따라, 최근에는 피부노화의 주요 원인이 되는 자외선 또는 활성산소로부터 피부를 보호하면서, 미백, 주름개선 및 자외선 차단 등 다기능성을 지닌 복합기능성 소재의 개발이 진행되고 있다.

한편, 아이스플랜트(Mesembryanthemum Crystallinum; ice plant)는 석죽목의 석류풀과에 속하는 염생/다육식물로, 온도 및 기타 외부환경요인에 의한 스트레스를 받을 때 줄기와 잎에 에피더멀 블래더 셀(epidermal bladder cells)이 많이 형성되며, 이 부분에 염분(NaCl) 및 각종 영양성분들을 저장할 수 있다. 이러한 아이스플랜트는 이노시톨, 미네랄(칼슘, 칼륨, 마그네슘, 아연, 망간 등), 베타-카로틴, 판토텐산 및 폴리페놀 등의 영양성분들을 함유하고 있어 고지혈증 방지, 중성지방 축적 억제, 항산화, 콜라겐 생성, 고혈압 예방, 피부염 방지 등의 효과가 기대된다고 알려져 있다(일본 등록특허 제5648880호). 그러나, 아이스플랜트는 발아율이 낮고, 성장속도가 매우 느려 화장품 조성물로 이용하기에는 그 시간과 비용이 많이 소요되는 문제가 있다. 또한, 같은 종 내에서도 계절, 장소, 지리적 기후, 재배조건, 식물체의 부위 등에 따라 생산성 및 함유되어 있는 영양성분이 달라진다고만 알려져 있을 뿐, 어느 영양성분이 어떠한 특정 조건하에서 그 함량이 향상되는지 등에 대한 연구는 아직까지 보고된 바 없다.

이에 본 발명자들은 아이스플랜트의 활용 방안에 대하여 연구하던 중, 식물세포 배양법을 이용하여 아이스플랜트로부터 유도시킨 아이스플랜트 캘러스 추출물이 우수한 항산화, 미백 및 주름 개선 효과를 나타낸다는 사실을 발견함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및/또는 주름 개선용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 포함하는 항산화, 미백 및/또는 주름 개선 효과가 우수한 화장료, 약학적 또는 식품 조성물을 제공하는데 있다.

하나의 양태로서, 본 발명은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및/또는 주름 개선용 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "캘러스"는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포 덩어리로서 대부분 유세포로 되어 있으며, 식물체에서 잘라낸 조직을 다양한 배지, 바람직하게는 옥신(auxin) 또는 사이토키닌(cytokinin) 등의 생장 조절제를 함유한 조직배양용 배지에서 배양하거나, 식물체에 상처를 내거나 또는 식물체의 상구를 옥신으로 처리하였을 때 생기는 특수한 조직 또는 세포덩어리를 말한다.

본 발명의 유효성분인 아이스플랜트 캘러스는 아이스플랜트의 잎, 줄기, 뿌리 및 전초로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상, 바람직하게는 잎 및 줄기로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 부위로부터 유도된 캘러스라면 어느 것이나 사용 가능하다. 하나의 구체적 예로, 아이스플랜트 캘러스는 아이스플랜트의 잎과 줄기를 절취하여 유도시킨 캘러스일 수 있다.

본 발명에 있어서, 캘러스의 유도는 당업계에 공지된 통상의 방법을 통해 수행될 수 있다. 보다 구체적으로 캘러스의 유도는 식물체의 조직 또는 이의 절편체를 조직배양용 배지에서 배양하여 이루어진다. 상기 조직배양용 배지로는 MS(Murashige and Skoog, 1962) 배지, N6(Chu et al., 1975), B5(Gamborg et al., 1968), NN(Nitsch and Nitsch, 1967) 배지, WHITE 배지 등 다양한 식물의 기본 배지를 사용할 수 있다. 또한, 상기 조직배양용 배지는 식물 생장조절제가 첨가된 것을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 식물 생장조절제는 당업계에 공지된 물질을 이용할 수 있으나, 바람직하게는 2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid), 2,4,5-T(2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid), Dicamba(2-methoxy-3,6-dichlorobenzoic acid), IAA(indole-3-acetic acid), IBA(indole-3-butyric acid), MCPA(2-methyl-4-chlorophenoxyacetic acid), NAA(1-naphthylacetic acid), NOA(2-naphthyloxyacetic acid), Picloram(4-amino-2,5,6-trichloropicolinic acid) 등의 옥신(Auxin)류; BAP(6-benzylaminopurine), 2iP(N6-(2-isopentyl)adenine), Kinetin(6-furfurylaminopurine), Thidiazuron(1-phenyl-3-(1,2,3-thiadiazol-5-yl)urea), Zeatin(4-hydroxy-3-methyl-trans-2-butenylaminopurine) 등의 사이토키닌(Cytokinin)류 및 이의 유도체를 포함한다. 이외에도 조직배양용 배지에는 세포의 분화 및 증식에 작용하는 알카로이드류, 테르페노이드류, 카로테노이드류, 페놀류 화합물 및 천연 추출물 등을 추가로 첨가할 수 있다.

하나의 구체적 예로, 본 발명의 아이스플랜트 캘러스는 아이스플랜트의 잎 및 줄기를 채취하여 소독한 후 유기성분(예, 탄수화물, 아미노산 등), 무기양분(예, 질소, 인산, 칼륨 등) 및 식물 호르몬(예, 나프탈렌 아세트산, 옥신, 벤질아미노퓨린 등)이 함유된 한천 배지에 8 내지 15주 동안 배양하여 가지의 세포가 분열하여 세포 덩어리인 캘러스가 형성되면 배지로부터 캘러스를 분리하여 신선한 고체 배지 위에 치상한 다음 일정기간 간격으로 캘러스 상태를 관찰하며 계대 배양하여 수득할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 아이스플랜트 캘러스 추출물은 아이스플랜트 캘러스 자체 또는 아이스플랜트 캘러스 분말, 아이스플랜트 캘러스를 일반적인 소독제(detergent 등)를 이용하여 화학적인 방법 또는 프렌치 프레스(french press) 방법 등의 물리적 방법으로 파쇄하여 얻은 파쇄물, 또는 당업계에 알려진 통상적인 세포배양 방법으로 세포를 배양한 후 초고속 원심분리 등의 물리적 방법을 이용하여 펠렛을 제거한 나머지 배양액을 당업계에 알려진 통상의 방법에 의하여 추출하거나 이로부터 분리된 항산화, 미백 및/또는 주름 개선 활성을 갖는 물질을 말한다. 상기 아이스플랜트 캘러스 추출물은 통상의 방법에 의하여 추출한 추출액뿐만 아니라 건조분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 말한다.

본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물은 물 또는 유기용매를 사용하여 추출할 수 있는데, 추출한 액은 액체 형태로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 이때 상기 유기용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매이며, 추출물의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 추출물의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 열수 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등이 있다.

또한, 상기 아이스플랜트 캘러스 추출물은 상기 추출용매에 의하여 추출하는 방법 이외에 통상적인 정제과정을 거쳐서도 수득할 수 있다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제방법을 통해 얻어진 분획을 통하여서도 아이스플랜트 캘러스 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거활성을 나타내고, 티로시나아제 활성 및 엘라스타제 활성을 억제하는 효과를 나타낸다.

또한, 본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거 활성, 티로시나아제 저해 활성 및 엘라스타제 활성이 아이스플랜트 추출물에 비하여 현저히 향상된 효과를 나타낸다.

따라서, 본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물은 항산화, 미백 및/또는 주름 개선 용도로 유용하게 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 항산화는 대사과정을 통해 생성되는 활성산소의 생성을 억제하여 조직세포의 노화, 퇴행성 질환 등의 유발을 예방하는 것을 의미한다. 여기서, 상기 퇴행성 질환은 관상동맥질환, 피부암, 위염, 간염, 장염, 뇌졸중, 관절염, 다발성 경화증, 루푸스, 황반변성, 당뇨병, 알츠하이머, 파킨스병 및 크론병 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환일 수 있다. 그러나, 특별히 이로 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 상기 미백은 자외선 또는 활성산소에 의해 합성량이 증가된 멜라닌에 의해 야기되는 색소침착을 예방 또는 개선하는 것을 의미한다. 여기서, 상기 색소침착은 기미, 주근깨, 검버섯(흑자), 잡티, 흑색점, 밀크커피반점, 베커모만, 오타모반 및 후천양측오타모양모반으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질환일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 주름 개선은 주름의 예방, 주름의 제거, 자외선 또는 활성산소로 인한 피부손상의 완화, 개선, 예방 또는 치료 등을 포함하는 것으로 해석된다.

본 발명은 아이스플랜트 자체가 아니라 아이스플랜트 캘러스를 이용함으로써 별도의 재배과정 없이도 아이스플랜트의 유용물질을 얻을 수 있어 생산비용이 절감되는 장점이 있다.

본 발명의 조성물은 유효성분인 아이스플랜트 캘러스 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.

본 발명의 하나의 구체적 용도로서, 본 발명의 상기 조성물은 화장료 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 사용되는 경우, 유효성분으로서 아이스플랜트 캘러스 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 추가적으로 포함할 수 있다. 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 시트타입의 팩 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤, 마사지 크림 또는 시트타입의 팩 제형으로 제조될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림, 겔 또는 시트타입의 팩인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있고, 특히 시트타입의 팩인 경우에는 추가적으로 천연라텍스, 폴리부텐, 폴리아크릴산 에스테르, 알긴산나트륨, 아세트산 비닐 등과 같은 점착제를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 하나의 구체적 용도로서, 본 발명의 상기 조성물은 약학적 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 약학적 조성물로 사용되는 경우, 유효성분으로서 아이스플랜트 캘러스 추출물 이외에 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구 투여, 보다 바람직하게는 도포에 의한 국부 투여(topical application) 방식으로 적용된다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다. 또한 외용제인 경우에는 성인 기준으로 1.0 내지 3.0 ml의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 하는 것이 좋다. 다만, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 당분야의 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이 때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑시르제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 구체적 용도로서, 본 발명의 상기 조성물은 식품 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 식품 조성물로 사용되는 경우, 유효성분으로서 아이스플랜트 캘러스 추출물 이외에 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 추가로 포함할 수 있다.

상기 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 식물 유래 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 상술한 성분 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.

한편, 본 발명의 아이스플랜트 캘러스 추출물은 천연물질로서 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 특히 상기한 바와 같이 화장료, 약학적 또는 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 아이스플랜트 캘러스 추출물은 우수한 DPPH 자유라디칼 소거 활성, 티로시나아제 저해 활성 및 엘라스타제 저해 활성을 나타내므로, 항산화, 미백 및/또는 주름 개선용 조성물로서 유용하게 사용할 수 있다. 또한, 상기 아이스플랜트 캘러스 추출물은 독성 및 부작용이 없어 화장료, 약학적 또는 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

도 1은 아이스플랜트로부터 유도한 캘러스이다.
도 2는 아이스플랜트 캘러스 추출물 및 아이스플랜트 추출물의 DPPH 자유라디칼 소거 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 아이스플랜트 캘러스 추출물 및 아이스플랜트 추출물의 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 아이스플랜트 캘러스 추출물 및 아이스플랜트 추출물의 엘라스타제(elastase) 저해 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예 등에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예 등은 오직 본 발명을 더욱 상세히 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예 등에 의해 한정되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 아이스플랜트 캘러스 유도 및 추출물 제조

1-1. 캘러스 유도용 배양배지 제조

수크로오스(Sucrose) 30g/L 및 비타민이 포함된 MS(Murashige & Skoog Medium) 기본 액체배지에 생장 조절제로서 옥신(Auxin) 0.3 mg/L와 6-BA(6-Benzylaminopurine) 3 mg/L을 첨가하여 캘러스 유도용 배양배지를 제그조하였다.

1-2. 아이스플랜트 캘러스 유도

아이스플랜트의 잎과 줄기를 채취하여 0.5~1 cm 크기로 절편한 다음, 70% 에탄올에 1분 동안 침지시킨 후 멸균수로 세척하였다. 그 다음 상기 세척한 아이스플랜트의 잎과 줄기를 25% 락스 용액(Ynhan-Clorox. Korea)에 20분 동안 진탕하여 표면을 살균한 후 살균한 아이스플랜트의 잎과 줄기를 멸균수로 3회 세척하였다. 그 다음 상기 살균된 아이스플랜트의 잎과 줄기를 상기 1-1의 배양배지에 접종한 후 28℃의 온도가 유지되는 배양기에서 12주간 동안 암 배양 하여 캘러스(callus)를 유도하였다. 그 캘러스를 도 1에 나타내었다.

1-3. 아이스플랜트 캘러스 추출물 제조

상기 1-2에서 유도한 캘러스를 MS 기본배지에 접종한 후 28℃의 온도가 유지되는 공기 부양형 생물반응기에서 12주 동안 암상태로 배양하였다. 그 다음 상기 배양된 캘러스를 면 필터로 여과한 뒤, 필터 상에 있는 여과물을 원심 분리하여 캘러스를 수득하였다. 그 후 상기 배양액을 제거시킨 캘러스 10g을 100 mL의 30% 부틸렌글리콜에 침지하여 40℃ 에서 24시간 동안 추출한 다음, 수득된 추출물을 여과지(Advantes, No.2)에 여과하여 아이스플랜트 캘러스 추출물을 제조하였다.

비교예 1: 아이스플랜트 추출물 제조

아이스플랜트의 잎과 줄기를 채취하여 믹서기로 분쇄하여 분말화한 다음, 상기 아이스플랜트 분말 10g을 100 mL의 30% 부틸렌글리콜에 침지하여 40℃ 에서 24시간 동안 추출한 다음, 수득된 추출물을 여과지(Advantes, No.2)에 여과하여 아이스플랜트 추출물을 제조하였다.

시험예 1: 아이스플랜트 캘러스 추출물의 DPPH 자유라디칼 소거 활성 측정

상기 실시예 1의 아이스플랜트 캘러스 추출물의 항산화 활성 측정을 위한 1,1-디페닐-2-피크릴-히드라질(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) 자유라디칼 소거활성은 DPPH에 대한 전자공여 활성으로 확인하였다. 구체적으로, 증류수를 이용하여 상기 실시예 1의 아이스플랜트 캘러스 추출물을 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5, 5 및 10 중량% 농도로 희석시켜 준비하였다. 그 다음 상기 다양한 농도로 희석된 아이스플랜트 캘러스 추출물 70㎕와 DPPH 용액(5mg/100ml 메탄올) 100㎕을 각각 96웰 플레이트에 분주한 후 상온에서 20분 동안 반응시켰다. 그 다음 ELISA 리더를 이용하여 520nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식 1을 이용하여 DPPH 자유라디칼 소거 활성(%)을 산출하였다. 이때, 무첨가구는 아이스플랜트 캘러스 추출물 대신 증류수를 사용하였고, 비교군으로는 아이스플랜트 캘러스 추출물 대신 비교예 1의 아이스플랜트 추출물을 사용하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

[수학식 1]

DPPH 자유라디칼 소거 활성(%) = {1-(시료첨가구의 흡광도/무첨가구의 흡광도)} × 100

도 2에서 보듯이, 아이스플랜트 캘러스 추출물은 농도 의존적으로 DPPH 자유라디칼 소거활성을 나타내었고, 아이스플랜트 추출물에 비하여 현저히 우수한 DPPH 자유라디칼 소거활성을 나타내는 것을 확인하였다.

특히, 0.156 중량% 농도의 아이스플랜트 캘러스 추출물의 DPPH 자유라디칼 소거활성은 비교군인 아이스플랜트 추출물에 비하여 약 5배 높은 활성을 나타냄을 확인하였다.

시험예 2: 아이스플랜트 캘러스 추출물의 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성 측정

상기 실시예 1의 아이스플랜트 캘러스 추출물의 미백 활성을 다음과 같이 티로시나아제 저해 활성을 측정함으로써 평가하였다. 구체적으로, 증류수를 이용하여 상기 실시예 1의 아이스플랜트 캘러스 추출물을 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5, 5 및 10 중량% 농도로 희석시켜 준비하였다. 그 다음 상기 다양한 농도로 희석된 아이스플랜트 캘러스 추출물 100㎕에 0.2 M 인산나트륨 용액(sodium phosphate buffer, pH 6.8) 50㎕, 2 mM L-티로신 50㎕ 및 버섯 티로시나아제(1000 U/ml) 10㎕를 넣고 혼합한 후, 37℃에서 20분 동안 반응시켰다. 그 다음 상기 반응물을 ELISA 리더를 이용하여 490nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식 2을 이용하여 티로시나아제 저해 활성(%)을 산출하였다. 이때, 무첨가구는 아이스플랜트 캘러스 추출물 대신 증류수를 사용하였고, 비교군으로는 아이스플랜트 캘러스 추출물 대신 비교예 1의 아이스플랜트 추출물을 사용하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

[수학식 2]

티로시나아제 저해 활성(%) = {1-(시료첨가구의 흡광도/무첨가구의 흡광도)} × 100

도 3에서 보듯이, 아이스플랜트 캘러스 추출물은 농도 의존적으로 티로시나아제 저해 활성을 나타내었고, 아이스플랜트 추출물에 비하여 현저히 우수한 티로시나아제 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다.

특히, 1.25 중량% 이상 농도의 아이스플랜트 캘러스 추출물의 티로시나아제 저해 활성은 비교군인 아이스플랜트 추출물에 비하여 약 1.2 내지 1.3배 높은 활성을 나타냄을 확인하였다.

시험예 3: 아이스플랜트 캘러스 추출물의 엘라스타제(elastase) 저해 활성 측정

상기 실시예 1의 아이스플랜트 캘러스 추출물의 주름 개선 효과는 다음과 같은 엘라스타제 저해 활성 측정으로 평가하였다. 구체적으로, 0.2M Tris-Cl 용액(pH 8.0)를 이용하여 상기 실시예 1의 아이스플랜트 캘러스 추출물을 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5, 5 및 10 중량% 농도로 희석하여 준비하였다. 또한, 0.2M Tris-Cl 용액(pH 8.0) 1ml에 엘라스타제(elastase) 기질인 N-숙시닐-(Ala)3-ρ-나이트로아닐라이드(N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide) 4 mg을 넣어 8.8 mM의 기질용액을 제조하였고, 0.2M Tris-Cl 용액(pH 8.0)를 이용하여 돼지 췌장 엘라스타제(Porcine pancreatic elastase, PPE)를 10 ㎍/ml의 농도로 희석하여 효소용액을 제조하여 준비하였다.

그 다음 상기 다양한 농도로 희석된 아이스플랜트 캘러스 추출물 60㎕에 8.8 mM의 기질용액 20㎕ 및 10 ㎍/ml의 효소용액 20㎕를 넣고 혼합한 후 25℃에서 15분 동안 반응시켰다. 그 다음 상기 반응물을 ELISA 리더를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식 3을 이용하여 엘라스타제 저해 활성(%)을 산출하였다. 이때, 대조군은 아이스플랜트 캘러스 추출물 대신 증류수를 사용하였고, 비교군으로는 아이스플랜트 캘러스 추출물 대신 비교예 1의 아이스플랜트 추출물을 사용하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.

[수학식 3]

엘라스타아제 저해 활성(%) = {1-(B-C)/(A-D) } × 100

A : 시료 대신 증류수를 넣고 효소를 첨가하여 반응 한 후의 흡광도

B : 효소를 첨가하여 반응 한 후의 시료의 흡광도

C : 효소 대신 증류수를 첨가하여 반응 한 후의 시료의 흡광도

D : 시료와 효소 대신 각각 증류수를 첨가해 반응 한 후의 흡광도

도 4에서 보듯이, 아이스플랜트 캘러스 추출물은 농도 의존적으로 엘라스타제 저해 활성을 나타내었고, 아이스플랜트 추출물에 비하여 현저히 우수한 엘라스타제 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다.

특히, 0.156 중량% 농도의 아이스플랜트 캘러스 추출물의 엘라스타제 저해 활성은 비교군인 아이스플랜트 추출물에 비하여 약 1.7배 높은 활성을 나타냄을 확인하였다.

Claims

아이스플랜트(Mesembryanthemum Crystallinum) 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 또는 주름 개선용 화장료 조성물로서,
상기 항산화 또는 주름 개선용 조성물은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 0.156 내지 10 중량%의 양으로 포함하고,
상기 미백 개선용 조성물은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 0.313 내지 10 중량%의 양으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
아이스플랜트(Mesembryanthemum Crystallinum) 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 또는 주름 개선용 식품 조성물로서,
상기 항산화 또는 주름 개선용 조성물은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 0.156 내지 10 중량%의 양으로 포함하고,
상기 미백 개선용 조성물은 아이스플랜트 캘러스 추출물을 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 0.313 내지 10 중량%의 양으로 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
제1항에 있어서, 상기 아이스플랜트 캘러스가 아이스플랜트의 잎, 줄기, 뿌리 및 전초로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 부위로부터 유래된 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 아이스플랜트 캘러스가 아이스플랜트의 잎, 줄기, 뿌리 및 전초로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 부위로부터 유래된 것을 특징으로 하는 항산화, 미백 또는 주름 개선용 식품 조성물.