KR101378260B1

KR101378260B1 - 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 억제제

Info

Publication number: KR101378260B1
Application number: KR1020117023570A
Authority: KR
Inventors: 니콜라스 자크스 프랑코이스 드레이푸스; 샌드라 앤 필라; 아네트 마가레타 요한슨; 티어리 제이. 마스?린; 지케쉬 아빈드 샤; 에릭 조지 트로믹자크; 매그너스 빌헬름 월터
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2009-04-09
Filing date: 2010-04-06
Publication date: 2014-03-27
Also published as: TW201103908A; BRPI1014382A2; MX2011010658A; AR075988A1; CA2758251C; JP2012523416A; AU2010234610B2; KR20110123287A; ES2446644T3; US8173821B2; AU2010234610A1; WO2010117979A2; CN102388036A; CA2758251A1; EA201171230A1; WO2010117979A3; EP2417124A2; EP2417124B1; US20100261762A1

Abstract

하기 화학식 I의 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 억제제, 그의 용도, 및 그의 제조 방법이 기술된다.
<화학식 I>

Description

세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 억제제{SEROTONIN AND NOREPINEPHRINE REUPTAKE INHIBITOR}

세로토닌 및 노르에피네프린은 하행 통증 경로에서의 내인성 진통계의 조절인자로 분류되어 있으며, 세로토닌 노르에피네프린 재흡수 억제제 (SNRI)는 당뇨 말초 신경병증성 통증 및 섬유근통과 같은 만성 통증 이상의 치료에 효능을 나타낸 바 있다 (문헌 [Kroenke et al. Pharmacotherapy of chronic pain : a synthesis of recommendations from systematic reviews, General Hospital Psychiatry 31 (2009) 206-219] (온라인 http://www.sciencedirect.com, 2009년 3월 30일 검색)).

WO 2008/023258호는 통증을 포함한 광범위한 장애의 치료를 위한 모노아민 재흡수 억제제 (세로토닌 및/또는 노르에피네프린 재흡수 억제제)로서의 소정의 3-(피리드-3-일옥시메틸)-피페리딘 화합물에 대해 기술하고 있다.

US 20020151712호는 통증의 치료를 포함한 다양한 징후를 위한 니코틴성 아세틸콜린 수용체 리간드로서의 소정의 3-피롤리디닐-옥시-3'-피리딜 에테르 화합물에 대해 기술하고 있다.

본 발명은 인용된 선행 참고문헌에 비해 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수에 있어서 더 큰 효능 및 더 높은 선택성을 가지는 추가적인 SNRI 화합물을 제공한다. 또한, 소정의 본 발명 화합물은 인용된 선행 참고문헌에 비해 개선된 세로토닌 대 노르에피네프린 재흡수 억제제 활성의 균형을 제공한다. 즉, 선행의 이중 활성 화합물들이 통상적으로 노르에피네프린에 비해 더 큰 세로토닌 재흡수 억제제 활성을 가지는 데에 반해, 소정의 본 발명에서 청구되는 화합물은 세로토닌 및 노르에피네프린 양자의 재흡수 억제에 대하여 동일한 수준에 상당히 더 가까운 이중 활성을 가진다. 또한, 본 발명의 화합물은 감소된 산 불안정성(acid lability)을 제공하는데, 이는 일반적으로 약리학적 노출의 개선은 물론 제제화의 용이성을 위한 장점이 된다. 또한, 소정의 본 발명 화합물은 개선된 대사 분해 프로필을 제공하는데, 이는 일반적으로 개선된 치료적 노출을 위한 장점이 되며, 환자 군집 내에서의 약리학적 다양성의 감소에 유리할 수 있다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:

<화학식 I>

(상기 식에서, R¹은 n-프로필, 이소부틸, (C₃-C₄)시클로알킬, 및 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-로 구성되는 군으로부터 선택되며;

n은 1 또는 2이고;

각 R²는 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 트리플루오로메톡시, 메틸아미노, 시클로프로필아미노 및 t-부틸카르보닐아미노로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되되, 단 n이 2인 경우, R² 중 1개 이상은 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 또는 에톡시임).

본 발명은 또한 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그의 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제, 담체, 또는 희석제와 함께 포함하는, 만성 통증 치료에 적합한 제약 조성물을 제공한다. 다른 실시양태는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그의 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제, 담체, 또는 희석제와 함께 포함하는, 당뇨 말초 신경병증성 통증, 섬유근통, 섬유근통 연관 통증, 및 염증성 통증, 예를 들자면 다발근통, 류마티스 관절염 또는 골관절염 중 어느 것의 치료에 적합한 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 유효량을 해당 치료를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서의 만성 통증의 치료 방법을 제공한다. 이와 같은 본 발명 측면의 구체적인 실시양태에는 당뇨 말초 신경병증성 통증의 치료 방법, 섬유근통의 치료 방법, 섬유근통 연관 통증의 치료 방법, 및/또는 염증성 통증, 예를 들자면 다발근통, 류마티스 관절염 또는 골관절염의 치료 방법이 포함되며, 각 방법은 개별적으로 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 유효량을 해당 치료를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다. 이와 같은 본 발명 측면의 구체적인 일 실시양태에서, 상기 포유동물은 인간이다.

본 발명은 또한 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 이와 같은 측면 내에서, 본 발명은 포유동물, 특히 인간에서의 만성 통증의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 이와 같은 본 발명 측면의 다른 실시양태에는 하기 중 어느 것이 포함된다: 만성 통증의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 당뇨 말초 신경병증성 통증의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 섬유근통의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 섬유근통 연관 통증의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 염증성 통증의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 다발근통의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 골관절염의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.

본 발명의 또 다른 측면은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 만성 통증 치료용 의약 제조에서의 용도를 제공한다. 이와 같은 측면의 구체적인 실시양태는 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 당뇨 말초 신경병증성 통증 치료용 의약 제조에서의 용도; 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 섬유근통 치료용 의약 제조에서의 용도; 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 섬유근통 연관 통증 치료용 의약 제조에서의 용도; 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 염증성 통증 치료용 의약 제조에서의 용도; 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 다발근통 치료용 의약 제조에서의 용도; 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 류마티스 관절염 치료용 의약 제조에서의 용도; 및 화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 골관절염 치료용 의약 제조에서의 용도가 포함된다.

본 발명의 화합물은 염기이며, 그에 따라 수많은 유기 및 무기 산과 반응하여 제약상 허용되는 염을 형성하므로, 본 발명에는 화학식 I 화합물의 제약상 허용되는 염이 포함된다. 본원에서 사용될 때의 "제약상 허용되는 염"이라는 용어는 살아있는 생물체에 대하여 실질적으로 비-독성인 화학식 I 화합물의 모든 염을 지칭한다. 그와 같은 염에는 업계 숙련자에게 알려져 있는 문헌 [Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977)]에 열거되어 있는 것들이 포함된다.

지속적인 통증은 신체 구조 또는 내장에서의 만성적인 병리학적 과정에 의해, 또는 말초 또는 중추 신경계의 장기적이며 때로는 영구적인 기능장애에 의해, 또는 이들 모두에 의해 야기된다. 지속적인 염증, 조직 손상, 또는 신경 손상은 중추성 감작으로도 알려져 있는 과정인 척수 내에서의 배각 뉴런(dorsal horn neuron)의 과다흥분을 초래한다. 중추성 감작은 배각 뉴런의 반응성 변경, 수용야(receptive field)의 팽창, 및 통증 전달 경로 내에서의 뉴런 연결의 가소성을 특징으로 한다. 이러한 과정들은 상행 통증 경로 및 극상 부위 내에서의 뉴런 활성의 증가, 및/또는 내인성인 척추 및 극상 하행 통증 억제 기작의 기능장애/탈억제로 이어진다.

중추 감작 및 탈억제는 자발적이며 지속적인 통증의 진행 상태는 물론, 정상적으로는 비-통증성인 기계적 또는 열적 자극 (무해자극통증)의 통증 자극 (통각과민) 또는 통증 경험으로의 민감성의 증가를 야기할 수 있다 (문헌 [C.J. Woolf, Pain: Moving from Symptom Control toward Mchanism - Specific Pharmacologic Management, Annals of Internal Medicine, 140, 441-451 (2004)]). 이러한 과정은 신경병증성 통증 (당뇨병성 신경병증, AIDS와 관련된 감염 신경병증성 통증, 비-외과적 손목 터널 증후군, 포진-후 신경통, 경부, 흉부 및 요천골 신경근병증, 삼차 신경통, 복합 국소 통증 증후군 I 및 II, 화학요법-유도 신경병증성 통증, 그리고 척수 손상, 다발 경화증 또는 뇌졸중-관련 통증을 포함한 중추 신경병증성 통증 증후군 포함), 염증성 통증 (다발근통, 류마티스 관절염 및 골관절염 포함), 및 비-신경병증성 비-염증성 통증 (만성 피로 증후군, 신경근병증을 동반하지 않는 만성 등 통증, 섬유근통, 만성 긴장 유형의 두통, 염증성 장 장애, 과민성 대장 증후군, 편타 손상, 간질성 방광염을 포함한 만성 골반 통증, 및 턱관절 장애 (TMJD) 포함)을 포함한 몇 가지 유형의 지속성이거나 만성인 통증의 원인이 되는 것으로 추정된다.

내인성 통증 억제 경로에서의 탈억제, 그리고 세로토닌과 노르에피네프린의 불균형 사이의 상관관계에 대한 인식은 인간의 만성 통증 상태 치료에서의 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 억제제의 성공적인 평가로 이어졌다. 따라서, 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 모두의 이중 활성 억제제로서, 화학식 I의 화합물은 포유동물에서의 당뇨 말초 신경병증성 통증 및 섬유근통을 포함한 만성 통증의 치료에 유용하다. 바람직한 일 실시양태에서, 상기 포유동물은 인간이다. 또한, 화학식 I의 화합물은 우울 장애 (주요 우울 장애 포함), 불안 장애 (범 불안 장애 포함), 및 실금 (예컨대 절박, 스트레스 및 혼합-유형 실금)의 치료에 유용하다 (문헌 [Orjales, et al., Journal of Medicinal Chemistry, 46(25), 5512-5532 (2003)]; [Fish, et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 17, 2022-2025 (2007)]).

본원에서 사용되는 약어는 하기와 같이 정의된다:

"HPLC"는 고-압 액체 크로마토그래피를 의미한다.

"MS (ES+)"는 전기분무 이온화를 사용하는 질량 분광법을 의미한다.

"MTBE"는 메틸 t-부틸 에테르를 의미한다.

"NMR"은 핵 자기 공명을 의미한다.

"THF"는 테트라히드로퓨란을 의미한다.

"EtOAc"는 에틸 아세테이트를 의미한다.

"MeOH"는 메탄올을 의미한다.

"DMSO"는 디메틸 술폭시드를 의미한다.

"SCX 컬럼"은 강력 양이온 교환 컬럼을 의미한다.

"Pd(OAc)₂"는 팔라듐(II) 아세테이트를 의미한다.

"DMF"는 디메틸포름아미드를 의미한다.

"n-BuLi"은 n-부틸리튬을 의미한다.

"MeOAc"는 메틸 아세테이트를 의미한다.

"(S)-Ru(OAc)₂T-BINAP"는 디아세테이토[(S)-(-)-2,2'-비스(디-p-톨릴포스피노)-1,1'-비나프틸]루테늄(II)를 의미한다.

"DMA"는 디메틸아세트아미드를 의미한다.

"XRD"는 X-선 회절을 의미한다.

"TOCSY"는 총 상관 분광법(Total Correlation Spectroscopy)을 의미한다.

"SERT"는 세로토닌 전달체를 의미한다.

"hSERT"는 인간 세로토닌 전달체를 의미한다.

"Net"는 노르에피네프린 전달체를 의미한다.

"hNet"는 인간 노르에피네프린 전달체를 의미한다.

"DAT"는 도파민 전달체를 의미한다.

"hDAT"는 인간 도파민 전달체를 의미한다.

"HEPES"는 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산을 의미한다.

"SEM"은 평균의 표준 오차를 의미한다.

"PCA"는 파라-클로로암페타민을 의미한다.

"α-MMT"는 알파-메틸-m-티로신을 의미한다.

"IC₅₀"은 최대 절반 억제 농도(half maximal inhibitory concentration)를 의미한다.

"ED₅₀"은 유효 투여량(effective dose)을 의미한다.

본 발명의 바람직한 화합물은 하기인 화합물이다:

1) R¹이 n-프로필 또는 이소부틸 (즉, 2-메틸프로필-)임;

2) R¹이 이소부틸 (즉, 2-메틸프로필-)임;

3) R¹이 n-프로필임;

4) R¹이 (C₃-C₄)시클로알킬 또는 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-임;

5) R¹이 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸임;

6) R¹이 시클로부틸 또는 시클로부틸메틸임;

7) 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 및 트리플루오로메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

8) 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

9) 각 R²가 클로로, 메틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

10) 각 R²가 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

11) R¹이 이소부틸이고, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 및 트리플루오로메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

12) R¹이 이소부틸이고, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

13) R¹이 이소부틸이고, 각 R²가 클로로, 메틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

14) R¹이 이소부틸이고, 각 R²가 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

15) R¹이 n-프로필이고, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 및 트리플루오로메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

16) R¹이 n-프로필이고, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

17) R¹이 n-프로필이고, 각 R²가 클로로, 메틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

18) R¹이 n-프로필이고, 각 R²가 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

19) R¹이 (C₃-C₄)시클로알킬 또는 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-이고, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 및 트리플루오로메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

20) R¹이 (C₃-C₄)시클로알킬 또는 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-이고, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

21) R¹이 (C₃-C₄)시클로알킬 또는 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-이고, 각 R²가 클로로, 메틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

22) R¹이 (C₃-C₄)시클로알킬 또는 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

23) R¹이 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 및 트리플루오로메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

24) R¹이 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

25) R¹이 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 클로로, 메틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

26) R¹이 시클로프로필 또는 시클로프로필메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

27) R¹이 시클로부틸 또는 시클로부틸메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 및 트리플루오로메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

28) R¹이 시클로부틸 또는 시클로부틸메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

29) R¹이 시클로부틸 또는 시클로부틸메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 클로로, 메틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

30) R¹이 시클로부틸 또는 시클로부틸메틸이고, n이 1 또는 2이며, 각 R²가 메틸, 에틸, 및 메톡시로부터 독립적으로 선택됨;

31) 상기 언급된 실시양태 7 내지 30 각각에 있어서, 다른 바람직한 화합물은 n이 2이고, R² 치환체가 피리딜 2 및 6 위치에 치환되어 있는 것들임.

본 발명의 특히 바람직한 일 화합물은 (3S)-3-((S)1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 예를 들자면 실시예 19, 19A, 및 19B에 예시되어 있는 바와 같은 L- 및/또는 D-타르트레이트 염이다.

화학식 I의 화합물에는 2개의 키랄 중심이 존재하며, 그 각각은 하기의 "*"로 표시된다:

따라서, 화학식 I의 화합물은 라세미체는 물론 부분입체이성질체 및 거울상이성질체와 같은 다양한 입체이성질 배치로 존재할 수 있다.

화합물의 활성은 피롤리딘 고리 3-위치의 키랄 중심이 화학식 I에서의 요건에 따라 "S" 절대 배치로 존재하는 화합물에서 상당히 향상된다. 화합물은 부가 사슬의 1'-위치에 "R" 절대 배치, "S" 절대 배치, 또는 이들의 소정 혼합물 중 어느 것인 키랄 중심을 가질 수도 있다:

일반적으로는, 입체화학적으로 순수한 화합물이 라세미체에 비해 바람직하다. 일반적으로, 1종의 입체이성질체가 다른 1종에 비해 향상된 활성을 가진다. 바람직한 화합물은 양 키랄 중심이 "S" 절대 배치인 것들이다:

화학식 I 화합물의 구체적인 입체이성질체 및 거울상이성질체들은 문헌 [J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981], 및 [E.L. Eliel and S.H. Wilen, "Stereochemistry of Organic Compounds", (Wiley-Interscience 1994)], 그리고 1998년 4월 29일에 공개된 유럽 특허 출원 제EP-A-838448호에 개시되어 있는 것들과 같이 잘 알려져 있는 기술 및 공정들을 활용하여 업계 일반의 숙련자에 의해 제조될 수 있다. 분리의 예에는 재결정화 기술 또는 키랄 크로마토그래피가 포함된다.

본 발명의 화합물은 업계에 잘 알려져 인식되어 있는 방법에 의해 하기의 합성 반응식에 따라 제조될 수 있다. 이들 반응식의 단계들을 위한 적합한 반응 조건에 대해서는 업계에 잘 알려져 있으며, 용매 및 공동-반응물의 적절한 대체는 업계 숙련자의 영역이다. 마찬가지로, 업계 숙련자라면, 필요에 따라 또는 원할 경우, 잘 알려져 있는 다양한 기술에 의해 합성 중간물들이 단리 및/또는 정제될 수 있으며, 종종 약간의 정제로 또는 정제 없이 다양한 중간물들을 직접 이후의 합성 단계에 사용하는 것이 가능할 것이라는 것을 알고 있을 것이다. 또한, 숙련 기술자라면, 상황에 따라서는 잔기가 도입되는 순서가 중요하지 않다는 것을 알고 있을 것이다. 본 발명 화합물을 제조하는 데에 필요한 단계들의 구체적인 순서는, 숙련 화학자라면 잘 알고 있듯이, 합성되는 구체적인 화합물, 개시 화합물, 및 선택된 치환체들의 상대적인 불안정성에 따라 달라진다. 다르게 표시되지 않는 한, 치환체 R¹ 및 R²는 전기에 정의된 바와 같으며, 모든 반응물들은 업계에 잘 알려져 인식되어 있다. Pg는 업계에 잘 알려져 있는 것들과 같은 질소 보호 기이다 (문헌 [Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., Chapter 7, John Wiley and Sons Inc., (2007)] 참조).

<반응식 1>

개시 알콜 (a)를 디메틸 술폭시드와 같은 적합한 용매 중에서 승온으로 적합한 염기 예컨대 수소화 나트륨 및 적절하게 치환된 플루오르화 아릴과 반응시켜 에테르 (b)를 제공한다. 다르게는, 알콜 (a)를 표준 미츠노부(Mitsunobu) 조건하에서 적절하게 치환된 피리딘과 반응시켜 에테르 (b)를 제공할 수도 있다. 다음에, 숙련 기술자에게 잘 알려져 있는 조건하에서 에테르 (b)를 탈보호시킴으로써, 화학식 I의 화합물을 제공한다 (예를 들면 전기한 문헌 [Greene and Wuts] 참조). 다음에는, 생성되는 아민을 메탄올과 같은 적합한 용매 중에서 제약상 허용되는 산, 예컨대 L-타르타르산, D-타르타르산, 또는 HCl로 처리함으로써, 화학식 I 화합물의 제약상 허용되는 염을 제공할 수 있다.

필수적인 알콜 (a)는 하기 반응식에 기술되어 있는 바와 같이 제조될 수 있는데, 여기서 R¹, R² 및 Pg는 전기에 정의된 바와 같다.

<반응식 2>

N-보호된 피롤리딘-3-카르복실산 (c)를 표준 아미드 결합 조건하에서 N,O-디메틸-히드록실아민과 반응시켜 웨인레브(Weinreb) 아미드 (d)를 제공한다. 이와 같은 아미드를 적합한 유기금속 친핵체와 반응시킴으로써, 케톤 (e)를 제공한다. 메탄올 중 나트륨 보로히드리드를 사용하는 것과 같은 표준 조건하에서 케톤 (e)를 환원시킴으로써, 알콜 (a)를 제공한다. 다르게는, N-보호된 2-피롤리딘온 (f)를 테트라히드로퓨란과 같은 적합한 용매 중에서 적합한 염기, 예컨대 리튬 비스(트리메틸실릴) 아미드로 처리하고, 생성되는 음이온을 알데히드와 반응시킴으로써, 부가 생성물 (g)를 제공할 수도 있다. 아미드 잔기를 예컨대 승온에서의 테트라히드로퓨란 중 붕소-메틸 술피드와의 반응에 의해 표준 조건하에서 환원시킴으로써, 알콜 (a)를 제공한다.

6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시 피롤리딘 유도체로의 6-메톡시 기의 도입이 표준 친핵성 방향족 치환 조건하에서의 메톡시드에 의한 클로로의 친핵성 치환에 의해, 상응하는 6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시 유도체의 자유 아민 상에서 이루어짐으로써, 반응식 3에 나타낸 바와 같이 원하는 화합물을 제공할 수 있다.

<반응식 3>

하기의 제조예 및 실시예에서, (S-믹스(mix))라는 지칭은 피롤리딘 고리 3-위치의 키랄 중심이 "S" 절대 배치에 있으며 제2 키랄 중심 (상기에서 1'로 지칭)이 "S"와 "R"의 혼합물인 중간물 또는 화학식 I의 화합물을 나타내는 것으로 간주된다. (S-1)이라는 지칭은 크로마토그래피에 의해 거울상이성질체의 혼합물이 분리될 때, 해당 중간물 또는 화학식 I의 화합물이 제1 용리 거울상이성질체이거나, 또는 제1 용리 거울상이성질체로부터 유래하는 것 중 어느 것이라는 것을 나타내는 것으로 간주된다. 마찬가지로, (S-2)라는 지칭은 크로마토그래피에 의해 거울상이성질체의 혼합물이 분리될 때, 해당 중간물 또는 화학식 I의 화합물이 제2 용리 거울상이성질체이거나, 또는 제2 용리 거울상이성질체로부터 유래하는 것 중 어느 것이라는 것을 나타내는 것으로 간주된다. (D1)이라는 지칭은 크로마토그래피에 의해 부분입체이성질체가 분리될 때, 제1 용리 부분입체이성질체이거나, 또는 그로부터 유래하는 중간물 또는 화학식 I의 화합물을 나타내는 것으로 간주된다. 마찬가지로, (D2)라는 지칭은 크로마토그래피에 의해 부분입체이성질체가 분리될 때, 제2 용리 부분입체이성질체이거나, 또는 그로부터 유래하는 중간물 또는 화학식 I의 화합물을 나타내는 것으로 간주된다. (D1-E1) 및 (D1-E2)라는 지칭은 각각 제1-용리 부분입체이성질체의 제1 및 제2 용리 거울상이성질체이거나, 또는 그로부터 유래하는 중간물 또는 화학식 I의 화합물을 나타내는 것으로 간주된다. 마찬가지로, (D2-E1) 및 (D2-E2)라는 지칭은 각각 제2-용리 부분입체이성질체의 제1 및 제2 용리 거울상이성질체이거나, 또는 그로부터 유래하는 중간물 또는 화학식 I의 화합물을 나타내는 것으로 간주된다. 이러한 일반 규칙들의 예외는 1' 탄소 배치의 역전으로 이어지는 알콜 (a)를 사용하여 미츠노부 반응이 이루어졌을 경우이다. 그러한 실시예들에서는, (S-1)으로 지칭되는 개시 알콜이 (S-2) 생성물을 초래하며, (D1) 개시 알콜이 (D2) 생성물을 초래한다.

하기의 제조예 및 실시예들은 본 발명 화합물의 합성에 유용한 방법을 예시한다. 제조예 및 실시예에 예시되어 있는 많은 화합물들의 명칭은 켐드로우 울트라(ChemDraw Ultra) 10.0을 사용하여 작성된 구조로부터 제공된다.

[ 실시예 ]

제조예 1: (S)-3-(3-메틸부타노일)피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르

(S)-3-( 메톡시(메틸)카르바모일 )- 피롤리딘 -1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르

디클로로메탄 (5.81 L) 중 (S)-N-tert-부톡시카르보닐피롤리딘-3-카르복실산 (500 g, 2.32 mol)의 교반 용액에 1,1'-카르보닐디이미다졸 (414.33 g, 2.56 mol)을 일부씩 첨가하고, 질소하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. N,O-디-메틸히드록실아민 히드로클로리드 (253.04 g, 2.56 mol)을 첨가하고, 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 1 N HCl을 사용하여 반응을 급랭하고, 에틸 아세테이트 (2×)를 사용하여 추출하였다. 포화 NaHCO₃ 및 염수를 사용하여 합쳐진 유기물질을 세척하였다. 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하여 535 g (89 %)의 표제 화합물을 제공하였다.

웨인레브 아미드에의 그리그나드(Grignard)의 부가

질소하에 -7 ℃로 유지하면서, THF (400 mL) 중 (S)-3-(메톡시(메틸)카르바모일)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (21.86 g, 84.62 mmol)의 교반 용액에 THF (50 mL) 중 브롬화 이소부틸마그네슘 (테트라히드로퓨란 (THF) 중 2.0 M, 63.47 mL, 126.94 mmol)의 용액을 적가하였다. -5 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 반응액을 실온으로 가온시키고, 계속하여 밤새 교반하였다. 포화 수성 염화 암모늄을 첨가한 후, 에틸 아세테이트 (2×)로 추출하였다. 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 헥산 중 에틸 아세테이트 (EtOAc)를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 잔류물을 정제하여 (0-20 % 구배), 21.6 g (99.6 %)의 표제 화합물을 제공하였다.

제조예 2-5의 화합물은 제조예 1에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조하였다.

조

제조예 5: (S)-3-시클로부틸카르보닐-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르

질소하에서, THF (1 mL) 중 마그네슘 (0.960 g, 39.5 mmol)과 요오드 (0.100 g, 0.395 mmol)의 교반 혼합물에 수소화 디이소부틸알루미늄 (톨루엔 중 1 M, 0.790 mL, 0.790 mmol)을 첨가하였다. THF (10 mL) 중 브롬화 시클로부틸 (8.00 g, 59.2 mmol)의 용액을 적가하고, 60 ℃에서 2시간 동안 반응액을 교반함으로써, 모든 마그네슘을 소비하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, THF (50 mL) 중 (S)-3-(메톡시(메틸)카르보닐)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (10.2 g, 39.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 1 M 수성 시트르산을 사용하여 급랭한 후, EtOAc로 추출하였다. 물 및 포화 수성 NaCl을 사용하여 유기 층을 세척하고, 건조하여 (Na₂SO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 헥산 중 EtOAc를 사용하여 용리하는 (0-50 % 구배) 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 잔류물을 정제함으로써, 표제 화합물 (5.30 g, 53 %)을 수득하였다.

제조예 6: (3S)-3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 이성질체 1 (S-1) 및 이성질체 2 (S-2)

메탄올 (500 mL) 중 (S)-3-(3-메틸부타노일)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (21.6 g, 84.6 mmol)의 용액에 나트륨 보로히드리드 (15.2 g, 423 mmol)를 일부씩 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 다시 등가의 나트륨 보로히드리드 (3.04 g, 84.6 mmol)를 첨가하였다. 다시 2시간 동안 교반하고, 부피가 절반이 되도록 메탄올을 증발시킨 후, 염수를 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기 상을 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 0.2 % 디에틸메틸아민을 포함하는 10 % MeOH/CO₂를 사용하여 용리하는 초 임계 유체 크로마토그래피 (AD-H 컬럼)에 의해 부분입체이성질체를 분리함으로써, 제1 용리 이성질체로서의 (3S)-3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 이성질체 1 (S-1) (8.2 g, 38 %) 및 제2 용리 이성질체로서의 (3S)-3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 이성질체 2 (S-2) (8.9 g, 41 %)를 제공하였다.

제조예 7: (3S)-3-(1-히드록시-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 이성질체 1 (S-1) 및 이성질체 2 (S-2)

메탄올 (200 mL) 중 (S)-3-부타노일-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (7.0 g, 29.0 mmol)의 용액에 나트륨 보로히드리드 (5.19 g, 145 mmol)을 일부씩 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 추가 나트륨 보로히드리드 (1.4 g, 39 mmol)을 첨가한 후, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 부피가 절반이 되도록 메탄올을 증발시킨 후, 염수를 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합쳐진 유기 상을 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 헥산 중 5 % 이소프로필아민을 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 부분입체이성질체를 분리함으로써, 제1 용리 이성질체로서의 (3S)-3-(1-히드록시-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 이성질체 1 (S-1) (2.6 g, 37 %) 및 제2 용리 이성질체로서의 (3S)-3-(1-히드록시-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 이성질체 2 (S-2) (1.8 g, 26 %)를 제공하였다.

제조예 8-9의 화합물은 제조예 8에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

제조예 10: (3S)-3-(시클로부틸-히드록시-메틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-믹스)

질소 분위기하에 0 ℃로 유지하면서, MeOH (105 mL) 중 (S)-3-시클로부탄카르보닐-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (5.30 g, 20.9 mmol)의 교반 용액에 나트륨 보로히드리드 (1.19 g, 31.4 mmol)을 첨가하였다. 실온으로 가온하면서 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. MeOH를 농축하고, 디클로로메탄으로 희석한 후, 포화 수성 NaHCO₃, 물 및 염수를 사용하여 유기물질을 세척하였다. 건조하여 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축함으로써, 부분입체이성질체의 혼합물 (S-믹스)로서의 표제 화합물 (4.4 g, 82 %)을 산출하였다.

제조예 11: (3S)-3-(1-히드록시-3-부테닐)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, (S-믹스)

제조예 11의 화합물은 (3S)-3-(부트-3-에노닐)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 사용하여 제조예 10에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

제조예 12: 3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 부분입체이성질체 1 (D1)

3-(1-히드록시-3- 메틸 -부틸)-2-옥소- 피롤리딘 -1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르, 부분입체이성질체 1 ( D1 ) 및 부분입체이성질체 2 ( D2 )

-78 ℃에서, THF (450 mL) 중 2-옥소-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (25.0 g, 134 mmol)의 용액에 리튬 비스(트리메틸 실릴)-아미드 (THF 중 1.0 M, 148 mL, 148 mmol)을 첨가하고, 질소하에서 2시간 동안 교반하였다. 3-메틸-부티르알데히드 (17.5 mL, 162 mmol)을 첨가한 후, 이어서 붕소 트리플루오리드 디에틸 에테르에이트 (20.5 mL, 162 mmol)을 첨가하고, -78 ℃에서 2시간 동안 교반을 계속하였다. 혼합물을 실온으로 가온한 후, 포화 수성 염화 암모늄 (250 mL)를 사용하여 급랭하고, EtOAc (3×)로 추출하였다. 합쳐진 유기물질을 건조하고 (Na₂SO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 조 생성물을 2개의 동일 분량으로 분할하고, 헥산 중 0-40 % EtOAc를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 각 분량을 정제함으로써, 제1 용리 이성질체로서의 3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-2-옥소-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 부분입체이성질체 1 (12.5 g, 34 %) (D1)

및 제2 용리 이성질체로서의 3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-2-옥소-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 부분입체이성질체 2 (3.87 g, 11 %) (D2)

을 제공하였다.

아미드 환원

질소하에서 유지하면서, THF (220 mL) 중 3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-2-옥소-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D1) (12.5 g, 45.9 mmol)의 용액에 붕소-메틸 술피드 착물 (THF 중 2.0 M, 68.8 mL, 138 mmol)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 2시간 동안 환류시킨 후, 포화 수성 염화 암모늄 (200 mL)을 사용하여 급랭하였다. 에틸 아세테이트 (2×)를 사용하여 추출하였다. 합쳐진 유기물질을 H₂O (100 mL), 5 % 시트르산 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 건조하여 (Na₂SO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 헥산 중 0-40 % EtOAc를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 잔류물을 정제함으로써, 10.7 g (91 %)의 표제 화합물을 산출하였다.

제조예 13: (3S)-3-(2-시클로프로필-1-히드록시에틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (S-믹스)

질소하에 0 ℃에서, THF (20 mL) 중 (3S)-tert-부틸 3-(1-히드록시부트-3-에닐)피롤리딘-1-카르복실레이트 (S-믹스) (3.0 g, 12.43 mmol) 및 새로 제조한 디아조메탄 (50 mL, 디에틸 에테르 중 약 23.8 mmol)의 교반 용액에 팔라듐(II) 아세테이트 (50.0 mg; 0.22 mmol)을 첨가하였다 (주의: 강력한 기체 발생). 0 ℃에서 10분 동안 교반하였다. 실온으로 가온한 후, 물에 붓고, 에틸 아세테이트 (3×)로 추출하였다. 합쳐진 유기물질을 물 및 염수로 세척하였다. 건조하여 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축하였다. 헥산 중 0-100 % 에틸 아세테이트를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 잔류물을 적용함으로써, 2.9 g (91 %)의 표제 화합물을 산출하였다.

제조예 14: 3-(2-시클로부틸-1-히드록시에틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르

tert -부틸 3-(2-( 디에톡시포스포릴 )아세틸) 피롤리딘 -1- 카르복실레이트

질소하에 -78 ℃에서 15분에 걸쳐, THF (194 mL) 중 디에틸 메틸포스포네이트 (23.6 g, 155 mmol)의 용액에 부틸 리튬 (98.0 mL, 157 mmol)을 적가하였다. THF 중 (S)-3-(메톡시(메틸)카르바모일)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (5.0 g, 19.4 mmol)을 첨가하고, -78 ℃에서 약 3.5시간 동안 교반하였다. 물에 붓고, 에틸 아세테이트 (3×)로 추출하였다. 합쳐진 유기물질을 물 및 염수로 세척하였다. 건조하여 (MgSO₄), 여과한 후, 농축하였다. 클로로포름 중 0-50 % 아세톤을 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피 후, 이어서 디클로로메탄 중 0-30 % 아세톤을 사용하여 용리하는 또 다른 실리카 겔 크로마토그래피에 잔류물을 적용함으로써, 3.15 g (47 %)의 원하는 화합물을 산출하였다.

3-(2- 시클로부틸리덴아세틸 ) 피롤리딘 -1- 카르복실산 tert 부틸 에스테르

질소하에서 5 ℃로 유지하면서, 에탄올 (45 mL) 중 3-(2-(디에톡시포스포릴)-아세틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (3.14 g, 8.99 mmol)과 수산화 칼륨 (656 mg, 11.7 mmol)의 교반 혼합물에 시클로부탄온 (0.738 mL; 9.89 mmol)을 첨가하였다. 실온으로 가온한 후, 3시간 동안 교반하였다. 감압하에서 농축한 후, 잔류물을 헥산 중 20 % 에틸 아세테이트를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 적용함으로써, 0.85 g (36 %)의 원하는 조 화합물을 산출하고, 그것을 추가적인 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

3-(2- 시클로부틸아세틸 ) 피롤리딘 -1- 카르복실산 tert 부틸 에스테르

에틸 아세테이트 (25 mL) 중 3-(2-시클로부틸리덴아세틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (850 mg, 3.20 mmol)에 탄소 상 팔라듐 (50 mg, 촉매촉진)을 첨가하고, 질소하에서 실온으로 교반하였다. 수소 기체 벌룬(balloon)을 설치하고, 밤새 교반하였다. 셀라이트(celite) 상에서 반응액을 여과하고, 에틸 아세테이트로 세정한 후, 농축하여 건조함으로써, 391 mg (46 %)의 원하는 화합물을 산출하였다.

환원

0 ℃에서, 메탄올 (7.31 mL) 중 3-(2-시클로부틸아세틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (391 mg, 1.46 mmol)에 나트륨 보로히드리드 (71.9 mg, 1.90 mmol)을 일부씩 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반하였다. 감압하에서 농축하고, 물로 희석한 후, 에틸 아세테이트 (3×)로 추출하였다. 합쳐진 유기물질을 포화 수성 NaHCO₃, 물 및 염수로 세척하였다. 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 감압하에서 농축함으로써, 0.39 g (97 %)의 표제 화합물을 산출하였다.

제조예 15: (3S)-3-[2-시클로프로필-1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 이성질체 1 (S-1) 및 이성질체 2 (S-2)

질소 분위기하에 유지하면서, (3S)-3-(2-시클로프로필-1-히드록시-에틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-믹스) (31.5 g, 123.36 mmol)과 DMSO (11.8 mL)의 혼합물에 실온에서 수소화 나트륨 (60 %, 94.0 mg, 2.35 mmol)을 천천히 첨가하였다. 10분 동안 교반한 다음, 2-클로로-5-플루오로피콜린 (359 mg, 2.47 mmol)을 첨가하였다. 60 ℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 냉각하고, 물에 부은 후, 에틸 아세테이트 (3×)로 추출하였다. 합쳐진 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하였다. 건조하여 (MgSO₄), 여과한 후, 농축하였다. 헥산 중 20 % 에틸 아세테이트를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 조 잔류물을 정제함으로써, 제1 용리 이성질체로서의 (3S)-3-[2-시클로프로필-1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 이성질체 1 (S-1) (99 mg, 22 %) 및 제2 용리 이성질체로서의 (3S)-3-[2-시클로프로필-1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 이성질체 2 (S-2) (80 mg, 18 %)를 산출하였다.

제조예 16-23의 화합물은 제조예 15에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

제조예 24: 3-[1-(6-클로로-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 이성질체 1 (D2E1) 및 이성질체 2 (D2E2)

미츠노부 반응

실온에서 10분 동안, 톨루엔 (10 mL) 중 3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D1) (600 mg, 2.33 mmol) 및 2-클로로-5-히드록시-피리딘 (0.451 g, 3.50 mmol)의 용액을 통하여 질소를 폭기하였다. 트리-n-부틸포스파인 (0.872 mL, 3.50 mmol) 첨가 후, 이어서 아조디카르복실산 디피페리디드 (0.882 g, 3.50 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70 ℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 추가적인 3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D1) (600 mg, 2.33 mmol), 트리-n-부틸포스파인 (0.872 mL, 3.50 mmol) 및 아조디카르복실산 디피페리디드 (0.882 g, 3.50 mmol)를 첨가하였다. 70 ℃에서 3시간 동안 교반을 계속하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 포화 수성 NaHCO₃에 부었다. 에틸 아세테이트 (2×)로 추출하고, 유기 추출물을 합친 후, 건조하고 (Na₂SO₄), 여과하여, 농축하였다. 헥산 중 0-20 % 에틸 아세테이트를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 조 잔류물을 정제함으로써, 180 mg의 키랄 분리용 3-[1-(6-클로로-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D2)를 산출하였다.

키랄 크로마토그래피 분리

0.2 % 디에틸메틸아민을 포함하는 12 % 이소프로필아민/CO₂를 사용하여 용리하는 OD-H 컬럼 상 초 임계 유체 크로마토그래피를 사용하여 3-[1-(6-클로로-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D2)의 이성질체 혼합물을 분리함으로써, 제1 용리 이성질체로서의 3-[1-(6-클로로-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D2E1) (80.6 mg, 9.4 %) 및 제2 용리 이성질체로서의 3-[1-(6-클로로-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (D2E2) (81.2 mg, 9.4 %)을 수득하였다.

제조예 25-28의 화합물은 제조예 24에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

제조예 29: (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2)

수소화 나트륨 (60 %, 121.2 mg, 3.03 mmol), (3S)-3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2) (0.65 g, 2.53 mmol) 및 DMSO (10.0 mL)를 혼합하였다. 혼합물을 질소 분위기하에서 실온으로 1시간 동안 교반하였다. 2-클로로-5-플루오로피콜린 (2.21 g, 15.2 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 70 ℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 염수를 사용하여 반응을 급랭한 후, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 합쳐, 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 농축하였다. 헥산 중 0-20 % 에틸 아세테이트 후, 이어서 헥산 중 20 % 에틸 아세테이트를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 조 잔류물을 정제함으로써, 0.58 g (60 %)의 표제 화합물을 산출하였다.

제조예 30: 6-메톡시-2-메틸-피리딘-3-올

질소하에서 실온으로 유지하면서, 디클로로메탄 (100 mL) 중 2-메톡시-6-메틸-5-피리딜보론산 (5.0 g, 30 mmol)의 교반 혼합물에 과산화 수소 (7.69 mL, 89.8 mmol)를 첨가하였다. 주변 온도에서 밤새 교반한 후, 물을 첨가하고, 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 상을 합쳐, 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 농축함으로써, 2.6 g (62 %)의 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 1: (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-1)

탈보호

메톡시벤젠 (1.0 mL) 및 디클로로메탄 (2.0 mL) 중 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-1) (99.0 mg, 0.260 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1.51 g, 1.0 mL, 13.2 mmol)을 첨가하였다. 질소하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 사전-패킹된 SCX 컬럼상에 바로 혼합물을 적재하고, CH₂Cl₂, 이어서 CH₃OH를 사용하여 세정하였다. 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 용리하고, 감압하에서 농축함으로써, 58 mg (79 %)의 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘 (S-1)을 생성시켰다.

염 형성

메탄올 (2 mL) 중 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘 (S-1) (58.0 mg, 0.207 mmol)의 용액에 L-타르타르산 (31.0 mg, 0.207 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 농축한 후, 진공 오븐에서 건조함으로써, 89.0 mg (99 %)의 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 2-8의 화합물은 실시예 1에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

실시예 9: (3S)-3-(3-메틸-1-(2-메틸-6-메틸아미노-3-피리딜옥시)부틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

Pd -촉매촉진 결합 반응

5 mL 마이크로파 용기에 톨루엔 중 Pd(OAc)₂ (2.93 mg, 0.013 mmol)의 10 mg/mL 용액 0.294 mL를 충전하였다. 질소 분위기하에서, 톨루엔 중 데구사(Degussa) 사의 cataCXium@PtB [(N-페닐-2-(디-t-부틸포스피노)피롤] (7.50 mg, 0.026 mmol)의 10 mg/mL 용액 0.756 mL 및 나트륨 tert-부톡시드 (30.2 mg, 0.314 mmol)을 첨가하였다. 톨루엔 중 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2) (0.100 g, 0.261 mmol)의 10 mg/mL 용액 1 mL 및 메틸아민 (0.392 mL, 0.785 mmol)을 첨가하였다. 150 ℃로 1.5시간 동안 반응 혼합물을 가열하였다. Si-SH 수지를 첨가하고, 2시간 동안 교반하여 Pd를 포획하였다. 조 혼합물을 사전-패킹된 SCX-컬럼 상에 붓고, 메탄올로 세척한 후, 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 생성물을 방출시키고, 농축하였다. 조 생성물을 추가적인 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

탈보호

실온에서 1시간 동안, (3S)-3-[1-(2-메틸-6-메틸아미노-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2)와 수성 HCl (4 M, 0.261 mL, 1.04 mmol)의 혼합물을 교반하였다. 완전 전환 후, 혼합물을 농축하여, 디클로로메탄에 용해시키고, 혼합물을 사전-패킹된 SCX 컬럼에 적재하였다. 디클로로메탄, 이어서 메탄올로 세척하였다. 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 생성물을 방출시키고, 감압하에서 농축하였다. 역상 크로마토그래피 (수중 0.01 M 암모늄포르메이트 중 17-43 % 구배 아세토니트릴, 85 mL/분, 8분 동안, C¹⁸ ODB XBridge 컬럼, 30×75 mm, 5 ㎛)에 의해 조 잔류물을 정제함으로써, 9 mg (12 %)의 (3S)-3-[1-(2-메틸-6-메틸아미노-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘 (S-2)를 생성시켰다.

아세토니트릴/메탄올 (5:1)의 혼합물에 정제된 물질을 용해시킴으로써, L-타르트레이트 염을 제조하였다. L-타르타르산 (1.05 당량)의 1 N 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 동결건조하여, 고체로서 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 10: (3S)-3-[1-(6-시클로프로필아미노-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘, L-트르트레이트 (S-2)

표제 화합물은 실시예 9에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

실시예 11: (3S)-3-(1-(6-에톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

Pd -촉매촉진 결합 반응

5 mL 마이크로파 용기에 (S)-(-)-2,2'-비스(디-p-톨릴포스피노)-1,1'-비나프틸 (15.1 mg, 0.0222 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (10.2 mg, 0.0111 mmol) 및 톨루엔 (2 mL)를 충전하였다. 톨루엔 (1 mL) 중 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2) (85.0 mg, 0.222 mmol)의 용액, 이어서 나트륨 에톡시드 (0.216 mg, 0.666 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 140 ℃에서 30분 동안 마이크로파 조건하에 조사하였다. Si-SH 수지를 첨가하고, 2시간 동안 교반하여 Pd를 포획하였다. 조 혼합물을 SCX-컬럼 상에 붓고, 메탄올로 세척한 후, 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 생성물 방출하고, 농축하였다. 조 생성물을 추가적인 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

탈보호

실온에서 1시간 동안, (3S)-3-[1-(6-에톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2)와 수성 HCl (디옥산 중 4 N, 0.261 mL, 1.04 mmol)의 혼합물을 교반하였다. 완전 전환 후, 혼합물을 농축하여, 잔류물을 클로로메탄에 용해시키고, 사전-패킹된 SCX 컬럼에 적재하였다. 디클로로메탄, 이어서 메탄올을 사용하여 컬럼을 세척하였다. 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 생성물을 방출하고, 감압하에서 농축하였다. 역상 크로마토그래피 (수중 0.01 M 암모늄포르메이트 중 34-60 % 구배 아세토니트릴, 85 mL/분, 8분 동안, C¹⁸ ODB XBridge 컬럼, 30×75 mm, 5 ㎛)에 의해 조 잔류물을 정제함으로써, 13.4 mg (21 %)의 (3S)-3-[1-(6-에톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘 (S-2)를 생성시켰다.

실시예 12: (3S)-3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)부틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

DMSO (10 mL)에 (3S)-3-(1-히드록시-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2) (0.400 g, 1.64 mmol) 및 수소화 나트륨 (60 %, 132 mg, 3.29 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기하에서 유지하면서 15분 동안 교반하였다. 6-클로로-3-플루오로피콜린 (1.44 g, 9.86 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 70 ℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 염수에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 추출물을 합쳐, 건조하고 (MgSO₄), 여과한 후, 농축하였다. 조 잔류물을 추가적인 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

실시예 1에서와 본질적으로 동일하게 탈보호 및 L-타르트레이트 형성을 수행함으로써, 표제 화합물 (384 mg, 56 %)을 산출하였다.

실시예 13-16의 화합물은 실시예 12에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

실시예 17: (3S)-3-(1-(6-브로모-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

반응 용기에 DMF (3 mL) 중 (3S)-3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2) (100 mg, 0.389 mmol)의 용액을 충전하였다. 3-플루오로-6-브로모-3-피리딘 (90 mg, 0.051 mmol), 18-크라운-6 (10.3 mg, 0.039 mmol) 및 나트륨 tert-부톡시드 (68.2 mg, 0.699 mmol)을 첨가하였다. LC/MS가 원하는 생성물로의 전환을 나타낼 때까지 수시간 동안 80 ℃로 반응액을 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 추가적인 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.

실시예 11에서와 본질적으로 동일하게 탈보호 및 염 형성을 수행함으로써, 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 18: (3S)-3-[1-(6-클로로-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

실시예 17에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 표제 화합물이 제조될 수 있다.

실시예 19: (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

실온에서 10분 동안, 톨루엔 (10 mL) 중 (3S)-3-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-1) (0.5 g, 1.94 mmol) 및 6-메톡시-2-메틸-피리딘-3-올 (0.41 g, 2.91 mmol)의 용액을 통하여 질소를 퍼징하였다. 트리-n-부틸포스파인 (0.73 mL, 2.91 mmol), 이어서 아조디카르복실산 디피페리디드 (0.59 mg, 2.91 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70 ℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 포화 수성 NaHCO₃ (50 mL)에 부었다. 에틸 아세테이트 (2×)로 추출하고, 유기 추출물을 합쳐, 건조하고 (Na₂SO₄), 여과한 후, 농축하였다. 헥산 중 0-20 % 에틸 아세테이트를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 조 잔류물을 정제함으로써, (3S)-3-[1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-2) (101 mg, 13 %)를 산출하였다. 실시예 1에서와 본질적으로 동일하게 탈보호 및 L-타르트레이트 형성을 수행함으로써, 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 19A: (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘, (S-2). 합성 대안

(S)-1-벤질-3-(3- 메틸부타노일 ) 피롤리딘 -2-온:

자석 교반기, 열전쌍, 첨가 깔때기 및 N₂ 유입구가 장착된 5 L, 3-목 원형저 플라스크에 디이소프로필아민 (176 mL, 1265 mmol) 및 2-메틸테트라히드로퓨란 (500 mL)를 충전하였다. 용액을 교반하면서 ~-10 ℃로 냉각한 후 (염/얼음 배스), 온도를 0 ℃ 이하로 유지하면서 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 504 mL, 1259 mmol)의 용액을 적가하였다. 2-메틸테트라히드로퓨란 (25 mL)를 사용하여 첨가 깔때기를 세정하였다. ~-5 ℃에서 약 15분 동안 용액을 교반하였다. 2-Me-THF (500 mL) 중 N-벤질-2-피롤리딘온 (100.8 g, 575.2 mmol), 에틸 이소발레레이트 (90 g, 690 mmol)의 용액을 온도가 5 ℃ 이하에서 유지되는 속도로 적가함으로써, 황색의 슬러리를 제공하였다. 반응 혼합물을 -5 ℃에서 약 1시간 동안 교반하고, 헵탄 (1 L)을 적가한 후, -5 ℃에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 중간 프릿화(medium fritted) 깔때기를 통한 여과에 의해 고체를 수집하고, 2-메틸테트라히드로퓨란/헵탄의 1:1 용액 (250 mL), 이어서 헵탄 (250 mL)을 사용하여 세척한 후, 고체가 분말처럼 될 때까지 공기 건조하였다. 황색 고체를 자석 교반기가 장착된 5 L, 3-목 원형저 플라스크에 넣고, MTBE (1 L) 및 10 % 시트르산 (1 L)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 약 1시간 동안 교반하여, 균질한 혼합물을 제공하였다. 층을 분리하고, H₂O (2×500 mL), 이어서 염수 (500 mL)를 사용하여 유기 층을 세척하였다. Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 여과하여, 농축함으로써, 오렌지색의 오일로서 조 중간물 (128 g)을 생성시켰다. 쾨겔러(Kuegelrohr) 증류에 의해 조 물질로부터 주요 불순물을 제거함으로써, 짙은 오렌지색의 오일로서 원하는 중간물 (117.4 g, 452.7 mmol, 78.7 % 수율)을 산출하였다.

(R)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3- 메틸부틸 ) 피롤리딘 -2-온:

400 mL 스테인리스강 오토클레이브 용기에 IPA (250 mL) 중 (S)-1-벤질-3-(3-메틸부타노일)피롤리딘-2-온 (20 g, 77.12 mmol)의 용액, 이어서 35 % HCl (재료 대비 6 %, 4.63 mmol, M = 36.4 g/mol, d = 1.18 g/mL, 0.408 mL)을 충전하였다. N₂ 기체 (5× ~50 PSI)를 사용하여 퍼징하였다. 용기를 열고, N₂ 스트림이 반응 혼합물 상부로 흐르는 동안, 신속하게 (S)-Ru(OAc)₂T-BINAP (250 mg, 0.2784 mmol)을 첨가하였다. 즉시 오토클레이브를 밀봉하고, N₂ 기체 (5× ~50 PSI)를 사용하여 퍼징하였다. H₂ 기체 (5× 60 PSI)를 사용하여 용기를 퍼징한 다음, 용기에 H₂ 기체 (60 PSI)를 충전하였다. 반응 혼합물을 65 ℃로 밤새 (~16-18시간) 교반하였다. 이와 같은 시간 동안 용기의 압력은 ~70 PSI까지 증가하는데, 용기는 필요에 따라 H₂ 기체로 재충전되는 것으로써, 반응 과정 전체에 걸쳐 60 PSI의 일정 압력으로 유지되는 것은 아니다. 실온으로 냉각하고, 감압하에서 농축함으로써, 짙은 갈색의 오일로서 조 (R)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3-메틸부틸)피롤리딘-2-온을 생성시킨 후, 그것을 추가적인 정제 없이 다음 단계로 넘겼다 (21.6 g, 82.6 mmol, ~95-97 % ee, > 100 % 수율).

(S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3- 메틸부틸 )- 피롤리딘 :

자석 교반기, 열전쌍, 첨가 깔때기 및 N₂ 유입구가 장착된 1 L, 3-목 원형저 플라스크에 조 (R)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3-메틸부틸)피롤리딘-2-온 (38.26 mmol, 추정) 및 톨루엔 (100 mL)를 충전하였다. 약간 불균질한 교반 용액을 0 ℃로 냉각하고 (염/얼음 배스), 온도를 5 ℃ 이하로 유지하면서, 비트리드(Vitride)™ (롬 앤 하스(Rohm & Haas) 사) (톨루엔 중 65 중량%, 24 mL, 86.085 mmol)의 용액 및 톨루엔 (70 mL)를 적가하였다. 톨루엔 (10-20 mL)를 사용하여 첨가 깔때기를 세정하였다. 실온에서 밤새 (~16시간) 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각한 후 (염/얼음 배스), 포화 로첼(Rochell) 염 용액 (200 mL), 이어서 MTBE (200 mL)를 사용하여 급랭하였다. 혼합물을 교반하면서 실온으로 가온시킨 다음, 해당 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 유기 및 수성 층을 분리하고, H₂O (2×200 mL), 다음에는 염수 (200 mL)를 사용하여 유기 층을 세척한 다음, Na₂SO₄ 상에서 건조하였다. 여과하고, 농축함으로써, 갈색의 오일로서 원하는 중간물을 생성시켰다 (9.61 g, 38.85 mmol, > 100 % 수율).

(S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3- 메틸부틸 )- 피롤리딘의 분리/정제:

자석 교반 바 및 N₂ 유입구가 장착된 500 mL 원형저 플라스크에 조 (S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3- 메틸부틸 )- 피롤리딘 (9.61 g, 38.26 mmol) 및 MeOAc (96 mL)를 충전하였다. 디벤조일-(L)-타르타르산 (13.71 g, 38.26 mmol)을 교반하면서 일부씩 첨가하고, 혼합물이 탁해질 때까지 (~5분) 실온에서 반응 혼합물을 교반시켰다. 사전가열된 오일 배스에서 교반하면서 밤새 (~16시간) 50 ℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 중간 프릿화 깔때기를 통한 여과에 의해 고체를 분리하였다. 메틸 아세테이트 (5×20 mL)를 사용하여 고체를 세척하고, 공기 건조시킴으로써, 백색의 고체로서 (S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3-메틸부틸)-피롤리딘 염을 생성시켰다 (15.1 g, 24.93 mmol, 3단계에 걸쳐 65.2 % 수율, 81.4 %의 이성질체 회수로써 80 % ee 추정).

(S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3- 메틸부틸 )- 피롤리딘 염의 탈염 :

자석 교반 바가 장착된 500 mL 원형저 플라스크에 (S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3-메틸부틸)-피롤리딘 염 (13.71 g, 22.636 mmol) 및 MTBE (140 mL)를 충전하였다. 수성 포화 NaHCO₃ (140 mL)를 첨가하고, 불균질 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. EtOAc (140 mL) 및 수성 포화 NaHCO₃ (50 mL), 이어서 H₂O (~100 mL)를 사용하여 탁한 용액을 희석함으로써, 투명 혼합물을 제공하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조하였다. 여과하여, 농축함으로써, 황갈색의 오일로서 (S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3-메틸부틸)-피롤리딘을 생성시키고, 그것을 추가적인 정제 없이 다음 단계로 넘겼다 (5.37 g, 21.707 mmol, 95.9 % 회수).

(S)-1-벤질-3-((S)-1-(6- 클로로 -2- 메틸 -3- 피리딜옥시 )-3- 메틸부틸 )- 피롤리딘 :

크라이젠 어댑터(Claisen adaptor), 열전쌍 및 N₂ 유입구가 장착된 200 mL 원형저 플라스크에 (S)-1-벤질-3-((S)-1-히드록시-3-메틸부틸)-피롤리딘 (5.69 g, 23 mmol) 및 DMA (58 mL)를 충전하였다. 교반하면서 NaH (1.29 g, 32.2 mmol)을 일부씩 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 교반하면서 6-클로로-3-플루오로-2-메틸피리딘 (3.52 g, 24.15 mmol)을 일부씩 첨가한 다음, 실온에서 24시간 동안 교반하였다. H₂O (120 mL)를 사용하여 반응 혼합물을 급랭하고, MTBE (120 mL)로 추출하였다. H₂O (2×60 mL), 이어서 염수 (60 mL)를 사용하여 유기 층을 세척한 다음, Na₂SO₄ 상에서 건조하였다. 여과하여, 농축한 다음, 실리카 (225 g, 톨루엔으로 침윤) 상에 적재하고 하기를 사용하여 용리함으로써, 조 물질 (톨루엔 중)을 정제하였다: 헥산 (2×500 mL), 15 % MTBE/헥산 (16×500 mL), 50 % MTBE/헥산 (8×500 mL). 적절한 분획을 농축함으로써, 밝은 황색의 오일로서 (S)-1-벤질-3-((S)-1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘 (5.77 g, 15.47 mmol, 67 % 수율, 순도 > 98 %)을 생성시켰다.

(S)-1-벤질-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘:

자석 교반 바 및 N₂ 유입구가 장착된 200 mL RB 플라스크에 (S)-1-벤질-3-((S)-1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘 (5.46 g, 14.65 mmol) 및 DMSO (30 mL)를 충전하였다. 교반하면서 칼륨 메톡시드 (4.11 g, 58.61 mmol)을 일부씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 오일 배스에서 100 ℃로 1시간 동안 교반하였다. H₂O (60 mL) 및 MTBE (60 mL)를 사용하여 희석하였다. 층을 분리하고, H₂O (2×30 mL), 이어서 염수 (30 mL)를 사용하여 유기 층을 세척한 다음, Na₂SO₄ 상에서 건조하였다. 여과하고, 조 물질 (톨루엔 중)을 농축하였다. 실리카 (225 g, 톨루엔으로 침윤) 상에 적재하고 하기를 사용하여 용리하였다: 헥산 (2×500 mL), 50 % MTBE/헥산 (6×500 mL). 적절한 분획을 농축함으로써, 황색/오렌지색 오일로서 (S)-1-벤질-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘 (4.32 g, 11.72 mmol, 80 % 수율)을 생성시켰다.

(S)-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘:

400 mL 스테인리스강 오토클레이브에 20 중량% Pd/C (10 중량%, 820 mg), 이어서 에탄올 (82 mL) 중 (S)-1-벤질-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘 (4.1 g, 11.126 mmol)의 용액을 충전하였다. H₂ 기체 (3×50 PSI)로 퍼징한 다음, H₂ 기체 (50 PSI)를 용기에 충전하였다. 반응 혼합물을 60 ℃로 가열하고, 60 ℃에서 24시간 동안 교반하였다. 60 ℃에서 용기의 압력을 ~55 PSI로 증가시키고, 필요에 따라 H₂ 기체를 용기에 재충전하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 (에탄올로 침윤)가 충전된 중간 프릿화 깔때기를 통하여 여과한 후, 에탄올 (~80 mL)을 사용하여 세척하였다. 감압하에서 농축함으로써, 밝은 황색의 오일로서 (S)-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸부틸)-피롤리딘을 생성시켰다 (3.02 g, 10.848 mmol, 97.5 % 수율).

실시예 19B: (S)-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘, D-타르트레이트

1000 rpm으로 교반하면서 60 ℃에서, (S)-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘 (353 mg)을 THF (1 mL)에 용해시켰다. 약간 탁한 황색의 용액이 생성되었다. 용액에 D-타르타르산 (218 mg, 80 ℃에서 3 mL의 THF에 용해시킴)의 용액을 천천히 첨가하였다. 0.45 ㎛ PTFE 주사기 필터를 통하여 용액을 여과하고, 아세토니트릴 (4 mL)을 첨가하였다. 뚜껑이 없는 후드에서 증발시켰다. 약 20분 후에 다량의 오프-화이트 색상 고체가 침전되었다. 용액을 진공 여과하고, 고체를 60 ℃ 진공 오븐에서 1시간 동안 건조함으로써, 분말상의 오프-화이트 색상 고체를 수득하였다.

X-선 분말 회절

CuKα 공급원 (λ = 1.54056 Å) 및 반텍(Vantec) 검출기가 장착되어 있으며 50 kV 및 40 mA로 작동하는 브루커 D8 어드밴스(Bruker D8 Advance) X-선 분말 회절기에서 결정질의 XRD 패턴을 수득하였다. 2θ에서 0.02°의 단계 크기 및 9.0 초/단계의 스캔 속도를 사용하고, 1 mm의 발산 및 수광 슬릿과 0.1 mm의 검출 슬릿을 사용하여, 2θ에서 4 내지 40° 사이로 샘플을 스캐닝하였다. 건조 분말을 오목한 상부-적재 샘플 홀더에 패킹한 후, 유리 슬라이드를 사용하여 평활한 표면을 수득하였다. 주변 온도 및 상대 습도에서 결정 형태 회절 패턴을 수집하였다. 피크 선발에 앞서 바탕을 제거하였다. 주어진 어떠한 결정 형태에서도 결정 형태 및 성향과 같은 요인에 기인하는 선호 배향으로 인하여 회절 피크의 상대적인 강도가 달라질 수 있다는 것은 결정학계에 잘 알려져 있다. 선호 배향의 효과가 존재하는 경우, 피크 강도가 변화되기는 하지만, 특징적인 다형의 피크 위치는 변화되지 않는다. 예를 들면 문헌 [The United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18, pages 1843-1844, 1995]을 참조하라. 또한, 주어진 어떠한 결정 형태에서도 각도상의 피크 위치는 약간씩 달라질 수 있다는 것 역시 결정학계에 잘 알려져 있다. 예를 들면, 샘플이 분석되는 온도 또는 습도의 변이, 샘플 교체, 또는 내부 표준의 존재 또는 부재로 인하여 피크 위치가 이동할 수 있다. 본 건의 경우에서는, 표시된 결정 형태의 명확한 확인을 방해하지 않고, 2θ에서 ± 0.1의 피크 위치 변이성으로 이러한 잠재적 변이들을 고려하게 된다. 결정 형태의 확인은 통상적으로 더 현저한 피크인 두드러진 피크 (°2θ 단위)의 소정의 독특한 조합을 기준으로 이루어질 수 있다. 예컨대, 제조된 (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘의 d-타르트레이트 염 샘플은 CuKα 방사선을 사용한 XRD 패턴에서 하기 표 1에 기술되어 있는 바와 같은 회절 피크 (2-세타 값)을 가지며, 특히 9.26, 16.12 및 16.59로 구성되는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 피크와 함께 4.63에서의 피크를 가지고; 0.1 °의 회절 각도에 대한 내성(tolerance)를 가지는 것을 특징으로 한다.

실시예 20-32의 화합물은 실시예 19에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조될 수 있다.

실시예 33: 3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로부틸-에틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (D1E2)

탈염

3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로부틸-에틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (D1) (80.0 mg, 0.180 mmol)을 SCX 컬럼 상에 붓고, 디클로로메탄, 메탄올 중 50 % 디클로로메탄 및 메탄올을 사용하여 세정하였다. 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 화합물을 용리하고, 농축함으로써, 3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로부틸-에틸)-피롤리딘 (50 mg)을 산출하였다.

키랄 크로마토그래피 분리

25 % 메탄올/0.2 % 이소프로필아민/CO₂를 사용하여 용리하는 초임계 유체 키랄 크로마토그래피 (키라셀(Chiracel) OD-H)에 아민 (50 mg)을 적용하여, 3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로부틸-에틸)-피롤리딘 (D1E1) (21 mg, 40 %, > 99 % ee) 및 3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로부틸-에틸)-피롤리딘 (D1E2) (20 mg, 38 %, > 99 ee)를 산출하였다.

실시예 1에서와 본질적으로 동일하게 3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로부틸-에틸)-피롤리딘 (D1E2) 의 L-타르트레이트 형성을 수행하여 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 34: (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-부틸)-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-2)

탈염

(3S)-3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-부틸)-피롤리딘 (S-2) (1.00 g, 2.39 mmol)의 L-타르트레이트 염을 메탄올에 용해시킨 후, 용액을 SCX 컬럼에 부었다. 메탄올을 사용하여 컬럼을 세정한 다음, 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 유리 아민을 용리하였다. 용매를 증발시키고, 진공하에서 아민을 건조함으로써, 0.65 g (99 %)의 (3S)-3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-부틸)-피롤리딘 (S-2)를 산출하고, 그것을 추가적인 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.

염화물에서 메톡시로의 전환

(3S)-3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-부틸)-피롤리딘 (S-2) (0.65 g, 2.44 mmol), DMSO (9.75 mL), 메탄올 (0.493 mL, 12.18 mmol), 및 수소화 나트륨 (0.390 g, 9.75 mmol)을 반응 바이알에 첨가하였다. 바이알을 배기하고, 질소로 퍼징하였다. 혼합물을 100 ℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 SCX 컬럼에 붓고, 메탄올을 사용하여 세정하였다. 실리카 겔 컬럼의 상부에 SCX 컬럼을 장착한 후, 클로로포름 중 5-30 %의 NH₃OH/에탄올 (1:9)를 사용하여 용리함으로써, 0.420 g (65 %)의 (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-부틸)-피롤리딘을 수득하였다.

실시예 1에서와 본질적으로 동일하게 (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-부틸)-피롤리딘 (S-2)의 L-타르트레이트 형성을 수행하여 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 35: (3S)-3-[1-시클로부틸-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-메틸]-피롤리딘 (S-1), L-타르트레이트

실시예 34에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 (3S)-3-[1-시클로부틸-1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-메틸]-피롤리딘 (S-1) L-타르트레이트로부터 표제 화합물이 제조될 수 있다.

실시예 36: (3S)-3-[1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-1)

탈보호

반응 바이알에서, (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-1) (0.50 g, 1.31 mmol), 메톡시벤젠 (6.6 mL) 및 디클로로메탄 (6.6 mL)를 혼합하였다. 바이알을 배기하고, 질소로 퍼징하였다. 트리플루오로아세트산 (1.51 g, 1.0 mL, 13.2 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 바로 사전-패킹된 SCX 컬럼에 적재하고, CH₂Cl₂, 이어서 CH₃OH를 사용하여 세정하였다. 메탄올 중 2 M NH₃를 사용하여 용리하고, 감압하에서 농축함으로써, 0.353 g (96 %)의 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘 (S-1)를 생성시켰다.

염화물에서 메톡시로의 전환

(3S)-3-(1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-시클로프로필-에틸)-피롤리딘 (S-1) (0.35 g, 1.25 mmol), DMSO (4.99 mL), 메탄올 (0.404 mL, 9.97 mmol), 및 수소화 나트륨 (0.349 g, 8.73 mmol)을 반응 바이알에 첨가하였다. 바이알을 배기하고, 질소로 퍼징하였다. 혼합물을 110 ℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응액을 pH 7 버퍼에 용해시키고, 5 N HCl을 사용하여 중화하였다. 혼합물을 SCX 컬럼에 붓고, 메탄올을 사용하여 세정하였다. SCX 컬럼을 실리카 겔 컬럼의 상부에 장착하고, 클로로포름 중 5-35 %의 NH₄OH/에탄올 (1:9)를 사용하여 용리함으로써, 0.209 g (61 %)의 (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸)-피롤리딘 (S-1)을 수득하였다.

실시예 1에서와 본질적으로 동일하게 (3S)-3-(1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-시클로프로필-에틸)-피롤리딘 (S-1)의 L-타르트레이트 형성을 수행하여, 표제 화합물을 산출하였다.

실시예 37: (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-1)

웨인레브 아미드의 제조

THF (160 mL) 중 1,1'-카르보닐디이미다졸 (31.4 g, 190 mmol)의 교반 용액에 THF (240 mL) 중 (S)-N-tert-부톡시카르보닐피롤리딘-3-카르복실산 (40 g, 186 mmol)의 용액을 적가하고, 질소하에 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. N,O-디-메틸히드록실아민 히드로클로리드 (18.8 g, 190 mmol)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 사용하여 반응을 급랭하였다. 상을 분리하고, t-부틸메틸에테르 (2×)를 사용하여 수상을 추출하였다. 유기물질을 합쳐, 10 % 수성 H₃PO₄, 20 % 수성 KHCO₃, 물 및 염수를 사용하여 세척하였다. 농축함으로써, 37.1 g (77 %)의 표제 화합물을 산출하였다.

웨인레브 아미드에의 그리그나드의 부가 및 케톤의 알콜로의 환원

질소하에 0 ℃로 유지하면서, THF (296 mL) 중 (S)-3-(메톡시(메틸)카르바모일)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (37.0 g, 143.2 mmol)의 교반 용액에 브롬화 알릴마그네슘 (THF 중 2.0 M, 100.3 mL, 200.5 mmol)의 용액을 천천히 적가하였다. 반응액을 실온으로 가온시키고, 48시간 동안 교반을 계속하였다. 수중 (74 mL) 나트륨 보로히드리드 (5.42 g, 143 mmol) 및 브롬화 테트라부틸암모늄 (0.74 g, 2.39 mmol)의 냉 용액 (0-5 ℃) 상에 혼합물을 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 상을 분리하고, 수상을 t-부틸메틸에테르 (2×)로 추출하였다. 유기 상을 합쳐, 물 및 염수로 세척하였다. t-부틸메틸에테르/헥산 (3/7 내지 7/3)을 사용하여 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 조 잔류물을 농축하여 정제함으로써, (3S)-3-(1-히드록시-부트-3-에닐)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-믹스) (29 g, 85 %)를 수득하였다.

(3S)-3-(2-시클로프로필-1-히드록시에틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (S-믹스)

디클로로메탄 (43.2 mL) 중 (3S)-3-(1-히드록시-부트-3-에닐)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-믹스) (14.4 g, 59.7 mmol)의 교반 용액에 팔라듐(II) 아세테이트 (2.31 g; 0.298 mmol)을 첨가하였다. 질소하에서 -30 내지 -40 ℃로, 새로 제조한 디아조메탄 (100 mL, 디에틸 에테르 중 약 50 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다 (주의: 강력한 N₂ 기체 발생). 용매를 증발시키고, 조물질을 디클로로메탄 (43.2 mL)에 용해시켰다. 질소하에 -30 내지 -40 ℃로 유지하면서, 팔라듐(II) 아세테이트 (2.31 g, 0.298 mmol), 이어서 새로 제조한 디아조메탄 (100 mL, 디에틸 에테르 중 약 50 mmol)의 용액을 혼합물에 첨가하였다 (주의: 강력한 N₂ 기체 발생). 용매를 증발시키고, 조물질을 디클로로메탄 (43.2 mL)에 용해시켰다. 질소하에 -30 내지 -40 ℃로 유지하면서, 팔라듐(II) 아세테이트 (2.31 g, 0.298 mmol), 이어서 새로 제조한 디아조메탄 (50 mL, 디에틸 에테르 중 약 25 mmol)의 용액을 혼합물에 첨가하였다 (주의: 강력한 N₂ 기체 발생). 용매를 증발시키고, 조 잔류물에 헥산 (140 mL)을 첨가한 후, 현탁액을 실온에서 밤새 교반하였다. 셀라이트® 패드 상에서 현탁액을 여과하여, 농축함으로써, (3S)-3-(2-시클로프로필-1-히드록시에틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert 부틸 에스테르 (S-믹스)를 다량 수율로 수득하였다.

(3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-1) 및 (S-2)

질소 분위기하에 실온으로 유지하면서, (3S)-3-(2-시클로프로필-1-히드록시-에틸)피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-믹스) (19.8 g, 77.5 mmol), 6-클로로-3-플루오로-2-메틸-피리딘 (16.9 g, 116.3 mmol) 및 디메틸아세트아미드 (59.4 mL)의 혼합물에 수소화 나트륨 (60 %, 6.20 g, 155.1 mmol)을 천천히 첨가하였다. 40 ℃로 가열하고, 3.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고, 메탄올을 첨가하였다. 10 % 수성 H₃PO₄ (100 mL) 및 t-부틸메틸에테르 (100 mL) 상에 혼합물을 부었다. 상을 분리하고, 수상을 t-부틸메틸에테르 (2×)로 추출하였다. 유기 상을 합쳐, 물 및 염수로 세척하였다. 용매를 증발시켜, 조 잔류물을 수득하였다. t-부틸메틸에테르/헥산 (2:8 내지 4:6)을 사용하여 용리하는 실리카 겔 상에서 조 잔류물을 크로마토그래피함으로써, 또 다른 배치로부터의 조 잔류물 (알콜 2 g 기준)과 혼합된 조 잔류물을 수득하였다. 헥산 중 25 %의 t-부틸메틸에테르를 사용하여 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 부분입체이성질체의 혼합물을 분리함으로써, 제1 용리 이성질체로서의 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 이성질체 1 (S-1) (15.0 g, 51 %)

및 제2 용리 이성질체로서의 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 이성질체 2 (S-2) (12.0 mg, 41 %)

를 수득하였다.

(3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘, (S-1)

디클로로메탄 (40.2 mL) 중 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (S-1) (13.4 g, 35.2 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 M, 52.7 mL, 627 mmol)을 첨가하였다. 질소하에서 실온으로 1시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 t-부틸메틸에테르 (40 mL)와 물 (40 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 상을 분리하고, 수성 상을 t-부틸메틸에테르 (2×)로 세척하였다. 10 % 수성 K₂CO₃의 첨가에 의해 수성 상의 pH를 9로 조정하고, t-부틸메틸에테르 (3×)로 추출하였다. 물 및 염수를 사용하여 합쳐진 유기 상을 세척하였다. 휘발성물질을 증발시킴으로써, (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘 (S-1) (9.6 g, 97 %)를 수득하였다.

(3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘, L-타르트레이트 (S-1)

메탄올 (48.5 mL) 중 (3S)-3-[1-(6-클로로-2-메틸-3-피리딜옥시)-2-시클로프로필-에틸]-피롤리딘 (S-1) (9.7 g, 34.5 mmol)의 용액에 L-타르타르산 (5.1 g, 33.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소하에 실온에서 15분 동안 교반하였다. 휘발성물질을 증발시키고, 잔류물을 물 (100 mL)에 용해시킨 후, t-부틸메틸에테르 (2×)로 추출하였다. 25 ℃로 배스를 유지하면서, 회전 증발기에서 수성 상을 최종 부피 50 mL로 농축하였다. 잔류물을 동결건조하여, 14.0 g (95 %)의 표제 화합물을 수득하였다.

3(S)-(1'-히드록시-3'- 메틸 -부틸)- 피롤리딘 -1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르 이성질체 1 및 2의 절대 배치 할당

화학식 1에 도시되어 있는 바와 같이, 3(S)-(1'-히드록시-3'-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르에는 탄소 5 및 7 (C5 및 C7)에 해당하는 2개의 입체생성 탄소가 존재한다.

<화학식 1>

C7의 배치가 개시 (S)-N-(tert-부톡시카르보닐)-피롤리딘-3-카르복실산에서부터 알려져 있기 때문에, 상대적인 배치의 측정은 C5에서의 절대 배치의 할당으로 이어지게 된다. 유연성 분자의 상대적인 배치는 양성자-탄소 결합이 문헌 [Matsumori et al., J. Org . Chem . 64, 866 (1999)]에 기술되어 있는 J-기준 배치법을 통하여 고려되는 경우에 이루어질 수 있다. 이와 같은 접근법은 소정 C-C 결합을 가로지르는 H-H 및 H-C 연결, 그리고 카플러스-알토나(Karplus-Altona) 관계를 통한 그의 2면각으로의 전환을 측정하는 것을 포함한다. H-C 결합 역시 카플러스 관계를 따르는데, 1 내지 3 Hz 범위의 작은 값은 고오쉬(gauch) 배향의 지표이며, 6 내지 8 Hz 범위의 큰 값은 안티(anti) 배열을 나타낸다.

관련 H5-C11 양성자-탄소 결합 상수(coupling constant)는 문헌 [P. Vidal, et al., J. Org . Chem ., 72, 3166-3170 (2007)]에 기술되어 있는 위성-선택성(satellite-selective) 1D-TOCSY 실험을 사용하여 측정된다. 선택성 펄스의 오프셋(offset)이 H11의 저-주파수 ¹³C 위성 상에 설정되는 1D-TOCSY 실험이 수득된다. 생성되는 스펙트럼은 주요 12C 동위원소이성질체의 H11 신호가 여기되는 통상적인 1D-TOCSY 실험, 또는 다르게는 1H 스펙트럼과 비교된다. C11 및 H5 사이의 3-결합 H, C 결합은 위성-선택성 TOCSY 스펙트럼에서의 교체된 H5 신호의 그의 1H 스펙트럼에서의 위치에 대비한 변위로부터 측정되는데, 결합 상수는 변위의 2배이다. C8 및 H5 사이의 결합 상수는 신호 중복으로 인하여 측정되지 않는다. 제조예 4에 기술되어 있는 것과 본질적으로 동일하게 제조된 3(S)-(1-히드록시-3-메틸-부틸)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸-에스테르 이성질체 1 및 이성질체 2 각각에 대하여 C7-C5 결합을 가로지르는 양성자-양성자 및 양성자-탄소 결합 상수를 측정하고, 그 값을 하기 표에 나타내었다.

이성질체 2에서의 작은 H5-C11 결합 상수는 H5와 C11이 양 주요 구성에서 서로 고오쉬라는 것을 나타내는데, 이는 3(S)-1'(S) 이성질체와 일치한다.

생체외 전달체 친화성 분석

인간 세로토닌 전달체 (SERT), 노르에피네프린 전달체 (NET), 또는 도파민 전달체 (DAT)를 pcDNA3 벡터에 클로닝하여, HEK293 세포로 안정하게 핵산전달감염시켰다. 표준 프로토콜에 따라 막 모액(membrane stock)을 제조하고, 각 막 배치에 대하여 포화 결합 또는 상동 경쟁 결합법을 사용하여 K_d 값을 계산하였다 (문헌 [Bylund and Toews, Am . J. Phys . ( Lung Cell . Mold Physiol 9), 265, 421-429 (1993)]). 모든 결합 분석은 여과 방사성리간드 결합 분석을 섬광 근접 분석(scintillation proximity assay) (SPA) 체재로 전환함으로써 개발된 방법 (문헌 [Carpenter, et al., Methods in Molecular Biology, 190, 21-49 (2002)])을 사용하여 96-웰 플레이트에서 수행하였다. 간단하게 말하면, ³H-시탈로프람의 존재하에 50 mM 트리스(Tris), 150 mM NaCl, 및 5 mM KCl을 함유하는 분석 버퍼 (pH 7.4) 중 10 ㎍/웰의 농도로 SERT 막을 사용하였다. 플루옥세틴 (100 μM)을 사용하여 비-특이적 결합을 측정하고, 벤라팍신을 양성 대조로 사용하였다. 50 mM 트리스, 300 mM NaCl, 및 5 mM KCl을 함유하는 분석 버퍼 (pH 7.4) 중 8 ㎍/웰의 농도로 NET 막을 사용하였다. ³H-니속세틴을 추적자(tracer)로 사용하였으며, 100 μM 데시프라민을 비-특이적 결합의 척도로 사용하였고, 니속세틴을 양성 대조로 사용하였다. DAT 결합 분석의 경우, 분석 버퍼는 SERT에서와 동일하였으며, 막은 20 ㎍/웰로 사용하였고, 100 μM의 노미페신을 사용하여 비-특이적 결합을 측정하였으며, ³H-WIN 35428 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer) 사)를 방사성추적자로 사용하였고, 노미페신을 양성 대조로 사용하였다. 모든 경우에서, 0.5 mg/웰의 맥아 응집소 섬광 근접 분석 비드 (WGA-SPA, GE 헬스 사이언시즈(Health Sciences) 사)를 막을 포획하는 데에 사용하였으며, 플레이트는 실온에서 3시간 동안 배양하였다. 방사능을 측정한 후, K_i 값은 4-파라미터 논리 곡선 피팅 프로그램 (액티비티베이스(ActivityBase) v5.3.1.22)를 사용하여 계산하였다.

상기한 것과 본질적으로 동일하게 대표적인 화합물들을 시험하였는데, 생체외에서 hSERT 및 hNET 수용체에 대해서는 높은 친화성을 가지나, hDAT 수용체에 대해서는 매우 낮은 친화성을 가지는 것으로 나타났다. SERT 및 NET에 있어서의 K_i는 각각 20.1 nM 및 23.4 nM 미만인 것으로 나타난 반면, DAT에 있어서의 K_i는 255 nM을 초과하는 것으로 나타났다. 상기한 것과 본질적으로 동일하게 실시예 19의 화합물을 시험하였는데, 하기 표에 나타낸 바와 같은 친화성을 가지는 것으로 나타났다.

생체외 억제제 활성 분석:

인간 세로토닌 (SERT) 또는 노르에피네프린 (NET) 전달체를 pcDNA3 벡터에 클로닝하여, HEK293 세포에 안정하게 핵산전달감염시켰다. 문헌 [Eshleman et al., J. Pharmacol . Exptl Ther ., 289. 877-885 (1999)] 및 [Wall et al., Mol . Pharmacol ., 47, 544-550 (1995)]에 기술되어 있는 방법으로부터 양 분석을 변형시켰다. 폴리-D-라이신 코팅된 플라스크 또는 96-웰 플레이트 상의 5 % 소 태아 혈청, 250 ㎍/mL 제네티신, 및 20 mM 헤페스를 함유하는 D-MEM/F-12 3:1 (뉴트리언트 믹스(Nutrient Mix) F-12 배지 1부 중 둘베코 변형 이글 배지 3부)에서 세포를 생장시켰다. 분석 전에, 200 μL의 배지에 웰 당 40,000 세포로 세포를 플레이팅하고, 37 ℃에서 18-24시간 동안 배양하였다. 분석 흡수 버퍼(uptake buffer)는 1.26 % 탄산수소 나트륨, 20 mM 헤페스, 및 파르길린 및 아스코르브산 각각 100 μM이 보충된 크렙스-링거(Krebs-Ringer) 탄산수소 모액으로 구성되었다. 화합물 또는 인다트랄린 (양성 대조로서)을 사용한 30분의 예비-배양 후, ³H-세로토닌 또는 ³H-노르에피네프린을 1분 및 50초 동안 첨가하였다. 다음에, ³H-기질을 제거하고, 멀티멕(multimek)을 사용하여 100 μL의 냉 흡수 버퍼로 세포를 4회 세척하였다. 트리톤 X-100 (1 %)를 첨가하여 세포를 용해하고, 혼합한 후, 모든 내용물을 흰색 바탕의 플레이트로 옮겼다. 각 웰에 마이크로신트(Microscint)™ 40을 첨가하고, 웰 당 1분 동안 방사능을 정량하였다. 4-파라미터 논리 곡선 피팅 프로그램 (액티비티베이스 v5.3.1.22)를 사용하여 IC₅₀ 값으로서 결과를 분석하였다.

상기한 것과 본질적으로 동일하게 대표적인 화합물들을 시험하였는데, 각각 227 nM 및 44.6 nM 미만인 SERT 및 NET의 IC₅₀을 가지는, 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 억제제인 것으로 나타났다. 상기한 것과 본질적으로 동일하게 실시예 19의 화합물을 시험하였는데, 하기 표에 나타낸 바와 같은 IC₅₀을 가지는, 생체외에서의 세로토닌 및 노르에피네프린 재흡수 억제제인 것으로 나타났다.

생체내 전달체 점유율 분석:

3마리 군의 무게 240-280 gm 수컷 스프라그-도울리(Sprague-Dawley) 래트를 사용하여 세로토닌 전달체 점유율을 측정하였다. 12시간 이상 동물을 굶긴 후, 각 실험을 개시하였다. 0.1, 0.33, 1, 3.33, 또는 10 % 캅티솔(CAPTISOL)™ (캅티솔™의 농도 (%) = 시험 화합물의 투여량 (mg/kg))을 함유하는 25 mM 포스페이트 버퍼 (pH = 3.0) 중 4 % 글루코스 중 운반체, 또는 0.10, 0.33, 1.00, 3.33 또는 10.00 mg/kg 투여량의 시험 화합물을 동물에게 경구로 투여하였다. 2시간 후, 식염수 중 N,N-디메틸-2-(2-아미노-4-시아노페닐티오)-벤질아민 (10 ㎍/kg)을 동물의 외측 꼬리 정맥에 정맥내로 투여하였다. 추가 40분 후, 경부 탈구를 통하여 래트를 사망시키고, 전두엽 부분을 제거하여, 드라이 아이스 상에 위치시켰다. 추가적인 3마리 래트의 대조 군에 12 mg/kg으로 파록세틴 말레에이트를, 이어서 1시간 후에 N,N-디메틸-2-(2-아미노-4-시아노페닐티오)-벤질아민 (10 ㎍/kg)을 정맥내로 투여하였다.

조직을 해동시킨 다음, 4부피 (w/v)의 0.1 % 포름산을 함유하는 아세토니트릴을 첨가하였다. 초음파 분쇄기 프로브를 사용하여 샘플을 균질화하고, 14,000×g로 16분 동안 원심분리하였다. 1부피의 상청액을 자동샘플러 바이알 내의 물 3부피에 첨가한 후, 보르텍싱하였다. 조르박스(Zorbax) C18 HPLC 컬럼, 그리고 각각 0.1 % 포름산을 포함하는 20 % 내지 90 % 아세토니트릴/물의 이동 상 구배를 사용하여 분리를 완수하였다. 총 HPLC 전개 시간은 추가 2.0분의 재-평형 시간과 함께 3.5 분이었다. MRM 모드로 작동하는 API4000 삼중 사중극 질량 분광기 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 미국 캘리포니아 포스터 시티 소재)를 검출에 사용하였다. 모니터링된 이온 전이는 N,N-디메틸-2-(2-아미노-4-시아노페닐티오)-벤질아민에 있어서 284.1/239.1 m/z이었다.

운반체-예비처리 동물 피질에서의 N,N-디메틸-2-(2-아미노-4-시아노페닐티오)-벤질아민 (추적자)의 농도는 비특이적 및 특이적 결합의 합계를 나타내며, 0 %의 점유율 값 (모든 수용체가 추적자에 대해 가용함)이 할당된다. 매우 높은 정맥내 파록세틴 말레에이트 (양성 대조 군) 투여량으로 예비처리된 동물에서의 낮은 추적자 농도는 비특이적인 결합을 나타내며, 100 %의 점유율 값 (수용체가 추적제에 대해 가용하지 않음)이 할당된다. % 세로토닌 전달체 점유율을 측정하기 위하여, 시험 화합물 경구 투여 후 피질에서의 추적자 농도는 상기 2종의 극한 사이에서 선형으로 보삽된다. 데이터는 프리즘(Prism) 버젼 3.0 (그라프패드 소프트웨어(GraphPad Software) Inc. 사, 미국 캘리포니아 샌디에고 소재)를 사용하여 계산된 평균 ± SEM (n = 3/군)으로 표현된다. 비선형 회귀를 사용하여 S자형 곡선에 데이터를 피팅함으로써, ED₈₀ 값이 수득된다.

상기한 것과 본질적으로 동일하게 실시예 19의 화합물을 시험하였는데, 투여 후 1시간 동안의 하기 투여량 응답 데이터를 기준으로 7.1 mg/kg의 절대 ED₈₀을 가지는 것으로 나타남으로써, 생체내에서의 세로토닌 수용체의 점유를 확인해 주었다.

알파 MMT : 모노아민 고갈 억제 분석:

고갈제가 전달체를 통한 뉴런으로의 활발한 흡수를 필요로 하는 경우, 신경전달물질 전달체 억제제는 뇌 모노아민의 고갈을 방지할 수 있다. DL-파라-클로로암페타민 (PCA)은 뉴런 전달체를 통하여 세로토닌성 뉴런으로 전달되어, 래트 뇌 세로토닌 (5-HT) 농도의 오래 지속되는 고갈을 초래한다. 알파-메틸-m-티로신 (α-MMT)는 생체내에서 메타라미놀로 β-히드록실화되어 뉴런 전달체를 통해 활발하게 노르에피네프린 (NE) 뉴런으로 전달됨으로써 래트 뇌에서의 NE 농도의 감소를 초래하는 노르아드레날린성 고갈제이다. PCA에 의한 래트 뇌 5-HT 농도의 고갈, 및 α-MMT에 의한 래트 피질 NE 농도의 고갈은 5-HT 및 NE 재흡수 억제제 활성을 가지는 제제에 의해 차단된다. 본 발명의 화합물은, 하기의 방법을 사용하여 급식 및 비급식 래트에서 생체내로, PCA 에 의한 래트 뇌 5-HT 농도의 고갈, 및 α-MMT에 의한 래트 피질 NE 농도의 고갈을 방지하는 그의 활성에 대하여 분석될 수 있다.

무게 160-180 그램의 수컷 스프라그-도울리 래트를 밤새 굶기거나, 임의로 급식하였다. 운반체 (멸균 H₂O) 또는 시험 화합물을 동물에게 위관영양하고 2시간 후에, 10 mg/kg의 PCA 히드로클로리드 (ip) 또는 6.25 mg/kg의 α-MMT (sc)를 투여하였다. 모든 화합물은 1 mL/kg으로 투여하였다. PCA 또는 α-MMT 투여 2시간 후에 동물들을 사망시켰다. 조직을 절개하여, 드라이 아이스 상에서 냉동한 후, 분석 전에 -70 ℃로 저장하였다. PCA가 투여된 동물의 경우, 문헌 [Fuller and Perry in J. Pharmacol . Exp . Ther ., 248, 50-56 (1989)]에 기술되어 있는 바와 같은 전기화학적 검출을 사용하는 고압 액체 크로마토그래피를 사용하여 전체 뇌 세로토닌 (5-HT) 농도를 측정하였다. α-MMT가 투여된 동물의 경우, 문헌 [Bymaster, et al., Neuropsychopharmacology, 27(5), 699-711 (2002)]에 기술되어 있는 바와 같은 알루미나 흡수 후 HPLC-EC에 의해 피질 노르에피네프린 농도를 측정하였다. 피크 높이 및 샘플 농도를 계산하는 EZChrom™ 크로마토그래피 데이터 시스템 (사이언티픽 소프트웨어(Scientific Software) 사, 캘리포니아 산 라몬 소재)을 사용하여 데이터를 수집하였다. 변이의 분석, 이어지는 이후의 튜키의 정확 유의 차이 검정(Tukey's Honestly Significant Difference test)은 처리 군들 간의 상당한 차이 (P ≤ 0.05)를 나타내었다. 최적-피팅 선형 회귀 분석을 사용하여, PCA- 또는 α-MMT-유도 모노아민 고갈을 50 % 길항하는 투여량 (ED₅₀)을 계산하였다.

상기한 것과 본질적으로 동일하게 실시예 19의 화합물을 시험하였는데, 하기의 투여량 응답 기준 9.5 mg/kg의 ED₈₀으로 래트 피질에서 노프에피네프린의 α-MMT 유도 고갈을 길항하는 것으로 나타남으로써, 노르에피네프린 전달체 기능을 억제함에 있어서의 생체내 효능을 확인해 주었다.

수동 포르말린 시험

크기가 대략 25 cm × 25 cm × 20 cm인 맞춤형 플렉시글라스(Plexiglas) 박스에서 수동 포르말린 시험을 수행하였다. 케이지 후면에 위치한 거울은 포르말린이 주입된 발의 막힘없는 관찰을 가능케 한다. 래트 (찰스 리버(Charles River) (CRL) 스프라그 도울리 (SD))를 실험 30분 이상 전에 개별적으로 큐비클(cubicle)에 넣었다. 모든 시험은 08:00 내지 14:00시 사이에 수행하였으며, 실험실 온도는 21-23 ℃로 유지하였다. 포르말린 적용 전에, 말초 투여되는 시험 화합물을 다양한 회수로 투여하였다. 27 게이지의 바늘을 사용하여 우측 뒷발의 등 외측 표면에 포르말린 (식염수 중 5 % 용액 50 μL)을 피하로 주입하였다. 포르말린 주입 직후 관찰을 개시하였다. 5분 간격으로 각 핥음 행동이 지속되는 초수를 기록함으로써, 포르말린 유도 통증을 정량하였다. 포르말린 주입 후 50분 동안 통증 점수를 측정하였다. 이미 기술되어 있는 바와 같은 2종의 통증 거동 양상이 관찰되었다 (문헌 [Wheeler-Aceto, H., Porreca, F. and Cowan, A., The rat paw formalin test: comparison of noxious agents, Pain 40 (1990) 229-238]). 초기 단계는 포르말린 주입 직후에 개시되어 대략 5분 지속되었고, 이후 10-15분 사이에 개시되는 후기 단계가 이어졌으며, 최대 응답은 통상적으로 포르말린 주입 후 25-35분 부근에서 관찰되었다. 50분의 관찰 기간 후, CO₂를 사용하여 동물을 사망시켰다.

포르말린 시험에 대하여 보고되어 있는 다양한 점수화 파라미터들 중, 주입된 발을 핥거나 깨무는 데에 소요하는 총 시간이 가장 적합한 것으로 고려되었다 (문헌 [Abbott et al., The formalin test : scoring properties of the first and second phases of the pain response in rats, Pain 60 (1995) 91-102]; [Coderre et al., The formalin test : a validation of the weighted - scores method of the behavioral pain rating, Pain 54 (1993) 43-50]). 초기 단계 점수는 시간 0 내지 5분에서의 핥는데 소요되는 시간의 합계 (초)이다. 후기 단계 점수는 16분 내지 40분의 관찰 기간에서의 핥는데 소요되는 총 초수를 합산함으로써 수득하였다. 데이터는 평균의 표준 오차 (± SEM)와 함께 평균으로서 나타내었다. 변이의 일방 분석 (ANOVA), 및 2종의 측면 비교를 위한 듀넷(Dunnett) "t" 시험에 의해 분석되는 적절한 대비에 의해 데이터를 평가하였다. P-값이 0.05 미만인 경우, 차이가 상당한 것으로 간주되었다 (전기한 문헌 [Abbott]; [Coderre]; 및 [Wheeler-Aceto]).

상기한 것과 본질적으로 동일하게 실시예 19의 화합물을 시험하였는데, 하기의 투여량 응답으로부터 유추된 ED₅₀이 13.4 mg/kg으로써, 통증 거동을 상당히 감소시키는 것으로 나타났다:

본 발명의 방법에서 사용된 화합물을 어떠한 제제화도 없이 바로 투여하는 것이 가능하기는 하지만, 상기 화합물은 보통은 활성 성분으로서의 1종 이상의 화학식 I 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 제약 조성물의 형태로 투여된다. 이러한 조성물은 경구, 비내, 경피, 피하, 정맥내, 근육내, 및 폐내를 포함한 다양한 경로에 의해 투여될 수 있다. 그와 같은 제약 조성물 및 그의 제조 방법에 대해서는 업계에 잘 알려져 있다. 예를 들면, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy (University of the Sciences in Philadelphia, ed., 21^st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005)]을 참조하라.

상기 조성물은 바람직하게는 각 투약분이 약 0.1 내지 약 500 mg, 더욱 일반적으로는 약 1.0 내지 약 200 mg, 예를 들자면 약 1 내지 20 mg 사이의 활성 성분을 함유하는 단위 투약 형태로 제제화된다. "단위 투약 형태"라는 용어는 각 단위가 1종 이상의 제약상 허용되는 적합한 담체, 희석제 및/또는 부형제와 함께 원하는 치료 효과를 산출할 것으로 계산된 사전결정량의 활성 물질을 함유하는, 인간 대상 및 다른 포유동물을 위한 단위 투약분으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭한다.

화학식 I의 화합물은 일반적으로 넓은 투약 범위에 걸쳐 효과적이다. 예를 들어, 일 당 투약량은 보통 약 0.001 내지 약 30 mg/kg체중, 더욱 일반적으로는 약 0.01 내지 3.0 mg/kg체중, 예를 들자면 0.01 내지 0.3 mg/kg체중 사이의 범위에 속한다. 일부 경우에는, 상기언급된 범위의 하위 한계 미만인 투약량 수준이 더욱 적정할 수 있는 반면, 다른 경우에는, 더 큰 투약량이 어떠한 유해한 부작용도 야기하지 않으면서 사용될 수 있기 때문에, 어떠한 방식으로도 상기 투약량 범위로써 본 발명의 영역을 제한하고자 하는 것은 아니다. 실제로 투여되는 화합물의 양이 치료될 이상, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물 또는 화합물들, 개별 환자의 연령, 체중 및 응답, 그리고 환자 증상의 중증도를 포함한 관련 상황에 비추어 의사에 의해 결정될 것이라는 것을 알고 있을 것이다.

Claims

하기 화학식의 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염:

(상기 식에서, R¹은 n-프로필, 이소부틸, (C₃-C₄)시클로알킬, 및 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-로 구성되는 군으로부터 선택되며;
n은 1 또는 2이고;
각 R²는 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 시클로프로필메틸옥시, 트리플루오로메톡시, 메틸아미노, 시클로프로필아미노 및 t-부틸카르보닐아미노로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되되, 단 n이 2인 경우, R² 중 1개 이상은 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 또는 에톡시임).
제1항에 있어서, R¹이 n-프로필 또는 이소부틸인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, R¹이 이소부틸인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, R¹이 (C₃-C₄)시클로알킬 또는 (C₃-C₄)시클로알킬-메틸-인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항에 있어서, (S)-3-((S)-1-(6-메톡시-2-메틸-3-피리딜옥시)-3-메틸-부틸)-피롤리딘인 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
삭제
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 포함하는, 인간에서 만성 통증을 치료하기 위한 제약 조성물.
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