TW201103908A - Serotonin and norepinephrine reuptake inhibitor - Google Patents

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201103908 六、發明說明： 【先前技術】 血清素及腎上腺素係涉及下行疼痛路徑中内源性鎮痛機 制之調節劑，且已顯示血清素正腎上腺素再吸收抑制劑 (SNRI)可有效治療諸如糖尿病周邊神經病變性疼痛及纖維 肌痛症之慢性疼痛病症（Kroenke等人Pharmacotherapy of chronic pain : a synthesis of recommendations from systematic reviews, General Hospital Psychiatry 31 (2009) 206-219(線 上為 http : //www.sciencedirect.com,於 2009 年 3 月 30 日錄 入）。 WO 2008/023258闡述某些3-(吡啶-3-基曱氧基）-哌啶化 合物，其係作為單胺再吸收抑制劑（血清素及/或正腎上腺 素再吸收抑制劑），而用於治療包括疼痛之寬廣範圍之病 症。 US 2002015 1712闡述某些3-吡咯啶基-氧基-3'-吡啶基-醚 化合物，其係作為菸鹼性乙醯膽鹼受體配體，而用於多種 適應症，包括治療疼痛。 【發明内容】 本發明提供其他SNRI化合物，其對血清素及正腎上腺 素再吸收比前述參照物具有更大效力及更高選擇性。此 外，某些本發明化合物提供的血清素對正腎上腺素再吸收 抑制劑活性之平衡比前述參照物更改善。換言之，先前之 雙重活性化合物所具有之血清素再吸收抑制劑活性通常比 正腎上腺素再吸收抑制劑活性高，而某些本發明所主張專 146616.doc 201103908

權之化合物針對血清素及正腎上腺素再吸收抑制所且有 之雙重活性明顯接近於相：所具有 (/ 丹運步’本發明仆A 物具有降低之酸不穩m σ 調配而言通常為優點。再進—步，二 =路劍1及方便 ^^^^ 步某些本發明化合物具有 改善的代謝降解曲線，苴铋 深八就改善治療暴露劑量而言 優點’且有利於減少在患者群體中之醫藥變異性。 本發明提供一種通式1化合物或其醫藥上可接受鹽：

其中R1係自由下列組成之群中選出：正丙基、異丁基、 (C3_C4)環烧基、及（CrC4)環燒基-甲基·； η為1或2 ;且 各R2係獨立地自由下列組成之群中選出：氣、氯、演、甲 基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、環丙基曱基氧 基-氟曱氧基、曱基胺基、環丙基胺基及第三丁基徵基 胺基’條件為當η為2時，至少其中一個尺2為氟、氣、溴、 曱基、乙基、三敦甲基、曱氧基、或乙氧基。 本發明進一步提供一種醫藥址合物，其包含通式Ϊ化合 物或其醫藥上可接受鹽’與醫藥上可接受載劑、稀釋劑、 或賦形劑組合。此外，本發明提供—種適於治療慢性疼痛 之醫藥組合物，其包含通式】化合物或其醫藥上可接受 146616.doc 201103908 χ與—種或多種醫藥上可接受賦形劑、载劑、或稀釋劑 組合。其他實施例提供—種適於治療糖尿病周邊神經病變 ί·生疼痛、纖維肌痛症、與纖維肌痛症相關之疼痛、及發炎 性疼痛’例如多肌痛、風濕性關節炎或骨關節炎中之任一 種之醫藥組合物，其包含通式j化合物或其醫藥上可接受 與種或多種醫藥上可接受賦形劑、载劑、或稀釋劑 本發明亦提供一種為哺乳動物治療慢性疼痛之方法，其 包括向需要該種治療之哺乳動物投與有效量之通式工化合 物：其醫藥上可接受鹽。本發明之該態樣之特定實施例包 括種冶療糖尿病周邊神經病變性疼痛之方法、一種治療 纖維肌痛症之方法、一種治療與纖維肌痛症相關之疼：之 方法、及/或一種治療例如多肌痛、風濕性關節炎或骨關 即炎之發炎性疼痛之方法，各該方法獨立地包括向需要該 種治療之哺乳動物投與有效量之通式〗化合物、或其醫藥 上可接受鹽。在本發明之該態樣中之—項特定實施例中， 哺乳動物為人類。

本發明亦提供一種用於療法之通式j化合物或其醫藥上 可接一受鹽。在該態樣令，本發明提供—種用於為哺乳動物 (特定言之人類）治療慢性疼痛之通式丨化合物、或其醫藥上 可接受鹽。本發明之該態樣之其他實施例包括以下任一 者：用於治療慢性疼痛之通式丨化合物、或其醫藥上可接 文鹽，用於治療糖尿病周邊神經病變性疼痛之通式I化合 物、或其醫藥上可接受鹽；用於治療纖維肌痛症之通式I 146616.doc 201103908 化合物、或其醫藥上可接受鹽；用於治療與纖維肌痛症相 關之疼痛之通式！化合物、或其醫藥上可接受鹽；用於户 療發炎性疼痛之通式！化合物、或其醫藥上可接受鹽；用° 於治療多肌痛之通式j化合物、或其醫藥上可接受:.用 於治療風濕性關節炎之通式j化合物、或其醫藥上=接受 鹽，及用於治療骨關節炎之通以化合物、或其醫藥 接受鹽。 ” 本發明之另一態樣提供一種以通式Σ化合物、或其醫藥 上可接又鹽於製備用於治療慢性疼痛之醫藥品上之用途。 該態樣之特定實施例提供一種以通式工化合物、或盆醫華 上可接受鹽於製備用於治療糖尿病周邊神 ^ 醫藥品上之用途；一種以通 、厂甬之 <八σ物、或其醫藥上可接 又瓜於W備用於治療纖維肌痛症之醫藥品上之用途；一種 以通式I化合物、或其醫筚 丈鹽於製僙用於治療與 纖維肌痛症相關之疼痛之醫

酋樂ασ上之用途；一種以通式I 5物'或其醫藥上可接受踏 .s ^ 0 又孤於y備用於治療發炎性疼痛 、σπ上之用途；一種以通式I化合物、或豆醫举上可 接受鹽於製備用於，么庥夕„ 乂 /、诗樂上Γ 、甬…人痛之醫藥品上之用途；-種以 通式I化合物、咬里磐遂一 性關Μ κ…可接受鹽於製備用於治療風濕 性關即炎之醫藥品上之用 苴邀茲 途，及一種以通式I化合物、或 八醬樂上可接受鹽於製備 用途。 於-療月關即炎之醫藥品上之 本發明化合物為鹼類， >彳| — 口此了在與許多有機及無機酸反 …後开/成商樂上可接受鹽， 1本發明包括通式I化合物之 146616.doc 201103908 醫藥上可接受鹽。文中所用之術語「醫藥上可接受」係指 對活的生物體大體上無毒性之通式I化合物之任一種鹽。 〇亥等鹽包括彼等於 Journal of Pharmaceutical Science，66, 2-19 (1977)中所列者，其為熟習此項技術者所知。 【實施方式】 引起持續性疼痛之原因為：身體結構或内臟之慢性病變 過私或周邊或中樞神經系統或該二者之長期及有時候永 久性之功能障礙。持續性發炎、組織損傷、或神經受損導 致脊髓中之背角神經元過度激發，該過程亦稱為中枢敏感 化。中樞敏感化之特徵為背角神經元之反應改變、感受領 域擴大、及疼痛傳導路徑内之神經連接可塑性。該等過程 導致上行疼痛路徑及脊椎上位點内之神經元活動增加及/ 或内源性脊椎及脊椎上下行疼痛抑制機制功能障礙/解除 抑制。 中樞敏感化及解除抑制可導致自發性、持續性疼痛之病 症增加、及對疼痛刺激之敏感度增加（痛覺過敏）或對正常 非疼痛機械或熱刺激之疼痛經歷的敏感度增加（異常疼 痛）。C.J. Woolf，pain : Moving fr〇m Sympt〇m toward Mchanism-Specific Pharmacologic Management,

Annals of Internal Medicine，140, 441-451 (2004)。推斷該 等過程係造成多種類型之持續性或慢性疼痛之基礎，包括 神經病變性疼痛（包括糖尿病神經病變、與AIDs相關之感 染性神經病變性疼痛、非外科手術腕隧道症候群、帶狀皰 疹後神經痛、子宮頸、胸廓及腰薦椎神經根病變、三叉神 1466I6.doc 201103908 痛複σ性區域疼痛症候群〗及π、由化學療法誘發之神 經病變性疼痛及中框#經病變性疼痛症候群，⑽脊髓受 損:多發性硬化症或與中風相關之疼痛）、發炎性疼痛（包 括多肌痛、風濕性關節炎及骨關節炎）、及非神經病變 性i非發炎性疼痛（包括慢性疲勞症候群、無神經根病變 之k ί·生奇部疼痛、纖維肌痛症、慢性緊張型頭痛、發炎性 腸病、腸激躁症候群、鞭抽式創傷、包括間質性膀胱炎之 慢性骨盆疼痛、及顳下頜關節障礙（TMJD))。 確定在内源性疼痛抑制路徑中解除抑制與血清素及正腎 上腺素之不平衡之間之關係後，即可成功評定血清素及正 腎上腺素再吸收抑制劑於人類治療慢性疼痛病症上之作 用。因此，作為血清素及正腎上腺素再吸收之雙重活性抑 制劑之通式I化合物適用於為哺乳動物治療慢性疼痛，包 括糖尿病周邊神經病變性疼痛及纖維肌痛症。在一項較佳 貫施例中甫乳動物為人類。此外，通式I化合物適用於 治療抑鬱症（包括嚴重抑鬱症）、焦慮症（包括廣泛焦慮 症）、及失禁（諸如尿、壓力及混合類型之失禁）。（orjales， 等人 ’ Journal of Medicinal Chemistry，46(25)，5512-5532 (2003) ’ Fish，等人 ’ Bi〇〇rganic 及 Medicinal chemistry Letters，17, 2022-2025 (2007))。 文中所用之縮寫定義如下： 「HPLC」意指高效液相層析術。 「MS(ES+)」意指利用電子喷霧離子化之質譜。 「MTBE」意指曱基第三丁基醚。 146616.doc 201103908 「NMR」意指核磁共振術。 「THF」意指四氫呋喃。 「EtOAc」意指乙酸乙酯。 「MeOH」意指甲醇。 「DMSO」意指二曱基亞砜。 ^ SCX管柱」意指強陽離子交換管柱。 「Pd(OAc)2」意指乙酸鈀（II)。 「DMF」意指二曱基曱醯胺。 「n-BuLi」意指正丁基裡 「MeOAc」意指乙酸曱酯。 「（S)-Ru(OAc)2T-BINAP」意指二乙醯基[(S)-(-)-2,2，-雙 (二-對-甲苯膦基）-1，Γ-聯萘]釕（II)。 「DMA」意指二曱基乙醯胺。 「XRD」意指X-射線繞射術。 「TOCSY」意指全相關光譜術（Total Correlation Spectroscopy) 〇 「SERT」意指血清素轉運子。 「hSERT」意指人類血清素轉運子。 「Net」意指正腎上腺素轉運子。 「hNet」意指人類正腎上腺素轉運子。 「DAT」意指多巴胺轉運子。 「hDAT」意指人類多巴胺轉運子。 「HEPES」意指4-(2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸。 「SEM」意指平均值之標準差。 L S 1 146616.doc 201103908 pCA」意指對-氯苯丙胺β α-ΜΜΤ」意指α-曱基-間-酪胺酸。 ICm」意指達最大抑制度一半值之濃度。 ED5〇」意指有效劑量。 較佳本發明化合物為該等化合物，其中·· UR1為正丙基或異丁基（亦即2_甲基丙基_); ^R1為異丁基（亦即2-甲基丙基·）； 3)111為正丙基； 4) W為（CVC4)環烷基或（c^C4)環烷基-甲基_ ; 5) W為環丙基或環丙基曱基； 6) W為環丁基或環丁基甲基； 7) 各R2係獨立地選自 基、甲氧基、乙氧基、 8) 各R2係獨立地選自 基； :氯、溴、甲基、乙基、三氟甲 環丙基甲基氧基及三氟甲氧基； :氯、溴、甲基、乙基、及甲氧 T暴、及曱氧基 9)各R係獨立地選自 1〇)各R2係獨立地選自：曱基 為異丁一獨立地選自:及二基、’_ ::甲::甲基、甲氧基、乙氧基、環丙基心及 氣、溴' 曱基、 氣、曱基、及曱 12) Rl為異丁基且各r2係獨立地選 乙基'及曱氧基； 13) 111為異丁其日久 、Γ基且各R係獨立地ϋ 氧基； 146616.doc 201103908 係獨立地 14)Rl為異丁基且各R2 曱氧基； 15)111為正丙基且各R2係 乙基、三氟甲基'甲氧基' 三氟甲氧基； 選自··曱基'乙基、及 獨立地選自：氣、溴、甲基、 乙氧基、環丙基甲基氧基、及 氣、溴、曱基、 氣、甲基、及甲 曱基、乙基、及 16) R為正丙基且各r2係獨立地選 乙基、及甲氧基； 、 17) Ri為正丙基且各R2係獨立地選 氧基； ' 18) R1為正丙基且各R 2係獨立地選 甲氧基； ' :立: 烧基或(C3_C、基-甲基_，且以 ΓΓ;Τ:氣、漠、甲基1基、…基、甲 r基、環丙基甲基氧基、及三氟甲氧基； 且各I； 20)R為（kco環烧基或⑹弋）環烧基_曱基， 係獨立地選自：氯、演、甲基、乙基、及曱氧美； 且各Ϊ 2DR1為〜叫環烷基或(CVC4)環烷基-甲基_ , 係獨立地選自：氯、甲基、及曱氣基； 2WR1為（cvc：4)環烷基或（C3%)環烷基曱基…

2’且各R2係獨立地選自：曱基、己基、及甲氧基 寧1為環丙基或環丙基甲基，_或2，且各R 地選自.氯、演、曱基、乙基、三氟曱基、曱氧基、乙 基、環丙基子基氧基、及三氟甲氣基； 24)R〗為環丙基或環丙基曱基，11為1或2,且各R2係獨 146616.doc 201103908 地選自丨氯、溴、甲基、乙基、及曱氧基； 25)Rl為環丙基或環丙基甲基，11為1或2，且 地選自：氯、甲基、及甲氧基； 26)Rl為環丙基或環丙基曱基，n為，且各r 地選自：甲基、乙基、及曱氧基； 各R2係獨 立 係獨立 且各R2係獨立 曱氧基、乙氧 且各R2係獨立 且各R2係獨立 且各R2係獨立 27)^為環丁基或環丁基甲基，11為1或2， 地選自：氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、 基、環丙基曱基氧基、及三氟甲氧基； 2WR1為環丁基或環丁基曱基，11為1或2， 地選自丨:氯、溴、曱基、乙基、及甲氧基； 29)111為環丁基或環丁基曱基，11為1或2， 地選自：氣、曱基、及曱氧基； 為環丁基或環丁基曱基，11為1或2 地選自：甲基、乙基、及曱氧基； 31)對於上述所引用之實施例7至3〇之每—項，更佳之 合物為彼等其中η為2,且R2取代基係取代於㈣基:及6 上之化合物。 一種特別佳之本發明化合物為（3扑3_((8)丨_(6_甲氧基_2_ 甲基-3-吼啶基氧基）_3·甲基·丁基）_吼咯啶、或其醫藥上可 接受鹽，例如於實例19、19A、及19B中所列舉之例如^_ 及/或D-酒石酸鹽。 通式I化合物中具有兩個掌性中心，以下皆以「*」標 記： 146616.doc -12· 201103908

通式1化合物可呈多種 八仔在’諸如消 旋物、及非對映異構體及對映異構體。 若該^合物中於吼㈣環3_位之掌性中心呈如通式^ 要求之「S」絕對組態存在時’ τ顯著改善化合物之$ 性。化合物可於側鏈Γ-位具有呈「R」絕對組態、「S」I 對組態、或其混合物之掌性中心： 、-、e

純立體化學性之化合物通常比消旋物更佳。—種立體显 構體之活性通常比另一種强β較佳化合物為彼等具有兩個 呈「s」絕對組態之掌性中心者：

通式I化合物之特定立體異構體及對映異構體可由一般 技術者利用熟知技術及方法製得（諸如彼等揭#於如下文 acques，專人，「Enantiomers, Racemates, and 146616.doc -13- 201103908

Resolutions」，John Wiley及 Sons，Inc·，1981，及 E.L. Eliel 及 S.H. Wilen，Stereochemistry of Organic Compounds」， (Wiley-Interscience 1994)，及 European Patent Application No. EP-A-838448，於1998年4月29曰公開）。解析實例包括 再結晶技術或掌性層析。 本發明化合物可根據以下合成反應圖，藉由相關技術中 熟知且較佳之方法製得。該等反應圖中步驟的適宜反應條 件係相關技術中熟知，且溶劑及共試劑之適宜替代係於相 關技術之技術範圍内。熟習此項技術者同樣咸瞭解，若需 要或必要時，可藉由多種熟知技術分離及/或純化合成中 間物，且可於隨後之合成步驟中，在幾乎不純化或不純化 下直接使用多種中間物。此外，熟習此項技術者咸瞭解， 有時候，引入基團之順序並不重要。如熟習之製藥家咸瞭 解，製備本發明化合物所需之步驟的特定順序取決於計晝 合成之特定化合物、起始化合物、及所選取代基之相對不 穩定性。除非另外指出，否則取代基Rl&R2之定義如前， 且所有試劑係相關技術中所熟知且較佳者。如相關技術中 所熟知，Pg為氮保護基團（參見Wuts&Greene，Greene,s Protective Groups in 〇rganic Synthesis 第四版第七 早 ’ John Wiley及 Sons Inc·, (2007))。 反應圖1

146616.doc •14- 201103908 於高溫下，令起始物醇（a)與諸如氫化鈉之適宜鹼、及經 適宜取代之芳基氟化物，於諸如二曱基亞砜之適宜溶劑中 反應’產生醚（b)。或者，可令醇（a)與經適宜取代之β比啶 在標準Mitsun〇bu條件下反應，產生醚（b)。隨後在熟習此 項技術者所熟知之條件下，使醚脫除保護基，產生通式 化&物（例如參見.Greene及Wuts, supra)。隨後於諸如 曱醇之適且溶劑中，以諸如L-酒石酸、D-酒石酸、或HC1 之醬藥上可接受酸處理所得之胺，產生通式〖化合物之醫 藥上可接受鹽。 可如以下反應圖中所述，製得所需醇（a)，其中Rl、R2及 pg之定義如前。 反應圖2

7 N-文保濩之吡咯啶_3_甲酸二甲基-羥基胺在 標準醯胺偶合條件下反應，I生溫瑞伯（獅_)酿胺 (句。令該醯胺與適宜有機金屬親核物反應，產生酮（e)。 於標準條件下，諸如利用含喊化鈉之甲醇溶液，使嗣⑷ 還原’產生醇(a)。或者’可於諸如四氫呋喃之適宜溶劑 146616.doc -15- 201103908 中，以諸如雙（三曱基矽烷基）胺化鋰之適宜鹼處理N受保 4之2-吡咯啶酮（f)，且令所得陰離子與醛反應，產生加成 產物（g)。於標準條件下還原醯胺部份基團，諸如在高溫 下，於四氫呋喃中，與硼_曱基硫化物反應，產生醇（a)。 引入6-曱氧基形成6_甲氧基_2•甲基比咬基氧基吼洛。定 衍生物之步驟可由相應之6_氯_2•甲基_3吡啶基氧基衍生 物之游離胺於標準親核性芳香族取代條件下，卩甲醇鹽親 核性取代氣，產生如反應圖3所示之所需化合物。 反應圖3

%、Μ卜裂法及實例令 s4>mix)表示通式 咯咬環3-位上之掌性令心係呈「s」絕對組綠，且第二 性中心(前文稱為η為「S」*「R」之混合物的中間體 化合物。當該對應_間體或通式他合物利用層析術分 對映異構η合物時，㈣標記表示第 對映異構體或衍生自該第一溶離對映異構體。類：出 該對應合物湘 旦 混合物時，採用標記㈣表示第二個溶離;=異構: 或衍生自該第二個溶離出之㈣ 、異構j 再體备中間體或ii 3 1化合物利用層析術分離非對映異構體時，採用，： 表第個洛離出之非對映異構體或其街生物。類似的， 146616.doc -16- 201103908 當中間體或通式i化合物刹田麻α 利用層析術分離非對映異構體 時’採用標記（D2)表示第二個玄 個/合離出之非對映異構體或兑 衍生物。採用標記（D1-E1)及mi pm \ • 及（D1-E2)分別表示該中間體或 通式I化合物之第一個溶離之非董 *心井對映異構體之第一個及第 二個溶離之對映異構體或其衍生物。類似的，採用標記 (D2-E1)及(D2-E2)分別纟示該中間體或通式j化合物之第二 個溶離之非對映異構體之第一個及第二個溶離之對映異構 體或其衍生物。該等一般規則之例外為：當利用醇（a)進行 Mitsunobu反應，將導致Γ碳轉變組態。在該等實例中，設 計（s-i)起始醇產生（s_2)產物，且（D1)起始醇產生（D2)產 物。 以下製法及實例為適用於合成本發明化合物之闡述性方 法。製法及實例中所述之許多化合物之名稱係由利用 ChemDraw Ultra 1〇.〇所繪製之結構提供。 製法1 : (S)-3-(3-甲基丁醯基）吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯

〇 (S)-3-(甲氧基（甲基）胺甲酿基）_吡咯啶甲酸第三丁基酯 逐份添加1，1，-羰基二咪唑（414.33 g，2.56 mol)至經攪拌 之含（S)-N-第三丁氧基羰基吡咯啶_3_甲酸（5〇〇 g，2.32 mol)之二氯曱烷（5.8i l)溶液，並於氮氣中，在室溫下攪 146616*doc 201103908 拌1小時。添加Ν,Ο-二-曱基羥基胺鹽酸鹽（253.04 g，2.5 6 mol)並於室溫下攪拌48小時。利用IN HC1中止反應，並利 用乙酸乙酯（2X)萃取。利用飽和NaHC03及鹽水洗滌合併 之有機相。乾燥（MgS04)、過濾並於減壓下濃縮，產生535 g(89%)標題化合物。MS(m/z)=203(M-55)。 添加格林納試劑（Grignard)至溫瑞伯（Weinreb)酿胺 逐滴添加含異丁基溴化鎂（2.0 Μ四氫呋喃（THF)溶液， 63.47 mL，126.94 mmol)之 THF(50 mL)溶液至保存於-7°C 下之氮氣中的經攪拌之含（S)-3-(曱氧基（甲基）胺曱醯基）-0比σ各0定-1-曱酸第三丁基醋（21.86 g，84.62 mmol)之 THF(400 mL)溶液。於-5°C下攪拌1小時，讓反應物回升至 室溫，並繼續攪拌過夜。添加飽和氯化銨水溶液並利用乙 酸乙酯（2X)萃取。乾燥（MgS04)、過濾並於減壓下濃縮。 以含乙酸乙酯（EtOAc)之己烷溶液（0-20%梯度）為溶離液， 藉由矽膠層析術純化殘質，產生21.6 g (99.6)標題化合 物。 大體上如製法1所述，製得製法2至5中之化合物。 製法 化合物 結構 MS (m/z) 2 (S)-3- 丁 -3-炸酿基D比洛淀· 卜曱酸第三丁基酯 0 人人。 146616.doc •18- 201103908 3 (S)-3-i^丙基 >炭基比洛°定_ 1·曱酸第三丁基酯 0 ,0^ 262 (M+23) 4 (S)-3-丁醯基-吡咯啶-1-曱 酸第三丁基酯 〇 264 (M+23) 製法5 : (S)-3-環丁基羰基-吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯 〇

於氮氣中，添加二異丁基氫化鋁（1 Μ曱苯溶液，0.790 mL，0.790 mmol)至經攪拌之於THF(1 mL)中之鎂（0.960 g，39.5 mmol)及蛾（0.100 g，0.395 mmol)的混合物中。逐 滴添加含環丁基溴化物（8.00 g，59.2 mmol)之THF(10 mL) 溶液，並於60°C下攪拌反應物2小時，直至耗盡所有鎂。 將混合物冷卻至室溫，並逐滴添加含（S)-3-(曱氧基（甲基） 胺曱醯基）-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（10.2 g，39.5 mmol) 之THF(50 mL)溶液。於室溫下攪拌反應混合物2.5 h。以1 Μ檸檬酸水溶液終止反應，並以EtOAc萃取。利用水及飽 和NaCl水溶液洗滌有機層，乾燥（Na2S04)，並於減壓下濃 縮。以含EtOAc之己烷溶液（0-50%梯度）為溶離液，藉由 矽膠層析術純化殘質，獲得標題化合物（5.30 g，53%)。 146616.doc -19- 201103908 製法6 . (3S)-3-(l-經基·3·甲基-丁基卜比咯咬·i甲酸第三 丁基酯，異構體l(S-l)及異構體2(s_2)

逐份添加硼氫化鈉（15.2 g，423 mm〇l)至含（s)_3(3_甲基 丁醯基）-吡咯啶q-甲酸第三丁基酯（21 6 g，84 6 mm〇i)之 甲醇（500 mL)溶液，並於室溫下攪拌過夜。再添加【當量 之硼氫化鈉（3.04 g，84.6 mmol)。再攪拌2小時，蒸發甲 醇’使體積減半’添加鹽水並以EtOAc萃取。使合併之有 機相乾燥（MgS〇4)，過濾，並於減壓下濃縮。以含〇 2%二 乙基甲基胺之10% Me〇H/C〇2為溶離液，藉由超臨界液相 層析術（AD-H管柱）分離非對映異構體，產生（38) 3_(1_經 基-3-甲基-丁基）-吡咯啶_1-甲酸第三丁基酯之第一個溶離 之異構體（異構體l(S-l) ’ 8.2 g，38%)及（3S)-3-(l-經基_3_ 曱基-丁基）-η比咯啶-1-曱酸第三丁基酯之第二個溶離之異 構體（異構體 2(S-2)，8.9 g，41%))。 襲法7. (3S)-3-(l-經基-丁基）_β比β各咬-1-曱酸第三丁基g旨， 異構體l(S-l)及異構體2(S-2)

〇 146616.doc -20- 201103908 逐份添加硼氫化鈉（5·19 g，145 mmol)至含（s)_3-丁醯 基-吡咯啶-1·甲酸第三丁基酯（7.0 g，29.0 mmol)之甲醇 (200 mL)溶液，並於室溫下攪拌過夜。再次添加硼氫化鈉 (1‘4 g，39 mmol)，並於室溫下攪拌！小時。蒸發甲醇，使 體積減半，添加鹽水並以乙酸乙酯萃取。乾燥合併之有機 相（MgS〇4)，過濾並於減壓下濃縮。以含5%異丙胺之己燒 洛液為溶離液’藉由石夕膠層析術分離非對映異構體，產生 (3S)-3-(l-羥基-丁基）-吡咯啶·ι·甲酸第三丁基酯之第一個 溶離之異構體（異構體l(S-l)，2.6 g，37%)及（3S)-3-(l-經 基·丁基）-吡咯啶-1 _甲酸第三丁基酯之第二個溶離之異構 體（異構體 2(S-2)，1.8 g，26%)。 可大體上如製法7中所述，製得製法8至9中之化合物。 製法 化合物 MS(m/z) 8 (3S)-3-(環丙基(羥基）曱基） 吡咯啶-1-曱酸第三丁基 酯，異構體l(S-l) ^γΟΗ ό _ (3S)-3-(環丙基(羥基）甲基） ^γ〇Η 9 吡咯啶-1-甲酸第三丁基 酯，異構體2(S-2) ό Υ 夂0 製法10. (3S)-3-(i哀丁基_輕基-甲基）_°比略α定-1-甲酸第三丁 基酉旨（S-mix) 1466l6.doc -21 - 201103908

V1 添加棚氣化鈉（1.19 g，4 mmol)至保存於〇°C之氮氣 氛圍中之經攪拌的含（s)_3_環丁烷羰基_吡咯啶_丨_曱酸第三 丁基酯（5.30 g ’ 20.9 mm〇1)2Me〇H( 1〇5 mL)溶液。攪拌混 合物2小時’同時回升至室溫。濃縮Me〇H，以二氯曱烧稀 釋’並以飽和NaHC〇3水溶液、水及鹽水洗滌有機相。乾 燥（MgSCU) ’過濾並於減壓下濃縮，產生呈非對映異構體 混合物（S-mix)之標題化合物（4.4 g，82%)。 製法11 : (3S)-3-(l-羥基_3_丁烯基）-吡咯啶-1-曱酸第三丁 基酉旨（S-mix)

可利用（3S)-3-( 丁 -3-烯醯基吡咯曱酸第三丁基酯， 且大體上如製法1 0中所述製得製法11中之化合物。 製法12 : 3-(1-羥基-3-甲基-丁基吡咯啶甲酸第三丁基 酯，非對映異構體UP1)

146616.doc • 22· 201103908 3-(1-經基-3-曱基-丁基）_2_側氧基_吨洛咬甲酸第三丁基 SI ’非對映異構體1(D1)及非對映異構體2(D2) 於-78C下’添加雙（三甲基矽烷基）_胺化鋰（1〇 μ THF 溶液，148 mL，148 mmol)至含2-側氧基-吡咯啶•甲酸第 三丁基酯（25_0 g，134 mmol)之THF(450 mL)溶液，並於氮 氣中攪拌2小時。添加3_甲基·丁醛（17 5 mL，162 mmol)， 11¾後添加二氟化侧-乙醚複合物（20.5 mL，162 mmol)，並 繼續於-78 C下授拌2小時。使混合物回升至室溫，利用飽 和氯化敍水溶液（25〇 mL)終止反應’並利用EtOAc(3X)萃 取。乾燥合併之有機相（Na2S04)，過濾，並減壓濃縮。將 粗產物分成兩等分’分別以〇_40% EtOAc之己烷溶液為溶 離液’藉由石夕膠層析術純化，產生3-(1-經基-3-甲基-丁 基）-2-側氧基-吡咯啶-1 ·曱酸第三丁基酯之第一個溶離之異 構體’非對映異構體 1(12.5 g ’ 34%)(D1，MS(m/z)=216.0 (M-56))及3-(1-羥基-3-曱基-丁基）-2-側氧基-吡咯啶_ι_甲酸 第三丁基酯之第二個溶離之異構體，非對映異構體2(3 87 g，llQ/〇)(D2)，MS(m/z)=216.0(M-56))。 醯胺還原法 缓慢添加硼·甲基硫複合物（2.0 M THF溶液，68.8 mL， 138 mmol)至保存於氮氣中之含3-(1-羥基-3-曱基-丁基）-2-側氧基-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（Dl)(12.5 g，45.9 mmol) 之THF(220 mL)溶液。加熱混合物，回流2小時，並利用飽 和氯化錄水溶液（200 mL)終止反應。以乙酸乙酯（2X)萃 取。以H2O(100 mL)、5% 檸檬酸（100 mL)及鹽水（100 mL) 146616.doc •23- 201103908 洗滌合併之有機相。乾燥（NajO4)，過濾，並於減壓下濃 縮。以0-40% EtOAc之己烷溶液為溶離液，藉由矽膠層析 術純化殘質，產生10.7 g(91%)標題化合物。 MS(m/z)=202.0(M-56)。 製法13 : (3S)-3-(2-環丙基-1-羥乙基）吡咯啶-1-甲酸第三丁 基 S旨（S-mix)

於〇°C下，在氮氣中，添加乙酸鈀（π)(5〇 〇 mg，0.22 mmo1)至經授拌之含（3S)-3-(l-羥基丁 -3-稀基）η比洛。定-1-甲 酸第三丁基酯（S-mix)(3.0 g，12.43 mmol)及新鮮製得之重 氮甲烷（50 mL，於乙醚中約23.8 mmol)之THF(20 mL)溶液 (注意：氣體劇烈釋出）^於〇°C下攪拌1 〇分鐘。回升至室 溫，倒入水中’並以乙酸乙酯（3χ)萃取。利用水及鹽水洗 滌合併之有機相。乾燥（MgS〇4)，過濾，並於減壓下濃 縮。殘質以含〇· 1 00。/。乙酸乙酯之己烷溶液為溶離液進行矽 膠層析’產生2.9 g(91%)標題化合物。MS(m/z)=200.0(M-55)。 製法14 : 3-(2-環丁基-1-羥乙基）吡咯啶_丨_曱酸第三丁基酯

146616.doc -24- 201103908 3-(2-( 一乙氧基填酿基）乙酿基略咬-1-甲酸第三丁基酯 於-78 C下之氮氣中，經15分鐘，逐滴添加丁基鋰（98 〇 mL，157 mmol)至含甲基膦酸二乙基酯（23 6 g，155 mm〇1) 之THF(194 mL)溶液。添加含（s)_3_(甲氧基（甲基）胺甲醯 基）吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯（5〇 g，194 mm〇l)之THF溶 液並於_78 C下攪拌3.5小時。倒入水中，並以乙酸乙酯 (3X)萃取。利用水及鹽水洗滌合併之有機相。乾燥 (MgS〇4)，過濾，並濃縮。殘質以含〇_5〇%丙酮之氯仿溶 液為/合離液進行矽膠層析’隨後以含〇_3〇%丙酮之二氯曱 烷洛液為溶離液，再次進行矽膠層析，產生315 g(47%)之 所需化合物。MS(m/z)=294.0(M-55) 3-(2_亞環丁基乙酿基）吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯 "】、、加環丁酮（0.738 mL，9.89 mmol)至保存於5。(：及氮氣 下的έ 3-(2-(一乙氧基碌酿基）_乙醯基）。比Β各咬_ 1 -甲酸第三 丁基 S日（3.14 g，8.99 mmol)及氫氧化鉀（656 mg，11,7 mmol)之乙醇（45 mL)授拌混合物中。回升至室溫，並攪拌 3小日寸。於減壓下濃縮，殘質以含2〇%乙酸乙酯之己烷溶 液為溶離液進行矽膠層析，產生〇85 g(36%)所需化合物之 粗產物，其不再進一步純化即用於後續步驟。 3-(2_環丁基乙醯基）吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯 、/皿卜，在鼠氣中，添加碳載鈀（50 mg，催化劑）至 3 (2亞環丁基·乙醯基）。比咯啶_ 1 -曱酸第三丁基酯（85〇 mg 3·20 mmol)之乙酸乙酯（25爪匕）溶液，並攪拌。安装 氫轧虱球，並攪拌過夜。經過矽藻土過濾反應物，以乙酸 146616.doc 25· 201103908 乙酯沖洗，並濃縮至乾燥，產生391 mg(46Q/〇之所需化合 物。MS(m/z)=212.0(M-55)。 還原法 於0 C下，逐份添加硼氫化鈉（71 9 mg ,丨9〇 mm〇1)至含 3-(2-環丁基乙醯基）吡咯啶_丨_曱酸第三丁基酯（391 ， 1.46 mmol)之甲醇（7.31 mL)溶液中。於室溫下攪拌過夜。 於減壓下濃縮，以水稀釋並以乙酸乙酯（3χ)萃取。以飽和 NaHCCh水溶液、水及鹽水洗滌合併之有機相。乾燥 (MgSCU) ’過濾，並減壓濃縮，產生〇·39 g(97%)標題化合 物。MS(m/z)=214.0(M-55) 製法15 : (3S)-3-[2-環丙基-i_(6_氣_2_曱基_3_吼啶基氧基）_ 乙基]-吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯，異構體及異構體 2(S-2)。

於室溫下緩慢添加氫化鈉（60%，94.0 mg，2.3 5 mmol)至 保存於氮氣氛圍中之（3S)-3-(2-環丙基-1-羥基-乙基）-吼略 啶-1-甲酸第三 丁基酯（S-mix)(31.5 g，123.36 mmol)與 DMSO(11.8 mL)之混合物《攪拌10分鐘，隨後添加2_氯-5· 氟甲基吡啶（359 mg，2.47 mmol)。加熱至6(TC並攪拌過 夜。將反應物冷卻’倒入水中，並以乙酸乙酯（3X)萃取。 以水及鹽水洗滌合併之有機萃取物。乾燥（MgS04)，過渡 146616.doc •26· 201103908 並濃縮。以含20%乙酸乙酯之己烷溶液為溶離液，藉由石夕 膠層析術純化粗殘質，產生（3S)-3-[2-環丙基-1-(6-氯-2-曱 基-3-吡啶基氧基）-乙基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯之第一 個溶離之異構體（異構體1 ’（S-l)(99 mg，22%))及（3S)-3-[2-環丙基-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基）_乙基]_吡咯啶 曱酸第三丁基酯之第二個溶離之異構體（異構體2，（3- 2)(80 mg，18%))。MS(m/z)=325.〇(M-55) 可大體上如製法15中所述製得製法16至23中之化合物。 製法 化合物 __------- 結構 非對 映異 構體 MS(m/z) 16 (3S)-3-[l-(2-三氟1 曱基-3-D比啶基氧基)-3-甲基-丁 基]-吡咯啶-1-曱酸第三 丁基酯 Fvl-F 衫N A >=0 --------—— S-1 425(M+Na) 17 (3S)-3-[l-(2-三氟甲基-3-D比啶基氧基)-3-曱基-丁 基]-吡咯啶-1-甲酸第三 丁基酯 ^Ν S-2 425(M+Na) 18 (3S)-3-[l-(2-三氟曱基-3-0比啶基氧基>1-環丁基-曱基]-吡咯啶-1_甲酸第 三丁基酯 '—Ν S-1 423.2(M+23) 19 (3S)-3-[l-(2-三氟曱基_3_ °比啶基氧基)-1·環丁基_ 曱基]比咯咬-1-曱酸第 三丁基酯 X >=0 r° — 丨丨 — S-2 423.2 (M+23) 146616.doc -27- 201103908 20 (38)-3-[1-(6-氯-2-甲基- 3-11比啶基氧基)小環丁 基-甲基]比洛咬-1-曱酸 第三丁基酯 °χώα '―Ν S-l 325.2 (M-55) 21 (3S)-3-[l-(6-氣·2-曱基-3-。比啶基氧基)小環丁 基-甲基]比洛唆-1-甲酸 第三丁基酯 °χώα '―Ν S-2 325.2 (M-55) 22 氣-2-曱基-3-吡啶 基氧基)-2-環丁基-乙基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁 基酯 D-l 339.2 (M-55) 23 3-[1-(6-氯-2-甲基-3-。比π定 基氧基)_2_環丁基-乙基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁 基S旨 十>。 D-2 339.2 (M-55) 製法24 : 3-[l-(6-氯-3-吡啶基氧基）-3-甲基-丁基]_吡咯啶_ 1-甲酸第三丁基酯，異構體1(D2E1)及異構體2(D2E2)

Mitsunobu 反應 於室溫下，向含3·(1·羥基-3-曱基-丁基）―吡。各啶q-曱酸 第二 丁基酯（D1)(60〇 mg，2_33 mmol)及 2 -氣-5-經基 比唆 (0.451 g ’ 3.50 mmol)之曱苯（1〇 mL)溶液通入氮氣10分 鐘。添加二正丁基膦（0.872 mL，3.50 mmol)，且隨後添加 146616.doc •28· 201103908 偶氮—甲酸二哌啶（0.882 g，3·5〇 mmol)。將反應混合物加 熱至70C，並攪拌過夜。再添加3_(卜羥基_3_甲基_ 丁基 °比洛唆-1-甲酸第三丁基酯（D1)(6〇〇 mg，2 33 _〇1)、三 正丁基膦（0.872 mL ’ 3.50 mmol)及偶氮二甲基二D底口定 (0·882 g，3.50 mmol)。於70°C下，繼續攪拌3小時。將混 合物冷卻至室溫，並倒入飽和NaHCCh水溶液。利用乙酸 乙醋（2X)萃取，合併有機相萃取物，乾燥（Na2S〇〇，過遽 並濃縮。以含0-20。/。乙酸乙酯之己烷溶液為溶離液，藉由 矽膠層析術純化粗殘質，產生18〇 mg、[丨气心氯一^比啶基 氧基）-3-曱基-丁基]_吡咯啶d-甲酸第三丁基酯（D2)，進行 掌性分離。 掌性層析解析 以含0.2%二乙基曱基胺之12%異丙胺/C〇2為溶離液，於 OD-H管柱上’利用超臨界液相層析術，分離 吼啶基氧基）-3-甲基-丁基]-吡咯啶-1-甲酸第三丁基酯（D2) 異構體混合物，產生3-[l-(6 -氯- 3-°比β定基氧基）-3-.曱基-丁 基]-π比11各咬-1 -甲酸第三丁基醋之第一個溶離之異構體 (D2E1，80.6 mg’ 9.4%)及 3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基）_3·曱 基-丁基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯之第二個溶離之異構 體（D2E2 ’ 81.2 mg，9.4%)。 MS(m/z)=391[M+l]。 可大體上如製法24中所述製得製法25至28中之化合物。 146616.doc .29- 201103908 製法 化合物 結構 非對映 異構體 分離條件 MS(m/z) 25 3-[1-(2-氯-4-曱 基-3- °比咬基氧 基)-3-曱基-丁 基]-〇比°各〇定-1-甲 酸第三丁基酯 '―Ν \ >=° V D2E1 AD-H， 50/〇 MeOH， 0.2% DEMA 405 (M+Na) 26 3-[1-(2-氯-4-甲 基-3-11比D定基氧 基）-3-曱基-丁 基]比洛咬-1-曱 酸第三丁基酯 '―Ν A )=° D2E2 AD-H，5% MeOH， 0.2% DEMA 405 (M+Na) 27 3-[1-(2-甲基-3-吼啶基氧基)-3-曱基-丁基]-吡 咯啶-1-甲酸第 三丁基酯 '―Ν D2E1 OD-H ’ 10〇/〇 MeOH， 0.2% DEMA 371 (M+Na) 28 3-[1-(2-甲基-3-°比π定基乳基)-3_ 曱基-丁基]比 咯啶-1-甲酸第 三丁基酯 ^-Ν V >=° V D2E2 OD-H，10% MeOH， 0.2% DEMA 371 (M+Na) 製法29 : (3 S)-3-[ 1-(6-氣-2-曱基-3-吡啶基氧基）-3-甲基-丁 基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（S-2)

混合氫化納（6〇Q/〇，121.2 mg，3.03 mmol)、（3S)-3-(l-經 146616.doc -30· 201103908 基-3-甲基-丁基）-吡咯啶_丨-甲酸第三丁基酯（S-2)(0.65 g， 2.53 mmol)及DMSO(1〇.〇 mL)。於氮氣氛圍中，在室溫 下，攪拌混合物1小時。添加2-氣-5-氟甲基吡啶（2.21 g， 15.2 mmol)並於70°C下攪拌該混合物過夜。將混合物冷卻 至室溫，利用鹽水終止反應，並以乙酸乙酯萃取。合併有 機相萃取物，並乾燥（MgS04)，過濾並濃縮。以含0-20% 乙酸乙酯之己烷溶液為溶離液，且隨後以含20%乙酸乙酯 之己烷溶液為溶離液，藉由矽膠層析術純化粗殘質，產生 〇_58 g(60°/〇)標題化合物。MS(m/z) = 425.0(M+23)。 製法3〇: 6-罗氧基-；2-曱基-吡啶_3_醇

OMe 添加過氧化氫（7·69 mL，89_8 mmol)至保存於室溫下， 於氮氣中的含2-曱氧基-6-曱基-5-°比咬基二經基硼酸（5.〇 g ’ 30 mm〇l)之二氯曱烷（1 〇〇 mL)攪拌混合物中。於周溫 下授拌過夜’添加水並以二氣甲烷萃取該混合物。合併有 機相’乾燥（MgSCU)，過濾並濃縮，產生2.6 g(62%)標題化 合物。MS(m/z)=140[M+l] 實例1 · (3S)-3-[ 1-(6-氣-2-甲基-3-。比啶基氧基）-2-環丙基-乙基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-1)

1466l6.doc •31 - 201103908 脫除保護基 添加三氟乙酸（1.51 g，1.0 mL，13.2 mmol)至含（3S)-3-[1-(6-氣-2-甲基-3-。比啶基氧基）-2-環丙基_乙基]•吡咯啶 甲西义弟二丁基醋（S-l)(99.0 mg ’ 0.260 mmol)之甲氧基笨 (1.0 mL)及二氣甲烧（2.0 mL)溶液中。於室溫下，在氮氣 中攪拌1小時。將混合物直接裝入經預填裝之sex管柱， 並以CHAb，且隨後以CHsOH沖洗。利用含2 μ NH3之甲 醇溶液溶離，並減壓濃縮，產生58 mg(79%) (3S)-3-[l-(6_ 氣-2-曱基-3-吼啶基氧基）-2-環丙基-乙基]_吡咯啶（^)。 MS(m/z)=281.2[M+l] 形成鹽 添加 L-酒石酸（31.0 mg，0.207 mmol)至含（3S)-3-[l-(6- 氯-2-曱基-3-。比啶基氧基）-2-環丙基-乙基]_吡咯啶ο-ΐ )(5 8.0 mg ， 0.207 mmol)之曱醇 （2 mL)溶液 。於室 溫下， 在氮氣中攪拌該混合物1小時。濃縮並於真空爐中乾燥， 獲得89.0mg(99%)標題化合物。 MS(m/z)=281.0[M+l] 可大體上如實例1所述製得實例2至8中之化合物。 實例 化合物 結構 非對映 MS, --:--- 3-[ 1-(2-氣-4-甲基-3, °比咬 Λνι 異構體 m/z 2 基氧基)-3-曱基-丁基]-。比 咯啶，L-酒石酸鹽 γΤ°ΓΓ〇η ：h〇Vy- OH Ο D2E2 283 [M+l] 146616.doc •32· 201103908 3 3-[ 1-(6-氯_3 - °比σ定基氧!基)_ 3_曱基-丁基]-σ比洛。定’ L- 酒石酸鹽 卜 Vy〇h OH 0 D2E2 269 [M+l] 4 (3S)-3-[l-(2-三氟甲基-3-°比咬基氣基)-3-曱基-丁 基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽 (1 0 OH r H〇 Vy〇h OH 0 S-l 303 [M+l] 5 3-(3-曱基-1-(2-甲基-3-吡 啶基氧基)丁基)吡咯啶， L-酒石酸鹽 (^\ 〇 OH ；h〇Vy〇H OH 0 D2E2 249 [M+l] 6 (3S)-3-(環丁基(2-(三氟曱 基)-3-。比啶基氧基)曱基)。比 咯啶，L-酒石酸鹽 0½ N 一 h F u 0 OH h〇Vt〇H OH 0 S-l 301 [M+l] 7 (3S)-3-(環丁基-(6-氯-2-曱 基-3-吼啶基氧基）甲基)吼 咯啶，L-酒石酸鹽 N」 u 0 OH h〇W〇h OH 0 S-l 281.2 [M+l] 8 3-(2-環丁基-1-(6-氯-2-曱 基-3-吼啶基氧基)-乙基户比 咯啶，L-酒石酸鹽 0 OH H H〇W〇H OH 0 D1 295.0 [M+l] 實例9 : (3S)-3-(3-曱基-1-(2-曱基-6-甲基胺基-3-°比啶基氧 基）丁基）-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-2)

1466l6.doc -33- 201103908 經Pd催化之偶合反應 向5 mL微波容器添加0.294 mL含10 mg/mL Pd(OAc)2(2.93 mg，0.013 mmol)之甲苯溶液。於氮氣氛圍 中’添加 0.756 mL 10 mg/mL 之含cataCXium@PtB(購自 Degussa [(N-苯基-2-(二-第三丁 基膦）吡咯])(7.50 mg， 〇·〇26 mmol)之甲苯溶液及第三丁醇鈉（30.2 mg，0.314 mmol)。添力口 1 mL 10 mg/mL之含（3S)-3-[l-(6-氯-2-曱基-3- °比啶基氧基）_3_曱基-丁基]-吡咯啶-1_曱酸第三丁基酯（8-2)(0·100 g，〇 261 mmol)之甲苯溶液及曱基胺（0.392 mL， 0-785 mmol)。於150°C下加熱反應混合物1·5小時。添加 Si-SH樹脂並攪拌2小時，以清除Pd。將粗混合物倒至預填 裝之SCX-管柱，以曱醇洗滌，釋放包括含2 Μ NH3之曱醇 溶液的產物，並濃縮。粗產物不再進一步純化，即用於後 續步驟。MS(m/z)=378[M+l] 脫除保護基團 於室溫下，攪拌（3S)-3-[l-(2-曱基-6-甲基胺基-3-吡啶基 氧基）-3-曱基-丁基；吡咯啶_丨-甲酸第三丁基酯（S-2)及HC1 水溶液（4 Μ，0.261 mL，1.04 mmol)之混合物1小時。在完 全轉化之後，濃縮該混合物，溶解於二氣曱烷並將混合物 裝入預填裝之SCX管柱。依序以二氯曱烷，且隨後以曱醇 洗滌。釋放包括含2 Μ NH3之曱醇溶液的產物，並減壓濃 縮。藉由逆相層析術（17-43%梯度含乙腈之〇.〇1 Μ曱酸銨 水溶液之溶液，85 mL/min，進行8 min。C18 ODB XBridge管柱，30x75 mm，5 μιη)純化粗殘質，產生9 mg 146616.doc • 34· 201103908 (12%)(3S)-3-[l-(2-曱基-6-甲基胺基-3-吡啶基氧基）-3-曱 基-丁基]-吡咯啶（S-2)。MS(m/z)=278[M+l]。 L-酒石酸鹽製法係由純化物質溶解於乙腈/甲醇（5 : 1)之 混合物中。添加IN L-酒石酸水溶液（1.05當量）。將混合物 凍乾’產生標題化合物固體。MS(m/z)=278[M+l] 實例10 : (3S)-3-[l-(6-環丙基胺基-2-甲基-3-。比啶基氧基）-3-甲基-丁基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-2)

可大體上如實例9所述，製得標題化合物。 MS(m/z)=304[M+l]。 實例11 : (3S)-3-(l-(6-乙氧基-2-曱基-3-吼啶基氧基）-3-曱 基-丁基）-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-2)

經Pd催化之偶合反應 向5 mL微波容器添加（S)-(-)-2,2·-雙（二-對甲笨基膦）_ 1，1'_ 聯萘（15.1 mg，0.0222 mmol)、參（二亞苯甲基丙嗣）二 鈀（0)(10.2 mg，0.0111 mmol)及曱苯（2 mL)。添加含（3S)_ 146616.doc -35· 201103908 3-[l-(6-氯-2-甲基-3-n比咬基氧基）-3-甲基-丁基]-η比洛咬_1_ 甲酸第三丁基酯（S-2)(85.0 mg，0.222 mmol)之曱笨（1 mL) 溶液’且隨後添加乙醇納（0.216 mg，0.666 mmol)。於 140°C下’在微波條件中照射該反應混合物30分鐘。添加 Si-SH樹脂並授拌2小時，以清除Pd。將粗混合物倒至SCX-管柱’以曱醇洗滌，釋放包括含2 Μ NH3之曱醇溶液的產 物。粗產物不再進一步純化即用於後續步驟。 MS(m/z)=393 [M+1] 脫除保護基團 於室溫下，攪拌（3S)-3-[l-(6-乙氧基-2-曱基-3-吡啶基氧 基）-3-曱基-丁基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（S_2)及HC1水 溶液（4>1二°惡烧溶液’ 0.261 mL，1.04 mmol)之混合物1小 時。在完全轉化之後’濃縮混合物，將殘質溶解於氯曱 烧’並裝入預填裝之SCX管柱。以二氯曱烧，且隨後以曱 醇洗滌管柱。釋放包括含2 Μ NH3之甲醇溶液的產物，並 減壓濃縮。藉由逆相層析術（34-60%梯度含乙腈之0.01 Μ 曱酸錄水溶液，85 mL/min，進行8 min，C18 ODB XBridge 管柱，30x75 mm，5 μηι)純化粗殘質，產生 13.4 mg(210/〇) 之（3S)-3-[ 1-(6-乙氧基-2-曱基-3-吡啶基氧基）-3-曱基-丁 基]-。比咯啶（S-2)。MS(m/z)=293[M+l]。 L-酒石酸鹽製法係由純化之物質溶解於乙腈/甲醇（5 : 〇 混合物。添加IN L-酒石酸水溶液（1.05當量）。將混合物凍 乾’產生標題化合物固體。MS(m/z)=293[M+l]。 實例12 : (3S)-3-(l-(6-氣-2-曱基-3-。比啶基氧基）丁基）-'•比咯 146616.doc -36· 201103908 啶，L-酒石酸鹽（S-2)

OH Ο 添加（3S)-3-(1-經基-丁基比洛咬_1-甲酸第三丁基酯（s_ 2)(0.400 g，1·64 mmol)及氫化鈉（6〇%，132 mg，3_29 mmol)至DMSO(10 mL)中。保持混合物處於氮氣氛圍中， 並攪拌15分鐘。添加6-氯-3 -氟甲基吡啶（1.44 g，9.86 mmol)。將混合物加熱至70°C，並攪拌1小時。將反應混合 物倒至鹽水中，並以EtOAc萃取。合併萃取物，並乾燥 (MgS〇4)，過濾並濃縮。粗殘質不再進一步純化即用於後 續步驟。 大體上如實例1所述脫除保護基團及形成L-酒石酸鹽， 產生標題化合物（384 mg ’ 56%)。MS(m/z)=268 [M+1 ]。 可大體上如實例12所述製得實例13至16中之化合物。 實例 化合物 結構 非對 映異 構體 MS， m/z 13 (3S)-3-[l-(6-氯-2-曱基-3 -0比咬基 氧基）-3-甲基-丁 基]-吡洛咬，L-酒石酸鹽 S-2 269 [M+l] 146616.doc -37- 201103908 實例 化合物 結構 非對 映異 構體 MS， m/z 14 (3S)-3-[l-(6-溴-2-曱基-3-。比啶基 氧基）-3 -曱基-丁 基]-吡咯啶，L- 酒石酸鹽 广，，/ 0 / 1 0 OH 卜WH OH 0 S-2 314 [M+l] 15 (3S)-3-[l-(2-溴-6-曱基-3-吡啶基 氧基）-3 -曱基-丁 基]-°比洛唆，L - 酒石酸鹽 / \ O OH 卜WH OH O S-2 328 [M+l] 16 (3S)-3-[l-(6-氣-2-曱基-3-吡啶基 氧基）-1-5哀丙基 甲基]-°比0各σ定， L-酒石酸鹽 r H〇 vy〇h OH O S-2 267 [M+l] 實例17 : (3S)-3-( 1-(6-溴-3-。比啶基氧基）-3-曱基-丁基）-。比 咯啶，L-酒石酸鹽（S-2)

向反應容器添加含（3S)-3-(l-羥基-3-甲基-丁基）-吡咯啶-1-曱酸第三 丁基酯（S-2)(100 mg，0.389 mmol)之 DMF(3 mL)溶液。添加 3-氟-6-溴-3-。比咬（90 mg，0.051 mmol)、 18-冠醚-6( 10.3 mg，0.03 9 mmol)及第三 丁醇鈉（68.2 mg， 146616.doc -38- 201103908 0.699 mmol)。於80°C下加熱該反應物若干小時，直至 LC/MS顯示已轉化成所需產物。蒸發溶劑，且殘質不再進 一步純化即用於後續反應。 大體上如實例11所述脫除保護基團及形成鹽，產生標題 化合物。MS(m/z)=314[M+l]。 實例18 : (3S)-3-[l-(6-氣·3_吼啶基氧基）-3-甲基-丁基]_0比 咯啶，L-酒石酸鹽（S_2)

OH 〇 可大體上如實例17所述製得標題化合物。MS(m/z)=269 [M+1] 〇 實例19 : (3S)-3-( 1-(6-甲氧基-2-甲基-3-。比啶基氧基）-3-曱 基-丁基）-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-2)

於室溫下，將氮氣通入含（3S)_3_(1_羥基_3_甲基-丁基）_ 吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（s_1)(〇 5 g，1 94 mmol)及6-甲 氧基-2-曱基比啶_3_醇（〇 4i g，2 91 mm〇l)之曱苯（10 mL) 洛液10分鐘。添加三正丁基膦（〇 73 mL，2.91 mmol)，且 146616.doc ]. •39- 201103908 隨後添加偶氮二曱基二派咬（〇· 59 mg，2.91 mmol)。將反 應混合物加熱至70°C，並攪拌過夜。將反應物冷卻至室 溫，並倒入飽和NaHC03水溶液（50 mL)上。以乙酸乙酯 (2X)萃取，合併有機萃取物並乾燥（Na2S04)，過濾並濃 縮。以含0-20%乙酸乙酯之己烷溶液為溶離液，藉由矽膠 層析術純化粗殘質，產生（3S)-3-[l-(6-甲氧基-2-曱基-3-。比 啶基氧基）-3-曱基-丁基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（8-2)(101 mg，13%)。大體上如實例1中所述脫除保護基團及 形成L-酒石酸鹽，產生標題化合物。MS(m/z) = 279 [M+1 ]。 實例19A : (3S)-3-(1-(6-曱氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基）-3-曱 基-丁基）-吡咯啶，（S-2)(替代性合成法）

(S)-l-苯甲基-3-(3-甲基丁醯基）吡咯啶_2_酮： 向配備磁力攪拌器、熱電偶、滴加漏斗及N2入口之5 L 三頸圓底燒瓶添加二異丙胺（176 mL，1265 mmol)及2_甲基 146616.doc -40- 201103908 四氫吱喃（50G mL)。在授拌下，將溶液冷卻至〜哉（鹽/ 冰冷），並逐滴添加正BuU溶液（2 5 Μ己烷溶液， mL，I259 mmol) ’同時維持溫度處於或低於〇£>c。以2曱 基四氫呋喃（25 mL)沖洗滴加漏斗。於〜_5<5(：下，攪拌溶液 約15刀鐘。依一疋速率逐滴添加含苯甲基_2_吡咯啶酮 (100.8 g ’ 575.2 mmol)、異戊酸乙醋（9〇 g，69〇 mm〇1)之 2_

Me-THF(500 mL)溶液’以維持溫度處於或低於π，產生 κ色漿液。於-5 C下攪摔該反應混合物約丨小時，滴加庚 烷（1 L) ’並於-5 C下再攪拌i小時。通過中孔玻璃料漏斗 過濾收集固體，依序以2·甲基四氫呋喃/庚烷（25〇 mL)之 1 · 1溶液，且隨後以庚烷（250 mL)洗滌，並風乾，直至固 體邊成粉末樣。添加黃色固體至配備磁力攪拌器之5 l三 ，員圓底燒瓶中，並添加MTBEq L)及1〇%檸檬酸（丨L)。於 室溫下攪拌混合物約1小時，產生均句混合物❶分離各 層’並以H2〇(2x500 mL) ’且隨後以鹽水（5〇〇 mL)洗滌有 機層。經過NaeO4乾燥’並濃縮，產生粗中間產物黃色油 (128 g)。經過球管（Kuegelr〇hr)蒸餾法移除粗物質中之大 部伤雜質’產生所需反應中間物暗橙色油（117.4 g，452.7 mmol ’ 產率為 78 7%)。111]^1^11(3〇〇]^沿，〇0(：13)5 7.3 8- 7.16 (m5 5H), 4.55-4.35 (m, 2H), 3.62 (dd, 1H, J=5.86, 9.37 Hz), 3.38-3.14 (m, 2H), 2.92-2.8 (m, 1H), 2.64-2.42 (m, 2H), 2.28-2.11 (mj 1H), 2.08-1.93 (m, 1H)S 0.96 (d, 3H, J-7.03 Hz) 0.93 (d，3H，J=7.04 Hz)。GC/MS=260 (M+l)。 146616.doc •41 · 201103908 (R) -l-苯甲基-3-((S)-l-羥基_3_甲基丁基）吼咯啶_2•酮·· 向400 mL不鏽鋼高壓容器添加含苯曱基_3_(3_甲基 丁酿基）β 比咯咬-2-酮（20 g’ 77.12 mmol)之 IPA(250 mL)溶 液’且隨後添加35% HC1(相對於基質為6%，4.63 mmol， M=36.4 g/mo卜 d=1.18 g/mL，0.408 mL)。以 N2 氣（5x〜50 psi)淨化。釋放容器中之氣體，並迅速添加（s)_ru(〇Ac)2 T-BINAP(250 mg，0.2784 mmol)，同時使]^2流通過反應混 合物上方。立即密封高壓爸’並以N2氣體（5 X〜50 PSI)淨 化。以氣體（5x60 PSI)淨化容器，且隨後向容器中通入 H2氣體（60 PSI)。於65下攪拌反應混合物過夜（〜16-1 8小 時）。於此期間’該容器之壓力上升至〜70 PSI，且若需要 則向該容器再填充H2氣體，以在反應過程中維持60 PSI之 恒定壓力。冷卻至室溫’並減壓濃縮，產生粗（R)_ 1 _苯甲 基-3-((S；M-羥基-3-甲基丁基）吡咯啶-2-酮暗棕色油（21.6 g， 82.6 mmol，-95-97°/。ee，產率 >100%)，其不再進一步純 化即用於後續步驟。4 NMR(300 MHz，CDC13) δ 7.38-7.18 (m, 5Η), 4.48 (s, 2H), 4.34-4.22 (m, 1H), 3.28-3.14 (m , 2H), 2.63 (td, 1H, J=2.93, 9.37 Hz), 2.47 (d, 1H, J=5.86 Hz), 2.12-1.70 (m, 3H), 1.54-1.38 (m, 1H), 1.24-1.10 (m, 1H), 0.95 (d，3H，J=3.51 Hz)，0.93 (d，3H，J=2.93 Hz)。 GC/MS=262 (M+l)。 (S) -l_苯甲基-3-((S)-l-羥基-3-甲基丁基）-»比咯啶： 向配備磁力攪拌器、熱電偶、滴加漏斗及N2入口之1 L. 三頸圓底燒瓶添加粗（R)-l-苯甲基-3-((S)-l-羥基-3-曱基丁 146616.doc -42- 201103908 基）°比略咬-2-酮（推算為38.26 mmol)及甲苯（1〇〇 mL)。將該 賴不均勻之攪拌溶液冷卻至0°C (鹽/冰浴），並逐滴添加 VitrideTM(Rohm & Haas)(65 重量 ％之甲笨溶液，24 mL， 86.085 mmol)溶液及甲苯（70 mL)，同時維持溫度處於或低 於5C。以曱苯（10-20 mL)沖洗滴加漏斗。於室溫下授拌過 夜（〜16小時）》將反應混合物冷卻至〇°c (鹽/冰浴），並依序 利用飽和羅氏（Rochell's)鹽溶液（200 mL)及隨後之ΜΤΒΕ (200 mL)終止反應。伴隨授拌下，讓混合物升溫至室溫， 且隨後於該溫度下攪拌1小時。分離有機層及水溶液層， 並依序以H2〇(2x200 mL)，且隨後以鹽水（200 mL)洗滌有 機層’並經過NaaSO4乾燥。過濾並濃縮，產生所需反應中 間物掠色油（9.61 g，38.85 mmol，產率 >100%)。NMR (300 MHz, CDC13) δ 7.36-7.18(m, 5H), 3.82-3.72(m, 1H), 3.58(dd, 2H, 7.61, 20.51 Hz), 2.87(td, 1H, J=4.10, 8.79 Hz), 2.79-2.70(m, 1H), 2.48-2.38(m, 1H), 2.26-2.04(m, 2H), 1.98-1.64(m, 3H), 1.46-1.32(m, 1H), 1.14-0.98(m, 1H), 0.92(d, 3H，J=l_18 Hz)， 0.89(d， 3H，J=1.76 Hz)。 LC/MS=248.1(M+1)。 解析/純化（S)-l-苯甲基-3-((S)-l-羥基-3-甲基丁基）-»比咯 啶： 向配備磁力授拌棒及N2入口之500 mL圓底燒瓶添加粗產 物（S)-l-苯甲基-3-((S)-l-羥基-3-甲基丁基）-吼咯啶 (9.61g，38.26 mmol)及]VleOAc(96 mL)。於授拌下，一次 添加二苯甲醯基-(L)-酒石酸（13.71 g，38.26 mmol)，並使 146616.doc -43· 201103908 反應扣〇物在室溫下攪拌，直至混合物渾濁（〜5 min)。伴 逍攪半下於經預熱之5Ot：油浴中加熱過夜（〜1 6小時）。 將反應混合物冷卻至室溫，並通過中孔玻璃料漏斗過慮， 刀離得到固體。以乙酸甲酯（5χ2〇 mL)洗務固體，並風 乾產生（S)-1·笨甲基-3-((S)-l-羥基-3 - f基丁基比洛咬 鹽白色固體（15.1 g，24.93 mm〇1，經3個步驟之產率為 65.2%，異構體回收率81 4%，推算8〇% ee)。lc/ms=248 i (M+1)。 (S)-l-苯甲基-3-((S)-l-羥基甲基丁基）_吡咯啶鹽之去鹽 化·· 向配備磁力攪拌棒之500 mL圓底燒瓶添加（s)_i苯曱基 3-((S)-l-羥基-3-曱基丁基）·吡咯啶鹽（13 71 g，22 636 mmol)及MTBE(140 mL)。添加飽和NaHC03水溶液（140 mL)並於至 >凰下搜拌該不均勻混合物過夜。依序以

EtOAc(140 mL)及餘和NaHC〇3水溶液（50 mL)，且隨後以 ΗζΟ(〜100 mL)稀釋該渾濁溶液，產生清澈混合物。分離各 層，並經過NajCU乾燥有機層。過濾，並濃縮，產生 1-笨甲基-3-((S)-l-羥基-3-曱基丁基）-η比咯啶黃褐色油（5.37 g， 21.707 mmol，回收率為95.9%)，其係不再進一步純化即 用於後續步驟。1H NMR(300 MHz，CDC13) δ 7.36-7.18(m， 5H)，3.82-3.72(m, 1H), 3.58(dd, 2H, 7.61, 20.51 Hz), 2.87(td, 1H, J=4.10, 8.79 Hz)s 2.79-2.70(m, 1H), 2.48-2.38(m，lH)，2.26-2.04(m，2H)，1.98-1.64(m，3H)，l.46-1.32(m, 1H), 1.14-0.98(m, 1H), 0.92(d, 3H, J=1.18 Hz), 146616.doc -44· 201103908 0.89(d, 3H, J=1.76 Hz)。LC/MS=248.1(M+1)。 (S)-l-苯甲基-3-((S)-l-(6-氣-2-甲基-3-吼啶基氧基）-3-甲基 丁基）-吡咯啶： 向配備Claisen接頭、熱電偶及N2入口之200 mL圓底燒 瓶添加（S)-l -苯甲基-3-((S)-l -經基-3-甲基丁基）-D比洛咬 (5.69 g，23 mmol)及 DMA(58 mL)。伴隨授拌下，一次添 加全量NaH(l ·29 g，32.2 mmol)，並於室溫下攪;拌1小時。 伴隨攪拌下，一次添加全量6-氯-3-氟-2-甲基吡咯啶（3.52 g，24.15 mmol)，且隨後於室溫下攪拌24小時。以H20 (120 mL)使反應混合物終止反應，並以MTBE(120 mL)萃 取。依序以Η2Ο(2χ60 mL)且隨後以鹽水（60 mL)洗滌有機 層，且隨後經過Na2S04乾燥。過濾，濃縮，且隨後添加至 矽石（225 g，經甲苯濕潤），且以如下物質為溶離液純化粗 物質（含於甲苯中）：己烷（2x500 mL)、15% MTBE/己烷 (16x500 mL)、50% MTBE/己烷（8x500 mL)。濃縮適宜溶 離份，產生（S)-l-苯甲基-3-((S)-l-(6-氣-2-甲基-3-吡啶基 氧基）-3 -甲基丁基）-°比0各咬淡黃色油（5·77 g，15.47 mmol， 產率為 67%，純度>98°/〇)。4 NMR(300 MHz，CDC13) δ 7.38-7.20(m, 5Η), 7.06(s, 2H), 4.32-4.20(m, 1H), 3.68-3.48(m, 2H) 2.78-2.64(m, 2H), 2.64-2.30(m, 2H), 2.42(s, 3H)，2.28-2.20(m, 1H), 2.05-1.85(m, 1H)，1.82-1.52(m, 4H)， 1.48-1.34(m, 1H), 0.92(d, 3H, J=6.45 Hz), 0.88(d, 3H, J=6.45 Hz)。LC/MS=373.2(M)，375.3(M+2)。 146616.doc -45- 201103908 (S)-l-苯曱基-3-(0)4-(6-甲氧基_2_甲基·3_0比啶基氧基）_3_ 甲基丁基）-°比略咬： 向配備磁力檀拌棒及Ν2入口之200 mL圓底燒瓶添加（S)-1-苯曱基-3-((S)-l-(6«氯_2_甲基·3-吼啶基氧基）-3-甲基丁 基）-。比洛咬（5.46 g，14.65 mmol)及 DMSO(30 mL)。伴隨攪 拌下’ 一次添加全量甲醇鉀（4 n g，58.61 mmol)。於 100 C下之油浴中攪拌反應混合物1小時。以h2〇(6〇 mL)及 MTBE(60 mL)稀釋。分離各層並依序以H2〇(2x3〇仏），且 隨後以鹽水（30 mL)洗滌有機層，且隨後經過Na2S04乾 燥。過濾並濃縮粗物質（含於曱苯中）。添加至矽石（225 g， 經曱苯濕潤），並採用如下物質溶離：己烷（2x500 mL)、 50% MTBE/己烷（6 X 500 mL)。濃縮適宜溶離份，產生（S) -1-苯甲基-3-((S)-l-(6-甲氧基-2-甲基-3-°比啶基氧基）-3-甲 基丁基）-吡咯啶黃色/橙黃色油。（4.32 g，11.72 mmol，產 率為 80%)4 NMR(300 MHz，CDC13)6 7.34-7.2(m, 5H)， 7.10(d, 1H, J=8.79 Hz), 6.49(d, 1H, J=8.79), 4.17-4.07(m, 1H), 3.88(s, 3H), 3.68-3.50(m, 2H), 2.78-2.67(m, 2H), 2.61-2.48(m, 1H), 2.48-2.38(m, 1H), 2.37(s, 3H), 2.33-2.24(m, 1H), 2.00-1.50(m, 5H), 1.44-1.30(m, 1H), 0.885(at, 6H, Ja=7.03 Hz, Jb=6.44 Hz) ° LC/MS=369.3(M+1) ° (S)-3-((S)-l-(6-甲氧基-2-曱基-3-«比啶基氧基）-3-曱基丁 基）-°比1咬. 向400 mL不鏽鋼高壓爸中添加20重量％ Pd/C(10°/〇，濕 物質，820 mg)，且隨後添加含（S)-卜苯曱基-3-((S)-l-(6-甲 I466l6.doc -46- 201103908 氧基-2-曱基-3-°比咬基氧基）·3·甲基丁基）_〇比略咬（4 1 g， 11.126 mmol)之乙醇（82 mL)溶液。以 H2 氣體（3x50 PSI)沖 刷’隨後向該容器填充&氣體（50 PSI)。將反應混合物加 熱至60°C 1並於60°C下攪拌24小時。提高容器壓力至60°c 下約55 PSI ’且若需要則向容器再填充h2氣體。讓反應混 合物冷卻至室溫’通過裝有矽藻土（經乙醇濕潤）之中孔玻 璃料漏斗過濾’並以乙醇（〜80 mL)洗滌。減壓濃縮，產生 (S)-3-((S)_l-(6-甲氧基-2·甲基-3-°比咬基氧基）-3-甲基丁 基）-°比略咬淡黃色油（3.02 g，10.848 mmol，產率為97·5 %)。NMR(300 MHz，CDC13)5 7.12(d，1Η，J=8.79 Ηζ)， 6.50(d, 1H, 8.79 Hz), 4.2(aq, 1H, Ja=7.03 Hz, Jb=5.27 Hz), 3.87(s, 3H), 3.08-2.94(m, 2H), 2.94-2.82(m, 1H), 2.82-2..70(m, 1H), 2.50-2.26(m, 3H), 2.36(s, 3H), 1.94-1.78(m, 1H), 1.78-1.52(m, 3H), 1.44-1.30(m, 1H), 0.898(at, 6H, Ja=6.45 Hz，Jb=7.03 Hz)。LC/MS=279.3(M+1)。 實例19B : (S)-3-((S)-l-(6-曱氧基-2-甲基-3-吼啶基氧基）-3 -甲基-丁基）_〇比17各咬，D-酒石酸鹽

於 60°C 下，以 1000 rpm 攪拌下，將（S)-3-((S)-l-(6-甲氧 基-2-甲基-3·°比啶基氧基）-3-甲基-丁基）-吡咯啶（353 mg)溶 146616.doc •47- 201103908 解於THF(lmL)中。產生輕度渾濁之黃色溶液。向該溶液 緩慢添加D-酒石酸（218 mg，於80。〇下溶解於3 mL THF中） 溶液。通過0.45 μπι PTFE注射器濾器過濾該溶液，並添 加乙腈（4 mL)。使其於未加蓋下在通風櫥中蒸發。於約2〇 分鐘後，沉澱出大量灰白色固體。於真空中過濾溶液，並 於6(TC真空爐申乾燥固體！小時，獲得灰白色固體粉末。 X-射線粉末繞射術 於配備CuKa源λ=1.54056 A)及Vantec偵測器（於50 kv及40 mA下操作）之Bruker D8 Advance X-射線粉末繞射儀獲得晶 體之XRD圖譜。於4至40。（以2Θ表示）下，以〇·〇2。（以⑼表 示）之步幅，且以9.0秒/步之掃描速率，及丨mm之發散及 接收狹縫，及0.1 mm之偵測器狹縫下，掃描樣本。將乾粉 末裝入凹槽裝載樣本持樣器，並利用玻璃載玻片獲得平滑 表面·。於周溫及相對濕度下獲得晶型繞射圖譜。於採集波 峰之前，消除背景。於結晶圖譜技術中已知，對於任一指 定晶型，繞射峰之相對強度可能隨諸如結晶型態及習慣等 因素所導致的較佳取向而變化。當存在較佳取向之效應 時，波峰強度會改變，但多晶型之特徵峰位置不變。參見 例如 The United States Pharmacopeia #23，Nati〇nal

Formulary #18，第 1843-1844 頁，1995。此外，於結晶圖 譜技術中亦已知，對於任一指定晶型，角度波峰位置可輕 微變化。例如，波峰位置可由於下列因素而偏移：分析樣 本時之溫度或濕度之變化、樣本位移、或存在或不存在内 標準物。在本發明之情形中’ ± 〇丨（以2 θ表示）之波 146616.doc -48 - 201103908 峰位置變化已將該等潛在變數 — 思'在内’而不會妨礙精確 鑑疋所指示晶型。可基於任—彳5 饲特組合（通常為較顯著之 主峰)(單位為。2Θ)分辨晶型。因此，所製得之叫3_(1* 曱氧基-2_甲基-34咬基氧基）_3_甲基_丁基）_吼嚷。定之&酒 石酸鹽之特徵係利用CuKa輻射，由XRD圖譜確定，其具 有如下表1中所述之繞射峰（2-Θ值），且特定言之於46、3處 出現波峰，並與一個或多個選自由如下組成之群中之波峰 組合：9.26、16.12及16.59 ;繞射角度之公差為〇1度。 表1 . (3S)-3-(l-(6-甲氧基-2-甲基-3-»比啶基氧基卜3_甲基_ 丁基）-。比咯啶之D-酒石酸鹽的X-射線粉末繞射峰。 — —____________ 2-Θ 角0 4.63 9.26 12.22 13.87 16.12 16.59 17.85 18.55 18.88 20.21 21.56 22.45 23.23 24.11 24.55 埃(Angstrom) 19.06 9.55 7.23 6.38 5.49 5.34 4.96 4.78 4.70 4.39 4.12 3.96 3.83 3.69 3.62 強度％ % ~T〇0^ ~~19^ ~~14^ ~~86^ |_ 38 ~~20^ ~~τΓ^ ___18^ 11 15 ~~23 17 ~~12 146616.doc -49- 201103908 25.63 3.47 12 26.48 3.36 15 26.64 3.34 10 可大體上如實例19所述製得實例20至32之化合物。 實例 化合物 結構 非對映 異構體 MS * m/z 20 (3S)-3-[l-(2-氣-3-。比咬基氧 基)-3-曱基-丁基]比。各。定5 L-酒石酸鹽 〈」0 OH ：h〇W〇H OH 0 S-2 269 [M+l] 21 (3S)-3-[l-(2,6-二甲基-3-吡啶 基氧基)-3-曱基-丁基]比咯 啶，L-酒石酸鹽 (1 Ο OH r H〇 Vy〇h OH 0 S-2 263 [M+l] 22 (3S)-3-[l-(6-甲氧基-3-吼啶基 氧基）-3-曱基-丁基]-°比洛 啶，L-酒石酸鹽 \ / 〜〇Me /u,··^^ 0 (1 O OH r - Vy〇h OH O S-2 265 [M+l] 23 (3S)-3-[l-(6-甲基-3-。比啶基氧 基)-3-曱基-丁基]-吡咯啶， L-酒石酸鹽 /···>.0 (I O OH r H〇 Vy〇h OH O S-2 249 [M+l] 24 (3S)-3-[l-(2-氣-6-甲基-3-吼 啶基氧基)-3-曱基-丁基]比 咯啶，L-酒石酸鹽 / 1 0 OH ηοΥϊοη S-2 283 [M+l] 25 (3S)-3-[l-(6-氣-4-曱基-3-吼 啶基氧基)-3-曱基-丁基]-。比 0各咬，L-酒石酸鹽 从 h'h〇Vy〇H OH 0 S-2 283 [M+l] 146616.doc •50· 201103908 26 (3S)-3-[l-(2-乙基-6-曱基_3_ 。比啶基氧基)-3-曱基-丁基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽 (I 0 OH r H〇 w〇h OH 0 S-2 277 [M+l] 27 (3S)-3-[l-(2-氟-6-甲基-3·。比 σ定基氧基)-3-甲基-丁基]-D比 咯啶，L-酒石酸鹽 (1 0 OH ；h〇Vy〇H OH 0 S-2 267 [M+l] 28 (3S)-3-[l-(2-f 氧基-6-曱基-3-。比啶基氧基)-3-曱基-丁基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽 (1 0 OH r H〇 Vt〇h OH 0 S-2 279 [M+l] 29 (38)-3-[1-(2,6-二氣-3-。比淀基 氧基)-3-甲基-丁基]· °比1:7各 啶，L-酒石酸鹽 切Cl < 0 OH ：h〇Vt〇H OH 0 S-2 303 [M+l] 30 (3S)-3-[l-(2-第三丁基羰基胺 基-3-°比啶基氧基)-3-曱基-丁 基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽 ( 0 OH ；h〇Vy〇H OH 0 S-2 334 [M+l] 31 (3S)_3_[l-(2-乙氧基-3_0比〇定基 氧基)-3-甲基-丁基]-°比洛 啶，L-酒石酸鹽 ( 0 OH 卜 Vy〇h OH O S-2 279 [M+l] 32 (3S)-3-[l-(2-環丙基曱基氧 基-3-。比σ定基氧!基)-3-曱基-丁 基]-。比咯啶，L-酒石酸鹽 ( 0 OH r H〇 Vy〇h OH 0 S-2 305 [M+l] 實例33 · 3-(1-(6 -氯-2-甲基-3 -°比。定基乳基）-2-¾ 丁基-乙 基）-吡咯啶，L-酒石酸鹽（D1E2) 146616.doc -51 - 201103908

去鹽化 將氯_2·甲基_3_吡啶基氧基)2_環丁基-乙基)_吡 口各咬’ L-酒石酸鹽（Dl)(8〇.〇 mg，〇 18〇麵〇1)倒至^管 柱並以一氯曱烧、含5〇%二氯甲烧之甲醇溶液及甲醇沖 洗。以2 Μ NH3之曱醇溶液溶離出化合物，並激縮，產生 3_(1_(6_氣_2_曱基·34咬基氧基Μ.環丁基_乙基卜比咯啶 (50 mg) 0 掌性層析解析術 以25%甲醇/0.2%異丙胺/C〇2為溶離液，對該胺（5〇 mg) 進行超臨界液相掌性層析術（Chiracei 〇d-H)，產生3-(1-(6-氣-2-甲基-3-吡啶基氧基）_2_環丁基-乙基）-吼咯啶 (D1E1)(21 mg，40% ’ ee >99%)及 3-(1-(6-氯-2-曱基-3-吡 啶基氧基）-2-環丁基-乙基）-。比咯啶（D1E2)(20 mg，38%， ee>99%) 〇 大體上如實例1中所述形成3-(1-(6-氣-2-曱基·3-吡啶基 氧基）-2-環丁基-乙基）_吡咯啶之L-酒石酸鹽（D1E2)，產生 標題化合物。MS(m/z)=295.2(M+l) 實例34 : (3S)-3-(l-(6-甲氧基·2-曱基-3-°比啶基氧基）-丁 基）-°比咯啶，L-酒石酸鹽（s-2) 146616.doc • 52· 201103908

OH Ο 去鹽化 將（3S)-3-(l-(6-氯_2-甲基_3_。比啶基氧基）_ 丁基）_D比咯啶 之L- /酉石酸鹽鹽（s_2)(i 〇〇 g，2.39 mmol)溶解於曱醇，並 將该溶液倒至SCX管柱。以甲醇沖洗管柱，且隨後以含2 Μ NH3之甲醇溶液溶離出游離胺。蒸發溶劑，該胺於真空 下乾燥，產生0.65 g(99%)之（3S)-3-(l-(6-氣-2-甲基-3-吡啶 基氧基）-丁基）-吼咯啶（s_2)，其不再進一步純化即用於後 續步驟。 由氣離子形成曱氧基之置換反應 添加（3 S)-3-(l -(6-氯-2-曱基-3-。比啶基氧基）_ 丁基）_吼咯 啶（S-2)(0.65g ’ 2.44 mmol) ' DMSO(9.75 mL)、甲醇（0.493 mL，12.18 mmol)、及氫化鈉（0·390 g , 9 75 mm〇1)至反應 小玻璃瓶。使該小玻璃瓶抽真空，並通入氮氣。於i 〇〇〇c 下加熱混合物過夜。將反應混合物倒至SCX管柱並以甲醇 沖洗。將該sex管柱附接至矽膠管柱上，並以含5_30〇/〇 NH3〇H/乙醇（1 : 9)之氯仿溶液溶離，獲得〇 42〇 g(65%)之 (3S)-3-(l-(6-曱氧基-2-曱基-3-°比咬基氧基）_ 丁基）_。比洛咬。 大體上如實例1所述形成（3S)-3-(l-(6-曱氧基_2_曱基-3-°比咬基氧基）-丁基）-°比咯啶之L-酒石酸鹽（s_2)，產生標題 化合物。MS(m/z)=265[M+l] 146616.doc •53· 201103908 實例35 : (3S)-3-[l-環丁基-1-(6-曱氧基-2-甲基·3_。比啶基氧 基）-甲基]-吡咯啶（S-1)，L-酒石酸鹽

可大體上如實例34中所述，自（3S)-3-[l_環丁基_1_(6_氣_ 2-甲基-3- °比咬基氧基）-甲基]-°比嘻咬（S-1)製得標題化合 物。MS(m/z)=277[M+l] 實例36 : (3S)-3-[l-(6-甲氧基-2-甲基- 基氧基）_2_環 丙基-乙基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-1)

脱除保護基團 於反應小玻璃瓶中混合（3S)-3-[l-(6-氣-2-曱基-3-。比咬基 氧基）-2-環丙基-乙基]-吡咯啶-1_曱酸第三丁基酯（s_i)(〇 5〇 g，1.31 mmol)、曱氧基苯（6.6 mL)及二氯甲烷（66 mL)。 將該小玻璃瓶抽真空，並通入氮氣。添加三氟乙酸（1 5 i g，1.0 mL，13·2 mmol)，並於室溫下攪拌該混合物 時。將該混合物直接添加至經預填裝之Sex管柱，並依序 146616.doc -54- 201103908 以CH2C12且隨後以CH3OH沖洗。以含2 Μ NH3之曱醇溶液 溶離，並減壓濃縮，產生0.353 g(96。/。）之（3S)-3-[l-(6-氯- 2- 曱基-3-n比啶基氧基）-2-環丙基-乙基]-吼咯啶（S-1)。 MS(m/z)=281.2[M+l]。 向反應小玻璃瓶添加（3S)-3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧 基）-環丙基-乙基）-吡咯啶（S-1)(0.35g，1.25 mmol)、DMSO (4.99 mL)、甲醇（0.404 mL，9.97 mmol)、及氫化鈉（0.349 g，8.73 mmol)。將該小玻璃瓶抽真空，並通入氮氣。於 110 °C下加熱該混合物4小時。將反應物溶解於pH 7緩衝液 中，並以5N HC1中和。將混合物倒至SCX管柱，並以曱醇 沖洗。將該SCX管柱附接至矽膠管柱上，並以含5_35%之 NH4OH/乙醇（1 : 9)之氯仿溶液溶離，獲得0.209 g(61%)之 (3S)-3-(l-(6-甲氧基-2-曱基-3-吼啶基氧基）·2_環丙基-乙 基）_。比咯啶（S-1)。MS(m/z)=277[M+l]。 大體上如實例1中所述形成（3S)-3-(l-(6-曱氧基-2-曱基- 3- °比咬基氧基）-環丙基-乙基）-n比洛咬之L-酒石酸鹽（S-1)。 MS(m/z)=277[M+l] 實例37 : (3S)-3-[l-(6-氯-2-曱基-3·-比啶基氧基）·2·環丙基_ 乙基]-吡咯啶，L-酒石酸鹽（S-1)

146616.doc -55· 201103908 製備溫瑞伯（Weinreb)醯胺

逐滴添加含（S)-N-第三丁基氧基幾基。比洛咬-3 -甲酸（40 g，186 mmol)之THF(240 mL)溶液至經攪拌之含ι，ι'_羰基 二 〇米 η坐（3 1.4 g ’ 190 mmol)之 THF(160 mL)溶液，並於室溫 下’在氣氣中授拌2.5小時。添加N，0-二-曱基經基胺鹽酸 鹽（18.8 g，190 mmol)，並於室溫下攪拌過夜。以水終止 反應。分離各相，並以第三丁基甲基醚（2X)萃取水相。合 併有機相’並以10% H3P04水溶液、20% khco3水溶液、 水及鹽水洗滌。濃縮，產生37.1 g(77%)標題化合物。 MS(m/z)=203.1[M-55]。 添加格林納試劑（Grignard)至溫瑞伯（Weinreb)醢胺，並使 萌還原成醇

將烯丙基溴化鎂溶液（2.〇 M THF溶液，100.3 mL，200.5 mmol)緩慢滴加至保存於〇〇c及氮氣中之含（s)_3_(曱氧基 (甲基）胺曱醯基）_吡咯啶_丨-甲酸第三丁基酯（37.0 g， 143_2 mmol)之THF(296 mL)溶液中。讓反應物回升至室 146616.doc .56· 201103908 溫，並繼續攪拌48小時。添加混合物至冷的（〇-5。〇含硼氫 化鈉（5.42 g，143 mmol)及第三丁基溴化銨（0.74 g，2.39 mmol)之水（74 mL)溶液上，並攪拌1小時。分離各相，並 以第三丁基甲基醚（2X)萃取水相。合併有機相並以水及鹽 水洗滌。濃縮’並以第三丁基甲基醚/己烷（3/7至7/3)為溶 離液，藉由矽膠層析術純化粗殘質，獲得（3S)-3-(l-羥基_ 丁 -3-烯基）-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（s_mix)(29 g， 85%)。MS(m/z)=186.1[M-55]。 (3 8)-3-(2-環丙基-1-經乙基）1»比洛咬_1-曱酸第三丁基酯（8_ mix)

0 添加乙酸lE (11)(2.31 g ’ 0.298 mmol)至經授拌之含（3 s) -3-(1-羥基-丁 -3-烯基）-吡咯啶_丨_甲酸第三丁基酯（s_mix) (14.4 g，59.7 mmol)之二氣曱烷（43 2 mL)溶液。於氮氣 中，在-30至-4(TC下，緩慢添加新鮮製備之重氮甲烷溶液 (HU) mL，含於乙醚中約50 mm〇1)(注意：氣體劇烈釋 出）。蒸發溶劑，並將殘質溶解於二氯曱烷（43 2 mL)中。 添加乙酸把（ΙΙ)(2·31 g，ο.2% mm〇1)，且隨後添加新鮮製 備之重氮甲烷溶液（100 mL，含於乙醚中約5〇 存於-3 0至-40°C下及氮氣中之混合物（注意 mmol)至保 N2氣體劇烈釋 I466I6.doc -57- 201103908 出）。蒸發溶劑，並將粗產物溶解於二氯甲烷（43 2 。 添加乙酸16(11)(2.31 g，0.298 mmol)，且隨後添加新鮮製 備之重氮曱烷溶液（50 mL，含於乙醚中約25 mm〇1)至保 存於-30至-40°C下之氮氣中之混合物（注意：氣體劇烈釋 出）。蒸發溶劑，添加己烷（140 mL)至粗殘質，並於室溫下 授拌該懸浮液過夜。經celite®填料過渡懸浮液，並濃縮， 獲得全收量產率之（3S)-3_(2-環丙基-1-羥乙基）吡咯啶甲 酸第三 丁基酯（S-mix)。MS(m/z)=200.1 [M-55]。 (3S)-3-[l-(6-氣-2-曱基-3-。比啶基氧基）-2-環丙基-乙基卜„比 咯啶-1-甲酸第三丁基酯（H)及（s_2).

緩慢添加氫化鈉（60%，6.20 g，155.1 mmol)至保存於室 溫下之氮氣氛圍中之（3S)-3-(2-環丙基-卜羥基-乙基）-»比咯 咬-1_甲酸第三 丁基酯（S-mix)(l9.8 g，77.5 mmol)、6-氣-3-氟_2·甲基-吡啶（16.9 g，116.3 mmol)及二甲基乙醯胺（59.4 mL)混合物中。加熱至40。(：並攪拌3_5小時。將混合物冷卻 並添加甲醇。將混合物倒至10% H3P04水溶液（100 mL)及 第三丁基甲基醚（100 mL)上。分離各相，並以第三丁基甲 基驗（2X)萃取水相。合併有機相，並以水及鹽水洗滌。蒸 146616.doc * 58 · 201103908 發溶劑，獲得粗殘質。以第三丁基曱基醚/己烷（2: 8至4 ·· 6)為溶離液，於矽膠上，使粗殘質層析，獲得粗殘質，並 與獲自另一批（基於2 g醇）粗殘質混合。以含25%第三丁基 甲基醚之己烷溶液為溶離液，藉由矽膠層析術分離非對映 異構體混合物，獲得氯_2_甲基_3_吼啶基氧 基）-2-環丙基_乙基]_吡咯啶•曱酸第三丁基酯之第一個溶 離出之異構體（異構體 1，（S-1)，15_〇 g，51%)，Ms(m/z)= 325·0(Μ -55)、及氯 _2_ 甲基 _3_0 比啶基氧基）_2· 環丙基_乙基]-吡咯啶·1_甲酸第三丁基酯之第二個溶離出 之異構體（異構體 2 ’（S-2)，12.0 mg，41%)。MS(m/z)= 325·0(Μ-55) ° (3 3)-3-[1-(6-氣-2-曱基-3-吼啶基氧基）_2_環丙基-乙基]_11比 咯啶，（S-1)

添加HC1(4 Μ 1,4-二噁烷溶液，52.7 mL，627 mmol)至 含（3S)-3-[l-(6-氣-2-甲基-3-"比啶基氧基）_2-環丙基-乙基]-吡咯啶-1-曱酸第三丁基酯（S-l)(13.4 g，35.2 mmol)之二氣 甲烷（40.2 mL)溶液。於室溫下，在氮氣中，攪拌1小時。 蒸發溶劑，將殘質溶解於第三丁基甲基醚（40 mL)及水（40 mL)之混合物。分離各相’以第三丁基甲基醚（2X)洗滌水 146616.doc •59· 201103908 相。添加1 0% K2C〇3水溶液’將水相之pH調節至9，以第 三丁基甲基醚（3X)萃取。以水及鹽水洗滌合併之有機相， 獲得（3S)-3-[l-(6-氣-2-甲基-3-吼啶基氧基）-2-環丙基-乙 基]-吡咯啶（S-l)(9.6 g，97%)。MS(m/z)=281.2[M+l]。 (3S)-3-[l-(6-氯-2-甲基-3-°比咬基氧基）-2-環丙基-乙基]_0比 咯啶，L-酒石酸鹽（S-1)

添加L-酒石酸（5.1 g，33.9 mmol)至含（3S)-3-[l-(6-氯 _2_ 曱基-3-吼啶基氧基）_2_環丙基-乙基]_吡咯啶04)(9.7 g， 34.5 mmol)之甲醇（48.5 mL)溶液中。在氮氣中，於室溫下 攪拌混合物1 5分鐘。蒸發揮發物質，將殘質溶解於水（丨〇〇 mL)中，並以第三丁基曱基_(2χ)萃取。在保持槽溫25艺 下於$疋轉蒸發器中濃縮水液相，直至最終體積為 mL。將殘質；東乾’獲得14 〇 g(95%)標題化合物。 MS(m/z) : 281.0[M+1] 〇

酯異構體1及2之絕對組態

1466I6.doc 201103908

由於自起始物（S)-N-(第三丁氧基羰基）_吡咯啶-3-甲酸已 知C7之組態，因此確定相對組態將可得知C5之絕對組 態。若透過如 Matsumori 等人，J. Org. Chem. 64，866 (1999)所述基於j之組態確定方法考慮質子-碳是否偶合， 可確定可撓性分子之相對組態。該方法涉及測定橫跨某一 C-C鍵之H-H及H-C偶合，並經Karplus-Altona關係式將其 轉化成二面角。H-C偶合亦符合Karplus關係式，且小數值 (1至3 Hz)表示間扭取向（gauche orientation)，大數值（6至8 Hz)表示對扭排列（anti arrangements)。 採用如P. Vidal，等人 ’ j· 〇rg. chem.，72, 3166-3170

(2007)所述之衛星-選擇性（sateUite_seiective)1D -TOCSY實

驗，測定相關H5-C11質子-碳偶合常數。已取得1D_T〇CSY 實驗，其中於H11之低頻率！3C衛星峰設定選擇性脈衝之偏 移。所得圖譜與其中激發出主要12C同位素異構體之Ηι丄 信號的一般1D-TOCSY實驗t卜·々，十本, , ± 只概比季父’或者與1Η圖譜比較。由 衛星-選擇性TOCSY圖譜中接桂> α #丄 w 接替之Η5仏虓相對於其在出圖 睹中之位置的位移，確定— %疋L11與H5之間三個鍵H，C偶合， 偶合常數為位移之兩倍。由於产缺舌％ 田於k唬重豐，因此未確定C8與 H5之間之偶合常數。分別·、丨a J和疋大體上如製法4所述製得之 146616.doc •61 · 201103908 3(s)-(i-經基小曱基-丁基）_。比咯咬小f酸第三丁基酯異構 體1及異構體2的橫跨C7-C5鍵之質子-質子及質子-碳偶合 常數’且其數值出示於下表中。 化合物 H-H或H-c對 3.ΙΎΤΤπΛ - 異構體1 H5-H7 -----° _ 7 0 異構體1 _H5-C11 ----- / Φ V ---_ --- 4.2 異構體2 H5-H7 7 η 異構體2 H5-C11 1,8 異構體2之小的H5-C11偶合常數說明在兩種構象異構物 族群中H5與C11相互偏扭，此點與3(S)-1，（S)異構體一致。 活體外轉運子親和力分析法 選殖人類血清素轉運子（SERT)、正腎上腺素轉運子 (NET)、或多巴胺胺轉運子（DAT)進入pcDNA3載體，且穩 疋轉染至HEK293細胞。根據標準方法製得膜儲備物，且 利用飽和結合或同源競爭結合方法計算各批膜之Kd值 (Bylund及 Toews，Am. J. Phys. (Lung Cel】. Mold Physiol

9)，265, 421-429 (1993))。所有結合分析法均於96_孔平板 中’採用由將過濾放射性配位體結合分析法（filtrati〇n radiolig and binding assay)轉化成親近閃爍分析法 (scintillation proximity assay(SPA))形式發展出之方法 (Carpenter,等人，Methods in Molecular Biology, 190，21-49 (2002))進行。簡言之，使用濃度為i〇 μβ/個孔 之 SERT膜，於包含 50 mM Tris、150 mM NaC卜及 5 mM 146616.doc -62- 201103908 KC1之分析缓衝液（pH 7.4)中，於3H-西它普蘭（citalopram) 存在下進行。使用氟西汀（Fluoxetine)(100 μΜ)測定非特異 性結合，且使用凡拉法新（venlafaxine)作為正對照組。使 用濃度為8 pg/個孔之NET膜，於包含50 mM Tris、300 mM NaCl、及5 mM KC1之分析缓衝液（pH 7.4)中進行。使用 3H-尼索西汀（Nisoxetine)作為指示劑，使用100 μΜ地昔帕 明（desipramine)測定非特異性結合，且使用尼索西汀作為 正對照。分析DAT結合性時，分析緩衝液與SERT之分析法 相同，所使用之膜為20 pg/個孔，使用100 μΜ諾米芬新 (nomifensine)測定非特異性結合，以3H-WIN 35428(Perkin Elmer)作為放射指示劑，且使用諾米芬新作為正對照組。 在所有情形中，使用0.5 mg/個孔之麥芽凝集素親近閃燦分 析小珠（WGA-SPA，GE Health Sciences)來捕捉膜，並於室 溫下培養分析板3小時。測定放射活性，並利用四參數對 數形曲線擬合程式（four-parameter logistic curve fitting program)(ActivityBase v5.3.1.22)計算 Kj值。 大體上如上所述測試化合物實例，並發現在活體外對 hSERT及hNET受體具有高親和力，但對hDAT受體之親和 力則低得多。發現SERT及NET之Kj分別小於20.1 nM及 23.4 nM，而發現DAT之Ki大於255 nM。大體上如上所述 測試實例19中之化合物，且發現其具有如下表所示之親和 力0 146616.doc •63- 201103908 受體 Ki(nM) hSERT 0.199 土 0.02(n=6) hNET 1.08±0_32(n=6) hDAT 46l±72(n=6) (平均值±標準差） 活體外抑制劑活性分析法： 選殖人類血清素（SERT)或正腎上腺素（NET)轉運子進入 pcDNA3載體，並穩定轉染至HEK293細胞中。兩種分析法 皆基於如 Eshleman等人，J·. Pharmacol. Exptl Ther” 289, 877-885 (1999))及 Wall 等人 > Mol. Pharmacol., 47，544-550 (1995)中所述之方法修改。於包含5%胎牛血清、250 pg/mL 遺傳黴素 / 及 20 mM Hepes 之 D-MEM/F-12 3 : 1(3 份 杜貝卡氏經改良依格生長培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium)於1份營養混合物F-l 2培養基中）中，在塗覆 聚-D-離胺酸之燒瓶或96-孔平板中，使細胞生長。於200 pL介質中，依每個孔40,000個細胞平鋪細胞，並在分析之 前，於37°C下培養18-24小時。分析吸收緩衝液係由補充 有1.26%碳酸氫鈉、20 mM HEPES、及各100 μΜ之曱基丙 字胺（pargyline)及抗壞血酸之Krebs-Ringer碳酸氫鹽儲備液 組成。在與本發明化合物或茚達曲林（indatraline)(作為正 對照組）預先培養30分鐘之後，添加3H-血清素或3H-正腎上 腺素1分鐘50秒。隨後移除3H-受質，並利用微量板分析儀 (multimek)，以100 μί冷的吸收緩衝液洗務·細胞4次。添加 Triton X· 100(1 %)，以溶解細胞，且在混合之後，將所有 146616.doc •64· 201103908 内容物轉移至白底分析板上。添加MicroscintTM 40至各 孔，且定量每孔之放射活性1分鐘。利用四參數對數形曲 線擬合程式（ActivityBase v5.3_l.22)分析，以IC5〇值表示其 結果。 大體上如上所述測試化合物實例，並發現其係血清素及 正腎上腺素再吸收之抑制劑，其對SERT及NET之IC5〇分別 小於227 nM及44·6 nM。大體上如上所述測試實例19中之 化合物，且發現其係血清素及正腎上腺素再吸收之活體外 抑制劑，其IC5G如下表所示。 受體 IC5〇(nM) hSERT 2.15±0.70(n=4) hNET 7·34±1·48(η = 4) (平均值±標準差） 活體内轉運子佔有分析法： 使用三隻一組，體重為240-280公克之雄性Sprague-Dawley大鼠，測定血清素轉運子佔有率。使動物於開始各 項實驗之前禁食至少12小時。對該等動物經口投與載劑或 包含0.10、0.33、1_00、3.3 3或10.0〇11^/1^劑量之測試化 合物之含4%葡萄糖之25 mM磷酸鹽缓衝液（pH =3.0)(其包 含 0.1、0.33、1、3.33、或 10%之 CAPTISOL™ (CAPTISOL™ 度（％)=測試化合物之劑量（mg/kg))。2小時後，在側尾靜脈 中，對該等動物經靜脈内投與含N，N-二曱基-2-(2-胺基-4- 146616.doc -65- 201103908 氰基苯基硫）-苯甲基胺（10 pg/kg)之生理食鹽水溶液。再經 過40分鐘之後’藉由頸椎脫臼法處死大鼠，並取出一部份 額葉皮層’放置於乾冰上。對另一組含三隻大鼠之對照組 經靜脈内投與I2 mg/kg之克憂果馬來酸鹽（par〇xetine maleate)，且於1小時後投與N，N_二曱基_2(2_胺基_4_氰基 苯基硫）-苯甲基胺（10 pg/kg)。 讓組織解凍，隨後添加四體積（w/v)含〇 · 1。/。甲酸之乙 腈。利用超音波細胞壁破壞裝置探針（uhras〇nic dismembrator pr〇be)將樣本均質化，並於14〇〇〇Xg下離心 16分鐘。添加丨體積上清液至含於自動採樣小玻璃瓶中之3 體積水，並渦旋混合。採用Zorbax C18 HPLC管柱及各含 0.1。/。甲酸之自20〇/。至90%乙腈/水之移動相梯度完成分離。 總HPLC運行時間為3 _5 min，另加2.0 min之再平衡時間。 使用於MRM模式下操作之API4000三重四極質譜儀 (Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)檢測。所監測 到之N，N-二甲基_2_(2_胺基_4_氰基苯基硫）·苯罗基胺的離 子轉移為 284.1/239.1 m/z。 以經載劑預處理之動物的皮層中之N，N-二曱基_2_(2_胺 基-4-氰基苯基硫）_苯甲基胺（指示劑）濃度代表非特異性及 特異性結合之總和，且指定其數值為〇%佔有率（指示劑可 結合所有受體）。於接受極高靜脈内劑量之克憂果馬來酸 鹽預處理之動物（正對照組）中之較低指示劑濃度代表非特 異性結合，且指定其數值為1〇〇%佔有率（指示劑無法結合 受體）。將經口投與測試化合物後之皮層中指示劑濃度線 1466i6.doc •66- 201103908 性内插至該兩個極端值之間，以確定企清素轉運子佔有率 百分比。數據以平均值士SEM表示（n=3隻/組）（利用阳咖版 本 3.0(GraphPad Software Inc.，San Diego，CA，USA)叶 算）。利用非線性回歸，將數據套入s形曲線，獲得ED 值。 大體上如上所述測試實例19化合物，且發現其依據如下 投藥後1小時之劑量反應數據之絕對^1)8()為7.1 mg/kg，因 此證實其於活體内佔有血清素受體。

ex MMT :單胺消減抑制分析法·· 當消減劑需要經轉運子活性佔領神經元時，神經遞質串 運子抑制劑可阻止腦單胺m對氯苯異㈣ 、二神、、二元轉運子轉運進入血清素激導性神經元，並導致y 鼠腦灰清素（5-HT)濃度之長時間消減。α_曱 致> Γίϊ-ΜλΛΤ、* 您-間-酪胺趣 )為正腎上腺素激導性消減劑，其於活 _ 羥基化，產夺Μ _内進行β 座生間發胺（metaraminol)，並經神辆 性韓谨挽 轉運子9 進入正腎上腺素㈣神經元，導致大鼠腦中 …。具有5-町謂再吸收抑_性之試劑可㈣ 146616.doc -67- 201103908 由PCA所導致之大鼠腦中5-HT濃度及由α-ΜΜΤ導致之大鼠 皮層ΝΕ濃度的消減。可採用如下方法，在餵食及禁食大 鼠中，檢測本發明化合物是否具有於活體内阻止由PCA所 導致之大鼠腦中5-ΗΤ濃度之消減及由α-ΜΜΤ所導致之大鼠 皮層中之ΝΕ濃度之消減的活性。 取體重為160-1 80公克之雄性Sprague Dawley大鼠禁食一 夜或自由取食。以載劑（無菌H20)或測試化合物強制餵食 動物，2小時後投與1〇11^/1^?€八鹽酸鹽（經腹膜内）或6.2 5 mg/kg α-ΜΜΤ(經皮下）。所投與所有化合物均為1 mL/kg。 於投與PCA或α-ΜΜΤ後2小時，處死動物。分解組織，於 乾冰上冷凍，並於分析之前貯存於-70°C下。對於接受PCA 之動物，如 Fuller及 Perry in J. Pharmacol. Exp. Ther.， 248, 50-56 (1989)所述，利用高壓液相層析術及電化學偵 測法測定全腦血清素（5-HT)濃度。對於接受α-ΜΜΤ之動 物，如 Bymaster，人，Neuropsychopharmacology, 27(5)， 699-711 (2002)所述，經氧化鋁吸收後，藉由HPLC-EC測 定皮層正腎上腺素濃度。利用£2(：111'〇1111^層析術數據系統 (Scientific Software, San Ramon，CA)收集數據，該系統計 算波峰高度及樣本濃度。分析變方差，隨後進行Tukey公 正顯著差異法（Tukey’s Honestly Significant Difference test)，確定處理組之間之顯著性差異（PS0.05)。利用最擬 合線性回歸分析（best-fit linear regression analysis)計算拮 抗PCA-或α-ΜΜΤ-所誘發之單胺消減達50%時的劑量 146616.doc -68- 201103908 (ed50)。 大體上如上所述測試實例19中之化合物，且依據如下之 劑里反應，發現拮抗α-ΜΜΤ所誘發之大鼠皮層中正腎上腺 素消減的EDso為9.5 mg/kg，因此證實其於活體内抑制正腎 上腺素轉運子功能之效力。 劑量(mg/kg，經口） 抑制率百分比 S.E.M. 30 115.3 14.6 10 79.0 9.3 3 21.0 5.5 1 5.6 3.9 0.3 7.0 10.4 ed8〇 9.5 mg/kg 人工福馬林測試 於大小約25 cmx5 cmx20 cm之定製Plexiglas玻璃箱中進 仃人工福馬林測試。於該籠子之背面安置鏡子，使得能夠 無障礙觀察經注射福馬林之爪。於實驗之前，將大鼠 (Charles River (CRL) Sprague Dawley (SD))單獨安置於各 隔間中至少30分鐘。於08: 00至14: 〇〇 h期間進行所有測 試，且測試時之室溫維持在21至23它。在不同時間非經腸 投與測試化合物，隨後以福馬林激發。利用27孔徑規針 頭，經皮下注射福馬林（50卟之5%生理食鹽水溶液）至右 後爪之背側部表面。在注射福馬林之後立即開始觀察。記 錄，5分鐘内的每次舔舐所持續之秒數，定量由福馬林所誘 發之疼痛。於注射福馬林後之50分鐘内測定疼痛評分。如 146616.doc -69- 201103908 先月ύ 文獻所述（Wheeler-Aceto, H·，Porreca，F.及 Cowan A., The rat paw formalin test ： comparison 〇f noxious agents’ Pain 40 (1990) 229_238.)，觀察到疼痛行為之兩個 時期。早期係在注射福馬林之後立即開始，且持續約5分 鐘，隨後為晚期，其在注射福馬林後1〇至15分鐘開始，通 常於約25至35分鐘時觀察到最大反應。在5〇分鐘之觀察期 之後’利用C〇2處死動物。 在福馬林測試中所記錄之不同評分參數中，認為舔及咬 經注射之爪的總時間為最具相關性。（Abbott等人，The formalin test ： scoring properties of the first and second phases of the pain response in rats, Pain 60 (1995) 91- 102 ; Coderre等人，The formalin test : a validation of the weighted-scores method of the behavioral pain rating, Pain 54 (1993) 43-50).)。早期得分值為第〇至5分鐘内舔舐之總 時間（秒數）。晚期得分值之計算法為於觀察期之第16分鐘 至第40分鐘期間的添舐之總秒數之總和。數據以平均值與 平均值之標準差（士 SEM)表示。藉由單因子變數分析（oneway analysis of variance)(ANOVA)評 估數據 ，且藉 由針對 雙邊對照（two sided comparisons)之登尼（Dunnett)之「t」 試驗進行適當比對分析。若P_值小於0 05，則認為差異顯 著。（如上述Abbott文獻；如上述Coderre文獻；及如上述 Wheeler-Ac eto文獻） 大體上如上所述測試實例19化合物，並依據以下劑量反 應’發現顯著減少疼痛行為，且ED5〇為13.4 mg/kg : 146616.doc -70· 201103908 劑量(經口 mg/kg) 添舐總時間之 減少百分比％ S.E.M. 30 78.4 5.6% 10 38.0 7.8% 3 ~~ 14.4 13.0% 1 4.5 8^3% ED50 13.4 mg/kg 雖然可不經過調配即直接投與本發明方法所使用之化合 物，但是化合物通常係呈包括作為活性成份之至少一種通 式I化合物、或其醫藥上可接受鹽、及至少一種醫藥上可 接受載劑、稀釋劑及/或賦形劑的醫藥組合物形式投與。 該等組合物係經多種途徑投與，包括經口、鼻内、穿皮、 皮下、靜脈内、肌内、及經肺。該等醫藥組合物及其製備 方法係相關技術中熟知。參見例如Remingt〇n : The

ScienceAPractice of Pharmacy (University of the Sciences in Phiiadeiphia，ed_，第 21 版，Lippinc〇tt &

Wilkins Co.，2005)。 較佳將組合物調配成單位劑量形式，每一劑量包含約 0.1至約500 mg，更通常約！.〇至約2〇〇 mg(例如約玉至⑼ mg)之活性成份。術語「單位劑量形式」係指適於作為人 類又:檢者及其他哺乳動物之單位劑量的物理離散單位，每 一單位包含計畫產生所需治療效應之預定量活性物質、及 至少一種適宜的醫藥上可接受載劑、稀釋劑及/或賦形 劑。 通式I化合物通常在寬廣劑量範圍内有效。例如，曰劑 量通常處於約0·001至約30 mg/kg，更通常約〇 〇1至3 〇 [

146616.doc -7K 201103908 mg/kg’ 及例如 0_01至 〇,3 mg 置。在一此棒：士 能低於前述範圍之劑量濃度， 二If形中，可 _ 而在其他情形中， 用高得多的劑量，而不會引起 、犯使 S 5丨起任何有害副作用，因此，上 述劑量範圍無意於以任何方弋 m万式限制本發明之範圍。應瞭 解，只際投與之化合物數量將由醫生根據相關環境因素確 定’該等相關環境因素包括計畫治療之病症、所選擇之投 與途徑、所投與之實際化合物或化合物、各患者之年齡、 體重、及效應、及患者症狀之嚴重程度。 146616.doc 72-

Claims (1)

1. 201103908 七、申請專利範圍： 1. 一種如下通式化合物或其醫藥上可接受鹽

   其中Rl係自由下列組成之群中選出…基、異丁基 (C3_C4)環院基、及（C3_C4)環院基_甲基_ ; η為1或2 ;且 各R係獨立地自由下列組成之群中選出：氟、氯、溴、 曱基、乙基、二氟甲基、甲氧基、乙氧基、環丙基曱基 氧土—氟曱氧基、曱基胺基'環丙基胺基及第三丁基 =基胺基，條件為當η為2時，至少其中一個R2為氟、 乳、/臭、甲基、乙基、三氟曱基、曱氧基、或乙氧基。 2. 如吻求項丨之化合物，其中Rl為正丙基或異丁基，或其 醫藥上可接受鹽。 3. 如咕求項1之化合物，其中Ri為異丁基，或其醫藥上可 接受鹽。 4·如清求項i之化合物，其中Rl為環烷基或（C3_C4) 環烧基-甲基_，或其醫藥上可接受鹽。 5.如凊求項1之化合物，其係甲氧基_2曱 基-3-¾啶基氧基；)_3_曱基丁基）_吡咯啶，或其醫藥上可 接受鹽。 種醫藥組合物，其包含如請求項丨至5中任一項之化合 146616.doc 201103908 物、或其醫藥上可接受鹽，與醫藥上可接受載劑、稀釋 劑、或賦形劑組合。 7. 如請求項1至5中任一項之化合物、或其醫藥上可接受 鹽，其係用於治療。 8. 如請求項1至5中任一項之化合物、或其醫藥上可接受 鹽，其係用於為人類治療慢性疼痛。 9. 一種以請求項1至5中任一項之化合物、或其醫藥上可接 受鹽於製備醫藥品上之用途，該醫藥品係供治療慢性疼 痛。 146616.doc 201103908 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 1

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