MX2011010658A - Inhibidor de la recaptacion de serotonina y norepinefrina. - Google Patents

Abstract

Un inhibidor de recaptación de serotonina y norepinefrina de la fórmula (I): sus usos y métodos para su preparación son descritos. (ver fórmula (I)).

Description

INHIBIDOR DE LA RECAPTACIÓN DE SEROTONINA Y NOREPINEFRINA Campo de la invención La serotonina y norepinefriña han sido implicadas como moduladores de mecanismos analgésicos endógenos, en la descendencia de trayectorias de dolor y los inhibidores de recaptación de norepinefriña y serotonina (SNRI) han mostrado eficacia en el tratamiento de condiciones de dolor crónico, tales como dolor neuropático periférico diabético y fibromialgia (Kroenke et al. Pharmacotherapy of chronic pain: a synthesis of recommendations from systematic reviews, General Hospital Psychiatry 31 (2009) 206-219 (en línea en http: //www. sciencedirect . com, accesada el 30 de Marzo de 2009) .

El documento WO 2008/023258 describe ciertos compuestos de 3- (pirid-3-iloximetil ) -piperidina como inhibidores de la recaptación de monoamina (inhibidores de la recaptación de serotonina y/o norepinefriña) para el tratamiento de un amplio intervalo de trastornos que incluyen dolor .

El documento US 20020151712 describe ciertos compuestos de 3-pirrolidinil-oxi-3' -piridil éter tales como ligandos del receptor de acetilcolina nicotinico, para varias indicaciones que incluyen el tratamiento de dolor.

La presente invención proporciona compuestos de SNRI adicionales con mayor potencia y selectividad superior para recaptación de serotonina y norepinefriña que las referencias citadas antes. Adicionalmente, ciertos de los presentes compuestos proporcionan un balance mejorado de actividad inhibidora de recaptación de serotonina contra norepinefriña, comparada con las referencias citadas antes. Es decir, los compuestos de actividad dual previos, típicamente tienen mayor actividad inhibidora de recaptación de serotonina comparada con norepinefriña, mientras ciertos de los compuestos actualmente reivindicados tienen actividades duales significantemente más cercanas a los mismos niveles para tanto inhibición de recaptación de serotonina como norepinefriña . Además, los compuestos de la presente invención proporcionan estabilidad reducida al ácido, lo cual es en general, una ventaja para exposiciones farmacológicas mejoradas así como también para facilidad de formulación. Aún además, ciertos de los compuestos de la presente invención proporcionan perfiles de degradación metabolica mejorados, lo cual es en general, una ventaja para exposiciones terapéuticas mejoradas y pueden ser ventajosos en la reducción de variabilidad farmacológica dentro de una población de pacientes.

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula I : I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en donde R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de n-propilo, isobutilo, cicloalquilo (C3-C4) , y cicloalquilmetilo (C3-C4) ; n es 1 o 2; y cada R2 se selecciona independientemente a partir del grupo que consiste de fluoro, cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, trifluorometoxi , metilamino, ciclopropilamino y t-butilcarbonilamino, siempre que cuando n es 2, al menos uno de R2 es fluoro, cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, o etoxi.

La invención además, proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para el tratamiento de dolor crónico que comprende, un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable en combinación con uno o más excipientes, portadores o diluyentes de los mismos farmacéuticamente aceptables. Modalidades adicionales proporcionan una composición farmacéutica adaptada para el tratamiento de cualquiera de dolor neuropático periférico diabético, fibromialgia, dolor asociado con fibromialgia y dolor inflamatorio, como por ejemplo polimialgia, artritis reumatoide u osteoartritis, que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable en combinación con uno o más excipientes, portadores o diluyentes de los mismos farmacéuticamente aceptables.

La presente invención también proporciona un método para tratar dolor crónico en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. Modalidades particulares de este aspecto de la invención incluyen, un método para tratar dolor neuropático periférico diabético, un método para tratar fibromialgia, un método para tratar dolor asociado con fibromialgia, y/o un método para tratar dolor inflamatorio, como por ejemplo polimialgia, artritis reumatoide u osteoartritis, cada método individualmente comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad particular de este aspecto de la invención, el mamífero es un humano.

Esta invención también proporciona un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para usarse en terapia. Dentro de este aspecto, la invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de dolor crónico en mamíferos, particularmente humanos. Modalidades adicionales de este aspecto de la invención incluyen, cualquiera de los siguientes: un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de dolor crónico; un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de dolor neuropático periférico diabético; un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de fibromialgia ; un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de dolor asociado con fibromialgia; un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de dolor inflamatorio; un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de polimialgia; un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de artritis reumatoide; y un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de osteoartritis .

Otro aspecto de esta invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor crónico. Modalidades particulares de este aspecto incluyen, el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor neuropático periférico diabético; el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de fibromialgia ; el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor asociado con fibromialgia; el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor inflamatorio; el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de polimialgia; el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoide; y el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de osteoartritis .

Compuestos de esta invención son bases, y por consiguiente, reaccionan con un número de ácidos orgánicos e inorgánicos para formar sales farmacéuticamente aceptables y la presente invención incluye las sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de Fórmula I. El término "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente, se refiere a cualquier sal de un compuesto de Fórmula I que es sustancialmente no tóxico a organismos vivos. Tales sales incluyen aquellas listadas en Journal de Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977), las cuales son conocidas por el experto en la técnica.

El dolor persistente es causado por procesos patológicos crónicos en estructuras somáticas o visceras, o por disfunción prolongada y algunas veces permanente del sistema nervioso periférico o central, o por ambos. La inflamación persistente, daño al tejido o lesión al nervio, resultan en hiperexcitabilidad de las neuronas de cuerno doral dentro de la médula espinal, un proceso también conocido como sensibilización central. La sensibilización es caracterizada por sensibilización alterada de neuronas de cuerno dorsal, la expansión de campos receptivos, y plasticidad de conexiones neuronales dentro de las trayectorias que transmiten dolor. Estos procesos conducen a actividad neuronal incrementada dentro de las trayectorias de dolor ascendentes y sitios supraespinales y/o para disfunción/desinhibición de los mecanismos inhibidores de dolor descendente espinal y supraespinal endógenos.

La sensibilización y desinhibición central pueden producir una condición en curso de dolor persistente, espontáneo, asi como también una sensibilidad incrementada a estimulo doloroso (hiperalgesia) o a experiencia dolorosa de estímulos térmicos o mecánicos normalmente no dolorosos (alodinia) . C.J. Woolf, Pain: Moving from Symptom Control toward Mchanism-Specific Pharmacologic Management, ñnnals de Internal Medicine, 140, 441-451 (2004) . Estos procesos son postulados para subrayar varios tipos de dolor persistente o crónico, que incluye dolor neuropático (que incluye neuropatía diabética, dolor neuropático infeccioso asociado con SIDA, síndromes de túnel carpiano no quirúrgicos, neuralgia post-herpética , radiculopatías cervicales, torácicas y lumbrosacrales , neuralgia trigeminal, síndromes de dolor regional complejo I y II, dolor neuropático inducido por quimioterapia y síndromes neuropáticos centrales que incluyen lesión de médula espinal, dolor relacionado con apoplejía o esclerosis múltiple), dolor inflamatorio (que incluye polimialgia, artritis reumatoide y osteoartritis) , y dolor no inflamatorio no neuropático (que incluye síndrome de fatiga crónica, dolor de espalda crónico sin radiculopatía, fibromialgia, cefaleas de tipo tensión crónica, trastornos de intestino inflamatorio, síndrome de intestino irritable, lesiones cervicales, dolor pélvico crónico que incluye cistitis intersticial y trastorno de articulación temporomandibular (T JD) ) .

El reconocimiento de la correlación entre la desinhibición y un desequilibrio de serotonina y norepinefriña en las trayectorias inhibidoras de dolor endógeno, conduce a la evaluación exitosa de inhibidores de recaptación de serotonina y norepinefriña en el tratamiento de condiciones de dolor crónico en el hombre. Por lo tanto, como inhibidores de actividad dual de tanto recaptación de serotonina como norepinefriña, los compuestos de Fórmula I son útiles para el tratamiento de dolor crónico, que incluye dolor neuropático periférico diabético y fibromialgia, en mamíferos. En una modalidad preferida, el mamífero es un humano. Además, los compuestos de Fórmula I son útiles para el tratamiento de trastornos depresivos (que incluyen trastorno depresivo principal), trastornos de ansiedad (que incluyen trastorno de ansiedad generalizado) , e incontinencia (tal como urgencia, estrés e incontinencia de tipo combinada) . (Orjales, et al., Journal of Medicinal Chemistry, 46(25), 5512-5532 (2003); Fish, et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 17, 2022-2025 (2007)) .

Las abreviaturas usadas en la presente son definidas como sigue: "HPLC" significa cromatografía líquida de alta presión .

"MS (ES+)" significa espectroscopia usando ionización por electroatomizado .

"MTBE" significa metil t-butil éter.

"NMR" significa resonancia magnética nuclear.

"THF" significa tetrahidrof rano .

"EtOAc" significa acetato de etilo.

"MeOH" significa metanol.

"DMSO" significa dimetil sulfóxido. "columna SCX" significa intercambio catiónico fuerte .

"Pd(OAc)2 " significa acetato de Paladio (II) .

"DMF" significa dimetilformamida . "n-BuLi" significa n-butilitio.

"MeOAc" significa acetato de metilo.

" (S) -Ru (OAc)2T-BlNAP" significa diacetato [( S) -(-) -2, 2 '-bis (di-p-tolilfosfino) -1, 1 '-binaftil] rutenio (II) "DMA" significa dimetilacetamida .

"XRD" significa Difracción de rayos-X.

"TOCSY" significa Espectroscopia de Correlación Total .

"SERT" significa transportador de serotonina. "hSERT" significa transportador de serotonina humana .

"Net" significa transportador de norepinefriña . "hNet" significa transportador de norepinefriña humana.

"DAT" significa transportador de dopamina. "hDAT" significa transportador de dopamina humana. "HEPES" significa ácido 4- (2-hidroxietil) -1-piperazinetansulfónico .

"SEM" significa errores estándares de media.

"PCA" significa para-cloranfetamina . "a-MMT" significa Alfa-metil-m-tirosina .

"IC50" significa concentración inhibidora máxima media .

"ED50 " significa dosis efectiva.

Compuestos preferidos de la presente invención son compuestos en donde: 1) R1 es n-propilo o isobutilo (es decir, 2-metilpropilo) ; 2) R1 es isobutilo (es decir, 2-metilpropilo) ; 3) R1 es n-propilo; 4) R1 es cicloalquilo (C3-C4) o cicloalquilmetilo (C3-C4) ; 5) R1 es ciclopropilo o ciclopropilmetilo; 6) R1 es ciclobutilo o ciclobutilmetilo; 7) cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, y trifluorometoxi; 8) cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, y metoxi; 9) cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, metilo, y metoxi; 10) cada R2 es independientemente seleccionado a partir de metilo, etilo, y metoxi; 11) R1 es isobutilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, y trifluorometoxi; 12) R1 es isobutilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, y metoxi ; 13) Rx es isobutilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, metilo, y metoxi; 14) R1 es isobutilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de metilo, etilo, y metoxi; 15) R1 es n-propilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, y trifluorometoxi ; 16) R1 es n-propilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, y metoxi; 17) R1 es r¡-propilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, metilo, y metoxi; 18) R1 es .n-propilo y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de metilo, etilo, y metoxi; 19) R1 es cicloalquilo (C3-C4) o cicloalquilmetilo (C3-C4) y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, y trifluorometoxi ; 20) R1 es cicloalquilo (C3-C4) o cicloalquilmetilo (C3-C4) y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, y metoxi; 21) R1 es cicloalquilo (C3-C4) o cicloalquilmetilo (C3-C4) y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, metilo, y metoxi; 22) R1 es cicloalquilo (C3-C4) o cicloalquilmétilo (C3-C4) , n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de metilo, etilo, y metoxi; 23) R1 ciclopropilo o ciclopropilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, y trifluorometoxi ; 24) R1 ciclopropilo o ciclopropilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, y metoxi; 25) R1 ciclopropilo o ciclopropilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, metilo, y metoxi; 26) R1 ciclopropilo o ciclopropilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de metilo, etilo, y metoxi; 27) R1 es ciclobutilo o ciclobutilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, y trifluorometoxi ; 28) R1 es ciclobutilo o ciclobutilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, bromo, metilo, etilo, y metoxi; 29) R1 es ciclobutilo o ciclobutilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de cloro, metilo, y metoxi; 30) R1 es ciclobutilo o ciclobutilmetilo, n es 1 o 2 y cada R2 es independientemente seleccionado a partir de metilo, etilo, y metoxi; 31) Para cada una de las modalidades 7 hasta 30 mencionadas anteriormente, los compuestos preferidos adicionales son aquellos en donde n es 2 y los sustituyentes R2 son sustituidos en las posiciones 2 y 6 de piridilo.

Un compuesto particularmente preferido de la presente - invención es (3S) -3- ( (S) 1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metil-butil ) -pirrolidina, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, como por ejemplo la sal de L y/o D-tartrato, como se ejemplifica en los ejemplos 19, 19A, y 19B.

Existen dos centros quirales en los compuestos de Fórmula I, cada uno de los cuales es marcado con "*" abajo: Los compuestos de Fórmula I pueden, por lo tanto, existir en una variedad de configuraciones eestereoisoméricas , tales como un racemato, asi como también los diastereómeros y enantiómeros . La actividad de los compuestos es significantemente mejorada para compuestos en donde existe el centro quiral en la posición 3 del anillo pirrolidina en la configuración absoluta "S" como se requiere en la Fórmula I. Los compuestos pueden tener el centro quiral en la posición 1' de la cadena adjunta en ya sea la configuración absoluta "R", la configuración absoluta "S", o cualquier mezcla de las mismas: En general, los compuestos estereoquímicamente puros son preferidos sobre los racematos. En general, un estereoisómero tiene actividad mejorada sobre los otros. Los compuestos preferidos son aquellos con ambos centros quirales en la configuración absoluta "S".

Los estereoisómeros y enantiómeros específicos del compuesto de Fórmula I, pueden ser preparados por uno de habilidad ordinaria en la técnica utilizando técnicas y procesos bien conocidos, tales como aquellos descritos por J. Jacques, et al., "Enantiomers , Racemates, and Resolutions" , John iley and Sons, Inc., 1981, and E.L. Eliel and S.H. Wilen, " Stereochemistry of Organic Compounds", ( iley-Interscience 1994), y Solicitud de Patente Europea No. EP-A-838448, publicada el 29 de Abril de 1998. Ejemplos de resoluciones incluyen técnicas de cristalización o cromatografía quiral.

Los compuestos de la presente invención pueden ser preparados de conformidad con los siguientes esquemas de reacción sintéticos, por métodos bien conocidos y apreciados en la técnica. Las condiciones de reacción adecuadas para las etapas de estos esquemas de reacción son bien conocidas en la técnica, y sustituciones apropiadas de solventes y co-reactivos están dentro de la habilidad de la técnica.

Del mismo modo, se apreciará por aquellos de habilidad en la técnica, que intermediarios sintéticos pueden ser aislados y/o purificados en varias técnicas bien conocidas como se necesite o desee, y que frecuentemente, será posible usar varios intermediarios directamente en las etapas sintéticas subsecuentes con poca o ninguna purificación .

Además, el experto en la técnica apreciará en algunas circunstancias, que el orden en el cual las porciones son introducidas, no es critico. El orden particular de etapas requeridas para producir los compuestos de la presente invención es dependiente del compuesto particular siendo sintetizado, el compuesto de partida y la responsabilidad relativa de los sustituyentes seleccionados, como es bien apreciado por el químico experto. Los sustituyentes R1 y R2, a menos que se indique de otro modo, son como se definen previamente, y todos los reactivos son bien conocidos y apreciados en la técnica. Pg es un grupo protector de nitrógeno, tal como aquellos bien conocidos en la técnica {véase Wuts and Greene, Greene' s Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., Chapter 7, John Wiley and Sons Inc., (2007) . quema de reacción El alcohol de partida (a) se hace reaccionar con una base adecuada tal como hidruro de sodio y un fluoruro de arilo apropiadamente sustituido en un solvente adecuado, tal como dimetil sulfóxido, a temperatura elevada para proporcionar el éter (b) . Alternativamente, el alcohol (a) se puede hacer reaccionar con una piridina apropiadamente sustituida bajo condiciones Mitsunobu estándares para proporcionar el éter (b) . El éter (b) es entonces desprotegido bajo condiciones bien conocidas por aquellos expertos en la técnica para proporcionar el compuesto de Fórmula I. (Por ejemplo, véase : Greene and Wuts, supra) . La amina resultante pueden entonces ser tratada con ácidos farmacéuticamente aceptables, tales como ácido L-tartárico, ácido D-tartárico o HC1, en un solvente adecuado, tal como metanol, para proporcionar las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula I.

El alcohol requisito (a) puede ser preparado como se describe en el siguiente esquema de reacción, en donde R1, R2 y Pg son como se definen previamente.

Esquema de reacción 2 Un ácido pirrolidin-3-carboxilico N-protegido (c) , se hace reaccionar con N, O-dimetil-hidroxilamina bajo condiciones de acoplamiento de amina estándar para proporcionar la amida einreb (d) . Esta amida se hace reaccionar con un nucleófilo organometálico adecuado para proporcionar la cetona (e) . La reducción de la cetona (e) bajo condiciones estándares, tales como borohidruro de sodio en metanol, proporciona el alcohol (a) . Alternativamente, una 2-pirrolidinona N-protegida (f) se puede tratar con una base adecuada, tal como bis (trimetilsilil ) amida de litio en un solvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, y el anión resultante se hace reaccionar con un aldehido para proporcionar el producto de adición (g) . La porción de amida se reduce bajo condiciones estándares, tales como por reacción con metilsulfuro de boro en tetrahidrofurano a temperatura elevada para proporcionar el alcohol (a) .

La introducción del grupo 6-metoxi en derivados de 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi pirrolidina, se puede realizar en la amina libre de los derivados 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi correspondientes por desplazamiento nucleofilico del cloro por un metóxido bajo condiciones de sustitución aromática nucleofilica estándar para proporcionar el compuesto deseado como se muestra en el Esquema de reacción Esquema de reacción 3 En las siguientes preparaciones y ejemplos, la designación (S-mez) , es tomada por representar un intermediario o compuesto de Fórmula I, en donde el centro quiral en la posición 3 del anillo pirrolidina está en la configuración absoluta "S" y el segundo centro quiral (referido como 1' anterior), es una mezcla de "S" y "R". La designación (S-l) es tomada por representar el intermediario o compuesto de Fórmula I correspondiente, como ya sea el primer enantiómero de elución o se deriva del primer enantiómero de elución cuando la mezcla de enantiómeros se separa por cromatografía. De manera similar, la designación (S-2) es tomada por representar que el intermediario o compuesto de Fórmula I correspondiente, es ya sea el segundo enantiómero de elución o se deriva a partir del segundo enantiómero de elución cuando la mezcla de enantiómeros se separa por cromatografía. La designación (DI) se toma por representar un intermediario o compuesto de Fórmula I que es, o se deriva de, el primer diastereómero de elución cuando los diastereómeros son separados por cromatografía. Del mismo modo, la designación (D2) se toma por representar un intermediario o compuesto de Fórmula I que es, o se deriva de, el segundo diastereómero de elución cuando los diastereómeros se separan por cromatografía. Las designaciones (Dl-El) y (D1-E2), se toman por representar un intermediario o compuesto de Fórmula I que es, o se deriva de, el primero y segundo enantiómeros de elución, respectivamente, del primer diastereómero de elución. Del mismo modo, las designaciones (D2-E1) y (D2-E2) son tomadas por representar un intermediario o compuesto de Fórmula I que es, o se deriva de, el primero y segundo enantiómeros de elución, respectivamente, del segundo diastereómero de elución. La excepción de estas reglas generales es cuando una reacción de Mitsunobu ha sido realizada con alcohol (a) conduciendo a inversión de la configuración del carbono 1' . En estos ejemplos, la designación de un alcohol de partida de (S-l), resulta en un producto (S-2) y un alcohol de partida (DI) resulta en un producto (D2) .

Las siguientes Preparaciones y Ejemplos son ilustrativos de métodos útiles para la síntesis de los compuestos de la presente invención. Los nombres para muchos de los compuestos ilustrados en las preparaciones y ejemplo, se proporcionan a partir de estructuras dibujadas por ChemDraw Ultra 10.0.

Preparación 1: Ester ter-butílico del ácido (S)-3-(3- etilbutanoil ) pirrolidin-l-carboxílico Éster ter-butílico del ácido (S) -3- (Metoxi (metil) carbamoil) -pirrolidin-l-carboxílico Se agregó 1, 11 -carbonildiimidazol (414.33 g, 2.56 mol) en forma de porciones a una solución agitada de ácido (S) -N-ter-butoxicarbonilpirrolidin-3-carboxílico (500 g, 2.32 mol) en diclorometano (5.81 L) y se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 1 hora. Se agregó clorhidrato de N, O-di-metilhidroxilamina (253.04 g, 2.56 mol) y se agitó a temperatura ambiente por 48 horas. Se apagó la reacción con HC1 1N, y se extrajo con acetato de etilo (2X) . Se lavaron los orgánicos combinados con NaHC03 saturado y salmuera. Se secó (MgS04) , filtró y concentró bajo presión reducida para proporcionar 535 g (89%) del compuesto del titulo. MS (m/z) = 203 (M-55) .

Adición de Grignard en amida Weinreb Se agregó una solución de bromuro de isobutilmagnesio (2.0 M en tetrahidrofurano (THF) , 63.47 mL, 126.94 mmol) en THF (50 mL) por goteo, a una solución agitada de éster ter-butilico del ácido (S)-3-(metoxi (metil) carbamoil) -pirrolidin-l-carboxilico (21.86 g, 84.62 mmol) en THF (400 mL) mantenido bajo nitrógeno a -7 °C. Se agitó una hora a -5 °C, después la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se continuó agitando durante la noche. Se agregó cloruro de amonio acuoso saturado y se extrajo con acetato de etilo (2X) . Se secó (MgS04), filtró y concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo (EtOAc) en hexano, (gradiente 0-20%) para proporcionar 21.6 g (99.6%) del compuesto del título.

Los compuestos de las Preparaciones 2-5 son preparados esencialmente como se describe en la Preparación 1.

Preparación 5: Éster ter-butilico del ácido (S)-3-ciclobutilcarbonil-pirrolidin-l-carboxilico, Se agregó hidruro de diisobutilaluminio (1M en tolueno, 0.790 mL, 0.790 mmol) a una mezcla agitada de magnesio (0.960 g, 39.5 mmol) y yodo (0.100 g, 0.395 mmol) en THF (1 mL) bajo nitrógeno. Se agregó por goteo una solución de bromuro de ciclobutilo (8.00 g, 59.2 mmol) en THF (10 mL) y se agitó la reacción a 60°C por 2h por medio de lo cual todo el magnesio se consume. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se agregó por goteo una solución de éster ter-butilico del ácido (S) -3- (metoxi (metil) carbamoil) -pirrolidin-l-carboxílico (10.2 g, 39.5 mmol) en THF (50 mL) . Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente por 2.5 h. Se apagó con ácido cítrico acuoso 1M, se extrajo con EtOAc. Se lavó la capa orgánica con agua y NaCl acuoso saturado, se secó (Na2S04) , filtró y concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con EtOAc en hexanos (gradiente 0-50%) para obtener el compuesto del título (5.30 g, 53%).

Preparación 6: Éster ter-butilico del ácido (3S)-3-(l-Hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 1 (S-l) e isómero 2 (S-2) , Se agregó borohidruro de sodio (15.2 g, 423 mmol) a una solución de éster ter-butilico del ácido (S)-3-(3-metilbutanoil ) -pirrolidin-l-carboxílico (21.6 g, 84.6 mmol) en metanol (500 mL) en forma de porciones y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó ot equivalente de borohidruro de sodio (3.04 g, 84.6 mmol) . Se agitó por otras 2 horas, se evaporó el metanol a la mitad del volumen, se agregó salmuera y se extrajo con EtOAc. Se secaron las fases orgánicas combinadas (MgS04) , filtraron y concentraron bajo presión reducida. Se separaron los diastereómeros por cromatografía de fluido supercrítico (columna AD-H) eluyendo con 10% de eOH/C02 con 0.2% de dietilmetilamina para proporcionar éster ter-butílico del ácido (3S) -3- (l-hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-1-carboxílico, isómero 1 (S-l) como el primer isómero de elución (8.2 g, 38%) y éster ter-butílico del ácido (3S)-3- ( l-hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 2 (S-2) como el segundo isómero de elución (8.9 g, 41%).

Preparación 7: Éster ter-butílico del ácido (3S)-3-(l-Hidroxi-butil ) -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 1 (S-l) e isómero 2 ( S-2 ) .

Se agregó borohidruro de sodio (5.19 g, 145 mmol) en forma de porciones a una solución de éster ter- butílico del ácido (S) -3-butanoil-pirrolidin-l-carboxílico (7.0 g, 29.0 mmol) en metanol (200 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó más borohidruro de sodio (1.4 g, 39 mmol) y se agitó una hora a temperatura ambiente. Se evaporó el metanol a medio volumen, se agregó salmuera y se extrajo con acetato de etilo. Se secaron las fases orgánicas combinadas (MgS04) , filtraron y concentraron bajo presión reducida. Se separaron los diastereómeros por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 5% de isopropilamina en hexanos para proporcionar éster ter-butílico del ácido ( 3S) -3- ( 1-hidroxi-butil ) -pirrolidin-1-carboxílico, isómero 1 (S-l) como el primer isómero de elución (2.6 g, 37%) y éster ter-butílico del ácido (3S)-3-(1-hidroxi-butil) -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 2 (S-2) como el segundo isómero de elución (1.8 g, 26%) Los compuestos de las Preparaciones 8 - 9 pueden ser preparados esencialmente como se describe en la Preparación 8.

Preparación 10: Éster ter-butilico del ácido (3S)-3- (Cíclobutil-hidroxi-metil) -pirrolidin-l-carboxilico (S-mez) Se agregó borohidruro de sodio (1.19 g, 31.4 mmol) a una solución agitada de éster ter-butilico del ácido (S)-3-ciclobutancarbonil-pirrolidin-l-carboxílico (5.30 g, 20.9 mmol) en MeOH (105 mL) mantenido bajo una atmósfera de nitrógeno a 0 °C. Se agitó la mezcla por 2 horas mientras se calienta a temperatura ambiente. Se concentró el MeOH, diluyó con diclorometano y se lavaron los orgánicos con NaHCC>3 acuoso saturado, agua y salmuera. Se secó (MgSOí) , filtró y concentró bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del titulo (4.4 g, 82%) como una mezcla de diastereómeros (S-mez) .

Preparación 11: Éster ter-butilico del ácido (3S)-3-(l-Hidroxi-3-butenil) -pirrolidin-l-carboxilico, (S-mez) El compuesto de la Preparación 11 puede ser preparado esencialmente como se describe en la Preparación 10, usando éster ter-butilico del ácido ( 3S ) -3- (but-3-enonil ) -pirrolidin-l-carboxilico .

Preparación 12: Éster ter--butilico del ácido 3- (l-Hidroxi-3-metil-butil ) -pirrolidin-1-¦carboxilico, diastereómero 1 (DI) Éster ter-butilico del ácido 3- (l-Hidroxi-3-metil-butil) -2-oxo-pirrolidin-l-carboxílico, diastereómero 1 (DI) y diastereómero 2 (D2) Se agregó bis (trimetilsilil) -amida de litio (1.0 M en THF, 148 mL, 148 mmol) a una solución de éster ter- butilico del ácido 2-oxo-pirrolidin-l-carboxílico (25.0 g, 134 mmol) en THF (450 mL) a -78 °C y se agitó bajo nitrógeno por 2 horas. Se agregó 3-metil-butiraldehído (17.5 mL, 162 mmol) seguido por dietil eterato trifluoruro de boro (20.5 mL, 162 mmol) y se continuó agitando a -78 °C por 2 horas. Se calentó la mezcla a temperatura ambiente, se apagó con cloruro de amonio acuoso saturado (250 mL) y se extrajo con EtOAc (3X) . Se secaron los orgánicos combinados ( a2S04) , filtraron y concentraron bajo presión reducida. Se dividió el producto crudo en dos porciones iguales y se purificó cada porción por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 0-40% EtOAc en hexanos para proporcionar éster ter-butílico del ácido 3- ( l-hidroxi-3-metil-butil) -2-oxo-pirrolidin-l-carboxílico, diastereómero 1 (12.5 g, 34%) (DI) como el primer isómero de elución, MS (m/z) = 216.0 (M-56) , y éster ter-butílico del ácido 3- ( l-hidroxi-3-metil-butil ) -2-oxo-pirrolidin-l-carboxílico, diastereómero 2 (3.87 g, 11%) (D2) como el segundo isómero de elución. MS (m/z) = 216.0 (M-56) Reducción de amida Se agregó lentamente complejo de metil sulfuro de boro (2.0 M en THF, 68.8 mL, 138 mmol) a una solución de éster ter-butílico del ácido 3- (l-hidroxi-3-metil-butil) -2-oxo-pirrolidin-l-carboxílico (DI) (12.5 g, 45.9 mmol) en THF (220 mL) mantenido bajo nitrógeno. Se calentó la mezcla a reflujo por 2 horas y se apagó con cloruro de amonio acuoso saturado (200 mL) . Se extrajo con acetato de etilo (2X) . Se lavaron los orgánicos combinados con H20 (100 mL) , 5% de ácido cítrico (100 mL) y salmuera (100 mL) . Se secó (Na2S04) , filtró y concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 0-40% de EtOAc en hexanos para proporcionar 10.7 g (91%) del compuesto del título. MS (m/z) = 202.0 ( -56) .

Preparación 13: Ester ter-butílico del ácido (3S)-3-(2-ciclopropil-l-hidroxietil) pirrolidin-l-carboxílico (S-mez) Se agregó acetato de paladio (II) (50.0 mg; 0.22 mmol) a una solución agitada de 3- ( l-hidroxi-3-enil) pirrolidin-l-carboxilato de (3S) -ter-butilo (S-mez) (3.0 g, 12.43 mmol) y diazometano recientemente preparado (50 mL, aproximadamente 23.8 mmol en éter dietílico) en THF (20 mL) bajo nitrógeno a 0 °C (Precaución: desprendimiento vigoroso de gas) . Se agitó a 0 °C por 10 minutos. Se calentó a temperatura ambiente, se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3X) . Se lavaron los orgánicos combinados con agua y salmuera. Se secó (MgS04) , filtró y concentró bajo presión reducida. Se sometió el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 0-100% de acetato de etilo en hexano para proporcionar 2.9 g (91%) del compuesto del título. MS (m/z) = 200.0 (M-55) Preparación 14: Ester ter-butílico del ácido 3- ( 2-Ciclobutil-1-hidroxietil) pirrolidin-l-carboxílico . 3- (2- (dietoxifosforil ) acetil) pirrolidin-l-carboxilato de ter-Butilo Se agregó butil litio (98.0 mL, 157 mmol) por goteo a una solución de metilfosfonato dietílico (23.6 g, 155 mmol) en THF (194 mL) bajo nitrógeno a -78 °C durante 15 minutos. Se agregó éster ter-butílico del ácido (S)-3- (metoxi (metil) carbamoil) pirrolidin-l-carboxílico (5.0 g, 19.4 mmol) en THF y se agitó a -78 °C por aproximadamente 3.5 hrs. Se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3X) . Se lavaron los orgánicos combinados con agua y salmuera. Se secó (MgS04) , filtró, y concentró. Se sometió el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 0-50% de acetona en cloroformo seguido por otra cromatografía en gel de sílice eluyendo con 0-30% de acetona en diclorometano para proporcionar 3.15 g (47%) del compuesto deseado. MS (m/z) = 294.0 (M-55) Ester ter-butilico del ácido 3- (2-ciclobutilidenacetil) pirrolidin-l-carboxilico Se agregó ciclobutanona (0.738 mL; 9.89 mmol) a una mezcla agitada de éster ter-butilico del ácido 3- (2- (dietoxifosforil) -acetil) pirrolidin-l-carboxilico (3.14 g, 8.99 mmol) e hidróxido de potasio (656 mg, 11.7 mmol) en etanol (45 mL) mantenido bajo nitrógeno a 5°C. Se calentó a temperatura ambiente y se agitó por 3 horas. Se concentró bajo presión reducida y se sometió el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 20% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar 0.85 g (36%) del compuesto crudo deseado, el cual se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Éster ter-butílico del ácido 3- (2- Ciclobutilacetil ) pirrolidin-l-carboxílico Se agregó paladio en carbono (50 mg, catalítica) a Éster ter-butílico del ácido 3- (2-ciclobutiliden-acetil ) pirrolidin-l-carboxílico (850 mg, 3.20 mmol) en acetato de etilo (25 mL) y se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Se instaló un balón de gas de hidrógeno y se agitó durante la noche. Se filtró la reacción sobre celite, se enjuagó con acetato de etilo y se concentró a sequedad para proporcionar 391 mg (46%) del compuesto deseado. MS (m/z) = 212.0 (M-55) Reducción Se agregó borohidruro de sodio (71.9 mg, 1.90 mmol) en forma de porciones a éster ter-butilico del ácido 3- (2-ciclobutilacetil ) pirrolidin-l-carboxilico (391 mg, 1.46 mmol) en metanol (7.31 mL) a 0 °C. Se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró bajo presión reducida, diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3X) . Se lavaron los orgánicos combinados con NaHC03 acuoso saturado, agua y salmuera. Se secó (MgS04), filtró y concentró bajo presión reducida para proporcionar 0.39 g (97%) del compuesto del titulo. MS (m/z) = 214.0 (M-55) Preparación 15: Éster ter-butilico del ácido (3S)-3-[2-Ciclopropil-1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -etil ] -pirrolidin-l-carboxilico, isómero 1 (S-l) e isómero 2 (S-2).

Se agregó hidruro de sodio (60%, 94.0 mg, 2.35 mmol) lentamente a temperatura ambiente a una mezcla de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- (2-ciclopropil-l-hidroxi-etil) -pirrolidin-l-carboxílico (S-mez) (31.5 g, 123.36 mmol) y DMSO (11.8 mL) mantenido bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agitó por 10 minutos y después se agregó 2-cloro-5-fluoropicolina (359 mg, 2.47 mmol). Se calentó a 60°C y se agitó durante la noche. Se enfrió la mezcla, se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3X) . Se lavaron los extractos orgánicos combinados con agua y salmuera. Se secó (MgS04), filtró y concentró. Se purificó el residuo crudo por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 20% de acetato de etilo en hexano para proporcionar éster ter-butílico del ácido (3S) -3- [2-ciclopropil-l- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -etil ] -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 1, (S-1) (99 mg, 22%) como el primer isómero de elución y éster ter-butílico del ácido ( 3S) -3- [2-ciclopropil-l- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -etil] -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 2, (S-2) (80 mg, 18%) como el segundo isómero de elución. MS (m/z) =325.0 (M-55) Los compuestos de las Preparaciones 16 - 23 pueden ser preparados esencialmente como se describe en la Preparación 15.

Preparación 24: Éster ter-butílico del ácido 3- [ 1- ( 6-Cloro-3-piridiloxi) -3-metil-butil ] -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 1 (D2E1) e isómero 2 (D2E2) Reacción Mitsunobu Se burbujeó nitrógeno a través de una solución d éster ter-butilico del ácido 3- (l-hidroxi-3-metil-butil) pirrolidin-l-carboxilico (DI) (600 mg, 2.33 mmol) y 2-cloro-5-hidroxi-piridina (0.451 g, 3.50 mmol) en tolueno (10 mL) a temperatura ambiente por 10 minutos. Se agregó tri-n-butilfosfina (0.872 mL, 3.50 mmol) seguido por dipiperidida del ácido azodicarboxilico (0.882 g, 3.50 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 70 °C, y se agitó durante la noche. Se agregó éster ter-butilico del ácido 3- ( l-hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-l-carboxilico (Di) adicional (600 mg, 2.33 mmol), tri-n-butilfosfina (0.872 mL, 3.50 mmol) y dipiperidida del ácido azodicarboxilico (0.882 g, 3.50 mmol). Se continuó agitando a 70 °C por 3 horas. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se vertió en NaHC03 acuoso saturado. Se extrajo con acetato de etilo (2X) , se combinaron los extractos orgánicos, se secaron (Na2S04) , filtraron y concentraron. Se purificó el residuo crudo por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 0-20% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar 180 mg de éster ter-butilico del ácido 3- [ 1- (6-cloro-3-piridiloxi) -3-metil-butil ] -pirrolidin-1-carboxílico (D2) por separación quiral.

Resolución cromatográfica quiral Se separó la mezcla de isómeros de éster ter-butilico del ácido 3- [ 1- ( 6-cloro-3-piridiloxi ) -3-metil-butil ] -pirrolidin-l-carboxílico (D2) usando cromatografía de fluido supercrítico en una columna OD-H eluyendo con 12% de isopropilamina/C02 con 0.2% de dimetilamina para obtener éster ter-butílico del ácido 3- [ 1- ( 6-cloro-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-l-carboxilico (D2E1), como el primer isómero de elución (80.6 mg, 9.4%) y éster ter-butilico del ácido 3- [1- (6-cloro-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-l-carboxilico (D2E2) como el segundo isómero de elución (81.2 mg, 9.4%).

MS (m/z) = 391 [M+l] .

Los compuestos de las Preparaciones 25 - 28 pueden ser preparados esencialmente como se describe en la Preparación 24.

Condiciones MS Prep Compuesto Estructura Estéreo de (m/z) Separación éster ter- butílico del ácido 3-[l-(2- AD-H, 5% 405 25 Cloro-4-metil- D2E1 MeOH, 0.2% 3-piridiloxi) - (M+Na) 3-metil-butil] - DEMA pirrolidin-l- carboxilico éster ter- butílico del ácido 3-[l-(2- AD-H, 5% 26 Cloro-4-metil- '— N 405 D2E2 MeOH, 0.2% 3-piridiloxi) - (M+Na) 3-metil-butil] - DEMA pirrolidin-1- carboxílico Preparación 29: Éster ter-butilico del ácido (3S) -3- [ 1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-1-carboxílico (S-2) Se mezcló hidruro de sodio (60%, 121.2 mg, 3.03 mmol) , éster ter-butílico del ácido ( 3S) -3- ( l-hidroxi-3-metil-butil ) -pirrolidin-l-carboxilico (S-2) (0.65 g, 2.53 mmol) y DMSO (10.0 mL) . Se agitó la mezcla por lh a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó 2-cloro-5-fluoropicolina (2.21 g, 15.2 mmol) y se agitó la mezcla a 70 °C durante la noche. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente, se apagó la reacción con salmuera y se extrajo con acetato de etilo. Se combinaron los extractos orgánicos y se secaron (MgS0 ) , filtraron y concentraron. Se purificó el residuo crudo por cromatografía en gel de sílice, eluyendo con 0-20% de acetato de etilo en hexano seguido por 20% de acetato de etilo en hexano para proporcionar 0.58 g (60%) del compuesto del título. MS (m/z) =425.0 (M+23) .

Preparación 30: 6-Metoxi-2-metil-piridin-3-ol .

Se agregó peróxido de hidrógeno (7.69 mL, 89.8 mmol) a una mezcla agitada de ácido 2-metoxi-6-metil-5-piridilborónico (5.0 g, 30 mmol) en diclorometano (100 mL) mantenido bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Se agitó durante la noche a temperatura ambiente, se agregó agua y se extrajo la mezcla con diclorometano. Se combinaron las fases orgánicas, se secaron (MgS04) , filtraron y concentraron para proporcionar 2.6 g (62%) del compuesto del título. MS (m/z) = 140 [M+l] .

Ejemplo 1: (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2- ciclopropil-etil] -pirrolidina, L-tartrato (S-l) Desprotección Se agregó ácido trifluoroacético (1.51 g, 1.0 mL, 13.2 mmol) a una solución de éster ter-butilico del ácido (3S)-3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil ] -pirrolidin-l-carboxilico (S-l) (99.0 mg, 0.260 mmol) en metoxibenceno (1.0 mL) y diclorometano (2.0 mL) . Se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente por lh. Se cargó la mezcla directamente en una columna SCX pre-envasada y se enjuagó con CH2CI2 seguido por CH3OH. Se eluyó con 2M NH3 en metanol y se concentró bajo presión reducida para dar 58 mg (79%) de (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina (S-l). MS (m/z) = 281.2 [M+l] Formación de Sal agregó ácido L-tartárico (31.0 mg, 0.207 mmol) una solución de (3S) -3- [ 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina (S-l) (58.0 mg, 0.207 mmol) en metanol (2 mL) . Se agitó la mezcla a temperatura ambiente por una hora bajo nitrógeno. Se concentró y se secó en un horno a vacio para obtener 89.0 mg (99%) del compuesto del título.

MS (m/z) = 281.0 [M+l] Los compuestos de EJEMPLOS 2 - 8 pueden ser preparados esencialmente como se describe en el EJEMPLO 1.

Ejemplo 9: (3S) -3- (3- etil-l- (2-metil-6-metilamino piridiloxi) butil) -pirrolidina, L-tartrato (S-2) Reacción de acoplamiento catalizada por Pd Se cargó un recipiente de microondas de 5 mL con 0.294 mL de una solución de 10 mg/mL de Pd(OAc)2 (2.93 mg, 0.013 mmol) en tolueno. Se agregó 0.756 mL de una solución de 10 mg/mL de cataCXium@PtB de Degussa [ (N-Fenil-2- (di-t-butilfosfino) pirrol] (7.50 mg, 0.026 mmol) en tolueno y ter-butóxido de sodio (30.2 mg, 0.314 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó 1 mL de una solución de 10 mg/mL de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-l-carboxilico (S-2) (0.100 g, 0.261 mmol) en tolueno y metilamina (0.392 mL, 0.785 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 150 °C por 1.5 horas. Se agregó resina Si-SH y se agitó por 2 horas para depurar el Pd. Se vertió la mezcla cruda en una columna SCX pre-envasada, lavada con metanol, se liberó el producto con 2M NH3 en metanol y se concentró. El producto crudo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (m/z) = 378 [M+l] Desprotección Se agitó una mezcla de éster ter-butilico del ácido (3S)-3-[l- ( 2-metil-6-metilamino-3-piridiloxi ) -3-metil-butil ] -pirrolidin-l-carboxilico (S-2) y HC1 acuoso (4M, 0.261 mL, 1.04 mmol) a temperatura ambiente por 1 hora. Después de la conversión completa, se concentró la mezcla, se disolvió en diclorometano y se cargó la mezcla sobre una columna SCX pre-envasada. Se lavó con diclorometano seguido por metanol. Se liberó el producto con 2M NH3 en metanol y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo crudo por cromatografía de fase inversa (17-43% de gradiente de acetonitrilo en 0.01 M de formiato de amonio en agua, 85 mL/min, por 8 min., columna XBridge C18 ODB, 30 x 75 mm, 5 µp?) para dar 9 mg (12%) de ( 3S) -3- [ 1- ( 2-metil-6-metilamino-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidina (S-2). S (m/z) = 278 [M+l] .

Se preparó la sal de L-tartrato disolviendo el material purificado en una mezcla de acetonitrilo/metanol (5:1). Se agregó una solución acuosa 1N de ácido L-tartárico (1.05 equiv) . Se liofilizó la mezcla para proporcionar el compuesto del titulo como un sólido. MS (m/z) = 278 [M+l.

Ejemplo 10: ( 3S ) -3- [ 1- ( 6-ciclopropilamino-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidina, L-tartrato (S-2) El compuesto del titulo puede ser preparado esencialmente como se describe en el Ejemplo 9. MS (m/z) = 304 [M+l] .

Ejemplo 11: ( 3S) -3- ( 1- ( 6-etoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil) -pirrolidina, L-tartrato (S-2) Reacción de acoplamiento catalizad por Pd Se cargó un recipiente de microondas de 5 mL con (S)-(-)-2,2'-bis(di-p-tolilfosfino)-l,l'-binaftil (15.1 mg, 0.0222 mmol) , tris (dibencilidenacetona) dipaladio (0) (10.2 mg, 0.0111 mmol) y tolueno (2 mL) . Se agregó una solución de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-l-carboxilico (S-2) (85.0 mg, 0.222 mmol) en tolueno (1 mL) seguido por etóxido de sodio (0.216 mg, 0.666 mmol). La mezcla de reacción es irradió bajo condiciones de microondas a 140 °C por 30 minutos. Se agregó resina Si-SH y se agitó por 2 horas para depurar el Pd. Se vertió la mezcla cruda en una columna SCX, se lavó con metanol, se liberó el producto con 2 H3 en metanol y se concentró. El producto crudo se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (m/z) = 393 [M+l] Desprotección Se agitó una mezcla de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- [1- (6-etoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-l-carboxilico (S-2) y HC1 acuoso (4N en dioxano, 0.261 mL, 1.04 mmol) a temperatura ambiente por 1 hora. Después de la conversión completa, se concentró la mezcla, se disolvió el residuo en clorometano y se cargó sobre una columna SCX pre-envasada . Se lavó la columna con diclorometano seguido por metanol. Se liberó el producto con 2M NH3 en metanol y se concentró bajo presión reducida. Se purificó el residuo crudo por cromatografía de fase inversa (34-60% de gradiente de acetonitrilo en 0.01 M de formiato de amonio en agua, 85 mL/min, por 8 min., columna XBridge C18 ODB, 30 x 75 non, 5µp?) para dar 13.4 mg (21%) de (3S) -3- [ 1- ( 6-etoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidina (S-2) . MS (m/z) = 293 [M+l] .

Se preparó la sal de L-tartrato disolviendo el material purificado en una mezcla de acetonitrilo/metanol (5:1) . Se agregó una solución acuosa 1N de ácido L-tartárico (1.05 equiv) . Se liofilizó la mezcla para proporcionar el compuesto del título como un sólido. MS (m/z) = 293 [M+l] .

Ejemplo 12: (3S) -3- (1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) butil) -pirrolidina, L-tartrato (S-2).

Se agregó éster ter-butílico del ácido (3S)-3-(l-hidroxi-butil) -pirrolidin-l-carboxílico (S-2) (0.400 g, 1.64 mmol) e hidruro de sodio (60%, 132 mg, 3.29 mmol) a DMSO (10 mL) . Se mantuvo la mezcla bajo una atmósfera de nitrógeno y se agitó por 15 minutos. Se agregó 6-cloro-3-fluoropicolina (1.44 g, 9.86 mmol). Se calentó la mezcla a 70 °C y se agitó por 1 hora. Se vertió la mezcla de reacción sobre salmuera y se extrajo con EtOAc. Se combinaron los extractos y se secaron (MgS04), filtraron y concentraron. Se usó el residuo crudo en la siguiente reacción sin purificación adicional.

La desprotección y formación de L-tartrato son esencialmente realizadas como en el Ejemplo 1 para proporcionar el compuesto del titulo (384 mg, 56%). MS (m/z) = 268 [M+l] .

Los compuestos de Ejemplos 13 - 16 pueden ser preparados esencialmente como se describe en el Ejemplo 12.

Ejemplo 17: ( 3S ) -3- ( 1- ( 6-bromo-3-piridiloxi ) -3-metil-butil ) -pirrolidina, L-tartrato (S-2) .

Se cargó un recipiente de reacción con una solución de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- ( l-hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-l-carboxilico (S-2) (100 mg, 0.389 mmol) en DMF (3 mL) . Se agregó 3-fluoro-6-bromo-3-piridina (90 mg, 0.051 mmol), 18-corona-6 (10.3 mg, 0.039 mmol) y ter-butóxido de sodio (68.2 mg, 0.699 mmol). Se calentó la reacción a 80 °C por varias horas hasta que el LC/ S mostró conversión al producto deseado. Se evaporó el solvente y se usó el residuo en la siguiente reacción sin purificación adicional.

La desprotección y la formación de sal son esencialmente realizadas como en el Ejemplo 11 para proporcionar el compuesto del titulo. MS (m/z) = 314 [M+l] .

Ejemplo 18: ( 3S) -3- [ 1- ( 6-Cloro-3-piridiloxi ) -3-metil-butil] pirrolidina, L-tartrato (S-2) El compuesto del titulo pueden ser preparados esencialmente como se describe en el Ejemplo 17. MS (m/z) = 269 [M+l] .

Ejemplo 19: ( 3S) -3- ( 1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metil-butil) -pirrolidina, L-tartrato (S-2).

Se purgó nitrógeno a través de una solución de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- (l-hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-l-carboxílico (S-l) (0.5 g, 1.94 mmol) y 6-metoxi-2-metil-piridin-3-ol (0.41 g, 2.91 mmol) en tolueno (10 mL) a temperatura ambiente por 10 minutos. Se agregó tri-n-butilfosfina (0.73 mL, 2.91 mmol) seguido por dipiperidida del ácido azodicarboxílico (0.59 mg, 2.91 mmol) . Se calentó la mezcla de reacción a 70 °C, y se agitó durante la noche. Se enfrió la mezcla a temperatura ambiente y se vertió sobre NaHCC>3 acuoso saturado (50 mL) . Se extrajo con acetato de etilo (2X) , se combinaron los extractos orgánicos y se secaron (Na2S04) , filtraron y concentraron. Se purificó el residuo crudo por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 0-20% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar éster ter-butílico del ácido ( 3S) -3- [ 1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil] -pirrolidin-l-carboxílico (S-2) (101 mg, 13%) . La desprotección y la formación de L-tartrato se realizan esencialmente como en el EJEMPLO 1 para proporcionar el compuesto del titulo. MS (m/z) = 279 [M+l] Ejemplo 19A: ( 3S) -3- ( 1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -3- metil-butil) -pirrolidina, (S-2). Síntesis Alternativa (S) -l-Bencil-3- ( 3-metilbutanoil ) pirrolidin-2-ona : Se cargó un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 5 litros, equipado con un agitador magnético, termopar, embudo de agitación y entrada de N2 con diisopropilamina (176 mL, .1265 mmoles) y 2-metiltetrahidrofurano (500 mL) . Se enfrió la solución a ~ -10 °C (sal/baño de hielo) con agitación y se agregó una solución de n-BuLi (2.5 M en hexanos, 504 mL, 1259 mmoles) por goteo mientras se mantiene una temperatura en o por debajo de 0 °C. Se enjuagó el embudo de agitación con 2-metiltetrahidrofurano (25 mL) . Se agitó la solución por aproximadamente 15 min, a ~ -5 °C. Se agregó una solución de N-bencil-2-pirrolidinona (100.8 g, 575.2 mmoles), isovalerato de etilo (90 g, 690 mmoles) en 2-Me-THF (500 mL) por goteo a una velocidad para mantener una temperatura en o por debajo de 5 °C para proporcionar una suspensión amarilla. Se agitó la mezcla de reacción aproximadamente 1 hora a -5 °C, se agregó heptano (1 L) por goteo, y se agitó por 1 hr. adicional a -5 °C . Se recolectó el sólido por filtración a través de un embudo de medio poroso, se lavó con una solución 1:1 de 2-metiltetrahidrofurano/heptano (250 mL) seguido por heptano (250 mL) y se secó en aire hasta que el sólido llegó a ser similar al polvo. Se colocó el sólido amarillo en un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 5 litros, equipado con un agitador magnético y se agregó MTBE (1 L) y 10% de ácido cítrico (1 L) . Se agitó la mezcla por aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente para proporcionar una mezcla homogénea. Se las capas se separaron y se lavó la capa orgánica con H20 (2 x 500 mL) , seguido por salmuera (500 mL) . Se secó sobre Na2S04, filtró y concentró para dar el intermediario crudo (128 g) como un aceite anaranjado. Una destilación Kuegelrohr remueve la impureza principal a partir del material crudo para proporcionar el intermediario deseado como un aceite anaranjado oscuro (117.4 g, 452.7 mmoles, 78.7% de rendimiento). 1R NMR (300 MHz, CDC13) d 7.38-7.16 (m, 5H), 4.55-4.35 (m, 2H) , 3.62 (dd, 1H, J = 5.86, 9.37 Hz) , 3.38-3.14 (m, 2H) , 2.92-2.8 (m, 1H) , 2.64-2.42 (m, 2H) , 2.28- 2.11 (m, 1H) , 2.08-1.93 (m, 1H) , 0.96 (d, 3H, J = 7.03 Hz) 0.93 (d, 3H, J = 7.04 Hz) . GC/ S = 260 (M+l) .

(R) -l-Bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil ) pirrolidin-2-ona : Se cargó un recipiente de autoclave de acero inoxidable de 400 mL con una solución de (S) -l-bencil-3- (3-metilbutanoil) pirrolidin-2-ona (20 g, 77.12 mmoles) en IPA (250 mL) , seguido por 35% de HC1 (6% comparado con el sustrato, 4.63 mmoles, M = 36.4 g/mol, d = 1.18 g/mL, 0.408 mL) . Se purgó con gas de N2 (5 x ~50 PSI) . Se ventiló el recipiente y se agregó rápidamente (S) -Ru (OAc) 2T-BINAP (250 mg, 0.2784 mmoles), mientras una corriente de N2 fluye sobre la parte superior de la mezcla de reacción. Se selló inmediatamente la autoclave y se purgó con gas de N2 (5 x ~50 PSI) . Se purgó el recipiente con gas de H2 (5 x 60 PSI) y después se cargó del recipiente con gas de H2 (60 PSI). Se agitó la mezcla de reacción a 65 °C durante la noche (~16-18 horas) . La presión del recipiente incrementó a ~70 PSI durante este tiempo y el recipiente se rellenó con gas de H2 como sea necesario y no se mantiene a una presión constante de 60 PSI sobre el curso de la reacción. Se enfrió a temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida para dar (R) -l-bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil ) pirrolidin-2-ona cruda como un aceite marrón oscuro que se mantuvo sobre la siguiente etapa sin purificación adicional (21.6 g, 82.6 inmoles, ~95-97% ee, >100% de rendimiento). H NMR (300 MHz , CDC13) d 7.38-7.18 (m, 5H) , 4.48 (s, 2H) , 4.34-4.22 (m, 1H) , 3.28-3.14 (m , 2H) , 2.63 (td, 1H, J = 2.93, 9.37 Hz) , 2.47 (d, 1H, J = 5.86 Hz) , 2.12-1.70 (m, 3H) , 1.54-1.38 (m, 1H) , 1.24-1.10 (m, 1H) , 0.95 (d, 3H, J = 3.51 Hz) , 0.93 (d, 3H, J = 2.93 Hz) . GC/MS = 262 (M+l) .

(S) -l-Bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil ) -pirrolidina : Se cargó un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 1 L equipado con un agitador magnético, termopar, embudo de agitación y entrada de N2 con (R) -l-bencil-3- ( (S) -1-hidroxi-3-metilbutil ) pirrolidin-2-ona cruda (38.26 mmoles, asumido) y tolueno (100 mL) . Se enfrió la solución de agitación ligeramente heterogénea a 0 °C (sal/baño de hielo) y se agregó una solución de Vitride™ (Rohm & Haas) (65 % en peso en tolueno, 24 mL, 86.085 mmoles) y tolueno (70 mL) por goteo mientras se mantiene una temperatura en o por debajo de 5 °C. Se enjuagó el embudo de agitación con tolueno (10-20 mL) . Se agitó a temperatura ambiente durante la noche (~16 hr) . Se enfrió la mezcla de reacción a 0 °C (sal/baño de hielo) y se apagó con solución saturada de sal Rochell (200 mL) seguido por MTBE (200 mL) . Se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente con agitación y después se agitó a esta temperatura por 1 hora. Se separó lo orgánico y las capas acuosas y se lavó la capa orgánica con H20 (2 x 200 mL) , después salmuera (200- mL) , y después se secó sobre Na2S04. Filtraron y concentraron para dar el intermediario deseado como un aceite marrón (9.61 g, 38.85 mmoles, >100% de rendimiento). 1H NMR (300 MHz, CDC13) d 7.36-7.18 (m, 5H) , 3.82-3.72 (m, 1H) , 3.58 (dd, 2H, 7.61, 20.51 Hz) , 2.87 (td, 1H, J = 4.10, 8.79 Hz) , 2.79-2.70 (m, 1H) , 2.48-2.38 (m, 1H) , 2.26-2.04 (m, 2H) , 1.98-1.64 (m, 3H) , 1.46-1.32 (m, 1H) , 1.14-0.98 (m, 1H) , 0.92 (d, 3H, J = 1.18 Hz), 0.89 (d, 3H, J = 1.76 Hz). LC/MS = 248.1 (M+l).

Resolución/Purificación de (S) -l-bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil) -pirrolidina : Se cargó un matraz de fondo redondo de 500 mL equipado con una barra agitadora magnética y entrada de N2 con (S) -l-bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil ) -pirrolidina cruda (9.61g, 38.26 mmoles) y MeOAc (96 mL) . Se agregó ácido dibenzoil- (1) -tartárico (13.71 g, 38.26 mmoles) en una porción con agitación y la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente hasta que la mezcla llegó a ser turbia (~5 min.). Se calentó en un baño de aceite precalentado a 50°C durante la noche con agitación (~16 horas) . Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y lo sólido se aisló por filtración a través de un embudo de medio poroso. Se lavó lo sólido con acetato de metilo (5 x 20 mL) y se dejó secar en aire para dar sal de (S) -l-bencil-3- ( (S) -1-hidroxi-3-metilbutil) -pirrolidina como un sólido blanco (15.1 g, 24.93 mmoles, 65.2% de rendimiento sobre 3 etapas, 81.4% de recuperación de isómero asumiendo 80% ee) . LC/MS = 248.1 (M+l) .

Desalación de sal de ( S) -l-bencil-3- (( S ) -l-hidroxi-3-metilbutil) -pirrolidina: Se cargó un matraz de fondo redondo de 500 mL equipado con una barra agitadora magnética con sal de (S)-l-bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil) -pirrolidina (13.71 g, 22.636 mmoles) y MTBE (140 mL) . Se agregó NaHC03 acuoso saturado (140 mL) y se agitó la mezcla heterogénea a temperatura ambiente durante la noche. Se diluyó la solución turbia con EtOAc (140 mL) y NaHC03 acuoso saturado (50 mL) , seguido por H20 (~100 mL) , para proporcionar una mezcla clara. Las capas se separaron y se secó la capa orgánica sobre a2S04. Se filtró y concentró para dar ( S) -l-bencil-3-( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil) -pirrolidina como un aceite marrón que se mantuvo sobre la siguiente etapa sin purificación adicional (5.37 g, 21.707 mmoles, 95.9% de recuperación). XH NMR (300 MHz, CDC13) d 7.36-7.18 (m, 5H) , 3.82-3.72 (m, 1H) , 3.58 (dd, 2H, 7.61, 20.51 Hz) , 2.87 (td, 1H, J = 4.10, 8.79 Hz), 2.79-2.70 (m, 1H) , 2.48-2.38 (m, 1H) , 2.26-2.04 (m, 2H) , 1.98-1.64 (m, 3H) , 1.46-1.32 (m, 1H) , 1.14-0.98 (m, 1H) , 0.92 (d, 3H, J = 1.18 Hz) , 0.89 (d, 3H, J = 1.76 Hz) . LC/MS = 248.1 (M+l).

(S) -l-bencil-3- ( (S) -1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -3-metilbutil ) -pirrolidina : Se cargó un matraz de fondo redondo de 200 mL equipado con un adaptador Claisen, termopar y entrada de N2 con (S) -l-bencil-3- ( (S) -l-hidroxi-3-metilbutil ) -pirrolidina (5.69 g, 23 mmoles) y DMA (58 mL) . Se agregó NaH (1.29 g, 32.2 mmoles) en una porción con agitación y se agitó a temperatura ambiente por 1 hora. Se agregó 6-cloro-3-fluoro-2-metilpiridina (3.52 g, 24.15 mmoles) en una porción con agitación y después se agitó a temperatura ambiente por 24 horas. Se apagó la mezcla de reacción con H20 (120 mL) y se extrajo con MTBE (120 mL) . Se lavó la capa orgánica con H20 (2 x 60 mL) , seguido por salmuera (60 mL) , y después se secó sobre Na2S0 . Se filtró, concentró, y después se purificó el material crudo (en tolueno) cargando sobre sílice (225 g, humedecido con tolueno) y eluyendo con lo siguiente: hexanos (2 x 500 mL), 15% MTBE/hexanos (16 x 500 mL) , 50% MTBE/hexanos (8 x 500 mL) . Se concentraron las fracciones apropiadas para dar (S) -l-bencil-3- ( (S) -1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metilbutil ) -pirrolidina como un aceite amarillo ligero (5.77 g, 15.47 mmoles, 67% de rendimiento, pureza >98%) . XH NMR (300 MHz, CDC13) d 7.38-7.20 (m, 5H) , 7.06 (s, 2H) , 4.32-4.20 (m, 1?) , 3.68-3.48 (m, 2H) 2.78-2.64 (m, 2H) , 2.64-2.30 (m, 2H) , 2.42 (s, 3H) , 2.28-2.20 (m, 1H) , 2.05-1.85 (m, 1H) , 1.82-1.52 (m, 4H) , 1.48-1.34 (m, 1H) , 0.92 (d, 3H, J = 6.45 Hz), 0.88 (d, 3H, J = 6.45 Hz). LC/MS = 373.2 (M) , 375.3 (M+2).

(S) -l-bencil-3- ( (S) -1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metilbutil) -pirrolidina : A un matraz RB de 200 mL equipado con una barra agitadora magnética y entrada de N2, se cargó con (S)-l-bencil-3- ( ( S ) -1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metilbutil ) -pirrolidina (5.46 g, 14.65 mmoles) y DMSO (30 mL) . Se agregó metóxido de potasio (4.11 g, 58.61 mmoles) en una porción con agitación. Se agitó la mezcla de reacción en un baño de aceite a 100 °C por 1 hora. Se diluyó con H20 (60 mL) y MTBE (60 mL) . Las capas se separaron y se lavó la capa orgánica con H20 (2 x 30 mL) , seguido por salmuera (30 mL) , y después se secó sobre Na2S(_>4. Se filtró y concentró el material crudo (en tolueno) . Se cargó sobre sílice (225 g, humedecido con tolueno), y se eluyó con lo siguiente: hexanos (2 x 500 mL) , 50% MTBE/hexanos (6 x 500 mL) . Se concentraron las fracciones apropiadas para dar (S) -l-bencil-3- ( (S) -1- (6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metilbutil ) -pirrolidina . (4.32 g, 11.72 mmoles, 80% de rendimiento) como un aceite amarillo/anaranjado. XH NMR (300 MHz, CDC13) d 7.34-7.2 (m, 5H) , 7.10 (d, 1?, J = 8.79 Hz) , 6.49 (d, 1H, J = 8.79), 4.17-4.07 (m, 1H) , 3.88 (s, 3H) , 3.68-3.50 (m, 2H) , 2.78-2.67 (m, 2H), 2.61-2.48 (m, 1H) , 2.48-2.38 (m, 1H) , 2.37 (s, 3H) , 2.33-2.24 (m, 1H) , 2.00-1.50 (m, 5H) , 1.44-1.30 (m, 1H) , 0.885 (at, 6H, Ja = 7.03 Hz, Jb = 6.44 Hz) . LC/MS = 369.3 (M+l) .

(S) -3- ( (S) -1- (6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metilbutil) -pirrolidina : Se cargó una autoclave de acero inoxidable de 400 mL con 20% en peso de Pd/C (10%, húmedo, 820 mg) seguido por una solución de (S) -l-bencil-3- ( (S) -1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metilbutil) -pirrolidina (4.1 g, 11.126 mmoles) en etanol (82 mL) . Se purgó con gas de H2 (3 x 50 PSI) , después se cargó el recipiente con gas de H2 (50 PSI) . Se calentó la mezcla de reacción a 60 ^,1 y se agitó a 60 °C por 24 horas. La presión del recipiente incrementó a ~55 PSI a 60 °C y el recipiente se rellenó con gas de H2 como sea necesario. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se filtró a través de un embudo de medio poroso cargado con celite (humedecido con etanol) , y se lavó con etanol (-80 mL) . Se concentró bajo presión reducida para dar (S) -3- ( (S) -1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metilbutil ) -pirrolidina como un aceite amarillo ligero (3.02 g, 10.848 mmoles, 97.5 % de rendimiento). XH N R (300 Hz, CDC13) d 7.12 (d, 1H, J = 8.79 Hz), 6.50 (d, 1H, 8.79 Hz), 4.2 (aq, 1H, Ja = 7.03 Hz, Jb = 5.27 Hz) , 3.87 (s, 3H) , 3.08-2.94 (m, 2H) , 2.94-2.82 (m, 1H) , 2.82-2.70 (m, 1H) , 2.50-2.26 (m, 3H) , 2.36 (s, 3H) , 1.94-1.78 (m, 1H) , 1.78-1.52 (m, 3H) , 1.44-1.30 (m, 1H) , 0.898 (at, 6H, Ja = 6.45 Hz, Jb = 7.03 Hz) . LC/MS = 279.3 (M+l) .

Ejemplo 19B: (S) -3- ( (S) -1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil) -pirrolidina, D-tartrato.

Se disolvió (S) -3- ( (S) -1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil) -pirrolidina (353 mg) en THF (1 mL) a 60 °C mientras se agita a 1000 rpm. Resulta una solución amarilla ligeramente turbia. Se agregó lentamente una solución de ácido D-tartárico (218 mg disuelto en 3 mL THF a 80 °C) a la solución. Se filtró la solución a través de una jeringa PTFE de 0.45 pm, se filtró y se agregó acetonitrilo (4 mL) . Se dejó evaporar, sin tapa, en una campana. Precipitó una gran cantidad de sólido blancuzco después de aproximadamente 20 min. se filtró a vacio la solución y se secaron los sólidos en un horno a vacio a 60 °C por 1 hr. para obtener un sólido blancuzco en polvo.

Difracción en Polvo de Rayos-X Se obtiene el patrón XRD del cristalino en un difractómetro en polvo de rayos-X Bruker D8 Advance, equipado con una fuente CuKa ? = 1.54056 Á) y un detector Vantec, que opera a 50 kV y 40 mA. La muestra se exploró entre 4 y 40° en 2T, con un tamaño de etapa de 0.02° en 2T y una velocidad de exploración de 9.0 segundos/etapa, y con 1 mm de divergencia y que recibe ranuras y una ranura de detector de 0.1 mm. El polvo seco es envasado en sujetadores de muestra de carga superior ahuecados, y se obtiene una superficie suave usando una laminilla de vidrio. El cristal forma patrones de difracción que son recolectados a temperatura ambiente y humedad relativa. El antecedente es removido previo a la elección del pico. Es bien sabido en la técnica de cristalografía que, para cualquier forma de cristal dado, las intensidades relativas de los picos de difracción pueden variar debido a orientación preferida que resulta de factores tales como morfología y hábito del cristal. En donde los efectos de orientación preferida están presentes, las intensidades de pico son alteradas, pero las posiciones de pico características del polimorfo están in cambio. Véase, por ejemplo, La Farmacopea Estadounidense #23, National Formulary #18, páginas 1843-1844, 1995. Además, también es bien, sabido en la técnica de cristalografía, que para cualquier forma de cristal dado, las posiciones de pico angular pueden variar ligeramente. Por ejemplo, las posiciones pico pueden cambiar debido a una variación en la temperatura o humedad en la cual una muestra es analizada, desplazamiento de muestra, o la presencia o ausencia de un estándar interno. En el presente caso, una variabilidad de posición de pico de ± 0.1 en 2T, tomará en cuenta estas variaciones potenciales sin obstaculizar la identificación inequívoca de la forma de cristal indicada. La confirmación de una forma de cristal puede hacerse basada en cualquier combinación única de picos de distinción (en unidades de °2T), típicamente los picos más prominentes. De este modo, una muestra preparada de la sal d-tartrato de (3S ) -3- ( 1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-metil-butil) -pirrolidina se caracterizada por un patrón de XRD usando radiación CuKa por tener picos de difracción (valores 2-teta) , como se describe en la Tabla 1 abajo, y en particular, que tiene picos a 4.63 en combinación con uno o más de los picos seleccionados a partir del grupo que consiste de 9.26, 16.12, y 16.59; con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0.1 grados.

Tabla 1: Picos de difracción en polvo de rayos-X de la sal d-tartrato de (3S) -3- (1- (6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -3-nietil-butil) -pirrolidina .

Los compuestos de los Ejemplos 20 - 32 pueden ser preparados esencialmente como se describe en el Ejemplo 19.

Ejemplo 33: 3- ( 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclobutil-etil) -pirrolidina, L-tartrato (D1E2) .

Desalado Se vertió 3- ( 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclobutil-etil) -pirrolidina, L-tartrato (DI) (80.0 mg, 0.180 mmol) sobre una columna SCX y se enjuagó con diclorometano, 50% de diclorometano en metanol y metanol. Se eluyó el compuesto con 2M NH3 en metanol y se concentró para proporcionar 3- (1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclobutil-etil ) -pirrolidina (50 mg) .

Resolución cromatográfica quiral Se sometió la amina (50 mg) a cromatografía quiral de fluido supercrítico (Chiracel OD-H) eluyendo con 25% de meta ol/0.2% de isopropilamina/C02 para proporcionar 3- (1— ( 6— cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclobutil-etil) -pirrolidina (D1E1) (21 mg, 40%, >99 lee) y 3- ( 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclobutil-etil) -pirrolidina (D1E2) (20 mg, 38%, . >99 ee) .

La formación de L-tartrato de 3- ( 1- ( 6-cloro-2- metil-3-piridiloxi) -2-ciclobutil-etil) -pirrolidina (D1E2) es esencialmente realizada como en el EJEMPLO 1 para proporcionar el compuesto del titulo. MS (m/z) = 295.2 (M+l) Ejemplo 34: ( 3S ) -3- ( 1- ( 6-Metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -butil ) -pirrolidina, L-tartrato (S-2).

Desalación Se disolvió la sal de L-tartrato de (3S) -3- (1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -butil ) -pirrolidina (S-2) (1.00 g, 2.39 mmol) en metanol y se vertió la solución sobre una columna SCX. Se enjuagó la columna con metanol y después se eluyó la amina libre con 2M NH3 en metanol. Se evaporó el solvente y se secó la amina bajo vacio para proporcionar 0.65 g (99%) de ( 3S ) -3- ( 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -butil ) -pirrolidina (S-2) el cual se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.

Desplazamiento cloruro a metoxi Se agregó ( 3S) -3- ( 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -butil) -pirrolidina (S-2) (0.65g, 2.44 mmol), DMSO (9.75 mL) , metanol (0.493 mL, 12.18 mmol) , e hidruro de sodio (0.390 g, 9.75 mmol) a un vial de reacción. Se evacuó el vial y se purgó con nitrógeno. Se calentó la mezcla a 100 °C durante la noche. Se vertió la mezcla de reacción sobre una columna SCX y se enjuagó con metanol. Se unió la columna SCX en la parte superior de una columna de gel de sílice y se eluyó con 5-30% de NH30H/etanol (1:9) en cloroformo para obtener 0.420 g (65%) de (3S) -3- (1- (6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -butil) -pirrolidina .

La formación de L-tartrato de ( 3S) -3- (1- ( 6-metoxi- 2-metil-3-piridiloxi ) -butil ) -pirrolidina (S-2) se realizó esencialmente como en el EJEMPLO 1 para proporcionar el compuesto del título. MS (m/z) = 265 [M+l] Ejemplo 35: ( 3S) -3- [ 1-Ciclobutil-l- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -metil] -pirrolidina (S-l) , L-tartrato El compuesto del título puede ser preparado a partir de ( 3S ) -3- [ 1-ciclobutil-l- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -metil ] -pirrolidina (S-l), L-tartrato esencialmente como se describe en el EJEMPLO 34. MS (m/z) = 277 [ +l].

Ejemplo 36: ( 3S ) -3- [ 1- ( 6-Metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina, L-tartrato (S-l) Desprotección Se mezcló éster ter-butilico del ácido (3S)-3-[l- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclopropil-etil ] -pirrolidin-l-carboxilico (S-l) (0.50 g, 1.31 mmol) , metoxibenceno (6.6 mL) y diclorometano (6.6 mL) en un vial de reacción. Se evacuó el vial y se purgó con nitrógeno. Se agregó ácido trifluoroacético (1.51 g, 1.0 mL, 13.2 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente por lh. Se cargó la mezcla directamente en una columna SCX pre-envasada y se enjuagó con CH2CI2 seguido por CH3OH. Se eluyó con 2M NH3 en metanol y se concentró bajo presión reducida para dar 0.353 g (96%) de (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina (S-l). MS (m/z)= 281.2 [M+l] .

Desplazamiento cloruro a metoxi Se agregó ( 3S ) -3- ( 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) - ciclopropil-etil) -pirrolidina (S-l) (0.35g, 1.25 mmol) , DMSO (4.99 mL) , metanol (0.404 mL, 9.97 mmol) , e hidruro de sodio (0.349 g, 8.73 mmol) a un vial de reacción. Se evacuó el vial y se purgó con nitrógeno. Se calentó la mezcla a 110 °C por 4h. Se disolvió la reacción en un amortiguador a pH 7 y se neutralizó con HCl 5N. Se vertió la mezcla sobre una columna SCX y se enjuagó con metanol. Se unió la columna SCX en la parte superior de una columna de gel de sílice y se eluyó con 5-35% de NH4OH/etanol (1:9) en cloroformo para obtener 0.209 g (61%) de (3S) -3- (1- (6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil) -pirrolidina (S-l). MS (m/z) = 277 [M+l] .

La formación de L-tartrato de ( 3S) -3- ( 1- ( 6-metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -ciclopropil-etil) -pirrolidina (S-l) se realizó esencialmente como en el Ejemplo 1 para proporcionar el compuesto del título. MS (m/z) = 277 [M+l] Ejemplo 37j_ ( 3S) -3- [ 1- ( 6-Cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina, L-tartrato (S-l) Preparación de amida Weinreb Se agregó una solución de ácido (S) -N-ter-butoxicarbonilpirrolidin-3-carboxilico (40 g, 186 mmol) en THF (240 mL) por goteo a una solución agitada de 1,1'— carbonildiimidazol (31.4 g, 190 mmol) en THF (160 mL) y se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno por 2.5 horas. Se agregó clorhidrato de N, O-di-metilhidroxilamina (18.8 g, 190 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se apagó la reacción con agua. Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con t-butilmetiléter (2X) . Se combinaron los orgánicos y se lavaron con 10% de H3P04 acuoso, 20% de KHCO3 acuoso, agua y salmuera. Se concentró para proporcionar 37.1 g (77%) del compuesto del titulo. MS (m/z) = 203.1 [M-55] .

La adición de Grignard a amida Weinreb y reducción de la cetona al alcohol agregó lentamente y por goteo una solución de bromuro de alilmagnesio (2.0 M en THF, 100.3 mL, 200.5 mmol) a una solución agitada de éster ter-butilico del ácido (S)-3- (metoxi (metil ) carbamoil ) -pirrolidin-l-carboxílico (37.0 g, 143.2 mmol) en THF (296 mL) mantenido bajo nitrógeno a 0 °C. Se dejó calentar la reacción a temperatura ambiente y se continuó agitando por 48 horas. Se agregó la mezcla sobre una solución enfriada (0-5 °C) de borohidruro de sodio (5.42 g, 143 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (0.74 g, 2.39 mmol) en agua (74 mL) y se agitó por 1 hora. Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con t-butilmetiléter (2X) . Se combinaron las fases orgánicas y se lavaron con agua y salmuera. Se concentró y se purificó el residuo crudo por cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con t-butilmetiléter/hexanos (3/7 a 7/3) para obtener éster ter-butílico del ácido (3S) -3- (l-hidroxi-but-3-enil) -pirrolidin-1-carboxílico (S-mez) (29 g, 85%). MS (m/z) = 186.1 [M-55] . Éster ter-butílico del ácido ( 3S) -3- (2-ciclopropil-l-hidroxietil ) pirrolidin-l-carboxílico (S-mez) agregó acetato de paladio (II) (2.31 g; 0.298 mmol) a una solución agitada de éster ter-butílico del ácido (3S) -3- (l-hidroxi-but-3-enil) -pirrolidin-l-carboxilico (S-mez) (14.4 g, 59.7 mmol) en diclorometano (43.2 mL) . Se agregó lentamente una solución recientemente preparada de diazometano (100 mL, aproximadamente 50 mmol en éter dietilico) bajo nitrógeno de -30 a -40 °C (Precaución: desprendimiento vigoroso de gas de N2) . Se evaporó el solvente y se disolvió lo crudo en diclorometano (43.2 mL) . Se agregó acetato de paladio (II) (2.31 g, 0.298 mmol) seguido por una solución recientemente preparada de diazometano (100 mL, aproximadamente 50 mmol en éter dietilico) a la mezcla mantenido bajo nitrógeno de -30 a -40 °C (Precaución: desprendimiento vigoroso de gas de N2) . Se evaporó el solvente y se disolvió lo crudo en diclorometano (43.2 mL) . Se agregó acetato de paladio (II) (2.31 g, 0.298 mmol) seguido por una solución recientemente preparada de diazometano (50 mL, aproximadamente 25 mmol en éter dietilico) a la mezcla mantenido bajo nitrógeno de -30 a -40 °C (Precaución: desprendimiento vigoroso de gas de N2) . Se evaporó el solvente, se agregó hexanos (140 mL) al residuo crudo y se agitó la suspensión durante la noche a temperatura ambiente. Se filtró la suspensión sobre una almohadilla de celite® y se concentró para obtener un rendimiento cuantitativo de éster ter-butilico del ácido (3S)-3-(2-ciclopropil-l-hidroxietil) pirrolidin-l-carboxilico (S-mez) .

MS (m/z) = 200.1 [M-55] .

Ester ter-butilico del ácido (3S) -3- [1- (6-Cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidin-1-carboxílico (S-1) y (S-2) .

Se agregó hidruro de sodio (60%, 6.20 g, 155.1 mmol) lentamente a una mezcla de éster ter-butilico del ácido (3S) -3- (2-ciclopropil-l-hidroxi-etil) -pirrolidin-l-carboxilico (S-mez) (19.8 g, 77.5 mmol), 6-cloro-3-fluoro-2-metil-piridina (16.9 g, 116.3 mmol) y dimetilacetamida (59.4 mL) mantenido bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Se calentó a 40 °C y se agitó por 3.5 horas. Se enfrió la mezcla y se agregó metanol. Se vertió la mezcla sobre 10% de H3P04 acuoso (100 mL) y t-butilmetiléter (100 mL) . Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con t-butilmetiléter (2X) . Se combinaron las fases orgánicas y se lavaron con agua y salmuera. Se evaporó el solvente para obtener un residuo crudo. Se cromatografió el residuo crudo sobre gel de sílice eluyendo con t-butilmetiléter/hexanos (2:8 a 4:6) para obtener un residuo crudo el cual se mezcló con el residuo crudo de otro lote (basado en 2 g del alcohol) . La mezcla de diastereómeros se separó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 25% de t-butilmetiléter en hexanos para obtener éster ter-butílico del ácido (3S) -3- [1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclopropil-etil ] -pirrolidin-l-carboxílico, isómero 1, (S-l) (15.0 g, 51%) como el primer isómero de elución, MS (m/z) =325.0 (M -55) y éster ter-butílico del ácido ( 3S ) -3- [ 1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi ) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidin-1-carboxílico, isómero 2, (S-2) (12.0 mg, 41%) como el segundo isómero de elución. MS (m/z) =325.0 (M-55). (3S) -3- [1- ( 6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina, (S-l) Se agregó HC1 (4M en 1,4-dioxano, 52.7 mL, 627 mmol) a una solución de éster ter-butílico del ácido (3S)-3-[1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidin-l-carboxílico (S-l) (13.4 g, 35.2 mmol) en diclorometano (40.2 mL) . Se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente por lh. Se evaporó el solvente y se disolvió el residuo en una mezcla de t-butilmetiléter (40 mL) y agua (40 mL) . Se separaron las fases, se lavó la fase acuosa con t-butilmetiléter (2X) . Se ajustó el pH de la fase acuosa a 9 por la adición de 10% de K2CO3 acuoso, se extrajo con t-butilmetiléter (3X) . Se lavaron las fases orgánicas combinadas con agua y salmuera. Se evaporaron los volátiles para obtener (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina (S-l) (9.6 g, 97%). MS (m/z) = 281.2 [M+l] (3S) -3- [1- ( 5-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil] -pirrolidina, L-tartrato (S-l) Se agregó ácido L-tartárico (5.1 g, 33.9 mmol) a una solución de (3S) -3- [1- (6-cloro-2-metil-3-piridiloxi) -2-ciclopropil-etil ] -pirrolidina (S-l) (9.7 g, 34.5 mmol) en metanol (48.5 mL) . Se agitó la mezcla a temperatura ambiente por 15 minutos bajo nitrógeno. Se evaporaron los volátiles, se disolvió el residuo en agua (100 mL) y se extrajo con t-butilmetiléter (2X) . Se concentró en el evaporador rotatorio la fase acuosa a un volumen final de 50 mL mientras se mantiene el baño a 25 °C. Se liofilizó el residuo para obtener 14.0 g, (95%) del compuesto del título. MS (m/z): 281.0 [M+l] Asignación de la Configuración Absoluta de Ester ter-butílico del ácido 3 (S) - (1' -Hidroxi-3' -metil-butil ) -pirrolidin-1-carboxilico, Isómeros 1 y 2 Existen dos carbonos estereogénicos en el éster ter-butílico del ácido 3 (S) - (1' -hidroxi-3' -metil-butil) -pirrolidin-l-carboxílico el cual corresponde a los carbonos 5 y 7 (C5 y C7) como se ilustra en la Figura 1.

Figura 1 Debido a que la configuración de C7 se conoce a partir del ácido (S) -N- (ter-butoxicarbonil) -pirrolidin-3-carboxílico de partida, la determinación de la configuración relativa podría conducir a la asignación de la configuración absoluta a C5. La configuración relativa de moléculas flexibles puede ser realizada si los acoplamientos de protón-carbono son considerados a través del método de configuración a base de J por Matsumori et al., J. Org. Chem. 64, 866 (1999). Este procedimiento involucra la medición de acoplamientos H-H y H-C a través de un cierto enlace C-C y su conservación a ángulos diédricos vía la relación Karplus-Altona . Los acoplamientos H-C también siguen una relación Karplus, y valores menores, que varian desde 1 hasta 3 Hx, son indicadores de orientaciones gauche, y valores mayores, que varian desde 6 hasta 8 Hz, indican órdenes anti.

Las constantes de acoplamiento de protón-carbono H5-C11 relevantes, son medidas usando el experimento 1D-TOCSY selectivo de satélite descrito por P. Vidal, et al., J. Qrg. Chem. , 72, 3166-3170 (2007). Son adquiridos los experimentos 1D-TOCSY en los cuales las compensaciones de los pulsos selectivos son ajustadas en el satélite 13C de baja frecuencia de Hll. El espectro resultante es comparado con el experimento 1D-T0CSY convencional, en el cual se excita la señal Hll del isotopómero 12C principal, o alternativamente, con el espectro 1H. Los tres acoplamientos H-C unidos entre Cll y H5, son determinados a partir del desplazamiento de la señal H5 retardada en el espectro TOCSY selectivo de satélite, con relación a su posición en el espectro 1H, la constante de acoplamiento siendo dos veces el desplazamiento. La constante de acoplamiento entre C8 y H5 no es medida debido al traslape de señal. Las constantes de acoplamiento de protón-protón y protón-carbono a través del enlace C7-C5, son medidas para cada uno del éster ter-butilico del ácido 3 (S) - (l-hidroxi-3-metil-butil) -pirrolidin-l-carboxílico, Isómero 1 e isómero 2 preparados esencialmente como se describe en la Preparación 4 y sus valores están en la siguiente tabla.

La constante de acoplamiento H5-C11 menor en el Isómero 2, indica que H5 y Cll están en orientación gauche entre si en ambos confórmeros poblados, lo cual es consistente con el isómero 3(S)-1' (S).

Ensayo de afinidad de transportador in vitro El transportador de serotonina humana (SE T) , transportador de norepinefriña (NET) , o transportador de dopamina (DAT) , son clonados en un vector pcADN3 y establemente transfectados en células HEK293. Las pilas de membrana son preparadas siguiendo protocolos estándares, y los valores Kd son calculados usando métodos de enlace de competición homólogo o enlace de saturación para cada lote de membranas (Bylund and Toews, Am. J. Phys . (Lung Cell. Mold Physiol 9) , 265, 421-429 (1993). Todos los ensayos de enlace se condujeron en placas de 96 cavidades usando un método desarrollado convirtiendo un ensayo de enlace de radioligando por filtración a un formato de ensayo de proximidad de escintilación (SPA) (Carpenter, et al., Methods in Molecular Biology, 190, 21-49 (2002)). Brevemente, las membranas SERT se usaron a una concentración de 10 pg/cavidad en amortiguador de ensayo que contiene 50 mM de Tris, 150 mM de NaCl, y 5 mM de KC1 (pH 7.4) en la presencia de 3H-citalopram. Se usa Fluoxetina (100 µ?) para determinar el enlace no especifico, y se usa venlafaxina como un control positivo. Se usan membranas NET a una concentración de 8 g/cavidad en amortiguador de ensayo que contiene 50 mM de Tris, 300 mM de NaCl, y 5 mM de KC1 (pH 7.4). Se usa 3H-Nisoxetina como el indicador, 100 µ? de desipramina sirven como una medida de enlace no especifico, y se usa nisoxetina como el control positivo. Para ensayos de enlace DAT, el amortiguador de ensayo es el mismo como para SERT, se usan membranas a 20 pg/cavidad, se usan 100 µ? de nomifensina para determinar el enlace no especifico, 3H-WIN 35428 (Perkin Elmer) sirve como el radioindicador, y se usa nomifensina como el control positivo. En todos los casos, 0.5 mg/cavidad de perlillas de ensayo de proximidad de escintilación de aglutinina de germen de trigo (WGA-SPA, GE Health Sciences) se usan para capturar las membranas y las placas son incubadas por 3 horas a temperatura ambiente. Se mide la radioactividad y los valores K± se calculan usando un programa de ajuste de curva logística de cuatro parámetros (ActivityBase v5.3.1.22).

Los compuestos e emplificados son probados esencialmente como se describe anteriormente y se encuentran por tener alta afinidad para los receptores hSERT y hNET, pero afinidad muy inferior para el receptor hDAT in vitro. El Ki para SERT y NET se encuentra por ser menos de 20.1 n y 23.4 nM, respectivamente, mientras el Ki para DAT se encuentra por ser mayor de 255 nM. El compuesto del EJEMPLO 19 se prueba esencialmente como se describe anteriormente y se encuentra por tener afinidades como se muestra en la tabla abaj o . (media + error estándar) Ensayo de actividad inhibidora in vitro Los transportadores de serotonina (SERT) o norepinefriña (NET) humana, son clonados en un vector pcADN3 y establemente transíectados en células HEK293. Ambos ensayos son modificados de los métodos descritos por Eshleman et al. , J. Pharmacol. Exptl Ther., 289, 877-885 (1999)) y Wall et al., Mol. JPharmacol., 47, 544-550 (1995). Las células se hacen crecer en hojuelas revestidas con poly-D-lisina o placas de 96 cavidades en D-MEM/F-12 3:1 (3 partes de Medio Eagle Modificado de Dulbecco en 1 parte de Mezcla de Nutriente F-12) que contiene 5% de suero bovino fetal, 250 µg/mL de geneticina, y 20mM de Hepes. Las células se plaquearon a 40, 000 células por cavidad en 200 µ?. de medio y se incubaron por 18-24 horas a 37°C previo al ensayo. El amortiguador de ensayo de captación consiste de solución base de bicarbonato Ringer-Kbrebs, suplementada con 1.26% de bicarbonato de sodio, 20 mM de HEPES, y 100 de µ?, cada uno de pargilina y ácido ascórbico. Después de una pre-incubación de 30 minutos con el compuesto o intralina (como un control positivo) , la 3H-serotonina o 3H-norepinefriña son agregadas por 1 min. y 50 sec. El sustrato 3H es después removido y las células lavadas 4X con 100 pL de amortiguador de captación frió usando multimek. El Tritón X-100 (1%) se agregó para lisar las células y, después del mezclado, todos los contenidos son transferidos a una placa de fondo blanco. Se agregó Microscint™ 40 a cada cavidad y la radioactividad se cuantificó por 1 min. por cavidad. Los resultados son analizados como valores IC50 usando un programa de ajuste de curva logistico de cuatro parámetros. (ActivityBase v5.3.1.22) .

Los compuestos ejemplificados son probados esencialmente como se describe anteriormente y se encuentran por ser inhibidores de recaptación de serotonina y norepinefrina, que tiene IC50 de SERT y NET de menos de 227 nM y 44.6 nM, respectivamente. El compuesto del EJEMPLO 19 es probado esencialmente como se describe anteriormente y se encuentra por ser un inhibidor de recaptación de serotonina y norepinefrina in vitro, que tiene IC50 como se muestra en la tabla siguiente. (media + error estándar) Ensayo de ocupación de transportador in vivo: Ratas Sprague-Dawley macho que pesan 240-280 gm en grupos de tres, se usaron para determinar la ocupación del transportador de serotonina. Los animales son ayunados al menos 12 hrs. antes del inicio de cada experimento. Los animales son administrados oralmente con vehículo o 0.10, 0.33, 1.00, 3.33 o 10.00 mg/kg dosis del compuesto de prueba en 4% de Glucosa en amortiguador de Fosfato 25 mM, (pH =3.0) que contiene 0.1, 0.33, 1, 3.33, o 10% de CAPTISOL™ (concentración de CAPTISOL™ (%) = dosis de compuesto de prueba (mg/kg)). Después de 2 hrs., los animales administrados intravenosamente con N, N-dimetil-2- (2-amino-4-cianofeniltio) -bencilamina (10 µ?/ q) en salina en la vena lateral de la cola. Después de 40 minutos adicionales, las ratas son sacrificadas vía dislocación cervical y una porción de la corteza frontal se remueve y coloca en hielo seco. Un grupo de control adicional de las tres ratas, es dosificado con malato de paroxetina a 12 mg/kg, i.v., seguido por N,N-dimetil-2- (2-amino-4-cianofeniltio) -benci lamina (10 ]qfq) 1 hr. después.

Los tejidos se dejan derretir y después se agregan cuatro volúmenes (p/v) de acetonitrilo que contiene 0.1% de ácido fórmico. Las muestras son homogenizadas usando una sonda dismembrator y se centrifugan por 16 min. a 14,000 x g. Un volumen del sobrenadante se agregan a 3 volúmenes de agua en un vial automuestreador y se someten a vórtices. La separación se logra con una columna HPLC Zorbax C18 y un gradiente de fase móvil desde 20% hasta 90% de acetonitrilo/agua, cada uno con 0.1% de ácido fórmico. El tiempo de corrida total de HPLC es de 3.5 minutos con un tiempo adicional de re-equilibrio de 2.0 min. Se usa un espectrómetro quadrupole triple API4000 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) que opera en modo MRM. La transición iónica monitoreada es 284.1/239.1 m/z por N, N-dimetil-2- (2-amino-4-cianofeniltio) -bencilamina .

El nivel de N, -dimetil-2- (2-amino-4-cianofeniltio) -bencilamina (indicador) en la corteza de los animales pre-tratados con vehículo, representa la suma de enlace específico y no específico y es asignado al valor de ocupación 0% (todos los receptores disponibles al indicador) . El nivel inferior de indicador en animales pretratados con dosis intravenosa muy alta de malato de paroxetina, el grupo de control positivo, representa el enlace no específico y es asignado al valor de ocupación 100% (sin receptores disponibles en el indicador) . Los niveles de indicador en la corteza después de la administración oral del compuesto de prueba, son interpolados linealmente entre estos dos extremos para determinar el porcentaje de ocupación de transportador de serotonina. Los datos son expresados como media ± SEM (n=3/grupo) calculado usando Prism versión 3.0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Los valores ED8o se obtienen ajustando los datos a una curva sigmoidal usando regresión no lineal.

El compuesto del Ejemplo 19 es probado esencialmente como se describe anteriormente y se encuentra por tener un EDso absoluto de 7.1 mg/kg, basado en los datos de respuesta de dosis siguiente, de este modo confirmando la ocupación de receptores de serotonina in vivo.

Dosis (mg/kg % de ocupación S.E.M. p.o. ) 30 105.6 1.8 10 9 .0 3.6 3 43.3 5.8 1 25.0 4.2 0.3 5.9 3.9 ED80 7.1 mg/kg Alfa MT: Ensayo de Inhibición de Depleción de Monoamina: Los inhibidores transportadores del neurotransmisor , pueden prevenir la depleción de monoaminas cerebrales cuando el agente de depleción requiere captación activa en neuronas vía un transportador. La DL-Para-cloroanfetamina (PCA) es transportada en neuronas serotonérgicas vía el transportador neuronal y produce una depleción de larga duración de concentraciones de serotonina de cerebro de rata (5-HT). La alfa-metil-m-tirosina (a-? ?) , es un agente de depleción noradrenérgico que es a-hidroxilado a metaraminol in vivo y activamente transportado en neuronas de norepinefriña (NE) via el transportador neuronal que produce una reducción en niveles NE en cerebro de rata. La depleción de niveles de 5-HT en cerebro de rata por PCA y concentraciones de NE corticales en rata por a-? ?, es bloqueada por agentes con actividad inhibidora de recaptación de NE y 5-HT. Los compuestos de la presente invención pueden ser ensayados por su actividad para prevenir la depleción de concentraciones de 5-HT en cerebro de rata por PCA y la depleción de concentraciones NE corticales de rata por un a-MMT en ratas alimentadas y ayunadas in vivo, usando los siguientes métodos.

Se hace ayunar a Ratas Sprague Dawley macho que pesan 160-180 gramos, durante la noche o dejadas alimentar a discreción. Los animales son alimentados de manera forzada con vehículo (H20 estéril) o compuesto de prueba, 2 horas antes de la administración de 10 mg/kg de clorhidrato de pCA (ip) o 6.5 mg/kg de a- ?? (se). Todos los compuestos son administrados a 1 mL/kg. Los animales son sacrificados 2 horas después de la administración de PCA o a-MMT . Los tejidos son disectados, congelados en hielo seco y almacenados -70° previo al análisis. Para animales administrados con PCA, se midieron concentraciones completas de serotonina cerebral (5-HT) usando cromatografía líquida de alta presión con detección electroquímica como se describe por Fuller and Perry in J. Pharmacol. Exp. Ther., 248, 50-56 (1989) . Para animales administrados con a-? ?, concentraciones de norepinefriña cortical son medidas por HPLC-EC después de la captación de alúmina como se describe por Bymaster, et al., Neuropsychopharmacology, 27(5), 699-711 (2002) . Los datos son recolectados usando un sistema de datos de cromatografía EZChrom™ (Scientific Software, San Ramón, CA) , el cual calcula alturas de pico y concentraciones de muestra. El análisis de varianza, seguido por la prueba de Diferencia Honestamente Significante de Tukey post hoc, identifica diferencias significantes entre grupos de tratamiento (P<0.05). Dosis que antagonizan la depleción inducida por PCA o a-MMT de monoaminas por 50 por ciento, (ED50) , son calculadas usando un análisis de regresión lineal de mejor ajuste.

El compuesto del Ejemplo 19 es probado esencialmente como se describe anteriormente, y se encuentra por antagonizar la depleción inducida por a-MMT de norepinefriña en la corteza de rata con un ED80 de 9.5 mg/kg, basado en las respuestas de dosis siguiente, de este modo, confirmando la eficacia in vivo en inhibición de la función transportadora de norepinefriña .

Prueba Manual de Formalina La prueba manual de formalina se realiza en cajas Plexiglás personalizadas de aproximadamente 25 cm x 25 cm x 20 cm en tamaño. Un espejo se coloca en la parte de atrás de la jaula permitiendo la observación no obstaculizada de la pata inyectada con formalina. Las ratas (Charles River (CRL) Sprague Dawley (SD) ) , son colocadas individualmente en los cubículos al menos, 30 minutos previo al experimento. Todas las pruebas son conducidas entre 08:00 y 14:00 h y la temperatura ambiente de las pruebas se mantiene a 21-23°C. Los compuestos de prueba periféricamente administrados, son dosificados a tiempos variantes antes de la estimulación con formalina. La formalina (50 \i de una solución al 5% en salina) , es inyectada subcutáneamente en la superficie lateral dorsal de la pata de extremo derecho con una aguja de calibre 27. La observación inicia inmediatamente después de la inyección de formalina. El dolor inducido por formalina es cuantificado registrando el número de segundos que cada evento de lamida dura en intervalos de 5 minutos. El registro del dolor es medido por 50 minutos después de la inyección de formalina. Se observan dos fases de comportamiento de dolor como se describe previamente ( heeler-Aceto, H., Porreca, F. and Cowan, A., The rat paw formalin test: comparison of noxious agents, Pain 40 (1990) 229-238.). La fase temprana inicia inmediatamente después de la inyección de formalina y dura aproximadamente 5 minutos, seguido por la fase tardía que inicia entre 10-15 minutos, con una respuesta máxima típicamente observada alrededor de 25-35 minutos después de la inyección de formalina. Después de 50 minutos del periodo de observación, los animales son sacrificados con C02.

De los diferentes parámetros de registro reportados para la prueba de formalina, el tiempo total dedicado a lamer y morder la pata inyectada, es considerado por ser más relevante. (Abbott et al., The formalin test: scoring properties of the first and second phases of the pain response in rats, Pain 60 (1995) 91-102; Coderre et al., The formalin test: a validation of the weighted-scores method of the behavioral pain rating, Pain 54 (1993) 43-50).) El registro de fase temprana es la suma de tiempo dedicado a lameduras (segundos), desde el tiempo 0 hasta el minuto 5. El registro de fase tardía se obtiene agregando el número total de segundos dedicados a la lamedura desde el periodo de observación del minuto 16 hasta el minuto 40. Los datos son representados como medias con errores estándares de media (± SE ) . Los datos son evaluados por análisis de varianza de una forma (ANOVA) y los contrastes apropiados analizados por la prueba "t" de Dunnet por comparación de dos lados. Las diferencias son consideradas por ser significantes si el valor P es menos de 0.05. (Abbott, supra . ; Coderre, supra . ; y Wheeler-Aceto, supra.) El compuesto del Ejemplo 19 es probado esencialmente como se describe anteriormente y se encuentra por reducir significantemente el comportamiento de dolor con un ED50 de 13.4 mg/kg, que deriva a partir de las siguientes respuestas de dosis: Dosis (mg/kg % de S.E.M. p.o. ) reducción en tiempo total de lamedura 30 78.4 5.6% 10 38.0 7.8% 3 14.4 13.0% 1 4.5 8.3% ED50 13.4 mg/kg Mientras es posible administrar compuestos empleados en los métodos de esta invención directamente sin alguna formulación, los compuestos son usualmente administrados en la forma de composiciones farmacéuticas que comprenden al menos, un compuesto de Formula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, como un ingrediente activo y al menos un portador, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones pueden ser administradas por una variedad de rutas que incluyen, oral, intranasal, transdermal, subcutánea, intravenosa, intramuscular y pulmonar. Tales composiciones farmacéuticas y procesos para prepararlas, son bien conocidos en la técnica. Véase por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (University of the Sciences in Philadelphia, ed. , 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005).

Las composiciones son preferiblemente formuladas en una forma de dosificación única, cada dosificación contiene desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 500 mg, usualmente aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 200 mg, como por ejemplo, entre aproximadamente 1 y 20 mg del ingrediente activo. El término "forma de dosificación unitaria", se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros animales, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con al menos, un portador, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable .

Los compuestos de Fórmula I son en general, efectivos sobre un amplio intervalo de dosificaciones. Por ejemplo, las dosificaciones por día normalmente caen dentro del intervalo de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 30 mg/kg, más usualmente desde aproximadamente 0.01 hasta 3.0 mg/kg, y como por ejemplo, entre 0.01 y 0.3 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado anteriormente, pueden ser más gue adecuados, mientras que en otros casos, todavía dosificaciones más grandes pueden ser empleadas sin ocasionar algún efecto secundario peligroso, y por lo tanto, el intervalo de dosificación promedio no está propuesto para limitar el alcance de la invención en alguna forma. Se entenderá que la cantidad del compuesto actualmente administrado, será determinada por un especialista, en vista de las circunstancias relevantes, que incluyen la condición a ser tratada, la ruta elegida de administración, el compuesto o compuestos actuales administrados, la edad, peso y respuesta del paciente individual, y la severidad de los síntomas del paciente.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES compuesto de la fórmula o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de n-propilo, isobutilo, cicloalquilo (C3-C4) , y cicloalquilmetilo (C3-C4) ; n es l o 2; y cada R2 se selecciona independientemente a partir del grupo que consiste de fluoro, cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, ciclopropilmetiloxi, trifluorometoxi , metilamino, ciclopropilamino y t-butilcarbonilamino, siempre que cuando n es 2, al menos uno de R2 es fluoro, cloro, bromo, metilo, etilo, trifluorometilo, metoxi, o etoxi.
2. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es n-propilo o isobutilo, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es isobutilo, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es cicloalquilo (C3-C4) o cicloalquilmetilo (C3-C4) , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
5. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es (S) -3- ( (S) -1- (6-Metoxi-2-metil-3-piridiloxi ) -3-metil-butil ) -pirrolidina, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
6. 6. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
7. 7. Un método para tratar dolor crónico en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero en necesidad de tal tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la Reivindicación 1, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el mamífero es un humano.
9. 9. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en terapia.
10. 10. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para usarse en el tratamiento de dolor crónico en un humano.
11. 11. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor crónico.