CN102388036A - 血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂 - Google Patents

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Abstract

描述了式(I)的血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、其用途和其制备方法。

Description

血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂
血清素和去甲肾上腺素已经被认为是在降低痛觉传导道方面的内原性止痛机理的调节剂，并且血清素去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)在治疗慢性疼痛病症，例如糖尿病的外围神经疼痛和肌纤维痛方面显示了效果(Kroenke等人Pharmacotherapy of chronic pain: a synthesis of recommendations from systematic reviews, General Hospital Psychiatry 31 (2009) 206-219 (在线http://www.sciencedirect.com，访问时间2009年3月30日)。
WO 2008/023258描述了某些3-(吡啶-3-基氧基甲基)-哌啶化合物作为一元胺再摄取抑制剂(血清素和/或去甲肾上腺素再摄取抑制剂)，用于治疗大量病症，包括疼痛。
US 20020151712描述了某些3-吡咯烷基-氧基-3'-吡啶基醚化合物作为烟酸乙酰胆碱受体配体，用于各种适应症，包括疼痛的治疗。
本发明提供了另外的SNRI化合物，与先前引用的参考文献相比，其对于血清素和去甲肾上腺素再摄取具有更大的效能和更高的选择性。另外，与先前引用的参考文献相比，某些本发明的化合物提供了改善的血清素相对于去甲肾上腺素再摄取抑制剂活性的平衡性。也就是，与去甲肾上腺素再摄取抑制剂活性相比，先前的双重活性化合物典型地具有更大的血清素再摄取抑制剂活性，而某些本发明请求保护的化合物对于血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制两者具有显著更接近于相同水平的双重活性。此外，本发明的化合物提供了降低的酸不稳定性，对于改善药理学暴露以及便于配制来说，这通常是有利的。进一步地，某些本发明的化合物提供了改善的代谢降解特性，对于改善治疗暴露来说，这通常是有利的，并且在患者人群中可以有利于降低药理可变性。
本发明提供了式I的化合物∶
Figure 845288DEST_PATH_IMAGE001
；
或其可药用盐，
其中R1选自正丙基、异丁基、(C3-C4)环烷基和(C3-C4)环烷基-甲基-；
n是1或2；和
每个R2独立地选自氟、氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基、三氟甲氧基、甲基氨基、环丙基氨基和叔丁基羰基氨基，条件是：当n是2时，至少一个R2是氟、氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基或乙氧基。
本发明进一步提供了药物组合物，其包含式I的化合物或其可药用盐与可药用载体、稀释剂或赋形剂的组合。此外，本发明提供了适合于治疗慢性疼痛的药物组合物，其包含式I的化合物或其可药用盐与一或多种其可药用赋形剂、载体或稀释剂的组合。另外的实施方案提供了适合于治疗任何一种糖尿病的外围神经疼痛、肌纤维痛、与肌纤维痛有关的疼痛和炎症性疼痛例如多肌痛、类风湿性关节炎或骨关节炎的药物组合物，其包含式I的化合物或其可药用盐与一或多种其可药用赋形剂、载体或稀释剂的组合。
本发明还提供了治疗哺乳动物的慢性疼痛的方法，该方法包括：给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的式I的化合物或其可药用盐。本发明该方面的具体实施方案包括治疗糖尿病的外围神经疼痛的方法、治疗肌纤维痛的方法、治疗与肌纤维痛有关的疼痛的方法和/或治疗炎症性疼痛的方法，例如多肌痛、类风湿性关节炎或骨关节炎，每种方法分别包括：给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的式I的化合物或其可药用盐。在本发明该方面的一个具体实施方案中，哺乳动物是人。
本发明还提供了用于治疗的式I的化合物或其可药用盐。在该方面内，本发明提供了式I的化合物或其可药用盐，用于治疗哺乳动物，尤其是人的慢性疼痛。本发明该方面的另外的实施方案包括下列的任一项∶式I的化合物或其可药用盐，用于治疗慢性疼痛；式I的化合物或其可药用盐，用于治疗糖尿病的外围神经性疼痛；式I的化合物或其可药用盐，用于治疗肌纤维痛；式I的化合物或其可药用盐，用于治疗与肌纤维痛有关的疼痛；式I的化合物或其可药用盐，用于治疗炎症性疼痛；式I的化合物或其可药用盐，用于治疗多肌痛；式I的化合物或其可药用盐，用于治疗类风湿性关节炎；和式I的化合物或其可药用盐，用于治疗骨关节炎。
本发明另一个方面提供了式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗慢性疼痛药物中的用途。该方面的具体实施方案包括：式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗糖尿病的外围神经性疼痛的药物中的用途；式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗肌纤维痛的药物中的用途；式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗与肌纤维痛有关的疼痛的药物中的用途；式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗炎症性疼痛的药物中的用途；式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗多肌痛的药物中的用途；式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途；和式I的化合物或其可药用盐在制备用于治疗骨关节炎的药物中的用途。
本发明的化合物是碱，并且相应地与许多有机和无机酸反应，形成可药用盐，本发明包括式I化合物的可药用盐。本文使用的术语“可药用盐”是指式I化合物的任何盐，即对生物机体基本上无毒的盐。这种盐包括列于Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977)中的那些盐，这对于技术熟练的人员是已知的。
持久性疼痛由身体结构或脏器的慢性病理过程所引起，或由长期和有时的外围或中枢神经系统的永久性功能障碍所引起，或由这两者所引起。持久性炎症、组织损伤或神经损伤导致脊髓内的背角神经元的超兴奋性，亦称中枢性敏感的过程。中枢敏感的特征在于：改变背角神经元的响应性、扩增感受域和在疼痛传输途径内的神经元连接的可塑性。这些过程导致在上升痛觉传导道内和脊椎上的位点的神经元活性提高，和/或导致内原性脊椎和脊椎上的降低疼痛抑制机理的功能障碍/抑制解除。
中枢敏感和抑制解除可以产生自发的、持久性疼痛的进行性病症以及对疼痛刺激的敏感性提高(痛觉过敏)，或对普通非疼痛机械性或热刺激(触摸痛)的疼痛感受的敏感性提高。C.J. Woolf, Pain: Moving from Symptom Control toward Mchanism-Specific Pharmacologic Management, Annals of Internal Medicine, 140, 441-451 (2004)。这些过程被假定为构成几种类型的持久性或慢性疼痛的基础，包括神经性疼痛(包括糖尿病性神经病变，与AIDS有关的感染性的神经性疼痛，非手术的腕管综合征，疱疹后的神经痛，子宫颈、胸和腰骶的神经根病，三叉神经痛，复杂区域疼痛综合症I和II，化疗引起的神经性疼痛和中枢神经性疼痛综合症，包括脊髓损伤、多发性脑硬化或中风相关的疼痛)，炎症性疼痛(包括多肌痛、类风湿性关节炎和骨关节炎)和非神经性非炎性的疼痛(包括慢性疲劳综合症，无神经根病的慢性背痛，肌纤维痛，慢性紧张型头痛，炎症性的肠病症，过敏性肠综合症，挥鞭样损伤，慢性骨盆疼痛包括间质性膀胱炎，和颞下颌关节紊乱(TMJD))。
对内原性疼痛抑制途径中血清素和去甲肾上腺素的抑制解除与失调之间关系的认识，成功地评价了血清素和去甲肾上腺素再摄取抑制剂对人的慢性疼痛病症的治疗。因此，作为血清素和去甲肾上腺素再摄取两者的双重活性抑制剂，式I的化合物可用于治疗哺乳动物的慢性疼痛，包括糖尿病的外围神经疼痛和肌纤维痛。在一个优选实施方案中，哺乳动物是人。此外，式I的化合物可有效用于治疗抑郁症(包括重度抑郁症)、焦虑症(包括广泛性焦虑症)和失禁(例如急迫性、紧张性和混合型失禁)。(Orjales等人，Journal of Medicinal Chemistry, 46(25), 5512-5532 (2003); Fish等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 17, 2022-2025(2007))。
本文使用的缩写定义如下∶
“HPLC”是指高压液相色谱。
“MS (ES+)”是指使用电喷射离子化的质谱。
“MTBE”是指甲基叔丁基醚。
“NMR”是指核磁共振。
“THF”是指四氢呋喃。
“EtOAc”是指乙酸乙酯。
“MeOH”是指甲醇。
“DMSO”是指二甲亚砜。
“SCX柱”是指强阳离子交换柱。
“Pd(OAc)2”是指乙酸钯(II)。
“DMF”是指二甲基甲酰胺。
“n-BuLi”是指正丁基锂。
“MeOAc”是指乙酸甲酯。
“(S)-Ru(OAc)2T-BINAP”是指[(S)-(−)-2,2'-二(二-对甲苯基膦基)-1,1'-联萘]二乙酸钌(II)。
“DMA”是指二甲基乙酰胺。
“XRD”是指X射线衍射。
“TOCSY”是指全相关光谱。
“SERT”是指血清素转运体。
“hSERT”是指人血清素转运体。
“Net”是指去甲肾上腺素转运体。
“hNet”是指人去甲肾上腺素转运体。
“DAT”是指多巴胺转运体。
“hDAT”是指人多巴胺转运体。
“HEPES”是指4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸。
“SEM”是指平均标准误差。
“PCA”是指对氯苯异丙胺。
“α-MMT”是指α-甲基-间酪氨酸。
“IC50”是指最大抑制浓度的一半。
“ED50”是指有效剂量。
优选的本发明化合物是符合下列条件的化合物，其中∶
1) R1是正丙基或异丁基(即2-甲基丙基-)；
2) R1是异丁基(即2-甲基丙基-)；
3) R1是正丙基；
4) R1是(C3-C4)环烷基或(C3-C4)环烷基-甲基-；
5) R1是环丙基或环丙基甲基；
6) R1是环丁基或环丁基甲基；
7) 每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基和三氟甲氧基；
8) 每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基和甲氧基；
9) 每个R2独立地选自氯、甲基和甲氧基；
10)每个R2独立地选自甲基、乙基和甲氧基；
11) R1是异丁基，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基和三氟甲氧基；
12) R1是异丁基，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基和甲氧基；
13) R1是异丁基，每个R2独立地选自氯、甲基和甲氧基；
14) R1是异丁基，每个R2独立地选自甲基、乙基和甲氧基；
15) R1是正丙基，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基和三氟甲氧基；
16) R1是正丙基，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基和甲氧基；
17) R1是正丙基，每个R2独立地选自氯、甲基和甲氧基；
18) R1是正丙基，每个R2独立地选自甲基、乙基和甲氧基；
19) R1是(C3-C4)环烷基或(C3-C4)环烷基-甲基-，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基和三氟甲氧基；
20) R1是(C3-C4)环烷基或(C3-C4)环烷基-甲基-，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基和甲氧基；
21) R1是(C3-C4)环烷基或(C3-C4)环烷基-甲基-，每个R2独立地选自氯、甲基和甲氧基；
22) R1是(C3-C4)环烷基或(C3-C4)环烷基-甲基-，n是1或2，每个R2独立地选自甲基、乙基和甲氧基；
23) R1是环丙基或环丙基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基和三氟甲氧基；
24) R1是环丙基或环丙基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基和甲氧基；
25) R1是环丙基或环丙基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自氯、甲基和甲氧基；
26) R1是环丙基或环丙基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自甲基、乙基和甲氧基；
27) R1是环丁基或环丁基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基和三氟甲氧基；
28) R1是环丁基或环丁基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自氯、溴、甲基、乙基和甲氧基；
29) R1是环丁基或环丁基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自氯、甲基和甲氧基；
30) R1是环丁基或环丁基甲基，n是1或2，每个R2独立地选自甲基、乙基和甲氧基；
31) 对于上述实施方案7至30中的每一个，进一步优选的化合物是其中n是2且R2取代基在吡啶基的2和6位被取代的那些化合物。
一个尤其优选的本发明化合物是(3S)-3-((S)1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷，或其可药用盐，例如，L-和/或D-酒石酸盐，如实施例19、19A和19B所举例说明。
在式I的化合物中，有两个手性中心，每个在下面用“*”标记∶
Figure 949379DEST_PATH_IMAGE002
。
因此，式I的化合物可以存在各种立体异构构型，例如消旋体，以及非对映体和对映体。对于其中如式I中所需的在吡咯烷环的3位的手性中心以“S”绝对构型存在的化合物，化合物的活性显著地改善。化合物可以在悬挂链的1'-位具有手性中心，可以是“R”绝对构型、“S”绝对构型或其任何混合物∶
Figure 729116DEST_PATH_IMAGE003
。
通常，相对于消旋体，优选立体化学纯的化合物。通常，一个立体异构体的活性比另一个的活性高。优选的化合物是两个手性中心为“S”绝对构型的那些化合物∶
Figure 186642DEST_PATH_IMAGE004
。
使用众所周知的技术和方法，例如下面公开的那些技术和方法，本领域普通技术人员可以制备式I化合物的特异性立体异构体和对映体：J. Jacques等人， “Enantiomers, Racemates, and Resolutions”, John Wiley and Sons, Inc., 1981, 和E.L. Eliel和S.H. Wilen, “Stereochemistry of Organic Compounds”, (Wiley-Interscience 1994), 和欧洲专利申请EP-A-838448，1998年4月29日公开。拆分的例子包括重结晶技术或手性色谱。
利用本领域众所周知的和理解的方法，本发明的化合物可以按照下列合成反应路线制备。本领域众所周知这些反应路线的步骤的合适反应条件，并且溶剂和辅助试剂的合适替代品在本领域技术范围之内。同样，本领域技术人员将理解，利用各种众所周知的技术，根据需要或要求，可以将合成的中间体分离和/或纯化，并且常常可以在随后的合成步骤中直接使用各种中间体，只需要稍微纯化或不用纯化。此外，技术熟练人员将理解，在一些情况下，各个部分的引入顺序不是关键性的。制备本发明化合物所要求步骤的具体顺序取决于所合成的具体化合物、原料化合物和所选择取代基的相对倾向，正如技术熟练的化学工作者所充分理解的那样。除非另有陈述，否则取代基R1和R2如先前所定义，所有的试剂在本领域是众所周知的和了解的。Pg是氮保护基团，例如本领域众所周知的那些(参见Wuts和Greene，Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis, 第4版, 第7章, John Wiley and Sons Inc.,(2007)。
反应路线1
Figure 1014DEST_PATH_IMAGE005
在合适的溶剂，例如二甲亚砜中，在高温下，使起始的醇(a)与合适的碱(例如氢化钠)和适当取代的芳基氟反应，提供醚(b)。或者，在标准Mitsunobu条件下，可以使醇(a)与适当取代的吡啶反应，提供醚(b)。然后在技术熟练人员熟知的条件下，将醚(b)脱保护，提供式I的化合物。(例如，参见∶Greene和Wuts，上文)。然后在合适的溶剂，例如甲醇中，可以用可药用酸(例如L-酒石酸、D-酒石酸或HCl)处理得到的胺，提供式I化合物的可药用盐。
可以如下列反应路线所述来制备必要的醇(a)，其中R1、R2和Pg如先前所定义。
反应路线2
Figure 636526DEST_PATH_IMAGE006
在标准酰胺偶合条件下，使N-保护的吡咯烷-3-甲酸(c)与N,O-二甲基-羟胺反应，提供Weinreb酰胺(d)。使该酰胺与合适的有机金属亲核物质反应，提供酮(e)。在标准条件下，例如用在甲醇中的硼氢化钠将酮(e)还原，提供醇(a)。或者，可以在合适的溶剂，例如四氢呋喃中，用合适的碱，例如二(三甲基甲硅烷基)酰胺锂，处理N-保护的2-吡咯烷酮(f)，并使得到的阴离子与醛反应，提供附加产物(g)。在标准条件下将酰胺部分还原，例如通过在四氢呋喃中在高温下与硼-甲基硫醚(boron-methyl sulfide)反应，提供醇(a)。
可以按照下列方式将6-甲氧基引入到6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基吡咯烷衍生物中：在标准亲核芳香取代条件下，在相应的6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基衍生物的游离胺上，通过甲醇盐对氯进行亲核取代，提供目标化合物，如反应路线3所示。
反应路线3
Figure 903559DEST_PATH_IMAGE007
在下列制备例和实施例中，符号(S-mix)代表式I的中间体或化合物，其中在吡咯烷环的3位的手性中心是“S”绝对构型，第二个手性中心(上面称为1')是“S”和“R”的混合物。符号(S-1)表示相应的式I的中间体或化合物是色谱分离对映体的混合物时的第一个洗脱的对映体或源自于第一个洗脱的对映体。类似地，符号(S-2)表示对应的式I的中间体或化合物是色谱分离对映体的混合物时的第二个洗脱的对映体或源自于第二个洗脱的对映体。符号(D1)表示式I的中间体或化合物，其是或源自于色谱分离非对映体时的第一个洗脱的非对映体。同样，符号(D2)表示式I的中间体或化合物，其是或源自于通过色谱分离非对映体时的第二个洗脱的非对映体。符号(D1-E1)和(D1-E2)分别表示式I的中间体或化合物，其是或源自于第一个洗脱非对映体的第一和第二个洗脱的对映体。同样，符号(D2-E1)和(D2-E2)分别表示式I的中间体或化合物，其是或源自于第二个洗脱非对映体的第一和第二个洗脱的对映体。这些总规则的例外是：当与醇(a)进行Mitsunobu反应而导致1'碳的构型反转时。在那些实施例中，(S-1)的起始醇的符号产生(S-2)产物，(D1)起始醇产生(D2)产物。
下列制备例和实施例举例说明了可用于合成本发明的化合物的方法。在制备例和实施例中举例说明的许多化合物的名称是由使用ChemDraw Ultra 10.0绘制的结构提供的。
制备例 1∶(S)-3-(3-甲基丁酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
Figure 102459DEST_PATH_IMAGE008
(S)-3-( 甲氧基 ( 甲基 ) 氨基甲酰基 )- 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁基酯
将1,1'-羰基二咪唑(414.33 g，2.56 mol)分为几份加入到(S)-N-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-甲酸(500 g，2.32 mol)的二氯甲烷(5.81 L)搅拌溶液中，并在室温氮气下搅拌1小时。加入N,O-二-甲基羟基胺盐酸盐(253.04 g，2.56 mol)，并在室温下搅拌48小时。用1 N HCl猝灭反应，并用乙酸乙酯(2X)提取。用饱和NaHCO3和盐水洗涤合并的有机物。干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩，提供535 g (89%)标题化合物。MS(m/z)=203(M-55)。
格氏试剂对 Weinreb 酰胺的加成
在氮气下，在-7℃，将异丁基溴化镁(2.0 M，在四氢呋喃(THF)中，63.47 mL，126.94 mmol)的THF (50 mL)溶液滴加到(S)-3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(21.86 g，84.62 mmol)的THF (400 mL)搅拌溶液中。在-5℃搅拌1小时，然后使反应温热至室温，并继续搅拌过夜。加入饱和氯化铵水溶液，并用乙酸乙酯(2X)提取。干燥(MgSO4)，过滤，并减压浓缩。用硅胶色谱纯化残余物，用乙酸乙酯(EtOAc)/己烷(0-20%梯度)洗脱，提供21.6 g (99.6%)标题化合物。
制备例2-5的化合物是基本上如制备例1所述来制备的：
Figure 833655DEST_PATH_IMAGE010
。
制备例 5∶(S)-3-环丁基羰基-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
Figure 827019DEST_PATH_IMAGE011
在氮气下，将二异丁基氢化铝(1 M，在甲苯中，0.790 mL，0.790 mmol)加入到镁(0.960 g，39.5 mmol)和碘(0.100 g，0.395 mmol)的THF (1 mL)搅拌混合物中。滴加入环丁基溴(8.00 g，59.2 mmol)的THF (10 mL)溶液，并在60℃下搅拌该反应2小时，由此耗尽所有的镁。将该混合物冷却至室温，并滴加入(S)-3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(10.2 g，39.5 mmol)的THF (50 mL)溶液。在室温下搅拌该反应混合物2.5小时。用1 M柠檬酸水溶液淬灭，用EtOAc提取。用水及饱和NaCl水溶液洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤，减压浓缩。用硅胶色谱纯化残余物，用EtOAc/己烷(0-50%梯度)洗脱，获得标题化合物(5.30 g，53%)。
制备例 6∶(3S)-3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体1 (S-1)和异构体2 (S-2)
Figure 892933DEST_PATH_IMAGE012
将硼氢化钠(15.2 g，423 mmol)分为几份加入到(S)-3-(3-甲基丁酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(21.6 g，84.6 mmol)的甲醇(500 mL)溶液中，并在室温下搅拌过夜。再加入等量的硼氢化钠(3.04 g，84.6 mmol)。另外搅拌2小时，蒸发甲醇，达到一半体积，加入盐水，并用EtOAc提取。干燥合并的有机相(MgSO4)，过滤，减压浓缩。用超临界流体色谱(AD-H柱)分离非对映异构体，用10% MeOH/CO2 (含有0.2%二乙基甲胺)洗脱，提供(3S)-3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体1 (S-1)作为第一个洗脱的异构体(8.2 g，38%)，和(3S)-3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体2 (S-2)作为第二个洗脱的异构体(8.9 g，41%)。
制备例 7∶(3S)-3-(1-羟基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体1 (S-1)和异构体2 (S-2)
Figure 629945DEST_PATH_IMAGE013
将硼氢化钠(5.19 g，145 mmol)分为几份加入到(S)-3-丁酰基-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(7.0 g，29.0 mmol)的甲醇(200 mL)溶液中，并在室温下搅拌过夜。加入更多的硼氢化钠(1.4 g，39 mmol)，并在室温下搅拌一个小时。蒸发甲醇至一半体积，加入盐水，并用乙酸乙酯提取。干燥合并的有机相(MgSO4)，过滤，减压浓缩。用硅胶色谱分离非对映异构体，用5%异丙胺/己烷洗脱，提供(3S)-3-(1-羟基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体1 (S-1)作为第一个洗脱的异构体(2.6 g，37%)，和(3S)-3-(1-羟基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体2 (S-2)作为第二个洗脱的异构体(1.8 g，26%)。
制备例8-9的化合物可以基本上如制备例8所述来制备：
。
制备例 10∶(3S)-3-(环丁基-羟基-甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)
Figure 645491DEST_PATH_IMAGE016
在氮气氛下，在0℃，将硼氢化钠(1.19 g，31.4 mmol)加入到(S)-3-环丁羰基-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5.30 g，20.9 mmol)的MeOH (105 mL)搅拌溶液中。搅拌该混合物2小时，同时温热至室温。浓缩MeOH，用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤有机物。干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩，得到标题化合物(4.4 g，82%)的非对映体混合物(S-mix)。
制备例 11∶(3S)-3-(1-羟基-3-丁烯基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，(S-mix)
Figure 887116DEST_PATH_IMAGE017
基本上如制备例10所述，使用(3S)-3-(丁-3-烯酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，可以制备制备例11的化合物。
制备例 12∶3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，非对映体1 (D1)
Figure 975289DEST_PATH_IMAGE018
3-(1- 羟基 -3- 甲基 - 丁基 )-2- 氧代 - 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁基酯，非对映体 1 (D1) 和非对映体 2 (D2)
在-78℃，将二(三甲基甲硅烷基)-酰胺锂(1.0 M，在THF中，148 mL，148 mmol)加入到2-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(25.0 g，134 mmol)的THF (450 mL)溶液中，并在氮气下搅拌2小时。加入3-甲基-丁醛(17.5 mL，162 mmol)，而后加入三氟化硼二乙基醚合物(20.5 mL，162 mmol)，并在-78℃下继续搅拌2小时。将该混合物温热至室温，用饱和氯化铵水溶液(250 mL)淬灭，并用EtOAc (3X)提取。干燥合并的有机物(Na2SO4)，过滤，减压浓缩。将粗品分为两个等份，用硅胶色谱纯化每份，用0-40% EtOAc/己烷洗脱，提供3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-2-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，非对映体1 (12.5 g，34%)(D1)作为第一个洗脱的异构体，MS(m/z)=216.0(M-56)，和3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-2-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，非对映体2 (3.87 g，11%)(D2)作为第二个洗脱的异构体。MS(m/z)=216.0(M-56)。
酰胺还原
在氮气下，将硼烷二甲硫醚络合物(2.0 M，在THF中，68.8 mL，138 mmol)慢慢地加入到3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-2-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D1)(12.5 g，45.9 mmol)的THF (220 mL)溶液中。将该混合物加热至回流，保持2小时，并用饱和氯化铵水溶液(200 mL)淬灭。用乙酸乙酯(2X)提取。用水(100 mL)、5%柠檬酸(100 mL)和盐水(100 mL)洗涤合并的有机物。干燥(Na2SO4)，过滤，并减压浓缩。用硅胶色谱纯化残余物，用0-40%的EtOAc/己烷洗脱，得到10.7 g (91%)标题化合物。MS(m/z)=202.0(M-56)。
制备例 13∶(3S)-3-(2-环丙基-1-羟乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)
Figure 681077DEST_PATH_IMAGE019
在氮气下，在0℃，将乙酸钯(II)(50.0 mg；0.22 mmol)加入到(3S)-叔丁基3-(1-羟基丁-3-烯基)吡咯烷-1-甲酸酯(S-mix)(3.0 g，12.43 mmol)和新制备的重氮甲烷(50 mL，约23.8 mmol，在乙醚中)的THF (20 mL)搅拌溶液中(注意∶气体猛烈逸出)。在0℃下搅拌10分钟。温热至室温，倾倒入水中，并用乙酸乙酯(3X)提取。用水和盐水洗涤合并的有机物。干燥(MgSO4)，过滤，并减压浓缩。对残余物进行硅胶色谱，用0-100%的乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2.9 g (91%)标题化合物。MS (m/z)=200.0(M-55)。
制备例 14∶3-(2-环丁基-1-羟乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
3-(2-( 二乙氧基磷酰基 ) 乙酰基 ) 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁基酯
在氮气下，在-78℃，用15分钟将丁基锂(98.0 mL，157 mmol)滴加到甲基膦酸二乙基酯(23.6 g，155 mmol)的THF (194 mL)溶液中。加入(S)-3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5.0 g，19.4 mmol)(在THF中)，并在-78℃下搅拌约3.5小时。倒入水中，用乙酸乙酯(3X)提取。用水和盐水洗涤合并的有机物。干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。对残余物进行硅胶色谱，用0-50%丙酮/氯仿洗脱，而后再进行硅胶色谱，用0-30%丙酮/二氯甲烷洗脱，得到3.15 g (47%)目标化合物。MS(m/z)=294.0(M-55)。
3-(2- 环亚丁基乙酰基 ) 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁基酯
在氮气下，在5℃，将环丁酮(0.738 mL；9.89 mmol)加入到3-(2-(二乙氧基磷酰基)-乙酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.14 g，8.99 mmol)和氢氧化钾(656 mg，11.7 mmol)在乙醇(45 mL)中的搅拌混合物中。温热至室温，并搅拌3小时。减压浓缩，对残余物进行硅胶色谱，用20%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到0.85 g (36%)粗品目标化合物，其不用进一步纯化就可以在下一步中使用。
3-(2- 环丁基乙酰基 ) 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁基酯
将钯/碳(50 mg，催化)加入到3-(2-环亚丁基乙酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(850 mg，3.20 mmol)(在乙酸乙酯(25 mL)中)中，并在氮气下在室温下搅拌。安装氢气球，并搅拌过夜。用硅藻土过滤反应，用乙酸乙酯冲洗，浓缩至干，得到391 mg (46%)目标化合物。MS(m/z)=212.0(M-55)。
还原
在0℃，将硼氢化钠(71.9 mg，1.90 mmol)分为几份加入到在甲醇(7.31 mL)中的3-(2-环丁基乙酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(391 mg，1.46 mmol)中。在室温下搅拌过夜。减压浓缩，用水稀释，并用乙酸乙酯(3X)提取。用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤合并的有机物。干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩，得到0.39 g (97%)标题化合物。MS(m/z)=214.0(M-55)。
制备例 15∶(3S)-3-[2-环丙基-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯异构体1 (S-1)和异构体2 (S-2)
Figure 56750DEST_PATH_IMAGE021
在室温下，在氮气氛下，将氢化钠(60%，94.0 mg，2.35 mmol)慢慢地加入到(3S)-3-(2-环丙基-1-羟基-乙基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)(31.5 g，123.36 mmol)和DMSO (11.8 mL)的混合物中。搅拌10分钟，而后加入2-氯-5-氟甲基吡啶(359 mg，2.47 mmol)。加热至60℃，并搅拌过夜。冷却该混合物，倒入水中，并用乙酸乙酯(3X)提取。用水和盐水洗涤合并的有机提取物。干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。用硅胶色谱纯化粗品残余物，用20%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(3S)-3-[2-环丙基-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体1 (S-1)(99 mg，22%)作为第一个洗脱的异构体，和(3S)-3-[2-环丙基-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体2 (S-2)(80 mg，18%)作为第二个洗脱的异构体。MS(m/z)=325.0(M-55)。
制备例16-23的化合物可以基本上如制备例15所述来制备：
Figure 135564DEST_PATH_IMAGE023
Figure 695858DEST_PATH_IMAGE025
。
制备例 24∶3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯异构体1 (D2E1)和异构体2 (D2E2)
Mitsunobu 反应
在室温下，向3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D1)(600 mg，2.33 mmol)和2-氯-5-羟基-吡啶(0.451 g，3.50 mmol)的甲苯(10 mL)溶液中鼓入10分钟氮气。加入三正丁基膦(0.872 mL，3.50 mmol)，而后加入偶氮二甲酸二胡椒脂(0.882 g，3.50 mmol)。将该反应混合物加热至70℃，并搅拌过夜。加入额外的3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D1)(600 mg，2.33 mmol)、三正丁基膦(0.872 mL，3.50 mmol)和偶氮二甲酸二胡椒脂(0.882 g，3.50 mmol)。在70℃下继续搅拌3小时。将该混合物冷却至室温，并倒入饱和NaHCO3水溶液中。用乙酸乙酯(2X)提取，合并有机提取物，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。用硅胶色谱纯化粗品残余物，用0-20%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到180 mg的3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D2)，用于手性分离。
手性色谱分离
使用超临界流体色谱，在OD-H柱上分离3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D2)的异构体的混合物，用12%异丙胺/CO2 (含有0.2%二乙基甲胺)洗脱，获得3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D2E1)，作为第一个洗脱的异构体(80.6 mg，9.4%)，和3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(D2E2)，作为第二个洗脱的异构体(81.2 mg，9.4%)。MS(m/z)=391[M+1]。
制备例25-28的化合物可以基本上如制备例24所述来制备：
Figure 231193DEST_PATH_IMAGE028
。
制备例 29∶(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)
Figure 176015DEST_PATH_IMAGE029
将氢化钠(60%，121.2 mg，3.03 mmol)、(3S)-3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)(0.65 g，2.53 mmol)和DMSO (10.0 mL)混合。在室温下，在氮气氛下搅拌该混合物1小时。加入2-氯-5-氟甲基吡啶(2.21 g，15.2 mmol)，并在70℃搅拌该混合物过夜。将该混合物冷却至室温，用盐水猝灭该反应，并用乙酸乙酯提取。将有机提取物合并，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。用硅胶色谱纯化粗品残余物，用0-20%乙酸乙酯/己烷洗脱，而后用20%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到0.58 g (60%)标题化合物。MS(m/z)=425.0(M+23)。
制备例 30∶6-甲氧基-2-甲基-吡啶-3-醇
Figure 528499DEST_PATH_IMAGE030
在氮气下，在室温下，将过氧化氢(7.69 mL，89.8 mmol)加入到2-甲氧基-6-甲基-5-吡啶基硼酸(5.0 g，30 mmol)的二氯甲烷(100 mL)搅拌混合物中。在环境温度下搅拌过夜，加入水，并用二氯甲烷提取该混合物。合并有机相，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到2.6 g (62%)标题化合物。MS(m/z)=140[M+1]。
实施例 1∶(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-1)
Figure 471048DEST_PATH_IMAGE031
脱保护
将三氟乙酸(1.51 g，1.0 mL，13.2 mmol)加入到(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-1)(99.0 mg，0.260 mmol)的甲氧基苯(1.0 mL)和二氯甲烷(2.0 mL)溶液中。在室温氮气下搅拌1小时。将该混合物直接装填到预填装的SCX柱上，并用CH2Cl2、而后用CH3OH冲洗。用2 M NH3/甲醇洗脱，减压浓缩，得到58 mg (79%)(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷(S-1)。MS(m/z)=281.2[M+1]。
盐的形成
将L-酒石酸(31.0 mg，0.207 mmol)加入到(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷(S-1)(58.0 mg，0.207 mmol)的甲醇(2 mL)溶液中。在室温氮气下搅拌该混合物一个小时。浓缩，并在真空烘箱中干燥，获得89.0 mg (99%)标题化合物。MS(m/z)=281.0[M+1]。
实施例2-8的化合物可以基本上如实施例1所述来制备：
Figure 220567DEST_PATH_IMAGE033
。
实施例 9∶(3S)-3-(3-甲基-1-(2-甲基-6-甲基氨基-3-吡啶基氧基)丁基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
Figure 641184DEST_PATH_IMAGE034
Pd- 催化的偶合反应
向5 mL微波容器中装入0.294 mL的10 mg/mL Pd(OAc)2 (2.93 mg，0.013 mmol)的甲苯溶液。在氮气氛下，加入0.756 mL的10 mg/mL cataCXium@PtB(得自于Degussa)[(N-苯基-2-(二-叔丁基膦基)吡咯](7.50 mg，0.026 mmol)的甲苯溶液和叔丁醇钠(30.2 mg，0.314 mmol)。加入1 mL的10 mg/mL(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)(0.100 g，0.261 mmol)的甲苯溶液和甲胺(0.392 mL，0.785 mmol)。在150℃下加热该反应混合物1.5小时。加入Si-SH树脂，并搅拌2小时，以便清除Pd。将粗品混合物倾倒在预填装的SCX-柱上，用甲醇洗涤，用2 M NH3/甲醇释放产物，并浓缩。粗品不用进一步纯化就在下一步中使用。MS(m/z)=378[M+1]。
脱保护
将(3S)-3-[1-(2-甲基-6-甲基氨基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)和HCl水溶液(4 M，0.261 mL，1.04 mmol)的混合物在室温下搅拌1小时。完全转化之后，浓缩该混合物，溶于二氯甲烷中，并将该混合物装填在预填装的SCX柱上。用二氯甲烷、而后用甲醇洗涤。用2 M NH3/甲醇释放产物，并减压浓缩。用反相色谱纯化粗品残余物(17-43%梯度的乙腈/0.01 M甲酸铵-水，85 mL/min，8 min，C18 ODB XBridge柱，30 x 75 mm，5μm)，得到9 mg (12%)的(3S)-3-[1-(2-甲基-6-甲基氨基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷(S-2)。MS(m/z)=278[M+1]。
如下制备L-酒石酸盐：将纯化的物质溶解到乙腈/甲醇(5:1)的混合物中。加入1 N L-酒石酸的水溶液(1.05当量)。将混合物冷冻干燥，得到固体标题化合物。MS(m/z)=278[M+1]。
实施例 10∶(3S)-3-[1-(6-环丙基氨基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
可以基本上如实施例9所述制备标题化合物。MS(m/z)=304[M+1]。
实施例 11∶(3S)-3-(1-(6-乙氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
Figure 289520DEST_PATH_IMAGE036
Pd- 催化的偶合反应
向5 mL微波容器中装入(S)-(-)-2,2'-二(二-对甲苯基膦基)-1,1'-联萘(15.1 mg，0.0222 mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(10.2 mg，0.0111 mmol)和甲苯(2 mL)。加入(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)(85.0 mg，0.222 mmol)的甲苯(1 mL)溶液，而后加入乙醇钠(0.216 mg，0.666 mmol)。将反应混合物在微波条件下、在140℃下辐射30分钟。加入Si-SH树脂，并搅拌2小时，以便清除Pd。将粗品混合物倾倒在SCX-柱上，用甲醇洗涤，用2 M NH3/甲醇释放产物，并浓缩。粗品不用进一步纯化就在下一步中使用。MS(m/z)=393[M+1]。
脱保护
将(3S)-3-[1-(6-乙氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)和HCl水溶液(4 N，在二
Figure 27800DEST_PATH_IMAGE037
烷中，0.261 mL，1.04 mmol)的混合物在室温下搅拌1小时。完全转化之后，浓缩该混合物，将残余物溶于氯甲烷中，并装填在预填装的SCX柱上。用二氯甲烷、而后用甲醇洗涤该柱。用2 M NH3/甲醇释放产物，并减压浓缩。用反相色谱纯化粗品残余物(34-60%梯度的乙腈/0.01 M甲酸铵-水，85 mL/min，8 min，C18 ODB XBridge柱，30 x 75 mm，5μm)，得到13.4 mg (21%)的(3S)-3-[1-(6-乙氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷(S-2)。MS(m/z)=293[M+1]。
如下制备L-酒石酸盐：将纯化的物质溶解到乙腈/甲醇(5:1)的混合物中。加入1 N L-酒石酸的水溶液(1.05当量)。将混合物冷冻干燥，得到固体标题化合物。MS(m/z)=293[M+1]。
实施例 12∶(3S)-3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)丁基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
将(3S)-3-(1-羟基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)(0.400 g，1.64 mmol)和氢化钠(60%，132 mg，3.29 mmol)加入到DMSO (10 mL)中。将该混合物在氮气氛下保持并搅拌15分钟。加入6-氯-3-氟甲基吡啶(1.44 g，9.86 mmol)。将该混合物加热至70℃，并搅拌1小时。将反应混合物倾倒在盐水中，并用EtOAc提取。将提取物合并，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。粗品残余物不用进一步纯化就在下一步反应中使用。
脱保护和L-酒石酸盐的形成基本上按照1进行，得到标题化合物(384 mg，56%)。MS(m/z)=268[M+1]。
实施例13-16的化合物可以基本上如实施例12所述来制备：
Figure 375921DEST_PATH_IMAGE040
。
实施例 17∶(3S)-3-(1-(6-溴-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
向反应容器中装入(3S)-3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)(100 mg，0.389 mmol)的DMF (3 mL)溶液。加入3-氟-6-溴-3-吡啶(90 mg，0.051 mmol)、18-冠-6 (10.3 mg，0.039 mmol)和叔丁醇钠(68.2 mg，0.699 mmol)。在80℃下加热该反应几小时，直到LC/MS显示转化为目标产物为止。蒸发溶剂，并且不用进一步纯化就在下一步反应中使用残余物。
脱保护和盐的形成基本上按照实施例11进行，得到标题化合物。MS(m/z)=314[M+1]。
实施例18∶(3S)-3-[1-(6-氯-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
Figure 72799DEST_PATH_IMAGE042
可以基本上如实施例17所述制备标题化合物。MS(m/z)=269[M+1]。
实施例 19∶(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
Figure 435820DEST_PATH_IMAGE043
在室温下，向(3S)-3-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-1)(0.5 g，1.94 mmol)和6-甲氧基-2-甲基-吡啶-3-醇(0.41 g，2.91 mmol)的甲苯(10 mL)溶液中通入氮气10分钟。加入三正丁基膦(0.73 mL，2.91 mmol)，而后加入偶氮二甲酸二胡椒脂(0.59 mg，2.91 mmol)。将该反应混合物加热至70℃，并搅拌过夜。将该混合物冷却至室温，并倾倒在饱和NaHCO3水溶液(50 mL)中。用乙酸乙酯(2X)提取，合并有机提取物，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。用硅胶色谱纯化粗品残余物，用0-20%乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(3S)-3-[1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-2)(101 mg，13%)。脱保护和L-酒石酸盐的形成基本上按照实施例1进行，得到标题化合物。MS(m/z)=279[M+1]。
实施例 19A∶(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷，(S-2)。可选的合成法
Figure 617402DEST_PATH_IMAGE045
(S)-1- 苄基 -3-(3- 甲基丁酰基 ) 吡咯烷 -2- 酮∶
向配备磁力搅拌器、热电偶、加料漏斗和N2入口的5 L的3颈圆底烧瓶中装入二异丙胺(176 mL，1265 mmol)和2-甲基四氢呋喃(500 mL)。在搅拌下，将该溶液冷却至～-10℃(盐/冰浴)，并滴加入正丁基锂溶液(2.5 M，在己烷中，504 mL，1259 mmol)，同时保持温度等于或低于0℃。用2-甲基四氢呋喃(25 mL)冲洗加料漏斗。在～-5℃搅拌该溶液约15分钟。滴加入N-苄基-2-吡咯烷酮(100.8 g，575.2 mmol)、异戊酸乙酯(90 g，690 mmol)的2-Me-THF (500 mL)溶液，加入速度应保持温度等于或低于5℃，提供黄色浆液。在-5℃搅拌该反应混合物约1小时，滴加入庚烷(1 L)，并在-5℃额外搅拌1小时。通过中号的玻璃漏斗过滤收集固体，用1:1的2-甲基四氢呋喃/庚烷溶液(250 mL)洗涤，而后用庚烷(250 mL)洗涤，空气干燥，直到固体变成粉末状为止。将黄色固体放到配备磁力搅拌器的5 L的3颈圆底烧瓶中，并加入MTBE (1 L)和10%柠檬酸(1 L)。在室温下搅拌该混合物约1小时，提供均匀混合物。分离各层，用H2O (2 x 500 mL)、而后用盐水(500 mL)洗涤有机层。经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到粗品中间体(128 g)橙色油。Kuegelrohr蒸馏除去粗品的主要杂质，得到目标中间体暗橙色油(117.4 g，452.7 mmol，78.7%产率)。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.16(m, 5H), 4.55-4.35(m, 2H), 3.62 (dd, 1H, J=5.86, 9.37 Hz), 3.38-3.14(m, 2H), 2.92-2.8(m, 1H), 2.64-2.42 (m, 2H), 2.28-2.11 (m, 1H), 2.08-1.93(m, 1H), 0.96(d, 3H, J=7.03 Hz)0.93(d, 3H, J=7.04 Hz)。GC/MS=260(M+1)。
(R)-1- 苄基 -3-((S)-1- 羟基 -3- 甲基丁基 ) 吡咯烷 -2- 酮∶
向400 mL不锈钢高压釜容器中装入(S)-1-苄基-3-(3-甲基丁酰基)吡咯烷-2-酮(20 g，77.12 mmol)的IPA (250 mL)溶液，而后加入35% HCl (6%，与底物相比，4.63 mmol，M=36.4 g/mol，d=1.18 g/mL，0.408 mL)。用氮气(5 x～50 PSI)吹扫。将该容器排气，并快速加入(S)-Ru(OAc)2T-BINAP (250 mg，0.2784 mmol)，同时自反应混合物的顶部通入N2流。立刻密封高压釜，并用氮气(5 x～50 PSI)吹扫。用H2气(5 x 60 PSI)吹扫该容器，而后用H2气(60 PSI)填充该容器。在65℃搅拌该反应混合物过夜(～16-18小时)。此时容器的压力提高至～70 PSI，并根据需要用H2气再充填该容器，在反应过程中，不保持60 PSI的恒压。冷却至室温，减压浓缩，得到粗品(R)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)吡咯烷-2-酮暗褐色油，其不用进一步纯化就用于下一步(21.6 g，82.6 mmol，～95-97% ee，>100%产率)。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.18(m, 5H), 4.48(s, 2H), 4.34-4.22 (m, 1H), 3.28-3.14(m , 2H), 2.63(td, 1H, J=2.93, 9.37 Hz), 2.47(d, 1H, J=5.86 Hz), 2.12-1.70(m, 3H), 1.54-1.38(m, 1H), 1.24-1.10(m, 1H), 0.95(d, 3H, J= 3.51 Hz), 0.93(d, 3H, J=2.93 Hz)。GC/MS=262 (M+1)。
(S)-1- 苄基 -3-((S)-1- 羟基 -3- 甲基丁基 )- 吡咯烷∶
向配备磁力搅拌器、热电偶、加料漏斗和N2入口的1 L的3颈圆底烧瓶中加入粗品(R)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)吡咯烷-2-酮(38.26 mmol，假定)和甲苯(100 mL)。将该略不均匀的搅拌溶液冷却至0℃(盐/冰浴)，并滴加入VitrideTM溶液(Rohm & Haas)(65 wt%，在甲苯中，24 mL，86.085 mmol)和甲苯(70 mL)，同时保持温度等于或低于5℃。用甲苯(10-20 mL)冲洗加料漏斗。在室温下搅拌过夜(～16小时)。将反应混合物冷却至0℃(盐/冰浴)，并用饱和Rochell's盐溶液(200 mL)、而后用MTBE (200 mL)来淬灭。在搅拌下，使混合物温热至室温，而后在此温度下搅拌1小时。分离有机和水层，用H2O (2 x 200 mL)、然后盐水(200 mL)洗涤有机层，而后经Na2SO4干燥。过滤，浓缩，得到目标中间体棕色油(9.61 g，38.85 mmol，>100%产率)。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.18(m, 5H), 3.82-3.72 (m, 1H), 3.58(dd, 2H, 7.61, 20.51 Hz), 2.87(td, 1H, J=4.10, 8.79 Hz), 2.79-2.70(m, 1H), 2.48-2.38(m, 1H), 2.26-2.04(m, 2H), 1.98-1.64(m, 3H), 1.46-1.32 (m, 1H), 1.14-0.98(m, 1H), 0.92 (d, 3H, J=1.18 Hz), 0.89(d, 3H, J=1.76 Hz)。LC/MS=248.1 (M+1)。
(S)-1- 苄基 -3-((S)-1- 羟基 -3- 甲基丁基 )- 吡咯烷的拆分 / 纯化∶
向配备磁性搅拌棒和N2入口的500 mL圆底烧瓶中加入粗品(S)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)-吡咯烷(9.61g，38.26 mmol)和MeOAc(96 mL)。在搅拌下，以一份加入二苯甲酰基-(L)-酒石酸(13.71 g，38.26 mmol)，并在室温下搅拌该反应混合物，直到混合物变浑浊为止(～5分钟)。在搅拌下，在预热的油浴中、在50℃加热过夜(～16小时)。将反应混合物冷却至室温，并通过中号玻璃漏斗过滤来分离固体。用乙酸甲酯(5 x 20 mL)洗涤固体，空气干燥，得到作为白色固体的(S)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)-吡咯烷盐(15.1 g，24.93 mmol，经3步产率65.2%，81.4%异构体回收率，假定80% ee)。LC/MS=248.1 (M+1)。
(S)-1- 苄基 -3-((S)-1- 羟基 -3- 甲基丁基 )- 吡咯烷盐的脱盐∶
向配备磁性搅拌棒的500 mL圆底烧瓶中加入(S)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)-吡咯烷盐(13.71 g，22.636 mmol)和MTBE (140 mL)。加入饱和NaHCO3水溶液(140 mL)，并在室温下搅拌该不均匀混合物过夜。用EtOAc (140 mL)及饱和NaHCO3水溶液(50 mL)稀释该浑浊的溶液，而后用水(～100 mL)稀释，提供清澈的混合物。分离各层，经Na2SO4干燥有机层。过滤，浓缩，得到(S)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)-吡咯烷褐色油，其不用进一步纯化就用于下一步(5.37 g，21.707 mmol，95.9%回收率)。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.18(m, 5H), 3.82-3.72 (m, 1H), 3.58(dd, 2H, 7.61, 20.51 Hz), 2.87(td, 1H, J=4.10, 8.79 Hz), 2.79-2.70(m, 1H), 2.48-2.38(m, 1H), 2.26-2.04(m, 2H), 1.98-1.64(m, 3H), 1.46-1.32 (m, 1H), 1.14-0.98(m, 1H), 0.92 (d, 3H, J=1.18 Hz), 0.89(d, 3H, J=1.76 Hz)。LC/MS=248.1 (M+1)。
(S)-1- 苄基 -3-((S)-1-(6- 氯 -2- 甲基 -3- 吡啶基氧基 )-3- 甲基丁基 )- 吡咯烷∶
向配备Claisen接头、热电偶和N2入口的200 mL圆底烧瓶中加入(S)-1-苄基-3-((S)-1-羟基-3-甲基丁基)-吡咯烷(5.69 g，23 mmol)和DMA (58 mL)。在搅拌下，以一份加入NaH (1.29 g，32.2 mmol)，并在室温下搅拌1小时。在搅拌下，以一份加入6-氯-3-氟-2-甲基吡啶(3.52 g，24.15 mmol)，而后在室温下搅拌24小时。用水(120 mL)猝灭反应混合物，并用MTBE (120 mL)提取。用H2O (2 x 60 mL)、而后用盐水(60 mL)洗涤有机层，而后经Na2SO4干燥。过滤，浓缩，而后通过装填在硅胶(225 g，用甲苯湿润)上并用下列洗脱来纯化粗品(在甲苯中)∶己烷(2 x 500 mL)，15% MTBE/己烷(16 x 500 mL)，50% MTBE/己烷(8 x 500 mL)。将合适的级份浓缩，得到(S)-1-苄基-3-((S)-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷浅黄色油(5.77 g，15.47 mmol，67%产率，纯度>98%)。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.20(m, 5H), 7.06(s, 2H), 4.32-4.20(m, 1H), 3.68-3.48(m, 2H)2.78-2.64(m, 2H), 2.64-2.30(m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.28-2.20(m, 1H), 2.05-1.85(m, 1H), 1.82-1.52 (m, 4H), 1.48-1.34(m, 1H), 0.92 (d, 3H, J=6.45 Hz), 0.88(d, 3H, J=6.45 Hz)。LC/MS=373.2 (M), 375.3(M+2)。
(S)-1-苄基-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷∶
向配备磁性搅拌棒和N2入口的200 mL RB烧瓶中装入(S)-1-苄基-3-((S)-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷(5.46 g，14.65 mmol)和DMSO (30 mL)。在搅拌下，以一份加入甲醇钾(4.11 g，58.61 mmol)。在油浴中、在100℃下搅拌该反应混合物1小时。用H2O (60 mL)和MTBE (60 mL)稀释。分离各层，用H2O (2 x 30 mL)、而后用盐水(30 mL)洗涤有机层，而后经Na2SO4干燥。过滤，并浓缩粗品(在甲苯中)。装填在硅胶(225 g，用甲苯湿润)上，并用下列洗脱∶己烷(2 x 500 mL)，50% MTBE/己烷(6 x 500 mL)。浓缩合适的级份，得到(S)-1-苄基-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷(4.32 g，11.72 mmol，80%产率)黄色/橙色油。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.34-7.2 (m, 5H), 7.10(d, 1H, J=8.79 Hz), 6.49(d, 1H, J=8.79), 4.17-4.07(m, 1H), 3.88(s, 3H), 3.68-3.50(m, 2H), 2.78-2.67(m, 2H), 2.61-2.48(m, 1H), 2.48-2.38(m, 1H), 2.37(s, 3H), 2.33-2.24(m, 1H), 2.00-1.50(m, 5H), 1.44-1.30(m, 1H), 0.885(at, 6H, Ja=7.03 Hz, Jb=6.44 Hz)。LC/MS=369.3(M+1)。
(S)-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷∶
向400 mL不锈钢高压釜中加入20%重量的Pd/C (10%，湿润，820 mg)，而后加入(S)-1-苄基-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷(4.1 g，11.126 mmol)的乙醇(82 mL)溶液。用H2气(3 x 50 PSI)吹扫，后用H2气(50 PSI)填充该容器。将反应混合物加热至60℃，并在60℃下搅拌24小时。在60℃下，将容器的压力提高至～55 PSI，并根据需要，用H2气再充填容器。将反应混合物冷却至室温，通过装有硅藻土(用乙醇湿润)的中号玻璃漏斗过滤，并用乙醇(～80 mL)洗涤。减压浓缩，得到(S)-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基丁基)-吡咯烷浅黄色油(3.02 g，10.848 mmol，97.5%产率)。1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.12 (d, 1H, J=8.79 Hz), 6.50(d, 1H, 8.79 Hz), 4.2 (aq, 1H, Ja=7.03 Hz, Jb=5.27 Hz), 3.87(s, 3H), 3.08-2.94(m, 2H), 2.94-2.82 (m, 1H), 2.82-2.70(m, 1H), 2.50-2.26(m, 3H), 2.36(s, 3H), 1.94-1.78(m, 1H), 1.78-1.52 (m, 3H), 1.44-1.30(m, 1H), 0.898(at, 6H, Ja=6.45 Hz, Jb=7.03 Hz)。LC/MS=279.3(M+1)。
实施例 19B∶(S)-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷，D-酒石酸盐。
在60℃，将(S)-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷(353 mg)溶于THF (1 mL)中，同时在1000 rpm下搅拌。得到略微浑浊的黄色溶液。将D-酒石酸(218 mg，溶于3 mL THF中，在80℃)溶液慢慢地加入到该溶液中。通过0.45μm PTFE针筒式过滤器过滤该溶液，并加入乙腈(4 mL)。在通风柜中蒸发(无盖)。约20分钟之后，沉淀大量类白色固体，真空过滤该溶液，在60℃真空烘箱中将固体干燥1小时，获得粉末状类白色固体。
X 射线粉末衍射
在Bruker D8 Advance X射线粉末衍射仪(配备CuKα源λ=1.54056Å和Vantec检测器，在50 kV和40 mA下操作)上获得晶体的XRD图。在2θ为4和40°之间扫描样品，其中2θ的步长为0.02°，扫描速度为9.0秒/步，并且具有1 mm的发散和接收狭缝和0.1 mm的检测器狭缝。将干粉填装到凹陷的顶部装填持样器中，并使用载玻片获得光滑表面。在环境温度和相对湿度下收集晶形衍射图。在选出峰之前，除去背景。晶体学领域众所周知对于任何给定的晶形，由于例如晶体形态和特性因素所引起的优选取向，衍射峰的相对强度可以变化。当存在优选取向效果时，峰强度改变，但多晶型物的特征峰位置无变化。参见例如The United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18，1843-1844页，1995。此外，晶体学领域还众所周知，对于任何给定的晶形，角的峰位置可以略微地变化。例如，由于分析样品时的温度或湿度的变化、替换样品或存在或不存在内标，峰位置可以移动。在本文的情况下，2θ±0.1的峰位置可变性考虑了这些潜在的变化，不会防碍所显示晶形的明确鉴定。基于分辨峰(单位°2θ)的任何独特的组合(典型地是更突出的峰)，可以确定晶形。由此，制备的(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷的D-酒石酸盐的样品的特征在于：使用CuKα辐射的XRD图，具有如下面表1所述的衍射峰(2θ值)，尤其是在4.63处具有峰，其与一个或多个选自9.26、16.12和16.59的峰组合；衍射角的容许误差为0.1度。
表1∶(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷的d-酒石酸盐的X射线粉末衍射峰
Figure 769215DEST_PATH_IMAGE048
。
实施例20-32的化合物可以基本上如实施例19所述来制备：
Figure 335326DEST_PATH_IMAGE050
Figure 450043DEST_PATH_IMAGE052
。
实施例 33∶3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丁基-乙基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(D1E2)
Figure 810618DEST_PATH_IMAGE053
脱盐
将3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丁基-乙基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(D1)(80.0 mg，0.180 mmol)倾倒在SCX柱上，并用二氯甲烷、50%二氯甲烷/甲醇和甲醇冲洗。用2 M NH3/甲醇洗脱化合物，浓缩，得到3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丁基-乙基)-吡咯烷(50 mg)。
手性色谱分离
对胺(50 mg)进行超临界流体手性色谱(Chiracel OD-H)，用25%甲醇/0.2%异丙胺/CO2洗脱，得到3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丁基-乙基)-吡咯烷(D1E1)(21 mg，40%，>99%ee)和3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丁基-乙基)-吡咯烷(D1E2)(20 mg，38%，>99 ee)。
基本上按照实施例1进行3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丁基-乙基)-吡咯烷(D1E2)的L-酒石酸盐的形成，得到标题化合物。MS(m/z)=295.2 (M+1)。
实施例 34∶(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-丁基)-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-2)
Figure 260053DEST_PATH_IMAGE054
脱盐
将(3S)-3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-丁基)-吡咯烷(S-2)的L-酒石酸盐(1.00 g，2.39 mmol)溶解在甲醇中，并将该溶液倾倒在SCX柱上。用甲醇冲洗该柱，而后用2 M NH3/甲醇洗脱游离胺。蒸发溶剂，将胺真空干燥，得到0.65 g (99%)的(3S)-3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-丁基)-吡咯烷(S-2)，其不用进一步纯化就用于下一步。
氯置换为甲氧基
将(3S)-3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-丁基)-吡咯烷(S-2)(0.65g，2.44 mmol)、DMSO (9.75 mL)、甲醇(0.493 mL，12.18 mmol)和氢化钠(0.390 g，9.75 mmol)加入到反应管瓶中。将管瓶排气，并用氮气吹扫。将该混合物在100℃下加热过夜。将反应混合物倾倒在SCX柱上，并用甲醇冲洗。将SCX柱连接在硅胶柱顶上，用5-30% NH3OH/乙醇(1:9)-氯仿洗脱，获得0.420 g (65%)的(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-丁基)-吡咯烷。
基本上按照实施例1进行(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-丁基)-吡咯烷(S-2)的L-酒石酸盐的形成，得到标题化合物。MS(m/z)=265[M+1]。
实施例 35∶(3S)-3-[1-环丁基-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-甲基]-吡咯烷(S-1)，L-酒石酸盐
Figure 629855DEST_PATH_IMAGE055
基本上如实施例34所述，可以由(3S)-3-[1-环丁基-1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-甲基]-吡咯烷(S-1)，L-酒石酸盐制备标题化合物。MS(m/z)=277[M+1]。
实施例 36∶(3S)-3-[1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-1)
Figure 520451DEST_PATH_IMAGE056
脱保护
将(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-1)(0.50 g，1.31 mmol)、甲氧基苯(6.6 mL)和二氯甲烷(6.6 mL)在反应管瓶中混合。将管瓶排气，并用氮气吹扫。加入三氟乙酸(1.51 g，1.0 mL，13.2 mmol)，并在室温下搅拌该混合物1小时。将该混合物直接装填到预填装的SCX柱上，并用CH2Cl2、而后用CH3OH冲洗。用2 M NH3/甲醇洗脱，减压浓缩，得到0.353 g (96%)(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷(S-1)。MS(m/z)=281.2[M+1]。
氯置换为甲氧基
将(3S)-3-(1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-环丙基-乙基)-吡咯烷(S-1)(0.35g，1.25 mmol)、DMSO (4.99 mL)、甲醇(0.404 mL，9.97 mmol)和氢化钠(0.349 g，8.73 mmol)加入到反应管瓶中。将管瓶排气，并用氮气吹扫。将混合物在110℃下加热4小时。将反应物溶解在pH 7缓冲液中，并用5 N HCl中和。将混合物倾倒在SCX柱上，并用甲醇冲洗。将SCX柱连接在硅胶柱顶上，用5-35% NH4OH/乙醇(1:9)-氯仿洗脱，获得0.209 g (61%)的(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基)-吡咯烷(S-1)。MS(m/z)=277[M+1]。
基本上按照实施例1进行(3S)-3-(1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-环丙基-乙基)-吡咯烷(S-1)的L-酒石酸盐的形成，得到标题化合物。MS(m/z)=277[M+1]。
实施例 37∶(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-1)
Figure 629090DEST_PATH_IMAGE057
Weinreb 酰胺的制备
Figure 237926DEST_PATH_IMAGE058
将(S)-N-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-甲酸(40 g，186 mmol)的THF (240 mL)溶液滴加到1,1'-羰基二咪唑(31.4 g，190 mmol)的THF (160 mL)搅拌溶液中，并在氮气室温下搅拌2.5小时。加入N,O-二-甲基羟胺盐酸盐(18.8 g，190 mmol)，并在室温下搅拌过夜。用水猝灭该反应。分离各相，并用甲基叔丁基醚(2X)提取水相。将有机物合并，用10% H3PO4水溶液、20% KHCO3水溶液、水和盐水洗涤。浓缩，得到37.1 g (77%)标题化合物。MS(m/z)=203.1[M-55]。
格氏试剂对 Weinreb 酰胺的加成和酮还原为醇
Figure 411418DEST_PATH_IMAGE059
在0℃，在氮气下，将烯丙基溴化镁溶液(2.0 M，在THF中，100.3 mL，200.5 mmol)慢慢地滴加到(S)-3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(37.0 g，143.2 mmol)的THF (296 mL)溶液中。将反应温热至室温，并继续搅拌48小时。将该混合物加入到硼氢化钠(5.42 g，143 mmol)和四丁基溴化铵(0.74 g，2.39 mmol)的冷水溶液(0-5℃)(74 mL)中，并搅拌1小时。分离各相，并用甲基叔丁基醚(2X)提取水相。合并有机相，并用水和盐水洗涤。浓缩，并用硅胶柱色谱纯化粗品残余物，用甲基叔丁基醚/己烷(3/7至7/3)洗脱，获得(3S)-3-(1-羟基-丁-3-烯基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)(29 g，85%)。MS(m/z)=186.1[M-55]。
(3S)-3-(2-环丙基-1-羟乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)
Figure 484416DEST_PATH_IMAGE060
将乙酸钯(II)(2.31 g；0.298 mmol)加入到(3S)-3-(1-羟基-丁-3-烯基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)(14.4 g，59.7 mmol)的二氯甲烷(43.2 mL)搅拌溶液中。在氮气下，在-30至-40℃，慢慢地加入新制备的重氮甲烷溶液(100 mL，约50 mmol，在乙醚中)(注意∶N2气猛烈逸出)。蒸发溶剂，并将粗品溶解在二氯甲烷(43.2 mL)中。加入乙酸钯(II)(2.31 g，0.298 mmol)，而后在氮气下、在-30至-40℃，向该混合物中加入新制备的重氮甲烷溶液(100 mL，约50 mmol，在乙醚中)(注意∶N2气猛烈逸出)。蒸发溶剂，并将粗品溶解在二氯甲烷(43.2 mL)中。加入乙酸钯(II)(2.31 g，0.298 mmol)，而后在氮气下、在-30至-40℃，向该混合物中加入新制备的重氮甲烷溶液(50 mL，约25 mmol，在乙醚中)(注意∶N2气猛烈逸出)。蒸发溶剂，向粗品残余物中加入己烷(140 mL)，并在室温下搅拌该悬浮液过夜。用celite®垫过滤悬浮液，浓缩，获得定量产率的(3S)-3-(2-环丙基-1-羟乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)。MS (m/z)=200.1[M-55]。
(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-1)和(S-2)
Figure DEST_PATH_IMAGE061
在室温氮气氛下，将氢化钠(60%，6.20 g，155.1 mmol)慢慢地加入到(3S)-3-(2-环丙基-1-羟基-乙基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-mix)(19.8 g，77.5 mmol)、6-氯-3-氯-2-甲基-吡啶(16.9 g，116.3 mmol)和二甲基乙酰胺(59.4 mL)的混合物中。加热至40℃，搅拌3.5小时。冷却该混合物，并加入甲醇。将该混合物倾倒在10% H3PO4水溶液(100 mL)和甲基叔丁基醚(100 mL)中。分离各相，并用甲基叔丁基醚(2X)提取水相。合并有机相，并用水和盐水洗涤。蒸发溶剂，获得粗品残余物。在硅胶上对粗品残余物进行色谱，用甲基叔丁基醚/己烷(2:8至4:6)洗脱，获得粗品残余物，将其与来自另一个批次(基于2 g醇)的粗品残余物混合。用硅胶色谱分离非对映体的混合物，用25%的甲基叔丁基醚/己烷洗脱，获得(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体1 (S-1)(15.0 g，51%)作为第一个洗脱的异构体，MS(m/z)=325.0(M-55)，和(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，异构体2 (S-2)(12.0 mg，41%)作为第二个洗脱的异构体。MS (m/z)=325.0(M-55)。
(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷，(S-1)
Figure 452372DEST_PATH_IMAGE062
将HCl (4 M，在1,4-二
Figure 361553DEST_PATH_IMAGE037
烷中，52.7 mL，627 mmol)加入到(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(S-1)(13.4 g，35.2 mmol)的二氯甲烷(40.2 mL)溶液中。在室温下氮气下搅拌1小时。蒸发溶剂，并将残余物溶解在甲基叔丁基醚(40 mL)和水(40 mL)的混合物中。分离各相，用甲基叔丁基醚(2X)洗涤水相。通过加入10% K2CO3水溶液，将水相的pH值调节至9，并用甲基叔丁基醚(3X)提取。用水和盐水洗涤合并的有机相。蒸发挥发物，获得(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷(S-1)(9.6 g，97%)。MS (m/z)=281.2[M+1]。
(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷，L-酒石酸盐(S-1)
将L-酒石酸(5.1 g，33.9 mmol)加入到(3S)-3-[1-(6-氯-2-甲基-3-吡啶基氧基)-2-环丙基-乙基]-吡咯烷(S-1)(9.7 g，34.5 mmol)的甲醇(48.5 mL)溶液中。在室温氮气下搅拌该混合物15分钟。蒸发挥发物，将残余物溶解在水(100 mL)中，并用甲基叔丁基醚(2X)提取。在旋转蒸发器上将水相浓缩至50 mL的最终体积，同时保持水浴在25℃。将残余物冷冻干燥，获得14.0 g (95%)标题化合物。MS(m/z): 281.0[M+1]。
3(S)-(1'- 羟基 -3'- 甲基 - 丁基 )- 吡咯烷 -1- 甲酸叔丁基酯异构体 1 和 2 的绝对构型的归属
在3(S)-(1'-羟基-3'-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯中有两个立构碳，其与碳5和7 (C5和C7)对应，如图1所示：
图1。
因为C7的构型从起始(S)-N-(叔丁氧基羰基)-吡咯烷-3-甲酸而已知，所以，相对构型的确定可以引出C5的绝对构型的归属。如果认为质子-碳耦合是通过Matsumori等人(J. Org. Chem. 64, 866(1999))描述的J-基构型方法，则可以得到柔性分子的相对构型。这种方法涉及通过某个C-C键的H-H和H-C偶合的测定，以及它们通过Karplus-Altona关系向二面角的转化。H-C偶合还遵循Karplus关系，从1至3 Hz的小的值是非对称取向的标志，从6至8 Hz的大的值表示反排列。
使用P. Vidal等人, J. Org. Chem., 72，3166-3170(2007)描述的卫星-选择性1D-TOCSY实验，测定相关的H5-C11质子-碳偶合常数。获得1D-TOCSY实验，其中选择性脉冲的偏移设置在H11的低频13C卫星上。得到的谱与其中主要12C同位素的H11信号被激发的常规1D-TOCSY实验相比较，或者与1H谱相比较。在C11和H5之间的三键H,C偶合是由相对于其1H谱中的位置卫星选择性TOCSY谱中的中续H5信号的位移测定的，偶合常数是该位移的两倍。由于信号重迭没有测定C8和H5之间的偶合常数。对于每个3(S)-(1-羟基-3-甲基-丁基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯异构体1和异构体2测定了C7-C5键的质子-质子和质子-碳偶合常数，所述异构体基本上如制备例4所述制备，且它们的值列于下列表中：
Figure DEST_PATH_IMAGE065
。
在异构体2中，小的H5-C11偶合常数表示H5和C11在两个构成构象异构体中是彼此非对称的，这与3(S)-1'(S)异构体一致。
体外转运体亲合性试验
将人血清素转运体(SERT)、去甲肾上腺素转运体(NET)或多巴胺转运体(DAT)克隆到pcDNA3载体中，并稳定地转染到HEK293细胞中。按照标准规程制备膜原料，并对于每批膜，使用饱和结合或同源竞争结合方法计算Kd值(Bylund和Toews, Am. J. Phys.(Lung Cell. Mold Physiol 9), 265, 421-429(1993)。使用通过将滤过放射性配体结合试验转化为闪烁近似试验(SPA)格式所形成的方法(Carpenter等人，Methods in Molecular Biology, 190, 21-49(2002))，在96孔平皿中进行所有的结合试验。简要地说，在3H-西酞普兰的存在下，在含有50 mM Tris、150 mM NaCl和5 mM KCl (pH 7.4)的试验缓冲液中，以10μg/孔的浓度使用SERT膜。使用氟西汀(100μM)，测定非特异性结合，文拉法新用作阳性对照。在含有50 mM Tris、300 mM NaCl和5 mM KCl (pH 7.4)的试验缓冲液中，以8μg/孔的浓度使用NET膜。3H-尼索西汀(Nisoxetine)用作示踪物，100μM地昔帕明用于测定非特异性结合，尼索西汀(nisoxetine)用作阳性对照。对于DAT结合试验，试验缓冲液与SERT相同，以20μg/孔的浓度使用膜，100μM诺米芬新用于测定非特异性结合，3H-WIN 35428 (Perkin Elmer)充当放射性示踪剂，诺米芬新用作阳性对照。在所有情况下，0.5 mg/孔的麦胚凝集素闪烁近似试验小球(WGA-SPA，GE Health Sciences)用于捕获膜，并在室温下将平皿培养3小时。测定放射性，并使用四参数逻辑曲线拟合程序(ActivityBase v5.3.1.22)计算Ki值。
基本上如上所述测试示例的化合物，并且发现它们对于hSERT和hNET受体具有高亲合性，但对于hDAT受体具有低得多的体外亲合性。发现SERT和NET的Ki分别小于20.1 nM和23.4 nM，而发现DAT的Ki大于255 nM。基本上如上所述来测试实施例19的化合物，并且发现具有亲合性，如下表所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE067
。
体外抑制剂活性试验∶
将人血清素(SERT)或去甲肾上腺素(NET)转运体克隆到pcDNA3载体中，并稳定地转染到HEK293细胞中。两个试验都是由下面所描述方法改进的：Eshleman等人，J. Pharmacol. Exptl Ther., 289, 877-885(1999)和Wall等人，Mol. Pharmacol., 47, 544-550(1995)。在聚D-赖氨酸涂渍的烧瓶或96孔平皿上，使细胞在含有5%胎牛血清、250μg/mL遗传霉素和20 mM Hepes的D-MEM/F-12 3:1 (3份Dulbecco改进的Eagle培养基，在1份Nutrient Mix F-12介质中)中生长。在试验之前，将细胞以每孔40,000个细胞涂覆在200 μL介质中，并在37℃培养18-24小时。试验吸收缓冲液由Krebs-Ringer碳酸氢盐原料(补充有1.26%碳酸氢钠)、20 mM HEPES和100μM优降宁与抗环血酸中的每一个组成。用化合物或吲达曲林(indatraline)(作为阳性对照)预培养30分钟之后，加入3H-血清素或3H-去甲肾上腺素，保持1分50秒。然后除去3H-底物，并将细胞用100μL的冷吸收缓冲液洗涤4X(使用multimek)。加入Triton X-100 (1%)，将细胞溶解，混合之后，将所有的内含物转入白底平皿中。将MicroscintTM 40加入到每个孔中，每个孔测定1分钟放射性。使用四参数逻辑曲线拟合程序(ActivityBase v5.3.1.22)，分析结果，作为IC50值。
基本上如上所述测试示例的化合物，并且发现它们是血清素和去甲肾上腺素再摄取的抑制剂，SERT和NET的IC50值分别小于227 nM和44.6 nM。基本上如上所述测试实施例19的化合物，发现其是体外血清素和去甲肾上腺素再摄取的抑制剂，具有如下表所示的IC50值：
。
体内转运体占有率试验∶
重量240-280克的雄性Sprague-Dawley大鼠(三个一组)用于测定血清素转运体占有率。在每个实验开始之前，使动物禁食至少12小时。口服给予动物赋形剂或0.10、0.33、1.00、3.33或10.00 mg/kg剂量的测试化合物，测试化合物在4%葡萄糖/25 mM磷酸盐缓冲液(pH=3.0)中，含有0.1、0.33、1、3.33或10% CAPTISOL™ (CAPTISOL™的浓度(%)=测试化合物的剂量(mg/kg))。2小时之后，在尾外侧静脉中，静脉注射给予动物N,N-二甲基-2-(2-氨基-4-氰基苯硫基)-苄胺(10μg/kg)(在盐水中)。额外的40分钟之后，通过颈脱位将大鼠杀死，除去一部分额侧皮层，并放在干冰上。静脉注射(i.v.)给予额外的三个大鼠的对照组帕罗西汀马来酸盐(12 mg/kg)，而后，1小时以后，给予N,N-二甲基-2-(2-氨基-4-氰基苯硫基)-苄胺(10μg/kg)。
将组织解冻，而后加入四个体积(w/v)的乙腈(含有0.1%甲酸)。使用超声波分离粉碎机探针将样品均化，并在14,000×g下离心16分钟。在自动进样器管瓶中，将一个体积的上清液加入到3个体积的水中，并旋转。用Zorbax C18 HPLC柱进行分离，移动相梯度为20%至90%乙腈/水(各自含有0.1%甲酸)。整个HPLC运行时间是3.5分钟，额外的2.0分钟为再平衡时间。以MRM模式操作的API4000三重四极质谱仪(Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)用于检测。对于N,N-二甲基-2-(2-氨基-4-氰基苯硫基)-苄胺来说，监测的离子跃迁是284.1/239.1 m/z。
在赋形剂预处理的动物的皮层中，N,N-二甲基-2-(2-氨基-4-氰基苯硫基)-苄胺(示踪物)的水平表示非特异性和特异性结合之和，并且指定为0%占有率的值(所有的受体可供给示踪物)。在用很高静脉内剂量的帕罗西汀马来酸盐预处理的动物(阳性对照组)中，示踪物的较低水平表示非特异性结合，并且指定100%占有率的值(没有受体看供给示踪物)。口服测试化合物之后皮层中的示踪物水平线性地插在这两个极端值之间，以便测定血清素转运体占有率的百分比。用平均值±SEM (n=3/组)来表示数据，使用Prism 3.0版(GraphPad Software Inc., San Diego，CA，USA)来计算。使用非线性回归，通过将数据与S形曲线拟合，获得ED80值。
基本上如上所述测试实施例19的化合物，并且发现，基于下面给药后1小时的剂量响应数据，其具有7.1 mg/kg的绝对ED80，由此确定血清素受体的体内占有率：
。
α MMT ∶一元胺消耗抑制试验∶
当消耗药剂要求通过转运体来主动吸收到神经元中时，神经传递介质转运体抑制剂可以防止脑一元胺的消耗。通过神经元转运体，将DL-对氯苯异丙胺(PCA)转运到含血清素的神经元中，并且引起大鼠脑血清素(5-HT)浓度的持久消耗。α-甲基-间酪氨酸(α-MMT)是拟正交感神经素消耗药剂，其在体内被β-羟基化为间羟胺，并且通过神经元转运体主动转运到去甲肾上腺素(NE)神经元中，造成大鼠脑中的NE水平降低。大鼠脑中5-HT水平被PCA消耗和大鼠皮层NE浓度被α-MMT消耗，被具有5-HT和NE再摄取抑制剂活性的药剂阻滞。使用下列方法，在体内摄食和禁食的大鼠中，可以检验本发明化合物防止大鼠脑中5-HT浓度被PCA消耗和大鼠皮层NE浓度被α-MMT消耗的活性。
将重量160-180克的雄性Sprague Dawley大鼠禁食过夜，或可以不限量地接触食品。在给予10 mg/kg PCA盐酸盐(ip)或6.25 mg/kg α-MMT(sc)之前2小时，给动物填喂赋形剂(无菌水)或测试化合物。所有化合物以1 mL/kg给予。给予PCA或α-MMT之后2小时，将动物杀死。在分析之前，将组织解剖，在干冰上冷冻，并在-70℃保存。对于给予PCA的动物，使用高压液相色谱(带有电化学检测)测定全部脑血清素(5-HT)浓度，如Fuller和Perry在J. Pharmacol. Exp. Ther., 248，50-56(1989)中所描述。对于给予α-MMT的动物，氧化铝吸收之后，利用HPLC-EC测定皮质去甲肾上腺素浓度，如Bymaster等人, Neuropsychopharmacology, 27(5), 699-711 (2002)所描述。使用EZChromTM色谱数据系统(Scientific Software，San Ramon，CA)收集数据，利用其计算峰高度和试样浓度。方差分析，而后进行Tukey's显著差异事后测试，确定治疗组之间的显著差异(P≤0.05)。使用最适线性回归分析，计算拮抗PCA-或α-MMT-引起的一元胺消耗50％时的剂量(ED50)。
基本上如上所述测试实施例19的化合物，并且发现，基于下面的剂量响应，其拮抗α-MMT引起的大鼠皮层中去甲肾上腺素的消耗，具有9.5 mg/kg的ED80，由此确定了抑制去甲肾上腺素转运体功能的体内效果：
Figure DEST_PATH_IMAGE073
。
人工福尔马林测试
在尺寸为约25 cm x 25 cm x 20 cm的定制有机玻璃盒子中进行人工福尔马林测试。使笼的背后所放置的镜子不阻碍对注射福尔马林的爪的观察。在实验之前，将大鼠(Charles River(CRL)Sprague Dawley(SD))单独放在小室中至少30分钟。所有的测试在08:00和14:00 h之间进行，测试室温度维持在21-23℃。在福尔马林刺激之前，在不同时间处计量外周给予的测试化合物。用27号针将福尔马林(50µL的5%盐水溶液)皮下注射到右后爪的背外侧面。注射福尔马林之后，立刻开始观察。在5分钟间隔内，通过记录每次舔爪现象持续的秒数，测定福尔马林引起的疼痛。注射福尔马林之后，测定疼痛得分50分钟。观察到两个阶段的疼痛行为，如先前所描述(Wheeler-Aceto, H., Porreca, F.和Cowan, A., The rat paw formalin test: comparison of noxious agents, Pain 40 (1990) 229-238)。注射福尔马林之后，早期阶段立刻开始，并且持续约5分钟，而后是晚期阶段，其在注射福尔马林之后10-15分钟之间开始，在约25-35分钟时典型地观察到最大响应。观察50分钟之后，用CO2杀死动物。
福尔马林测试所报道的不同得分参数当中，认为舔和咬注射爪所花费的总时间是最相关的。(Abbott等人，The formalin test: scoring properties of the first and second phases of the pain response in rats, Pain 60 (1995) 91-102; Coderre等人，The formalin test: a validation of the weighted-scores method of the behavioral pain rating, Pain 54 (1993) 43-50))。早期阶段评分是0至5分钟舔所消耗时间之和(秒)。晚期阶段评分是通过将从观察期的第16分钟至第40分钟舔所消耗的总秒数相加而获得的。以平均值与均值标准误差(±SEM)的形式提供数据。利用单向方差分析(ANOVA)和用于双侧比较的Dunnett"t'测试所分析的合适对照来评价数据。如果P-值小于0.05，认为差异是显著的。(Abbott, 上文；Coderre, 上文；和Wheeler-Aceto, 上文)。
基本上如上所述测试实施例19的化合物，并且发现，具有从下列计量响应中得出的13.4 mg/kg的ED50，显著地减轻疼痛行为∶
Figure DEST_PATH_IMAGE075
。
尽管可以不用任何制剂来直接给予本发明方法中所使用的化合物，但通常以药物组合物的形式给予该化合物，所述药物组合物包含至少一种式I的化合物或其可药用盐作为活性成分和至少一种可药用载体、稀释剂和/或赋形剂。这些组合物可以通过各种途径给予，包括口服、鼻内、透皮、皮下、静脉内、肌注和肺部。这种药物组合物和制备它们的方法在本领域是众所周知的。参见例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy(University of the Sciences in Philadelphia, ed., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005)。
优选，将组合物配制为单位剂型，每个剂量含有约0.1至约500 mg，更通常约1.0至约200 mg，例如在约1和20 mg之间的活性成分。术语“单位剂型”是指合适作为人类受试者及其它哺乳动物的单一剂量的物理分散单位，每个单位含有预定数量的、计算为产生目标治疗效果的活性物质，以及至少一种合适的可药用载体、稀释剂和/或赋形剂。
式I的化合物通常在很宽的剂量范围内是有效的。例如，每天剂量通常在约0.001至约30 mg/kg，更通常从约0.01至3.0 mg/kg，例如在0.01和0.3 mg/kg体重之间的范围内。在有些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能是更合适的，而在其它情况下，可以使用更大的剂量，不会引起任何有害的副作用，因此，上述剂量范围不打算以任何方式限制本发明的范围。应该理解，医生将按照有关情况来确定实际给予化合物的量，所述有关情况包括所治疗的病症，选择的给药途径，给予的一种或多种实际化合物，个体患者的年龄、体重和响应，和患者症状的严重程度。

Claims (11)

1.下式的化合物或其可药用盐∶
Figure 574749DEST_PATH_IMAGE001
其中R1选自正丙基、异丁基、(C3-C4)环烷基和(C3-C4)环烷基-甲基-；
n是1或2；和
每个R2独立地选自氟、氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基甲氧基、三氟甲氧基、甲基氨基、环丙基氨基和叔丁基羰基氨基，条件是：当n是2时，至少一个R2是氟、氯、溴、甲基、乙基、三氟甲基、甲氧基或乙氧基。
2.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1是正丙基或异丁基。
3.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1是异丁基。
4.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中R1是(C3-C4)环烷基或(C3-C4)环烷基-甲基-。
5.权利要求1的化合物或其可药用盐，其是(S)-3-((S)-1-(6-甲氧基-2-甲基-3-吡啶基氧基)-3-甲基-丁基)-吡咯烷。
6.药物组合物，其包含根据权利要求1至5的任一项的化合物或其可药用盐与可药用载体、稀释剂或赋形剂的组合。
7.治疗哺乳动物的慢性疼痛的方法，该方法包括：给予需要这种治疗的哺乳动物有效量的根据权利要求1的化合物或其可药用盐。
8.权利要求7的方法，其中哺乳动物是人。
9.根据权利要求1至5的任一项的化合物或其可药用盐，用于治疗。
10.根据权利要求1至5的任一项的化合物或其可药用盐，用于治疗人的慢性疼痛。
11.根据权利要求1至5的任一项的化合物或其可药用盐在制备用于治疗慢性疼痛的药物中的用途。
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