KR101215855B1 - 감마-세크레타제의 억제제를 스크리닝하는 방법 - Google Patents
감마-세크레타제의 억제제를 스크리닝하는 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101215855B1 KR101215855B1 KR1020057022603A KR20057022603A KR101215855B1 KR 101215855 B1 KR101215855 B1 KR 101215855B1 KR 1020057022603 A KR1020057022603 A KR 1020057022603A KR 20057022603 A KR20057022603 A KR 20057022603A KR 101215855 B1 KR101215855 B1 KR 101215855B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- secretase
- protein
- cell
- transgene
- seq
- Prior art date
Links
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 title claims abstract description 211
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 title claims abstract description 211
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 93
- 238000012216 screening Methods 0.000 title description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 161
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 152
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 98
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 84
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 76
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 76
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 66
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 61
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 61
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 47
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims abstract description 46
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 44
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract description 42
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract description 42
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 30
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims abstract description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 24
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 21
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108010068250 Herpes Simplex Virus Protein Vmw65 Proteins 0.000 claims description 68
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 claims description 52
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 claims description 48
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 claims description 48
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 claims description 48
- 102100039556 Galectin-4 Human genes 0.000 claims description 42
- 101000608765 Homo sapiens Galectin-4 Proteins 0.000 claims description 41
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 32
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 32
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 claims description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 15
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 claims description 10
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 101100386089 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) MET17 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 claims description 4
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 claims description 3
- 102100034035 Alcohol dehydrogenase 1A Human genes 0.000 claims description 3
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 claims description 3
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000780443 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1A Proteins 0.000 claims description 3
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101150014136 SUC2 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 101100071585 Caenorhabditis elegans hsp-16.2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100465890 Caenorhabditis elegans sel-12 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100347613 Caenorhabditis elegans unc-54 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101150068888 MET3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100022915 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-11 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 101100022918 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) sua1 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 claims description 2
- 101100315695 Danio rerio unc119b gene Proteins 0.000 claims 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims 1
- 101100285000 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) his-3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 claims 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 11
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 abstract description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 abstract 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001777 nootropic effect Effects 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 19
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 14
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 13
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 12
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 12
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 11
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 9
- 108010065395 Neuropep-1 Proteins 0.000 description 9
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- WATXSTJXNBOHKD-LAEOZQHASA-N Glu-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WATXSTJXNBOHKD-LAEOZQHASA-N 0.000 description 7
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 7
- DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 7
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 7
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 description 6
- NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 6
- 108010045023 alanyl-prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 6
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 6
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 6
- 108010089198 phenylalanyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 6
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 108010017949 tyrosyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 6
- FBHOPGDGELNWRH-DRZSPHRISA-N Ala-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FBHOPGDGELNWRH-DRZSPHRISA-N 0.000 description 5
- LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LBYMZCVBOKYZNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- BMNVSPMWMICFRV-DCAQKATOSA-N Arg-His-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CN=CN1 BMNVSPMWMICFRV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- GYCPQVFKCPPRQB-GUBZILKMSA-N Glu-Gln-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N GYCPQVFKCPPRQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- UVTSZKIATYSKIR-RYUDHWBXSA-N Gly-Tyr-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UVTSZKIATYSKIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 5
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- YKZAMJXNJUWFIK-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N YKZAMJXNJUWFIK-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 5
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JKJSIYKSGIDHPM-WBAXXEDZSA-N Phe-Phe-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(O)=O JKJSIYKSGIDHPM-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 5
- OQPNSDWGAMFJNU-QWRGUYRKSA-N Ser-Gly-Tyr Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 OQPNSDWGAMFJNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- GBIUHAYJGWVNLN-UHFFFAOYSA-N Val-Ser-Pro Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O GBIUHAYJGWVNLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 5
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 5
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- NTUPOKHATNSWCY-PMPSAXMXSA-N (2s)-2-[[(2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 NTUPOKHATNSWCY-PMPSAXMXSA-N 0.000 description 4
- NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N Arg-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WBDWQKRLTVCDSY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- VWWAFGHMPWBKEP-GMOBBJLQSA-N Asp-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VWWAFGHMPWBKEP-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 4
- HXVILZUZXFLVEN-DCAQKATOSA-N Asp-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HXVILZUZXFLVEN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 4
- ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N His-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- NYEYYMLUABXDMC-NHCYSSNCSA-N Ile-Gly-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N NYEYYMLUABXDMC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- KBDIBHQICWDGDL-PPCPHDFISA-N Ile-Thr-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N KBDIBHQICWDGDL-PPCPHDFISA-N 0.000 description 4
- 108010056836 L 685458 Proteins 0.000 description 4
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BQSLGJHIAGOZCD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 4
- VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N Leu-Thr-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 4
- CQRGINSEMFBACV-WPRPVWTQSA-N Met-Val-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O CQRGINSEMFBACV-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 4
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 4
- RIYZXJVARWJLKS-KKUMJFAQSA-N Phe-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RIYZXJVARWJLKS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- FRKBNXCFJBPJOL-GUBZILKMSA-N Pro-Glu-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FRKBNXCFJBPJOL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- ILUOMMDDGREELW-OSUNSFLBSA-N Thr-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O ILUOMMDDGREELW-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 4
- SMKXLHVZIFKQRB-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N SMKXLHVZIFKQRB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- DJQIUOKSNRBTSV-CYDGBPFRSA-N Val-Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N DJQIUOKSNRBTSV-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 4
- RQOMPQGUGBILAG-AVGNSLFASA-N Val-Met-Leu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RQOMPQGUGBILAG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 4
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 4
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 4
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 4
- KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N Ala-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N 0.000 description 3
- GHBSKQGCIYSCNS-NAKRPEOUSA-N Ala-Leu-Asp-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GHBSKQGCIYSCNS-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 3
- KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 3
- SBVJJNJLFWSJOV-UBHSHLNASA-N Arg-Ala-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SBVJJNJLFWSJOV-UBHSHLNASA-N 0.000 description 3
- IDUUACUJKUXKKD-VEVYYDQMSA-N Asn-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IDUUACUJKUXKKD-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 3
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100297345 Caenorhabditis elegans pgl-2 gene Proteins 0.000 description 3
- DWJXYEABWRJFSP-XOBRGWDASA-N DAPT Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)C(=O)CC1=CC(F)=CC(F)=C1 DWJXYEABWRJFSP-XOBRGWDASA-N 0.000 description 3
- CITDWMLWXNUQKD-FXQIFTODSA-N Gln-Gln-Asn Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N CITDWMLWXNUQKD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- FKXCBKCOSVIGCT-AVGNSLFASA-N Gln-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKXCBKCOSVIGCT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- UQKVUFGUSVYJMQ-IRIUXVKKSA-N Gln-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O UQKVUFGUSVYJMQ-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 3
- PVBBEKPHARMPHX-DCAQKATOSA-N Glu-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O PVBBEKPHARMPHX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N Glu-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 3
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- IALQAMYQJBZNSK-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IALQAMYQJBZNSK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 description 3
- KZTLOHBDLMIFSH-XVYDVKMFSA-N His-Ala-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KZTLOHBDLMIFSH-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 3
- CYHYBSGMHMHKOA-CIQUZCHMSA-N Ile-Ala-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N CYHYBSGMHMHKOA-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 3
- AMSYMDIIIRJRKZ-HJPIBITLSA-N Ile-His-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N AMSYMDIIIRJRKZ-HJPIBITLSA-N 0.000 description 3
- YNMQUIVKEFRCPH-QSFUFRPTSA-N Ile-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)O)N YNMQUIVKEFRCPH-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 3
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 3
- ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ZRLUISBDKUWAIZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N Leu-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CCQLQKZTXZBXTN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- NJMXCOOEFLMZSR-AVGNSLFASA-N Leu-Met-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NJMXCOOEFLMZSR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZDJQVSIPFLMNOX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- ABHIXYDMILIUKV-CIUDSAMLSA-N Lys-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ABHIXYDMILIUKV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN ITWQLSZTLBKWJM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- IPTUBUUIFRZMJK-ACRUOGEOSA-N Lys-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IPTUBUUIFRZMJK-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 3
- SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N Met-Leu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- AWGBEIYZPAXXSX-RWMBFGLXSA-N Met-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N AWGBEIYZPAXXSX-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 3
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BJEYSVHMGIJORT-NHCYSSNCSA-N Phe-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BJEYSVHMGIJORT-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- CDQCFGOQNYOICK-IHRRRGAJSA-N Phe-Glu-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CDQCFGOQNYOICK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 3
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- OCWWJBZQXGYQCA-DCAQKATOSA-N Ser-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O OCWWJBZQXGYQCA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N 0.000 description 3
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 3
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 description 3
- XWYUBUYQMOUFRQ-IFFSRLJSSA-N Val-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O XWYUBUYQMOUFRQ-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 3
- DHINLYMWMXQGMQ-IHRRRGAJSA-N Val-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 DHINLYMWMXQGMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N Val-Ile-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000011977 dual antiplatelet therapy Methods 0.000 description 3
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 3
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 108010030617 leucyl-phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 3
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 3
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- SICITCLFXRGKJW-IIZANFQQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 SICITCLFXRGKJW-IIZANFQQSA-N 0.000 description 2
- MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N Ala-Asp-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MKZCBYZBCINNJN-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- DAEFQZCYZKRTLR-ZLUOBGJFSA-N Ala-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DAEFQZCYZKRTLR-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- JDIQCVUDDFENPU-ZKWXMUAHSA-N Ala-His-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CNC=N1 JDIQCVUDDFENPU-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N Ala-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CN=CN1 KMGOBAQSCKTBGD-DLOVCJGASA-N 0.000 description 2
- CFPQUJZTLUQUTJ-HTFCKZLJSA-N Ala-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](C)N CFPQUJZTLUQUTJ-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 2
- QPBSRMDNJOTFAL-AICCOOGYSA-N Ala-Leu-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QPBSRMDNJOTFAL-AICCOOGYSA-N 0.000 description 2
- IAUSCRHURCZUJP-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IAUSCRHURCZUJP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XUCHENWTTBFODJ-FXQIFTODSA-N Ala-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XUCHENWTTBFODJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- CQJHFKKGZXKZBC-BPNCWPANSA-N Ala-Pro-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CQJHFKKGZXKZBC-BPNCWPANSA-N 0.000 description 2
- RYRQZJVFDVWURI-SRVKXCTJSA-N Arg-Gln-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N RYRQZJVFDVWURI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- VNFWDYWTSHFRRG-SRVKXCTJSA-N Arg-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VNFWDYWTSHFRRG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- KRQSPVKUISQQFS-FJXKBIBVSA-N Arg-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KRQSPVKUISQQFS-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 2
- GXXWTNKNFFKTJB-NAKRPEOUSA-N Arg-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXXWTNKNFFKTJB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- UZGFHWIJWPUPOH-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UZGFHWIJWPUPOH-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- ICRHGPYYXMWHIE-LPEHRKFASA-N Arg-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O ICRHGPYYXMWHIE-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- QHUOOCKNNURZSL-IHRRRGAJSA-N Arg-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QHUOOCKNNURZSL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- JRVABKHPWDRUJF-UBHSHLNASA-N Asn-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JRVABKHPWDRUJF-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- FTSAJSADJCMDHH-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N FTSAJSADJCMDHH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MJIJBEYEHBKTIM-BYULHYEWSA-N Asn-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MJIJBEYEHBKTIM-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O RGKKALNPOYURGE-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- IXIWEFWRKIUMQX-DCAQKATOSA-N Asp-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O IXIWEFWRKIUMQX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- RDRMWJBLOSRRAW-BYULHYEWSA-N Asp-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O RDRMWJBLOSRRAW-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- SVFOIXMRMLROHO-SRVKXCTJSA-N Asp-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SVFOIXMRMLROHO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- RRKCPMGSRIDLNC-AVGNSLFASA-N Asp-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RRKCPMGSRIDLNC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N Asp-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIRHEUMYXXLCBF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- LBFYTUPYYZENIR-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N LBFYTUPYYZENIR-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- YFSLJHLQOALGSY-ZPFDUUQYSA-N Asp-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YFSLJHLQOALGSY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- RRUWMFBLFLUZSI-LPEHRKFASA-N Asp-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RRUWMFBLFLUZSI-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N Asp-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GWIJZUVQVDJHDI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WMLFFCRUSPNENW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- QSFHZPQUAAQHAQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QSFHZPQUAAQHAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- HRVQDZOWMLFAOD-BIIVOSGPSA-N Asp-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O HRVQDZOWMLFAOD-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O QOJJMJKTMKNFEF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- -1 Clontech) Chemical compound 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- DCJNIJAWIRPPBB-CIUDSAMLSA-N Cys-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N DCJNIJAWIRPPBB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MBPKYKSYUAPLMY-DCAQKATOSA-N Cys-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MBPKYKSYUAPLMY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- XXDLUZLKHOVPNW-IHRRRGAJSA-N Cys-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)O XXDLUZLKHOVPNW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N Cys-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WDQXKVCQXRNOSI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- KXUKWRVYDYIPSQ-CIUDSAMLSA-N Cys-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXUKWRVYDYIPSQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- UCSXXFRXHGUXCQ-SRVKXCTJSA-N Cys-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N UCSXXFRXHGUXCQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- WZJLBUPPZRZNTO-CIUDSAMLSA-N Cys-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)N WZJLBUPPZRZNTO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- DTCCMDYODDPHBG-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Cys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DTCCMDYODDPHBG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- WOACHWLUOFZLGJ-GUBZILKMSA-N Gln-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O WOACHWLUOFZLGJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- INFBPLSHYFALDE-ACZMJKKPSA-N Gln-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O INFBPLSHYFALDE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- ZPDVKYLJTOFQJV-WDSKDSINSA-N Gln-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O ZPDVKYLJTOFQJV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- CRRFJBGUGNNOCS-PEFMBERDSA-N Gln-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CRRFJBGUGNNOCS-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- DWDBJWAXPXXYLP-SRVKXCTJSA-N Gln-His-Arg Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N DWDBJWAXPXXYLP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- SHAUZYVSXAMYAZ-JYJNAYRXSA-N Gln-Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N SHAUZYVSXAMYAZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- MLSKFHLRFVGNLL-WDCWCFNPSA-N Gln-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MLSKFHLRFVGNLL-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- DFRYZTUPVZNRLG-KKUMJFAQSA-N Gln-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N DFRYZTUPVZNRLG-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- FLQAKQOBSPFGKG-CIUDSAMLSA-N Glu-Cys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N FLQAKQOBSPFGKG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- OXEMJGCAJFFREE-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXEMJGCAJFFREE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- NWOUBJNMZDDGDT-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 NWOUBJNMZDDGDT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N Glu-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 2
- KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N Glu-Phe-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N Glu-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- CBWKURKPYSLMJV-SOUVJXGZSA-N Glu-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O CBWKURKPYSLMJV-SOUVJXGZSA-N 0.000 description 2
- WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N Glu-Ser-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N WIKMTDVSCUJIPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VNCNWQPIQYAMAK-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VNCNWQPIQYAMAK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- HAGKYCXGTRUUFI-RYUDHWBXSA-N Glu-Tyr-Gly Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O HAGKYCXGTRUUFI-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- DTRUBYPMMVPQPD-YUMQZZPRSA-N Gly-Gln-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O DTRUBYPMMVPQPD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- FIQQRCFQXGLOSZ-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FIQQRCFQXGLOSZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- UYPPAMNTTMJHJW-KCTSRDHCSA-N Gly-Ile-Trp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O UYPPAMNTTMJHJW-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 2
- YSDLIYZLOTZZNP-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN YSDLIYZLOTZZNP-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N Gly-Leu-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N Gly-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)CN)O WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- JBJNKUOMNZGQIM-PYJNHQTQSA-N His-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JBJNKUOMNZGQIM-PYJNHQTQSA-N 0.000 description 2
- NWGXCPUKPVISSJ-AVGNSLFASA-N His-Gln-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N NWGXCPUKPVISSJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- VFBZWZXKCVBTJR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N VFBZWZXKCVBTJR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N His-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LVWIJITYHRZHBO-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- SJIGTGZVQGLMGG-NAKRPEOUSA-N Ile-Cys-Arg Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)O SJIGTGZVQGLMGG-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- LGMUPVWZEYYUMU-YVNDNENWSA-N Ile-Glu-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N LGMUPVWZEYYUMU-YVNDNENWSA-N 0.000 description 2
- UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- JTBFQNHKNRZJDS-SYWGBEHUSA-N Ile-Trp-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N JTBFQNHKNRZJDS-SYWGBEHUSA-N 0.000 description 2
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 2
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- GRZSCTXVCDUIPO-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GRZSCTXVCDUIPO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- BPANDPNDMJHFEV-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BPANDPNDMJHFEV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N Leu-Asp-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- XVSJMWYYLHPDKY-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O XVSJMWYYLHPDKY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- ZYLJULGXQDNXDK-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZYLJULGXQDNXDK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N Leu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CN=CN1 CSFVADKICPDRRF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- QLDHBYRUNQZIJQ-DKIMLUQUSA-N Leu-Ile-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QLDHBYRUNQZIJQ-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 2
- KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- FYPWFNKQVVEELI-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 FYPWFNKQVVEELI-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C QWWPYKKLXWOITQ-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- QQXJROOJCMIHIV-AVGNSLFASA-N Leu-Val-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O QQXJROOJCMIHIV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CCCN=C(N)N NQCJGQHHYZNUDK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- HKCCVDWHHTVVPN-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HKCCVDWHHTVVPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- ZAWOJFFMBANLGE-CIUDSAMLSA-N Lys-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZAWOJFFMBANLGE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SSYOBDBNBQBSQE-SRVKXCTJSA-N Lys-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SSYOBDBNBQBSQE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- BYEBKXRNDLTGFW-CIUDSAMLSA-N Lys-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BYEBKXRNDLTGFW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- XNKDCYABMBBEKN-IUCAKERBSA-N Lys-Gly-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XNKDCYABMBBEKN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RBEATVHTWHTHTJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- GZGWILAQHOVXTD-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GZGWILAQHOVXTD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- LUTDBHBIHHREDC-IHRRRGAJSA-N Lys-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O LUTDBHBIHHREDC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000579835 Merops Species 0.000 description 2
- VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- DLAFCQWUMFMZSN-GUBZILKMSA-N Met-Arg-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CCCN=C(N)N DLAFCQWUMFMZSN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- WPTDJKDGICUFCP-XUXIUFHCSA-N Met-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N WPTDJKDGICUFCP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 2
- HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N Met-Leu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O HZVXPUHLTZRQEL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- KMSMNUFBNCHMII-IHRRRGAJSA-N Met-Leu-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN KMSMNUFBNCHMII-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- LQTGGXSOMDSWTQ-UNQGMJICSA-N Met-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCSC)N)O LQTGGXSOMDSWTQ-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- YLDSJJOGQNEQJK-AVGNSLFASA-N Met-Pro-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YLDSJJOGQNEQJK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 101100068676 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) gln-1 gene Proteins 0.000 description 2
- OYQBFWWQSVIHBN-FHWLQOOXSA-N Phe-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O OYQBFWWQSVIHBN-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 2
- YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- MMJJFXWMCMJMQA-STQMWFEESA-N Phe-Pro-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=CC=C1 MMJJFXWMCMJMQA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- RAGOJJCBGXARPO-XVSYOHENSA-N Phe-Thr-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RAGOJJCBGXARPO-XVSYOHENSA-N 0.000 description 2
- SHUFSZDAIPLZLF-BEAPCOKYSA-N Phe-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O SHUFSZDAIPLZLF-BEAPCOKYSA-N 0.000 description 2
- KUSYCSMTTHSZOA-DZKIICNBSA-N Phe-Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N KUSYCSMTTHSZOA-DZKIICNBSA-N 0.000 description 2
- DRVIASBABBMZTF-GUBZILKMSA-N Pro-Ala-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DRVIASBABBMZTF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N Pro-Glu-Phe Chemical compound N([C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- FEPSEIDIPBMIOS-QXEWZRGKSA-N Pro-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 FEPSEIDIPBMIOS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- XQSREVQDGCPFRJ-STQMWFEESA-N Pro-Gly-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XQSREVQDGCPFRJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- GBRUQFBAJOKCTF-DCAQKATOSA-N Pro-His-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GBRUQFBAJOKCTF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N Pro-Leu-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- YAZNFQUKPUASKB-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O YAZNFQUKPUASKB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N Pro-Pro-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QUBVFEANYYWBTM-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- LZHHZYDPMZEMRX-STQMWFEESA-N Pro-Tyr-Gly Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O LZHHZYDPMZEMRX-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N Ser-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N Ser-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 2
- BEAFYHFQTOTVFS-VGDYDELISA-N Ser-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BEAFYHFQTOTVFS-VGDYDELISA-N 0.000 description 2
- GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- GVMUJUPXFQFBBZ-GUBZILKMSA-N Ser-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GVMUJUPXFQFBBZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- NMZXJDSKEGFDLJ-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O NMZXJDSKEGFDLJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- GYDFRTRSSXOZCR-ACZMJKKPSA-N Ser-Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GYDFRTRSSXOZCR-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 2
- BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N Ser-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEBVVQPDSHHWQL-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- CAGTXGDOIFXLPC-KZVJFYERSA-N Thr-Arg-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CCCN=C(N)N CAGTXGDOIFXLPC-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N Thr-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 2
- VXMHQKHDKCATDV-VEVYYDQMSA-N Thr-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VXMHQKHDKCATDV-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- APIQKJYZDWVOCE-VEVYYDQMSA-N Thr-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O APIQKJYZDWVOCE-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 2
- ZUUDNCOCILSYAM-KKHAAJSZSA-N Thr-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZUUDNCOCILSYAM-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 2
- BNGDYRRHRGOPHX-IFFSRLJSSA-N Thr-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O BNGDYRRHRGOPHX-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 2
- AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- JAJOFWABAUKAEJ-QTKMDUPCSA-N Thr-Pro-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O JAJOFWABAUKAEJ-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 2
- WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N Thr-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- VZBWRZGNEPBRDE-HZUKXOBISA-N Trp-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N VZBWRZGNEPBRDE-HZUKXOBISA-N 0.000 description 2
- JWGRSJCYCXEIKH-QEJZJMRPSA-N Trp-Glu-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JWGRSJCYCXEIKH-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- BYSKNUASOAGJSS-NQCBNZPSSA-N Trp-Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N BYSKNUASOAGJSS-NQCBNZPSSA-N 0.000 description 2
- CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N Tyr-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N 0.000 description 2
- HIINQLBHPIQYHN-JTQLQIEISA-N Tyr-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 HIINQLBHPIQYHN-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- CWVHKVVKAQIJKY-ACRUOGEOSA-N Tyr-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N CWVHKVVKAQIJKY-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- SYFHQHYTNCQCCN-MELADBBJSA-N Tyr-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O SYFHQHYTNCQCCN-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OGNMURQZFMHFFD-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N OGNMURQZFMHFFD-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- YCMXFKWYJFZFKS-LAEOZQHASA-N Val-Gln-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N YCMXFKWYJFZFKS-LAEOZQHASA-N 0.000 description 2
- OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N Val-Glu-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- LAYSXAOGWHKNED-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LAYSXAOGWHKNED-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- APQIVBCUIUDSMB-OSUNSFLBSA-N Val-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N APQIVBCUIUDSMB-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- GBIUHAYJGWVNLN-AEJSXWLSSA-N Val-Ser-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N GBIUHAYJGWVNLN-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 2
- DLRZGNXCXUGIDG-KKHAAJSZSA-N Val-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O DLRZGNXCXUGIDG-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 2
- WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N Val-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010090037 glycyl-alanyl-isoleucine Proteins 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 2
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N (2s)-1-[2-[[(2s)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1 BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 102100040055 Amyloid beta precursor like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100040038 Amyloid beta precursor like protein 2 Human genes 0.000 description 1
- YFWTXMRJJDNTLM-LSJOCFKGSA-N Arg-Ala-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N YFWTXMRJJDNTLM-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- UDSVWSUXKYXSTR-QWRGUYRKSA-N Asn-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O UDSVWSUXKYXSTR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- FHCRKXCTKSHNOE-QEJZJMRPSA-N Asn-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N FHCRKXCTKSHNOE-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SARSTIZOZFBDOM-FXQIFTODSA-N Asp-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SARSTIZOZFBDOM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 230000007466 Aβ secretion Effects 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100069049 Caenorhabditis elegans goa-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 244000132059 Carica parviflora Species 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 102000010170 Death domains Human genes 0.000 description 1
- 108050001718 Death domains Proteins 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091005941 EBFP Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010001515 Galectin 4 Proteins 0.000 description 1
- QYTKAVBFRUGYAU-ACZMJKKPSA-N Gln-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QYTKAVBFRUGYAU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- NMYFPKCIGUJMIK-GUBZILKMSA-N Gln-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N NMYFPKCIGUJMIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PBEQPAZRHDVJQI-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PBEQPAZRHDVJQI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- BDISFWMLMNBTGP-NUMRIWBASA-N Glu-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BDISFWMLMNBTGP-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- GWCRIHNSVMOBEQ-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GWCRIHNSVMOBEQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QSTLUOIOYLYLLF-WDSKDSINSA-N Gly-Asp-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QSTLUOIOYLYLLF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- NTXIJPDAHXSHNL-ONGXEEELSA-N His-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NTXIJPDAHXSHNL-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000890407 Homo sapiens Amyloid beta precursor like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000890401 Homo sapiens Amyloid beta precursor like protein 2 Proteins 0.000 description 1
- IDAHFEPYTJJZFD-PEFMBERDSA-N Ile-Asp-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N IDAHFEPYTJJZFD-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- DLEBSGAVWRPTIX-PEDHHIEDSA-N Ile-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC DLEBSGAVWRPTIX-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DCGXHWINSHEPIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N DCGXHWINSHEPIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- IRRZDAIFYHNIIN-JYJNAYRXSA-N Lys-Gln-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IRRZDAIFYHNIIN-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N Lys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- PYFNONMJYNJENN-AVGNSLFASA-N Lys-Lys-Gln Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N PYFNONMJYNJENN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WKUXWMWQTOYTFI-SRVKXCTJSA-N Lys-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N WKUXWMWQTOYTFI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- TZLYIHDABYBOCJ-FXQIFTODSA-N Met-Asp-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O TZLYIHDABYBOCJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MYKLINMAGAIRPJ-CIUDSAMLSA-N Met-Gln-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MYKLINMAGAIRPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JYCQGAGDJQYEDB-GUBZILKMSA-N Met-Gln-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JYCQGAGDJQYEDB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N Met-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- VVAWNPIOYXAMAL-KJEVXHAQSA-N Pro-Thr-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VVAWNPIOYXAMAL-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100250396 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) RPL28 gene Proteins 0.000 description 1
- BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N Ser-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N Thr-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WTMPKZWHRCMMMT-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 description 1
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 1
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 1
- LOOCQRRBKZTPKO-AVGNSLFASA-N Tyr-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 LOOCQRRBKZTPKO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- UEHRGZCNLSWGHK-DLOVCJGASA-N Val-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UEHRGZCNLSWGHK-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N Val-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O DVLWZWNAQUBZBC-ZNSHCXBVSA-N 0.000 description 1
- NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N Val-Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 101100527649 Wickerhamomyces ciferrii (strain ATCC 14091 / BCRC 22168 / CBS 111 / JCM 3599 / NBRC 0793 / NRRL Y-1031 F-60-10) RPL44 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 230000036953 caspase-like activity Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 101150055276 ced-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150112018 ced-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150039936 ced-9 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 239000003540 gamma secretase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000012750 in vivo screening Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000008011 inorganic excipient Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003715 limbic system Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 101150012912 mec-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000008012 organic excipient Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108010014614 prolyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 101150114748 unc-119 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/61—Fusion polypeptide containing an enzyme fusion for detection (lacZ, luciferase)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/71—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing domain for transcriptional activaation, e.g. VP16
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
- C07K2319/81—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor containing a Zn-finger domain for DNA binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
본 발명은 γ-세크레타제 활성의 개선된 측정 방법, 당해 방법의 개개의 성분, 및 당해 방법의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 γ-세크레타제 활성의 측정, 및 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 검출을 위한 개선된 방법에 관한 것이고; 당해 방법의 특정 태양은 한편으로는 γ-세크레타제, 또는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA의 동정 방법에 관한 것이고, 다른 한편으로는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 억제할 수 있는 물질의 동정 방법에 관한 것이다. 이러한 물질은, 이들이 예컨대 알츠하이머 질환의 치료를 위한, 예를 들어 약제학적 활성 화합물로서 사용될 수 있기 때문에, 특히 중요하다.
γ-세크레타제, 스크리닝, 알츠하이머, γ-세크레타제의 아단위 단백질, γ-세크레타제-유사 프로테인아제
Description
본 발명은 γ-세크레타제의 활성 측정방법, 당해 방법 중의 각각의 성분 및 당해 방법의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 WO 00/34511 A2의 교시를 토대로 하므로, WO 00/34511 A2가 본원에 참조로 인용된다.
알츠하이머 질환(AD)은 대뇌변연계와 대뇌 피질 내의 뉴런의 대량 손실에 의해 세포 수준에서 동반되는 뇌의 신경퇴행성 장애이다. 당해 질환에 걸린 뇌 부위에서, 단백질 침착물, 소위 플라크가 분자 수준으로 검출될 수 있는데, 이는 알츠하이머 질환의 본질적인 특징이다. 이들 플라크에서 가장 빈번하게 발생하는 단백질은 Aβ-펩티드로 지칭되는 40개 내지 42개 아미노산의 펩티드이다. 이러한 Aβ-펩티드는 695개 내지 770개 아미노산의 상당히 보다 큰 단백질인 소위 아밀로이드 전구체 단백질(APP)의 절단 생성물이다.
APP는 지질 이층을 맨 먼저 횡단하는 내재성 막관통(integral transmembrane) 단백질이다. 당해 단백질 중의 월등하게 가장 큰 부분은 세포외에 존재하며, 보다 짧은 C-말단 영역은 시토졸 내로 지시된다(도 1). Aβ-펩티드는 도 1에서 암회색으로 도시된다. Aβ-펩티드의 약 2/3는 세포외 영역으로부터 기원하고, 약 1/3은 APP의 막관통 도메인으로부터 기원한다.
막-계 APP 이외에, APP의 큰 엑토도메인(ectodomain)을 구성하며 APPsec("분비된 APP")로 지칭되는, 아밀로이드 전구체 단백질의 분비된 형태가 검출될 수 있다. APPsec는 α-세크레타제에 의해 초래되는 단백질 분해성 절단에 의해 APP로부터 형성된다. 단백질 분해성 절단은 Aβ-펩티드의 아미노산 서열 내(Aβ-펩티드의 아미노산 잔기 16번 이후)에 존재하는 APP의 아미노산 서열 부위에서 발생한다. 따라서, α-세크레타제에 의한 APP의 단백질 분해는 Aβ-펩티드의 형성을 차단한다.
따라서, Aβ-펩티드는 오로지 다른 프로세싱 경로에서 APP로부터 형성될 수 있다. APP 내에서 Aβ-펩티드의 N-말단을 절단하는, β-세크레타제로서 지칭되는 하나의 프로테아제와 Aβ-펩티드의 C-말단을 유리시키는, γ-세크레타제로서 지칭되는 제2의 프로테아제인 2개의 추가의 프로테아제가 이러한 프로세싱 경로에 관련이 있다고 추정된다[참조: Kang, J. et al., Nature, 325, 733](도 1).
세크레타제(α-세크레타제, β-세크레타제, γ-세크레타제)에 관하여 알아보는 것은 특히 알츠하이머 질환의 연구와 관련하여, 예를 들면 세크레타제 조절 및 Aβ-펩티드 형성과 관련된 세크레타제 또는 인자들의 동정에 있어서 매우 중요하다[참조 문헌: Wolfe, M.S. (2001), J. Med. Chem., 44(13), 2039-2060]. β-세크레타제, 및 특히 γ-세크레타제의 억제는 Aβ-생성을 감소시킬 수 있으며, 다른 한편으로는 α-세크레타제의 활성화가 APPsec 형태의 APP의 프로세싱을 증가시켜, 동시에 Aβ-펩티드의 형성을 저하시킬 수 있다. 이러한 연구 과정에서 발견된 유전자전이된(transgenic) 씨. 엘레간스(C. elegans)는 독일 특허원 제198 49 073 A1호에 기술되어 있다.
Aβ-펩티드가 알츠하이머 질환의 발생에 있어서 결정적인 인자라는 사실의 징후가 다수 존재한다. 특히, 세포 배양에 있어서의 Aβ-원섬유의 신경독성이 주장되고 있다[참조 문헌: Yankner, B.A. et al., (1990) Proc Natl Acad Sci USA, 87, 9020]. APP를 암호화하는 유전자가 추가의 복사체에 존재하는 다운 증후군에 걸린 환자에서는, 30세에서도 알츠하이머 질환의 신경병리학적 특성이 또한 나타난다. 이 경우에, APP의 과발현은 Aβ-펩티드로의 전환의 증가에 따른 것으로 추정된다[참조 문헌: Rumble, B. et al., (1989), N. Engl. J. Med., 320, 1446].
아마도, Aβ-펩티드의 주요 역할의 가장 강력한 징후는 알츠하이머 질환의 가족성 형태이다. 여기서, 돌연변이가 β-세크레타제 및 γ-세크레타제 절단 부위 주변의 APP 유전자, 또는 세포 배양에서 Aβ 펩타이드 생산성을 상당히 증가시키는 2개의 추가의 AD-관련 유전자(프리세닐린)에서 발견된다[참조 문헌: Scheuner, D. et al., (1996), Nature Medicine, 2, 864].
APP가 우선 이의 프로세싱 동안 β-세크레타제에 의해 Aβ-펩티드로 절단되고, 이어서 γ-세크레타제에 대한 기질로서 작용한다는 사실의 다수의 징후가 존재한다. 따라서, γ-세크레타제는 Aβ-펩티드의 형성에 있어서 중요한 역할을 한다[참조 문헌: Wolfe, M.S. (2001), loc.cit]
일반적으로, 소량의 APP만이 Aβ-펩티드로 전환되기 때문에, Aβ-펩티드의 검출은 어렵다[참조 문헌: Simons M, et al., Neurosci (1996) 1;16(3):899-908]. 게다가, Aβ-펩티드는 약 4kDa의 매우 작은 단편이며, 이의 소수성으로 인해, 자가 응집되는 경향이 크다. 따라서, Aβ-펩티드는 생리학적 조건하에 쉽게 침전되며[참조: Hilbich, C. et al., (1991) J. Mol. Biol., 218, 149], 이의 침전된 형태는 검출에 이용될 수 없다.
진핵 세포에서의 Aβ-펩티드의 검출은 면역생물학적 방법, 예를 들어, ELISA, 면역침전법 및 웨스턴 블롯팅법에 의해 수행된다[참조: Suzuki, N. et al., Science 1994, 27, 264(5163) 1336; Haass, C. et al., (1992) Nature, 359, 322]. 추가로, PS1(프리세닐린 1)을 함유하는 정제된 막 분획으로 부터 γ-세크레타제 활성을 측정하는 시험관내 검정이 문헌[Wolfe et al. 1999]에 기술되어 있다. 이들 방법은 적합한 항체와의 항온배양 단계, 적합한 세포 배양물 또는 모델 생물체(특히 씨. 엘레간스)로부터 수득된 세포를 파괴하는 단계를 포함하기 때문에 매우 시간 소모적이다. 상기 방법은, γ-세크레타제의 활성을 특이적으로 억제하거나 감소시키는 화합물을 동정하기 위한, 예를 들어 고 처리량 스크리닝을 위한 자동화 검정 시스템에는 적합하지 않다. 부분적으로, 이러한 이유는, γ-세크레타제의 활성이 지금까지 복합 막 지질 환경에서만 활성인 단백질의 어셈블리에 의존하기 때문이다.[참조 문헌: Mattson, (2003) Nature 422, 385].
추가로, γ-세크레타제의 활성은, γ-세크레타제 활성의 측정 방법 및 Aβ펩티드의 검출에 의한 γ-세크레타제의 검출 방법에 대하여 기술하고 있는 WO 00/34511 A2의 교시에 따라 증명될 수 있다. WO 00/34511 A2의 방법은, γ-세크레타제의 효소 표적 부위로서의 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML (서열 번호 1), 5'-말단의 시그날 펩티드 (SP), 프로모터, 및 경우에 따라, 당해 융합 단백질의 발현을 위하여 도입된 추가의 암호화 및/또는 비-암호화 뉴클레오티드 서열을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자(transgene)를 이용한다.
융합 단백질이 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 특이적으로 절단되는 경우에, 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV (서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질이 형성되고, 아미노산 서열 VIVITLVML (서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질이 형성된다. 후속적으로, 상기 제1 및/제2 부분 단백질은, 예를 들어 적합한 리포터, 예를 들어 제1 및/또는 제2 부분 단백질에 결합된 전사 활성화인자의 유리에 의해 활성화된 리포터 유전자를 사용하여 검출한다.
Aβ 펩티드의 검출에 따른 공지된 문제로 인해, 예를 들어 발명의 검정에서 시그날/노이즈 비를 개선하기 위하여 배경수준 시그날을 감소시키고/거나 시그날 특이성을 증가시키는 방법에 의해 WO 00/34511 A2의 방법을 개선하는 것이 본 발명의 과제이다.
놀랍게도, 비-특이적 프로테아제 활성에 기인한 제1 및/또는 제2 부분 단백질의 비-특이적 유리를 감소시킴으로써 WO 00/34511 A2에 따른 방법에서 시그날/노이즈 비를 개선할 수 있다. 이는, 예를 들어 WO 00/34511 A2의 융합 단백질에서, γ-세크레타제 절단 부위 이외의 프로테아제 절단 부위 및/또는 내재화 서열의 임의의 기타 서열/모티프를 제거/회피함으로써 달성된다. 따라서, 본 발명은 γ-세크레타제 활성의 측정 및 γ-세크레타제 활성을 가진 단백질의 검출의 개선된 방법에 관한 것이다.
상기 방법의 특정 태양은, γ-세크레타제의 동정 방법, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA의 동정 방법, 및 γ-세크레타제 활성을 가진 단백질의 활성을 조절하는, 예컨대 감소시키거나 억제하는 약제학적 활성 화합물의 동정 방법에 관한 것이다. 이러한 물질은, 약제학적으로 허용되고 알츠하이머 질환의 치료에 적합한 경우에, 특히 중요하다.
본 발명은
1.
(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,
(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,
(c) 프로모터 및
(d) 경우에 따라, 추가의 암호화 및/또는 비암호화 뉴클레오티드 서열
을 함유하고 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자(transgene)를 사용하며,
2. 상기 전이유전자를 세포 내에 도입하여 융합 단백질을 발현시키고,
3. 상기 융합 단백질을 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단하여, 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질을 형성시키고,
4. 상기 제1 부분 단백질 및/또는 제2 부분 단백질을 검출하며,
이때, 서열번호 1 이외에는, 상기 융합 단백질이 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드를 함유하지 않는,
γ-세크레타제를 검출하는 방법에 관한 것이다.
바람직하게는, 상기 방법에서 상기 융합 단백질은, 서열번호 1 이외에는, 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드(즉, 서열번호 1 이외의 임의의 추가의 펩티드)를 함유하지 않는다.
본 발명은
1.
(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,
(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,
(c) 프로모터 및
(d) 경우에 따라, 추가의 암호화 및/또는 비-암호화 뉴클레오티드 서열
을 함유하고 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자를 제조/사용하고,
2. 상기 전이유전자를 세포 내에 도입하여 융합 단백질을 발현시키고,
3. 상기 융합 단백질을 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단하여, 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질을 형성시키고,
4. 상기 제2 부분 단백질의 양을 측정하고 γ-세크레타제 활성을 형성된 제2 부분 단백질의 양으로부터 측정하며,
이때, 서열번호 1 이외에는, 상기 융합 단백질이 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드를 함유하지 않는,
γ-세크레타제의 활성을 검출하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법 ("Aβ-펩티드 스크리닝 검정" 및 "γ-세크레타제 검정")은 γ-세크레타제(γ-세크레타제 활성을 가진 단백질) 또는 γ-세크레타제 활성의 생체 내 검출에 적합하며, 예를 들어, 고처리량 스크리닝{high throughput screening("HTS")}에서도 보편적으로 사용가능하다. 당해 방법들은 상기한 종래 검출 방법의 단점을 갖지 않으며, 특히 수고스러운 분리 및 검출 단계가 필요하지 않으며, γ-세크레타제 활성에 대한 특이적 시그날이 현저히 개선된다. 보다 특이적인 시그날은, 배경수준 시그날 및 회피를 각각 상당히 감소시키고, 비특이적 프로테아제의 작용으로 인한 제1 및 제2 부분 단백질의 유리를 감소시킴으로써 성취된다.
본 발명에 따른 방법의 필수 요소는, γ-세크레타제에 의해 2개의 단편으로 절단되는 C-말단 APP 단편, 즉 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질이며, 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질은 세포의 세포질로 확산된다(도 2). 이러한 제2 부분 단백질은, 리포터 유전자의 도움으로 세포의 세포질 내에서, 예를 들어 전사 활성화 인자(TAF)와의 융합 단백질로서 용이하게 검출될 수 있으며; 이는 γ-세크레타제의 존재 또는 γ-세크레타제 활성의 정량을 위한 검출 수단으로서 작용한다. γ-세크레타제 절단 부위는 APP의 막관통 도메인 내에 위치한다[참조 문헌: Kang, J. et al., (1987) Nature, 325, 733]. APP 막관통 도메인은 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV40 IA42 TVIVITLVML을 함유한다. γ-세크레타제는 V40, A42 또는 T43 뒤에서 절단한다. 세포 배양 중에 진핵 세포에 의해 생성된 Aβ-펩티드는 배지의 상청액으로 분비된다.
적합한 리포터 시스템(예: TAF 및 상응하는 리포터 유전자)의 보조하에, 제2 부분 단백질의 유리는 진핵 세포 내에서 검출할 수 있는 리포터 단백질의 발현을 활성화시킬 수 있다. 리포터 단백질의 검출에 의해, γ-세크레타제 절단이 APP 내에서 일어난다는 것을 입증할 수 있다. 결과로서, γ-세크레타제 또는 γ-세크레타제 활성을 정성적으로 및/또는 정량적으로 측정할 수 있다.
당해 방법의 구성 요소는 다음과 같이 보다 상세하게 특징이 규정될 수 있다:
제1 뉴클레오티드 서열은 서열번호 1을 포함하는 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 또는 이의 부분을 암호화하며, 이때 당해 APP 또는 이의 부분은 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 어떠한 추가적 펩티드 모티프도 함유하지 않는다. 바람직하게는, 상기 제1 뉴클레오티드 서열은 서열번호 1을 포함하는 아미노산 서열, 예를 들어 서열번호 6 또는 서열번호 14를 함유하는 단백질을 암호화한다. 추가의 태양에서, 제1 뉴클레오티드 서열은, 예를 들어 서열번호 1 이외에 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 펩티드 모티프의 암호화를 회피하기 위하여, 예를 들어 부위-지정된 돌연변이유발에 의해 수득가능한 절두된(truncated) APP 또는 변형된 APP를 암호화한다. 또 다른 태양에서, 상기 제1 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 상기 APP 또는 이의 부분은 사람, 마우스의 APP로 부터 유래된 단백질 (예: APLP1 또는 APLP2)이다.
제2 뉴클레오티드 서열은 바람직하게는 임의의 적당한 시그날 펩티드("SP")를 암호화한다. 시그날 펩티드는, 예를 들어, 서열번호 5에 따른 SP(사람 APP의 SP), 서열번호 12에 따른 SP(효모 SUC2의 SP, "SP2"), 또는 서열번호 13에 따른 SP(BM40의 SP, "SP3"), 또는 예를 들어 문헌[Heijne et al., Nucl. Acids Res. (1986), 14(11) 4683-4690]에 따른 공지된 기타 시그날 펩티드를 함유한다.
프로모터로서, 임의의 적당한 조절가능한 프로모터 또는 구성적(constitutive) 프로모터를 사용할 수 있다. 당해 프로모터는, 예를 들어, 포유 동물 세포, 씨. 엘레간스, 효모 또는 드로소필라(Drosophila) 내에서의 발현에 적합할 수 있다. 포유 동물의 세포에 적합한 프로모터는, 예를 들어, CMV, HSV TK, SV40, LTR (제조원은 모두 Clontech, Heidelberg, Germany), 및 RSV (예: InvitrogenTM life technologies, NV Leek, Netherlands)이다. 씨. 엘레간스용으로 사용할 수 있는 프로모터는, 예를 들어, unc-119, unc-54, hsp16-2, goa-1 및 sel-12이다. 효모 내에서의 발현용으로서는, 프로모터 ADH1(구성적)[참조: Vlckova et al. (1994) Gene, 25(5), 472-4], GAL1(조건부 유도성)[참조: Selleck et al. (1987) Nature 325, 173-7], MET3(조건부)[참조: Cherest et al. (1987) Mol Gen Genet 210, 307-13] 및 MET25[비교 예: Kerjan et al. (1986) Nucleic Acids Res. 14(20), 7861-71]가 적합하다. 드로소필라에서는, 예를 들어, 프로모터 MT(메탈로티오닌), Ac5 또는 Ds47 (제조원은 모두 InvitrogenTM life technologies)을 사용할 수 있다.
바람직하게는, 진핵 세포, 예를 들어, 사람 세포 또는 비-사람 세포, 예컨대, 원숭이, 햄스터, 마우스, 드로소필라, 제브라피쉬(zebrafish) 또는 효모가 당해 방법에서 사용된다. 예를 들면, HeLa, HEK293, H4, SH-SY5Y, H9, Cos, CHO, N2A, SL-2 또는 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 세포가 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 태양에서, 씨. 엘레간스 세포가 사용된다. 당해 세포는 유전자전이된(transgenic) 비-사람 동물의 구성분일 수 있다. 특정 태양에서, 유전자전이된 세포가 유전자전이된 씨. 엘레간스의 구성분일 수 있다. 특히, 본 발명은, 예를 들어, 균주 MaV203 (InvitrogenTM Life Technologies, Rockville, MD, USA) 또는 EGY 48 (OriGene Technologies, Inc. Rockville, MD, USA)로부터의 효모 세포를 사용하는 방법에 관한 것이다.
전이유전자(transgene)는 융합 단백질을 암호화하며, 이는 제1 뉴클레오티드 서열과 제2 뉴클레오티드 서열 및, 경우에 따라 추가의 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되는 부분 단백질로 구성된다. 따라서, 융합 단백질은 제1 부분 단백질과 제2 부분 단백질 및, 경우에 따라 추가의 부분 단백질을 함유한다. 그러나, 융합 단백질이, 서열번호 1를 제외하고, 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 어떠한 펩티드 모티프도 함유하지 않는 것이 중요하다. 공지된 프로테아제 절단 부위는 프로테아제 데이타베이스, 예를 들어 MEROPS (Rawlings et al. (2002) MEROPS: the protease database. Nucleic Acids Res. 30, 343-346)로 부터 당업자에게 공지되어있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 융합 단백질은, 카스파제 절단 부위인 프로테아제 절단 부위, 예를 들어 (IVL)ExD, 특히, VEVA, VEVD를 함유하지 않으며, 또 다른 태양에서, 본 발명에 따른 융합 단백질은 APP 내재화에 대한 시그날인 세포내이입 또는 세포외유출에 대한 시그날 펩티드, 예를 들어 NpxY 또는 Di-루신, 특히, NPTY를 함유하지 않는다.
구체적 태양에서, 융합 단백질은 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는다. 서열번호 1 이외에, 상기 융합 단백질은 세포내이입 또는 세포외유출에 대한 시그날 (예를 들어, APP 내재화 시그날) 및/또는 프로테아제 (예: 카스파제) 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 어떠한 (하나 이상의) 추가의 펩티드 모티프도 함유하지 않는다.
특히, 서열번호 15(SPC55GV TAG)에 따른 뉴클레오티드 서열을 가진 전이유전자를 당해 방법에서 사용할 수 있다. 당해 방법의 특히 바람직한 태양에서, 전이 유전자는 벡터 내에 존재한다. 본 발명의 이러한 특정 태양은 또한 SP-C55-Gal 4-VP16 (즉, SPC55GV)으로 지칭된다. 이러한 경우에, APP의 시그날 펩티드, APP의 C55 단편, GAL4 및 VP16으로 이루어진 융합 단백질이 발현된다. 막관통 도메인 내에 위치하는 상기 단백질은 C55 단편에서 절단되며, 제2 부분 단백질, 즉 C55 단편의 일부, GAL4 및 VP16을 함유하는 융합 단백질의 부분이 리포터 플라스미드의 보조하에 검출된다.
전이유전자 작제물 SPC55GV 이외에, 다른 리포터 작제물, 예를 들어, 전사-활성화 도메인이 SPC55의 막관통 도메인과 세포질 도메인 사이에 삽입될 수 있는 것, 또는 SPC55의 막관통 도메인과 세포질 도메인 사이 및 N-말단과 C-말단 상의 Tag(예: MYC, FLAG)가 또한 고려될 수 있다.
추가의 암호화 뉴클레오티드 서열은, 예를 들어, 제2 부분 단백질의 검출에 사용될 수 있는 단백질을 암호화할 수 있다. 따라서, 바람직하게는, 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열은 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 위치한다. 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열은, 예를 들어, 키메라 단백질 또는 다수의 도메인으로부터 작제된 또 다른 단백질, 예를 들어, DNA-결합 도메인과 전사-활성화 도메인을 함유하는 단백질을 암호화한다. 본 발명의 특정 태양에서, 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열은 GAL4-결합 도메인과 VP16의 전사-활성화 도메인으로 이루어진 단백질(GAL4-VP16, "GV")을 암호화하고, 추가의 부분 단백질은 바람직하게는 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는다. 효모 세포에서는, 추가의 부분 단백질은 또한 LexA-결합 도메인(예: LexA-VP16)을 함유할 수 있다. 이러한 추가의 부분 단백질은 효 모 균주 EGY48의 세포가 사용되는 방법에 특히 적합하다.
특히, 본 발명은 리포터 플라스미드로 공동-형질감염된 세포가 사용되는 방법에 관한 것이다. 리포터 플라스미드는 조절가능한 프로모터의 제어하에 리포터 유전자를 함유한다. 예를 들어, 리포터 유전자는 GFP 및 이의 유도체, 예를 들어, EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein: 증강된 녹색 형광 단백질), EBFP, EYFP, d2EGFP, GFPuv 또는 루시페라제(예: Promega, Mannheim, Germany), CAT(예: Promega), SEAP(예: Clontech), βGal(예: Clontech), 산호초 형광 단백질(RCFP, Clontech), 또는 아폽토시스(apoptosis)-유도 인자, 예를 들어, Fas, TNF-R1, 사멸 도메인과 동족체[참조: Tartaglia et al. (1993) Cell 74, 845-53], ced3, ced4 및 ced9를 암호화할 수 있다. 조절가능한 프로모터로서, 리포터 플라스미드는 최소 프로모터, 예를 들어, HIV의 최소 프로모터, CD4 프로모터 또는 mec7 프로모터와 조합된 GAL4 결합 부위를 함유할 수 있다. 적합한 조절가능한 프로모터의 선택은 사용되는 전사-활성화 도메인에 따라 달라진다.
본 발명의 특정 태양은 사용된 세포가 효모 세포인 방법의 수행에 관한 것이다. 본 발명의 특정 태양에서 MET-25 프로모터가 통합된 효모 발현 벡터 pDBTrp(InvitrogenTM Life Technologies Inc. 네덜란드, Cat No. 10835023)(서열번호 10)에 대한 대안으로서, 상이한 프로모터(예: 유도성 GAL1 프로모터, 구성적으로 활성인 ADH1 프로모터)와 상이한 선별 마커(ADE, LEU, TRP, HIS, LYS, PHE)를 함유하는 다수의 다른 발현 벡터가 선택될 수 있다.
본 발명의 특정 태양은 게놈 내에 안정하게 통합되거나 염색체 외에 존재하는 Gal4- 또는 LexA-유도성 리포터 유전자를 함유하는 효모 세포의 용도에 관한 것이다. 이들 태양에서, 바람직하게는, 효모 균주 MaV203(InvitrogenTM Life Technologies, Rockville, MD, U.S.A.) 또는 EGY48(Origene Technologies, Inc. Rockville, MD, U.S.A.)가 사용된다.
당해 방법의 특정 태양은 또 다른 재조합 벡터로 추가로 형질감염된 세포의 용도에 관한 것이다. 바람직하게는, 이들 태양에 대해 사용된 세포는 통상적으로 어떠한 내인성 γ-세크레타제 또는 내인성 γ-세크레타제 활성도 전혀 또는 거의 함유하지 않으며, 위에서 언급된 방법을 이용하여 검출할 수 없다. 이러한 세포는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질, 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 뉴클레오티드 서열- 바람직하게는 cDNA -이 함유되어 있는 추가의 벡터를 사용하여 형질전환시킬 수 있다. 예를 들어, cDNA 라이브러리가 사용될 수 있다. 이때, 당해 방법의 이러한 태양을 사용하여, 특히 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제, 또는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA를 동정할 수 있다. γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 탐색할 수 있는 cDNA 라이브러리는 모든 생물체의 세포 또는 조직, 예를 들어, B 세포, 뉴런, 신경교 세포, 해마, 전뇌(whole brain), 태반 또는 신장으로부터 제조될 수 있다. 바람직하게는, cDNA는 척추동물 (예를 들어, 햄스터, 래트, 마우스, 개, 원숭이, 사람), 특히 사람 세포 또는 사람 조직으로부터 제조된다.
형질감염되지 않은 경우에 γ-세크레타제 활성을 전혀 나타내지 않으나, cDNA 라이브러리로 형질감염된 후에 γ-세크레타제 활성을 나타내는 세포의 경우에, 세포 내에 존재하는 cDNA는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화한다. 이러한 cDNA는 상기 행태를 나타내는 세포로부터 공지된 방법에 의해 분리될 수 있고, 공지된 방법에 의하여 추가로 분석될 수 있다.
또한, 본 발명은
(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,
(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,
(c) 프로모터 및
(d) 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 위치하는, DNA-결합 도메인과 전사-활성화 도메인을 암호화하는 하나 이상의 추가의 뉴클레오티드 서열
을 함유하고 융합 단백질을 암호화하며, 이때 서열번호 1 이외에, 상기 융합 단백질은 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드를 함유하지 않는 전이유전자에 관한 것이다.
바람직하게는, 제1 뉴클레오티드 서열은, 서열번호 1 이외에 세포내이입 또는 세포외유출 및/또는 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 어떠한 추가의 펩티드 모티프도 포함하지 않는 APP 또는 이의 부분을 암호화한다. 전이유전자는, 예를 들어, 서열번호 15의 뉴클레오티드 서열을 함유한다. 전이유전자는 적당한 벡터, 예를 들어 pcDNA 3.1+ 또는 pDBTrp 내에 존재할 수 있다. 본 발명의 또 다른 태양은, 유전자전이된 세포의 생성을 위해 본 발명의 전이유전자 및/또는 벡터를 사용하는 방법에 관한 것이며, 이에 의해 임의로 상기 유전자전이된 세포를 사용하여, 생체내 리포터 생물체로서 적합한 비-사람 생물체의 구성분이 되도록 한다. 예를 들어, 상기 전이유전자 및/또는 벡터는 유전자전이된 씨. 엘레간스의 제조에 사용될 수 있다. 또 다른 태양에서, 상기 전이유전자 및/또는 벡터는 유전자전이된 효모 세포, 예를 들어, 에스. 세레비지애(S. cerevisiae)의 제조에 사용된다.
또한, 본 발명은, 상기 전이유전자 및/또는 상기 전이유전자를 포함하는 벡터를 생물체(즉, 예를 들면, 씨. 엘레간스)의 생식선으로 미세주사하여, 유전자전이된 비-사람 생물체, 예를 들어, 유전자전이된 씨. 엘레간스를 제조하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은, 본 발명에 따르는 전이유전자를 함유하는 세포와 본 발명에 따르는 전이유전자를 함유하는 유전자전이된 씨. 엘레간스에 관한 것이다. 또한, 본 발명은, 바람직하게는 적합한 벡터 내에 존재하는, 본 발명의 전이유전자를 함유하는 세포, 특히 효모 세포에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 특히 본 발명에 따르는 전이유전자와 cDNA 라이브러리를 각각 함유하고, cDNA 발현 라이브러리(cDNA 라이브러리)를 적용하기에 적합한 세포, 바람직하게는 효모 세포에 관한 것이다.
본 발명은, γ-세크레타제, γ-세크레타제를 암호화하는 cDNA, γ-세크레타 제의 아단위 단백질을 암호화하는 cDNA, 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA의 측정 또는 동정, 또는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성의 측정 또는 동정을 위한 방법에서의 유전자전이된 또는 재조합된 세포, 바람직하게는 효모 또는 씨. 엘레간스의 세포의 용도, γ-세크레타제 활성(γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제)의 억제제를 동정하는 방법에서의 상기 세포의 용도, 및 당해 방법 자체에 관한 것이다.
특히, 본 발명은
1. 본 발명에 따른 전이유전자를 함유하고,
단백질 결합 부위, 최소 프로모터 및 리포터 유전자를 보유하는 리포터 플라스미드 및, 경우에 따라, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA를 추가로 함유하고,
상기 전이유전자 및, 경우에 따라 상기 cDNA에 의해 암호화되는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 발현시키는,
유전자전이된 비-사람 생물체, 예를 들어, 유전자전이된 씨. 엘레간스 또는 사카로마이세스 세레비지애, 또는 유전자전이된 세포를 제조하는 단계;
2. 상기 유전자전이된 비-사람 생물체 또는 유전자전이된 세포를 연구조사하고자 하는 물질과 함께 항온배양하는 단계, 및
3. 제2 부분 단백질의 양을 측정하는 단계
를 포함하여, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 조절(즉, 억제, 감소, 증가 또는 변경)하는 물질(효과인자)을 동정하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은
1. 본 발명에 따른 전이유전자를 제조/사용하고;
2. 상기 전이유전자와 리포터 플라스미드, 및 경우에 따라, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA를 세포의 게놈 내에 통합시키고, 상기 전이유전자에 의해 암호화되는 융합 단백질, 및 경우에 따라, 상기 cDNA에 의해 암호화되는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 연구조사하고자 하는 물질의 존재하에 발현시키고;
3. 상기 융합 단백질이
a) 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단됨으로써
b) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질을 형성시키고,
4. 상기 제2 부분 단백질을 정성적 또는 정량적으로 측정하여, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 효과인자를 동정하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은, 시그날 펩티드와 서열번호 1을 함유하는 단백질을 암호화 하는 전이유전자를 연구조사하고자 하는 물질과 리포터 플라스미드의 존재하에 발현시키고, 연구조사하고자 하는 물질이 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질의 형성량에 미치는 효과를 측정하여, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 억제하는 물질을 동정하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은, 본 발명의 방법에 의해 동정되는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 억제제에 관한 것이다.
특히, 당해 방법은, 하기 목적을 위해, 예를 들어, C55-Gal4-VP16 시스템(즉, C55, GAL4 및 VP16으로 이루어지는 융합 단백질 또는 상응하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산의 사용)과 함께 사용할 수 있다:
1. γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제 활성의 동정 및 측정(정성 및/또는 정량).
2. 상이한 조직, 세포 및 생물체 또는 종에서의 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 동정. γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 관련 cDNA의 동정 및 분리, 및 상기 cDNA의 추가의 용도.
3. 면역생물학적 방법을 사용하지 않으면서 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제 활성의 측정을 가능케하는, 예를 들어, 효모 세포(예: 사카로마이세스 세레비지애) 또는 씨. 엘레간스 또는 세포 배양물 내에서의 생체내 스크리닝.
4. γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 효소적 또는 생물학적 활성을 조절하는 물질, 예를 들어, 약리학적 활성 화합물, 예를 들어, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 효과인자 (억제제, 활성화제, 조절제)의 동정 및 특성규명을 위한 본 발명의 방법의 용도. 특히, 상기 방법은 HTS(고처리량 스크리닝)에서 사용될 수 있다. HTS 검정 시스템을 사용하여, 알츠하이머 질환의 치료 및/또는 예방적 치료에 사용될 수 있는 물질을 동정할 수 있다.
5. 예를 들어, 돌연변이된 APP 또는 이의 단편, 또는 막-계 프로테아제의 기능의 폭넓은 이해를 촉진하는, 알츠하이머 질환에 관한 또는 관련된 연구조사.
6. 기술된 융합 단백질/전이유전자, 예를 들어 SP-C55-Gal4-VP16 내 C55를 본 발명에 따른 다른 단편으로 대체할 수 있으며, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제, 이의 활성 및 조절을 당해 방법의 보조하에 연구조사할 수 있다.
본 발명의 또 다른 태양은, 본 발명에 따른 방법에 의해 동정되어진, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 억제하는 약제학적 활성 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 발명의 추가적 태양은, 본 발명의 방법 및 상기 동정된 약제학적 활성 화합물의 제형화 단계를 포함하여, 약제학적 조성물을 제조하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 추가적 태양은, a) 본 발명에 따른 방법 및 b) 동정된 약제학적 활성 화합물을 약제학적 불활성 무기 및/또는 유기 부형제와 혼합하는 단계를 포함하여, 약제를 제조하는 방법이다.
또한, 본 발명의 또 다른 태양은, 본 발명에 따른 전이유전자, 벡터 또는 세포를 포함하는, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 검출하기 위한 시험 키트이다.
도 1: 도 1은 아밀로이드 전구체 단백질 (이소형(isoform) APP695 및 이소형 APP770 또는 APP751) 및 세크레타제 절단 생성물을 도시한다.
도 2: 본 발명의 방법이 기초로 하는 주요 요소: N-말단에서의 β-세크레타제 절단 부위; 막관통 도메인에서의 γ-세크레타제 절단 부위; C100 = APP의 C100 단편; GAL4-VP16 = 리포터 플라스미드의 DNA 상의 단백질-결합 도메인에 결합하는, DNA-결합 도메인, 전사-활성화 도메인 (DNA-결합 도메인 및 전사 활성화인자로 이루어짐)을 도식적으로 도시한다.
도 3: 발현 플라스미드 SP-C100-GAL4-VP16의 작제: aa = 아미노산; 플라스미드 상의 절단 부위의 위치를 나타내는 제한 절단 부위 SacI, HindIII 및 KpnI.
도 4: 발현 플라스미드 pDBTrp-MET25-SP-C100-GAL4-VP16: 효모 내에서 전이유전자의 발현을 위한 발현 플라스미드의 작제.
아래의 실시예는 본 발명을 설명하지만, 본 발명의 개념을 제한하는 것으로 간주해서는 아니된다.
실시예 1: SP-C100-GAL4/VP16을 포함하는 발현 플라스미드 pcDNA3.1+의 작제
상기 플라스미드는 APP의 C-말단 100개 아미노산 잔기(C100)에 융합된 APP 시그날 펩티드(SP)를 암호화한다. C100은 Aβ-펩티드의 N-말단에서 시작하여 APP의 C-말단에서 종결된다. Aβ-펩티드를 유리시키기 위해 C100을 γ-세크레타제에 의해 추가로 절단해야 한다.
GAL4/VP16(서열번호 7)을 SP-C100(서열번호 6)의 C-말단에 융합시켰다. GAL4/VP16은 효모 전사 활성화인자 GAL4의 처음 147개 아미노산 잔기 및 단순 포진 바이러스로부터의 전사 활성화인자인 VP16의 78개 C-말단 아미노산 잔기를 포함한다. 융합 단백질로서, GAL4 단편은 DNA 결합 작용을 수행하는 한편, VP16 단편은 전사를 활성화시킨다[참조: Sadowski et al., (1988)]. pcDNA3.1+ (InvitrogenTM, life technologies, The Netherlands, Cat. No. V79020)를 플라스미드 벡터로서 사용한다.
실시예 2: 리포터 플라스미드 pGL2-MRG5-EGFP의 작제
포유동물 세포 리포터 플라스미드 pGL2 MRG5는, 사람 면역결핍 바이러스 (HIV) 코어 프로모터 (Kretzschmar et al., 1994)의 상류의 5개의 GAL4 DNA-결합 부위를 포함하는 pMRG5 (Ikeda et al., 1998)로 부터의 DNA 단편이 pGL2의 루시퍼라제 리포터 유전자의 상류에 삽입된 pGL2 (Promega)이다. 세포 배양물에서 보다 용이한 검출을 위해, 루시페라제 리포터 유전자를 벡터 pEGFP-N1(Clontech, Laboratories, Heidelberg)로부터 수득된 EGFP(증강된 녹색 형광 단백질) 유전자로 대체하였다.
실시예 3: 사람 신경모세포종 세포의 공동-형질감염
사람 신경모세포종 세포 SH-SY5Y (ATCC CRL-2266)를 실시예 1 및 2의 2개의 플라스미드로 공동-형질감염시킨 다음, 480nm 파장의 광선 조사하에 EGFP를 여기시켜 현미경으로 분석하였다. 강한 녹색 형광을 나타내는 EGFP-발현 세포를 검출할 수 있었다. 녹색 형광이 리포터 플라스미드에 의한 EGFP의 발현에 특이적으로 의존한다는 것을 확인하기 위하여, SH-SY5Y 세포를 리포터 플라스미드 pGL2-MRG5-EGFP만으로 형질감염시켰다. 이들 세포에서는, 녹색 형광이 검출될 수 없었다. 당해 발현은 GAL4-VP16에 의해 활성화되는데, 이는 SP-C100-GAL4/VP16의 C-말단으로 부터의 GAL4/VP16의 단백질분해적 유리를 전제로 하는 것이다.
실시예 4: γ-세크레타제 활성을 암호화하는 cDNA를 cDNA 라이브러리 내에서 검출하기 위한 C100-Gal4/VP16 시스템의 용도
SPC100-Gal4-VP16을, ADH 프로모터 및 GAL4DB 도메인 (CYH2 유전자와 다중 클로닝 부위 사위에 위치)을 함유하는 pDBTrp 부분을 SP-C100-Gal4-VP16 상류의 p415MET25 (Mumberg et al., 1994)로 부터의 MET25 프로모터를 함유하는 DNA 단편으로 대체하여, MET25 프로모터의 제어하에 효모 발현 벡터 pDBTrp (InvitrogenTMlife technologies, The Netherlands, Cat. No. 10835023) 내에 클로 닝하였다. 당해 효모 균주 MaV203 (InvitrogenTMlife technologies)을 상기 작제물로 형질전환시켰다. MaV203은 유전자가 변경되며, 게놈 내에 안정하게 통합된 3종의 Gal4-유도성 리포터 유전자 (URA3, HIS3, LacZ)를 함유한다[참조: Vidal et al., 1996]. MaV203 에서, SPC100-Gal4-VP16 단백질로 부터의 GAL4/VP16 도메인의 단백질분해적 유리로 인해, URA3 및 HIS3 판독이 활성화됨으로써, 우라실 또는 히스티딘이 결핍된 플레이트에서의 성장이 가능해진다.
MaV203에서의 SP-C100-Gal4-VP16 cDNA의 발현은 리포터의 낮은 활성만을 일으키므로, 이러한 생체내 기능 검정 시스템은 cDNA 라이브러리 내의 γ-세크레타제에 대한 cDNA의 발현을 스크리닝하고 검출하는데 적합하다.
실시예 5: 사람 B 세포 cDNA 라이브러리의 스크리닝에 의한 γ-세크레타제의 동정
실시예 4로부터의 재조합 MaV203 효모 균주를, γ-세크레타제 활성을 가진 단백질을 암호화하는 cDNA에 대하여 사람 B 세포 cDNA 라이브러리(ATCC 87286; American Type Culture Collection, Manassas, VA, U.S.A.; Elledge et al., 1991)를 스크리닝할 목적으로 사용하였다. 달리, 효모 발현 벡터 p415-MET25 (Mumberg et al., 1994) 또는 p415-ADH1 (Mumberg et al., 1995) 내에 통합된 사람 해마 cDNA 라이브러리를 또한 γ-세크레타제 또는 γ-세크레타제-유사 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 cDNA의 스크리닝에 사용할 수도 있다.
실시예 6: SP2-C100 및 SP2-C100-GAL4/VP16의 클로닝
(실시예 1에 기술된 바와 같은) SP-C100-GAL4/VP16의 사람 펩티드 시그날에 대한 암호 영역을, 효모 SUC2 유전자로 부터 유래된 시그날 펩티드 (SP2; 서열번호 12)로 대체함으로써, SP2-C100-GAL4/VP16 (서열번호 19)을 암호화하는 작제물이 생성된다.
C100의 성숙형의 암호 영역 (시그날 서열 부존재, 참조 서열번호 4)을, SUC2-시그날 펩티드 (서열번호 12)에 대한 암호 서열을 포함하는 5'-프라이머 및 천연 종결 코돈(Kang et al., (1987))에 상응하는 3'-프라이머를 사용하여 증폭시켜 SP2-C100를 작제하였다. 시그날 펩티드의 교체를 용이하게 하기 위하여, 생성된 PCR 생성물이 시그날 펩티드 및 성숙 펩티드에 대한 암호 영역을 연결하는 추가적 NheI 부위를 함유하도록, 프라이머 EH47 (서열번호 23) 및 EH49 (서열번호 24) 를 설계하였다.
EH47: 5'-GCTCTAGAATGCTTTTGCAAGCTTTCCTTTTCCTTTTGGCTGGTTTTGCAGCC AAAATATCTGCAGCGCTAGCTGATGCAGAATTCCGACATGAC-3'
EH49: 5'-CGGGATCCCTAGGCGCCGTTCTGCATCTGCTCAAAGAAC-3'
상기 SP2-C100-GAL4/VP16는 EcoRI 절단에 의해 SP2-C100의 C100 단편을 잘라내고 이를 C100-GAL4/VP16로 대체함으로써 수득되었다.
상기 단편을, 실시예 4에 기술된 바와 같은 MET25 프로모터를 함유하는 효모 발현 벡터 pDBTrp (InvitrogenTM life technologies, The Netherlands, Cat. No. 10835023) 내로 클로닝하였다.
실시예 7: SP2-C-GAL4/VP16-100의 클로닝
작제물 SP2-C-GAL4/VP16-100 (서열번호 17)을 수득하기 위하여, 3회의 독립적인 PCR 반응을 아래의 프라이머를 사용하여 수행하였다:
EH53: 5'-ACTATATCTAGAATGCTTTTGC-3'
EH54: 5'-TTCGATAGAAGACAGTAGCTTGCCAGATCTACCTTTCTTCTTCAGCATC ACCAA-3'
EH55: 5'-TTGGTGATGCTGAAGAAGAAAGGTAGATCTGGCAAGCTACTGTCTTCT ATCGAA-3'
EH56: 5'-ATGATGAATGGATGTGTACTGGCCACTAGTACCCCCACCGTACTCGTC AATT-3'
EH57: 5'-AATTGACGAGTACGGTGGGGGTACTAGTGGCCAGTACACATCCATTC ATCAT-3'
EH59: 5'-CGATAAGCTTGATATCGAATTC-3'
1) SP2-C100을 주형으로서 사용하여, C100의 엑토도메인 및 막관통 도메인을 프라이머 EH53 (서열번호 25) 및 EH54 (서열번호 26)에 의해 증폭시킴으로써, 당해 PCR 생성물은 GAL4/VP16 암호 영역과 중첩하는 3'-플랭킹 영역을 함유하게 되었다.
2) 프라이머 EH55 (서열번호 27) 및 EH56 (서열번호 28)을 사용하며 GAL4/VP16를 주형으로서 사용하여, PCR 반응을 수행하여, SP2-C100의 각 측면에 상응하는 5'- 및 3'- 플랭킹 영역을 가진 암호 영역을 증폭시켰다.
3) C100의 세포질 도메인을 암호하하는 SP2-C100의 3'-절편을 프라이머 EH57 (서열번호 29) 및 EH 59 (서열번호 30)를 사용하여 증폭시킴으로써, GAL4/VP16 암 호 영역의 5'-중첩부가 생성되었다. 수득된 PCR 생성물 (약 200 bp, 720 bp, 및 100 bp)을 정제하고, SP2-C100의 5'- 및 3'-말단에 상응하는 EH53 및 EH59의 존재하에 최종 PCR을 위해 사용하였다. 약 1000bp의 최종 PCR 생성물을, 실시예 4에 기재된 바와 같이 MET25 프로모터를 함유하는 pDBTrp (InvitrogenTM life technologies, The Netherlands, Cat. No. 10835023)로 부터 유도된 효모 발현 벡터 내로 클로닝하였다.
실시예 8: SP3-C100, SP3-C100-GAL4/VP16, 및 SP3-C-GAL4/VP16-100의 클로닝
포유동물 세포계에서 SP3-C100, SP3-C100-GAL4/VP16 (서열번호 21), 및 SP3-C-GAL4/VP16-100 (서열번호 32)을 발현시키기 위한 3종의 플라스미드 벡터를 제조하기 위하여, C100, C100-GAL4/VP16 또는 C-GAL4/VP16-100을 실시예 6 또는 7의 효모 발현 벡터으로 부터 BM40 시그날 펩티드 (SP3; 서열번호 13)에 대한 암호 영역을 함유하는 포유동물 발현 벡터 pRc/CMV (Invitrogen, Cat. No. V75020) 내로 서브클로닝시켰다. C100, C100-GAL4/VP16 또는 C-GAL4/VP16-100의 암호 영역을, 실시예 6에 기재된 특유 NheI 제한 부위에서 SP3 암호 영역에 프레임 내에서 연결시켰다.
실시예 9: 효모 내에서 C100-GAL4/VP16의 발현의 개선
형질전환된 효모로 부터의 조 용해물 중의 상이한 작제물의 발현 수준의 정량은, 효모 suc2 시그날 펩티드를 함유하는 융합물을 암호화하는 벡터로 형질전환된 효모 세포로 부터의 용해물과 비교하여, SP-C100-GAL4/VP16의 발현이 매우 낮았다는 것을 보여주었다. 예를 들면, SP2-C100-GAL4/VP16의 발현은 기대된 크기의 특정 밴드의 강한 발현을 초래하였다. 그러나, 고도의 전기영동 이동성을 가진 밴드가 면역블롯팅에 의해 검출될 수 있으며, 이는 효모 내의 재조합 단백질의 비-특이적 분해를 암시한다. 당해 단백질의 안정성은, GAL4/VP16 도메인이 γ-세크레타제 절단 부위 부근의 C100 내로 프레임 내에서 삽입된 C-GAL4/VP16-100 (하기 참조)의 경우에는 개선되었다. 두 융합 단백질 모두 GAL4/VP16이 없는 C100을 암호화하는 작제물에 필적할 만한 발현 수준으로 수득되었으며, 이는 C100과 GAL4/VP16 간의 2개의 상이한 융합물이 단백질 발현을 간섭하지 않는다는 것을 암시한다.
실시예 10: 효모에서의 배경수준의 개선
시그날 펩티드의 교체에 기인한 C100-GAL4/VP16의 발현 증가는 효모 균주 MaV203 내에서의 URA3, HIS3, 및 lacZ 리포터 시스템의 비-특이적 활성화의 높은 증가와 상관이 있었다. 효모는 γ-세크레타제 활성이 없기 때문에, 이는 세포 프로테아제에 의한 C100-GAL4/VP16의 비-특이적 프로세싱 및 활성 GAL4/VP16의 유리로 인한 것일 가능성이 높다. GAL4/VP16 도메인을 γ-세크레타제 절단 부위에 보다 근접하게 이동시킴으로써, C100의 막관통 도메인과 GAL4/VP16 도메인의 아미노 말단부 사이의 부위에서 C100-GAL4/VP16로 검출된 비-특이적 단백질분해적 절단이 본질적으로 제거되었다.
다양한 작제물의 절단은, 리포터 시스템의 GAL4/VP16-의존형 활성화를 검토함으로써 MaV203에서 시험되었다. SP-C100-GAL4/VP16를 이용한 MaV203의 형질전환은, Ura+, His- 표현형을 나타내었다(참조. 실시예 4). SP 시그날 펩티드를 SP2 펩티드로 대체(SP2-C100-GAL4/VP16 생성)함으로써 발현 수준이 증가되면, 양성 대조군, 즉 전장의 GAL4 단백질[플라스미드 pCL1(Clontech Laboratories)에 의해 암호화됨]을 구성적으로 발현하는 MaV203에서 검출된 것과 유사한 수준으로 모든 판독물이 강하게 활성화되었다. 대조적으로, SP2-C100-GAL4/VP16에 필적한 수준으로 발현되는 SP2-C-GAL4/VP16-100을 발현하는 MaV203 세포는 Ura--, His-- 표현형을 나타내었으며, 이는 공(empty) 벡터 대조군으로 형질전환된 MaV203에 의해 나타난 바와 같았다.
따라서, SP2-C-GAL4/VP16-100은 효모에서 고수준으로 발현될 수 있으나, 여전히 GAL4-의존형 리포터의 비-특이적 활성화를 나타낸다. 비-특이적 절단/리포터 활성화의 낮은 배경수준과 합쳐진, SP2-C-GAL4/VP16-100 단백질의 고수준 발현은 놀랍도록 최적화된 시그날-대-노이즈 비를 가진 판독 시스템의 전제조건이다.
실시예 11: 포유동물 세포에서 γ-세크레타제에 의한 SP3-C-GAL4/VP16-100의 프로세싱
SP3-C-GAL4/VP16-100 단백질이 포유동물 세포에서 발현된다는 것을 입증하기 위하여, SP3-C-GAL4/VP16-100을, 내생적으로 γ-세크레타제 활성을 발현하는 것으로 밝혀진 포유동물에 형질감염시켰다(참조: Haass et al., 1992). 포유동물에서의 발현을 위하여, SP2-C-GAL4/VP16-100 내의 시그날 펩티드를, 실시예 8에 기재된 바와 같이, 기저막 단백질 BM40로 부터 유도된 포유동물 시그날 펩티드 (이의 고수준 발현은 공지되었다)(SP3; 서열번호 13)로 대체하였다. γ-세크레타제의 프로세싱을, Ab가 세포 배양물로 분비되는 것을 정량하는 방식으로 모니터하였다. 분비된 Ab를, 모노클로날 항체 6E10 및 바이오티닐화 4G8 (Senetek PLC, Napa, California, USA; cf. Kim et al., 1990)을 각각 포획 및 검출 항체로서 사용하여 샌드위치 ELISA로 검출하였다.
SP3-C100를 사용한 형질감염 후, 공 벡터 대조군에 비해, 8배 증가된 Aβ분비량이 관찰되었다. SP3-C100-GAL4/VP16 또는 SP3-C-GAL4/VP16-100로 형질감염된 세포는 유사한 양의 Aβ를 분비하였으며, 이는 GAL4/VP16의 막-근접(juxtamembrane) 융합물 또는 C-말단 어느 것도 γ-세크레타제에 의한 단백질분해적 프로세싱을 간섭하지 않는다는 것을 암시한다.
실시예 12: 포유동물 세포에서 발현된 C-Gal4/VP16-100에 의한 GAL4/VP16-의존형 리포터 유전자의 전사 활성화
γ-세크레타제에 의한 C100-GAL4/VP16 및 C-GAL4/VP16-100의 프로세싱에 의해, GAL4/VP16, 및 C100의 플랭킹 부분으로부터의 추가적 아미노산을 함유하는 폴리펩티드가 유리된다. SP3-C100-GAL4/VP16 및 SP3-C-GAL4/VP16-100를, 실시예 2에 기술된 사람 면역결핍 바이러스(HIV)의 상류에 5개의 GAL4 DNA-결합 부위를 함유하 는 포유동물 리포터-플라스미드 pGL2-MRG5-EGFP (Ikeda et al., 1998), 및 EGFP를 암호화하는 cDNA로 공동-형질감염시켰다. GAL4/VP16-함유 융합물을 이용한 pGL2-MRG5-EGFP의 공동-형질감염에 의해, 두 경우 모두에서 GFP-양성 세포의 외관이 나타났다.
실시예 13: 포유동물 발현 플라스미드 SP3-C55-GAL4/VP16의 작제:
APP의 C100 서열 및 GAL4/VP16을 함유하는 작제물은 γ-세크레타제의 절단 부위 및 카스파제-유사 프로테아제의 절단 부위를 둘 모두 함유한다. 비-특이적 카스파제-유사 활성이 진정 γ-세크레타제 부위와 GAL4/VP16 도메인 사이의 SP3-C100-GAL4/VP16를 절단하여 GAL4/VP16를 유리시키고 포유동물 세포에서 리포터 시스템을 활성화시키는 것을 피하기 위하여, APP의 세포질 도메인을 암호화하는, SP3-C100-GAL4/VP16 내에 함유된 C100의 45개 아미노산 C-말단 절편을 결실시켰다. C100의 C-말단 45개 아미노산의 제거는 또한, 원형질막 속에 삽입된 후 APP의 세포내이입을 유도하는 APP의 C-말단에 위치하는 "내재화 시그날" 펩티드를 제거한다.
따라서, 포유동물 발현 플라스미드 SP3-C55-GAL4/VP16는 BM40 시그날 펩티드 (서열번호 13), APP-C100의 N-말단 55개의 아미노산 잔기 (C55; 서열번호 6), 및 GAL4/VP16을 포함한다. C55는 Aβ펩티드의 N-말단에서 시작하여 APP의 막관통 도메인에서 종결된다. SP3-C55-GAL4/VP16 단백질에서, γ-세크레타제에 대한 유일한 절단 부위가 존재한다. C55는 γ-세크레타제 절단 부위를 포함하며, Aβ 펩티드 및 GAL4/VP16를 유리시키기 위하여는 γ-세크레타제에 의해 절단하여야 한다. 또한, 세포내이입성 내재화 시그날 펩티드는 SP3-C55-GAL4/VP16 내에 존재하지 않기 때문에, 원형질막-관련 C55-GAL4/VP16의 γ-세크레타제 촉매화 절단만이 Aβ펩티드를 유리시키고 리포터 시스템의 GAL4/VP16-의존형 전사를 활성화시킬 것이다.
GAL4/VP16 서열 뒤에 종결 코돈 (TAG)를 도입하여 벡터 SP3-C-GAL4/VP16-100로 부터 발현 플라스미드를 유도하였다. 이는, SP3-C-GAL4/VP16-100의 HpaI-ClaI 단편을, SP3-C-GAL4/VP16-100을 DNA 주형으로 사용하고, GAL4/VP16 내의 특유한 HpaI 부위의 상류의 5'-프라이머, 및 3'-프라이머 (5'-CCATCGATTTTCTAACCCCCACCGTA-3'; 서열번호 31)을 사용하는 PCR에 의해 생성된 DNA 단편으로 대체하여, GAL4/VP16 개방형 판독 프레임의 C-말단에 ClaI 제한 부위 및 TAG 종결 코돈 (밑줄)을 도입함으로써 수행되었다.
실시예 14: 안정한 형질감염된 HEK293 세포
HEK293 세포 (사람 배아 신장 세포주 (ATCC))를 플라스미드 SP3-C55-GAL4/VP16 및 루시퍼라제 리포터 플라스미드 PGL2-MRG5(실시예 2에 기재됨)으로 공동-형질감염시켰다.
후속적으로, 400 ㎍/ml 게네티신(Geneticin) (GibcoBRL)과 함께 항온배양하여 네오마이신(Neomycin) 내성 클론을 선별하고, 이후에 SP3-C55-GAL4/VP16 및 루시페라제의 안정한 발현에 대한 특성을 조사하여, 안정한 세포를 선별하였다.
실시예 15: HEK 293 세포의 일시적 형질감염
HEK293 세포를 다중 웰 12 플레이트에서 SP3-C55-GAL4/VP16 벡터 (0.03 ㎍) 및 pGL2-MRG5 루시페라제 리포터 벡터 (1 ㎍)로 공동-형질감염시켰다.
γ-세크레타제 억제제로서 알려진 화합물 DPAT (참조: Elan Pharmaceuticals; Dovey et al., 2001) 및 L-685,458 (참조: Merck Pharmaceuticals; Shearman et al., 2000)은 모두 루시페라제 활성 및 Aβ-생성을 용량-의존적으로 억제하며, IC50이 각각 14nM (DAPT) 및 19nM (L-685,458)였다.
루시페라제 활성을 Bright-Glo 루시페라제 검정 키트 (Promega)에 의해 정량하였다. 세포 배지 중의 Aβ를, 실시예 11에 기술된 바와 같은 항체 4G8 및 6E10 (제조원: Senetek)을 사용하여, ELISA로 정량하였다. 이들 항체들은 Aβ펩티드의 아미노산 17-24 (4G8) 및 1-17 (6E10)에 대해 특이적이다.
일시적 형질감염 실험에서, Aβ를 또한 면역침전 또는 면역블롯팅에 의해 동정하였다. 두 방법 모두 Aβ펩티드에 상응하는 4 kDa 밴드를 나타내었다.
실시예 16: 안정한 형질감염된 HEK293 세포의 약리학적 특징
SP3-C55-GAL4/VP16 및 MRG5-루시페라제 작제물을 모두 안정하게 발현하는 HEK293 세포의 클론을 실시예 14에 따라 동정하였다. 이 세포 클론을 사용하여, DAPT (참조: Elan Pharm.; Dovey et al., 2001) 및 L-685,458 (참조: Merck Pharm.; Shearman et al., 2000)에 대한 안정하게-형질감염된 포유동물 세포 검정 시스템의 반응을 검토하였다. 두 화합물 모두 루시페라제 활성을 용량-의존적으로 억제하였으며 (24시간 처리), IC50이 각각 230nM (DAPT) 및 130nM (L-685,458)이였다.
실시예 17: γ-세크레타제의 억제제의 동정
γ-세크레타제의 억제제의 동정을 위하여, 안정하게 이중-형질감염된 HEK293 세포 (실시예 14 참조)를, 검정물 중에 10 μM 이하 농도의 연구조사 (예: 화합물 라이브러리 스크리닝)중인 화합물의 존재 하에 다중-웰 96 플레이트에서 항온배양하고, 루시페라제 활성을 24 시간 후에 측정한다. 루시페라제 활성은 루시페라제 검정 시스템 키트 (Promega), Bright-Glo 루시페라제 검정 키트 (Promega), 또는 루시페라제 정량을 위한 기타 방법에 의해 정량할 수 있다. 루시페라제 활성의 감소는 γ-세크레타제 활성의 감소를 반영한다.
참조 문헌:
<110> Sanofi-Aventis Deutschland GmbH
<120> Method for screening inhibitors of the gamma-secretase
<130> DEAV2003/0046
<150> EP 03011807.9
<151> 2003-05-26
<160> 32
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: APP fragment
<400> 1
Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val
1 5 10 15
Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu
20
<210> 2
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: APP fragment
<400> 2
Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val
1 5 10
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: APP fragment
<400> 3
Val Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu
1 5
<210> 4
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: C100 fragment
<400> 4
Leu Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln
1 5 10 15
Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile
20 25 30
Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile
35 40 45
Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile His His Gly
50 55 60
Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg His Leu Ser
65 70 75 80
Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys Phe Phe Glu
85 90 95
Gln Met Gln Asn
100
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Phe Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
1 5 10 15
Ala
<210> 6
<211> 55
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: C55 fragment
<400> 6
Leu Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln
1 5 10 15
Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile
20 25 30
Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile
35 40 45
Thr Leu Val Met Leu Lys Lys
50 55
<210> 7
<211> 232
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: GAL4-VP16
<400> 7
Met Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu
1 5 10 15
Lys Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu
20 25 30
Lys Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro
35 40 45
Leu Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu
50 55 60
Glu Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile
65 70 75 80
Leu Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu
85 90 95
Phe Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala
100 105 110
Ser Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser
115 120 125
Ala Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu
130 135 140
Thr Val Ser Pro Glu Phe Pro Gly Ile Trp Ala Pro Pro Thr Asp Val
145 150 155 160
Ser Leu Gly Asp Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala
165 170 175
His Ala Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly
180 185 190
Asp Ser Pro Gly Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly
195 200 205
Ala Leu Asp Met Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala
210 215 220
Leu Gly Ile Asp Glu Tyr Gly Gly
225 230
<210> 8
<211> 1813
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutagen
<400> 8
ggcaaggctt gaccgacaat tgcatgaaga atctgcttag ggttaggcgt tttgcgctgc 60
ttcgcgatgt acgggccaga tatacgcgtt gacattgatt attgactagt tattaatagt 120
aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga gttccgcgtt acataactta 180
cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga 240
cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggactatt 300
tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta 360
ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg 420
actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt 480
tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc 540
accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccgcgt gtacggtggg aggtctatat 600
aagcagagct ctctggctaa ctagagaacc cactgcttac tggcttatcg aaattaatac 660
gactcactat agggagaccc aagctggcta gcgtttaaac ttaagcttca cagctagcgc 720
actcggtgcc ccgcgcaggg tcgcgatgct gcccggtttg gcactgttcc tgctggccgc 780
ctggacggct cgggcgctgg atgcagaatt ccgacatgac tcaggatatg aagttcatca 840
tcaaaaattg gtgttctttg cagaagatgt gggttcaaac aaaggtgcaa tcattggact 900
catggtgggc ggtgttgtca tagcgacagt gatcgtcatc accttggtga tgctgaagaa 960
gaaacagtac acatccattc atcatggtgt ggtggaggtt gacgccgctg tcaccccaga 1020
ggagcgccac ctgtccaaga tgcagcagaa cggctacgaa aatccaacct acaagttctt 1080
tgagcagatg cagaacgcgc ggggtacccc ggcgatgaag ctactgtctt ctatcgaaca 1140
agcatgcgat atttgccgac ttaaaaagct caagtgctcc aaagaaaaac cgaagtgcgc 1200
caagtgtctg aagaacaact gggagtgtcg ctactctccc aaaaccaaaa ggtctccgct 1260
gactagggca catctgacag aagtggaatc aaggctagaa agactggaac agctatttct 1320
actgattttt cctcgagaag accttgacat gattttgaaa atggattctt tacaggatat 1380
aaaagcattg ttaacaggat tatttgtaca agataatgtg aataaagatg ccgtcacaga 1440
tagattggct tcagtggaga ctgatatgcc tctaacattg agacagcata gaataagtgc 1500
gacatcatca tcggaagaga gtagtaacaa aggtcaaaga cagttgactg tatcgccgga 1560
attcccgggg atctgggccc ccccgaccga tgtcagcctg ggggacgagc tccacttaga 1620
cggcgaggac gtggcgatgg cgcatgccga cgcgctagac gatttcgatc tggacatgtt 1680
gggggacggg gattccccgg ggccgggatt taccccccac gactccgccc cctacggcgc 1740
tctggatatg gccgacttcg agtttgagca gatgtttacc gatgcccttg gaattgacga 1800
gtacggtggg tag 1813
<210> 9
<211> 3354
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
agtttcctcg gcagcggtag gcgagagcac gcggaggagc gtgcgcgggg gccccgggag 60
acggcggcgg tggcggcgcg ggcagagcaa ggacgcggcg gatcccactc gcacagcagc 120
gcactcggtg ccccgcgcag ggtcgcgatg ctgcccggtt tggcactgct cctgctggcc 180
gcctggacgg ctcgggcgct ggaggtaccc actgatggta atgctggcct gctggctgaa 240
ccccagattg ccatgttctg tggcagactg aacatgcaca tgaatgtcca gaatgggaag 300
tgggattcag atccatcagg gaccaaaacc tgcattgata ccaaggaagg catcctgcag 360
tattgccaag aagtctaccc tgaactgcag atcaccaatg tggtagaagc caaccaacca 420
gtgaccatcc agaactggtg caagcggggc cgcaagcagt gcaagaccca tccccacttt 480
gtgattccct accgctgctt agttggtgag tttgtaagtg atgcccttct cgttcctgac 540
aagtgcaaat tcttacacca ggagaggatg gatgtttgcg aaactcatct tcactggcac 600
accgtcgcca aagagacatg cagtgagaag agtaccaact tgcatgacta cggcatgttg 660
ctgccctgcg gaattgacaa gttccgaggg gtagagtttg tgtgttgccc actggctgaa 720
gaaagtgaca atgtggattc tgctgatgcg gaggaggatg actcggatgt ctggtggggc 780
ggagcagaca cagactatgc agatgggagt gaagacaaag tagtagaagt agcagaggag 840
gaagaagtgg ctgaggtgga agaagaagaa gccgatgatg acgaggacga tgaggatggt 900
gatgaggtag aggaagaggc tgaggaaccc tacgaagaag ccacagagag aaccaccagc 960
attgccacca ccaccaccac caccacagag tctgtggaag aggtggttcg agttcctaca 1020
acagcagcca gtacccctga tgccgttgac aagtatctcg agacacctgg ggatgagaat 1080
gaacatgccc atttccagaa agccaaagag aggcttgagg ccaagcaccg agagagaatg 1140
tcccaggtca tgagagaatg ggaagaggca gaacgtcaag caaagaactt gcctaaagct 1200
gataagaagg cagttatcca gcatttccag gagaaagtgg aatctttgga acaggaagca 1260
gccaacgaga gacagcagct ggtggagaca cacatggcca gagtggaagc catgctcaat 1320
gaccgccgcc gcctggccct ggagaactac atcaccgctc tgcaggctgt tcctcctcgg 1380
cctcgtcacg tgttcaatat gctaaagaag tatgtccgcg cagaacagaa ggacagacag 1440
cacaccctaa agcatttcga gcatgtgcgc atggtggatc ccaagaaagc cgctcagatc 1500
cggtcccagg ttatgacaca cctccgtgtg atttatgagc gcatgaatca gtctctctcc 1560
ctgctctaca acgtgcctgc agtggccgag gagattcagg atgaagttga tgagctgctt 1620
cagaaagagc aaaactattc agatgacgtc ttggccaaca tgattagtga accaaggatc 1680
agttacggaa acgatgctct catgccatct ttgaccgaaa cgaaaaccac cgtggagctc 1740
cttcccgtga atggagagtt cagcctggac gatctccagc cgtggcattc ttttggggct 1800
gactctgtgc cagccaacac agaaaacgaa gttgagcctg ttgatgcccg ccctgctgcc 1860
gaccgaggac tgaccactcg accaggttct gggttgacaa atatcaagac ggaggagatc 1920
tctgaagtga agatggatgc agaattccga catgactcag gatatgaagt tcatcatcaa 1980
aaattggtgt tctttgcaga agatgtgggt tcaaacaaag gtgcaatcat tggactcatg 2040
gtgggcggtg ttgtcatagc gacagtgatc gtcatcacct tggtgatgct gaagaagaaa 2100
cagtacacat ccattcatca tggtgtggtg gaggttgacg ccgctgtcac cccagaggag 2160
cgccacctgt ccaagatgca gcagaacggc tacgaaaatc caacctacaa gttctttgag 2220
cagatgcaga actagacccc cgccacagca gcctctgaag ttggacagca aaaccattgc 2280
ttcactaccc atcggtgtcc atttatagaa taatgtggga agaaacaaac ccgttttatg 2340
atttactcat tatcgccttt tgacagctgt gctgtaacac aagtagatgc ctgaacttga 2400
attaatccac acatcagtaa tgtattctat ctctctttac attttggtct ctatactaca 2460
ttattaatgg gttttgtgta ctgtaaagaa tttagctgta tcaaactagt gcatgaatag 2520
attctctcct gattatttat cacatagccc cttagccagt tgtatattat tcttgtggtt 2580
tgtgacccaa ttaagtccta ctttacatat gctttaagaa tcgatggggg atgcttcatg 2640
tgaacgtggg agttcagctg cttctcttgc ctaagtattc ctttcctgat cactatgcat 2700
tttaaagtta aacattttta agtatttcag atgctttaga gagatttttt ttccatgact 2760
gcattttact gtacagattg ctgcttctgc tatatttgtg atataggaat taagaggata 2820
cacacgtttg tttcttcgtg cctgttttat gtgcacacat taggcattga gacttcaagc 2880
ttttcttttt ttgtccacgt atctttgggt ctttgataaa gaaaagaatc cctgttcatt 2940
gtaagcactt ttacggggcg ggtggggagg ggtgctctgc tggtcttcaa ttaccaagaa 3000
ttctccaaaa caattttctg caggatgatt gtacagaatc attgcttatg acatgatcgc 3060
tttctacact gtattacata aataaattaa ataaaataac cccgggcaag acttttcttt 3120
gaaggatgac tacagacatt aaataatcga agtaattttg ggtggggaga agaggcagat 3180
tcaattttct ttaaccagtc tgaagtttca tttatgatac aaaagaagat gaaaatggaa 3240
gtggcaatat aaggggatga ggaaggcatg cctggacaaa cccttctttt aagatgtgtc 3300
ttcaatttgt ataaaatggt gttttcatgt aaataaatac attcttggag gagc 3354
<210> 10
<211> 8331
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: recombinant
plasmid
<400> 10
acgaaagggc ctcgtgatac gcctattttt ataggttaat gtcatgataa taatggtttc 60
ttaggacgga tcgcttgcct gtaacttaca cgcgcctcgt atcttttaat gatggaataa 120
tttgggaatt tactctgtgt ttatttattt ttatgttttg tatttggatt ttagaaagta 180
aataaagaag gtagaagagt tacggaatga agaaaaaaaa ataaacaaag gtttaaaaaa 240
tttcaacaaa aagcgtactt tacatatata tttattagac aagaaaagca gattaaatag 300
atatacattc gattaacgat aagtaaaatg taaaatcaca ggattttcgt gtgtggtctt 360
ctacacagac aagatgaaac aattcggcat taatacctga gagcaggaag agcaagataa 420
aaggtagtat ttgttggcga tccccctaga gtcttttaca tcttcggaaa acaaaaacta 480
ttttttcttt aatttctttt tttactttct atttttaatt tatatattta tattaaaaaa 540
tttaaattat aattattttt atagcacgtg atgaaaagga cccaggtggc acttttcggg 600
gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc 660
tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatctgc agctctggcc cgtgtctcaa 720
aatctctgat gttacattgc acaagataaa aatatatcat catgaacaat aaaactgtct 780
gcttacataa acagtaatac aaggggtgtt atgagccata ttcaacggga aacgtcttgc 840
tggaggccgc gattaaattc caacatggat gctgatttat atgggtataa atgggctcgc 900
gataatgtcg ggcaatcagg tgcgacaatc tttcgattgt atgggaagcc cgatgcgcca 960
gagttgtttc tgaaacatgg caaaggtagc gttgccaatg atgttacaga tgagatggtc 1020
agactaaact ggctgacgga atttatgcct cttccgacca tcaagcattt tatccgtact 1080
cctgatgatg catggttact caccactgcg atccgcggga aaacagcatt ccaggtatta 1140
gaagaatatc ctgattcagg tgaaaatatt gttgatgcgc tggcagtgtt cctgcgccgg 1200
ttgcattcga ttcctgtttg taattgtcct tttaacagcg atcgcgtatt tcgtctcgct 1260
caggcgcaat cacgaatgaa taacggtttg gttgatgcga gtgattttga tgacgagcgt 1320
aatggctggc ctgttgaaca agtctggaaa gaaatgcata cgcttttgcc attctcaccg 1380
gattcagtcg tcactcatgg tgatttctca cttgataacc ttatttttga cgaggggaaa 1440
ttaataggtt gtattgatgt tggacgagtc ggaatcgcag accgatacca ggatcttgcc 1500
atcctatgga actgcctcgg tgagttttct ccttcattac agaaacggct ttttcaaaaa 1560
tatggtattg ataatcctga tatgaataaa ttgcagtttc atttgatgct cgatgagttt 1620
ttctaatcag aattggttaa ttggttgtaa cactggcaga gcattacgct gacttgacgg 1680
gacggcgcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 1740
tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 1800
aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 1860
tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 1920
agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 1980
taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 2040
caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 2100
agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagcattgag 2160
aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 2220
gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag gggggaacgc ctggtatctt tatagtcctg 2280
tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggccga 2340
gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 2400
ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 2460
ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 2520
aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 2580
aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 2640
atgtgagtta cctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctccta 2700
tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 2760
acgccaagct cggaattaac cctcactaaa gggaacaaaa gctggtaccg atcccgagct 2820
ttgcaaatta aagccttcga gcgtcccaaa accttctcaa gcaaggtttt cagtataatg 2880
ttacatgcgt acacgcgtct gtacagaaaa aaaagaaaaa tttgaaatat aaataacgtt 2940
cttaatacta acataactat aaaaaaataa atagggacct agacttcagg ttgtctaact 3000
ccttcctttt cggttagagc ggatgtgggg ggagggcgtg aatgtaagcg tgacataact 3060
aattacatga tatcgacaaa ggaaaagggg cctgtttact cacaggcttt tttcaagtag 3120
gtaattaagt cgtttctgtc tttttccttc ttcaacccac caaaggccat cttggtactt 3180
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3240
tttttttttt tttttttttt tttttttttt ttcatagaaa taatacagaa gtagatgttg 3300
aattagatta aactgaagat atataattta ttggaaaata catagagctt tttgttgatg 3360
cgcttaagcg atcaattcaa caacaccacc agcagctctg attttttctt cagccaactt 3420
ggagacgaat ctagctttga cgataactgg aacatttgga attctaccct tacccaagat 3480
cttaccgtaa ccggctgcca aagtgtcaat aactggagca gtttccttag aagcagattt 3540
caagtattgg tctctcttgt cttctgggat caatgtccac aatttgtcca agttcaagac 3600
tggcttccag aaatgagctt gttgcttgtg gaagtatctc ataccaacct taccgaaata 3660
acctggatgg tatttatcca tgttaattct gtggtgatgt tgaccaccgg ccatacctct 3720
accaccgggg tgctttctgt gcttaccgat acgaccttta ccggctgaga cgtgacctct 3780
gtgctttcta gtcttagtga atctggaagg cattcttgat tagttggatg attgttctgg 3840
gatttaatgc aaaaatcact taagaaggaa aatcaacgga gaaagcaaac gccatcttaa 3900
atatacggga tacagatgaa agggtttgaa cctatctgga aaatagcatt aaacaagcga 3960
aaaactgcga ggaaaattgt ttgcgtctct gcgggctatt cacgcgccag aggaaaatag 4020
gaaaaataac agggcattag aaaaataatt ttgattttgg taatgtgtgg gtcctggtgt 4080
acagatgtta cattggttac agtactcttg tttttgctgt gtttttcgat gaatctccaa 4140
aatggttgtt agcacatgga agagtcaccg atgctaagtt atctctatgt aagctacgtg 4200
gcgtgacttt tgatgaagcc gcacaagaga tacaggattg gcaactgcaa atagaatctg 4260
gggatccccc ctcgacggat gcaagggttc gaatccctta gctctcatta ttttttgctt 4320
tttctcttga ggtsgtcaca tgatcgcaaa atggcaaatg gcacgtgaag ctgtcgatat 4380
tggggaactg tggtggttgg caaatgacta attaagttag tcaaggcgcc atcctcatga 4440
aaactgtgta acataataac cgaagtgtcg aaaaggtggc accttgtcca attgaacacg 4500
ctcgatgaaa aaaataagat atatataagg ttaagtaaag cgtctgttag aaaggaagtt 4560
tttccttttt cttgctctct tgtcttttca tctactattt ccttcgtgta atacagggtc 4620
gtcagataca tagatacaat tctattaccc ccatccatac atctagaact agtggatccc 4680
ccgggctgca ggaattcgat atcaagcttc acagctagcg cactcggtgc cccgcgcagg 4740
gtcgcgatgc tgcccggttt ggcactgttc ctgctggccg cctggacggc tcgggcgctg 4800
gatgcagaat tccgacatga ctcaggatat gaagttcatc atcaaaaatt ggtgttcttt 4860
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgca atcattggac tcatggtggg cggtgttgtc 4920
atagcgacag tgatcgtcat caccttggtg atgctgaaga agaaacagta cacatccatt 4980
catcatggtg tggtggaggt tgacgccgct gtcaccccag aggagcgcca cctgtccaag 5040
atgcagcaga acggctacga aaatccaacc tacaagttct ttgagcagat gcagaacgcg 5100
cggggtaccc cggcgatgaa gctactgtct tctatcgaac aagcatgcga tatttgccga 5160
cttaaaaagc tcaagtgctc caaagaaaaa ccgaagtgcg ccaagtgtct gaagaacaac 5220
tgggagtgtc gctactctcc caaaaccaaa aggtctccgc tgactagggc acatctgaca 5280
gaagtggaat caaggctaga aagactggaa cagctatttc tactgatttt tcctcgagaa 5340
gaccttgaca tgattttgaa aatggattct ttacaggata taaaagcatt gttaacagga 5400
ttatttgtac aagataatgt gaataaagat gccgtcacag atagattggc ttcagtggag 5460
actgatatgc ctctaacatt gagacagcat agaataagtg cgacatcatc atcggaagag 5520
agtagtaaca aaggtcaaag acagttgact gtatcgccgg aattcccggg gatctgggcc 5580
cccccgaccg atgtcagcct gggggacgag ctccacttag acggcgagga cgtggcgatg 5640
gcgcatgccg acgcgctaga cgatttcgat ctggacatgt tgggggacgg ggattccccg 5700
gggccgggat ttacccccca cgactccgcc ccctacggcg ctctggatat ggccgacttc 5760
gagtttgagc agatgtttac cgatgccctt ggaattgacg agtacggtgg gtagggatcc 5820
actagtccag tgtggtggaa ttctgcagat atccagcaca gtggcggccg ctcgaccccg 5880
ggtgctagca aggccttgtg gccagccatg gcaactagtg cggccgctaa gtaagtaaga 5940
cgtcgagctc taagtaagta acggccgcca ccgcggtgga gctttggact tcttcgccag 6000
aggtttggtc aagtctccaa tcaaggttgt cggcttgtct accttgccag aaatttacga 6060
aaagatggaa aagggtcaaa tcgttggtag atacgttgtt gacacttcta aataagcgaa 6120
tttcttatga tttatgattt ttattattaa ataagttata aaaaaaataa gtgtatacaa 6180
attttaaagt gactcttagg ttttaaaacg aaaattcttg ttcttgagta actctttcct 6240
gtaggtcagg ttgctttctc aggtatagca tgaggtcgct cttattgacc acacctctac 6300
cggcatgccg agcaaatgcc tgcaaatcgc tccccatttc acccaattgt agatatgcta 6360
actccagcaa tgagttgatg aatctcggtg tgtattttat gtcctcagag gacaatacct 6420
gttgtaatcg ttcttccaca cggatcccaa ttcgccctat agtgagtcgt attacaattc 6480
actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc aacttaatcg 6540
ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc gcaccgatcg 6600
cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggacg cgccctgtag cggcgcatta 6660
agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg 6720
cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa 6780
gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc 6840
aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt 6900
cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca 6960
acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc 7020
tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattttaa caaaatatta 7080
acgtttacaa tttcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt atttcacacc 7140
gcaggcaagt gcacaaacaa tacttaaata aatactactc agtaataacc tatttcttag 7200
catttttgac gaaatttgct attttgttag agtcttttac accatttgtc tccacacctc 7260
cgcttacatc aacaccaata acgccattta atctaagcgc atcaccaaca ttttctggcg 7320
tcagtccacc agctaacata aaatgtaagc tttcggggct ctcttgcctt ccaacccagt 7380
cagaaatcga gttccaatcc aaaagttcac ctgtcccacc tgcttctgaa tcaaacaagg 7440
gaataaacga atgaggtttc tgtgaagctg cactgagtag tatgttgcag tcttttggaa 7500
atacgagtct tttaataact ggcaaaccga ggaactcttg gtattcttgc cacgactcat 7560
ctccatgcag ttggacgata tcaatgccgt aatcattgac cagagccaaa acatcctcct 7620
taggttgatt acgaaacacg ccaaccaagt atttcggagt gcctgaacta tttttatatg 7680
cttttacaag acttgaaatt ttccttgcaa taaccgggtc aattgttctc tttctattgg 7740
gcacacatat aatacccagc aagtcagcat cggaatctag agcacattct gcggcctctg 7800
tgctctgcaa gccgcaaact ttcaccaatg gaccagaact acctgtgaaa ttaataacag 7860
acatactcca agctgccttt gtgtgcttaa tcacgtatac tcacgtgctc aatagtcacc 7920
aatgccctcc ctcttggccc tctccttttc ttttttcgac cgaattaatt cttaatcggc 7980
aaaaaaagaa aagctccgga tcaagattgt acgtaaggtg acaagctatt tttcaataaa 8040
gaatatcttc cactactgcc atctggcgtc ataactgcaa agtacacata tattacgatg 8100
ctgtctatta aatgcttcct atattatata tatagtaatg tcgtttatgg tgcactctca 8160
gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg 8220
acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct 8280
ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg a 8331
<210> 11
<211> 355
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutein
<400> 11
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Phe Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
1 5 10 15
Ala Leu Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His
20 25 30
Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala
35 40 45
Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val
50 55 60
Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser Ile His His
65 70 75 80
Gly Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu Arg His Leu
85 90 95
Ser Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr Lys Phe Phe
100 105 110
Glu Gln Met Gln Asn Ala Arg Gly Thr Pro Ala Met Lys Leu Leu Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu Lys Lys Leu Lys Cys
130 135 140
Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu Lys Asn Asn Trp Glu
145 150 155 160
Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro Leu Thr Arg Ala His
165 170 175
Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu Glu Gln Leu Phe Leu
180 185 190
Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile Leu Lys Met Asp Ser
195 200 205
Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu Phe Val Gln Asp Asn
210 215 220
Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala Ser Val Glu Thr Asp
225 230 235 240
Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser Ala Thr Ser Ser Ser
245 250 255
Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu Thr Val Ser Pro Glu
260 265 270
Phe Pro Gly Ile Trp Ala Pro Pro Thr Asp Val Ser Leu Gly Asp Glu
275 280 285
Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala His Ala Asp Ala Leu
290 295 300
Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly Asp Ser Pro Gly Pro
305 310 315 320
Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly Ala Leu Asp Met Ala
325 330 335
Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly Ile Asp Glu
340 345 350
Tyr Gly Gly
355
<210> 12
<211> 22
<212> PRT
<213> Saccharomyces cerevisiae
<400> 12
Met Leu Leu Arg Ala Phe Leu Phe Leu Leu Ala Gly Phe Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ala Ala Leu Ala
20
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Signal peptide
<400> 13
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 14
<211> 308
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutein
<400> 14
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Phe Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg
1 5 10 15
Ala Leu Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His
20 25 30
Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala
35 40 45
Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val
50 55 60
Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gly Arg Ser Gly Lys Leu Leu
65 70 75 80
Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu Lys Lys Leu Lys
85 90 95
Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu Lys Asn Asn Trp
100 105 110
Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro Leu Thr Arg Ala
115 120 125
His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu Glu Gln Leu Phe
130 135 140
Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile Leu Lys Met Asp
145 150 155 160
Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu Phe Val Gln Asp
165 170 175
Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala Ser Val Glu Thr
180 185 190
Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser Ala Thr Ser Ser
195 200 205
Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu Thr Val Ser Pro
210 215 220
Glu Phe Pro Gly Ile Trp Ala Pro Pro Thr Asp Val Ser Leu Gly Asp
225 230 235 240
Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala His Ala Asp Ala
245 250 255
Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly Asp Ser Pro Gly
260 265 270
Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly Ala Leu Asp Met
275 280 285
Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly Ile Asp
290 295 300
Glu Tyr Gly Gly
305
<210> 15
<211> 6454
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutagen
<400> 15
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttaact ggcttatcga aattaatacg actcactata gggagaccca agcttctgcc 900
tgccgcctgc ctgcctgcca ctgagggttc ccagcaccat gagggcctgg atcttctttc 960
tcctttgcct ggccgggagg gctctggcag ccccgctagc tgatgcagaa ttccgacatg 1020
actcaggata tgaagttcat catcaaaaat tggtgttctt tgcagaagat gtgggttcaa 1080
acaaaggtgc aatcattgga ctcatggtgg gcggtgttgt catagcgaca gtgatcgtca 1140
tcaccttggt gatgctgaag aagaaaggta gatctggcaa gctactgtct tctatcgaac 1200
aagcatgcga tatttgccga cttaaaaagc tcaagtgctc caaagaaaaa ccgaagtgcg 1260
ccaagtgtct gaagaacaac tgggagtgtc gctactctcc caaaaccaaa aggtctccgc 1320
tgactagggc acatctgaca gaagtggaat caaggctaga aagactggaa cagctatttc 1380
tactgatttt tcctcgagaa gaccttgaca tgattttgaa aatggattct ttacaggata 1440
taaaagcatt gttaacagga ttatttgtac aagataatgt gaataaagat gccgtcacag 1500
atagattggc ttcagtggag actgatatgc ctctaacatt gagacagcat agaataagtg 1560
cgacatcatc atcggaagag agtagtaaca aaggtcaaag acagttgact gtatcgccgg 1620
aattcccggg gatctgggcc cccccgaccg atgtcagcct gggggacgag ctccacttag 1680
acggcgagga cgtggcgatg gcgcatgccg acgcgctaga cgatttcgat ctggacatgt 1740
tgggggacgg ggattccccg ggtccgggat ttacccccca cgactccgcc ccctacggcg 1800
ctctggatat ggccgacttc gagtttgagc agatgtttac cgatgccctt ggaattgacg 1860
agtacggtgg gggttagaaa atcgataccg tcgaggccgc tcgagcatgc atctagaggg 1920
ccctattcta tagtgtcacc taaatgctag agctcgctga tcagcctcga ctgtgccttc 1980
tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc 2040
cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg 2100
tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa 2160
tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggaacca gctggggctc gaggggggat 2220
ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg 2280
accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc 2340
gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg gcatcccttt agggttccga 2400
tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt 2460
gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat 2520
agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat 2580
ttataaggga ttttggggat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa 2640
tttaacgcga attttaacaa aatattaacg tttacaattt aaatatttgc ttatacaatc 2700
ttcctgtttt tggggctttt ctgattatca accggggtgg gtaccgagct cgaattctgt 2760
ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccaggcagg cagaagtatg 2820
caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 2880
ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact 2940
ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta 3000
atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag 3060
tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcccgggagc ttggatatcc 3120
attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga 3180
ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa 3240
cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt 3300
ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaggacga ggcagcgcgg 3360
ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa 3420
gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac 3480
cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt 3540
gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact 3600
cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg 3660
ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg 3720
acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt ttctggattc 3780
atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt 3840
gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc 3900
gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg 3960
ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg 4020
attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct 4080
ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccacccc aacttgttta 4140
ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat 4200
ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct 4260
ggatcccgtc gacctcgaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa 4320
ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg 4380
gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca 4440
gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg 4500
tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 4560
gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 4620
ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 4680
ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 4740
acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 4800
tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc 4860
ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc 4920
ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 4980
ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 5040
actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga 5100
gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc 5160
tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 5220
caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 5280
atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 5340
acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 5400
ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 5460
ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 5520
tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag 5580
tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca 5640
gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc 5700
tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 5760
tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag 5820
ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt 5880
tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat 5940
ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt 6000
gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc 6060
ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat 6120
cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag 6180
ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt 6240
ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg 6300
gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta 6360
ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc 6420
gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtc 6454
<210> 16
<211> 8259
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: recombinant
plasmid
<400> 16
gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt 60
cttaggacgg atcgcttgcc tgtaacttac acgcgcctcg tatcttttaa tgatggaata 120
atttgggaat ttactctgtg tttatttatt tttatgtttt gtatttggat tttagaaagt 180
aaataaagaa ggtagaagag ttacggaatg aagaaaaaaa aataaacaaa ggtttaaaaa 240
atttcaacaa aaagcgtact ttacatatat atttattaga caagaaaagc agattaaata 300
gatatacatt cgattaacga taagtaaaat gtaaaatcac aggattttcg tgtgtggtct 360
tctacacaga caagatgaaa caattcggca ttaatacctg agagcaggaa gagcaagata 420
aaaggtagta tttgttggcg atccccctag agtcttttac atcttcggaa aacaaaaact 480
attttttctt taatttcttt ttttactttc tatttttaat ttatatattt atattaaaaa 540
atttaaatta taattatttt tatagcacgt gatgaaaagg acccaggtgg cacttttcgg 600
ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg 660
ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatctg cagctctggc ccgtgtctca 720
aaatctctga tgttacattg cacaagataa aaatatatca tcatgaacaa taaaactgtc 780
tgcttacata aacagtaata caaggggtgt tatgagccat attcaacggg aaacgtcttg 840
ctggaggccg cgattaaatt ccaacatgga tgctgattta tatgggtata aatgggctcg 900
cgataatgtc gggcaatcag gtgcgacaat ctttcgattg tatgggaagc ccgatgcgcc 960
agagttgttt ctgaaacatg gcaaaggtag cgttgccaat gatgttacag atgagatggt 1020
cagactaaac tggctgacgg aatttatgcc tcttccgacc atcaagcatt ttatccgtac 1080
tcctgatgat gcatggttac tcaccactgc gatccgcggg aaaacagcat tccaggtatt 1140
agaagaatat cctgattcag gtgaaaatat tgttgatgcg ctggcagtgt tcctgcgccg 1200
gttgcattcg attcctgttt gtaattgtcc ttttaacagc gatcgcgtat ttcgtctcgc 1260
tcaggcgcaa tcacgaatga ataacggttt ggttgatgcg agtgattttg atgacgagcg 1320
taatggctgg cctgttgaac aagtctggaa agaaatgcat acgcttttgc cattctcacc 1380
ggattcagtc gtcactcatg gtgatttctc acttgataac cttatttttg acgaggggaa 1440
attaataggt tgtattgatg ttggacgagt cggaatcgca gaccgatacc aggatcttgc 1500
catcctatgg aactgcctcg gtgagttttc tccttcatta cagaaacggc tttttcaaaa 1560
atatggtatt gataatcctg atatgaataa attgcagttt catttgatgc tcgatgagtt 1620
tttctaatca gaattggtta attggttgta acactggcag agcattacgc tgacttgacg 1680
ggacggcgca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc 1740
gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg 1800
caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact 1860
ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg 1920
tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg 1980
ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac 2040
tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca 2100
cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagcattga 2160
gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc 2220
ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca ggggggaacg cctggtatct ttatagtcct 2280
gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggccg 2340
agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt ttgctggcct 2400
tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc 2460
tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg agcgcagcga gtcagtgagc 2520
gaggaagcgg aagagcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg gccgattcat 2580
taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg caacgcaatt 2640
aatgtgagtt acctcactca ttaggcaccc caggctttac actttatgct tccggctcct 2700
atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat 2760
tacgccaagc tcggaattaa ccctcactaa agggaacaaa agctggtacc gatcccgagc 2820
tttgcaaatt aaagccttcg agcgtcccaa aaccttctca agcaaggttt tcagtataat 2880
gttacatgcg tacacgcgtc tgtacagaaa aaaaagaaaa atttgaaata taaataacgt 2940
tcttaatact aacataacta taaaaaaata aatagggacc tagacttcag gttgtctaac 3000
tccttccttt tcggttagag cggatgtggg gggagggcgt gaatgtaagc gtgacataac 3060
taattacatg atatcgacaa aggaaaaggg gcctgtttac tcacaggctt ttttcaagta 3120
ggtaattaag tcgtttctgt ctttttcctt cttcaaccca ccaaaggcca tcttggtact 3180
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt 3240
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttcatagaa ataatacaga agtagatgtt 3300
gaattagatt aaactgaaga tatataattt attggaaaat acatagagct ttttgttgat 3360
gcgcttaagc gatcaattca acaacaccac cagcagctct gattttttct tcagccaact 3420
tggagacgaa tctagctttg acgataactg gaacatttgg aattctaccc ttacccaaga 3480
tcttaccgta accggctgcc aaagtgtcaa taactggagc agtttcctta gaagcagatt 3540
tcaagtattg gtctctcttg tcttctggga tcaatgtcca caatttgtcc aagttcaaga 3600
ctggcttcca gaaatgagct tgttgcttgt ggaagtatct cataccaacc ttaccgaaat 3660
aacctggatg gtatttatcc atgttaattc tgtggtgatg ttgaccaccg gccatacctc 3720
taccaccggg gtgctttctg tgcttaccga tacgaccttt accggctgag acgtgacctc 3780
tgtgctttct agtcttagtg aatctggaag gcattcttga ttagttggat gattgttctg 3840
ggatttaatg caaaaatcac ttaagaagga aaatcaacgg agaaagcaaa cgccatctta 3900
aatatacggg atacagatga aagggtttga acctatctgg aaaatagcat taaacaagcg 3960
aaaaactgcg aggaaaattg tttgcgtctc tgcgggctat tcacgcgcca gaggaaaata 4020
ggaaaaataa cagggcatta gaaaaataat tttgattttg gtaatgtgtg ggtcctggtg 4080
tacagatgtt acattggtta cagtactctt gtttttgctg tgtttttcga tgaatctcca 4140
aaatggttgt tagcacatgg aagagtcacc gatgctaagt tatctctatg taagctacgt 4200
ggcgtgactt ttgatgaagc cgcacaagag atacaggatt ggcaactgca aatagaatct 4260
ggggatcccc cctcgacgga tgcaagggtt cgaatccctt agctctcatt attttttgct 4320
ttttctcttg aggtcacatg atcgcaaaat ggcaaatggc acgtgaagct gtcgatattg 4380
gggaactgtg gtggttggca aatgactaat taagttagtc aaggcgccat cctcatgaaa 4440
actgtgtaac ataataaccg aagtgtcgaa aaggtggcac cttgtccaat tgaacacgct 4500
cgatgaaaaa aataagatat atataaggtt aagtaaagcg tctgttagaa aggaagtttt 4560
tcctttttct tgctctcttg tcttttcatc tactatttcc ttcgtgtaat acagggtcgt 4620
cagatacata gatacaattc tattaccccc atccatactc tagaatgctt ttgcgagctt 4680
tccttttcct cttggctggt tttgcagcca aaatatctgc agcgctagct gatgcagaat 4740
tccgacatga ctcaggatat gaagttcatc atcaaaaatt ggtgttcttt gcagaagatg 4800
tgggttcaaa caaaggtgca atcattggac tcatggtggg cggtgttgtc atagcgacag 4860
tgatcgtcat caccttggtg atgctgaaga agaaaggtag atctggcaag ctactgtctt 4920
ctatcgaaca agcatgcgat atttgccgac ttaaaaagct caagtgctcc aaagaaaaac 4980
cgaagtgcgc caagtgtctg aagaacaact gggagtgtcg ctactctccc aaaaccaaaa 5040
ggtctccgct gactagggca catctgacag aagtggaatc aaggctagaa agactggaac 5100
agctatttct actgattttt cctcgagaag accttgacat gattttgaaa atggattctt 5160
tacaggatat aaaagcattg ttaacaggat tatttgtaca agataatgtg aataaagatg 5220
ccgtcacaga tagattggct tcagtggaga ctgatatgcc tctaacattg agacagcata 5280
gaataagtgc gacatcatca tcggaagaga gtagtaacaa aggtcaaaga cagttgactg 5340
tatcgccgga attcccgggg atctgggccc ccccgaccga tgtcagcctg ggggacgagc 5400
tccacttaga cggcgaggac gtggcgatgg cgcatgccga cgcgctagac gatttcgatc 5460
tggacatgtt gggggacggg gattccccgg gtccgggatt taccccccac gactccgccc 5520
cctacggcgc tctggatatg gccgacttcg agtttgagca gatgtttacc gatgcccttg 5580
gaattgacga gtacggtggg ggtactagtg gccagtacac atccattcat catggtgtgg 5640
tggaggttga cgccgctgtc accccagagg agcgccacct gtccaagatg cagcagaacg 5700
gctacgaaaa tccaacctac aagttctttg agcagatgca gaacggcgcc tagggatccc 5760
ccgggctgca ggaattcgat atcaagctta tcgataccgt cgaccccggg tgctagcaag 5820
gccttgtggc cagccatggc aactagtgcg gccgctaagt aagtaagacg tcgagctcta 5880
agtaagtaac ggccgccacc gcggtggagc tttggacttc ttcgccagag gtttggtcaa 5940
gtctccaatc aaggttgtcg gcttgtctac cttgccagaa atttacgaaa agatggaaaa 6000
gggtcaaatc gttggtagat acgttgttga cacttctaaa taagcgaatt tcttatgatt 6060
tatgattttt attattaaat aagttataaa aaaaataagt gtatacaaat tttaaagtga 6120
ctcttaggtt ttaaaacgaa aattcttgtt cttgagtaac tctttcctgt aggtcaggtt 6180
gctttctcag gtatagcatg aggtcgctct tattgaccac acctctaccg gcatgccgag 6240
caaatgcctg caaatcgctc cccatttcac ccaattgtag atatgctaac tccagcaatg 6300
agttgatgaa tctcggtgtg tattttatgt cctcagagga caatacctgt tgtaatcgtt 6360
cttccacacg gatcccaatt cgccctatag tgagtcgtat tacaattcac tggccgtcgt 6420
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 6480
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 6540
gttgcgcagc ctgaatggcg aatggacgcg ccctgtagcg gcgcattaag cgcggcgggt 6600
gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccctagcgcc cgctcctttc 6660
gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc tctaaatcgg 6720
gggctccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa aaaacttgat 6780
tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg ccctttgacg 6840
ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac actcaaccct 6900
atctcggtct attcttttga tttataaggg attttgccga tttcggccta ttggttaaaa 6960
aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattttaaca aaatattaac gtttacaatt 7020
tcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc aggcaagtgc 7080
acaaacaata cttaaataaa tactactcag taataaccta tttcttagca tttttgacga 7140
aatttgctat tttgttagag tcttttacac catttgtctc cacacctccg cttacatcaa 7200
caccaataac gccatttaat ctaagcgcat caccaacatt ttctggcgtc agtccaccag 7260
ctaacataaa atgtaagctt tcggggctct cttgccttcc aacccagtca gaaatcgagt 7320
tccaatccaa aagttcacct gtcccacctg cttctgaatc aaacaaggga ataaacgaat 7380
gaggtttctg tgaagctgca ctgagtagta tgttgcagtc ttttggaaat acgagtcttt 7440
taataactgg caaaccgagg aactcttggt attcttgcca cgactcatct ccatgcagtt 7500
ggacgatatc aatgccgtaa tcattgacca gagccaaaac atcctcctta ggttgattac 7560
gaaacacgcc aaccaagtat ttcggagtgc ctgaactatt tttatatgct tttacaagac 7620
ttgaaatttt ccttgcaata accgggtcaa ttgttctctt tctattgggc acacatataa 7680
tacccagcaa gtcagcatcg gaatctagag cacattctgc ggcctctgtg ctctgcaagc 7740
cgcaaacttt caccaatgga ccagaactac ctgtgaaatt aataacagac atactccaag 7800
ctgcctttgt gtgcttaatc acgtatactc acgtgctcaa tagtcaccaa tgccctccct 7860
cttggccctc tccttttctt ttttcgaccg aattaattct taatcggcaa aaaaagaaaa 7920
gctccggatc aagattgtac gtaaggtgac aagctatttt tcaataaaga atatcttcca 7980
ctactgccat ctggcgtcat aactgcaaag tacacatata ttacgatgct gtctattaaa 8040
tgcttcctat attatatata tagtaatgtc gtttatggtg cactctcagt acaatctgct 8100
ctgatgccgc atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac 8160
gggcttgtct gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctcc gggagctgca 8220
tgtgtcagag gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcga 8259
<210> 17
<211> 1089
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutagen
<400> 17
atgcttttgc gagctttcct tttcctcttg gctggttttg cagccaaaat atctgcagcg 60
ctagctgatg cagaattccg acatgactca ggatatgaag ttcatcatca aaaattggtg 120
ttctttgcag aagatgtggg ttcaaacaaa ggtgcaatca ttggactcat ggtgggcggt 180
gttgtcatag cgacagtgat cgtcatcacc ttggtgatgc tgaagaagaa aggtagatct 240
ggcaagctac tgtcttctat cgaacaagca tgcgatattt gccgacttaa aaagctcaag 300
tgctccaaag aaaaaccgaa gtgcgccaag tgtctgaaga acaactggga gtgtcgctac 360
tctcccaaaa ccaaaaggtc tccgctgact agggcacatc tgacagaagt ggaatcaagg 420
ctagaaagac tggaacagct atttctactg atttttcctc gagaagacct tgacatgatt 480
ttgaaaatgg attctttaca ggatataaaa gcattgttaa caggattatt tgtacaagat 540
aatgtgaata aagatgccgt cacagataga ttggcttcag tggagactga tatgcctcta 600
acattgagac agcatagaat aagtgcgaca tcatcatcgg aagagagtag taacaaaggt 660
caaagacagt tgactgtatc gccggaattc ccggggatct gggccccccc gaccgatgtc 720
agcctggggg acgagctcca cttagacggc gaggacgtgg cgatggcgca tgccgacgcg 780
ctagacgatt tcgatctgga catgttgggg gacggggatt ccccggggcc gggatttacc 840
ccccacgact ccgcccccta cggcgctctg gatatggccg acttcgagtt tgagcagatg 900
tttaccgatg cccttggaat tgacgagtac ggtgggggta ctagtggcca gtacacatcc 960
attcatcatg gtgtggtgga ggttgacgcc gctgtcaccc cagaggagcg ccacctgtcc 1020
aagatgcagc agaacggcta cgaaaatcca acctacaagt tctttgagca gatgcagaac 1080
ggcgcctag 1089
<210> 18
<211> 362
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutein
<400> 18
Met Leu Leu Arg Ala Phe Leu Phe Leu Leu Ala Gly Phe Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ala Ala Leu Ala Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr
20 25 30
Glu Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser
35 40 45
Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
50 55 60
Thr Val Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gly Arg Ser
65 70 75 80
Gly Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu
85 90 95
Lys Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu
100 105 110
Lys Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro
115 120 125
Leu Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu
130 135 140
Glu Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile
145 150 155 160
Leu Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu
165 170 175
Phe Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala
180 185 190
Ser Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser
195 200 205
Ala Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu
210 215 220
Thr Val Ser Pro Glu Phe Pro Gly Ile Trp Ala Pro Pro Thr Asp Val
225 230 235 240
Ser Leu Gly Asp Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala
245 250 255
His Ala Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly
260 265 270
Asp Ser Pro Gly Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly
275 280 285
Ala Leu Asp Met Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala
290 295 300
Leu Gly Ile Asp Glu Tyr Gly Gly Gly Thr Ser Gly Gln Tyr Thr Ser
305 310 315 320
Ile His His Gly Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu
325 330 335
Arg His Leu Ser Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr
340 345 350
Lys Phe Phe Glu Gln Met Gln Asn Gly Ala
355 360
<210> 19
<211> 1080
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutagen
<400> 19
atgcttttgc gagctttcct tttcctcttg gctggttttg cagccaaaat atctgcagcg 60
ctagctgatg cagaattccg acatgactca ggatatgaag ttcatcatca aaaattggtg 120
ttctttgcag aagatgtggg ttcaaacaaa ggtgcaatca ttggactcat ggtgggcggt 180
gttgtcatag cgacagtgat cgtcatcacc ttggtgatgc tgaagaagaa acagtacaca 240
tccattcatc atggtgtggt ggaggttgac gccgctgtca ccccagagga gcgccacctg 300
tccaagatgc agcagaacgg ctacgaaaat ccaacctaca agttctttga gcagatgcag 360
aacgcgcggg gtaccccggc gatgaagcta ctgtcttcta tcgaacaagc atgcgatatt 420
tgccgactta aaaagctcaa gtgctccaaa gaaaaaccga agtgcgccaa gtgtctgaag 480
aacaactggg agtgtcgcta ctctcccaaa accaaaaggt ctccgctgac tagggcacat 540
ctgacagaag tggaatcaag gctagaaaga ctggaacagc tatttctact gatttttcct 600
cgagaagacc ttgacatgat tttgaaaatg gattctttac aggatataaa agcattgtta 660
acaggattat ttgtacaaga taatgtgaat aaagatgccg tcacagatag attggcttca 720
gtggagactg atatgcctct aacattgaga cagcatagaa taagtgcgac atcatcatcg 780
gaagagagta gtaacaaagg tcaaagacag ttgactgtat cgccggaatt cccggggatc 840
tgggcccccc cgaccgatgt cagcctgggg gacgagctcc acttagacgg cgaggacgtg 900
gcgatggcgc atgccgacgc gctagacgat ttcgatctgg acatgttggg ggacggggat 960
tccccgggtc cgggatttac cccccacgac tccgccccct acggcgctct ggatatggcc 1020
gacttcgagt ttgagcagat gtttaccgat gcccttggaa ttgacgagta cggtgggtag 1080
<210> 20
<211> 359
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutein
<400> 20
Met Leu Leu Arg Ala Phe Leu Phe Leu Leu Ala Gly Phe Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ala Ala Leu Ala Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr
20 25 30
Glu Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser
35 40 45
Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala
50 55 60
Thr Val Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr
65 70 75 80
Ser Ile His His Gly Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu
85 90 95
Glu Arg His Leu Ser Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr
100 105 110
Tyr Lys Phe Phe Glu Gln Met Gln Asn Ala Arg Gly Thr Pro Ala Met
115 120 125
Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu Lys
130 135 140
Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu Lys
145 150 155 160
Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro Leu
165 170 175
Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu Glu
180 185 190
Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile Leu
195 200 205
Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu Phe
210 215 220
Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala Ser
225 230 235 240
Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser Ala
245 250 255
Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu Thr
260 265 270
Val Ser Pro Glu Phe Pro Gly Ile Trp Ala Pro Pro Thr Asp Val Ser
275 280 285
Leu Gly Asp Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala His
290 295 300
Ala Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly Asp
305 310 315 320
Ser Pro Gly Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly Ala
325 330 335
Leu Asp Met Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala Leu
340 345 350
Gly Ile Asp Glu Tyr Gly Gly
355
<210> 21
<211> 1074
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutagen
<400> 21
atgagggcct ggatcttctt tctcctttgc ctggccggga gggctctggc agccccgcta 60
gctgatgcag aattccgaca tgactcagga tatgaagttc atcatcaaaa attggtgttc 120
tttgcagaag atgtgggttc aaacaaaggt gcaatcattg gactcatggt gggcggtgtt 180
gtcatagcga cagtgatcgt catcaccttg gtgatgctga agaagaaaca gtacacatcc 240
attcatcatg gtgtggtgga ggttgacgcc gctgtcaccc cagaggagcg ccacctgtcc 300
aagatgcagc agaacggcta cgaaaatcca acctacaagt tctttgagca gatgcagaac 360
gcgcggggta ccccggcgat gaagctactg tcttctatcg aacaagcatg cgatatttgc 420
cgacttaaaa agctcaagtg ctccaaagaa aaaccgaagt gcgccaagtg tctgaagaac 480
aactgggagt gtcgctactc tcccaaaacc aaaaggtctc cgctgactag ggcacatctg 540
acagaagtgg aatcaaggct agaaagactg gaacagctat ttctactgat ttttcctcga 600
gaagaccttg acatgatttt gaaaatggat tctttacagg atataaaagc attgttaaca 660
ggattatttg tacaagataa tgtgaataaa gatgccgtca cagatagatt ggcttcagtg 720
gagactgata tgcctctaac attgagacag catagaataa gtgcgacatc atcatcggaa 780
gagagtagta acaaaggtca aagacagttg actgtatcgc cggaattccc ggggatctgg 840
gcccccccga ccgatgtcag cctgggggac gagctccact tagacggcga ggacgtggcg 900
atggcgcatg ccgacgcgct agacgatttc gatctggaca tgttggggga cggggattcc 960
ccgggtccgg gatttacccc ccacgactcc gccccctacg gcgctctgga tatggccgac 1020
ttcgagtttg agcagatgtt taccgatgcc cttggaattg acgagtacgg tggg 1074
<210> 22
<211> 358
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Mutein
<400> 22
Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu
1 5 10 15
Ala Ala Pro Leu Ala Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu
20 25 30
Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn
35 40 45
Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala Thr
50 55 60
Val Ile Val Ile Thr Leu Val Met Leu Lys Lys Lys Gln Tyr Thr Ser
65 70 75 80
Ile His His Gly Val Val Glu Val Asp Ala Ala Val Thr Pro Glu Glu
85 90 95
Arg His Leu Ser Lys Met Gln Gln Asn Gly Tyr Glu Asn Pro Thr Tyr
100 105 110
Lys Phe Phe Glu Gln Met Gln Asn Ala Arg Gly Thr Pro Ala Met Lys
115 120 125
Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu Lys Lys
130 135 140
Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu Lys Asn
145 150 155 160
Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro Leu Thr
165 170 175
Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu Glu Gln
180 185 190
Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile Leu Lys
195 200 205
Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu Phe Val
210 215 220
Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala Ser Val
225 230 235 240
Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser Ala Thr
245 250 255
Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu Thr Val
260 265 270
Ser Pro Glu Phe Pro Gly Ile Trp Ala Pro Pro Thr Asp Val Ser Leu
275 280 285
Gly Asp Glu Leu His Leu Asp Gly Glu Asp Val Ala Met Ala His Ala
290 295 300
Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Asp Gly Asp Ser
305 310 315 320
Pro Gly Pro Gly Phe Thr Pro His Asp Ser Ala Pro Tyr Gly Ala Leu
325 330 335
Asp Met Ala Asp Phe Glu Phe Glu Gln Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Asp Glu Tyr Gly Gly
355
<210> 23
<211> 95
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 23
gctctagaat gcttttgcaa gctttccttt tccttttggc tggttttgca gccaaaatat 60
ctgcagcgct agctgatgca gaattccgac atgac 95
<210> 24
<211> 39
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 24
cgggatccct aggcgccgtt ctgcatctgc tcaaagaac 39
<210> 25
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 25
actatatcta gaatgctttt gc 22
<210> 26
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 26
ttcgatagaa gacagtagct tgccagatct acctttcttc ttcagcatca ccaa 54
<210> 27
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 27
ttggtgatgc tgaagaagaa aggtagatct ggcaagctac tgtcttctat cgaa 54
<210> 28
<211> 52
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 28
atgatgaatg gatgtgtact ggccactagt acccccaccg tactcgtcaa tt 52
<210> 29
<211> 52
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 29
aattgacgag tacggtgggg gtactagtgg ccagtacaca tccattcatc at 52
<210> 30
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 30
cgataagctt gatatcgaat tc 22
<210> 31
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Primer
<400> 31
ccatcgattt tctaaccccc accgta 26
<210> 32
<211> 6634
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: recombinant
plasmid
<400> 32
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttaact ggcttatcga aattaatacg actcactata gggagaccca agcttctgcc 900
tgccgcctgc ctgcctgcca ctgagggttc ccagcaccat gagggcctgg atcttctttc 960
tcctttgcct ggccgggagg gctctggcag ccccgctagc tgatgcagaa ttccgacatg 1020
actcaggata tgaagttcat catcaaaaat tggtgttctt tgcagaagat gtgggttcaa 1080
acaaaggtgc aatcattgga ctcatggtgg gcggtgttgt catagcgaca gtgatcgtca 1140
tcaccttggt gatgctgaag aagaaaggta gatctggcaa gctactgtct tctatcgaac 1200
aagcatgcga tatttgccga cttaaaaagc tcaagtgctc caaagaaaaa ccgaagtgcg 1260
ccaagtgtct gaagaacaac tgggagtgtc gctactctcc caaaaccaaa aggtctccgc 1320
tgactagggc acatctgaca gaagtggaat caaggctaga aagactggaa cagctatttc 1380
tactgatttt tcctcgagaa gaccttgaca tgattttgaa aatggattct ttacaggata 1440
taaaagcatt gttaacagga ttatttgtac aagataatgt gaataaagat gccgtcacag 1500
atagattggc ttcagtggag actgatatgc ctctaacatt gagacagcat agaataagtg 1560
cgacatcatc atcggaagag agtagtaaca aaggtcaaag acagttgact gtatcgccgg 1620
aattcccggg gatctgggcc cccccgaccg atgtcagcct gggggacgag ctccacttag 1680
acggcgagga cgtggcgatg gcgcatgccg acgcgctaga cgatttcgat ctggacatgt 1740
tgggggacgg ggattccccg gggccgggat ttacccccca cgactccgcc ccctacggcg 1800
ctctggatat ggccgacttc gagtttgagc agatgtttac cgatgccctt ggaattgacg 1860
agtacggtgg gggtactagt ggccagtaca catccattca tcatggtgtg gtggaggttg 1920
acgccgctgt caccccagag gagcgccacc tgtccaagat gcagcagaac ggctacgaaa 1980
atccaaccta caagttcttt gagcagatgc agaacggcgc ctagggatcc cccgggctgc 2040
aggaattcga tatcaagctt atcgataccg tcgaggccgc tcgagcatgc atctagaggg 2100
ccctattcta tagtgtcacc taaatgctag agctcgctga tcagcctcga ctgtgccttc 2160
tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc 2220
cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg 2280
tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa 2340
tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggaacca gctggggctc gaggggggat 2400
ccccacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg 2460
accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc 2520
gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg gcatcccttt agggttccga 2580
tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt 2640
gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat 2700
agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat 2760
ttataaggga ttttggggat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa 2820
tttaacgcga attttaacaa aatattaacg tttacaattt aaatatttgc ttatacaatc 2880
ttcctgtttt tggggctttt ctgattatca accggggtgg gtaccgagct cgaattctgt 2940
ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccaggcagg cagaagtatg 3000
caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca 3060
ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact 3120
ccgcccatcc cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta 3180
atttttttta tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag 3240
tgaggaggct tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcccgggagc ttggatatcc 3300
attttcggat ctgatcaaga gacaggatga ggatcgtttc gcatgattga acaagatgga 3360
ttgcacgcag gttctccggc cgcttgggtg gagaggctat tcggctatga ctgggcacaa 3420
cagacaatcg gctgctctga tgccgccgtg ttccggctgt cagcgcaggg gcgcccggtt 3480
ctttttgtca agaccgacct gtccggtgcc ctgaatgaac tgcaggacga ggcagcgcgg 3540
ctatcgtggc tggccacgac gggcgttcct tgcgcagctg tgctcgacgt tgtcactgaa 3600
gcgggaaggg actggctgct attgggcgaa gtgccggggc aggatctcct gtcatctcac 3660
cttgctcctg ccgagaaagt atccatcatg gctgatgcaa tgcggcggct gcatacgctt 3720
gatccggcta cctgcccatt cgaccaccaa gcgaaacatc gcatcgagcg agcacgtact 3780
cggatggaag ccggtcttgt cgatcaggat gatctggacg aagagcatca ggggctcgcg 3840
ccagccgaac tgttcgccag gctcaaggcg cgcatgcccg acggcgagga tctcgtcgtg 3900
acccatggcg atgcctgctt gccgaatatc atggtggaaa atggccgctt ttctggattc 3960
atcgactgtg gccggctggg tgtggcggac cgctatcagg acatagcgtt ggctacccgt 4020
gatattgctg aagagcttgg cggcgaatgg gctgaccgct tcctcgtgct ttacggtatc 4080
gccgctcccg attcgcagcg catcgccttc tatcgccttc ttgacgagtt cttctgagcg 4140
ggactctggg gttcgaaatg accgaccaag cgacgcccaa cctgccatca cgagatttcg 4200
attccaccgc cgccttctat gaaaggttgg gcttcggaat cgttttccgg gacgccggct 4260
ggatgatcct ccagcgcggg gatctcatgc tggagttctt cgcccacccc aacttgttta 4320
ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat 4380
ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct 4440
ggatcccgtc gacctcgaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa 4500
ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg 4560
gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca 4620
gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg 4680
tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 4740
gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 4800
ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 4860
ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 4920
acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 4980
tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc 5040
ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc 5100
ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 5160
ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 5220
actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga 5280
gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc 5340
tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 5400
caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 5460
atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 5520
acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 5580
ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 5640
ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 5700
tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag 5760
tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca 5820
gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc 5880
tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 5940
tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag 6000
ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt 6060
tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat 6120
ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt 6180
gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc 6240
ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat 6300
cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag 6360
ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt 6420
ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg 6480
gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta 6540
ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc 6600
gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtc 6634
Claims (53)
- A.(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,(c) 프로모터 및(d) 추가의 암호화 및/또는 비암호화 뉴클레오티드 서열을 함유하고 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자(transgene)를 사용하며,B. 상기 전이유전자를 세포 내에 도입하여 융합 단백질을 발현시키고,C. 상기 융합 단백질을 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단하여, 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질을 형성시키고,D. 상기 제1 부분 단백질 및/또는 제2 부분 단백질을 검출하며,이때, 서열번호 1 이외에는, 상기 융합 단백질이 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 것을 특징으로 하는,γ-세크레타제의 활성을 검출하는 방법.
- A.(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,(c) 프로모터 및(d) 추가의 암호화 및/또는 비-암호화 뉴클레오티드 서열을 함유하고 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자를 사용하고,B. 상기 전이유전자를 세포 내에 도입하여 융합 단백질을 발현시키고,C. 상기 융합 단백질을 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단하여, 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질을 형성시키고,D. 상기 제2 부분 단백질의 양을 측정하고 γ-세크레타제 활성을 형성된 제2 부분 단백질의 양으로부터 측정하고,이때, 서열번호 1 이외에는, 상기 융합 단백질이 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 것을 특징으로 하는,γ-세크레타제의 활성을 검출하는 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 펩티드 모티프가 카스파제 절단 부위인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 또는 이의 부분을 암호화하고, 펩티드가 NPTY 및/또는 VEVD인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이, 서열번호 4의 아미노산 서열로 부터 유도된 단백질을 암호화하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 뉴클레오티드 서열이, 사람 APP(서열번호 5), SUC2(서열번호 12) 또는 BM40(서열번호 13)의 시그날 펩티드를 암호화하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 시그날 펩티드가 서열번호 5의 아미노산 서열을 가지는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 프로모터가 포유동물 세포, 씨. 엘레간스(C. elegans), 효모 또는 드로소필라(Drosophila)에서의 발현을 위한 프로모터인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 프로모터가 CMV, HSV TK, RSV, SV40, LTR, unc119, unc54, hsp16-2, G0A1, sel-12, ADH1, GAL1, MET3, MET25, MT, Ac5 또는 Ds47 프로모터인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 세포가 진핵세포인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 세포가 사람 세포인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 세포가 비-사람 세포인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제12항에 있어서, 세포가 HeLa, 293, H4, SH-SY5Y, H9, Cos, CHO, N2A, SL-2 또는 효모 세포인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제12항에 있어서, 세포가 씨. 엘레간스 세포인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제13항에 있어서, 세포가 유전자전이된(transgenic) 씨. 엘레간스의 구성분인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제13항에 있어서, 세포가 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 세포인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 융합 단백질이 서열번호 6의 아미노산 서열을 함유하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열이 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 위치하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열이, 제1 부분 단백질 및 제2 부분 단백질과의 융합 단백질로서 발현되고 제2 부분 단백질의 검출에 사용될 수 있는 단백질을 암호화하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열이, DNA-결합 도메인 및 전사-활성화 도메인을 함유하는 단백질을 암호화하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 추가의 암호화 뉴클레오티드 서열이, GAL4-결합 도메인 및 VP16의 전사-활성화 도메인으로 이루어진 단백질(GAL4-VP16)을 암호화하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 세포가, 조절가능한 프로모터의 제어하의 리포터 유전자를 함유하는 리포터 플라스미드로 공동형질감염된, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제22항에 있어서, 조절가능한 프로모터가 전사-활성화 도메인에 의해 활성화될 수 있는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제23항에 있어서, 리포터 플라스미드가 EGFP(증강된 녹색 형광 단백질), Ura 3, His 3 또는 Lac Z에 대한 리포터 유전자를 암호화하고 조절가능한 프로모터가 GAL4 결합 부위 및 HIV의 최소 프로모터를 함유하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 전이유전자(transgene)가 서열번호 14, 서열번호 18, 서열번호 20 또는 서열번호 22를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 전이유전자가 벡터 내에 존재하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 재조합 벡터가 pcDNA 3.1+인, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 내인성 γ-세크레타제 활성이 세포 내에서 전혀 검출되지 않는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 세포를 cDNA 라이브러리를 사용하여 공동형질감염시키는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제29항에 있어서, 사람 또는 비-사람 조직 또는 사람 또는 비-사람 세포로 부터 제조된 cDNA가 cDNA 라이브러리에 존재하는, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- 제28항에 있어서,a) γ-세크레타제의 활성이 검출될 수 있는 세포를 동정하고,b) γ-세크레타제를 암호화하는 cDNA를 상기 세포로 부터 분리함을 특징으로 하는, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA의 동정을 위한, γ-세크레타제의 활성 검출 방법.
- (a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,(c) 프로모터 및(d) DNA-결합 도메인 및 전사-활성화 도메인을 암호화하는, 제1 뉴클레오티드 서열의 3' 말단에 위치하는 하나 이상의 추가의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자로서, 서열번호 1 이외에는, 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 융합 단백질을 암호화함을 특징으로 하는 전이유전자.
- 제32항에 있어서, 제1 뉴클레오티드 서열이 APP 또는 APP의 부분을 암호화하는 전이유전자.
- 제32항 또는 제33항에 있어서, 서열번호 14를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 가지는 전이유전자.
- 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 포함하는 벡터.
- 제35항에 있어서, pDBTrp 또는 pcDNA 3.1+인 벡터.
- 세포를 제35항에 따른 벡터로 형질감염시켜, 유전자전이된 세포를 제조하는 방법.
- 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 씨. 엘레간스의 생식선 속에 미세주사하여, 유전자전이된 씨. 엘레간스를 제조하는 방법.
- 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 포함하는 세포.
- 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 포함하는 유전자전이된 씨. 엘레간스.
- 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 포함하는 효모 세포.
- a) 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자,b) cDNA 라이브러리, 및c) 리포터 플라스미드를 포함하는 세포.
- 제42항에 있어서, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA를 동정하기 위한 세포.
- 1) 제42항에 따른 세포를 제조하고,2) 제2 부분 단백질이 형성되었는지를 판정하여,γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프 로테인아제의 cDNA를 동정하는 방법.
- 제42항에 있어서, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성의 억제제를 동정하기 위한 방법에서 사용되는 세포.
- A.(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,(c) 프로모터 및(d) 추가의 비-암호화 및/또는 암호화 뉴클레오티드 서열을 가지며 융합 단백질을 암호화는 전이유전자로서, 서열번호 1 이외에는, 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 융합 단백질을 암호화함을 특징으로 하는 전이유전자를 함유하고,단백질 결합 부위, 최소 프로모터 및 리포터 유전자를 보유하는 리포터 플라스미드, 및 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA를 추가로 함유하고,상기 전이유전자 및 상기 cDNA에 의해 암호화되는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 발현시키는,유전자전이된 비-사람 생물체 또는 유전자전이된 세포를 제조하는 단계;B. 상기 유전자전이된 비-사람 생물체 또는 유전자전이된 세포를 연구조사하고자 하는 물질과 함께 항온배양하는 단계, 및C. 제2 부분 단백질의 양을 측정하는 단계를 포함하여, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 억제하는 물질을 동정하는 방법.
- A.(a) 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML(서열번호 1)을 함유하는 단백질을 암호화하는 제1 뉴클레오티드 서열,(b) 제1 뉴클레오티드 서열의 5' 말단에 위치하는, 시그날 펩티드를 암호화하는 제2 뉴클레오티드 서열,(c) 프로모터 및(d) 추가의 비-암호화 및/또는 암호화 뉴클레오티드 서열을 함유하고 융합 단백질을 암호화하는 전이유전자로서, 서열번호 1 이외에는, 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 융합 단백질을 암호화함을 특징으로 하는 전이유전자를 사용하고;B. 상기 전이유전자와 리포터 플라스미드, 및 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 암호화하는 cDNA를 세포 내에 도입시키고, 상기 전이유전자에 의해 암호화되는 융합 단백질, 및 상기 cDNA에 의해 암호화되는 γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제를 연구조사하고자 하는 물질의 존재하에 발현시키고;C. 상기 융합 단백질이a) 상기 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단되어, 아미노산 서열 GAIIGLMVGGVV(서열번호 2)를 함유하는 제1 부분 단백질과 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질이 형성되거나,b) 상기 세포 내에 존재하는 γ-세크레타제에 의해 서열번호 1의 아미노산 서열 내에서 절단되지 않아서, 제1 및/또는 제2 부분 단백질의 검출가능한 양이 형성되지 않으며;D. 상기 제2 부분 단백질의 양을 측정하여,γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 억제하는 물질을 동정하는 방법.
- 제32항에 따르는 전이유전자를 연구조사하고자 하는 물질의 존재하에 발현시키고,연구조사하고자 하는 물질이 아미노산 서열 VIVITLVML(서열번호 3)을 함유하는 제2 부분 단백질의 형성량에 미치는 효과를 측정하며,이때 상기 전이유전자에 암호화되는 융합 단백질이, 서열번호 1 이외에는, 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 것을 특징으로 하는, γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 억제하는 물질을 동정하는 방법.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자, 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 포함하는 벡터 또는 제32항 또는 제33항에 따른 전이유전자를 포함하는 세포를 포함하고, 이때 상기 전이유전자에 암호화되는 융합 단백질이, 서열번호 1 이외에는, 세포내이입 또는 세포외유출 및 프로테아제 절단 부위에 대한 시그날로서 작용하는 하나 이상의 펩티드 모티프를 함유하지 않는 것을 특징으로 하는,γ-세크레타제, γ-세크레타제의 아단위 단백질 또는 γ-세크레타제-유사 프로테인아제의 활성을 검출하기 위한 시험 키트.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP03011807.9 | 2003-05-26 | ||
EP20030011807 EP1481987A1 (en) | 2003-05-26 | 2003-05-26 | Method for screening inhibitors of the gamma-secretase |
PCT/EP2004/004550 WO2004104037A1 (en) | 2003-05-26 | 2004-04-29 | Method for screening inhibitors of the gamma-secretase |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20060015312A KR20060015312A (ko) | 2006-02-16 |
KR101215855B1 true KR101215855B1 (ko) | 2012-12-31 |
Family
ID=33104072
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020057022603A KR101215855B1 (ko) | 2003-05-26 | 2005-11-25 | 감마-세크레타제의 억제제를 스크리닝하는 방법 |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7892778B2 (ko) |
EP (2) | EP1481987A1 (ko) |
JP (1) | JP4903046B2 (ko) |
KR (1) | KR101215855B1 (ko) |
CN (1) | CN1795203B (ko) |
AT (1) | ATE393779T1 (ko) |
AU (1) | AU2004241151B2 (ko) |
BR (1) | BRPI0410736A (ko) |
CA (1) | CA2526790C (ko) |
DE (1) | DE602004013440T2 (ko) |
DK (1) | DK1631584T3 (ko) |
ES (1) | ES2307012T3 (ko) |
HK (1) | HK1091215A1 (ko) |
IL (1) | IL172119A (ko) |
MX (1) | MXPA05012663A (ko) |
NO (1) | NO334058B1 (ko) |
RU (1) | RU2373284C2 (ko) |
WO (1) | WO2004104037A1 (ko) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007028655A2 (en) * | 2005-09-09 | 2007-03-15 | H. Lundbeck A/S | Drug discovery for neurodevelopmental disorders and their complications |
WO2007030937A2 (en) * | 2005-09-16 | 2007-03-22 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal/I.R.C.M. | Screening proteinase modulators using a chimeric protein and ski-i proprotein convertase substrates and inhibitors |
KR100883158B1 (ko) * | 2005-10-26 | 2009-02-10 | 주식회사 뉴젝스 | 살아있는 세포에서 단백질분해효소의 활성 측정 방법 |
JP2007300856A (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Hiroshi Mori | アミロイドタンパク質模倣物 |
WO2008061673A2 (en) * | 2006-11-24 | 2008-05-29 | Synthon B.V. | Drug discovery for cancer |
CN104880441B (zh) * | 2015-05-14 | 2017-12-22 | 上海皓拓生物技术有限公司 | β‑分泌酶特异性抑制剂的筛选方法及其筛选系统 |
WO2017041037A1 (en) * | 2015-09-04 | 2017-03-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Disruption of the interaction between amyloid beta peptide and dietary lipids |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20010034884A1 (en) * | 1998-12-07 | 2001-10-25 | Gisela Peraus | Abeta-peptide screening assay |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998015828A1 (en) * | 1996-10-07 | 1998-04-16 | Scios Inc. | Method to identify direct inhibitors of the beta-amyloid forming enzyme gamma-secretase |
DE19849073A1 (de) * | 1998-10-24 | 2000-04-27 | Aventis Pharma Gmbh | Transgener C. elegans als Modellorganismus für Untersuchungen zur Alzheimer'schen Krankheit |
DE19920514A1 (de) * | 1999-05-05 | 2000-11-16 | Boehringer Ingelheim Pharma | Methoden zur Auffindung von Proteasen, die spezifisch membrangebundene Substrate spalten |
US7718391B2 (en) * | 2001-05-11 | 2010-05-18 | Medical Research Council | Assays for identifying modulators of rhomboid polypeptides |
-
2003
- 2003-05-26 EP EP20030011807 patent/EP1481987A1/en not_active Withdrawn
-
2004
- 2004-04-29 DE DE602004013440T patent/DE602004013440T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-29 MX MXPA05012663A patent/MXPA05012663A/es active IP Right Grant
- 2004-04-29 RU RU2005140567/13A patent/RU2373284C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-04-29 DK DK04730223T patent/DK1631584T3/da active
- 2004-04-29 AT AT04730223T patent/ATE393779T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-04-29 JP JP2006529722A patent/JP4903046B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-29 AU AU2004241151A patent/AU2004241151B2/en not_active Ceased
- 2004-04-29 CN CN2004800142844A patent/CN1795203B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-29 ES ES04730223T patent/ES2307012T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-29 CA CA2526790A patent/CA2526790C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-29 BR BRPI0410736-5A patent/BRPI0410736A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-04-29 WO PCT/EP2004/004550 patent/WO2004104037A1/en active IP Right Grant
- 2004-04-29 EP EP04730223A patent/EP1631584B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-19 US US10/849,423 patent/US7892778B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-11-22 IL IL172119A patent/IL172119A/en not_active IP Right Cessation
- 2005-11-25 KR KR1020057022603A patent/KR101215855B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2005-12-19 NO NO20056029A patent/NO334058B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-25 HK HK06111751.0A patent/HK1091215A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20010034884A1 (en) * | 1998-12-07 | 2001-10-25 | Gisela Peraus | Abeta-peptide screening assay |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1631584A1 (en) | 2006-03-08 |
EP1631584B1 (en) | 2008-04-30 |
CN1795203A (zh) | 2006-06-28 |
KR20060015312A (ko) | 2006-02-16 |
US7892778B2 (en) | 2011-02-22 |
US20050032150A1 (en) | 2005-02-10 |
CA2526790A1 (en) | 2004-12-02 |
MXPA05012663A (es) | 2006-05-25 |
IL172119A (en) | 2010-12-30 |
JP4903046B2 (ja) | 2012-03-21 |
DK1631584T3 (da) | 2008-09-01 |
DE602004013440T2 (de) | 2009-05-20 |
WO2004104037A1 (en) | 2004-12-02 |
ATE393779T1 (de) | 2008-05-15 |
CN1795203B (zh) | 2010-06-16 |
HK1091215A1 (en) | 2007-01-12 |
BRPI0410736A (pt) | 2006-06-27 |
EP1481987A1 (en) | 2004-12-01 |
RU2373284C2 (ru) | 2009-11-20 |
RU2005140567A (ru) | 2006-06-27 |
DE602004013440D1 (de) | 2008-06-12 |
ES2307012T3 (es) | 2008-11-16 |
NO334058B1 (no) | 2013-12-02 |
CA2526790C (en) | 2013-12-24 |
JP2008502302A (ja) | 2008-01-31 |
AU2004241151B2 (en) | 2009-04-09 |
AU2004241151A1 (en) | 2004-12-02 |
NO20056029L (no) | 2006-02-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2249617C2 (ru) | ТРАНСКРИПЦИОННАЯ РЕГУЛЯТОРНАЯ ДНК ГЕНА ХОМЯКА EF-1α | |
KR101215855B1 (ko) | 감마-세크레타제의 억제제를 스크리닝하는 방법 | |
Akimaru et al. | Drosophila CBP is required for dorsal–dependent twist gene expression | |
KR20150023670A (ko) | 조건적 녹아웃 대립유전자의 생성 방법 및 이를 위한 조성물 | |
PT1649027E (pt) | Sistemas de expressão para o controlo de pragas de insetos | |
PT1984512T (pt) | Sistema de expressão génica utilizando excisão-união em insetos | |
US11820998B2 (en) | Porcine Thy1 gene promoter specifically expressed in neurons | |
AU766751B2 (en) | Abeta-peptide screening assay | |
WO1998008860A1 (en) | Novel polynucleotide sequences encoding proteins involved in myogenesis | |
US20050268350A1 (en) | Identification and purification of higher order transcription complexes from transgenic non-human animals | |
Hallerman et al. | Gene expression promoted by the RSV long terminal repeat element in transgenic goldfish | |
AU741340B2 (en) | Non human transgenic animal in which the expression of the gene coding for insulin is deleted | |
CA2395490A1 (en) | Repressible sterility of animals | |
CA2117756A1 (en) | Oligonucleotide sequences and transgenic animals transfected therewith having reduced sensitivity to narcotic analgesics | |
KR20020089352A (ko) | 파킨 유전자 활성의 조절에 유용한 조성물 | |
EP1163844A1 (en) | Transgenic mollusc and method for constructing the same | |
AU782109B2 (en) | Repressible sterility of animals | |
EP1752040A1 (en) | Isolation of the t-complex distorters and applications thereof | |
US20090007283A1 (en) | Transgenic Rodents Selectively Expressing Human B1 Bradykinin Receptor Protein | |
JP2006180712A (ja) | 血管細胞特異的発現プロモーターおよびその利用 | |
MXPA01005486A (en) | A&bgr;-PEPTIDE SCREENING ASSAY |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant | ||
LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |