RU2005140567A - Способ скрининга ингибиторов гамма-секретазы - Google Patents
Способ скрининга ингибиторов гамма-секретазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2005140567A RU2005140567A RU2005140567/13A RU2005140567A RU2005140567A RU 2005140567 A RU2005140567 A RU 2005140567A RU 2005140567/13 A RU2005140567/13 A RU 2005140567/13A RU 2005140567 A RU2005140567 A RU 2005140567A RU 2005140567 A RU2005140567 A RU 2005140567A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- secretase
- protein
- cell
- gamma
- nucleotide sequence
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 45
- 229940125373 Gamma-Secretase Inhibitor Drugs 0.000 title 1
- 239000003540 gamma secretase inhibitor Substances 0.000 title 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 63
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract 63
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 claims abstract 60
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 claims abstract 60
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract 45
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract 35
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract 35
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims abstract 28
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract 25
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract 25
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract 25
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract 25
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims abstract 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract 20
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract 17
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract 15
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract 8
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims abstract 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract 4
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 claims abstract 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract 3
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 claims abstract 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims abstract 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims abstract 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract 2
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 claims 4
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 claims 4
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 claims 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 4
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 claims 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 3
- 102100039556 Galectin-4 Human genes 0.000 claims 2
- 101000608765 Homo sapiens Galectin-4 Proteins 0.000 claims 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 2
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 claims 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims 2
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 claims 1
- 102100034035 Alcohol dehydrogenase 1A Human genes 0.000 claims 1
- 101100071585 Caenorhabditis elegans hsp-16.2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100465890 Caenorhabditis elegans sel-12 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100347613 Caenorhabditis elegans unc-54 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 claims 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 claims 1
- 101100315695 Danio rerio unc119b gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 claims 1
- 101150094690 GAL1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100028501 Galanin peptides Human genes 0.000 claims 1
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 108010068250 Herpes Simplex Virus Protein Vmw65 Proteins 0.000 claims 1
- 101000780443 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1A Proteins 0.000 claims 1
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 claims 1
- 101100121078 Homo sapiens GAL gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150068888 MET3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100022915 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-11 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100285000 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) his-3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 101150014136 SUC2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100386089 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) MET17 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100022918 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) sua1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 claims 1
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 claims 1
- 239000008011 inorganic excipient Substances 0.000 claims 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000008012 organic excipient Substances 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 abstract 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001777 nootropic effect Effects 0.000 abstract 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/61—Fusion polypeptide containing an enzyme fusion for detection (lacZ, luciferase)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/71—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing domain for transcriptional activaation, e.g. VP16
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
- C07K2319/81—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor containing a Zn-finger domain for DNA binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Claims (53)
1. Способ обнаружения активности γ-секретазы, который заключается в том, что
А. используют трансген, кодирующий слитый белок, содержащий
а) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML (SEQ ID NO:1);
b) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид, у 5'-конца первой нуклеотидной последовательности;
с) промотор и
d) при необходимости, дополнительные кодирующие и/или некодирующие нуклеотидные последовательности;
В. данный трасген вводят в клетку и экспрессируют слитый белок;
С. слитый белок расщепляют внутри аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 γ-секретазой, присутствующей в клетке, в результате чего образуется первый неполный белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVV (SEQ ID NO:2), и второй неполный белок, содержащий аминокислотную последовательность VIVITLVML (SEQ ID NO:3); и
D. обнаруживают первый неполный белок и/или второй неполный белок;
и отличается тем, что за исключением SEQ ID NO:1 указанный слитый белок не содержит ни одного пептида, действующего в качестве сигнала для эндо- или экзоцитоза, и/или сайта расщепления протеазой.
2. Способ обнаружения активности γ-секретазы, который заключается в том, что
А. используют трансген, кодирующий слитый белок и содержащий нижеследующие элементы:
а) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML (SEQ ID NO:1);
b) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид, у 5'-конца первой нуклеотидной последовательности;
с) промотор и
d) при необходимости дополнительные кодирующие и/или некодирующие нуклеотидные последовательности;
В. данный трасген вводят в клетку и экспрессируют слитый белок;
С. слитый белок расщепляют внутри аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 γ-секретазой, присутствующей в клетке, в результате чего образуется первый неполный белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVV (SEQ ID NO:2), и второй неполный белок, содержащий аиминокислотную последовательность VIVITLVML (SEQ ID NO:3); и
D. определяют количество второго неполного белка и активность γ-секретазы на основании количества образовавшегося второго неполного белка;
и отличается тем, что за исключением SEQ ID NO:1 указанный слитый белок не содержит ни одного пептида, действующего в качестве сигнала для эндо- или экзоцитоза, и/или сайта расщепления протеазой.
3. Способ по любому из пп.1 и 2, в котором пептидный фрагмент является сайтом расщепления каспазой.
4. Способ по любому из п.1 или 2, где первая нуклеотидная последовательность кодирует амилоидный белок-предшественник (АРР) или его часть, причем указанные пептиды представляют собой NPTY и/или VEVD.
5. Способ по п.4, в котором первая нуклеотидная последовательность кодирует белок, выделенный из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:4.
6. Способ по любому из пп.1 и 2, где вторая нуклеотидная последовательность кодирует сигнальный пептид АРР человека (SEQ ID NO:5), SUC2 (SEQ ID NO:12) или ВМ40 (SEQ ID NO:13).
7. Способ по п.6, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5.
8. Способ по любому из пп.1 и 2, где промотор является промотором, предназначенным для экспрессии в клетках млекопитающих, C. elegans, дрожжах и дрозофиле.
9. Способ по п.8, где промотор является промотором CMV, HSV TK, RSV, SV40, LTR, unc119, unc54, hsp16-2, G0A1, sel-12, ADH1, GAL1, MET3, MET25, MT, Ac5 или Ds47.
10. Способ по любому из пп.1 и 2, где клетка является эукариотической клеткой.
11. Способ по п.10, где клетка является клеткой человека.
12. Способ по п.10, где клетка является клеткой, отличной от человеческой.
13. Способ по п.12, где клетка является клеткой HeLa, 293, H4, SH-SY5Y, H9, Cos, CHO, N2A, SL2 или дрожжевой клеткой.
14. Способ по п.12, где клетка является клеткой C. elegans.
15. Способ по п.13, где клетка принадлежит трансгенному организму C. elegans.
16. Способ по п.13, где клетка является клеткой Saccharomyces cerevisiae.
17. Способ по любому из пп.1, 2, 5, 7, 9, 11-16, где слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6.
18. Способ по п.17, где дополнительная кодирующая нуклеотидная последовательность расположена у 3'-конца первой нуклеотидной последовательности.
19. Способ по п.18, где дополнительная кодирующая нуклеотидная последовательность кодирует белок, экспрессируемый в виде слитого белка с первым неполным белком и вторым неполным белком, и может быть использована для обнаружения второго неполного белка.
20. Способ по п.19, где дополнительная кодирующая нуклеотидная последовательность кодирует белок, содержащий ДНК-связывающий домен и домен, активирующий транскрипцию.
21. Способ по п.20, где дополнительная кодирующая нуклеотидная последовательность кодирует белок, содержащий GAL4-связывающий домен и домен, активирующий транскрипцию, фрагмента VP16 (GAL4-VP16).
22. Способ по любому из пп.1 и 2, где клетка котрансфецирована репортерной плазмидой, содержащей ген-репортер под контролем регулируемого промотора.
23. Способ по п.22, где регулируемый промотор активируется доментом, активирующим транскрипцию.
24. Способ по п.23, где репортерная плазмида кодирует ген-репортер для EGFP (усиленного зеленого флуоресцирующего белка), Ura 3, His 3 или Lac Z и регулируемый промотор содержит GAL4-связывающие сайты и минимальный промотор ВИЧ.
25. Способ по любому из пп.1, 2, 5, 7, 9, 11-16, 18-21, 23, 24, где трансген содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20 или SEQ ID NO:22.
26. Способ по п.25, где трансген находится в векторе.
27. Способ по п.26, где рекомбинантный вектор является pcDNA 3.1+.
28. Способ по любому из пп.1, 2, 5, 7, 9, 11-16, 18-21, 23, 24, 26, 27, где активность эндогенной γ-секретазы в клетке не обнаружена.
29. Способ по п.28, где клетка котрансфецирована с использованием библиотеки кДНК.
30. Способ по п.29, в котором кДНК, полученная из ткани человека или ткани, отличной от человеческой, либо из клеток человека или клеток, отличных от человеческих, присутствует в библиотеке кДНК.
31. Применение способа по любому или нескольким из пп.28-30 для идентификации кДНК, кодирующей γ-секретазу, субъединичный белок γ-секретазы или γ-секретаза-подобную протеиназу, которое заключается в том, что
а) идентифицируют клетку, в которой обнаружена активность γ-секретазы; и
b) выделяют из указанной клетки кДНК, кодирующую γ-секретазу.
32. Трансген, содержащий
а) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML (SEQ ID NO:1);
b) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид, у 5'-конца первой нуклеотидной последовательности;
с) промотор и
d) по крайней мере одну дополнительную нуклеотидную последовательность у 3'-конца первой нуклеотидной последовательности, которая кодирует ДНК-связывающий домен и домен, активирующий транскрипцию.
33. Трансген по п.32, где первая нуклеотидная последовательность кодирует АРР или часть АРР.
34. Трансген по одному или обоим пп.32 и 33, который имеет нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO:14.
35. Вектор, содержащий трансген по любому или нескольким пп.32-34.
36. Вектор по п.35, который является вектором pDBTrp или pcDNA 3.1+.
37. Способ получения трансгенной клетки, в котором клетку трансфецируют вектором по одному или обоим пп.35 и 36.
38. Способ получения трансгенного организма C. elegans, в котором трансген по одному или нескольким пп.31-33 микроинъецируют в гонады организма C. elegans.
39. Клетка, содержащая трансген по одному или нескольким пп.32-34.
40. Трансгенный организм C. elegans, содержащий трансген по одному или нескольким пп.32-34.
41. Дрожжевая клетка, содержащая трансген по одному или нескольким пп.32-34.
42. Клетка, содержащая
а) трансген по одному или нескольким пп.32-34;
b) библиотеку кДНК и
с) репортерную плазмиду.
43. Применение клетки по п.42 для идентификации кДНК, кодирующей γ-секретазу, субъединичный белок γ-секретазы или γ-секретаза-подобную протеиназу.
44. Способ идентификации кДНК γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы, который заключается в том, что
а) получают клетку по п.42 и
b) определяют, образовался ли второй неполный белок.
45. Применение клетки по п.42 в способе идентификации ингибиторов активности γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы.
46. Способ идентификации веществ, ингибирующих активность γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы, который включает нижеследующие стадии:
А. Получение трансгенного организма, отличного от человеческого, или трансгенной клетки, которые содержат трансген, имеющий нижеследующие элементы:
а) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML (SEQ ID NO:1);
b) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид, у 5'-конца первой нуклеотидной последовательности;
с) промотор и
d) при необходимости дополнительные некодирующие и/или кодирующие нуклеотидные последовательности;
репортерную плазмиду, имеющую сайт связывания белка, минимальный промотор, ген-репортер и при необходимости кДНК, кодирующую γ-секретазу, субъединичный белок γ-секретазы или γ-секретаза-подобную протеиназу,
при этом трансгенный организм, отличный от человеческого, или трансгенная клетка экспрессирует трансген и при необходимости γ-секретазу, субъединичный белок γ-секретазы или γ-секретаза-подобную протеиназу, кодированную данной кДНК;
В. Культивирование трансгенного организма, отличного от человеческого, или трансгенной клетки с исследуемым веществом и
С. Определение количества второго неполного белка.
47. Способ идентификации веществ, ингибирующих активность γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы, который заключается в том, что
А. используют трансген, содержащий нижеследующие элементы:
а) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVVIATVIVITLVML (SEQ ID NO:1);
b) вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид, у 5'-конца первой нуклеотидной последовательности;
с) промотор и
d) при необходимости дополнительные кодирующие и/или некодирующие нуклеотидные последовательности;
В. данный трасген, репортерную плазмиду и при необходимости кДНК, кодирующую γ-секретазу, субъединичный белок γ-секретазы или γ-секретаза-подобную протеиназу, вводят в клетку и экспрессируют слитый белок, кодированный указанным трансгеном, и при необходимости γ-секретазу, субъединичный белок γ-секретазы или γ-секретаза-подобную протеиназу, кодированную указанной кДНК, в присутствии исследуемого вещества;
С. слитый белок
а) расщепляют, в результате чего образуется первый неполный белок, содержащий аминокислотную последовательность GAIIGLMVGGVV (SEQ ID NO:2), и второй неполный белок, содержащий аминокислотную последовательность VIVITLVML (SEQ ID NO:3), или
b) не расщепляют внутри аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1 γ-секретазой, присутствующей в клетке, в результате чего не образуется обнаруживаемое количество первого и/или второго неполного белка;
D. определяют количество второго неполного белка.
48. Способ идентификации веществ, ингибирующих активность γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы, в котором трансген, кодирующий слитый белок, содержащий сигнальный пептид и SEQ ID NO:1, экспрессируют в присутствии исследуемого вещества и определяют воздействие указанного вещества на количество образовавшегося второго неполного белка, содержащего аминокислотную последовательность VIVITLVML (SEQ ID NO:3).
49. Ингибитор γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы, идентифицированный способом по любому из пп.46-48.
50. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически активное соединение, ингибирующее активность γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы при осуществлении способа по одному или нескольким пп.46-48.
51. Способ получения фармацевтической композиции, который включает осуществление способа по одному или нескольким пп.46-48 и приготовление препарата, содержащего идентифицированное фармацевтически активное соединение.
52. Способ получения фармацевтического препарата, который включает
а) осуществление способа по одному или нескольким пп.46-48 и
b) смешивание идентифицированного фармацевтически активного соединения с фармацевтически инертными неорганическими и/или органическими наполнителями.
53. Тест-набор для обнаружения активности γ-секретазы, субъединичного белка γ-секретазы или γ-секретаза-подобной протеиназы, который включает трансген, вектор или клетку по любому предшествующему пункту.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP03011807.9 | 2003-05-26 | ||
| EP20030011807 EP1481987A1 (en) | 2003-05-26 | 2003-05-26 | Method for screening inhibitors of the gamma-secretase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005140567A true RU2005140567A (ru) | 2006-06-27 |
| RU2373284C2 RU2373284C2 (ru) | 2009-11-20 |
Family
ID=33104072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005140567/13A RU2373284C2 (ru) | 2003-05-26 | 2004-04-29 | Способ скрининга ингибиторов гамма-секретазы |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7892778B2 (ru) |
| EP (2) | EP1481987A1 (ru) |
| JP (1) | JP4903046B2 (ru) |
| KR (1) | KR101215855B1 (ru) |
| CN (1) | CN1795203B (ru) |
| AT (1) | ATE393779T1 (ru) |
| AU (1) | AU2004241151B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0410736A (ru) |
| CA (1) | CA2526790C (ru) |
| DE (1) | DE602004013440T2 (ru) |
| DK (1) | DK1631584T3 (ru) |
| ES (1) | ES2307012T3 (ru) |
| HK (1) | HK1091215A1 (ru) |
| IL (1) | IL172119A (ru) |
| MX (1) | MXPA05012663A (ru) |
| NO (1) | NO334058B1 (ru) |
| RU (1) | RU2373284C2 (ru) |
| WO (1) | WO2004104037A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007028655A2 (en) * | 2005-09-09 | 2007-03-15 | H. Lundbeck A/S | Drug discovery for neurodevelopmental disorders and their complications |
| WO2007030937A2 (en) * | 2005-09-16 | 2007-03-22 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal/I.R.C.M. | Screening proteinase modulators using a chimeric protein and ski-i proprotein convertase substrates and inhibitors |
| KR100883158B1 (ko) * | 2005-10-26 | 2009-02-10 | 주식회사 뉴젝스 | 살아있는 세포에서 단백질분해효소의 활성 측정 방법 |
| JP2007300856A (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Hiroshi Mori | アミロイドタンパク質模倣物 |
| WO2008061673A2 (en) * | 2006-11-24 | 2008-05-29 | Synthon B.V. | Drug discovery for cancer |
| CN104880441B (zh) * | 2015-05-14 | 2017-12-22 | 上海皓拓生物技术有限公司 | β‑分泌酶特异性抑制剂的筛选方法及其筛选系统 |
| WO2017041037A1 (en) * | 2015-09-04 | 2017-03-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Disruption of the interaction between amyloid beta peptide and dietary lipids |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998015828A1 (en) * | 1996-10-07 | 1998-04-16 | Scios Inc. | Method to identify direct inhibitors of the beta-amyloid forming enzyme gamma-secretase |
| DE19849073A1 (de) * | 1998-10-24 | 2000-04-27 | Aventis Pharma Gmbh | Transgener C. elegans als Modellorganismus für Untersuchungen zur Alzheimer'schen Krankheit |
| DE19856261C1 (de) * | 1998-12-07 | 2000-03-30 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Aß-Peptid Screening Assay |
| DE19920514A1 (de) * | 1999-05-05 | 2000-11-16 | Boehringer Ingelheim Pharma | Methoden zur Auffindung von Proteasen, die spezifisch membrangebundene Substrate spalten |
| US7718391B2 (en) * | 2001-05-11 | 2010-05-18 | Medical Research Council | Assays for identifying modulators of rhomboid polypeptides |
-
2003
- 2003-05-26 EP EP20030011807 patent/EP1481987A1/en not_active Withdrawn
-
2004
- 2004-04-29 DE DE602004013440T patent/DE602004013440T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-29 MX MXPA05012663A patent/MXPA05012663A/es active IP Right Grant
- 2004-04-29 RU RU2005140567/13A patent/RU2373284C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-04-29 DK DK04730223T patent/DK1631584T3/da active
- 2004-04-29 AT AT04730223T patent/ATE393779T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-04-29 JP JP2006529722A patent/JP4903046B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-29 AU AU2004241151A patent/AU2004241151B2/en not_active Ceased
- 2004-04-29 CN CN2004800142844A patent/CN1795203B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-29 ES ES04730223T patent/ES2307012T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-29 CA CA2526790A patent/CA2526790C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-04-29 BR BRPI0410736-5A patent/BRPI0410736A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-04-29 WO PCT/EP2004/004550 patent/WO2004104037A1/en active IP Right Grant
- 2004-04-29 EP EP04730223A patent/EP1631584B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-19 US US10/849,423 patent/US7892778B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-11-22 IL IL172119A patent/IL172119A/en not_active IP Right Cessation
- 2005-11-25 KR KR1020057022603A patent/KR101215855B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2005-12-19 NO NO20056029A patent/NO334058B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-25 HK HK06111751.0A patent/HK1091215A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1631584A1 (en) | 2006-03-08 |
| EP1631584B1 (en) | 2008-04-30 |
| CN1795203A (zh) | 2006-06-28 |
| KR20060015312A (ko) | 2006-02-16 |
| US7892778B2 (en) | 2011-02-22 |
| US20050032150A1 (en) | 2005-02-10 |
| CA2526790A1 (en) | 2004-12-02 |
| MXPA05012663A (es) | 2006-05-25 |
| IL172119A (en) | 2010-12-30 |
| JP4903046B2 (ja) | 2012-03-21 |
| DK1631584T3 (da) | 2008-09-01 |
| DE602004013440T2 (de) | 2009-05-20 |
| WO2004104037A1 (en) | 2004-12-02 |
| ATE393779T1 (de) | 2008-05-15 |
| CN1795203B (zh) | 2010-06-16 |
| HK1091215A1 (en) | 2007-01-12 |
| BRPI0410736A (pt) | 2006-06-27 |
| EP1481987A1 (en) | 2004-12-01 |
| RU2373284C2 (ru) | 2009-11-20 |
| DE602004013440D1 (de) | 2008-06-12 |
| ES2307012T3 (es) | 2008-11-16 |
| NO334058B1 (no) | 2013-12-02 |
| CA2526790C (en) | 2013-12-24 |
| JP2008502302A (ja) | 2008-01-31 |
| AU2004241151B2 (en) | 2009-04-09 |
| AU2004241151A1 (en) | 2004-12-02 |
| KR101215855B1 (ko) | 2012-12-31 |
| NO20056029L (no) | 2006-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Spitz et al. | A global control region defines a chromosomal regulatory landscape containing the HoxD cluster | |
| Taxis et al. | Efficient protein depletion by genetically controlled deprotection of a dormant N‐degron | |
| Kelley et al. | FBN-1, a fibrillin-related protein, is required for resistance of the epidermis to mechanical deformation during C. elegans embryogenesis | |
| CA2354154A1 (en) | A.beta.-peptide screening assay | |
| RU2005140567A (ru) | Способ скрининга ингибиторов гамма-секретазы | |
| Novelli et al. | Gene interactions in Caenorhabditis elegans define DPY-31 as a candidate procollagen C-proteinase and SQT-3/ROL-4 as its predicted major target | |
| US20120174245A1 (en) | Transposition of maize ac/ds elements in vertebrates | |
| Mohler et al. | The embryonically active gene, unkempt, of Drosophila encodes a Cys3His finger protein. | |
| Spanier et al. | Caenorhabditis elegans neprilysin NEP-1: an effector of locomotion and pharyngeal pumping | |
| JP2008502302A5 (ru) | ||
| EP1678326A2 (en) | Genes involved in neurodegenerative disorders | |
| JPWO2004052934A1 (ja) | 蛋白質のプロセッシングを測定するためのモニター蛋白質 | |
| CN112194729B (zh) | 一种用于检测泛素-蛋白酶体系统降解活性的生物探针 | |
| CN101512336A (zh) | 胰腺β细胞增殖的刺激 | |
| Xian et al. | Sry promoters from domesticus (Tirano) and C57BL/6 mice function similarly in embryos and adult animals | |
| MXPA01005486A (en) | A&bgr;-PEPTIDE SCREENING ASSAY | |
| WO2005005640A1 (en) | A yeast model for amyloidogenic protein toxicity | |
| Hermann et al. | C. elegans | |
| Pantalena | Insights of hlh-2 post-transcriptional regulation and the AC/VU decision in Caenorhabditis elegans | |
| Hadzic | Control of Neuroendocrine Cell Physiology by a Single Transcription Factor, Drosophila Basic Helix Loop Helix Regulator DIMMED | |
| JP2009517066A (ja) | アルツハイマー病動物モデル、それを得るための方法およびその使用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150430 |