KR101090047B1

KR101090047B1 - 밀베마이신류의 정제법

Info

Publication number: KR101090047B1
Application number: KR1020057011825A
Authority: KR
Inventors: 다카히로 츠키야마; 히토미 스에모토; 가즈오 사토
Original assignee: 미쓰이가가쿠 아그로 가부시키가이샤
Priority date: 2002-12-24
Filing date: 2003-12-22
Publication date: 2011-12-07
Also published as: JP4373080B2; WO2004058771A1; CN1732174A; CN1732174B; AU2003296180A1; JP2004203757A; KR20050085876A

Abstract

본 발명은, 밀베마이신류를 염기로 세정하는 것에 의한 밀베마이신류의 정제법에 관한 것이다. 본 발명에 의해, 크로마토그래피 등의 공업적으로 번잡한 정제법을 사용하지 않고, 간편하게 불필요물을 제거할 수 있는 밀베마이신류의 정제법이 제공된다.

밀베마이신, 정제법

Description

밀베마이신류의 정제법 {METHOD FOR PURIFICATION OF MILBEMYCINS}

본 발명은, 천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 천연 밀베마이신류를 분리하는, 천연 밀베마이신류의 공업적 스케일에서의 정제법에 관한 것이다.

미생물 대사 산물로부터 얻어지는 16 원환 매크로라이드 화합물인 밀베마이신류는, 살충, 진드기 살충 활성 또는 구충활성을 갖는 것이 알려져 있고, 예를 들어 하기 표 1 로 표시되는 화합물을 들 수 있다.

이들의 화합물을 제조할 때, 통상 모든 미생물 대사 산물과 동일하게 유연체 및 불순물이 많이 함유된다. 따라서, 공업적으로 이들의 화합물을 제조하는 경우, 공업적 제조법으로 사용할 수 있는 방법으로 정제를 실시할 필요가 있다.

일반적인 상기 화합물의 정제법으로서는, 발효 배양물로부터 유기용매를 이용하여 밀베마이신류를 추출한 후, 실리카겔, 알루미나, 덱스트란겔, 이온교환 수지, 합성흡착제, 분자체, C₈H₁₇, C₁₈H₃₇, C₆H₅ 등의 화학 결합형 실리카겔 등의 담체를 사용한 크로마토그래피에 부여하여, 얻어진 목적 밀베마이신류를 함유하는 분획을 농축 건조시키는 방법이 알려져 있다 (예를 들어, 특허문헌 1: 일본 공개특허공보 소50-29742호, 특허문헌 2: 일본 공개특허공보 소 55-131398호, 특허문헌 3: 일본 공개특허공보 소56-32481호 또는 특허문헌 4: 일본 공개특허공보 평1-193270호 참조.). 그러나, 이들의 크로마토그래피를 사용하는 방법에서는, 담체의 부하량이 낮기 때문에, 대량의 크로마토 담체 및 유기용매 등의 용출용매를 사용해야 하고, 생산성도 낮으며, 얻어진 정제품은 비싸지고, 공업적으로는 반드시 만족할 수 있는 정제법은 아니다.

발명의 개시

본 발명의 목적은 공업적으로 번잡한 정제법, 예를 들어 크로마토그래피를 사용하지 않고, 천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 간편하게 불필요물을 제거하고, 천연 밀베마이신류를 분리하는 천연 밀베마이신류의 정제법을 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은, 상기한 과제를 해결하기 위해 예의 노력을 거듭한 결과, 천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 조제한 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 염기성 수용액으로 세정하고, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제 중의 천연 밀베마이신류 이외의 물질을 염기성 수용액에 용출시킨 후, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 농축시키고, 필요하면 추가로 전용(轉溶) 등의 액-액 분배를 실시한 후, 재결정하는 것에 의한 천연 밀베마이신류의 정제법을 발견하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명은,

(1) 천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 조제한 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 염기성 수용액으로 세정하고, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제 중의 천연 밀베마이신류 이외의 물질을 염기성 수용액에 용출시킨 후, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 농축시키고, 필요하면 추가로 전용 등의 액-액 분배를 실시한 후, 재결정하는 것에 의한 천연 밀베마이신류의 정제법,

(2) 발효 배양물에 함유되는 천연 밀베마이신류가 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄, 밀베마이신 D, 밀베마이신 α₁₁ 또는 밀베마이신 α₁₄ 로부터 선택되는 화합물의 하나 또는 둘 이상의 혼합물인 (1) 에 기재된 정제법,

(3) 발효 배양물에 포함되는 천연 밀베마이신류가 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄ 또는 이들의 혼합물인 (1) 또는 (2) 에 기재된 정제법,

(4) 천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 조제한 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제가, 천연 밀베마이신류를 함유하는 아세트산에틸 용액인 (1) 내지 (3) 에 기재된 정제법,

(5) 염기성 수용액이 암모니아 수용액인 (1) 내지 (4) 에 기재된 정제법이다.

삭제

본 발명에서의「발효 배양물에 포함되는 천연 밀베마이신류」로서는, 예를 들어 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄, 밀베마이신 D, 밀베마이신 α₁₁ 또는 밀베마이신 α₁₄ 로부터 선택되는 화합물의 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 들 수 있고, 바람직하게는 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄ 또는 밀베마이신 D 로부터 선택되는 화합물의 하나 또는 둘 이상의 혼합물을 들 수 있고, 더욱 바람직하게는 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄ 또는 이들의 혼합물을 들 수 있다.

본 발명에서의「용제」란, 메틸이소부틸케톤과 같은 케톤류; 아세트산에틸과 같은 에스테르류; 염화메틸렌, 클로로포름 또는 디클로로에탄과 같은 할로겐화탄화수소류; 디에틸에테르, 테트라히드로푸란 또는 디옥산과 같은 에테르류; 벤젠 또는 톨루엔과 같은 방향족탄화수소류; 헥산 또는 옥탄 등의 지방족탄화수소류 및 이들의 혼합용매를 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산에틸과 같은 에스테르류이다.

본 발명에서의「염기성 수용액」이란, 천연 밀베마이신류를 분해시키는 것이 아니면 특별히 한정은 없지만, 예를 들어 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 수산화리튬 등과 같은 알칼리금속수산화물의 수용액; 수산화칼슘 또는 수산화마그네슘 등과 같은 알칼리 토금속수산화물의 수용액; 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산수소나트륨 또는 탄산세슘 등과 같은 알칼리금속탄산염 또는 탄산칼슘 등과 같은 알칼리 토금속탄산염의 수용액 등과 같은 무기 염기의 수용액, 암모니아, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 피리딘 등의 아민류 수용액 등이고, 바람직하게는 아민류의 수용액이고, 더욱 바람직하게는 암모니아의 수용액이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명은, 천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 조제한 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 염기성 수용액으로 세정하고, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제 중의 천연 밀베마이신류 이외의 물질을 염기성 수용액에 용출시킨 후, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 농축시키고, 필요하면 추가로 전용 등의 액-액 분배를 실시한 후, 재결정하는 것에 의한 천연 밀베마이신류의 정제법이다.

삭제

밀베마이신류는, 상기한 바와 같이 어느 것이나 살충, 진드기 살충 활성 또는 구충활성을 갖는 것이 알려져 있는 공지된 화합물이고, 밀베마이신 A₃ 및 밀베마이신 A₄ 는 일본 공개특허공보 소55-131398호에, 밀베마이신 D 는 일본 공개특허공보 소56-32481호에, 밀베마이신 α₁₁ 및 밀베마이신 α₁₄ 는 일본 공개특허공보 평1-193270호에 각각 기재되어 있는 방법에 의해 제조할 수 있다.

천연 밀베마이신류를 함유하는 발효 배양물로부터 조제한 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 염기성 수용액으로 세정하고, 그 천연 밀베마이신류를 함유하는 용제 중의 천연 밀베마이신류 이외의 물질을 염기성 수용액으로 용출시킬 때의 시간은, 특별히 한정은 없지만, 통상 15 분 내지 2 일간이고, 바람직하게는 30 분 내지 3 시간이다. 그 때의 온도는, 통상 0 내지 80℃ 이고, 바람직하게는 20 내지 40℃ 이다.

사용되는 염기의 사용량은, 기질이 되는 천연 밀베마이신류의 순도에 따라 큰폭으로 변할 수 있지만, 통상 밀베마이신류에 대하여 중량비로 20% 내지 10 배량이고, 바람직하게는 50% 내지 5 배량이다.

세정 공정 종료 후는, 통상적 방법에 따라서 밀베마이신류를 함유하는 용액을 감압하 또는 상압으로 농축시킴으로써, 순도가 개선된 밀베마이신류를 얻을 수 있다. 또한 필요에 따라서, 전용 등의 액-액 분배법 등의 조작을 실시한 후, 재결정에 부여함으로써 목적물을 단리할 수 있다.

삭제

본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위해서, 이하에 실시예 등을 나타내지만, 본 발명은 이것에 한정되는 것은 아니다.

(실시예 1)

밀베마이신 A₃ 와 밀베마이신 A₄ 의 발효배양액 유래의 케이크로부터 아세트산에틸 용액을 조제하였다. 일부를 감압하에서 농축시킨 결과, 그 농축 잔류물의 순도는 28% (밀베마이신 A₃: 4.2%; 밀베마이신 A₄: 23.8%) 이었다. 당해 아세트산에틸용액 (130ml) 을, 5% 암모니아수 63ml, 5% 황산수용액 39ml 로 차례로 세정하였다. 이 아세트산에틸 용액을 농축시켜 얻어진 잔류물에 메탄올 300ml 와 물 300ml 를 차례로 첨가하고, 그 후, 아이소퍼 E (엑슨모빌사 제조 탄화수소계 용매: 옥탄 60-70%, 노난 30-40% 혼합물) 로 추출하였다. 얻어진 아이소퍼 E 용액을 감압하에서 농축시킴으로써 재결정화, 이어서 여과 채취를 실시함으로써, 밀베마이신 A₃ 와 밀베마이신 A₄ 의 결정 3.06g (수율 75%) 을 얻었다. 그 순도는 95% (밀베마이신 A₃: 15.2%; 밀베마이신 A₄: 79.8%) 이었다.

밀베마이신 A₃ 와 밀베마이신 A₄ 의 함유량, 순도는 하기의 조건으로 고속 액체 크로마토그래피를 사용하여 결정하였다. 참고예 1 에 있어서도 동일하게 결정하였다.

고속 액체 크로마토그래피 조건

칼럼: Wakosil-II 5C18 HG φ4.6×250mm

용매: 아세트니트릴/물 = 80/20

유속: 1.Oml/min

검출: UV240nm

(참고예 1)

밀베마이신 A₃ 와 밀베마이신 A₄ 의 발효배양액 유래의 케이크로부터 조제한 메탄올 용액 1L 을 농축시켜서, 얻어진 잔류물을 실리카겔 (와코겔 C-100, 400g 사용) 칼럼크로마토그래피에 부여하였다. 아세트산에틸-헥산혼합 용매로 전개하고, 얻어진 밀베마이신 A₃ 와 밀베마이신 A₄ 함유 분획을 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 재결정에 부여한 후, 여과 채취함으로써 밀베멕틴의 결정 2.69g (수율 78%) 을 얻었다. 그 순도는 95% (밀베마이신 A₃: 14.3%; 밀베마이신 A₄: 80.7%) 이었다.

본 발명에 의해, 크로마토그래피를 사용하지 않는, 간편하고 저렴하며 또한 정제 효과가 높은 밀베마이신류의 정제법이 제공된다.

Claims

천연 밀베마이신류를 함유하는 용제를 암모니아 수용액으로 세정하고, 상기 용제를 농축하고, 재결정하는 천연 밀베마이신류의 정제법.
제 1 항에 있어서, 천연 밀베마이신류가 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄, 밀베마이신 D, 밀베마이신 α₁₁ 또는 밀베마이신 α₁₄ 로부터 선택되는 물질의 하나 또는 둘 이상의 혼합물인 정제법.
제 1 항에 있어서, 천연 밀베마이신류가 밀베마이신 A₃, 밀베마이신 A₄ 또는 이들의 혼합물인 정제법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용제가 아세트산에틸 용액인 정제법.
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제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용제를 농축한 후에, 용매 추출을 행한 다음 재결정하는 정제법.
제 4 항에 있어서, 상기 용제를 농축한 후에, 용매 추출을 행한 다음 재결정하는 정제법.