JPH08107792A - 新規化合物の精製方法 - Google Patents
新規化合物の精製方法Info
- Publication number
- JPH08107792A JPH08107792A JP24746794A JP24746794A JPH08107792A JP H08107792 A JPH08107792 A JP H08107792A JP 24746794 A JP24746794 A JP 24746794A JP 24746794 A JP24746794 A JP 24746794A JP H08107792 A JPH08107792 A JP H08107792A
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- Japan
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- aqueous solution
- culture
- solution
- organic solvent
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 ゾフィエリンの菌体培養液からの精製単離工
程において、培養粗生成物を初めにアルカリ水溶液に溶
解して有機溶媒で洗浄し、次いでそのアルカリ水溶液に
酸を加えて、酸性水溶液とし、有機溶媒で抽出する精製
単離方法。 【効果】 本発明によると、簡便で工業的かつ経済的な
精製・単離方法によりゾフィエリンを高純度に得ること
ができる。
程において、培養粗生成物を初めにアルカリ水溶液に溶
解して有機溶媒で洗浄し、次いでそのアルカリ水溶液に
酸を加えて、酸性水溶液とし、有機溶媒で抽出する精製
単離方法。 【効果】 本発明によると、簡便で工業的かつ経済的な
精製・単離方法によりゾフィエリンを高純度に得ること
ができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はゾフィエラ・カルバータ
Ｎｏ．３７−３（Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ ｃｕｒｖａｔａ
Ｎｏ．３７−３）菌株の培養物であるゾフィエリン
（Ｚｏｐｆｉｅｌｌｉｎ）の精製、単離方法に関する。
Ｎｏ．３７−３（Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ ｃｕｒｖａｔａ
Ｎｏ．３７−３）菌株の培養物であるゾフィエリン
（Ｚｏｐｆｉｅｌｌｉｎ）の精製、単離方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】特開平
６−１８４１５７号公報には、ゾフィエラ・カルバータ
Ｎｏ．３７−３（Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ ｃｕｒｖａｔａ
Ｎｏ．３７−３）菌株の産生する新規化合物であるゾ
フィエリン
６−１８４１５７号公報には、ゾフィエラ・カルバータ
Ｎｏ．３７−３（Ｚｏｐｆｉｅｌｌａ ｃｕｒｖａｔａ
Ｎｏ．３７−３）菌株の産生する新規化合物であるゾ
フィエリン
【０００３】
【化２】
【０００４】及び該化合物の各種糸状菌に対する抗菌活
性や血小板凝集阻害作用が報告されている。
性や血小板凝集阻害作用が報告されている。
【０００５】通常ゾフィエラ属に属する微生物の産生す
るゾフィエリンを培養液から精製、単離するには、減圧
濃縮、凍結乾燥、有機溶媒抽出、各種イオン交換樹脂処
理、非イオン性吸着樹脂による処理、あるいは活性炭、
珪酸、シリカゲル、アルミナ等の吸着剤によるクロマト
グラフィー、さらに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）やゲル濾過クロマトグラフィー、あるいは結晶
化、再結晶等の手段を単独あるいは任意の順序に組み合
わせて用いられている。
るゾフィエリンを培養液から精製、単離するには、減圧
濃縮、凍結乾燥、有機溶媒抽出、各種イオン交換樹脂処
理、非イオン性吸着樹脂による処理、あるいは活性炭、
珪酸、シリカゲル、アルミナ等の吸着剤によるクロマト
グラフィー、さらに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）やゲル濾過クロマトグラフィー、あるいは結晶
化、再結晶等の手段を単独あるいは任意の順序に組み合
わせて用いられている。
【０００６】一般的には樹脂処理やクロマトグラフィー
が数回以上繰り返し用いられている。しかし、これらの
クロマトグラフィー操作には大量の溶媒類を必要とし、
またその後の溶媒濃縮など長時間の操作となり、極めて
非効率的である。したがってより簡便な工業的かつ経済
的に利用できる精製・単離方法が望まれている。
が数回以上繰り返し用いられている。しかし、これらの
クロマトグラフィー操作には大量の溶媒類を必要とし、
またその後の溶媒濃縮など長時間の操作となり、極めて
非効率的である。したがってより簡便な工業的かつ経済
的に利用できる精製・単離方法が望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、工業化可
能な製造技術の確立を目指し、ゾフィエリンの精製単離
方法について種々検討した結果、該化合物を含有する培
養粗生成物をアルカリ水溶液に溶解して、有機溶媒で洗
浄し、次いでそのアルカリ水溶液に酸を加えて、酸性水
溶液とし、有機溶媒で抽出することにより、収率良くか
つ高純度のゾフィエリンを精製単離することができるこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。
能な製造技術の確立を目指し、ゾフィエリンの精製単離
方法について種々検討した結果、該化合物を含有する培
養粗生成物をアルカリ水溶液に溶解して、有機溶媒で洗
浄し、次いでそのアルカリ水溶液に酸を加えて、酸性水
溶液とし、有機溶媒で抽出することにより、収率良くか
つ高純度のゾフィエリンを精製単離することができるこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】本発明の方法においては、初めに用いるア
ルカリ水溶液としては、アルカリ性を示す無機物であれ
ばすべて可能であるが、ｐＨ１０以上のアルカリ水溶液
が望ましい。例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化リ
チウム、水酸化バリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウ
ム等の水溶液が挙げられる。好ましくは、５〜８０％の
水酸化カリウム水溶液や５〜８０％の水酸化ナトリウム
水溶液が挙げられる。アルカリ水溶液に溶解する際に粗
生成物の性状によってはメタノール、エタノール等のア
ルコール類を添加してもよい。このアルカリ水溶液を有
機溶媒で洗浄することにより、培養粗生成物中に含まれ
る中性ないしアルカリ性の有機化合物を除去することが
できる。
ルカリ水溶液としては、アルカリ性を示す無機物であれ
ばすべて可能であるが、ｐＨ１０以上のアルカリ水溶液
が望ましい。例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化リ
チウム、水酸化バリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウ
ム等の水溶液が挙げられる。好ましくは、５〜８０％の
水酸化カリウム水溶液や５〜８０％の水酸化ナトリウム
水溶液が挙げられる。アルカリ水溶液に溶解する際に粗
生成物の性状によってはメタノール、エタノール等のア
ルコール類を添加してもよい。このアルカリ水溶液を有
機溶媒で洗浄することにより、培養粗生成物中に含まれ
る中性ないしアルカリ性の有機化合物を除去することが
できる。
【０００９】洗浄に用いる有機溶媒としては、ペンタ
ン、ヘキサン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キ
シレン等の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、クロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素類、クロロベンゼン、ジ
クロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、オク
タノール等のアルコール類、酢酸エチル等のエステル
類、シクロヘキサノン、メチルエチルケトン等のケトン
類、ジエチルエーテル、ジオキサン等のエーテル類、ア
セトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。
ン、ヘキサン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キ
シレン等の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、クロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素類、クロロベンゼン、ジ
クロロベンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、オク
タノール等のアルコール類、酢酸エチル等のエステル
類、シクロヘキサノン、メチルエチルケトン等のケトン
類、ジエチルエーテル、ジオキサン等のエーテル類、ア
セトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。
【００１０】次にアルカリ水溶液に酸を加えて、酸性水
溶液とする。用いる酸としては鉱酸類であればすべて可
能であるが、好ましくは塩酸、硫酸などが挙げられる。
また必要に応じてこれら酸は水で希釈して用いてもよ
い。引き続いてこの酸性水溶液を有機溶媒で抽出するこ
とにより、目的物を収率良く、高純度で得ることができ
る。
溶液とする。用いる酸としては鉱酸類であればすべて可
能であるが、好ましくは塩酸、硫酸などが挙げられる。
また必要に応じてこれら酸は水で希釈して用いてもよ
い。引き続いてこの酸性水溶液を有機溶媒で抽出するこ
とにより、目的物を収率良く、高純度で得ることができ
る。
【００１１】用いられる溶媒としては、ペンタン、ヘキ
サン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等
の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、クロロホルム等
のハロゲン化炭化水素類、クロロベンゼン、ジクロロベ
ンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、オクタノール
等のアルコール類、酢酸エチル等のエステル類、シクロ
ヘキサノン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチ
ルエーテル、ジオキサン等のエーテル類、アセトニトリ
ル等のニトリル類等が挙げられる。
サン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等
の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、クロロホルム等
のハロゲン化炭化水素類、クロロベンゼン、ジクロロベ
ンゼン等のハロゲン化芳香族炭化水素類、オクタノール
等のアルコール類、酢酸エチル等のエステル類、シクロ
ヘキサノン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチ
ルエーテル、ジオキサン等のエーテル類、アセトニトリ
ル等のニトリル類等が挙げられる。
【００１２】本発明に係るゾフィエリンは、これらの精
製操作で満足しうる純度のものであるが、場合によって
は、酸性水溶液から有機溶媒で抽出した後、さらにこの
有機溶媒を弱アルカリ水溶液で洗浄することにより、更
に純度良く単離することができる。用いられる弱アルカ
リ水溶液としては、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリ
ウム等の水溶液が挙げられる。
製操作で満足しうる純度のものであるが、場合によって
は、酸性水溶液から有機溶媒で抽出した後、さらにこの
有機溶媒を弱アルカリ水溶液で洗浄することにより、更
に純度良く単離することができる。用いられる弱アルカ
リ水溶液としては、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリ
ウム等の水溶液が挙げられる。
【００１３】これらの操作で、精製したゾフィエリンは
９０％以上の純度を有しており、極めて簡便で工業的か
つ経済的に利用できる精製・単離方法である。
９０％以上の純度を有しており、極めて簡便で工業的か
つ経済的に利用できる精製・単離方法である。
【００１４】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、この実施例は本発明の技術的範囲を何ら限定
するものではない。
明するが、この実施例は本発明の技術的範囲を何ら限定
するものではない。
【００１５】参考例 ゾフィエラ・カルバータＮｏ．３７−３（Ｚｏｐｆｉｅ
ｌｌａ ｃｕｒｖａｔａ Ｎｏ．３７−３）株を種培地
であるポテトデキストロース培地（ディフコ社製、以下
ＰＤ培地と略す）を含有する液体培地（ｐＨ７．０）に
２５℃で５日間培養し、得られた培養液を醗酵培地、す
なわち、ＰＤ培地にポリペプトン０．１％、酵母エキス
０．１％、トマトジュース（食塩添加、カゴメ（株）
製）１０％（ｖ／ｖ％）を添加した組成からなる培地
（ｐＨ７．０）に接種し、２５℃で１２日間旋回（１４
０ｒｐｍ）培養を行った。
ｌｌａ ｃｕｒｖａｔａ Ｎｏ．３７−３）株を種培地
であるポテトデキストロース培地（ディフコ社製、以下
ＰＤ培地と略す）を含有する液体培地（ｐＨ７．０）に
２５℃で５日間培養し、得られた培養液を醗酵培地、す
なわち、ＰＤ培地にポリペプトン０．１％、酵母エキス
０．１％、トマトジュース（食塩添加、カゴメ（株）
製）１０％（ｖ／ｖ％）を添加した組成からなる培地
（ｐＨ７．０）に接種し、２５℃で１２日間旋回（１４
０ｒｐｍ）培養を行った。
【００１６】得られた培養液を濾過し、菌体を除去した
後、培養濾液を２規定の塩酸でｐＨ３に調整した。この
培養濾液に酢酸エチルを加え抽出し、酢酸エチル抽出画
分を得た。酢酸エチル抽出画分を減圧濃縮し、粗生成物
を得た。この粗生成物は高速液体クロマトグラフィー分
析により約３０％のゾフィエリンが含まれているもので
ある。
後、培養濾液を２規定の塩酸でｐＨ３に調整した。この
培養濾液に酢酸エチルを加え抽出し、酢酸エチル抽出画
分を得た。酢酸エチル抽出画分を減圧濃縮し、粗生成物
を得た。この粗生成物は高速液体クロマトグラフィー分
析により約３０％のゾフィエリンが含まれているもので
ある。
【００１７】実施例 参考例で得られた粗生成物１ｇをメタノール５ｍＬ、５
０％水酸化カリウム水溶液５ｍＬに加え、室温で２時間
撹拌した。減圧濃縮した後、水２５ｍＬを加え、ヘキサ
ン２０ｍＬで洗浄した。さらにこのアルカリ水溶液を酢
酸エチル２０ｍＬで３回洗浄した。
０％水酸化カリウム水溶液５ｍＬに加え、室温で２時間
撹拌した。減圧濃縮した後、水２５ｍＬを加え、ヘキサ
ン２０ｍＬで洗浄した。さらにこのアルカリ水溶液を酢
酸エチル２０ｍＬで３回洗浄した。
【００１８】このアルカリ水溶液に氷水で冷却しながら
１０％塩酸を加え、ｐＨ１〜２の酸性水溶液とし、１５
時間放置した。この酸性水溶液を酢酸エチル２０ｍＬで
３回抽出した。酢酸エチル層を飽和重曹水４０ｍＬで洗
浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、溶
媒を減圧濃縮して０．３ｇのゾフィエリンを油状物とし
て得た。
１０％塩酸を加え、ｐＨ１〜２の酸性水溶液とし、１５
時間放置した。この酸性水溶液を酢酸エチル２０ｍＬで
３回抽出した。酢酸エチル層を飽和重曹水４０ｍＬで洗
浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、溶
媒を減圧濃縮して０．３ｇのゾフィエリンを油状物とし
て得た。
【００１９】この精製物は高速液体クロマトグラフィー
分析により９１．０％の純度であった。
分析により９１．０％の純度であった。
【００２０】
【発明の効果】本発明によると、簡便で工業的かつ経済
的な精製・単離方法によりゾフィエリンを高純度に得る
ことができる。
的な精製・単離方法によりゾフィエリンを高純度に得る
ことができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 田川 道人 埼玉県南埼玉郡白岡町大字白岡1470 日産 化学工業株式会社生物科学研究所内 (72)発明者 二川 貢 埼玉県南埼玉郡白岡町大字白岡1470 日産 化学工業株式会社生物科学研究所内 (72)発明者 西野 泰斗 埼玉県南埼玉郡白岡町大字白岡1470 日産 化学工業株式会社生物科学研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】 式 【化１】 で表されるゾフィエリンの菌体培養液からの精製単離工
程において、培養粗生成物を初めにアルカリ水溶液に溶
解して有機溶媒で洗浄し、次いでそのアルカリ水溶液に
酸を加えて、酸性水溶液とし、有機溶媒で抽出する精製
単離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24746794A JPH08107792A (ja) | 1994-10-13 | 1994-10-13 | 新規化合物の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24746794A JPH08107792A (ja) | 1994-10-13 | 1994-10-13 | 新規化合物の精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08107792A true JPH08107792A (ja) | 1996-04-30 |
Family
ID=17163887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24746794A Pending JPH08107792A (ja) | 1994-10-13 | 1994-10-13 | 新規化合物の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08107792A (ja) |
-
1994
- 1994-10-13 JP JP24746794A patent/JPH08107792A/ja active Pending
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