KR100998225B1 - 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 면역증강용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 생약 추출물을 적정 성분비로 포함하여 항염 및 항알러지 활성을 가지면서 공진단과 유사한 약리활성을 나타내 사향이 제거된 가미공진단 제조에 이용하거나, 면역증강 및 피로회복을 위한 약학적 제제 또는 건강기능식품으로 이용가능한 면역증강용 조성물에 관한 것이다.

한약재, 면역증진, 녹용, 산수유, 당귀, 홍삼

Description

녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강 조성물{Composition for immune enhancement comprising the extract of Young antler, Cornus officinalis, Ligusticum acutilobum, Chinese matrimony vine, Yam, Aurantii nobilis pericarpium, Gastrodia elata blume, Agastache rugosa, Cinnamomum loureirii, Ginseng steamed red and Schizandra chinensis, as an active ingredient}

본 발명은 한약재를 주재료로 하는 면역증강용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 생약 추출물을 적정 성분비로 포함하여 항염 및 항알러지 활성을 가지면서 공진단과 유사한 약리활성을 나타내 사향이 제거된 가미공진단 제조에 이용하거나, 면역증강 및 피로회복을 위한 약학적 제제 또는 건강기능식품으로 이용가능한 면역증강용 조성물에 관한 것이다.

최근 산업화와 환경의 변화 속에서 현대인들은 다양한 원인에 의한 면역력 저하로 인해 각종 질병에 노출되어 있으며, 이러한 질병 치료를 위해 막대한 비용 을 소모하고 있다. 특히, 최근 오염된 공기 및 신생활 변화, 즉, 인스턴트 식품, 탄산음료 등의 과잉섭취 등으로 인해 면역체계에 이상이 발생하여 알러지성 질환들이 지속적으로 증가되고 있는 추세이다. 알러지성 질환은 여러 알러지 유발인자에 의해 인체 면역체계를 과도하게 항진시켜 대식세포와 같은 면역세포에서 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1(interleukin-1), IL-6(interleukin-6), 프로스타글란딘(prostagladin), 류코트리엔(luecotriene) 및 산화질소(nitric oxide, NO)와 같은 염증유발물질을 과도하게 유도하여 이는 염증반응으로 진행되어 알러지성 비염, 아토피성 피부염, 만성 천식 및 면역 과민반응 증상 등을 일으키는 것으로 알려져 있다.

이러한 면역질환을 예방 및 치료하기 위해, 여러 가지 약제가 개발되고 있으나, 대부분의 약제들이 화학약품들로 부작용이 있으며, 지속적인 치료효과를 내지 못하는 한계가 있었다.

한의학에서는 질병이 야기되기 이전에 예방하는 예방치료의 개념이 강하였으며, 종래의 보약이 이러한 개념이었다. 이러한 보약들의 대표적인 한의학적 처방약인 공진단은 녹용, 당귀, 산수유, 사향으로 구성된 처방으로 공진단의 활용을 살펴보면 노화를 방지하고 질병을 예방하는 경우, 수술이나 큰 병으로 원기가 쇠약해진 경우, 정신적 신체적 과로로 기력이 저하된 경우, 만성 피로가 심하여 휴식으로도 회복이 더딘 경우, 선천적으로 체질이 약한 경우, 혈액순환 저하로 몸이 무겁고 저린 경우, 신경이 예민하여 어지럼증과 불면증이 있는 경우, 과다한 스트레스와 음 주로 간 기능이 약화된 경우 등에 유용하다고 알려져 있다. 동의보감에는 “대체로 남자가 장년시기에 진기(眞氣)가 몹시 약한 것은 타고날 때부터 약하고 허한 것이 아니므로 성질이 조(燥)한 약재를 쓰지 말아야 한다. 음혈을 보한다고 하는 처방들에 약품은 많으나 약효가 매우 약하여 효력을 보기 어렵다. 다만 타고난 원기를 든든히 하여 신수와 심화가 잘 오르내리게 되면 오장이 스스로 조화되고 온갖 병이 생기지 않을 것이다. 이런 때에는 이 처방을 쓴다.”라고 되어 있고 녹용(졸인 젖을 발라 구운 것), 당귀, 산수유 각각 160g, 사향(따로 간 것) 20g을 가루 내어 술을 두고 쑨 밀가루풀로 반죽한 다음 벽오동씨 만하게 알약을 만들어 한번에 70-100알씩 데운 술이나 소금 끓인 물로 복용하게 되어 있다.

그러나, 공진단의 주요성분 중 하나인 사향은 원료에 대한 공급이 원활하지 못하고 가격 또한 고가이며 진위에 대한 논란이 심하여 사용상의 문제가 있어 왔다. 또한, 최근에 사향의 대체품으로 사용하고 있는 목향은 의약품으로는 사용이 가능하지만 식품으로 개발할 수 없는 단점이 있다.

이에, 본 발명자는 사향을 제외하면서도, 기존의 공진단과 유사한 약리 효과를 갖는 새로운 배합의 생약 조성물을 개발하기 위해, 연구를 거듭한 결과, 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 생약 추출물을 적정 성분비로 포함하는 조성물이 증진된 항염 및 항알러지 활성을 통한 면역력 증진 및 피로회복 효능을 나타내며, 환제로 제조시 식감이 우수하여 새로운 배합의 가미공진단으로 이용할 수 있음을 발견함으로써, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물과 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 면역질환 예방 또는 치료용 약학적 제제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 면역질환 개선 및 피로회복 증진용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 생약 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 조성물에 포함되는 각 생약 재료들은 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있으며, 생약 추출물을 제조하는 방법은 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 구체적으로, 건조, 동결 상태 또는 자연 그대로의 재료들을 적절히 세절하여 건조중량의 약 1 내지 15배, 바람직하게는 약 10 내지 15배 부피의 정제수(물), 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매 를 사용하여 추출할 수 있다. 추출 방법은 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등을 이용할 수 있으며, 바람직하게는 열수 추출한다. 또한, 상기 추출물을 정제 및 농축하기 위해 여과하여 동결건조하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 녹용은 사슴과(鹿科；Cervidae)에 속한 매화록(梅花鹿) Cervus nippon Temminck, 마록(馬鹿) C. elaphus Linne 또는 대록(大鹿) C. canadensis Erxleben의 숫사슴의 털이 밀생하고 아직 골질화 되지 않았거나 약간 골질화 된 어린 뿔을 자른 다음 말린 것이다. 녹용에는 16 종류의 아미노산이 함유되어 있는데, 그 중에서 proline, lysine, serine의 함량이 가장 높은 것으로 알려져 있다. 녹용의 상대에는 amine류가 다량 함유되어 있는데 그 중에서 spermine, spermidine, putrescine이 풍부하다. 녹용의 중대와 하대에는 골화가 많이 진행된 상태이며 spermidine의 함량이 감소되어 있다. 이 외에도 collagen, estrone, proteolipid 등이 함유되어 있다. 최근의 연구를 종합하면 간장계, 면역계, 심혈관계, 노화, 스트레스, 당대사, 조혈작용 등에 대한 효능이 있다. 특히 녹용의 에탄올 분획물의 경우 상처치료와 외부물질 침입에 대한 보호 등 면역조절작용에 효과가 있고 녹용이 추출형태가 탕제나 추출물로 어느쪽에서도 모두 일정하게 면역증강의 효과가 있는 것으로 나타났다는 연구보고가 있다. 한의학적으로는 성질이 따뜻하고 맛은 달고 짜며 신장과 간에 작용을 하여 신장의 양기를 보충하고 정혈을 보충하여 근골을 강하게 하고 성기능이나 임신과 관련된 기능을 조절한다고 알려져 있다.

당귀는 미나리과(Umbelliferae)에 속한 다년생 초본인 당귀 참당귀 Angelica gigas Nakai의 뿌리를 건조시킨 것이다. 방향성분인 정유 및 데쿠신, 진정작용하는 베타시토스테롤, 자당, 니코틴산, 엽산 등의 성분으로 구성되어 있다. 각종 여성 질환, 생리불순, 생리통, 빈혈, 자궁 발육 부진, 산후 혈액 부족, 갱년기 장애 등에 두루 효과가 있고 여성 호르몬 분비를 원활하게 도와주는 작용이 있다. 최근의 연구결과로는 당귀가 세포성 면역반응에 우수한 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 한의학적으로는 성질이 따뜻하고 맛은 달고 매우며 심장, 간, 비장에 들어가 작용한다. 혈을 보충하고 조화롭게 하며 생리(월경)를 조절하고 변을 잘 통하게 한다.

산수유는 층층나무과(山茶萸科：Cornaceae)에 속한 낙엽소교목인 산수유나무 Cornus officinalis Sieb. et. Zucc.의 성숙한 열매를 건조한 것으로, 果肉에는 cornin, 즉 verbenalin, saponin, tannin, ursolic acid 및 vitamin A가 함유되어 있고, 종자의 지방유에는 palmitin acid, olein acid, linol acid 등이 함유되어 있다. 위 성분 중 코르닌은 신진 대사에 활력을 향상시켜주며, 항당뇨 효과가 추정되는 물질도 포함하고 있다. 최근 연구결과로는 산수유가 면역세포의 활성을 항진시켜 면역증강능력을 하고 또한 일정 정도의 항암효과가 있다는 보고가 있다. 한의학적으로 성질은 따뜻하고 맛은 시거나 떫고 간장과 신장에 작용한다. 간장, 신장의 기능을 보충하고 정액이 흘러나가는 것을 붙잡아 준다.

구기자는 가지과(茄科：Solanaceae)에 속한 구기자나무 Lycium chinense Mill. 또는 기타 동속식물의 성숙한 과실로, Carotene 3.39㎎％, vitamin B1 0.23㎎％, vitamin B2 0.33㎎％, nicotin acid 1.7㎎％, vitamin C 3㎎％을 함유하고, β-sitosterol, linoleic acid등이 함유되어 있다. 한의학적으로 성질은 평하고 맛은 달며 간장과 신장에 들어가 기능를 보강하고 정을 보충시키며 눈을 맑게 한다고 하였다. 이것을 지속적으로 복용하면 콜레스테롤을 줄이는 동시에 동맥경화증 예방 치료에 효과적이다. 이것의 뿌리 또한 약으로 사용할 수 있는데 뿌리껍질의 약리 실험에 의하면 혈압강하, 혈당량 저하, 살균작용이 있는 것으로 나타나 있다.

산약은 마과(Dioscoreaceae)에 속한 마 Dioscorea batatas Decne.(＝D. opposita Thunb.)와 참마 D. japonica Thunb.의 껍질을 제거한 뿌리줄기 Saponin, 점액, cholin, 전분(16％), glycoprotein과 유리amino산을 함유하며, 또한 abscisin Ⅱ, polyphenol 산화효소, vitamin C(5mg％), 3,4-dihydroxy-phenyle-thylamine(dopamine)을 함유하고 점액 중에는 mannan과 phytin산이 함유되어 있다. 한의학적으로는 성질이 평하고 맛은 달며 비장, 폐, 신장에 작용하며 특히 기능적으로 비위의 기능을 보강하고 진액을 보충시키며 신장을 보강하고 정액을 거두어 들인다.

진피는 운향과(芸香科：Rutaceae)에 속한 귤나무(橘) Citrus unshiu Markovich (＝Citrus reticulata Blanco) 및 동속 근연식물의 성숙한 과실의 과피 로 성분 중 정유성분으로 주성분은 d-limonine이며 이 외에도 hesperidin, myoinositol, vitamin C 등이 함유되어 있고 또한 flavonoide 배당체가 많이 함유되어 있다. 주 약리작용은 리파제(lipase)의 활성증가, 항알러지 효과, 자궁근의 수축 억제, 진정효과, 모세혈관 투과성 억제와 모세혈관 강화에 의한 동맥경화 및 고혈압예방 효과 등이다. 한의학적으로 성질은 따뜻하고 무독하며 맛은 맵고 쓰다. 비장과 폐로 들어가 기를 소통시키고 비위를 튼튼하게 하며 몸의 습을 조절하과 담을 없애는 효능이 있다.

곽향은 꿀풀과(脣形科：Labiatae)에 속한 배초향(藿香) Agastache rugosa (Fisch. et Meyer) O. Kuntze의 전초의 지상부로 6~7月 사이에 채취하여 햇볕에 말리거나 음건한다. 곽향에는 정유 0.28％를 함유되어 있으며, 주성분으로 methylchavicol이 80％ 이상을 차지하고, anethole, anisaldehydel, α-limonene, ρ-metlioxycinnaldehyde, α-pinene, β-pinene, 3-ocatanone, 3-ocatanol, ρ-cymene, 1-octen-3-ol, linalool, 1-caryophyllene, β-elemen, β-humulene, β-farnesene, γ-cadinene, calamenene 등이 함유되어 있다. 성질은 약간 따뜻하고 맛은 맵다. 비위와 폐로 들어가 향기로 더러운 기운을 몰아내고 비위기능을 촉진하고 구토를 멎게 하고 겉의 사기를 없애고 더위를 몰아낸다.

천마는 난초과(蘭科：Orchidaceae)에 속한 천마 Gastrodia elata Bl.의 덩이뿌리를 건조한 것으로 Gastrodin, gastrodioside(p-hydroxybenzol), vanillyl alcohol, succinic acid, citric acid, palmitic acid, p-hydroxybenzaldehyde, 미량의 alkaloids 등을 함유하고 있다. 주성분으로 알려진 gastrodin함량은 산지에 따라 차이가 있으나 약 0.25~0.67％ 정도이다. 성질은 평하고, 맛은 달다. 간장으로 들어가 간화를 다스리고 풍을 제거하며 경련을 멎게 한다.

육계는 녹나무과(樟科：Lauraceae)에 속한 육계 Cinnamomum cassia Presl의 수피로 정유성분이 1~2％ 함유되어 있는데, 그 주성분은 cinnamaldehyde가 75~90％이다. 성질은 뜨겁고 맛은 맥고 달다. 신장, 비, 방광으로 들어가 인체의 양기를 보충시키고 비위를 따뜻하게 하며 차가운 기운을 몰아내고 혈맥을 잘 통하게 한다.

오미자는 오미자과(Schisandraceae)에 속한 오미자(북오미자) Schisandra chinensis Baill. 또는 화중오미자(남오미자) S. sphenanthera Rehd. et Wils.의 완숙한 과실을 건조한 것으로, 정유 약 3％가 함유되어 있으며, 정유 속에 다양의 sesquicarene, β2-bisabclene, β-chamigrene, α-ylangene 등이 함유되어 있다. 건조된 과실은 citral 12％, 사과산 10％ 및 소량의 주석산을 함유하고 그 밖에 과당, 수지 등이 함유되어 있다. 성질은 따뜻하고 맛을 시고 달다. 폐, 심, 신장으로 들어가 수렴하고 거두어 들이며 기를 보충하고 진액을 생산하며 신장의 기운을 보충하고 진액을 생성하게 한다.

인삼은 두릅나무과(五加科：Araliaceae)에 속한 인삼 Panax ginseng C.A Mey 의 뿌리를 가공한 것으로, 가을에 줄기와 잎이 마를 때 캐어 말린 것을 백삼이라 하고, 잔뿌리를 제거하고 쪄서 건조한 것을 홍삼이라 하며 설탕에 가공하여 건조한 것을 당삼이라 한다. 인삼에는 ginsenoside가 약 5.22％ 함유되어 있다. 인삼 ginsenoside는 13종 이상의 saponin혼합물이며, 그 가운데에서 ginsenoside Rb1, Rc 및 Rg1의 함유량이 비교적 높다. saponin이 함유된 genin은 protopanaxadiol, protopanaxatriol, oleanol acid의 3종이 있다. 또한 정유가 약 0.05％ 함유되어 있는데 여기에는 독특한 향기의 근원이 되는 β-elemen과 쉽게 수지로 변하는 panaxynol이 함유되어 있다. 또한 panax acid는 palmitin acid, stearin acid, olein acid, linol acid 등의 혼합물인데 뿌리에 함유되어 있는 지질의 가수분해에 의하여 생성된 것이다. 또 β-sitosterol, stigmasterol 및 campesterol과 daucosterol도 분리되었으며, cholin이 0.1~0.2％ 함유되어 있는데 이것이 인삼의 강압성분이다. 또 많은 종류의 amino acid와 peptide류, vitamin AㆍBlㆍB2ㆍC 등과 포도당, 과당, 맥아당, 자당 등이 함유되어 있다. 한의학적으로 성질은 약간 따듯하고 맛은 달고 약간 쓰다. 비, 폐, 심장으로 들어가 원기를 보충하고 진액을 만들며 전신을 편안하게 하는 기능을 가지고 있다. 적혈구 생성을 촉진해 빈혈을 예방하고, 빈혈로 인한 신진대사 이상을 개선시킨다. 특히 암 환자의 빈혈 회복을 도우며 류머티스, 결핵, 노인성 빈혈에 효과가 탁월하다. 지혈 효과도 있다. 혈압을 조절하고 심장쇠약을 치료한다. 혈압조절 효능이 있어 저혈압과 고혈압에 효과가 있다. 또한 심장 쇠약, 심근의 영양 부족, 관상동맥 질환, 협심증 등 심혈관 계통의 질병에 효과가 있다. 심장성 쇼크나 일시적인 빈사 상태 등의 구급 처방에 활용 되기도 한다. 또한 갈증을 없애고 당뇨병을 치료한다. 비장 기능 강화와 당뇨병 치료에 효과가 있다. 인슐린 분비를 촉진해 혈당치를 떨어뜨리고, 체액을 보충해 당뇨로 인한 갈증을 해소시킨다. 합성 당뇨병 치료약과 같이 지나치게 혈당치를 떨어뜨리는 위험이 없기 때문에 안심하고 먹을 수 있다. 위를 튼튼히 하고 설사를 멎게 한다. 위와 장이 냉한 경우 식욕을 돋우고 소화가 잘 되도록 돕는다. 위산이 부족하거나 과다한 만성 위염환자의 경우 증상이 개선되고 식욕이 좋아지며, 통증이 줄어드는 효과도 있다. 위암을 예방, 치료하고 위암 수술을 받은 환자가 먹으면 면역 기능이 강화된다. 또한 인삼은 성질이 따뜻하여 설사를 멈추게 하는 효능도 있다. 홍삼은 인삼을 가공한 형태로 항암작용과 면역증강 작용이 뛰어난 것으로 알려져 있다.

본 발명의 면역증강용 조성물에 포함되는 각 구성성분의 함량은 녹용 10~30중량%, 산수유 10~30중량%, 당귀 10~30중량%, 구기자 5~15중량%, 산약 5~15중량%, 진피 5~15중량%, 천마 1~5중량%, 배초향 1~5중량%, 계피 1~5중량%, 홍삼 1~5중량% 및 오미자 1~5중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 녹용 18~22중량%, 산수유 18~22중량%, 당귀 18~22중량%, 구기자 8~12중량%, 산약 8~12중량%, 진피 8~12중량%, 천마 1~4중량%, 배초향 1~4중량%, 계피 1~4중량%, 홍삼 1~4중량% 및 오미자 1~4중량%로 포함하고, 더욱 바람직하게는 녹용 20중량%, 산수유 20중량%, 당귀 20중량%, 구기자 10중량%, 산약 10중량%, 진피 10중량%, 천마 2중량%, 배초향 2중량%, 계피 2중량%, 홍삼 2중량% 및 오미자 2중량%로 포함한다. 본 발명의 면역증강용 조성물은 상기한 구성성분비를 가질 때, 세포독성을 나타내지 않으면서도 최적의 면역력 증강 효능을 나타낸다. 또한, 본 발명의 조성물이 환제 형태로 제공될 때, 상기한 구성성분비를 가지는 경우 식감이 우수하여 취식성이 높은 특징을 가진다.

또한, 본 발명의 면역증강용 조성물은 항염 및 항알러지 활성을 나타내며, 특히 CTACK/CCL27 케모카인 발현 억제능을 가짐을 특징으로 한다.

알러지성 과민반응(allergic hypersensitivity)은 체내에 이 물질이 침입했을 때 즉, 병원균, 기생충, 바이러스 등의 이종단백질 항원이 체내에서 면역세포와 과민하게 반응하는 면역학적 현상을 말한다. 이러한 알러지성 과민반응은 즉시형 과민반응과 지연형 과민반응으로 분류되는데, 다양한 항원(antigen)들에 의해 동반된 형태로 유발될 수 있다. 이는 주로 혈청 내 IgE 항체의 증가와 함께 일련의 Th2 세포의 편향을 유도하여 Th2 사이토카인(IL-4, IL-5, Il13)의 유도 및 케모카인(CCL17/TARC, CCL22/MDC, CCL27/CTACK)의 생산을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 특히 Th2 케모카인은 말초혈액 또는 림프절의 면역세포에 작용하여 염증부위로 침윤을 야기하는 화학주성(chemotaxis)을 촉진하는데, CCL17/CTACK는 CCR10에 특이적으로 결합하여 화학주성을 일으킨다고 최근에 보고되었다.

또한, 아토피 피부질환과 천식을 비롯한 알러지성 면역 반응은 IgE에 의한 즉시형 면역반응(제1형)으로 표현되는데, 히스타민, 프로스타글란딘 등의 매개물에 이어서 후기에 나타나는 전구-염증 사이토카인(pro-inflammatory cytokines) 및 케모카인(chemokines)과 같은 염증성 매개물이 대량 생산된다는 특징이 있다. 또한, 즉시형 면역반응에서 생성된 물질은 이미 생성된 염증성 매개물질과 이들이 상호작 용에 의해 혈관 투과성을 증가시킨다. 이어서 비만세포가 활성화되고 호산구를 비롯한 면역세포가 염증부위로 침윤되면서 류코트리엔, 전구-염증 사이토카인 및 케모카인과 같은 매개물에 의해서 알러지 반응으로 대표되는 Th2 세포가 활성화됨으로써 만성적 염증반응을 유발시키는 것으로 알려졌다. 따라서, IgE와 Th2 사이토카인은 천식 및 아토피 피부염 등의 환경성 질환의 핵심 지표로 이용될 수 있다.

본 발명의 실시예에 따르면, 상기 조성물은 세포독성 및 체중변화 없이, 난백알부민(ovalbumin, OVA) 감작 시 부종을 감소시켰으며, 염증 및 알러지 반응에 관여하는 면역글로불린인 IgE의 혈청 내 농도를 저하시켰으며, CTACK/CCL27 케모카인 및 이들의 수용체로 알려진 CCR10 발현을 억제시키는 것으로 나타났다.

케모카인은 약 100 여개의 아미노산으로 구성된 작은 단백질(8~11kD)로서, 선택적으로 백혈구의 분화, 활성, 및 이동 등을 조절하며, 이러한 기능을 통하여 염증반응에서 중추적인 역할을 한다. 예를 들어, 케모카인은 림프 조직뿐 아니라 비림프 조직에서도 만들어져 백혈구들이 이동하는 과정을 조절하고, 혈관을 통과하여 조직으로 침투한 백혈구를 농도의 차이를 이용하여 염증부위로 유인하는 작용을 하기도 한다. CTACK/CCL27은 피부 등에서 특이적으로 발현되는 CC-케모카인으로, CLA+ 림프구(cutaneous lymphocyte associated antigen positive lymphocyte)에서 발현되는 케모카인 수용체인 CCR10과 결합하여, 결과적으로 T-림프구를 피부로 이동시키는 것으로 알려졌다. 또한, 상기 CTACK/CCL27은 각질형성세포에서 피부 상처나 감염에 의해 형성된 사이토카인인 TNF-α(Tumor Necrosis Factor-α)에 의해 유 도되며, IL-4 유전자 도입을 통한 아토피성 피부염 마우스 모델에서 CTACK/CCL27이 T-세포의 피부 침윤을 증가시키며, 초기 피부 손상에서 항-CTACK/CCL27에 의해 염증 진행과 T-세포 및 비만 세포(mast cells)의 피부 침윤이 감소되는 것이 확인됨으로써, CTACK/CCL27이 피부 염증 질환 및 아토피 피부염을 유발시킬 수 있음이 알려졌다. 이러한 결과들은 본 발명의 조성물이 CTACK/CCL27 케모카인의 발현 억제능을 가짐으로 인해 피부 염증질환 및 아토피 피부염에 유용하게 이용될 수 있음을 시사하는 것이다.

본 발명의 면역증강용 조성물은 대표적인 한의학 처방약인 공진단의 주요구성성분으로 알려진 녹용, 산수유 및 당귀를 포함하면서, 다른 생약들, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자를 적정 비율로 포함함으로써, 면역증강 작용을 나타내므로, 사향이 제외된 가미공진단 제조에 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 조성물은 특히 환제 형태로 가공되는 것이 바람직하다. 이러한 환제 형태는 생약을 추출하여 농축한 후 각 약재를 분쇄기를 이용하여 극세말하여 추출물과 가루를 혼합하고, 약액과 혼합한 가루는 다시 분쇄기에 넣어 극세말을 하여 300 내지 500mesh의 체에 걸러내 미세한 입자로 만들어 꿀과 함께 환(丸) 또는 단(丹), 원(元) 등으로 제조할 수 있다. 환ㆍ단ㆍ원으로 만든 약재는 다시 식용 금박(또는 은박)을 사용하여 포장을 할 수 있다. 금 또는 은은 예로부터 환약을 만들 때 사용되어 마음을 안정시키고 방충 방부의 효과로 공진단이나 우황청심원 같은 처방에 보조재료로 이용하여 왔다. 또한, 다른 형태로는 환을 만드는 과정은 동 일하게 하고 자초나 단삼 같은 한약재 중에서 과거부터 염료로 사용해왔고 방충 방부의 효과가 있는 약재를 추출하여 표면에 코팅하여 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 조성물은 면역증강을 위한 약학적 제제 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.

따라서, 또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 면역증강용 조성물과 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역질환 예방 또는 치료용 약학적 제제에 관한 것이다.

본 발명에서 "면역질환"은 생체의 면역체계 이상으로 유발되는 다양한 염증성 질환, 알러지성 질환 및 암 등을 포함하며, 예를 들면, 감기, 천식, 폐렴, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 아토피성 피부염, 알러지, 류마티스 관절염, 알츠하이머병, 자가면역성 갑상선 질환, 염증성 장질환, 재생불량성 빈혈, 홍반성 루푸스 및 건선 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 조성물은 면역질환 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 제공될 수 있으며, 담체와 함께 제제화될 수 있다. 상기 본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리 톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 약학적 조성물로 이용될 때, 생약 추출물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 건조 중량 기준으로 0.0001 ~ 50중량%, 바람직하게는 0.1 ~ 20중량%의 함량으로 포함되어 제제화될 수 있다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 건강 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 총 생약 추출물의 건조 중량 기준으로 0.0001 내지 1000mg/kg, 바람직하게는 0.1 내지 100mg/kg의 양을 1일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.

본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 구체적으로, 구강, 직장, 국소, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 경피, 비측내, 흡입, 안구 내 또는 피내경로를 통해 통상적인 방식으로 투여될 수 있다. 바람직하게는 경구 투여한다.

본 발명의 조성물은 임의의 동물에 적용가능하며, 동물은 인간 및 영장류뿐만 아니라, 소, 돼지, 양, 말, 개 및 고양이 등의 가축을 포함한다.

또한, 본 발명의 조성물은 염증 질환 및 알러지성 질환 등의 면역질환 예방 및 치료를 위하여 단독으로 사용하거나, 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 면역증강용 조성물을 포함하는 면역질환 개선 및 피로회복 증진용 건강기능식품에 관한 것이다.

본 발명의 상기 조성물은 염증 질환 및 알러지성 질환 등의 면역질환 예방 또는 개선이나 피로회복 증진을 위한 목적으로 건강기능식품에 첨가될 수 있다. 이 때, 조성물에 포함되는 각 생약 재료들은 추출물 형태 외에도 재료 자체를 분말화하여 추가로 첨가하는 방식으로도 이용될 수 있다.

상기 건강기능식품은 최종 제품의 상품성과 소비자 기호도에 따라 다른 식품소재를 첨가하여 제조될 수 있다. 상기 조성물의 유효한 첨가량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 바람직하게는 총 원료에 대하여 생약 건조 중량을 기준으로 0.01 내지 90중량%, 더욱 바람직하게는 5 내지 30중량%로 첨가될 수 있다.

본 발명의 면역증강용 조성물은 식품학적으로 허용가능한 식품첨가제를 추가로 포함하여 제제화함으로써 제제 형태의 건강기능식품으로 제조할 수 있으며, 제제의 형태로는 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등이 가능하다.

또한, 상기 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 예를 들면, 음료수, 차, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함한다.

또한, 본 발명의 건강기능식품은 다양한 향미제, 천연 탄수화물, 감미제, 비타민, 전해질, 착색제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 특히, 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 사용할 수 있으며, 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 0.01~10 g 정도의 범위에서 선택될 수 있다.

본 발명에 따른 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자의 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물은 IgE 항체 분비 억제 및 케모카인 발현 억제를 통한 항염 및 항알러지 효과를 나타내므로, 면역증강 및 피로회복을 위한 약학적 제제 또는 건강기능식품 제조에 유용하게 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 면역증강용 조성물은 면역력 증진, 자양강장, 수험생 체력증진, 항노화, 피로회복증진 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 환제 형태로 가공시 식감이 우수하여, 사향이 제외된 가미공진단 제조에 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 생약재의 대다수가 우리나라에서 나는 토종약재로 구성되어 있어 우리나라 농가의 약재산업의 발전에도 기여할 것으로 기대된다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 통해 본 발명의 구성 및 작용을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되지는 않는다. 여기에 기재되지 않은 내용은 이 기술 분야에서 숙련된 자이면 충분히 기술적으로 유추할 수 있는 것이므로 그 설명을 생략하기로 한다.

실시예 1. 재료 준비

<1-1> 생약 추출물 제조

본 발명의 조성물에 포함되는 재료로서, 녹용, 산수유, 당귀, 구기자, 산약, 진피, 천마, 배초향, 계피, 홍삼, 및 오미자는 울산시 소재 약재상에서 구입한 후, 분쇄하였다. 분말화된 생약재들을 표 1의 조성으로 총 약재 중량이 1kg이 되도록 한 후, 이를 증류수 4L로 추출기를 이용하여 3시간 동안 열수추출하였다. 수득한 추출물은 0.45㎛ 필터를 사용하여 여과한 후 동결건조기 (Model, EYELA FDU-2100, Janpan)에서 건조하여 227g을 수득하였다. 상기 수득된 추출물을 '가미공진단(Gami-KongJin-dan, GKD)'이라 명명하였으며, -20℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.

성분명	생약명	학명	함량(중량%)
녹용	Young antlers of the deer	Cervus nippon	20
산수유	Cornus Radix	Cornus officinalis	20
당귀	Angelica Radix	Angelica gigas	20
구기자	Lycium Radix	Lycium chinense	10
산약	Dioscorea Radix	Dioscorea japonica	10
진피	Dried orange pee	Citrus unshiu	10
천마	Gastrodia Radix	Gastrodia elata	2
배초향(곽향)	Aqastache Radix	Aqastache rugosa	2
계피	Cinnamo- mum Radix	Cinnamo- mum zeylanicum	2
홍삼	Scutellaria Radix	Scutellaria baicalensis	2
오미자	Schisandra Radix	Schisandra chinensis	2

<1-2> 시약 준비

난백알부민(ovalbumin, OVA), aluminium hydroxide, NH4Cl는 Sigma-Ardrich사(St Louis, MO)로부터 구입하였다. Total IgE, OVA-specific IgE, IgG1, IgG2a 등 ELISA kits는 Shibayagi사(Japan)로부터 구입하였고, CCL27/CTACK ELISA kit와 Anti mouse CCR10-PE conjugated antibody는 R&D사(Minneapolis, MN, USA)로부터 구입하였다.

<1-3> 실험동물 준비

무균환경에서 사육된 7주령의 암컷 BALB/c계 마우스는 중앙동물실험실(서울)사로부터 구입하였다. 마우스는 1주일간 스트레스를 해소하기 위해 1주일간 낮과 밤의 주기를 12시간씩 고정하여 사료(중앙동물실험실)와 멸균 물을 공급하면서 사육한 후 실험동물위원회의 실험 규정에 준하여 실험에 사용하였다.

실시예 2. OVA 감작을 통한 알러지 반응 유도

실험동물에게 염증 및 알러지 반응을 유도하기 위해, 마우스에 OVA 감작을 유도하였다. 난백알부민(ovalbumin, OVA)은 마우스에 감작(sensitization)하면, B세포의 활성에 의한 혈청 내 IgE의 증가와 함께 T 세포 매개에 의한 염증성 사이토카인(Th2 사이토카인)은 물론 화학주성의 원인인 케모카인의 생산을 증가시키는 것으로 알려졌다. OVA에 감작되면 혈청 내 항체뿐만 아니라 호산구(eosinophils)의 침윤이 높게 일어나고, 비만세포(mast cell)와 호염구에서 FcεRI와 매우 강력한 결합에 의하여 알러지성 질환을 유발하는 것으로 알려졌다. 따라서, OVA 감작을 통한 면역반응 유도는 알러지성 질환을 야기하는 동물모델로 많이 활용되고 있다.

구체적인 실험방법은 다음과 같다. 마우스 등쪽 털을 가위로 주의 깊게 자르고 제모크림을 바르고 25℃ 물을 이용하여 털을 제거한 후 400 mg/mL OVA를 용액을 제조하고 감작일에 Spergel 등의 방법(Spergel JM, et al., J Clin Invest. 1998,15;101(8):1614-22)을 변형하여, 도 1과 같은 프로그램에 의하여 100㎕ OVA(400㎍ OVA)을 복강에 주사하였고 2주 후에 같은 방법으로 복강에 주사하여 1주일간 방치 후 20㎕ OVA(500㎍/㎖)을 왼쪽 발에 주사하여 공격하고, 왼쪽 귀에는 20㎕의 생리식염수를 주사하였다. 대조군은 29일 또는 31일째 되는 날에 정제수를 주사하였으며, 실험군은 각각 다른 투여량의 GKD(50~200mg/kg체중)를 주사하였다. 이후, 마우스의 발 두께, 세포독성, 혈청 내 면역글로불린 항체 및 CTACK/CCL27 케모카인 발현 수준, 및 림프절내 CCR10 수용체 발현 수준 등을 검사하였다.

실시예 3. 체중 변화 측정

실시예 2의 방법으로 OVA 감작된 마우스에 생약 추출물(가미공진단, GDK)을 투여했을 때의 체중 변화를 확인하였다.

이를 위해, 스트레스가 해소된 8주령의 BALB/c계 마우스를 5마리씩 분주하여 OVA로 감작하기 1시간 전부터 실험 종료 시까지 대조군과 실험군은 각각 생리식염수와 GDK약물(50~200mg/kg체중)을 하루에 1회씩 경구투여 하였다. 실험시작일로부터 종료일까지 3일 간격으로 약물을 투여하기 직전에 체중을 계측하였다. 그 결과 도 2와 같이 아무런 약물과 OVA로 감작되지 않은 음성대조군은 정상적인 성장을 보인 반면, OVA로 감작된 양성대조군의 경우 21일까지는 음성대조군에 비해 체중의 증가량은 감소되었으나 두 번째 감작한 21일 이후에는 체중의 감량이 현저했다. 그러나 가미공진단이 투여된 실험군의 경우 50mg/kg 투여군을 제외하고 100mg/kg 투여군과 200mg/kg 투여군에서는 21일 감작 후 체중의 증가가 음성대조군과 비슷하게 증가했다(p<0.05와 p<0.01). 이러한 결과는 가미공진단의 투여가 OVA 감작에 따른 체중의 감소를 회복시키는 효과가 있다는 것을 제시하는 것이다.

실시예 4. 세포독성 평가

생약추출물(가미공진단)을 마우스에 투여한 경우 세포독성에 미치는 효과를 알아보았다.

이를 위해, OVA로 감작과 공격된 마우스에 Brewer's thioglycollate broth를 마리당 2 mL씩 복강내로 주사기를 이용하여 주입하고 3일 후 마우스를 경골탈추법으로 희생시킨 다음 헤파린(5U/㎖)이 첨가된 HBSS 10mL를 복강에 주입하고 복강을 잘 마사지하였다. 마사지 후 26케이지 10 ㎖용 주사기를 이용하여 복강으로 유입된 세포를 얻은 후 2회 원심세척하였다. 분리된 세포는 10% FBS와 1% penicillin/streptomycin이 첨가된 RPMI 1640 배지에 부유시켜 배양접시에 접종한 후 37℃와 5% CO2가 유지되는 배양기에서 2시간 동안 방치하였다. 그 후 대식세포외 다른 세포를 제거하기 위해서 냉각 HBSS을 이용하여 3회 반족 세척하였다. 부착된 생쥐 복강 대식세포는 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 RPMI 1640 배지에 접종한 후 가미공진단(50-200㎍/㎖)을 처리하고 24시간 동안 배양한 다음 MTT방법으로 세포생존율을 조사하여 세포독성을 평가하였다. 요약하면, 1mg/㎖의 농도로 배양하기 위해서 MTT용액이 첨가하고 다시 4시간 동안 배양하였다. MTT-formazan 생성물은 동일한 용량의 용해 완충액(50% n,n-dimethylformamide을 포함하는 20% SDS 용액, pH 4.7)을 첨가함으로써 용해했다. Formazan의 양은 570 nm에 흡수되는 양을 측정함으로써 결정했다.

그 결과, 도 3과 같이 가미공진단(50-200㎍/㎖)을 처리한 결과 세포의 생존율에 아무런 영향을 주지 않았다. 따라서 본 실험에서 사용된 가미공진단의 약물 농도에서는 세포의 독성은 없는 것으로 평가되었다.

실시예 5. 발 부종 억제효과 확인

생약추출물(가미공진단) 투여가 발 부종에 미치는 효과를 알아보기 위해서 OVA로 감작된 28일째 각 실험군의 마우스 왼쪽 발의 두께를 측정한 후에 20㎕ OVA(500㎍/㎖)을 마우스 왼쪽 발에 주사하고 8시간 후에 두께를 측정하여 발 부종율을 계산하였다.

마우스 귀 부종의 측정은 마지막 OVA를 왼쪽 발에 공격직전과 공격한 다음 8시간 후에 디지털 두께 측정기(Model 7326, Japan)로 측정하였다. 발의 부종 (footpad swelling response, FRS)은 하기 수학식1과 같이 계산한 후 %로 표현하였다.

그 결과 도 4와 같이 음성대조군의 경우 부종의 효과가 없었지만, OVA로 감작되고 공격된 양성대조군에서는 발부종이 현저히 증가한 반면, 가미공진단의 투여군은 농도에 의존적으로 부종이 감소되었다. 특히 100mg/kg 투여군 (p<0.05)과 200mg/kg 투여군 (p<0.01)에서는 그 효과가 유의하였다.

실시예 6. 혈청 내 면역글로불린 분비 억제효과 확인

생약추출물(가미공진단) 투여가 혈청 내 면역글로불린 항체 생산에 미치는 효과를 알아보기 위해서, OVA로 감작된 30일째 각 실험군의 마우스을 대상으로 혈청을 분리한 다음 총 IgE와 OVA 특이 IgE, IgG1 및 IgG2a의 항체를 ELISA법으로 측정하였다. 요약하면, anti-mouse IgE, anti-IgG1과 anti-IgG2a는 코팅완충액(0.1 M NaHCO3, pH 8.2)을 이용하여 high binding immunoplate에 well 당 100 μl를 주입하고 4℃에서 24시간 방치한 다음 0.1% Tween 20이 포함되어 있는 PBS로 3회 세척하고 3% (wt/vol) BSA-PBS를 주입하고 2시간 동안 블로킹하였다. 혈청은 1:10으로 희석하여 주입한 후 4℃ 상태에서 12시간 이상 방치한 후 0.05% gelatin 용액에 biotin-conjugated monoclonal rat anti-mouse IgE또는 OVA specific rat anti-mouse IgE mAb을 주입하고 실온에서 1시간 동안 방치했다. 발색은 avidin-alkaline phosphatase (1:1000)를 주입하고 실온에서 1시간동안 반응 시킨 다음 6회 세척하여 phosphatase 기질인 ρ-nitrophenylphosphate, disodium을 첨가하고 발색시켜 405 nm에서 microplate reader ( Molecular Devices)로 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 5와 같이 IgE의 총량은 음성대조군에 비해서 양성대조군에서 현저히 증가되었지만, 가미공진단을 투여한 실험군에서는 농도에 의존적으로 감소하였다. 특히 100mg/kg 투여군 (p<0.05)과 200mg/kg 투여군 (p<0.01)는 그 감소효과가 유의하였다. OVA 특이 IgE의 경우도 총 IgE의 결과와 매우 비슷하게 그 량이 현저히 감소하였고, OVA 특이 IgG1은 200 mg/kg 투여군에서만 감소하였다(p<0.05). 그러나 IgG2a는 가미공진단 투여군 모두에서 큰 영향을 미치지 못하였다. 이러한 결과는 가미공진단 투여가 과민반응 유도지표로 알려진 IgE의 생산량을 감소시키는데 효과가 있다는 것을 보여주는 것이다.

실시예 7. 혈청 내 CTACK/CCL27 케모카인 생산 억제효과 확인

생약추출물(가미공진단) 투여가 혈청 내 CTACK/CCL27 케모카인 생산에 미치는 효과를 알아보기 위해서 OVA로 감작된 29일째 각 실험군의 마우스을 대상으로 혈청을 분리한 다음 CTACK/CCL27 케모카인을 ELISA법으로 측정하였다.

그 결과 도 6과 같이 음성대조군에 비해서 양성대조군에서 현저히 증가되었지만, 가미공진단을 투여한 실험군에서는 농도에 의존적으로 감소하였다. 특히 100mg/kg 투여군(p<0.05)과 200mg/kg 투여군(p<0.01)에서는 그 감소효과가 유의하였다. 이러한 결과는 염증반응에 관여하는 면역세포의 화학주성을 약화시키는데 가 미공진단의 효과가 있다는 것을 보여주는 것이다.

실시예 8. CCR10 발현 억제효과 확인

생약추출물(가미공진단) 투여가 림프절의 면역세포에서 발현되는 CTACK/CCL27 케모카인 특이 수용체인 CCR10의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해, CCR10 발현수준을 flow cytomery법으로 측정하였다. 요약하면, OVA 공격 후 48시간에 각 대조군과 실험군의 마우스를 경추탈골법에 의해 즉사시킨 후 목, 사지 및 장내 림프절을 적출한 후 슬라이드 글레스를 이용하여 단일세포부유액을 제조한 후 세포부유액을 40 μm의 라일론 매쉬에 통과 시킨 후 Ficoll-hypaque을 활용하여 밀도구배법으로 림부구를 분리하였다. 분리된 림프구는 HBSS용액으로 3회 원심세척한 후 PE가 부착된 anti-mouse CCR10 항체를 주입하고 1시간 동안 방치 후 2% paraformaldehyde 용액을 주입하여 고정한 후 Flow cytometry (FACS, BD)을 활용하여 형광강도를 측정하여 CCR10의 발현을 측정하였다.

그 결과 도 7과 같이 OVA 단독 감작군인 양성대조군에서 CCR10의 발현이 현저히 증가되었지만, 가미공진단을 투여한 실험군에서는 농도에 의존적으로 감소하였다. 특히 100 mg/kg 투여군 (p<0.05)과 200 mg/kg 투여군 (p<0.01)는 그 감소효과가 유의하였다. 이러한 CCR10 발현 억제 결과는 도 6에서 보여준 CTACK/CCL27 케모카인의 생산량의 감소와 밀접한 관계가 있는 것을 나타내주는 것이며, 가미공진단이 OVA 감작에 따른 염증반응을 효과적으로 억제시킨다는 것을 제시하는 것이다.

이하, 본 발명의 면역증강용 조성물을 포함하는 약학적 제제 및 식품의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 환제의 제조

실시예 1에서 얻어진 생약 추출물 200 ㎎, 한약재를 미분말화하여 300 내지 500mesh의 체에 걸러낸 분말 100g을 균질하게 혼합하고 꿀등의 부형제를 가하고, 연합 제환하고 금박환의를 하여 환제를 제조하였다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 1에서 얻어진 생약 추출물 200 ㎎, 유당 100 ㎎, 전분 100 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 적량을 혼합하고 통상의 정제 제조방법에 따라 타정하여 정제를 제조하였다.

제제예 3. 캡슐제의 제조

실시예 1에서 얻어진 생약 추출물 100 ㎎, 유당 50 ㎎, 전분 50 ㎎, 탈크 2 ㎎ 및 스테아린산 마그네슘 적량을 혼합하고 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 1에서 얻어진 생약 추출물 100 mg, 소디움 메타비설파이트 3.0 ㎎, 메틸파라벤 0.8 ㎎, 프로필파라벤 0.1 ㎎ 및 주사용 멸균증류수 적량을 혼합하고 통상의 방법으로 최종 부피가 2㎖이 되도록 제조한 후, 2㎖용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조하였다.

제제예 5. 건강식품의 제조

실시예 1에서 얻어진 생약 추출물 200 ㎎, 비타민 혼합물 적량(비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B 1 0.13 ㎎, 비타민 B 2 0.15 ㎎, 비타민 B 6 0.5 ㎎, 비타민 B 12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎) 및 무기질 혼합물 적량(황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎)을 혼합한 다음 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다.

제제예 6. 건강음료의 제조

실시예 1에서 얻어진 생약 추출물 1.28㎎, 꿀 522㎎, 치옥토산아미드 5㎎, 니코틴산아미드 10㎎, 염산리보플라빈나트륨 3㎎, 염산피리독신 2㎎, 이노시톨 30㎎, 오르트산 50㎎ 및 물 200㎖의 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.

도 1은 OVA 감작 실험에 대한 프로토콜을 도시한 것이다.

도 2는 본 발명의 조성물(가미공진단, GDK)을 OVA 감작된 마우스에 투여했을 때의 체중 변화를 나타낸 것이다.

도 3은 본 발명의 조성물을 OVA 감작된 마우스에 투여한 후, 세포독성을 평가한 결과를 보여주는 그래프이다.

도 4는 본 발명의 조성물을 OVA 감작된 마우스에 투여한 후, 발 부종 정도를 평가한 그래프이다.

도 5는 본 발명의 조성물을 OVA 감작된 마우스에 투여한 경우, 마우스 혈청 내 면역글로불린 항체 생산량을 조사한 결과이다.

도 6은 본 발명의 조성물을 OVA 감작된 마우스에 투여한 경우, 마우스 혈청 내 CTACK/CCL27 케모카인 생성 정도를 나타낸 그래프이다.

도 7은 본 발명의 조성물을 OVA 감작된 마우스에 투여한 경우, 마우스 림프절의 면역세포에서 CCR10의 발현 수준을 조사한 그래프이다.

Claims (9)

1. 녹용 10~30중량%, 산수유 10~30중량%, 당귀 10~30중량%, 구기자 5~15중량%, 산약 5~15중량%, 진피 5~15중량%, 천마 1~5중량%, 배초향 1~5중량%, 계피 1~5중량%, 홍삼 1~5중량% 및 오미자 1~5중량%의 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 녹용 18~22중량%, 산수유 18~22중량%, 당귀 18~22중량%, 구기자 8~12중량%, 산약 8~12중량%, 진피 8~12중량%, 천마 1~4중량%, 배초향 1~4중량%, 계피 1~4중량%, 홍삼 1~4중량% 및 오미자 1~4중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 면역증강용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 사향이 제외된 가미공진단 제조를 위한 것임을 특징으로 하는, 면역증강용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 CTACK/CCL27 케모카인 발현 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는, 면역증강용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 항염 및 항알러지 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 면역증강용 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것임을 특징으로 하는, 면역증강용 조성물.
7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 환제 형태인 것을 특징으로 하는 면역증강용 조성물.
8. 제1항의 조성물과 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 감기, 천식, 폐렴, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 아토피성 피부염, 알러지, 류마티스 관절염, 알츠하이머병, 자가면역성 갑상선 질환, 염증성 장질환, 재생불량성 빈혈, 홍반성 루푸스 및 건선으로 구성된 군으로부터 선택되는 면역질환 예방 또는 치료용 약학적 제제.
9. 제1항의 조성물을 포함하는 면역질환 개선 및 피로회복 증진용 건강기능식품.

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