WO2013180469A1 - 천연추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 Th1-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물, 항히스타민 조성물 및 항염증용 조성물을 제공하고, Th1-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료방법, 히스타민 분비 억제방법 및 염증 질환 예방, 개선 또는 치료방법을 제공한다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물은 우수한 IL-4 생성 억제 활성 및 비만세포의 탈과립 억제 활성, 그리고 COX-2 억제, 15-NOX 억제, 알레르겐의 장상피세포층 통과 억제 또는 Treg 세포 유도활성을 갖는다. 또한, 본 발명은 천연물 및 식품 유래 항알레르기 물질의 세부적인 작용기전을 제공하고, 천연물을 소재로 이용하여 안정성, 생산비용의 감소 및 사용의 편이성을 제공할 수 있다.

Description

【명세서】

【발명의 명칭]

천연추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

[기술분야]

본 발명은 대한민국 지식경제부의 지원 하에서 과제번호 E0121500 에 의해 이루어진 것으로서, 상기 과제의 연구관리전문기관은 한국식품연구원， 연구사업명은 "한국식품연구원 주요사업" ， 연구과제명은 "알레르기 대웅 기능성식품 연구개발 사업" ， 주관기관은 한국식품연구원, 연구기간은 2012. 01. 01 - 2012. 12. 31 이다.

본 특허출원은 2012년 05월 29일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제 10-2012-0057005호， 2012년 05월 29일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제 10-2012-0057006호， 2012년 12월 06일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제 10-2012-0141324호， 2012년 12월 06일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제 10- 2012-0141327호， 2012년 12월 06일에 대한민국 특허청에 제출된 대한민국 특허출원 제 10-2012-0141329호에 대하여 우선권을 주장하며， 상기 특허출원의 개시 사항은 본 명세서에 참조로서 삽입된다. 본 발명은 견우자, 결명자， 대극, 배초향， 상륙, 율피， 백축， 영실， 감송향 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1 종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 T h2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료용 조성물 및 T hl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료방법에 관한 것이다.

【배경기술】

근년 소득수준의 향상과 더불어 식습관의 변화， 위생의 청결화, 공해의 심화 등으로 인하여 알레르기는 날로 증가하는 추세를 보이고 있어 전 국민의 20-25%가 아토피피부염 (AD), 천식， 비염 등의 증상을 가지고 있다. 이는 삶의 질을 현격히 저하시킴으로써 심각한 사회문제를 야기하고 있다. 또한， 식품 알레르기는 영유아의 6-8%에서 확인되고 있고， 소아의 AD는 35%가식품알레르기에 의한 것으로 결코 무시할 수 없다.

아직까지 여러 알레르기에 대하여 확실한 효과를 보이는 치료제가 거의 없으며， 소아 아토피피부염이 증가하고 있으나 소아의 특성상 치료에 어려움을 겪고 있다. 특히 스테로이드 계통의 약물은 부작용이 심하여 세계적으로 그 대안을 마련하기위한 시도가 활발하게 이뤄지고 있다. 이러한 알레르기에 대응하는 방안으로써 독성과 부작용이 없으면서 확실한 효능이 기대되는 소재를 천연물과 식품으로부터 발굴하여 ^' 적극적으로 활용할 필요가 있다. 또한, 활성소재 및 성분의 항알레르기 작용기전도 함께 구명되어야 할 것이다.

21세기에 주류를 이루는 치료제는 알레르기 및 당뇨에 대한 것이다 (일본 닛케이산쿄신문). 미국에서는 5,000만 명이 다양한 알레르기 질환을 갖고 있다 (의약품시장， 연 52억불). 일본에서는 연간 1,560억 엔의 알레르기 관련 의약품시장이 형성되어 있으며, 기능성식품시장은 약 600억 엔이다. 국내의 경우 이 분야 의약품시장은 약 500억 원이다. 최근 일본 기능성식품의 특허 동향에서 "항비만" 다음으로 출원건수가 많은 분야가 "항알레르기" 이다. 향후 높은 부가가치가 기대되며 이에 대한 대비가 요망된다.

최근에 면역기능조절이나 알레르기억제 활성을 강조하는 건강기능식품의 개발요구가 높아지고 있으며， 그 인정을 위하여 식품의약품안전청에 많은 건수가 신청되고 있다. 또한, 근년 일본의 특허분석을 통하여 조사한 미래 기능성식품의 잠재력은 "항비만" 다음으로 "항알레르기 " 활성으로 보고되었다.

알레르기는 "과민반웅" 이라는 뜻으로 그리스어인 "alios" 가 어원이며， 이는 "변형된 것" 을 뜻한다. 이처럼 알레르기란 면역시스템의 오작동으로 보통 사람에게는 별 영향이 없는 물질이 어떤 사람에게만 두드러기， 가려움， 콧물, 기침 등의 이상 과민 반응을 일으키는 것을 말한다. 최근 20 년 동안 이와 같은 알레르기성 질병의 발병율이 세계적으로 증가하고 있는 추세이다 (1,2). 주된 증가요인으로는 실내생활의 증가, 신소재의 개발， 외국으로부터 이물질 유입등과 같은 알레르기 유발 물질의 급증과 환경오염 및 스트레스로 인한 면역상태의 불안정， 그리고 식생활의 변화 등이 있다. 이처럼 현대인들의 알레르기 질병 발병율은 점차 증가하나 그 치료방법은 대부분 항히스타민제， 스테로이드제 등의 대중적 요법에 의존하고 있는 실정이며， 근본적인 치료방법은 찾지 못하고 있다 (3).

Gell 및 Coombes(1963)는 알레르기반웅을 발현시간과 타입에 기초하여 전통적으로 4 개의 부류로 나누었다 (4). I - III 형은 항체가 관여하는 체액성 면역 반응 (즉시형)이고， IV 형은 세포가 직접 관여하는 세포성 면역 반응 (지연형)이다. 그리고 면역반웅에 관여하는 세포와 매체의 종류에 따라 수분내에 증상이 나타나는 즉시 또는 조기 반웅과 몇 시간 후에 나타나는 후기단계 반웅으로 나뉘는데 제 I 형은 즉시형 과민반웅， 제 IV 형은 지연형 과민반웅의 형태로 나타난다. 대부분의 알레르기 반웅은 제 I 형으로 천식, 비염， 결막염, 식품 및 약물 알레르기， 아토피성 피부염 등이 대표적인 질환으로 나타나고 심한 경우 아나필락시스 (anaphylaxis)가 일어나 생명을 위협하기도 한다.

제 I 형 즉시형 과민빈？웅은 2 단계로 나뉘는데 제 1 단계는 알레르겐의 체내 침입에 의하여 IgE 및 IgGl의 분비를 억제하고， IgG2a의 분비를 증가시키는 IL-12 및 IFN- /"을 생산하는 Thl 세포반응과 IL-4, IL-5 및 IL-13등을 생산하는 Th2 세포반웅의 균형이 Th2 쪽으로 기울어지게 되면 Th2의 과도한 면역반웅으로 IL-4, IL-13 등이 분비되고 그 영향으로 B 세포가 생산한 IgE 특이항체들이 비만세포 (mast cell)나 호염기구 (basophil)의 표면에 부착됨으로써 알레르기 발증이 준비된 단계이다. 이를 알레르겐에 감작되었다고 한다 (5-7) (그림참조: "allergic diseases" , "Thl/Th2 balance") .

알레르기 발증의 제 2 단계는 초기반응과 후기반응으로 나뉘며, 초기반웅은 알레르겐이 체내에 재침입하여 비만세포를 자극하고 탈과립 반웅을 유발하여 이 때 방출된 히스타민， 지질대사물， 사이토카인 등에 의한 혈관확장 등이 일어나는 것이고, 후기반웅은 해당조직에 호중구, 호산구, 대식세포, Th2 세포, 호염기구 등이 침윤하여 활성화됨으로써 염증이 유발되어 아토피피부염， 비염， 천식 등을 일으키는 것이다 (7). 이 같은 탈과립 분비 물질 중 히스타민은 가장 잘 알려진 인자이며, 즉각형 과민반웅과도 관련되어 알레르기 증상의 중요한 지표로 사용되고 있다 (8). 한편 식품알레르기는 최근 10년 동안 선진국에서는 약 3-6%의 어린이들에게서 발병되며 증가하는 추세를 보이고 있다 (9). 식품알레르기는 소화관을 통해 체내에 들어 온 식품에 대하여 발생하는 것으로 주로 제 I 형 과민반응에 해당한다. 알레르기 환자의 경우 장관을 통하여 식품알레르겐이 소화되지 않은 상태로 침투하게 되며 (.4， 10)， 이러한 알레르겐의 장내 흡수가 식품알레르기 발증의 첫 단계라 할 수 있다 (11). 장관은 영양소의 소화흡수를 담당하는 기관일 뿐만 아니라 여러 가지 생체 조절에 관여하고 있다. 장상피 세포는 소화흡수， 장벽 (barrier), 식신호의 전달 / 변환 등의 주요 기능을 가지고 있을 뿐만 아니라 그 밖에도 독특한 면역시스템 (mucosal immunity)이나 신경조직이 발달되어 있는 등 소화관 /장관의 역할을 결코 과소평가할 수 없다. 이렇듯 장상피세포는 장벽으로써 밀착연접 (tight junction)에 의해 거대 분자의 투과를 제한하나 밀착연접이 손상된 경우에는 장벽의 기능 장애로 인해 투과성이 증가되어 식품알레르기뿐만 아니라 소아지방변증， 급성 췌장염과 같은 질환이 발생된다 (12-17). 즉， 밀착연접의 안정화를 통해 장관의 장벽 기능을 강화시킨다면 식품 알레르기를 예방할 수 있을 것이다.

이미 앞선 논문들에서는 식품 및 천연물의 알레르기 억제 활성이 상당수 보고된 바 있으며, 특히 우리나라에서는 알레르기의 치료 및 예방에 식품과 천연물이 한방과 민간요법으로 사용되어 왔다 (18， 19). 이러한 연구들은 주로 빈랑자， 지모， 호로파 둥의 한약재 및 약초들의 탈과립 억제 활성을 평가한 결과이며 (20-33)， 퀘르세틴 (quercetin), 다래， 마늘， 들깨 기름, 곤약， 소엽， 맥문동의 다당류성분， 영지버섯， 일본간장의 다당체 성분， 로얄 젤리, 동충하초 등에서의 Thl/Th2 면역반웅 조절에 관한 연구도 다수 보고되었다 (34-44). 이 외에 유산균， 발효된 보리， 청국장 등에서의 알레르기성 염증을 억제하는 활성에 관한 결과도 보고되었다 (45-49). 본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다. 【발명의 내용】

【해결하려는 과제】

본 발명자들은 염증성 질환 및 알레르기와 같은 Thl 또는 Th2 면역 반웅에 의해 유발되는 질병， 질환 또는 상태를 예방 또는 치료할 수 있는 천연물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과， 본 발명자들은 견우자0¾3/ /5 nil Choisy) , 결명자 (5a?/?a obtusi folia L.), 덱극 Euphorbia pekinensis) , ^Si^iAgastache rugosa) , 상 (Phytolacca esculenta) , \ Castanea crenata S. ) , 백축 ( ¾ar)/i/s nil Chois) , 영실 {Rosa mult i flora) , ( Nardostachys jatamanse) 및 대황 0¾euw rhabarbarum L.) 추출물이 IL-4 생성 및 비만세포 (mast cell)의 탈과립을 억제하고， C0X-2 억제 활성， 15-N0X 억제 활성， 알레르겐의 장상피세포 통과 억제 활성 또는 Treg 세포로의 분화 유도 활성을 가짐을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서， 본 발명의 목적은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 항히스타민 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 항염증용 조성물을 제공하는 데 있다. 본 발명의 또 다른 목적은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 히스타민 -매개 질환 예방， 개선 또는 치료방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 염증 예방, 개선 또는 치료방법을 제공하는 데 있다. 본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

【과제의 해결 수단】

본 발명의 일 양태에 따르면， 본 발명은 견우자， 결명자， 대극， 배초향, 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 견우자, 결명자, 대극， 배초향， 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 객체 (subject)에 투여하는 단계를 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료방법을 제공한다. 본 발명자들은 염증성 질환 및 알레르기와 같은 Thl 또는 Th2 면역 반웅에 의해 유발되는 질병， 질환 또는 상태를 예방 또는 치료할 수 있는 천연물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과， 본 발명자들은 견우자， 결명자， 대극， 배초향， 상륙， 율피， 백축， 영실, 감송향 또는 대황 추출물이 IL-4 생성 및 비만세포 (mast cell)의 탈과립을 억제하고， C0X-2 억제 활성， 15- N0X 억제 활성 , 알레르겐의 장상피세포 통과 억제 활성 또는 Treg 세포로의 분화 유도 활성을 가짐을 확인하였다.

본 발명의 조성물에서 이용되는 견우자， 결명자， 대극， 배초향, 상륙, 율피， 백축， 영실, 감송향 또는 대황에 추출용매를 처리하여 수득하는 경우에는， 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명에서 이용되는 추출용매는 극성 용매 또는 비극성 용매이다. 극성 용매는 (i) 물， (ii) 알코을 (바람직하게는, 메탄올, 에탄을， 프로판올， 부탄을， 노말-프로판 이소 -프로판올， 노말-부탄을, 1-펜탄을， 2-부톡시에탄을 또는 에틸렌글리콜)， (iii) 아세트산， (iv) DMFO(dimethyl- formamide) 및 (v) DMSOCdimethyl sulfoxide)를 포함한다. 비극성 용매는 아세톤, 아세토나이트릴， 에틸 아세테이트， 메틸 아세테이트， 플루오로알칸, 펜탄， 핵산， 2，2，4-트리메틸펜탄, 데칸， 사이클로핵산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌， 1-펜텐， 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄， 0-자일렌， 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판， 틀루엔， 1-클로로프로판, 클로로벤젤, 벤젠， 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드， 클로로포름， 디클로로메탄， 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민， 에테르， 사염화탄소 및 THF를 포함한다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명에서 이용되는 추출용매는 (a) 물， (b) 탄소수 1ᅳ4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올， 에탄을, 프로판올， 부탄을 등)， (c) 상기 저급 알코을과 물과의 흔합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트， (f) 클로로포름， (g) 부틸아세테이트， (h) 1,3-부틸렌글리콜， (i) 핵산 또는 (j) 디에틸에테르이다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 추출물은 물， 에탄올 또는 이의 조합올 견우자， 결명자， 대극， 배초향, 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 또는 대황에 처리하여 수득한 것이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물' 은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물 (crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획 ( fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉， 견우자, 결명자, 대극, 배초향， 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 또는 대황 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라， 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대， 상기 추출물을 일정한 분자량 컷 -오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획 , 다양한 크로마토그래피 (크기 , 전하， 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등， 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 견우자, 결명자， 대극, 배초향， 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 또는 대황 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명에서 이용되는 견우자, 결명자, 대극, 배초향, 상륙, 율피, 백축, 영실， 감송향 또는 대황 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는' 이란 하기의 견우자， 결명자， 대극， 배초향， 상륙, 율피, 백축， 영실, 감송향 또는 대황 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명은 천연식물재료인 견우자， 결명자， 대극, 배초향， 상륙， 율피， 백축， 영실, 감송향 또는 대황으로부터 추출한 조성물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 상기 견우자, 결명자， 대극， 배초향， 상륙, 율피， 백축， 영실， 감송향 또는 대황이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다양한 Th2-매개 면역 질환, 질병 또는 상태의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.

본 명세서에서， 용어 "Th2-매개 면역 질환" 은 알레르겐 -특이 Th2 세포의 생성 및 활성에 의한 IgE 및 비만세포가 관여하는 질환을 의미한다. 본 명세서에서 용어 "Th2 세포" 는 유전자 발현, 단백질 분비 및 기능적 활성 측면에서 특정되는 헬퍼 T 세포 림포사이트의 서브세트를 의미한다. 예를 들어， Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-10, 및 IL-13 사이토카인 발현 패턴을 나타낸다. Th2 세포는 체액성 면역반웅에 관여한다.

본 발명의 조성물이 적용되는 Th2—매개 면역 질환은 특별하게 제한되지 않으며， 본 발명의 일 구현예에 따르면， 상기 Th2-매개 면역 질환은 알레르기 질환이다.

본 명세서에서， 용어 '알레르기' 는 인체의 어떤 물질에 대한 과민증， 즉 외부로부터 들어온 물질에 대한 신체 면역계의 과도한 반웅으로 유발되는 다양한 질환， 질병 또는 이상 상태를 의미한다. 본 발명의 조성물에 적용되는 알레르기 질환으로는， 바람직하게는， 제 I 형 즉시형 과민반웅 및 제 IV 형 지연형 과민반웅이다. 제 I 형 즉시형 과민반응은 기관지 천식， 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 알레르기성 결막염， 알레르기성 중이염， 두드러기 및 아나필라시 쇼크 (anaphylatic shock)이고， 제 IV 형 지연형 과민반응은 은 접촉성 과민증， 알레르기성 접촉성 피부염， 세균 알레르기, 진균 알레르기ᅳ 바이러스 알레르기， 약물 알레르기， 갑상선염 및 알레르기성 뇌염이다. 제 I 형 즉시형 과민반응은 2 단계로 나뉘는데 제 1 단계는 알레르겐의 체내 침입에 의하여 IgE 및 IgGl의 분비를 억제하고， IgG2a의 분비를 증가시키는 IL-12 및 -_¥를 생산하는 Thl 세포반응과 IL-4, IL-5 및 IL-13 등을 생산하는 Th2 세포반응의 균형이 Th2 쪽으로 기울어지게 되면 Th2의 과도한 면역반웅으로 IL-4 및 IL-13 등이 분비되고 그 영향으로 B 세포가 생산한 IgE 특이항체들이 비만세포 (mast cell) 및 호염기구 (basophil)의 표면에 부착됨으로써 알레르기 발증이 준비된 단계이다. 이를 알레르겐에 감작되었다고 한다. 알레르기 발증의 제 2 단계는 초기반응과 후기반웅으로 나뉘며， 초기반웅은 알레르겐이 체내에 재침입하여 비만세포를 자극하고 탈과립 반응을 유발하여 이 때 방출된, 히스타민, 지질대사물， 사이토카인 등에 의한 혈관확장 등이 일어나는 것이고， 후기반웅은 해당 조직에 호중구， 호산구, 대식세포, Th2 세포， 호염기구 등이 침윤하여 활성화됨으로써 염증이 유발되어 아토피피부염, 비염, 천식 등을 일으키는 것이다. 이같은 탈과립 분비 물질 중 히스타민은 가장 잘 알려진 인자이며， 즉시형 과민반응과도 관련되어 알레르기 증상의 중요한지표로 사용되고 있다.

본 발명의 조성물이 적용되는 알레르기 질환은 아토피 피부염， 아토파와 관련된 다른 피부학적 질환, 알레르기 비염 (급성 또는 만성)， 고초열， 천식 및 식품 알레르기를 포함하나， 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구현예에 따르면， 본 발명의 알레르기 질환은 천식， 알레르기성 비염， 알레르기성 피부염, 알레르기성 아토피 피부염 또는 식품 알레르기이다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 알레르기 질환은 식품 알레르기이다.

본 발명의 주요한 특징은 본 발명의 조성물이 Th2 면역반웅을 억제하는 활성을 갖는 것이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 IL-4의 생성을 억제한다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 견우자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL— 4 생산을 10-99%，

30-99%, 50-99%, 70-99%, 80-99% 또는 90-99% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 IL-4 생산에 대한 IC₅₀ 값이 5-10, 6-9 또는 7-8 yg/ml이다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물은 농도가 50-

100， 70-90 또는 75-85 mg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 대황 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-99%, 30-99%, 50-99%, 70-99%, 70-90% 또는 75-85% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대황 추출물은 농도가 50-100, 70-90 또는 75-85 mg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-99%, 30-99%, 50-99%, 50-90%, 60-80% 또는 65—75% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 IL-4 생산에 대한 IC₅₀ 값이 10-50， 20-40 또는 25ᅳ35 yg/ml이다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 배초향 추출물은 농도가 50-100, 70-90 또는 75-85 mg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 상륙 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-80%， 30-80%, 30-70%, 40-70% 또는 50-65% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 상큭 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 IL-4 생산에 대한 IC₅₀ 값이 0.5—5, 0.5-3 또는 1-3 yg/ml이다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면 , 본 발명의 상륙 추출물은 농도가 50- 100, 70-90 또는 75-85 mg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 대극 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-60%, 10-50%, 10-40%, 20-40% 또는 25-35% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 상륙 추출물은 농도가 50-100， 70-90 또는 75- 85 mg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 율피 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10—50%, 20-50%, 20-40% 또는 25-35% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 상륙 추출물은 농도가 50-100, 70-90 또는 75-85 mg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 백축 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-70%， 30-70%, 50-70% 또는 55-65% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 백축 추출물은 농도가 1-30， 5-30, 7-30, 7-20 또는 7- 15 yg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-50%, 20-50% 또는 20-40% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 영실 추출물은 농도가 1-50， 5-50, 10-50, 20-50, 20-40 또는 25-35 yg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 IL-4 생산을 10-50%， 20-50% 또는 30-40% 감소시킨다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 감송향 추출물은 농도가 1-50， 5-50, 10-50, 20-50, 20-40 또는 25— 35 ug/ml이다.

본 발명의 일 구현예에 라르면， 본 발명의 조성물은 탈과립을 억제한다.

본 명세서에서, 용어 '탈과립' 은 특정 세포 내 존재하는 과립제 (granules)인 분비소낭 (secretory vesicle)으로부터 항균성 세포독성 분자가 유리되는 과정을 말한다. 상기 특정세포는 면역계 내의 과립구 (호중구ᅤ 호산구 및 호염기구) 및 비만세포와 자연살해 세포 및 세포독성 T세포와 같은 특정 임파 세포를 포함한다.

하기 실시예에서 개시한 바와 같이， 히스타민 분비 억제， β- 핵소사미니다아제 유리 (β -hexosaminidase release) 억제 또는 비만세포의 형태변화 억제 활성을 확인함으로써 본 발명의 조성물이 비만세포의 탈과립 억제 활성을 갖는 것을 확인하였다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 30-90% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 50-90%, 70-90% 또는 75-85% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β-핵소사미니다아제의 유리를 30-70%, 30-60% 또는 40- 50% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물은 농도가 30-150， 50-150， 70-150 , 90-150, 90-120 또는 95-105 rag/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 결명자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-60% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 결명자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 10-50%, 10-40% 또는 20-30% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 결명자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β-핵소사미니다아제의 유리를 10-50%， 20-50% 또는 30- 45% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 결명자 추출물은 농도가 1-20, 3-20， 3-10 또는 3—7 μΐ/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대황 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-50% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대황 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 20-40% 또는 25-35% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대황 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β—핵소사미니다아제의 유리를 10-30% 또는 15-20% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대황 추출물은 농도가 1-20， 3-20， 3-10 또는 3-7 μΐ/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-50% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 20-50% 또는 30-45% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β-핵소사미니다아제의 유리를 10-40% 또는 25-40% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 배초향 추출물은 농도가 1-20， 3-20, 3-10 또는 3-7 μΐ/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 상륙 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-90% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 상륙 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 30-90%, 50-90% 또는 6으 80% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 상륙 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β-핵소사미니다아제의 유리를 10-70%， 30-70% 또는 40- 60% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 상륙 추출물은 농도가 1-20， 3-20, 3-10 또는 3—7 μΐ/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 대극 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을

10-70% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 대극 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 30-70% 또는 40-60% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대극 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β-핵소사미니다아제의 유리를 30-70%， 40-60% 또는 4으50% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대극 추출물은 농도가 1-20, 3-20, 3-10 또는 3-7 μΐ/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 율피 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-60% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 율피 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 히스타민 분비를 10-50%， 20-50% 또는 30-40% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 율피 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 β-핵소사미니다아제의 유리를 10-50%， 10-40% 또는 20- 30% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 율피 추출물은 농도가 1-20， 3-20, 3-10 또는 3-7 μΐ/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 백축 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-80%, 30-70% 또는 40-60% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면 본 발명의 백축 추출물은 농도가 0.001-10， 0.005-10, 0.01-10, 0.01-5, 0.01-3 또는 0.01-1 yg/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-90%, 20-90% 또는 20-85% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면 본 발명의 영실 추출물은 농도 0.05-1.0, 0.05-0.5, 0.05-0.3 또는 0.05- 0.1에서 10-30% 또는 20-25% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면 본 발명의 영실 추출물은 농도 0.1-10, 0.5-10, 0.5-5, 0.5-3, 0.7-3 또는 0.7— 2에서 30-90%, 50-90%또는 70-90% 억제한다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 대조군과 비교하여 비만세포의 탈과립을 10-80%, 30-70%또는 40-70% 억제한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면 , 본 발명의 감송향 추출물은 농: £가 0.001-10, 0.005-10， 0.01-10， 0.01-5, 0.01-3또는 0.01-1 yg/ml이다.

본 발명의 조성물은 다양한 Thlᅳ매개 면역 질환， 질병 또는 상태의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.

본 명세서에서， 용어 "Thl-매개 면역 질환" 은 Thl 세포의 생성 및 /또는 활성에 의해 생성되는 사이토카인， 예컨대， IL-Ιβ, IL-2, IL-12, IL-17, IFN-γ 또는 TNF-α 등이 관여하는 질환을 의미한다.

본 명세서에서 용어 "Thl 세포" 는 유전자 발현, 단백질 분비 및 기능적 활성 측면에서 특정되는 헬퍼 T 세포 림포사이트의 서브세트를 의미한다 . 예를 들어 , Thl 세포는 IL-2 및 IFNᅳ γ를 합성하지만 IL—4, IL-5, IL-10 및 IL-13는 합성하지 않는 사이토카인 발현 패턴을 나타낸다. Thl 세포는 다양한 세포내 병원균에 대한 세포 -매개 면역반웅， 기관-특이적 자가면역 질환 및 지연성 과민반웅에 관여한다.

본 발명의 조성물이 적용되는 Thl-매개 면역 질환은 특별하게 제한되지 않으며， 본 발명의 일 구현예에 따르면， 본 발명의 조성물이 적용되는 Thl-매개 면역 질환은 이식 거부, 자가면역질환 또는 염증 질환이다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물이 적용되는 Thl-매개 면역 질환은 대장염， 염증성 장질환， 타입 1 당뇨병， 타입 2 당뇨병， 류마티스 관절염， 반응성 관절염 (Reactive Arthritis), 골관절염， 건선, 공피증， 골다공증， 아테롬성 동맥경화증， 심근염， 심내막염， 심낭염, 낭성 섬유증， 하시모토 갑상선염， 그레이브스병, 나병, 매독， 라임 질환 (Lyme), 보렐리아증 (Borreliosis), 신경성-보텔리아증， 결핵， 사르코이드증 (Sarcoidosis), 낭창， 원판성 낭창, 동창성 루프스, 루프스 신염， 전신성 흥반성 루프스， 천식， 황반변성， 포도막염， 과민대장 증후군, 크로씨병， 쇼그랜 증후군， 섬유근통， 만성피로 증후군, 만성피로 면역부전 증후군， 근육통성 뇌척수염， 근위축성 측삭경화증, 파킨스병， 다발경화증， 자폐스펙트럼 장애， 주의력결핍 장애 및 주의력 결핍 과잉행동장애를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물이 적용되는 Thl-매개 면역 질환은 대장염， 염증성 장질환 또는 류마티스 관절염이다. 본 발명의 일 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자， 결명자， 대극， 율피 또는 대황 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 C0X- 2(cyclooxygenase-2) 활성 억제능을 갖는다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 견우자 추출물은 농도가 60-100, 70-90또는 75-85 rag/ml이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 결명자 추출물은 C0X-2 IC₅₀/ C0X-1 IC₅₀ 수치가 2.5-4.0이고, 상기 대극 추출물은 COX-2 IC₅₀/ C0X- 1 IC₅₀ 수치가 2.5-4.5이며, 상기 대황 추출물은 COX-2 IC₅₀/ C0X-1 IC₅₀ 수치가 7.0-9.0이고, 상기 율피 추출물은 COX-2 IC₅₀/ C0X-1 IC₅₀ 수치가 7.5-9.5이다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 결명자 추출물의 C0X-2 IC₅₀ 값은 각 10으250， 150-250, 150-200 또는 180—200 ug/ml 이다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 대극 추출물의 COX-2 IC₅₀ 값은 각 10-40, 25-40 또는 35-45 g/ml 이다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 율피 추출물의 COX-2 IC₅₀ 값은 10-40， 20-40 또는 30-40 yg/ml이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면， 본 발명의 대극 또는 상륙 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 15-L0X(15-Lipooxygenase)의 활성을 억제한다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 대극 추출물의 15-L0X

IC₅₀ 값은 각 70-100, 80-93 또는 85-90 ug/ml 이다. 본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 상륙 추출물의 15— LOX IC₅₀ 값은 80-120， 90- 110또는 95-105 yg/ml이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면， 본 발명의 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 Treg 세포로의 분화를 유도한다. T세포에서 Treg 세포로의 유도는 Foxp3의 발현 증가로 알 수 있으며， Treg 세포를 유도함으로써 Thl/ Th2 균형을 유도하여 Thl-매개 면역 질환 및 /또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료하는데 유효하다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 감송향 추출물은 1-20， 3-20, 3-15 yg/ml로 처리한 경우 대조군과 비교하여 Fox3p의 발현을 1.5- 4.0배 증가시킨다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면， 본 발명의 감송향 추출물은 5-20, 7-20, 7-15 또는 7-13 yg/ml로 처리한 경우 대조군과 비교하여 Fox3p의 발현을 3-4배 증가시킨다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면， 본 발명은 견우자， 결명자, 대극, 배초 향， 상륙, 율피 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항히스타민 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면， 본 발명은 본 발명의 조성물을 대상체 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 히스타민 분비 억제방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 견우자， 결명자, 대극， 배초 향, 상륙， 율피 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항히스타민 조성물을 대상체 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 히스타민 -매개 질환 예방， 개선 또는 치료방법을 제공한다.

본 명세서에서, 용어 "히스타민 -매개 질환" 은 비만세포로부터 히스타민이 분비됨으로써 발생하는 질환을 의미한다. 본 발명의 항히스타민 조성물이 적용되는 히스타민ᅳ매개 질환은 만성 두드러기 (chronic urticaria), 혈관 신경 부종 (angioedema)， 천식， 알레르기 유사 반응을 포함한다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면， 본 발명은 견우자, 결명자， 대극， 배초 향， 상륙, 율피 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 견우자， 결명자, 대극 배초향, 상륙, 율피 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항히스타민 조성물올 대상체 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 염증 질환 예방, 개선 또는 치료방법올 제공한다.

본 발명의 항염증성 조성물에 적용되는 염증 질환은 염증성 피부 질환 (예컨대， 습진 및 건선)， ᅳ류마티스 관절염 , 접촉성 피부염 , 여드름， 부비동염， 골관절염， 위염， 통풍， 통풍 관절염, 궤양， 만성 기관지염, 급성 폐손상, 폐염증， 염증성 장질환 (예컨대， 크론병， 궤양성 대장염)， 강직성 척추염 (ankylosing spondylitis), 폐혈증, 폐혈성 쇼크， 맥관염 및 활액낭염 같은 급성 또는 만성 염증 질환을 포함하지만， 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 결명자， 영실 추출물 또는 이들의 조합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환을 예방한다.

본 발명의 다른 구현예에 따르면， 본 발명의 결명자 또는 영실 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 알레르겐의 상피세포층 통과를 억제한다 . 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면， 상기 상피세포층은 장상피세포층이다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 결명자 추출물은 대조군과 비교하여 알레르겐의 상피세포층 통과를 10-99， 30-99%, 50-99%, 70-99%또는 90-99% 억제한다.

본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 영실 추출물은 대조군과 비교하여 알레르겐의 상피세포층 통과를 10-50%， 20-50%또는 30- 40%억제한다.

본 발명의 견우자, 결명자， 대극， 배초향， 상륙， 율피， 백축, 영실， 감송향 및 대황으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으 로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2ᅳ매개 면역 질환의 예방， 개선 또 는 치료용 조성물， 항히스타민 조성물， 항염증용 조성물은 약제학적 조성물， 식품 조성물, 기능성 식품 조성물， 화장료 조성물 또는 사료 조성물이다. 본 발명의 조성물은 약제학적 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면， 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 견우자， 결명자, 대극， 배초향， 상륙， 율피， 백축, 영실， 감송향 및 대황으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물의 약제학적 유효 량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다. 본 명세서에서 용어 "약제학적 유효량" 은 상술한 견우자， 결명자， 대극， 배초향, 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 및 대황으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 층분한 양을 의미한다. 본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우， 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서， 락토스， 덱스트로스, 수크로스, 솔비를， 만니를, 전분， 아카시아 고무, 인산 칼슴, 알기네이트， 젤라틴， 규산 칼슘, 미세결정성 샐롤로스， 폴리비닐피롤리돈， 샐를로스， 물, 시럽， 메틸 샐를로스， 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석， 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제， 유화제， 현탁제， 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed. , 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며， 본 발명의 일 구현예에 따르면， 경구 투여한다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법， 투여 방식， 환자의 연령， 체중， 성， 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 rag/kg 범위 내이다 .,,

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라， 약제학적으로 허용되는 담체 및 /또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 액스제 , 산제， 분말제， 과립제， 정제 또는 캅샐제 형태일 수도 있으며， 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 식품 조성물로 제공될 수 있다. 본 발명의 견우자， 결 명자， 대극， 배초향, 상륙， 율피， 백축, 영실， 감송향 및 대황으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료용 조성물， 항 히스타민 조성물， 항염증용 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성 분으로서 견우자, 결명자, 대극, 배초향， 상륙， 율피， 백축， 영실, 감송향 또는 대황 뿐만 아니라， 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함 하며, 예를 들어, 단백질， 탄수화물, 지방， 영양소, 조미제 및 향미제를 포 함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드， 예를 들어， 포도당， 과당 등; 디사카라이드， 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카 라이드， 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리롤， 소르비를， 에리트리틀 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미 제 [타우마틴， 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히 진 등]) 및 합성 향미제 (사카린， 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨 대， 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 견 우자， 결명자， 대극， 배초향, 상륙， 율피， 백축, 영실, 감송향 또는 대황 이외에 구연산， 액상과당， 설탕, 포도당， 초산, 사과산， 과즙， 두충 추출액， 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

본 발명의 견우자, 결명자, 대극, 배초향， 상륙， 율피， 백축, 영실, 감송향 및 대황으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으 로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또 는 치료용 조성물， 항히스타민 조성물， 항염증용 조성물은 기능성 식품 조 성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물이 기능성 식품 조성물로 제조되 는 경우， 식품 제조 시 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며， 예를 들어， 단백질， 탄수화물， 지방， 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대 , 드링크 제로 제조되는 경우에는 유효성분으로서 견우자， 결명자, 대극， 배초향， 상 륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 또는 대황 이외에 향미제 또는 천연 탄수화 물을 추가 성분으로 포함시킬 수 있다. 예를 들어， 천연 탄수화물은 모노 사카라이드 (예컨대， 글루코오스， 프럭토오스 등); 디사카라이드 (예컨대, 말 토스， 수크로오스 등); 을리고당; 폴리사카라이드 (예컨대， 덱스트린， 시클 로덱스트린 등); 및 당알코올 (예컨대, 자일리를, 소르비틀， 에리쓰리를 등) 올 포함한다. 향미제로서 천연 향미제 (예컨대 , 타우마린， 스테비아 추출 물 등) 및 합성 향미제 (예컨대, 사카린， 아스파르탐 등)을 이용할 수 있다. 본 발명의 조성물은 화장료 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 견우자, 결명자， 대극, 배초향, 상륙， 율피， 백축， 영실， 감송향 및 대황으로 구성 된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Thl- 매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물， 항히스타민 조성물, 항염증용 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우， 유 효 성분으로서의 견우자， 결명자， 대극, 배초향， 상륙, 율피, 백축， 영실， 감송향 또는 대황 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며， 예컨대 안정화제， 용해화제， 비타민， 안료 및 향료와 같은 통상 적인 보조제， 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트， 겔， 크림， 로션， 파우더， 비누， 계면활성제 -함유 클린성， 오일, 분말 파운데이션， 유탁액 파운데이션， 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나， 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는， 유연 화장수, 영양 화장수， 영양 크림, 마사지 크림， 에센스, 아이 크림， 클렌징 크림， 클렌징 포음, 클렌징 워터, 팩， 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. ^"

본 발명의 제형이 페이스트， 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유， 식물성유， 왁스， 파라핀， 전분， 트라칸트， 샐를로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜， 실리콘， 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스， 탈크, 실리카， 알루미늄 히드록시드， 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고， 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본， 프로판 /부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매， 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고， 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올， 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트， 벤질 알코을, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1，3-부틸글리콜 오일, 글리세를 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물， 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 회석제， 에록실화 이소스테아릴 알코을， 폴리옥시에틸렌 소르비를 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제， 미소결정성 셀를로오스， 알루미늄 메타히드록시드 벤토나이트， 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코을 설페이트， 지방족 알코올 에테르 설페이트, 실포숙신산 모노에스테르， 이세티오네이트 , 이미다졸리늄 유도체 , 메틸타우레이트 , 사르코시네이트， 지방산 아미드 에테르 설페이트 , 알킬아미도베타인， 지방족 알코올, 지방산 글리세리드， 지방산 디에탄을아미드, 식물성 유， 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세를 지방산 에스테르 둥이 이용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 사료 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 견우자, 결 명자, 대극， 배초향, 상륙， 율피, 백축， 영실， 감송향 및 대황으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 .추출물을 유효성분으로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물, 항 히스타민 조성물， 항염증용 조성물이 사료료 조성물로 제조되는 경우， 견우 자, 결명자， 대극， 배초향， 상륙， 율피, 백축, 영실， 감송향 또는 대황을 그대로， 또는 사료 제조시 통상적으로 첨가되는 첨가제 등을 가하여 제조할 수 있다. 예컨대， 비타민， 아미노산류， 미네랄 등의 각종 양분， 항산화제， 항생물질， 항균제 및 기타의 첨가제이다. 그 형상에는 분체， 과립， 펠릿 또 는 현탁액 등이 포함된다.

본 발명의 조성물이 사료 조성물로 제조되는 경우， 육상 또는 수상 동물에 대하여 단독으로 또는 사료에 흔합하여 공급할 수 있다. 본 발명의 사료에는 분말사료, 고형사료， _. 모이스트 펠릿사료， 드라이 펠릿사료, EPCExt ruder Pellet) 사료， 날먹이 등이 포함되며， 이에 한정되는 것은 아니다.

【발명의 효과】

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(a) 본 발명은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료용 조성물， 항히스타민 조성물 및 항염증용 조성물올 제공한다. (b) 본 발명은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료방법， 히스타민 분비 억제방법 및 염증 질환 예방， 개선 또는 치료방법을 제공한다.

(c) 본 발명의 조성물은 우수한 IL-4 생성 억제 활성 및 비만세포의 탈과립 억제 활성, 그리고 C0X-2 억제， 15-N0X 억제, 알레르겐의 장상피세포층 통과 억제 또는 Treg 세포 유도활성을 갖는다.

(d) 본 발명은 천연물 및 식품 유래 항알레르기 물질의 세부적인 작용기전을 제공한다.

(e) 본 발명은 천연물올 소재로 이용하여 안정성, 생산비용의 감소 및 사용의 편이성을 제공할 수 있다.

【도면의 간단한 설명]

도 1은 마우스 비장세포의 IL-4 생성에 대한 백축 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 2는 마우스 비장세포의 IL-4 생성에 대한 영실 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 3은 마우스 비장세포의 IL-4 생성에 대한 감송향 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 4는 마우스 비만세포 (mast cell)의 탈과립에 대한 백축 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 5는 마우스 비만세포 (mast cell)의 탈과립에 대한 영실 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 6은 마우스 비만세포 (mast cell)의 탈과립에 대한 감송향 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 7은 알레르겐의 장상피세포 통과를 조사한 실험에 대한 모식도를 나타낸다.

도 8은 알레르겐의 장상피세포 통과에 대한 영실 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다.

도 9a 및 9b는 마우스 비장 및 림프절 세포에서 Treg 세포로의 유도에 대한 감송향 추출물의 영향을 확인한 결과를 보여준다. 【발명을 실시하기 위한 구체적인 내용】

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로， 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다. 실시예

실험방법 및 실험재료

시약및기기

OVA(Ovalbumin) , EL ISA( Enzyme— 1 inked immunosorbent assay) 용 일반시약 등은 시그마사 (St. Louis, 미국) 제품을 사용하였다. TEER(transepithelial electrical resistance, Ω/cnf)측정을 위해 사용한 Millicell-ERS(Electrical Resistance System)는 밀리포어 (Mill ipore)사 (Bedford, MA, 미국)제품을 사용하였다. ELISA를 위한 항 -OVA 항체 및 특이항체 -효소 결합물은 자체적으로 제작한 것 (류주현， 박춘욱， 이종미， 손동화 (2004) NaOH, 열 및 효소 처리에 의한 계란 난백 중 ovomucoid와 ovalbumin의 항원성 변화. 한국식품과학회지 36(1)： 147- 151.)을， 마이크로플레이트 (microplate)는 넌크 (Nunc)사 제품을， 리더 (reader)는 Molecular Devices사 제품을 사용하였다. IgE와 사이토카인 측정에 사용된 ELISA 키트는 BD bioscience사 (San Diego, CA, 미국)제품을 사용하였다. 시료의 확보 및 용매추출물의 준비

^^^ Pharbitis nil Choisy) 결명자 (5e/Ma obtusifolia L.), 캑 [극 {Euphorbia pekinensis) , ^^ .^ {Agastache rugosa) , - mPhytolacca esculent a) , -：^] {Castanea crenata S. ) ¾ ^훼 Rhe n rhabarbarum L. )¾· 시중에서 구입하여 사용하였다. 견우자, 결명자, 대극, 배초향， 상륙， 율피 및 대황 추출물을 제조하기 위해， 시료를 분쇄한 다음 25배의 50% EtOH을 첨가한 후 Prolabo사의 마이크로웨이브 추출 시스템 Soxwave 100 (Fontenay- Sous-Bois, 프랑스)을 이용하여 90 W에서 5분 동안 마이크로웨이브 처리하여 추출하였다. 추출액은 여과지로 여과하고 약 40%까지 감압 농축한 후 0.45 ΛΐΓ시린지 필터로 막여과 하여 4^°C에 보관하며 사용하였다.

즉, 견우자, 결명자, 대극, 배초향， 상륙， 율피 및 대황 추출물 100 g 기준 으로 70% EtOH 1,000 ml을 첨가하고 역류하여 추출하였다 (2회 실시). 역류 조건은 약 60^°C에서 3시간 후 추출물을 한번 회수 하고 다시 70% EtOH 1,000 ml를 첨가하여 총 2회 실시하였다. 그 후 회전식 진공증발기 (rotary evaporator)를 이용하여 최종 100 ml정도로 감압농축 후 동결건조하여 넁동 보관하면서 사용하였다.

백축, 영실 및 감송향은 한국식물추출물은행에서 구입하여 시료로 사용였으며， 각 시료는 95%에탄올또는물로 추출하였다. 추출물에 의한 Thl/Th2사이토카인 균형조절 활성시험 (ex vivo)

0VA≤ 면역한 마우스 비장세포 배양-견우자， 결명자, 대극， 배초향, 상륙， 율피 및 대황추출물

6주령 자성 BALB/c 마우스에 1주일 간격으로 2차례 알레르겐 (al lergen)을 복강면역하여 알레르기를 유발하였다. 알레르겐은 0VA(20 ^g) 및 백반 (2 mg)의 흔합액을 30분동안 흔합한 다음 마리당 100 μΐ씩 복강 주사하였다 (η=5). 면역 1주후 마우스를 경추탈골 하고 무균상태에서 비장올 적출하여 1 ml의 기본배지 (2-머캅토에탄을 및 항생제를 포함하는 RPMI1640)을 작은 페트리디쉬에 옮겨 아이스박스위에 보관하였다. 페트리디쉬에 담긴 비장은 메쉬 (mesh)를 이용하여 단세포화한 후 5 ml의 기본배지로 2회 세척하고 1000 rpm에서 10분동안 원심분리를 실시하였다. 상층액 제거 후 1 ml의 RBC(Red Blood Cell) 용해 버퍼 (SIGMA, 미국)를 첨가하여 손으로 잘 흔들어 현탁하고 3분 동안 아이스 위에서 반응시킨 뒤 10 ml의 기본배지 첨가 후 현탁하고 1000 rpm에서 10분 동안 원심분리를 2회 실시하였다. 상층액 제거 후 10% FBS를 첨가한 기본배지를 첨가하여 현탁하고 50 μΐ 증 10 μΐ와 살 린 (saline) 90 μ 1를 회석하여 10배 회석한 세포 현탁액을 제조하였다. 10 배 회석한 세포 현탁액 10 μΐ, 살린 190 μΐ 및 트리판 블루 (SIGMA, 미국) 190 μΐ을 첨가하고 흔합하여 5분 동안 방치 후 세포수를 측정하였다. 48- 웰 플레이트에 항원 (100 _Ug/ml)을 처리하고 각 4 yg/ml의 견우자, 결명자 대극, 배초향， 상륙， 율피 및 대황 추출물을 각각 첨가하였다. 그 후 5X 106 세포 /500 μΐ/웰의 밀도로 비장세포를 웰에 분주하였다. 37^°C C0₂ 항온 항습기에서 72시간 동안 배양 후, 상층액을 회수하였다.

0VA 면역한 마우스 비장세포 배양-백축， 영실 및 감송향

5주령된 자성 BALB/c 마우스에 1주 간격으로 2차례 알레르겐 (allergen)을 복강면역하여 알레르기를 유발하였다. 알레르겐은 0VAC20 )와 알럼 (alum, 2 rag)의 흔합액을 30분 동안 흔합한 다음 한 마리당 100 μΐ씩 복강 주사하였다 (η=5). 면역 1주후 마우스를 경추탈골 시키고 무균상태에서 비장을 적출하여 1 ml의 기본배지 (2-머캅토에탄을 및 항생제를 첨가한 RPMI1640, Wei Gene, 대구， 대한민국)를 첨가한 작은 페트리 접시에 옮겨 아이스박스 상에 보관하였다. 페트리 접시에 담긴 비장은 메쉬를 이용하여 단세포화 시킨 뒤 5 ml의 기본배지로 2회 세척하고 1500 rpm에서 5분간 원심분리를 실시하였다. 상층액 제거 후 1 ml의 RBCCRed Blood Cell) 용해 완층액 (SIGMA R7757, 미국)을 첨가하여 손으로 잘 흔들어 현탁하고 3분 동안 아이스 위에서 반응시킨 뒤 10 ml의 기본배지 첨가 후 현탁한 뒤 1500 rpm에서 5분 동안 원심분리를 2회 실시 하였다. 96-웰 플레이트에 항원 (OVA, 100 pg/ml)을 처리하고 준비된 10 yg/ml 백축， 영실 및 감송향 추출물을 각각 첨가하였으며, 비장세포의 농도는 5X106 세포 /웰로 처리하였다. 다음으로 37^°C, C0₂ 항은반응기에서 72시간 동안 배양한 후 상층액을 회수하였다. 비장세포 배양상층액의 사이토카인 분석 (IL-4의 생성 억제활성) -견우자， 결명자， 대극, 율피, 배초향， 상륙 및 대황추출물

견우자， 결명자， 대극， 배초향， 상륙, 율피 및 대황 추출물을 각각 상기 비장세포에 첨가하여 나타나는 사이토카인의 분비유형을 조사하였다. 분석은 ELISA 키트 (BD Biosicience사)를 이용하여 제조회사의 프로토콜에 따라서 행하였다. 간단히 설명하면 96 웰 플레이트에 포획항체를 첨가하고 4^°C에서 하룻밤 정치하였다. 포획항체가 코팅된 96 웰 플레이트를 세척버퍼 (트원 20을 포함하는 PBS; PBST)로 3회 세척한 후 10% FBS를 포함하는 PBS를 200 μΐ씩 각 웰에 첨가하고 상온에서 1시간 동안 블로킹하였다. 3회 세척 후 각 표준시료와 견우자, 결명자 대극， 배초향 상륙, 율피 및 대황 추출물을 100 μΐ씩 각 웰에 분주하여 상온에서 2시간 동안 반응하였다. 다시 5회 세척하여 검출항체 및 스트렙타비딘 -HRP를 100 μΐ씩 분주한 후 상은에서 1시간동안 반응하였다. 7회 세척 후 웰 당 100 μΐ의 기질용액 (0.01% ΤΜΒ를 포함하는 구연산-인산염 버퍼， ρΗ 5.0， 0.001% Η202)으로 상온에서 30분 동안 발색한 후， 2Μ H2S04를 50 μ 1씩 각 웰에 첨가하여 발색반웅을 중지하였다. 발색정도를 마이크로플레이트 리더 (THERMOmax, Molecular Devices, 미국)로 450 ran에서 흡광도를 측정하였다. 비장세포 배양상층액의 사이토카인 분석 (IL-4의 생성 억제활성) -백축， 영실 및 감송향

항원 (OVA, 100 ug/ml) 및 10 g/ml 백축, 영실 및 감송향 추출물 각각이 처리된 비장세포 배양 상층액을 72시간 후 회수하여 IL-4 분석에 사용하였다. 사이토카인 분석을 위하여 BD OptEIATM MOUSE ELISA(Enzyme- linked Immunosorbent Assay) 키트를 사용하였으며, 실험방법은 키트에 명시된 실험방법에 준하여 실험을 실시하였다. 간단히 설명하면 96웰 플레이트에 포획 항체를 4^°C에서 하룻밤 정치하였다. 코팅된 96웰 플레이트를 세척 완충액 (PBST)으로 세척한 후 분석용 회석제 (10% FBS가 첨가된 PBS)를 200 μΐ씩 각 웰에 넣고 상온에서 1시간 동안 블로킹 (blocking)하였다. 다음으로 표준 시료와 샘플 시료를 100 μ 1씩 각 웰에 분주하여 상온에서 2시간 반응시킨 다음, 검출 항체와 스트랩타비딘 (streptoavidin)-HRP를 100 μ 1씩 분주한 후 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반웅시간 후 100 μΐ의 기질용액 (0.01% ΤΜΒ가 첨가된 인산염-구연산염 완층액， ρΗ 5.0, 0.001% Η202)으로 상온에서 30분 동안 발색시킨 다음, 2 M H2S04를 50 μ 1씩 각 웰에 첨가하여 발색반응올 중지시켰다. 발색 정도는 450nm에서 마이크로플레이트리더 (THERMOmax, Molecular Devices, 미국)로 흡광도를 측정하였다. 탈과립 억제활성

히스타민 및 β-핵소사미니다아제 유리억제 활성-견우자, 결명자， 대극, 배초향, 상륙， 율피 및 대황추출물 흰 마우스의 호염기구 세포주인 RBL-2H3 세포주를 10¾ FBS, 100 U/ml 페니실린， 100 ug/ml 스트랩토마이신 및 1.0 mM 피루브산나트륨을 포함하는 RPMI 1640 배지에서 37^°C 및 5% C0₂ 조건 하에 항온항습기에서 배양하여 히스타민 및 β-핵사미니다아제 활성 시험에 사용하였다. 히스타민 유리 억제활성을 조사하기 위해， RBL-2H3 세포주를 24 웰 플레이트에 1X10⁶세포 /ml로 분주하고 하룻밤 정치하여 세포를 안정화 시킨 ·_,: 다음 각 웰에 견우자， 결명자， 대극, 배초향， 상륙， 율피 및 대황 (80 rag/ml)를 각각 5 μΐ씩 처리하고 1시간 동안 반웅하였다. 반웅이 종결된 다음 자극제 [1 uM 칼슘운반체 A23187+50 nM PMA(Phosbol 12-Myri state 13- Acetate)] 를 처리하여 8시간 동안 반응한 후 배양액을 회수하여 5000 rpm으로 5분 동안 원심분리를 실시하여 상층액을 수득하였다. 수득한 상층액을 이용하여 유리된 히스타민 양을 측정하였다. 이를 정량적으로 확인하기 위하여 히스타민 EIA(Enzyme I醒 unoassay) 키트 (EA31, Oxford, 미국)를 이용하였다.

즉， 단일클론 항-히스타민 항체가 코팅된 96 웰 플레이트에 50 μΐ 상층액 또는 표준시료를 첨가한 다음 바로 효소 결합체 50 μΐ를 첨가하여 교반한 후 45분 동안 상온에서 방치하고 세척버퍼로 3회 세척하였다. 다음, 기질 (Tetra-methyl benzidine; TMB)을 150 μ 1 첨가한 후 15-20분 동안 반응하고 50 μΐ의 1 N HC1을 첨가하여 반응을 종료하고 450 ran에서 흡광도를 측정하였다.

β-핵소사미니다아제 유리억제 활성을 조사하기 위해， RBL-2H3 세포주를 1X10⁶ 세포 /ml로 24 웰 풀레이트에 0.5 ml씩 분주하고 0.5 pg/ml의 마우스 단일클론 IgE를 첨가하여 37 ^°C， 5% C0₂ 항온항습기에서 하룻밤 배양하여 세포를 감작하였다. 감작된 세포를 0.5 ml 시라가니안 (siraganian) 버퍼 (119 mM NaCl , 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl , 25 mM 포페라진 -N,N'-bis(2—에탄설폰산) 및 40 mM NaOH, H 7.2)로 2회 세척하고 160 μ 1 반응버페 5.6 mM 글루코오스. 1 mM CaCl 및 0.1% BSACBovine Serum Albumin)을 포함하는 시라가니안 버페를 첨가하여 37^°C에서 10분 동안 배양하였다. 그 후， 5 μΐ 견우자， 결명자， 대극, 배초향, 상륙， 율피 및 대황을 각각 첨가하여 20분 동안 반응한 후, DNP-HSA(Dinitrophenyl-Human Serum Albumin, 1 ug/ml) 20 μ 1를 항원으로 처리하여 10분 동안 37Χ에서 배양하여 알레르기성 염증 반웅올 유도하였다. 반웅물을 800 xg에서 10분 동안 원심분리를 실시한 후 96 웰 플레이트에 20 μ 1 상층액 및 20 μ ΐ 기질 (1 mM p-니트로페닐— N-아세틸 -β-D-글루코사미나이드을 포함하는 0,2 M 구연산, pH 4.5)을 분주하여 37^°C에서 1시간 동안 반웅하였다. 반웅을 종결시키기 위해 0.1 M Na₂C0₃/NaHC0₃을 200 μ 1씩 첨가한 후 발색단 (chromophore), p-니트로페몰의 양을 ELISA 리더를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 비만세포의 형태변화 관찰-백축, 영실 및감송향

마우스를 에테르로 마취시키고 머리의 뒤통수를 강타하여 치사시킨 후 약 10 ml의 배지 (pH 7.4)을 마우스의 복강 내에 주입하고 90초 동안 복벽을 가볍게 맛사지하였다. 복벽 중앙선을 절개하고 복강 세척액을 스포이드로 채취하여 lOOXg에서 10분 동안 원심 시킨 후 상층액을 버리고， 동일 배지로 비만세포 (mast cells) 수가 1X10⁶ 세포 /ml 되도록 복강 부유액을 만들어 실험에 이용하였다.

재부유시킨 비만세포 부유액 200 μ ΐ에 살린 (saline) 25 μ 1 또는 백축 추출물 (1 ug/ml, 0.1 ug/ml 또는 0.01 ug/ml) 25 μ 1를 각각 넣어 37 ^°C 배양기에서 10분 동안 반웅시켰다. 반웅 후 컴파운드 48/80(Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo, 미국) 용액 25 μ 1를 첨가하여 20분 동안 반응시켰다.

광학현미경 상으로 비만세포의 형태를 관찰하기 위하여 반응이 끝난 비만세포 부유액 200 μ ΐ를 도립현미경 재물대 위에 놓여진 슬라이드글라스 (slide glass, 22x60 mm) 위에 떨어뜨려 비만세포들이 침전될 수 있도록 실온에서 10분 동안 정치시켰다. 400배의 배율 하에서 해마사이토메타 (hemacytometer)¥ 이용하여 비만세포를 도립현미경 (Olympus Japan)으로 관찰하였다. 정상 비만세포의 형태는 대부분 원형 또는 난원형으로 세포윤곽이 뚜렷하고, 세포질 내에는 많은 과립들이 층만 되어 있었다. 비만세포의 직경은 대략 10-20 im 정도로 복강 부유액의 다른 세포들 (림프구 또는 호중성백혈구)에 비해 2배 이상 컸다. 비만세포의 형태가 원형 또는 난원형으로 세포윤곽이 뚜렷하고, 세포질 내에 광굴절율이 높은 과립들로 충만된 상태를 정상형 비만세포로 구분하였다. 반면에 세포윤곽이 불분명하고 세포질 내 과립들이 세포표면으로 돌출 되거나 세포주위에 흩어져 있는 경우를 탈과립형으로 구분하였다. 탈과립율은 다음 공식에 의하여 산출뒤었다:

비만세포 탈과립율(¾>) = (탈과립된 비만세포 수 /비만세포 총수 )χιοο cox효소에 대한저해활성

Reddy(2000)등의 방법을 변형하여 인 비트로 (In w r^에서 수행하였다. 96 웰 플레이트에 하나의 웰당 효소 40 u U60 유니트 C0X- KCyclooxygenase) 또는 30 유니트 C0X-2)를 첨가하고， 90 μ ΐ의 100 mM Tris-HCI 버퍼 (pH 8.0), 20 μ 1의 30 μ M EDTA(Ethylenediaminetetraacet ic Acid), 20 μ ΐ의 150 μΜ 헤마틴 및 20 μ 1 시료를 흔합하여 25^°C에서 5분동안 반웅하고, 5 μ ΐ의 5 mM TMPD 및 5 μ 1의 20mM 아라키돈산을 첨가하여 25^°C에서 10분동안 반응 시킨 후 ELISA 리더를 사용하여 603 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 EGCG(Epigallocatechin Gal late , Sigma, 미국) 및 인도메타신 (Sigma, 미국)을 사용하였다.

L0X저해활성

15-L0X 억제 활성의 측정은 리폭시제나아제 억제제 스크리닝 분석키트 (lipoxygenase inhibitor screening assay kit , Cayman , 미국)를 이용하여 인 비트로 (/ w^' ro)에서 실시하였다. 샘플 10 μ ΐ에 15— L0X(220 유니트 /ml) 90 μ ΐ와 1 mM 아라키돈산 10 μ 1를 첨가하여 5분 동안 상온에서 반웅 시킨 후， 크로모겐 (chromogen) 100 μ 1를 가하여 상온에서 반응시키고 ELISA 리더로 490 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 양성대조군은 EGCGCe igal locatechin gal late) 및 노르디히드로구아야레틱산 (nordihydroguaiaretic acid, NDGA)을 사용 하였다. 상피세포층 통과 억제

Caco—2세포배양및 OVA 통과억제실험

ATCC 유래의 Caco—2 세포주 (HTB—37)를 얼스 염 (Earle' salt), 20 % FBS, 1% 100 U/ml 페니실린， 100 μ g/ml 1 스트랩토마이신, 2 mM L-글루타민, 1.5 g/L 이탄산나트륨, 0.1 mM 비-필수 아미노산 및 1.0 mM 피루브산 나트 륨올 포함하는 MEM 배지에서 37^°C, 5% C0₂ 조건 하에 계대배양 하였다. Caco-2 단세포층을 이용한 식품 알레르겐 통과시험을 하기 위해 상기 배양 배지를 사용하여 Caco-2 세포를 12 트랜스웰 플레이트의 상층부 (apical side)인 통과막 (transmembrane) 상에 1X10⁵세포 /ml의 밀도로 0.5 ml을 분 주하였다 (51). 웰의 하층부 (basolateral side)에는 배양배지 1.5 ml을 첨가 하고 37^°C, 5 % C0₂항온항습기에서 배양하였다. 배지교환은 매 2-3일에 간 격으로 실시하였다. 분주 후 약 2-3주가 지나 단세포층을 형성한 Cac으 2 세 포의 하층부와 상층부 간 전기저항치 (Transepitherial Electrical Resistance; TEER, ΩΧαί)를 Mi 11 icel l-ERS(Electrical Resistance System Millipore, 미국)로 측정하여 추치가 300 ΩΧαιί 초과인 경우 실험에 사용 하였다. Caco-2 단세포층을 HBSSCHank's Balanced Salt Solution)로 3회 세 척 한 후 50% EtOH 추출 후 막여과한 견우자， 결명자， 대극， 배초향， 상륙, 율피， 백축, 영실， 감송향 및 대황 추출물 (최종농도: 400 ug/ml) 각각을 담즙산염 (최종농도: 150 yg/ml)과 함께 상층부에 .첨가한 후 37^°C, 5% C0₂ 항온항습기에서 1시간 동안 처리하였다. 다음으로 0VA를 상층부에 첨가 한 후 (최종농도: 400 ug/ml) 37^°C, 5% C0₂항온항습기에서 3시간 반응시킨 다음 한번 더 TEER수치를 측정하였다.

여기에서 하층부의 액을 회수하여 통과된 0VA의 농도를 sELISA로 측정하였다. 하층부 내의 통과된 0VA량은 다음과 같이 구하였다:

Flux = C ng/ H hr/ S cm²

여기에서 C는 ELISA에 의하여 구한 OVA의 통과량이고， H는 Caco-2 단세포층 상층부에 OVA 첨가 후 반웅시간 (3h)을 나타내며， S는 트랜스웰 플레이트의 상층부 표면적 (1.12cm²)을 나타낸다.

ELISA에 의한 OVA 분석

코팅 완층액 ((tris hydroxymethyl ) aminomethane 0.05 M, pH 9.0)에 2 ug/ml의 농도로 회석한 항 -래빗 -OVA 항체를 96웰 플레이트에 각 웰 당 100 μΐ씩 분주하여 4^°C에서 하룻밤 정치하였다. 코팅된 96웰 플레이트를 세척 완층액버페 Tween 20을 포함하는 PBS(Phosphate Buffered Saline); PBST, 0.138 M NaCl, 0.0027 M KCl 및 0.05% Tween 20을 포함하는 0.01 M 인산염 완층액)로 3회 세척하였다. HBSS에 일정한 배수로 회석한 표준 OVA와 회수액을 각 웰 당 100 μΐ씩 첨가한 후 1시간 동안 상온에서 반웅시켰다. 다시 세척 완층액로 앞에서와 같이 세척한 다음 항 -OVA 항체가 결합된 바이오틴 (biotin)을 PBST로 일정농도 회석하고 웰 당 100 μΐ씩 처리하여 1시간 동안 상온에서 반응시켰다. 다음으로 상기와 같이 세척 완충액으로 세척한 후 아비딘 (avidin)-HRP를 PBST로 일정농도 희석하여 웰 당 100 μΐ씩 처리하여 1시간 동안 상온에서 반응시켰다. 이후, 세척 완층액으로 앞서 언급한 바와 같이 세척하였다. 다음으로 기질용액으로써 페닐 프로피온산 (phenyl propionic acid)/인산염 버퍼 (36 mM, pH 7.0)에 ¾0₂ 0.002%를 첨가한 것올 사용하고 반웅정지액으로 1 M NaOH-글라이신 (glycine) (1 M 글라이신 /1 M NaOH)을 각 웰 당 100 μ 1씩 사용하고 형광 마이크로플레이트 리더 (microplate reader)로 320/405 nm(Ex./Em.파장)에서의 형광을 측정하였다.

.

Treg의 유도활성

마우스

6-8 주령의 자성 balb/c 마우스를 찰스 리버 래보레이토리 (Charles River Laboratories)로부터 구매하였다. 마우스는 서울대학교 (서울， 대한민국) 약학대학의 동물실험시설에서 사육되었다. 모든 실험은 서울대학교 동물실험위원회의 규정괴" 가이드라인에 따라수행하였다. 감송향추출물의 제조

감송향 추출물은 25-100 mg/ml의 농도로 DMS0(Dimethyl Sulfoxide)에 용해된 상태로 한국식품연구원으로부터 받았다. 실험에 적합한 농도를 만들기 위해서 위 농도의 추출물올 세포 배양 배지인 완전 배지 (Gibco RPMI에 FBS 10%, 페니실린 /스트렙토마이신 1%， 피루브산 나트륨 1%， 비필수 아미노산 1%, HEPES 2.5%, β-머캅토에탄을 0.1%를 첨가한 배지)를 이용하여 회석하였다. 대조군으로는 완전 배지에 용매인 DMS0만을 추출물과 같은 용량 첨가한 것을 이용하였다. 세포 제조

마우스를 C0₂로 안락사 시킨 뒤 비장과 림프 절을 분리하여 70 iM 스트레이너 (strainer)를 통과시켜 단세포 현탁물을 수득하였다. 비감작 (naive) CD4 T 세포를 수득하기 위해서 CD25-PE 항체 (eBioscience)로 염색한 뒤 항 -PE, 항 -CD8a , 항 -B220 및 항 -CDllb 비드 (Miltenyl Biotec)를 붙이고 MACSCMagnet ic-Act ivated Cell Sorting)로 디플리션 (depletion)하여 CD4 T 세포를 인리치 (enrich)해 주었다. 그 후 CD62L-바이오틴 항체 (eBioscience) 및 항-바이오틴 비드 (Miltenyl Biotec)를 붙이고 MACS 선별하여 비감작 CD4 T 세포를 수득하였다. 항원제시세포는 비장과 림프 절에서 얻은 단세포 현탁물을 RBC 용해 한 뒤 CD3-바이오틴 항체 (eBioscience) 및 항-바이오틴 비드 (Miltenyl Biotec)를 붙여 MACS 디플리션한 것을 사용하였다. 인 비트로 세포 배양

모든 세포 배양은 완전 배지에서 행하였다. 비감작 T 세포는 항체자극 조건의 경우， 96 웰 평저 플레이트에 항 -CD3 2 ug/ml을 밤새 코팅하고 비감작 CD4 T 세포 5^χ10⁴ 세포 /웰과 함께 항 -CD28 1 yg/ml을 용해한 상태로 첨가하였다. 항원제시세포 자극 조건의 경우， 96 웰 U- 보텀 (bottom) 폴레이트에 항 -CD3 항체를 용해하게 첨가하였고 항원제시세포를 6X10⁴세포 /웰로 비감작 CD4 T 세포 3X10⁴세포 /웰과 함께 배양하였다. 두 조건 모두에서 재조합 마우스 IL-2를 10 ng/ml의 농도로 첨가하였고, 원하는 농도로 희석한 추출물을 각 웰에 첨가하였다. 이것을 37^°C, 5% C0₂ 조건에서 72시간 배양한 뒤 세포를 회수하여 분석하였다. 세포내 Foxp3 염색 및 유동세포 분석

배양한 세포를 걷어 PBSN 0.14M NaCl, 0.003M KC1 , 0.01M Na₂HP0₄₎ 0.002M KHP0_4> 0.002M NaN₃)에 1% FBS를 첨가한 완층액을 이용해 CD4- PE/Cy7(Biolegend)로 15분 동안 표면 염색을 하였다. 그 후 eBioscience의 Foxp3 염색 세트를 이용하여 지시된 방법대로 세포내 Foxp3를 염색하였다. FACS 분석은 BD FACS Calibur와 Cell Questpro를 이용하였다. 통계처리

모든 실험의 결과는 평균치 및 표준편차를 이용하여 나타내었으며, 각 그룹과 시료간의 차이는 SAS를 이용한 AN0VA 및 Duncan's 다중시험법을 통해 유의차 p<0.05유의 수준에서 검증하였다. 실험결과

IL-4생산 억제활성

'실험재료 및 실험방법' 에 명시한 바와 같이 견우자, 결명자， 대극, 배초향， 상륙, 율피, 백축, 영실， 감송향 또는 대황에 의한 비장세포의 IL- 4 생산억제 활성시험을 행하였다. 상기 추출물의 첨가농도는 4 μΐ/ml (약 80 rag/ml)로， 대조군과 비교하여 IL-4 생산저해활성을 표 1에 나타내었다. [표 1】

이러한 결과는 대극 추출물, 대황 추출물, 배초향 추출물， 상륙 추출물 및 율피 추출물이 IL-4의 생성에 대하여 약 30¾ 이상， 대황 추출물 및 배초향 추출물은 70% 이상, 견우자 추출물은 90% 이상의 억제 효과를 가짐을 보여준다.

높은 IL-4 억제활성을 갖는 견우자 추출물의 IC₅₀ 값은 7.4 Ug/ml이고, 배초향 추출물의 IC₅₀ 값은 30.91 wg/ml이며， 상큭 추출물의 IC₅₀ 값은 1.95 μ 1/ml이었다.

비장세포의 IL-4 생산에 대한 백축 추출물에 영향을 조사한 결과, 백축 추출물은 첨가농도 10 μ 1/ml에서 대조군과 비교하여 비장세포의 IL-4 생산을 약 60% 감소시켰다 (도 1). 또한 영실 추출물은 30μ1/ηιΙ에서 대조군과 비교하여 비장세포의 IL-4 생산을 약 30% 감소시켰다 (도 2). 감송향 추출물은 30μΐΑη1에서 대조군과 비교하여 비장세포의 IL-4 생산을 약 35%감소시켰다 (도 3). 히스타민 유리억제활성

견우자， 결명자， 대극, 배초향， 상륙, 율피， 백축, 영실， 감송향 또는 대황에 대한 히스타민 유리억제 활성을 조사하였다. 무처리 시 히스타민의 유리량은 167.7 ng/ml이며, 자극제 [칼슘운반체 A23187 및 PMA(Phosbol 12-Myri state 13-Acetate)]만 처리하는 경우， 히스타민의 유리량은 232.4 ng/ml이다. 다음의 공식을 통해 히스타민 유리억제율를 산출하였다.

각 추출물을 처리하여 유리된 히스타민올 통해 산출된 억제율을 표

2에 나타내었다. 표 2의 '히스타민 유리량 ' 은 각 추출물 처리시 유리량 (ng/ml)에서 무처리시의 히스타민 유리량 (167.7 ng/ral)을 제한 값이다.

【표 2]

견우자 추출물을 처리하는 경우, 히스타민 유리량은

180.9士1.2 /1111로 나타났으며， 히스타민 유리 억제율은 80.4±7.0%로 가장 높은 억제율을 나타냈다. 모든 추출물에서 히스타민

나타냈다. 핵소사미니다아제유리억제활성

결명자 추출물， 대극 추출물， 대황 추출물， 배초향 ^'추출물， 상륙 추출물 및 율피 추출물에 대한 β-핵소사미니다아제 유리억제 활성을 조사하였다. 무처리시 β-핵소사미니다아제의 유리정도를 나타내는 Α₄₀₅ 흡광도는 0.121이며， 자극제 [항 -DNP(Dinitrophenyl) IgE 항체 및 DNP- HSA(Dinitrophenyl-Human Serum Albumin)]만 처리하는 경우, β- 핵소사미니다아제의 유리정도를 나타내는 Α₄₀₅ 흡광도는 0.390이다. 다음의 공식을 통해 β-핵소사미니다아제의 유리 억제율를 산출하였다.

각 추출물을 처리하여 유리된 β-핵소사미니다아제을 통해 산출된 억제율을 표 3에 나타내었다.

【표 3】

상륙 추출물을 처리하는 경우， β-핵소사미니다아제 유리량를 나타내는 Α₄₀₅ 흡광도는 0.137±0.01로 나타났으며， β-핵소사미니다아제 유리 억제율은 49.2±2.0 ¾로 높은 억제율을 나타내었다. 모든 추출물에서 β-핵소사미니다아제 유리 억제활성을 보여주었다. 각 추출물의 히스타민 유리 억제율 및 β-핵소사미니다아제 유리 억제율을 정리하여 표 4에 나타내었다.

【표 4】

비만세포의 형태변화

컴파운드 48/80에 의한 비만세포 탈과립율에 대한 백축, 영실 또는 감송향 추출물의 영향을 조사하였다. 컴파운드 48/80을 단독 처리한 대조군과 비교하여, 컴파운드 48/80를 처리한 실험군에 백축 추출물 0.01 Ug/ml, 0.1 ug/ml 및 1.0 yg/ml를 처리한 경우 40-60%, 영실 추출물 0.1 ug/ml 을 처리한 경우 약 22¾의 탈과립 억제 효과, 영실 추출물 1.0 Ug/ml를 처리한 경우 약 80%의 탈과립 억제 효과 및 감송향 추출물 0.01 Ug/ml, 0.1 ug/ml 및 1.0 pg/ml를 처리한 경우 50-70)의 탈과립 억제 효과를 확인하였다 (도 3-5). ωΧ-l및 C0X-2효소에 대한 안비트로 (in vitro)저해활성

비만세포는 알레르기 발증의 2단계 전기반웅에 관여하는 핵심적인 요소로써， 비만세포 내 효소의 작용으로 인지질대사가 활발해지면 그 대사산물이 알레르기 반응을 더욱 심해지게 된다 (알레르기성 염증반웅). 그러므로 알레르기를 완화 및 억제하는데 도움이 될 수 있도록, COX(Cyclooxygenase, 특히， C0X-2)의 작용을 저해하는 활성이 견우자， 결명자， 대극， 배초향， 상륙， 율피 및 대황 추출물에 존재하는지 검토하고자 하였다. 염증반웅에 밀접한 연관이 있는 C0X-2 저해활성은 높으나 통상 생체 내에 필수적인 효소인 C0X-1의 저해활성은 낮은 추출물이 양호한 것으로 판단하고 이들을 구분하고자 하였다. 대조군의 C0X-1 활성을 나타내는 흡광도 값은 0,173이고， 견우자 추출물을 처리한 경우의 값은 0.139(C0X-1 활성) 및 0.123(C0X-2 활성)이었다. 이러한 견우자 추출물은 알레르기 발증의 2단계 전기반웅을 억제하는데 도움이 되리라 추측된다.

각 추출물을 C0X-1 및 C0X-2 저해활성을 표 5에 나타내었다.

【표 5】

이 중 COX-2 저해활성이 우수한 추출물 (결명자 추출물， 대극 추출물 및 율피 추출물)을 선발하여 IC₅₀ 값을 비교하였다.

【표 6】

표 6에서 COX-1 IC₅₀/C0X-2 IC50 비의 수치가 가장 낮게 나타난 결명자 추출물이 저해활성이 우수한 것을 판단되나, 여기에서 그 비율보다 C0X-2의 IC₅₀값이 낮은 것이 우선되어야 할 것이다.

L0X저해활성

C0X에 이어서 LOX(Lipoxygenase)도 알레르기 발증의 2단계 전기반웅에 관여하여 인지질 대사산물을 생산함으로써 염증을 유발하게 되는데， 이를 억제하는 것은 그 증상을 완화하는데 기여할 수 있을 것이다. 따라서 , 이 효소 중의 하나인 15-L0X를 저해하는 활성이 추출물 중에 어느 정도 존재하는지 검토하고자 하였다.

결명자， 대극, 배초향， 상륙， 율피 및 대황 추출물의 15-L0X 저해활성을 조사한 결과， 우수한 값을 나타내는 대극 추출물 및 상륙 추출물의 IC₅₀ 값을 확인하였다. 대극 추출물 및 상륙 추출물의 IC₅₀ 값은 각각 87 ug/ml 및 100 yg/ml이었다. 상피세포층 통과 억제

식품 알레르기 발증은 가장 면저 알레르겐이 소화되지 않은 채로 장상피세포층을 통과하여 체내에 흡수되고 이에 대한 생체의 과민한 면역반응이 일어나기 때문이다. 그러므로 알레르겐의 소장통과를 억제하는 활성소재를 탐색하고 선발하여 이를 활용한다면 식품알레르기의 발증 조절이 가능할 것이다. 이러한 논리에 근거하여, 본 발명에서는 결명자， 대극, 배초향， 상륙 또는 감송향 추출물의 장상피세포층 통과억제 활성을 조사하였다. 그 결과, 결명자 추출물이 약 6%의 알레르겐 통과율로 우수한 상피세포 통과 억제 활성을 나타내었다.

또한, 영실 추출물을 처리한 경우 OVA 단독으로 처리한 양성대조군과 비교하여 OVA의 통과량이 감소되는 것을 확인하였다. 이를 백분율로 환산한 결과, 알레르겐의 통과율을 30-50 감소시키는 효과가 있음을 알 수 있었다 (도 8). 세포내 Foxp3 염색및 유동세포 분석

세포내 Foxp3 발현에 대한 감송향 추출물의 영향을 조사한 결과， 감송향 추출물의 농도 -의존적으로 Foxp3의 발현이 증가함을 확인할 수 있었다 (도 9). 이러한 결과는, 감송향 추출물이 Treg 세포를 증가시킴올 의미한다. 참고문헌

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Claims

【특허청구범위】

[청구항 1】

견우자 (^ar^ /s nil Choisy) , 결명자 (5e/ a obtusi folia L.), ^극 {Euphorbia pekinensis) , ¾ ( Nardostachys jatamanse) , tifl 2. ¾ ( Agastache rugosa) , -¾ ^"^- ( Phytolacca esculent a) , -^mCastanea crenata S. ) , 백축 (/¾3_rZ?/ /s nil Chois) , 영실 {Rosa mult i flora) 및 대황 rhabarbarum L.) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환의 예방， 개선 또는 치료용 조성물.

【청구항 2]

제 1 항에 있어서, 상기 Th2-매개 면역 질환은 알레르기 질환인 것을 특징으로 하는 조성물. .

【청구항 3】

제 2 항에 있어서， 상기 알레르기 질환은 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 피부염， 알레르기성 아토피 피부염 또는 식품 알레르기인 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 4】

제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 IL— 4의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.

[청구항 5】

제 1 항에 있어서， 상기 조성물은 비만세포의 탈과립을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 6】

제 1 항에 있어서, 상기 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 Treg 세포로의 분화를 유도시키는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 7】

제 1 항에 있어서， 상기 Thl-매개 면역 질환은 이식 거부， 자가면역질환 또는 염증 질환인 것을 특징으로 하는조성물.

【청구항 8】

제 7 항에 있어서, 상기 조성물은 C0X-2(cyclooxygenase— 2) 활성 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 9]

제 7 항에 있어서， 상기 대극, 상륙 또는 이들의 조합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 15-L0X(15-Lipooxygenase)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 10】

제 1항에 있어서, 상기 결명자， 영실 또는 이들의 조합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2_매개 면역 질환을 예방하는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 11】

제 10 항에 있어서, 상기 조성물은 알레르겐의 상피세포층 통과를 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 12】

견우자， 결명자， 대극， 배초향, 상륙， 율피 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항히스타민 조성물.

【청구항 13]

견우자， 결명자, 대극, 배초향, 상륙 율피 및 대황 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물.

[청구항 14】

제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약제학적 조성물, 식품 조성물, 기능성 식품 조성물, 화장료 조성물 또는 사료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 15】

상기 제 1 항 내지 13 항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환 예방， 개선 또는 치료방법 .

【청구항 16】

제 15 항에 있어서， 상기 Th2-매개 면역 질환은 알레르기 질환인 것을 특징으로 하는 방법.

【청구항 17】

제 16 항에 있어서， 상기 알레르기 질환은 천식, 알레르기성 비염， 알레르기성 피부염， 알레르기성 아토피 피부염 또는 식품 알레르기인 것을 특징으로 하는 방법 .

【청구항 18】

제 15 항에 있어서， 상기 조성물은 IL-4의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 방법 .

【청구항 19】

제 15 항에 있어서， 상기 조성물은 비만세포의 탈과립을 억제하는 것을 특징으로 하는 방법 .

【청구항 20】

제 15 항에 있어서， 상기 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 Treg세포로의 분화를 유도시키는 것을 특징으로 하는 방법.

【청구항 21】

제 15 항에 있어서, 상기 Thl-매개 면역 질환은 이식 거부, 자가면역질환또는 염증 질환인 것을 특징으로 하는 방법.

【청구항 22】

제 21 항에 있어서, 상기 조성물은 C0X-2(cyclooxygenase-2) 활성 억제능을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 23】

제 21 항에 있어서， 상기 대극， 상륙 또는 이들의 조합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 15-L0X(15-Lipooxygenase)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 방법.

【청구항 24】

제 15항에 있어서， 상기 결명자, 영실 또는 이들의 조합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 Thl-매개 면역 질환 또는 Th2-매개 면역 질환을 예방하는 것을 특징으로 하는 방법.

【청구항 25】

제 24 항에 있어서， 상기 조성물은 알레르겐의 상피세포층 통과를 억제하는 것을 특징으로 하는 방법.

【청구항 26】

상기 제 1 항 내지 13 항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 히스타민 분비 억제방법.

【청구항 27】

상기 제 1 항 내지 13 항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 염증 질환 예방, 개선 또는 치료방법.