KR100831319B1 - 가시오가피와 참나무 우드칩을 함유하는 포도 발효증류주의제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 발효증류주의 제조에 있어서, (1) 가시오가피의 열매(생동과) 2 내지 10중량% 및 포도과즙 90 내지 98중량%를 혼합하여 보당조건, 살균처리 방법, 효모 처리 방법 개선 등을 통하여 알코올 생산성을 증대시키고, 발효 온도를 15 내지 17℃로 유지하여, 25 내지 30일 동안 발효시키는 1차발효단계; (2) 상기 1차발효단계에서 수득되는 발효물을 통상의 진공농축기에서 발효물 10 내지 30㎏을 투입하고, 55 내지 74℃ 및 진공도 0.06 내지 0.08토르(Torr)에서 증류하는 증류단계; (3) 가시오가피 및 참나무 우드칩의 지표성분 증폭을 위하여 세척, 건조, 증자, 덕음 1회, 덕음2회별 유효물질의 동정 및 정량을 위하여 고성능액체크로마토그래피(HPLC)와 액체크로마토그래피-질량분석(LC-Mass)에 의한 물질동정 및 정량단계; (4) 상기 증류단계에서 수득된 발효증류주와 우드칩들을 혼합하되, 상기 증류주 1ℓ에 대하여 20 내지 100g을 혼합하고, 12 내지 16℃의 온도에서 100 내지 365일 동안 정치시켜 숙성시키는 숙성단계; 및 (5) 숙성과정이 종료된 포도 가시오가피 발효증류주를 여과, 병입 등의 후처리를 수행하는 후처리단계;들을 포함하여 이루어지며,포도 가시오가피 발효증류주를 산란계 닭에 급수하여 초산일령, 산란수, 산란중을 조사하여 가시오가피 발효증류주의 효능을 구명하였다.

포도주, 가시오가피, 우드칩, 덕음, 엘류테로사이드, 쿼서틴어글리콘

Description

가시오가피와 참나무 우드칩을 함유하는 포도 발효증류주의 제조방법 {Manufacturing method of the brandy being fermented from the Grape comprising woodchips of Siberian Ginseng and Oak tree}

도 1은 물참나무, 떡갈나무, 굴피나무, 강참나무 및 유럽산 참나무들의 고성능액체크로마토그래피에 의한 유효성분의 분석결과를 나타낸 그래프이다.

도 2 내지 도 6은 유럽(프랑스)산 참나무 우드칩과 국내산 수종별 참나무에서 분획된 유효성분의 스펙트럼 분석을 통하여 동일물질 여부를 동정한 결과를 나타낸 그래프들로서, 도 2는 유럽산 참나무 우드칩을, 도 3은 국내산 떡갈나무를, 도 4는 국내산 굴참나무를, 도 5는 국내산 물참나무를 그리고 도 6은 국내산 강참나무를 각각 나타낸다.

도 7 내지 도 9는 고성능액체크로마토그래피(HPLC)에서 분획된 유효성분을 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-Mass)를 이용하여 유럽산 참나무와 국내산 떡갈나무 우드칩의 유효성분에 대한 분자량을 조사한 결과를 나타낸 그래프로서, 도 7은 유럽산 참나무에서 분획된 유효물질의 분자량의 측정결과를 나타내고, 도 8은 국내산 떡갈나무 1회 덕음처리에서 분획된 유효물질의 분자량을 조사한 결과를 그리고 도 9는 국내산 떡갈나무 2회 덕음처리에서 분획된 유효물질의 분자량을 조사한 결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 가시오가피와 참나무를 함유하는 포도발효증류주의 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 가시오가피와 포도를 혼합발효시키고, 이를 증류한 후, 덕음처리된 우드칩들과 혼합하여 숙성시켜 지표물질로서 엘류테로사이드와 쿼서틴어글리콘 유사물질을 포함하며, 맛, 색도 및 향이 우수한 포도발효증류주의 제조방법에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 한국형 포도발효증류주가 내재하고 있는 단점을 보완하고자 가시오가피의 열매, 줄기 및 근경을 첨가 발효 및 숙성시켜 맛, 색도 및 향을 개선하고, 가시오가피 고유의 기능성성분을 함유한 특성화된 포도발효증류주를 제조하고자 발효특성을 정립하고, 나아가 명주의 숙성과정에 이용되는 오크통의 대체효과로써 가시오가피 또는 참나무 등과 같은 우드칩들을 덕음처리한 후, 이들을 이용하여 증류된 증류주를 숙성시키는 것을 포함하는 포도발효증류주의 제조방법에 관한 것이다.

우리나라 특히 경기도 가평군에서 주로 생산되는 한국형 포도주에 대한 특성을 조사한 결과 포도주의 당도는 4.5 내지 16.6브릭스(Brix)이며, 알코올 도수(V/V)는 5.4 내지 16.2%(V/V)로써 알코올 도수의 차이는 큰 것으로 나타났으며, 평균 알코올 도수는 11.0%(V/V)로 조사되어 발효증류주를 생산하는데 있어 알코올 생산성이 저조한 실정이다.

특히 서양명주의 대표적인 브랜디와 위스키는 대부분 오크통에서 숙성되면서 에이징(Aging)이 형성되는데 이는 숙성기간중에 참나무(오크) 유래 향과 맛이 용출되어 명주고유의 독특한 향과 맛을 갖게 되는 것으로 사료되는바, 이러한 성분에 대한 물질동정을 위하여 국내에서 유통되는 위스키류와 브랜디류를 수집하여 HPLC를 이용하여 대표적인 지표성분에 대한 정량분석 결과, 머무름시간(RT)이 22 내지 26분 사이에서 분획되는 미지의 성분이 대표적인 오크통 유래의 유효성분으로 인정되었으며, 이러한 유효성분의 스펙트럼을 관찰한 결과 대부분 제1의 흡광도(λmax 1)는 330 내지 385 나노메타(nm)에서 최대흡광도를 나타내었으며, 제2의 흡광도(λmax 2)는 250 내지 280 나노메타(nm)에서 최대흡광도를 나타내는 것으로 미루어 플라보놀(Flavonol)계열의 물질인 것으로 사료되며, 이는 서양명주의 등급화에 관련된 지표성분으로 활용될 수 있었다.

브랜디, 위스키 등 서양 명주의 대부분은 참나무(오크)통에서 오랜 기간 동안 숙성과정을 거쳐 생산된다. 이러한 숙성과정을 통하여 술은 명주 고유의 맛이 형성되고, 더불어 저장기간에 대한 가치를 부여받게 된다. 그러나 술의 오랜 역사를 자랑하는 동양권에서는 술을 숙성시키는 과정보다는 어떤 재료를 가지고 어떻게 술을 빚느냐에 따라 명주의 가치를 부여받게 되었으며, 더군다나 술을 담아두는 용기 대부분은 항아리로써 숙성기간 중 술에 커다란 영향을 주지 않는 것으로 알려져 있다.

오크통은 고대 이집트에서 시작하여 로마시대부터 널리 사용되었다 하는데, 당시 와인을 저장 운반하는데 가장 적합한 용기였다. 돌이나 흙으로 만든 용기는 무겁고, 깨지기 쉽고, 금속으로 만든 용기는 값이 비싸고, 와인이 쉽게 변질되므로 사용할 수가 없었다. 대신 가죽부대를 많이 사용했지만 많은 양을 저장 및 운반하는 데는 한계가 있어서 오크통은 그 수요가 점차 늘어날 수밖에 없었다.

브랜디, 위스키는 오크통에서 극히 제한된 간접적인 공기접촉으로 서서히 숙성되면서 오크통에서 우러나오는 성분들로 인하여 맛과 향이 세련되게 되고, 다양한 향(부케향)이 형성된다고 한다. 특히, 브랜디나 위스키는 갓 증류한 무색의 투명한 술이 오크통에 저장되면서 황금색의 아름다운 색깔로 변하면서 원료에서 나오는 포도 고유의 향과 오크통에서 나오는 나무향이 어우러져 독특한 향미를 갖게 된다. 따라서 와인은 포도 본래의 향과 맛을 가지고 있어서 오크통의 맛과 향이 미치는 영향이 그다지 크지 않지만, 브랜디는 오크통에서 우러나는 성분의 맛과 향이 좌우되므로 오크통은 저장용기라기 보다는 하나의 원료라 할 수 있다. 오크통을 만드는 참나무는 우리나라와 같은 온대지방에 널리 분포되어 있는데, 양조용으로는 나무결이 넓고, 탄닌과 같은 성분이 적당히 함유되어서 냄새가 좋아야 한다. 따라서 와인을 만들 때, 포도의 선택이 중요한 만큼 오크통의 선택 또한 매우 중요하다. 오크통 제조로 유명한 참나무 산지는 프랑스의 리무쟁(Limousin)으로써, 이 지역의 참나무는 나무결 간격이 넓고, 탄닌이 풍부해서 숙성이 잘 되는 것으로 알려져 있다. 그 밖에 네베르(Nevers), 아르마냑의 블랙오크, 그리고 미국의 화이트 오크 등도 유명하지만, 와인과 꼬냑으로 유명한 프랑스의 오크통이 가장 고급으로 알려져 있다. 오크통은 대부분 수작업으로 만들어 지고 있다. 최근에는 부분적으로 기계를 사용하기도 하지만, 여전히 중요한 작업은 손으로 정교하게 자르고 가다 듬어야 한다. 그래서 오크통을 만드는 사람들은 대개 집안 대대로 기술을 전수하여 오늘날까지 이어져 오고 있다.

배부른 오크통을 만들려면 나무를 원래 크기보다 여유 있게 잘라서 건조시킨 후, 양쪽 끝을 가운데보다 더 가늘게 만들어 대패로 가다듬고, 금속으로 된 링 사이에 나무를 끼워서 통 모양으로 둥글게 묶어 다발로 만들고, 여기에 스팀이나 불을 쪼이면 나무가 부드럽게 된다. 이 때의 열을 이용하여 구부리면 쉽게 휘면서 둥근 통 모양을 갖추게 된다. 동시에 미리 만들어 놓은 뚜껑 혹은 바닥판을 기술적으로 끼워 넣으면 오크통이 완성된다. 불을 쪼일 때는 와인용은 가볍게 그을리고, 브랜디나 위스키 등 증류주는 강하게 그을린다. 이렇게 나무에 불을 가하면 나무의 당분이 타면서 카라멜로 변하고, 이 카라멜에 의해 술의 색깔과 향이 더 진해다고 한다.

과거 서양에서 밀주를 담그는 사람들이 스코틀랜드 깊은 산속에서 갓 증류한 보리술을 오크통에 오래 넣어두다가 오늘날 위스키를 만들게 되었고, 부피를 줄이고자 와인을 증류하여 오크통에 넣어 오랜 기간 항해를 하면서 그 향과 색깔이 좋아지는 것을 깨달아 오늘날 브랜디가 나오게 되었다. 특히 갓 증류한 무색의 투명한 술이 오크통에서 점차 황금색의 아름다운 색깔로 변하면서 원료에서 나오는 고유의 향과 나무향이 어우러져 독특한 향미와 맛을 갖게 된다. 따라서 이들 술이 투박한 토속주에서 세계적인 명주로 성장할 수 있었던 것은 오크통이라는 결정적인 원료를 만났기 때문이다. 오크통은 숙성과정에서 바닐린과 탄닌 성분 등 폴리페놀 성분에 의해 최고의 향인 부케향을 낼 수 있도록 도와주는 역할을 하는 것으로 알 려져 있다. 따라서 서양의 유명한 위스키, 브랜디 등 은 오크통에서 품질이 결정된다고 해도 지나치지 않을 만큼 오크통은 서양명주에서 가장 중요한 역할을 한다.

이밖에도 오크통의 역할은 오크통에서 침출되는 탄닌과 같은 유기성분이 숙성과정에서 다양한 유기화합물 등이 슬러지화되어 밑으로 가라앉는 청징작용이 매우 중요하다.

그러나 현실적으로 오크통 원료, 오크통의 제조 및 오크통에서의 숙성 등에 대한 축적된 기술이 거의 없는 우리나라에서 오크통을 대체하여 포도 발효증류주를 숙성시킬 수 있도록 하여 서양 명주들에 비견되거나 오히려 더 좋은 발효증류주를 생산할 수 있는 기술 개발의 필요성이 있다.

한편, 가시오가피는 두릅나무과(Araliaceae)이고, 학명은 엘류테로코커스 센티코서스 맥심(Eleutherococcus Senticosus Maxim)이고, 영문명으로 시고카(Shigoka)라 불리우며, 생약명으로는 ‘오갈피’, ‘자오가’, ‘오가삼’, ‘시베리아 진생’ 등으로 불리우기도 한다. 가시오가피에 대한 재배적인 관심은 1976년 프랑스에서 열린 국제약학회에서 소련의 과학자인 브레이크만 박사가 그 효능을 과학적으로 입증하면서 세계적으로 알려지기 시작했으며 우리나라에서는 1078년부터 강원도 지방을 중심으로 일부 재배되기 시작하였다.

가시오가피 나무는 그 생김새와 생태가 산삼을 꼭 빼 닮았다. 잎모양은 구별할 수 없을 만큼 닮았고, 깊은 산속 그늘지고, 부숙질이 풍부한 흙에서 자라고, 산삼은 다년생 풀 종류이고, 가시오가피는 나무종류라는 점이 다를 뿐이다.

본초강목에서는 "한줌의 오가피가 한 마차의 금화보다 낫다"고 하면서 가시 오가피의 효능을 극찬하고 있으며, 뿌리, 줄기, 잎을 가공하여 약재로 사용한다. 예로부터 "제2의 산삼" 이라고 표현될 정도로 그 효능을 인정받아 왔으며, 1960년대 구소련의 과학아카데미 연구팀에 의해 "가시오가피가 인삼, 산삼보다 더 효능은 뛰어난 반면 부작용이 거의 없다" 라고 할 만큼 우수한 약리효능을 지니고 있는 것으로 알려져 왔다. 동의보감에 나타난 오가피는 기를 북돋아 정(精)을 더하며, 남자의 음위와 여자의 음양을 낫게 함. 허리, 척추통증, 골절, 절룩거림에 효능 및 효과가 있다고 하고 있다. 특히 한국산 가시오가피는 노화방지를 위한 항산화 작용, 면역력 증강작용, 스트레스 해소, 당뇨조절, 피로회복 기능이 있으며, 추가로 혈압, 백혈구 수치 범적용 작용, 면역 및 대사기능 개선, 해독작용, 정력강화 등이 있다고 알려지고 있다.

본 발명의 목적은 가시오가피 생과와 포도를 혼합발효시켜 알코올 생산수율이 가장 높은 발효조건을 구명하고, 이어 알코올 수득율이 높은 진공증류기에서 증류한 후, 가시오가피 생과 유래 향이 전이된 발효증류주를 숙성시키는데, 오크통 대체방안으로 가시오가피 혹은 국내산 참나무 우드칩을 가공처리하여 일정량 첨가하여 발효증류주를 숙성시키는데, 특히 프랑스산 오크통 및 오크칩에서 확인된 지표물질과 동일한 국내산 참나무 수종을 선발하고, 나아가 프랑스산 오크통에서 확인된 유효성분이 증폭된 국내산 참나무 우드칩의 가공처리 조건을 구명하여, 동물실험에서 효능이 입증된 가시오가피 지표물질로서 엘류테로사이드 성분을 함유하며, 맛 색도 및 향이 우수한 포도발효증류주의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 가시오가피를 함유하는 포도발효증류주의 제조방법은, 포도주의 제조에 있어서, (1) 가시오가피의 열매(과일) 2 내지 10중량% 및 포도과즙 90 내지 98중량%를 혼합하여 발효원료를 준비하는 발효원료준비단계; (2) 상기 발효원료에 효모를 접종시키고, 초기 온도를 18 내지 22℃로 유지하고, 매일 2 내지 3회씩 저어주면서 발효개시 후, 10 내지 25일 동안 발효시키는 1차발효단계; (3) 상기 1차발효단계에서 수득되는 발효물을 통상의 진공농축기에서 발효물 10 내지 30㎏을 투입하고, 55 내지 74℃ 및 진공도 0.06 내지 0.08Torr에서 증류하는 증류단계; (4) 상기 증류단계에서 수득된 증류주에 우드칩들을 혼합하되, 상기 증류주 1ℓ에 대하여 20 내지 100g을 혼합하고, 12 내지 16℃의 온도에서 100일 내지 365일 동안 정치시켜 숙성시키는 숙성단계; 및 (5) 숙성된 가시오가피 포도 발효증류주를 착액한 후, 여과, 블랜딩, 병입 등의 후처리를 수행하는 후처리단계;들을 포함하여 이루어짐을 특징으로 한다.

상기 가시오가피 열매는 수확한 그대로인 생과 또는 급속냉동시킨 생동과가 될 수 있다.

상기 포도과즙의 원료인 포도의 품종은 캠벨얼리가 될 수 있다.

상기 우드칩들은 1 내지 3회, 바람직하게는 1회 덖음처리된 가시오가피우드칩 또는 참나무우드칩이 될 수 있다.

이하, 본 발명의 구체적인 실시예를 첨부한 도면을 참조하여 상세히 설명한다.

이하에서 본 발명의 바람직한 실시예 및 비교예들이 기술되어질 것이다.

이하의 실시예들은 본 발명을 예증하기 위한 것으로서 본 발명의 범위를 국한시키는 것으로 이해되어져서는 안될 것이다.

이하의 실시예들에서 달리 표시하지 않는 한, %는 중량%를 의미하며, (V/V)는 (용적/용적)을, 그리고 (W/W)는 (중량/중량)을 의미한다.

실시예 1

1차발효

하기 각 실시예들에서 세부적으로 한정되지 않은 것들을 제외하고는 기본적으로 이하의 기재와 같이 1차발효를 수행하였다.

가시오가피 열매의 생과(건조 등의 처리를 하지 않은 수확상태로 저장된 과일)와 생동과(-40℃의 온도에서 생과를 급속냉동시킨 과일)를 준비하였다.

별도로 포도는 생과를 준비하되, 가지 등을 제거하고(제경), 포도알만을 분리한 후(탈과), 파쇄기를 이용하여 파쇄하거나, 고무통에 담고 깨끗한 장화를 신고 밟아서 파쇄시켜 포도과즙을 준비하였다.

상기 포도과즙(이하, 단순히 ‘포도’라고도 칭함)과 가시오가피 생과 또는 생동과를 발효용기에 투입하여 발효원료를 준비하고, 살균제로서 메타아황산칼륨(Potassium pyrosulfite, K₂S₂O₅)을 발효원료 1㎏ 당 2㎖의 양을 투입하고, 12시간 방치한 후, 발효용기를 열고 살균된 발효원료를 충분히 환기시킨 후, 통상의 방법에 따라 특히 수득하고자 하는 포도주의 희망하는 알코올 함량에 따라 보당작업을 수행한 후, 효모접종을 수행하고, 잘 저어주었다.

효모접종 시 사용되는 효모는 상용화된 효모로서 프랑스 효모(Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae), France, DSM Food Specialites, Fermivin No.7013)를 사용하되, 사전발효시킨 것을 사용하였다. 효모의 사전발효는 발효원료 1㎏ 당 0.5g의 효모를 평량하고, 별도로 효모의 10배 분량의 온수(36℃)에 상기 평량된 효모량의 50중량%의 설탕을 용해시킨 후, 설탕이 용해된 상기 온수에 상기 평량된 효모를 잘 풀어서 용해시킨 후, 36℃의 항온기에 35분간 배양시킨 것을 사용하였다.

효모 접종 후, 초기 온도를 20℃로 유지하고, 매일 2회씩 저어주었다.

발효개시 후, 15일 정도면 과피가 완전히 가라앉게 되며, 이때 1차발효를 종료시켰다.

1차발효가 완료된 후, 통상의 방법에 따라 통상의 여과포로 거른 후, 저장용기에 저장하였다.

실시예 1-1

가시오가피 생과 5.2% 첨가 포도 발효시 알코올 생산효율을 높이고자 알코올 생산성에 가장 영향을 미치는 보당량 적정수준을 구명하기 위하여 포도 및 가시오가피 생과 파쇄액 당도를 24, 28, 32% 수준으로 각각 보당하여 생산된 발효주의 알코올 생산성을 비교한 결과, 하기 표 1에 나타난 바와 같이 보당수준별 평균 알코올 도수는 14.3, 18.2, 16.7%를 나타났으며, 특히 1차발효시 보당수준의 55%가 알 코올 생성도를 나타낸다는 기존학설을 바탕으로 공시재료의 당 소모율을 보당수준에 적용하여 당 분해 정도를 살펴보면 각각 15.9, 18.0, 16.7%로써 이론적인 알코올 생성도수와 유사한 경향을 나타내는 결과와 더불어 당잔존율은 33.8, 35.7, 47.8%를 나타낸 결과를 종합적으로 고찰할 때 가시오가피 생과를 첨가하여 발효증류주를 생산하는 1차발효시 보당의 경제적 당도 수준은 28%가 적정하였다.

보당수준 (Brix)	1차발효		잔당율 (%)	시료kg당 알코올량		평균지수
	기간	당도		(V/V)	(W/W)	(V/V)	(W/W)
24.0	17일	8.1	33.8	143.4± 1.2	115.3± 4.2	87	90
28.0	27일	10.0	35.7	181.8± 3.3	142.6± 1.4	111	112
32.0	28일	15.3	47.8	166.6± 5.5	125.0± 5.4	102	98
평균± 표준편차

실시예 1-2

가시오가피 생과에 묻어 있는 가시오가피 생과 친화성의 자연효모균 등 미생물을 효과적으로 살균하고자 포도와 가시오갈피 생과 5.2% 첨가 혼합 파쇄 후 1차발효시 메타아황산칼륨(Potassium pyrosulfite, K₂S₂O₅) 처리농도를 220ppm(발효시료 kg당 0.5Mol의 2ml 12시간 처리) 처리구와 440ppm(발효시료 kg당 0.5Mol의 4ml 12시간 처리) 처리구의 1차 발효주의 알코올 생산성을 비교하면, 하기 표 2에서와 같이 부피단위 알코올 생산량은 220ppm 처리에서 165.7g/kg 으로 440ppm 처리의 161.9g/kg 보다 양호하였으며, 중량단위 알코올 생산성도 220ppm 처리에서 같은 결과를 나타내는 것으로 미루어 가시오가피 생과 혼합발효시 살균제로써 메타아황산 처리농도는 220ppm 과 12시간 처리가 적정하였다.

메타아황산가리 처리농도(ppm)	시료kg당 알코올 량		평균지수
	(V/V)	(W/W)	(V/V)	(W/W)
220ppm	165.7± 18.5	128.8± 11.7	101	101
440ppm	161.9± 19.1	127.4± 16.5	99	99
평균± 표준편차

실시예 1-3

가시오가피 생과 고유의 향으로 알려진 살리실레이트 고유의 향을 발효증류주에 전이시키고자 급속냉동시킨 생동과를 장기간 저장함으로써 각종 미생물에 노출되어 있는 가시오가피 생동과의 효과적인 살균처리 조건을 구명하고자, 포도와 가시오갈피 생동과 50%를 첨가 혼합 파쇄 후 28Brix 보당수준에서 45일간 발효시켜 알코올 생산성을 비교한 결과 하기 표3에서와 같이 메타아황산칼륨 235ppm 처리에서 알코올 생산성이 161.6 g/kg으로 가장 양호하였으며 타 처리조건에 비하여 6.8% 향상되었다.

메타아황산 처리농도(ppm)	발효액 당도	시료kg당 알코올 량		평균지수
		알코올(V/V)	알코올(W/W)	알코올(V/V)	알코올(W/W)
235ppm	10.8	161.6	140.5	106.8	103.2
246ppm	10.9	147.5		97.5
328ppm	11.6	158.3	139.4	104.6	102.5
476ppm	12.3	143.4		94.7
486ppm	10.4	147.6	129.9	97.6	95.4
656ppm	11.7	149.5	134.6	98.8	98.9
합계		907.9	544.4	600.0	400.0
평균		151.3	136.1	100.0	100.0
표준편차		7.1	4.9	4.7	3.6
최대치		161.6	140.5	106.8	103.2
최소치		143.4	129.9	94.7	95.4

실시예 1-4

포도와 가시오갈피 생과 5.2% 첨가 혼합발효시 가시오가피 생과에 알맞은 효모 유형 및 처리량 적정수준을 구명하고자 28brix 보당수준에서 프랑스산 포도주 효모와 국내산(송천) 탁주 효모를 발효시료 kg당 0.2g을 접종한 결과 하기 표 4에서와 같은 알코올 생산성이 낮았으며, 효모균 수와 순도가 열악한 것으로 알려진 국내산 효모의 특성을 고려하여 효모 접종 기준량의 2.5 내지 7.0배량을 공시하여 알코올 생산성을 비교한 결과 하기 표 5에서와 같이 프랑스산 효모는 보당수준별 처리 공히 0.5g/kg을 접종하였을때 비교적 알코올 생산성이 양호하였으며, 국내산 탁주 효모(송천효모)를 이용하고자 할때 보당수준 28Brix에서 효모 접종량은 1.0g/kg 수준이 적정하였다.

효모접종(g/kg)		시료kg당 알코올 생산량		평균지수
효모유형	접종량	(V/V)	(W/W)	(V/V)	(W/W)
프랑스효모	0.2	165.7± 18.5	128.8± 11.7	100	101
국내송천효모	0.2	164.2± 21.2	126.7± 14.5	100	99
평균± 표준편차

보당수준	효모접종처리		시료kg당 알코올생산량		평균지수
	효모종류	효모량(g/kg)	(V/V)	(W/W)	(V/V)	(W/W)
24.0	프랑스	0.5	144.6	117.6	88	92
	송천	0.5	143.3	117.8	87	92
	프랑스	1.1	142.3	110.5	87	87
28.0	프랑스	0.5	179.4	141.0	109	110
	송천	1.0	185.6	143.5	113	112
	프랑스	1.0	180.5	143.4	110	112
32.0	프랑스	0.5	173.0	127.9	106	100
	송천	1.0	163.8	118.8	100	93
	프랑스	1.4	163.0	128.4	99	101
합계			1,475.6	1,148.8	900.0	900.0
평균			164.0	127.6	100.0	100.0
표준편차			17.1	12.5	10.4	9.8
최대치			185.6	143.5	113.2	112.4
최소치			142.3	110.5	86.8	86.5

실시예 1-5

발효증류주의 생산수율은 1차발효 후 1차발효액 잔존율, 총착즙율 및 순착즙율과 밀접한 관계가 있으며 이는 공시재료의 연화정도와 알코올 생산량, 슬러지율에 정비례하는 현상으로 나타나는 결과이다.

포도 가시오가피 생과 혼합발효시 보당수준별 발효액 잔존율을 살펴보면 하기 표 6에서와 같이 24, 32 Brix에서 89.1 내지 89.3%에 비교하여 28 Brix에서 발효액 잔존율은 이보다 약간 낮은 88.6%인 것으로 미루어 효모의 발효초기 당분해력이 왕성한 것을 알 수 있었으며, 공시량에 대한 총착즙율 및 발효액 잔존량에 대한 순착즙율은 비교하여 보면 24, 32 Brix에서 총착즙율은 81.2 내지 82.0%이고 순착즙율은 91.1 내지 91.8%인 것에 비교하여 28 Brix에서 총착즙율은 80.0%, 순착즙율은 90.4%인 것으로 미루어 착즙작업시 보당수준 24, 32 Brix에 비교하여 28Brix 보당수준에서 슬러지율은 1 내지 2% 높은 특징을 나타내었다.

보당수준	발효기간 (일)	발효액 잔존율(%)		총착즙율(%)		순착즙율(%)
		Mean	STD	Mean	STD	Mean	STD
24브릭스	14	89.3	0.1	82.0	1.4	91.8	1.4
28브릭스	14	88.6	0.3	80.0	0.1	90.4	0.3
32브릭스	14	89.1	0.2	81.2	0.2	91.1	0.2
합계	42	267.0	0.6	243.2	1.7	273.3	1.9
평균	14	89.0	0.2	81.1	0.6	91.1	0.6
표준편차	0	0.4	0.1	1.0	0.7	0.7	0.7
최대치	14	89.3	0.3	82.0	1.4	91.8	1.4
최소치	14	88.6	0.1	80.0	0.1	90.4	0.2

실시예 1-6

포도와 가시오가피 생과 첨가율별 혼합 파쇄한 후 1차발효시켜 알코올 생산성을 비교한 결과, 하기 표 7에 나타난 바와 같이, 포도 단일 발효구에 비하여 가시오가피 생과 첨가율이 20% 이상의 처리구에서 알코올 생산성은 감소되나, 가시오가피 생과 2.0% 첨가 발효구에서는 포도 단일 발효구 보다 알코올 생산성은 9.2% 향상되어 발효증류주의 생산성 향상을 위하여 가시오가피 생과 첨가율은 2.0%가 적정하였다.

가시오가피 생과 첨가율(%)	시료㎏당 알코올량(g/㎏)		알코올 생산 평균지수
	(V/V)	(W/W)	(V/V)	(W/W)
미처리	165.7	144.6	99.3	102.6
2.0%	182.3	142.8	109.2	101.4
4.0%	181.4	140.7	108.7	99.8
6.0%	174.3	146.9	104.4	104.2
8.0%	168.4	143.6	100.9	101.9
10.0%	160.3	138.0	96.0	97.9
12.0%	167.1	142.6	100.1	101.2
14.0%	166.7	142.8	99.9	101.4
16.0%	167.7	140.6	100.5	99.8
18.0%	168.8	139.4	101.2	99.0
20.0%	157.2	137.8	94.2	97.8
30.0%	160.7	136.2	96.3	96.6
40.0%	149.2	135.8	89.4	96.4
합계	2,169.8	1,831.8	1,300.0	1,300.0
평균	166.9	140.9	100.0	100.0
표준편차	9.1	3.4	5.5	2.4
최대치	182.3	146.9	109.2	104.2
최소치	149.2	135.8	89.4	96.4

실시예 2

상기 1차발효단계에서 수득되는 발효물로서 캠벨얼리 품종의 포도과즙에 가시오가피 생동과 5.2% 첨가 발효구에서 수득된 발효물을 통상의 진공농축기에서 발효물 20㎏을 투입하고, 60℃ 및 진공도 0.07Torr에서 증류한 후, 이 증류주(알코올 함량이 43%)에 우드칩들을 혼합하되, 상기 증류주 1ℓ에 대하여 50 내지 80g을 혼합하고, 12 내지 16℃의 온도에서 100일 내지 365일 동안 정치시켜 숙성시켰다. 숙성 전후에 증류 및 숙성작업 시 발생되는 각종 슬러지 제거를 위하여 3개월 이상 정치시켜 가라앉히고 2차적으로 0.1 내지 1.0㎛ 멤브레인 필터를 이용하여 여과작업을 하였다.

이하에서 사용되는 가시오가피우드칩과 참나무우드칩은 발효 및 숙성 용기에 적정한 크기로 재단하여 절단하고자 가시오가피 줄기 및 근경의 크기는 직경에 관계없이 3 내지 4㎝로 절단하였으며, 참나무는 낙엽 후, 초겨울에 절단한 직경 20㎝ 이상의 원목을 야적하여 1년간 자연건조 시킨 후, 5월경 수피를 제거한 다음, 얇게 판을 켠 후 2 x 2㎝ 크기로 정사각형으로 절단하여 이용하였다. 제조 된 각각의 우드칩을 세척한 후, 음지에서 자연건조한 후, 100℃에서 1시간 증자하거나, 자동덕음기에서 온도 170℃, 회전속도 10rpm, 덕음시간 1시간으로 시료별 덕음작업을 실시한 것을 사용하였다. 여기에서 덕음이란 물기가 조금 있는 고기나 약재, 곡식 따위를 물을 더하지 않고 타지 않을 정도로 볶아서 익히는 것을 의미한다.

가시오가피 및 참나무 우드칩이 첨가되어 숙성된 발효증류주의 색도 분석을 수행하였다.

색도 분석은 다음과 같이 실험하였다. 개발모형별 생산된 시제품을 색차계(Super color SP-80, Japan)를 이용하여 L(명도), a(적색도) 및 b(황색도) 값을 측정하여 비교하였다. 이때 기준이 되는 표준판의 색도는 L = 92.50, a =- 0.0, b = 1.36 이다. 또한 종합적인 색차(overall color difference)를 ΔE[ΔE=(ΔL²+Δa²+Δb²)^1/2]값으로 구하였다.

구분	정의	범위	최소값	최대값
L값	명도	0~100	0 : 흑색	100 : 백색
a값	적도	-60~+60	-값: 녹색	+값: 적색
b값	황색도	-60~+60	-값: 청색	+값: 황색

실시예 2-1

가시오가피 우드칩 첨가율에 따른 색도변화에 대하여는 상기 증류주(알코올 농도. 43%(v/v))에 가시오가피 근경 우드칩을 첨가하고 130일간 숙성시킨 후, 색도 조사를 실시한 결과, 하기 표 8에 나타난 바와 같이, 가시오갈피 근경 우드칩 첨가율 3.3%에서 6.7%로 증가할수록 명도는 낮은 경향이나, 적색도와 황색도는 증가하는 경향을 보였으며, 특히 황색도가 현저히 증가함을 확인할 수 있었다.

가시오갈피 근경첨가율(%)	색도 조사(130일)
	L(± 표준편차)	a(± 표준편차)	b(± 표준편차)
3.3	93.63± 0.46	3.15± 0.30	19.98± 2.87
6.7	92.25± 0.48	3.88± 0.40	29.17± 2.53
평균	92.94	3.51	24.58
표준편차	0.97	0.52	6.50

실시예 2-2

발효증류주의 오크통 숙성의 대체방안으로 첨가되는 가시오가피 줄기(stem), 근경(Rootstalk) 및 뿌리(Root)의 우드칩 가공처리(W:세척, D: 건조, S:증자 R:덕음)에 따른 색도 변화는 하기 표 9에 나타난 바와 같이, 세척 증자 건조 및 덕음 1회처리가 세척 건조처리와 세척 증자 건조처리에 비하여 적색도와 황색도가 현저히 증가함을 확인할 수 있었다.

공시재료		처리방법	크기	첨가율	알코올(v/v)	L	a	b
줄기(Stem)		세척건조	L	6.9	77.1	86.71	9.61	16.69
		세척건조	M	6.9	77.1	86.17	16.35	28.29
		세척건조	S	6.9	77.1	83.73	15.65	26.22
		세척증자건조	L	6.9	77.1	87.45	9.81	17.64
		세척증자건조	M	6.9	77.1	87.96	10.62	17.89
		세척증자건조	S	6.9	77.1	86.90	16.90	29.45
		세척증자건조	S	6.9	77.1	88.13	16.62	27.75
		세척증자건조1회덕음	L	6.9	77.1	87.84	15.76	33.44
		세척증자건조1회덕음	M	6.9	77.1	87.28	17.50	33.59
		세척증자건조1회덕음	S	6.9	77.1	86.12	21.35	45.26
뿌리(Root)		세척건조	S	6.9	77.1	90.24	9.45	20.76
		세척증자건조	S	6.9	77.1	91.09	7.83	16.05
		세척증자건조1회덕음	S	6.9	77.1	89.43	13.70	29.99
중국산	줄기	세척건조	L	6.9	77.1	90.54	9.20	17.83
	근경	세척건조	L	6.9	77.1	89.87	9.46	18.34
	뿌리	세척건조	L	6.9	77.1	91.41	6.79	14.48
합계				110.3	1,233.6	1,410.87	206.60	393.67
평균				6.9	77.1	88.18	12.91	24.60
표준편차				0.0	0.0	2.11	4.30	8.55
최대치				6.9	77.1	91.41	6.79	45.26
최소치				6.9	77.1	83.73	21.35	14.48

실험예 3

유효성분의 함량분석의 실험조건은 다음과 같다.

고성능액체크로마토그래피(Waters Alliance 2695 HPLC)를 사용하여 가시오가피와 참나무 우드칩을 첨가하여 숙성시킨 발효증류주를 시기별 일정량씩 채취하여 분석시료로 사용하였다.

여기에 사용된 컬럼(column)은 엑스테라(Xterra, 등록상표) MS C18 3.5㎛(2.1×150㎜), MS C18 5㎛(4.6X250㎜), 심메트리(Symmetry, 등록상표) C18 5㎛(4.6X250㎜) 3종으로 물질특성에 따라 선택적으로 사용하였으며, 이동상은 100% 메탄올, 물(1% 인산) 85%+아세토니트릴(15%), 2% 초산+50% 아세토니트릴(0.5% 초산 중) 3종을 사용하였으며, 흡광도 200 내지 600㎚(Waters 2996 PAD)에서 분획하였으며, 이때 이동상의 유속(Flow rate)은 분당 0.8 내지 1.0㎖을 유지하였다

가시오가피 및 참나무 우드칩 시료분석은 80℃에서 48시간 건조시켜 잘게 분쇄한 시료 5g를 250㎖ 둥근 플라스크에 각각 넣고 메탄올 100㎖씩을 가하여 80℃ 수조(water bath)에서 환류냉각으로 1시간 추출하고, 4℃에서 6시간동안 냉각시킨 후 여과하였다. 여과한 잔사는 1차 추출과 같은 방식으로 2차 추출 및 여과하고, 이렇게 2회 추출 여과액을 합쳐 감압 농축기로 40℃, 40rpm에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물은 다시 메탄올 10㎖로 정용하여 HPLC의 분석시료로 하였다.

가시오가피 포도 발효(증류)주의 분석은 시료를 PTFE 0.2 내지 0.45㎛ 기공(pore)의 멤브레인 필터(membrane filter)로 여과하여 고성능액체크로마토그래피에 직접 주입하거나, 시료 100㎖를 감압 농축기로 40℃, 40rpm에서 감압 농축 후 메탄올 10㎖로 정용하여 고성능액체크로마토그래피로 분석하였다. 메탄올로 정용한 시료는 폴리에틸렌테레프탈레이트(PTFE) 0.2㎛ 기공의 멤브레인 필터로 여과하여 고성능액체크로마토그래피에 주입하였으며, 이외 고성능액체크로마토그래피의 조건은 아래와 같다.

1. 표준물질

엘류테로사이드 E : 25, 50, 100, 200ppm(Nakarai 제품)

엘류테로사이드 B : 25, 50, 100, 200ppm(Nakarai 제품)

엘류테로사이드 E + 엘류테로사이드 B : 200ppm+200ppm(Nakarai 제품)

쿼세틴 디하이드레이트 : 25, 50, 100, 200ppm(Sigma 제품)

클로로겐산(Chlorogenic acid) : 25, 50, 100, 200ppm(Sigma 제품)

2. 샘플정제

A. 방법

가. 샘플을 60㎖ 둥근플라스크에 감암증류한다.

나. 6:4 메탄올을 10㎖ 취하여 소니케이션을 5분간 한 후,

다. 폴리에틸렌테레프탈레이트 멤브레인 필터 0.4㎛로 여과한 후, 채취하였다.

B. 방법

가. A방법의 가 방법으로 한 후 에테르(ether)로 1㎖에서 5㎖까지 서서히 취하여 녹임.

나. 둥근 플라스크에 3차 증류수 10㎖ + n-부탄올 10㎖을 층분리를 위하여 3반복 후에 물을 제거하고

다. 60㎖ 둥근플라스크에 넣은 후 감압증류하고,

라. 용기내벽에 붙은 물질을 6:4 메탄올에 5㎖에 최소한의 양으로 용해시킨 뒤 5분간 소니케이션(sonication)한 후에 폴리에틸렌테레프탈레이트 멤브레인 필터 0.45㎛로 여과한 후, 채취하였다.

실시예 3-1

포도+가시오가피 생과 발효증류주의 오크통숙성 효과 대체방안으로 알코올 농도가 각각 상이한 발효증류주에 가시오가피 줄기(Stem)의 가공처리 방법별 우드칩을 6.9% 첨가하여 162일 경과한 후 엘류테로사이드 B와 엘류테로사이드 E 함량을 조사하였다.

가시오가피 줄기 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 B 함량은 하기 표 10에서와 같이 알코올 농도별 평균함량은 세척건조 처리에서 54.6㎍/ml, 세척증자건조 처리구에서 46.3㎍/ml, 세척증자건조덕음1회 58.5㎍/ml로써 세척증자건조덕음1회 처리에서 세척건조 처리 대비 엘류테로사이드 B 함량은 7.1% 증가되었다. 엘류테로사이드 E 함량은 세척건조 처리에서 65.1㎍/ml, 세척증자건조 처리구에서 53.1㎍/ml, 세척증자건조덕음1회 70.3㎍/ml로써 세척증자건조덕음1회 처리에서 세척건조 처리 대비 엘류테로사이드 E 함량은 8.0% 증가되었다.

가시오가피 뿌리(소) 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 B 함량은 알코올 농도별 평균함량은 세척건조 처리에서 17.8㎍/ml, 세척증자건조 처리구에서 22.7㎍/ml, 세척증자건조덕음1회 27.2㎍/ml로써 세척증자건조덕음1회 처리에서 세척건조 처리 대비 엘류테로사이드 B 함량은 52.8% 증가되었다. 엘류테로사이드 E 함량은 알코올 농도 53.6% 증류주에서 세척건조 처리에서 11.0㎍/ml, 세척증자건조 처리구에서 65.7㎍/ml, 세척증자건조덕음1회 74.3㎍/ml로써 세척증자건조덕음1회 처리에서 세척건조 처리 대비 엘류테로사이드 E 함량은 6.7배 증가되었다.

가시오가피 줄기의 굵기별 규격을 달관적으로 대(직경 1.5cm 이상) 중(0.8 내지 1.5cm 미만) 소(0.8cm 미만)로 구분하여 엘류테로사이드 B와 엘류테로사이드 E 함량을 조사한 결과 세척건조 처리에서는 중 규격의 줄기에서, 세척증자건조 처리에서는 소 규격의 줄기에서, 세척증자건조덕음1회 처리에서는 대 규격의 줄기에서 엘류테로사이드의 함량이 높았다.

알코올 함량에 따른 엘류테로사이드 B 함량을 조사한 결과 세척건조 처리에서는 53.6%의 알코올에서 높았으며, 세척증자건조 처리에서는 77.1%의 알코올에서, 세척증자건조덕음1회 처리에서는 53.6%의 알코올 농도에서 엘류테로사이드의 함량이 높았다. 엘류테로사이드 E 함량은 세척건조 처리에서는 77.1%의 알코올 농도에서 높았으며, 세척증자건조 처리에서는 53.6%의 알코올에서, 세척증자건조덕음1회 처리에서는 53.6%의 알코올 농도에서 엘류테로사이드 E 함량이 높았다.

종합적인 고찰 결과 가시오가피 줄기와 뿌리를 세척건조하여 우드칩으로 사용하는 것보다 세척증자건조덕음1회 처리를 통하여 발효증류주의 숙성시 사용하는 것이 가시오가피의 지표성분으로서 엘류테로사이드 B와 엘류테로사이드 E 함량을 증대시키는 것으로 확인되었다.

공시재료		평균함량(㎍/ml)		엘류테로사이드 B		엘류테로사이드 E
처리방법	규격	EB	EE	Alc. 53.6%	Alc. 77.1%	Alc. 53.6%	Alc. 77.1%
세척건조	줄기(대)	53.3	66.1	64.6	42.1	64.8	67.3
	줄기(중)	56.7	70.8	67.1	46.3	67.5	74.0
	줄기(소)	53.7	58.5	64.9	42.5	58.4	58.6
	평 균	54.6	65.1	65.5	43.6	63.6	66.7
세척증자건조	줄기(대)	46.7	49.2	49.6	43.9	55.5	43.0
	줄기(중)	38.6	50.4	32.1	45.1	52.8	48.0
	줄기(소)	53.4	59.8	54.2	52.7	63.8	55.9
	평 균	46.3	53.1	45.3	47.2	57.3	48.9
세척증자건조덕음1회	줄기(대)	65.2	76.2	80.9	49.5	108.4	44.1
	줄기(중)	58.7	65.2	71.8	45.5	71.9	58.6
	줄기(소)	51.8	69.6	65.5	38.0	79.7	59.4
	평 균	58.5	70.3	72.7	44.4	86.7	54.0
세척건조	뿌리(소)	17.8	8.8	20.2	15.4	11.0	6.6
세척증자건조	뿌리(소)	22.7	65.7	26.9	18.4	65.7
세척증자건조덕음1회	뿌리(소)	27.2	51.3	31.6	22.9	74.3	28.3

실시예 3-2

포도+가시오가피 생과 발효증류주의 오크통숙성 효과 대체방안으로 알코올 농도가 각각 상이한 발효증류주에 가시오가피 가공처리 방법별 근경 우드칩을 6.5% 첨가하여 100일 경과한 후 엘류테로사이드 B 함량을 조사하였다.

가시오가피 근경 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 B 함량은 하기 표 11에서와 같이 알코올 농도별 평균함량은 세척덕음1회 처리에서 62.6㎍/ml, 세척덕음2회 58.0㎍/ml, 세척증자덕음1회 44.4㎍/ml, 세척증자덕음2회 56.9㎍/ml, 세척증자건조덕음1회 47.5㎍/ml, 세척증자건조덕음2회 42.9㎍/ml로써 엘류테로사이드 B 함량은 세척덕음1회 처리에서 가장 높았다. 그러나 상업용 포도 발효증류주(Brandy)의 알코올 농도 수준인 42.9%(v/v)에서 엘류테로사이드 B 함량은 세척증자덕음2회 처리에서 75.4㎍/ml으로 가장 높았고, 알코올 농도 45.4%(v/v)에서는 세척덕음1회 처리에서 76.4㎍/ml, 알코올 농도 75.8%에서는 세척덕음2회 처리에서 47.6㎍/ml으로 알코올 농도간 엘류테로사이드 B 함량은 차이가 있었다.

이러한 결과와 더불어 가시오가피 근경 우드칩의 처리방법별 지표성분 함량의 표준편차보다 알코올 농도간 표준편차가 큰 것으로 보아 지표성분의 함량은 알코올 농도에 영향이 큰 것으로 확인되었으며, 포도 가시오가피 발효증류주의 엘류테로사이드 B 성분을 증대시키기 위한 가시오가피 우드칩 처리는 덕음1회 처리가 가장 유리하였다.

우드칩 처리방법	알코올 농도별		Alc. 42.9		Alc. 45.4		Alc. 75.8
	평균	표준편차	평균	표준편차	평균	표준편차	평균	표준편차
세척덕음1회	62.6	18.0	69.2	1.2	76.4	0.9	42.2	2.5
세척덕음2회	58.0	10.7	57.3	1.6	69.0	1.6	47.6	2.8
세척증자덕음1회	44.4	7.0	52.0	1.2	43.0	2.7	38.2	2.4
세척증자덕음2회	56.9	18.5	75.4	1.9	57.0	2.4	38.3	2.2
세척증자건조덕음1회	47.5	12.9	60.0	1.9	48.1	4.2	34.3	2.7
세척증자건조덕음2회	42.9	8.6	43.0	1.7	51.4	3.1	34.2	4.2
합계	312.2	75.8	357.0	9.5	344.8	497.6	234.9	16.7
평균	52.0	12.6	59.5	1.6	57.5	99.5	39.1	2.8
표준편차	8.2	4.8	11.7	0.3	12.9	50.9	5.1	0.7
최대값	62.6	18.5	75.4	1.9	76.4	163.4	47.6	4.2
최소값	42.9	7.0	43.0	1.2	43.0	34.1	34.2	2.2

실시예 3-3

포도+가시오가피 생과 발효증류주의 알코올 농도가 각각 상이한 발효증류주에 가시오가피 가공처리 방법별 근경 우드칩을 6.5% 첨가하여 100일 경과한 후 엘류테로사이드 E 함량을 조사하였다.

가시오가피 근경 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 E 함량은 하기 표 12에서와 같이 알코올 농도별 평균함량은 세척덕음1회 처리에서 82.2㎍/ml, 세척덕음2회 73.5㎍/ml, 세척증자덕음1회 57.7㎍/ml, 세척증자덕음2회 80.7㎍/ml, 세척증자건조덕음1회 65.1㎍/ml, 세척증자건조덕음2회 53.2㎍/ml로써 엘류테로사이드 E 함량은 세척덕음1회 처리에서 가장 높았다. 그러나 알코올 농도 42.9%(v/v)에서 엘류테로사이드 E 함량은 세척증자덕음2회 처리에서 109.0㎍/ml으로 가장 높았고, 알코올 농도 45.4%(v/v)에서는 세척덕음1회 처리에서 104.3㎍/ml, 알코올 농도 75.8%에서는 세척덕음2회 처리에서 41.6㎍/ml으로 알코올 농도간 엘류테로사이드 E 함량은 차이가 있었다.

이러한 결과로 미루어 포도 가시오가피 생과 발효증류주의 엘류테로사이드 E 성분을 증대시키기 위한 가시오갈피 우드칩 처리는 세척덕음1회 처리가 가장 유리하였다.

우드칩 처리방법	알코올 농도별		42.9(v/v)	45.4(v/v)	75.8(v/v)
	평균	표준편차
세척덕음1회	82.2	36.6	102.5	104.3	39.9
세척덕음2회	73.5	27.7	87.4	91.4	41.6
세척증자덕음1회	57.7	19.6	72.9	64.6	35.6
세척증자덕음2회	80.7	44.6	109.0	104.0	29.3
세척증자건조덕음1회	65.1	31.6	92.8	71.8	30.6
세척증자건조덕음2회	53.2	24.4	71.9	62.1	25.5
합계	412.4	184.6	536.5	498.1	202.5
평균	68.7	30.8	89.4	83.0	33.8
표준편차	12.1	9.0	15.2	19.3	6.3
최대값	82.2	44.6	109.0	104.3	41.6
최소값	53.2	19.6	71.9	62.1	25.5

실시예 3-4

HPLC 분석의 기초원리로써 크로마토그래프상에서 분획된 유효성분이 동일한 물질일 경우 동일한 머무름시간(RT)에서 피크를 나타내는 것으로서, 서양명주의 숙성과정에서 사용되는 오크통과 동일한 유럽(프랑스)산 참나무 우드칩에서 분획된 유효성분의 머무름시간을 통하여 동일물질 여부를 동정하기 위하여 국내산 참나무 수종별 우드칩의 HPLC 크로마토그래프를 비교분석한 결과 , 도 1에 나타난 바와 같이, 참나무 수종별 분획된 유효성분의 머무름 시간은 물참나무 27.60, 굴피나무 26.04, 강참나무 28.20으로서 유럽산 참나무의 유효성분의 머무름 시간과 상이하나, 떡갈나무에서 분획된 유효성분의 머무름 시간은 유럽산 우드칩과 동일한 머무름 시간인 27.47분(RT)에서 피크를 나타냄으로 동일물질로 확인되었다. 도 1에서, 각 그래프들은 도면의 상단에 기재된 순서의 나무들의 순서대로 분석결과를 나타낸 것으로서, 맨 위로부터 물참나무, 떡갈나무, 굴피나무, 강참나무 및 유럽산 참나무의 순서대로 나타낸 것이다.

실시예 3-5

HPLC의 PAD(Photodiode Array Detector) 분석장치는 크로마토그래프에 나타난 각각의 피크를 여러파장에서 수집한 흡광도의 스펙트럼 비교를 통하여 분획된 유효물질의 특성과 동일물질 여부를 동정하는 장점을 이용할 수 있다. 이러한 분석기술을 통하여 유럽(프랑스)산 참나무 우드칩과 국내산 수종별 참나무에서 분획된 유효성분의 스펙트럼 분석을 통하여 동일물질 여부를 동정한 결과, 도 2(유럽산 참나무 우드칩), 도 3(국내산 떡갈나무), 도 4(국내산 굴참나무), 도 5(국내산 물참나무) 및 도 6(국내산 강참나무)에서와 같이 국내산 참나무류인 물참나무, 굴피나무, 강참나무의 덕음1회 및 2회 처리한 우드칩에서 분획된 유효성분의 스펙트럼 형태는 유럽산 참나무의 유효성분의 스펙트럼과 상이하나, 떡갈나무의 덕음1회 우드칩 분획물질의 스펙트럼은 제1의 흡광도(λmax 1)는 362.83 나노메타(nm)에서 최대흡광도를 나타내었으며, 제2의 흡광도(λmax 2)는 252.83 나노메타(nm)에서 최대흡광도를 나타내는 것이 유럽산 참나무 우드칩의 유효성분에 대한 스펙트럼과 동일한 스펙트럼으로 관찰됨에 따라 동일물질로 확인되었다.

실시예 3-6

HPLC에서 분획된 유효성분을 LC-Mass를 이용하여 유럽산 참나무와 국내산 떡갈나무 우드칩의 유효성분에 대한 분자량을 조사한 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 유럽산 참나무에서 분획된 유효물질의 분자량은 303.44이고, 도 8에 나타난 바와 같이, 떡갈나무 1회 덕음처리에서 분획된 유효물질의 분자량은 303.42이며, 도 9에 나타난 바와 같이, 떡갈나무 2회 덕음처리에서 분획된 유효물질의 분자량은 303.41인 결과를 나타내는 것으로 미루어 동일한 분자량을 가진 물질로 확인되며, 이는 플라보놀(Flavonol) 계열의 분자량 303으로 알려진 쿼서틴디하이드레이트(Quercetin dihydrate ; 분자량 302.24) aglycon의 유사물질로 추정된다.

실시예 3-7

국내산 참나무 수종별 우드칩의 유효성분은 덕음처리 횟수가 1회에서 2회로 증가됨에 따라 하기 표 13에서와 같이 물참나무, 강참나무, 굴피나무의 유효성분의 적분값은 감소되나, 떡갈나무는 덕음처리 1회에 비하여 2회처리 시 유효성분의 적분값은 급격히 증가되는 현상을 보였으며, 수종 및 처리별 유효성분 적분값은 4.3배 증폭되었다.

수종별	머무름시간	적분값(피크면적)	평균지수
물참나무-1회덕음	21.2	10,623,999	69
물참나무-2회덕음	21.1	6,524,999	42
떡갈나무-1회덕음	21.2	20,469,299	132
떡갈나무-2회덕음	20.4	66,629,490	430
굴참나무-1회덕음	22.1	5,452,455	35
굴참나무-2회덕음	22.0	1,402,723	9
강참나무-1회덕음	22.3	6,839,109	44
강참나무-2회덕음	22.6	486,323	3
프랑스산 오크칩	21.2	21,093,405	136
합계	192.7	139,521,803	900
평균	21.4	15,502,423	100
표준편차	0.9	20,538,497	132
최대치	22.6	66,629,490	430
최소치	19.8	486,323	3

실시예 3-8

국내산 참나무 수종별 우드칩을 건조, 증자, 1회덕음, 2회덕음, 증자1회덕음, 증자2회덕음처리 및 각 처리후 우드칩 겉면과 안면을 구분하여 분획한 유효성분의 적분값을 비교한 결과 하기 표 14에서와 같이 떡갈나무 우드칩은 물참나무, 강참나무, 굴피나무 우드칩에 비교하여 유효성분의 적분값이 높았다. 떡갈나무 우드칩의 가공처리별 유효성분의 적분값은 자외선(UV) 254nm 파장에서는 2회덕음처리+안면에서 최대값을 보였으며 평균지수는 234를 나타냈으며, 365nm파장에서는 증자1회덕음처리+겉면에서 최대값을 나타내었으며 평균지수는 248을 나타냈다. 이러한 결과를 종합적으로 고찰하여 가공처리 방법은 2회덕음 처리가 실용화 가능성이 높은 것으로 확인되었다.

참나무 수종 및 처리별		254nm 파장		365nm 파장
		적분값	평균지수	적분값	평균지수
떡갈나무	건조	76,304,921	65	12,659,735	60
	증자	93,672,350	79	16,931,441	80
	1회덕음(겉)	172,327,867	146	36,323,438	171
	1회덕음(안)	159,276,232	135	33,836,582	159
	2회덕음(겉)	248,410,543	210	41,316,410	195
	2회덕음(안)	277,023,629	234	38,215,410	180
	증자1회덕음(겉)	211,747,012	179	52,594,162	248
	증자1회덕음(안)	200,891,097	170	46,606,641	220
	증자2회덕음(겉)	175,685,066	149	25,490,434	120
	증자2회덕음(안)	200,367,264	169	19,002,048	90
물참나무	건조	6,001,804	5	4,281,268	20
	증자	33,563,991	28	5,960,841	28
굴피나무	건조	15,630,057	13	2,763,265	13
	증자	7,980,511	7	1,571,144	7
강참나무	건조	5,592,278	5	951,896	4
	증자	7,406,543	6	1,186,324	6
합계		1,891,881,166	1,600	339,691,038	1,600
평균		118,242,573	100	21,230,690	100
표준편차		97,356,646	82	18,041,213	85
최대치		277,023,629	234	52,594,162	248
최소치		5,592,278	5	951,896	4

실험예 4

동물실험에 의한 가시오가피 포도 발효증류주 급여 효과를 다음과 같이 실험하였다. 산란계 급여시험의 조건은 다음과 같다.

공시축 : 닭(영계, 중추)

산란계 품종 : 로만

일령 : 입추 후 105일령

공시 규모 : 중추 60수

시범 요인 및 조사항목

가시오가피 포도 발효증류주, 시판주류(소주), 포도 발효주의 지속적 급여로 만성 알코올중독시 닭의 초산일령 및 산란율에 미치는 영향 구명

항 목	시험요인
	표준구	시험구1	대비구	시험구2
급수 조건	물(정상급수)	가시오가피 포도 발효증류주 알코올 5% 희석액	소주 알코올 5% 희석액	포도 발효주 알코올 5% 희석액
조사항목	초산일령	초산일령	초산일령	초산일령
	초기 산란율(초산후 20일 혹은 공시축 50% 산란 시기까지)	산란율(초산후 20일혹은 공시축 50% 산란 시기까지)	산란율(초산후 20일간)	산란율(초산후 20일간)
	산란중(초산후 20일간)	산란중(초산후 20일간)	산란중(초산후 20일간)	산란중(초산후 20일간)
	알 평균중량	알 평균중량	알 평균중량	알 평균중량

실시예 4-1

가시오가피 포도 발효(증류)주 시제품의 발효증류주(시험구 1) 발효주(시험구 2)와 소주(대비구)를 알코올 성분 5% 희석액으로 조제하여 산란계 닭에 급여한 결과, 하기 표 15에 나타난 바와 같이, 공시축 입식 후 처리별 초산일까지 사육일수는 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 48일, 가시오가피 포도 발효주 급여구(시험구 2)에서 52일, 정상급수 급여구(표준구)에서 55일, 소주 급여구(대비구)에서 51일(정상 산란은 58일) 소요되었다. 따라서 처리구별 공시축의 초산일령은 정상급수(표준구)에서 160일에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 초산일령은 153일로써 정상급수 급여구(표준구)에 비하여 7일 빨랐다.

또한 공시축 전체 개체수의 50%가 알을 낳는 시기를 산란기로 규정하였을때 산란기 이전의 초기 산란일수는 정상급수(표준구)에서 12일이며, 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서는 20일로써 초기산란일수도 8일 증가하였다.

이는 가시오가피의 지표성분중 엘류테로사이드 E 성분은 면역증강력 및 항상성을 증가시키고, 엘류테로사이드 B 성분은 동물의 성호르몬 분비 촉진 및 성선발달 효과 등으로 동물의 교미회수가 증가하였다는 다수의 동물실험 결과에 미루어 가시오가피 포도 발효증류주 급여가 산란계 닭의 배란 및 난포 형성기간을 단축시킴으로 초산일령을 단축하는데 기여한 것으로 사료된다.

따라서 양계농장에서 초산일령을 단축하고자 시행하는 점등사육 등 사양관리에 효과적인 대체수단으로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.

조사일	처리구별 산란수(개/일)
	표준구	시험구 1	대비구	시험구 2	계(평균)
05-9-28		1			1
05-9-29		1			1
05-9-30		1			1
05-10-1		1	1(비정상난)		2
05-10-2		1		1	2
05-10-3		1		1	2
05-10-4		2		1	3
05-10-5	1	2		2	5
05-10-6	1	2		1	4
05-10-7	1	2		1	4
05-10-8	1	2	2	2	7
05-10-9		2	2	2	6
05-10-10	2	3	2	3	10
05-10-11	3	4	2	3	12
05-10-12	4	4	3	4	15
05-10-13	5	6	2	4	17
05-10-14	3	5	6	5	19
05-10-15	5	6	6	7	24
05-10-16	4	7	7	6	24
05-10-17	6	8	7	7	28
합 계	36	61	40	50	187
평 균	3.0	3.1	3.6	3.1	9.4
표준편차	1.8	2.2	2.3	2.2	9
최소치	1	1	1	1	1
최대치	6	8	7	7	28
입식후 초산일까지 사육일수	55	48	51(58)	52	67
공시기간중 산란일수	12	20	11	16	20
초산일	10월 5일	9월 28일	10월 1일	10월 2일	10월 17일
초산일령	160	153	156(163)	157	172

상기 표 15에서 괄호 속의 수치는 실험에 사용된 계란 중 비정상란을 의미하는 것으로서, 통계상으로는 불용한 수치이나, 전체 실험의 객관화를 위하여 병기하였다.

실시예 4-2

산란기 이전의 초기 산란수 및 산란중을 조사한 결과 하기 표 16에 나타난 바와 같이, 가시오가피 포도 발효증류주를 급여구(시험구 1)에서 산란수는 61개, 산란중은 3,193.2g으로 정상급수(표준구)에서는 산란수 36개, 산란중은 1,906.1g으로 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구에서 산란수는 69%, 산란중은 68% 증가하는 결과를 보임을 확인할 수 있었으며, 본 발명에 따른 가시오가피 포도 발효증류주에 함유되어 있는 기능성 성분(엘류테로사이드B 및 엘류테로사이드 E)의 영향으로 판단된다.

구 분	표준구		시험구 1		대비구		시험구 2
	산란수(개)	산란중(g)	산란수(개)	산란중(g)	산란수(개)	산란중(g)	산란수(개)	산란중(g)
초기산란수 및 산란중	36	1,906.1	61	3,193.2	40	2,094.9	50	2,587.2
표준구 대비 지수	100	100	169	168	111	110	139	136

실시예 4-4

산란기(공시축 개체수의 50% 이상 알을 낳는 시기) 이후의 일별 산란율을 비교한 결과 하기 표 17에 나타난 바와 같이 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 산란율은 81.5%이며 정상급수(표준구)에서 산란율은 69.0%로써 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구에서 산란율은 12.5% 증가하는 결과를 보임을 확인할 수 있었다.

조사일	처리구별 산란율					노지방사
	표준구	시험구 1	대비구	시험구 2	평균
05-10-18	57.1	71.4	42.9	35.7	51.8	25.0
05-10-19	42.9	64.3	71.4	57.1	58.9	50.0
05-10-20	78.6	64.3	78.6	50.0	67.9	50.0
05-10-21	57.1	64.3	71.4	46.2	60.0	50.0
05-10-22	57.1	85.7	64.3	61.5	67.3	50.0
05-10-23	64.3	92.9	85.7	72.7	79.2	75.0
05-10-24	64.3	85.7	78.6	63.6	73.6	75.0
05-10-25	71.4	100.0	64.3	72.7	77.4	50.0
05-10-26	85.7	100.0	85.7	72.7	86.8	50.0
05-10-27	85.7	100.0	71.4	81.8	84.9	50.0
05-10-28	85.7	92.9	64.3	72.7	79.2	75.0
05-10-29	78.6	57.1	64.3	45.5	62.3	50.0
합 계	829	979	843	732	849	650
평 균	69.0	81.5	70.2	61.0	70.8	54.2
표준편차	14	16	12	14	11	14
최소치	43	57	43	36	52	25
최대치	86	100	86	82	87	75

실시예 4-5

산란기(공시축 개체수의 50% 이상 알을 낳는 시기) 이후 무가온 사양관리 조건에서 기온이 낮아지는 초상일 이전까지 12일간의 처리구별 산란수, 산란중 및 평균 난중을 비교한 결과 하기 표 18에 나타난 바와 같이 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 총 산란수는 160개이며 정상급수(표준구)에서 총 산란수는 116개로써 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구에서 산란수는 20.7% 증가하는 결과를 보였다.

총 산란중은 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 7,779g이며 정상급수(표준구)에서 총 산란중은 6,517g로써 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구에서 총 산란중은 19.4% 증가하는 결과를 보였다.

그러나 처리구별 평균난중은 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 55.6g이며 정상급수(표준구)의 평균난중은 56.2g으로써 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)의 평균난중은 정상급수(표준구) 평균난중의 98.9% 수준을 보이는 것으로 미루어 평균난중은 양처리간 유사한 것으로 사료되며, 본 발명에 따른 가시오가피 포도 발효증류주에 함유되어 있는 기능성 성분(엘류테로사이드B 및 엘류테로사이드 E)의 영향으로 판단된다.

조사일	항목	처리구별 특성				노지방사
		표준구	시험구1	대조구	시험구2
05-10-18	일별산란수 일별총난중 평균난중	8 442.2 55.3	10 524.7 52.5	6 335.8 56.0	5 270.5 54.1	1 43.0 43.0
05-10-19	일별산란수 일별총난중 평균난중	6 331.3 55.2	9 480.9 53.4	10 552.6 55.3	8 431.6 54.0	2 100.3 50.2
05-10-20	일별산란수 일별총난중 평균난중	11 597.4 54.3	9 496.2 55.1	11 631.4 57.4	7 370.4 52.9	2 92.6 46.3
05-10-21	일별산란수 일별총난중 평균난중	8 461.3 57.7	9 496.2 55.1	10 579.1 57.9	6 324.4 54.1	2 92.5 46.3
05-10-22	일별산란수 일별총난중 평균난중	8 450.7 56.3	12 661.6 55.1	9 511.4 56.8	8 435.7 54.5	2 106.0 53.0
05-10-23	일별산란수 일별총난중 평균난중	9 498.2 55.4	13 712.1 54.8	12 683.2 56.9	8 443.8 55.5	3 152.2 50.7
05-10-24	일별산란수 일별총난중 평균난중	9 506.1 56.2	12 661.2 55.1	11 639.1 58.1	7 383.7 54.8	3 149.0 49.7
05-10-25	일별산란수 일별총난중 평균난중	10 557.9 55.8	14 761.3 54.4	9 525.5 58.4	8 444.8 55.6	2 99.9 49.9
05-10-26	일별산란수 일별총난중 평균난중	12 691.5 57.6	14 806.9 57.6	12 688.8 57.4	8 480.2 60.0	2 100.2 50.1
05-10-27	일별산란수 일별총난중 평균난중	12 680.2 56.7	14 803.3 57.4	10 584.4 58.4	9 491.1 54.6	2 112.8 56.4
05-10-28	일별산란수 일별총난중 평균난중	12 672.3 56.0	13 725.0 55.8	9 539.0 59.9	8 467.9 58.5	3 169.6 56.5
05-10-29	일별산란수 일별총난중 평균난중	11 628.1 57.1	11 649.8 59.1	10 581.5 58.1	8 444.2 55.6	2 105.3 52.6
총계	총산란수 산란수표준편차 총산란중 평균난중 난중표준편차 난중최소치 난중최대치	116 2.0 6,517 56.2 4.2 46.2 81.8	140 2.3 7,779 55.6 4.2 45.6 79.7	119 1.6 6,852 57.6 4.5 49.0 72.2	90 1.3 4,989 55.4 4.9 45.5 75.9	26 6.7 1,323 50.9 6.7 40.8 61.3

실시예 4-6

산란기(공시축 개체수의 50% 이상 알을 낳는 시기) 이후 12일간의 계란 난각의 적색도(a)를 조사 비교한 결과 하기 표 19에 나타난 바와 같이 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 생산된 계란 난각의 평균 적색도는 17.9이며 정상급수(표준구)에서 생산된 계란 난각의 적색도는 17.5로써 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구의 난각 적색도는 0.4 높으며 이는 약간 붉은빛을 보이는 것으로 본 발명에 따른 가시오가피 포도 발효증류주에 함유되어 있는 기능성 성분(엘류테로사이드B 및 엘류테로사이드 E)의 영향으로 판단된다.

조사일	구분	처리구별 난각색도(a값 : 적색도)				노지방사
		표준구	시험구1	대비구	시험구2
05-10-18	평균 표준편차	17.7 1.9	17.2 2.6	17.0 1.3	17.1 1.5
05-10-19	평균 표준편차	17.4 1.4	17.8 2.1	15.8 2.5	17.2 1.7	17.0
05-10-20	평균 표준편차	17.2 2.0	19.8 0.8	16.9 2.3	16.4 2.2	12.3 5.2
05-10-21	평균 표준편차	16.1 2.2	17.6 2.2	16.3 2.2	18.3 2.3	12.6 5.0
05-10-22	평균 표준편차	16.0 1.6	17.3 2.6	16.0 2.3	16.4 2.0	14.5 1.5
05-10-23	평균 표준편차	18.3 1.8	17.2 2.6	17.1 2.3	17.4 2.0	13.3 4.2
05-10-24	평균 표준편차	17.5 1.9	17.5 1.6	16.8 2.1	17.9 1.7	14.3 2.4
05-10-25	평균 표준편차	15.9 4.4	16.6 2.2	16.3 1.4	16.9 2.5	12.5 2.6
05-10-26	평균 표준편차	16.8 2.8	17.8 2.2	17.7 3.0	17.1 1.5	13.5 3.0
05-10-27	평균 표준편차	18.9 2.6	17.4 3.0	17.9 2.1	16.9 2.1	16.0 1.8
05-10-28	평균 표준편차	19.0 1.9	20.7 1.6	18.5 2.0	19.8 2.4	16.8 1.9
05-10-29	평균 표준편차	18.5 1.7	18.2 1.7	17.3 2.1	18.0 1.5	14.2 4.3
합계	평균 표준편차 최소치 최대치	17.5 2.5 4.5 22.8	17.9 2.4 10.9 23.0	17.0 2.3 10.3 21.9	17.5 2.1 12.3 23.1	1402 3.0 8.6 18.6

실시예 2(발효증류주 색도)

실시예 2-1. 가시오가피 근경 우드칩을 첨가율 3.3%에서 6.7%로 증가할수록 명도는 낮고, 적색도와 황색도는 증가하며, 특히 황색도가 현저히 증가됨

실시예 2-2. 가시오가피 우드칩 가공처리는 세척 증자 건조 및 덕음 1회처리가 세척 건조처리와 세척 증자 건조처리에 비하여 적색도와 황색도가 현저히 증가함

실시예 3(우드칩의 유효성분 동정 및 정량분석)

실시예 3-1. 가시오가피 줄기 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 B 함량은 세척건조 처리에서 54.6㎍/㎖, 세척증자건조 처리구에서 46.3㎍/㎖, 세척증자건조덕음1회 58.5㎍/㎖로써 세척증자건조덕음1회 처리에서 세척건조 처리 대비 엘류테로사이드 B 함량은 7.1% 증가되었으며, 엘류테로사이드 E 함량은 세척건조 처리에서 65.1㎍/㎖, 세척증자건조 처리구에서 53.1㎍/㎖, 세척증자건조덕음1회 70.3㎍/㎖로써 세척증자건조덕음1회 처리에서 세척건조 처리 대비 엘류테로사이드 E 함량은 8.0% 증가되었음

실시예 3-2. 가시오가피 근경 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 B 함량은 세척덕음1회 처리에서 62.6㎍/㎖, 세척덕음2회 58.0㎍/㎖, 세척증자덕음1회 44.4㎍/㎖, 세척증자덕음2회 56.9㎍/㎖, 세척증자건조덕음1회 47.5㎍/㎖, 세척증자건조덕음2회 42.9㎍/㎖로써 엘류테로사이드 B 함량은 세척덕음1회 처리에서 가장 높았음

실시예 3-3. 가시오가피 근경 우드칩 처리방법별 엘류테로사이드 E 함량은 세척덕음1회 처리에서 82.2㎍/㎖, 세척덕음2회 73.5㎍/㎖, 세척증자덕음1회 57.7㎍/㎖, 세척증자덕음2회 80.7㎍/㎖, 세척증자건조덕음1회 65.1㎍/㎖, 세척증자건조덕음2회 53.2㎍/㎖로써 엘류테로사이드 E 함량은 세척덕음1회 처리에서 가장 높았음

실시예 3-4. HPLC 크로마토그래프에서 참나무 수종별 분획된 유효성분의 머무름 시간은 물참나무 27.60, 굴피나무 26.04, 강참나무 28.20이나, 떡갈나무와 유럽산 참나무에서 분획된 유효성분의 머무름 시간은 동일한 머무름 시간인 27.47분(RT)에서 피크를 나타냄으로 동일물질로 확인되었다.

실시예 3-5. 떡갈나무 덕음1회 우드칩에서 분획된 유효물질의 스펙트럼은 제1의 흡광도(λmax 1)는 362.83, 제2의 흡광도(λmax 2)는 252.83 나노메타(㎚)에서 최대흡광도를 나타내는 것이 유럽산 참나무 우드칩의 유효성분에 대한 스펙트럼과 동일한 스펙트럼으로 관찰됨에 따라 동일물질로 확인되었다.

실시예 3-6. 유럽산 참나무에서 분획된 유효물질의 분자량은 303.44이고, 떡갈나무 1회 덕음처리에서 분획된 유효물질의 분자량은 303.42이며, 떡갈나무 2회 덕음처리에서 분획된 유효물질의 분자량은 303.41인 결과를 나타내는 것으로 미루어 동일한 분자량을 가진 물질로 확인되며, 이는 플라보놀(Flavonol) 계열의 분자량 303으로 알려진 쿼서틴디하이드레이트(Quercetin dihydrate ; 분자량 302.24) 어글리콘의 유사물질로 추정된다.

실시예 3-7. 참나무 우드칩 유효성분의 적분값은 덕음처리 1회에서 2회로 증가됨에 따라 물참나무, 강참나무, 굴피나무의 유효성분의 적분값은 감소되나, 떡갈나무는 덕음처리 1회에 비하여 2회처리 시 유효성분의 적분값은 4배 이상 증가되었다

실시예 3-8. 떡갈나무 우드칩의 가공처리별 유효성분의 적분값은 자외선(UV) 254㎚ 파장에서는 2회덕음처리+안면에서 최대값을 보였으며, 365㎚파장에서는 증자1회덕음처리+겉면에서 최대값을 나타내었으나 2회덕음 처리가 실용화 가능성이 높았음

실시예 4(포도 가시오가피 발효증류주의 동물실험 효과분석)

실시예 4-1. 산란계 닭의 초산일령은 정상급수(표준구)에서 160일이며 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 초산일령은 153일로써 정상급수 급여구(표준구)에 비하여 7일 빨랐으며 공시축 전체 개체수의 50%가 알을 낳는 시기를 산란기로 규정하였을때 산란기 이전의 초기 산란일수는 정상급수(표준구)에서 12일이며, 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서는 20일로써 초기산란일수도 8일 증가하였음

실시예 4-2. 산란기 이전의 초기 산란수 및 산란중을 조사한 결과 가시오가피 포도 발효증류주를 급여구(시험구 1)에서 산란수는 61개, 산란중은 3,193.2g으로 정상급수(표준구)에서는 산란수 36개, 산란중은 1,906.1g으로 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구에서 산란수는 69%, 산란중은 68% 증가하였음

실시예 4-3. 산란기(공시축 개체수의 50% 이상 알을 낳는 시기) 이후의 일별 산란율을 비교한 결과 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 산란율은 81.5%이며 정상급수(표준구)에서 산란율은 69.0%로써 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구에서 산란율은 12.5% 증가하였음

실시예 4-4. 산란기 이후 가시오가피 포도 발효증류주 급여구(시험구 1)에서 총 산란수는 160개이며 정상급수(표준구)에서 총 산란수는 116개로써 정상급수에 비하여 20.7% 증가하였고, 총 산란중은 발효증류주 급여구에서 7,779g이며 정상급수에서 는 6,517g로써 정상급수에 비하여 19.4% 증가하는 결과를 보였음

실시예 4-5. 가시오가피 포도 발효증류주 급여구에서 생산된 계란 난각의 평균 적색도는 17.9이며 정상급수 계란의 적색도는 17.5로써 정상급수에 비하여 가시오가피 포도 발효증류주를 급여한 처리구의 난각 적색도는 0.4 높음.

따라서 본 발명은 가시오가피 생과와 포도를 혼합발효시 경제성이 있는 보당수준, 가시오가피 생과 토착 미생물의 효과적인 살균방법, 가시오가피 생과 발효시 친화성이 있는 효모 유형 및 접종수준을 구명하여 알코올 생산성을 증대시키고, 오크통 대체방안으로 가시오가피 및 참나무 우드칩의 처리방법 개선으로 지표물질의 증폭효과를 가져오는 처리방법 구명과 아울러 지표물질로서 엘류테로사이드와 쿼서틴어글리콘 을 포함하며, 맛, 색도 및 향이 우수한 포도 발효증류주의 제조방법을 제공하는 효과가 있다.

아울러 포도 가시오가피 발효증류주을 산란계 닭에 급여한 결과 초산일령이 빨라지고, 산란수와 산란중이 증대되는 효과 등 가시오가피 지표성분에 의한 효과를 나타내었다.

이상에서 본 발명은 기재된 구체예에 대해서만 상세히 설명되었지만 본 발명의 기술사상 범위 내에서 다양한 변형 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속함은 당연한 것이다.

Claims (5)

1. 포도 가시오갈피 발효증류주 제조에 있어서,

   (1) 가시오가피의 생과(생동과) 2 내지 10중량% 및 포도 90 내지 98중량%를 혼합하여 발효원료를 준비하는 발효원료 준비단계;

   (2) 상기 발효원료에 효모를 접종시키고, 초기 온도를 15 내지 16℃로 유지하고, 매일 2 내지 3회씩 저어주면서 발효개시 후, 10 내지 25일 동안 발효시키는 1차발효단계;

   (3) 상기 1차발효단계에서 수득되는 발효물을 통상의 진공농축기에서 발효물 10 내지 30㎏을 투입하고, 55 내지 74℃ 및 진공도 0.06 내지 0.08Torr에서 증류하는 증류단계;

   (4) 상기 증류단계에서 수득된 증류주에 우드칩들을 혼합하되, 상기 증류주 1ℓ에 대하여 20 내지 100g을 혼합하고, 12 내지 16℃의 온도에서 100일 내지 365일 동안 정치시켜 숙성시키는 숙성단계; 및

   (5) 우드칩 첨가 숙성과정이 종료된 포도가시오가피 발효증류주를 착즙하여 제성, 여과, 병입 등의 후처리를 수행하는 후처리단계;

   들을 포함하여 이루어짐을 특징으로 하는 가시오가피를 함유하는 포도발효증류주의 제조방법.
2. 제 1 항에 있어서,

   상기 가시오가피 열매가 수확한 그대로인 생과 또는 급속냉동시킨 생동과임을 특징으로 하는 가시오가피를 함유하는 포도주의 제조방법.
3. 제 1 항에 있어서,

   상기 포도과즙의 원료인 포도의 품종이 MBA임을 특징으로 하는 가시오가피를 함유하는 포도주의 제조방법.
4. 제 1 항에 있어서,

   상기 우드칩들이 1 내지 3회 덖음처리된 가시오가피우드칩 또는 참나무우드칩임을 특징으로 하는 가시오가피를 함유하는 포도주의 제조방법.
5. 제 1 항에 있어서,

   상기 우드칩들이 1회 덖음처리된 가시오가피우드칩 또는 참나무우드칩임을 특징으로 하는 가시오가피를 함유하는 포도주의 제조방법.

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