KR100665916B1

KR100665916B1 - 저분자량 다당류 및 그 염의 제조방법

Info

Publication number: KR100665916B1
Application number: KR1020050055478A
Authority: KR
Inventors: 김기호; 김기수; 김영희; 김진국; 최봉락; 유희종; 조남석
Original assignee: 주식회사 바이오랜드
Priority date: 2005-06-27
Filing date: 2005-06-27
Publication date: 2007-01-10
Also published as: EP1896511B1; WO2007001140A1; EP1896511A4; EP1896511A1; KR20070000057A

Abstract

본 발명은 의약품, 화장품, 의료용 소재, 식품첨가제 등에 광범위하게 이용될 수 있는, 평균분자량 500 ~ 10,000을 가지는 저분자량 히알루론산 및 그 염의 제조방법에 관한 것으로, 고분자량 히알루론산을 수용액 또는 혼합용매 중에서 이온교환 수지를 사용하여 가수분해 함으로써 부생성물의 생성을 방지하고, 보다 간편한 반응과 조작 및 저렴한 생산단가로서 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 제조하는 방법을 제공할 수 있다.

히알루론산, 이온교환수지, 저분자량

Description

저분자량 다당류 및 그 염의 제조방법{A method for preparing low molecular weight polysaccharide and the salt thereof}

도 1은 실시예 1에서 제조한 저분자량화 올리고히알루론산을 GPC분석하여 크로마토그램으로 나타낸 도이며,

도 2는 실시예 1에서 제조한 저분자량화 올리고히알루론산을 ¹³C-NMR 스펙트럼으로 나타낸 도이다.

본 발명은 고분자량의 히알루론산을 수용액 또는 혼합용매 상에서 이온교환수지로 가수분해하여 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 효율적으로 제조하는 방법에 관한 것이다.

히알루론산(hyaluronic acid)은 고점도성, 보습성, 생체 적합성 등의 특징을 지닌 수용성 다당류의 생체 고분자 물질로서 콜라겐 및 엘라스틴과 함께 피부 삼대 요소 중의 하나이다. 히알루론산은 β-D-글루쿠론산 (glucuronic acid)과 β-D-N-아세틸글루코사민이 상호베타 결합으로 이뤄진 직쇄상의 긴 고분자 물질로서, 그 분자량은 기원, 제조 및 정제방법에 따라 0.1× 10⁶ ~ 10× 10⁶ 달톤으로 매우 다양하다. 수용액상에서 점성, 탄성 및 보습성을 가지며, 이러한 성질은 히알루론산의 분자량과 농도에 좌우된다. 뮤코 다당류 중에서도 비교적 입수가 용이하며, 특이한 물리화학적 및 생리적 성질을 지니고 있어, 그 자체 또는 그 유도체가 여러 분야에 광범위하게 사용되고 있다. 히알루론산의 주요 용도로는 안과 수술용, 경주용 말의 무릎 관절 치료용, 화장품의 보습제에의 사용(미국 특허 제4,141,973호 및 미국 특허 제4,517,295호), 이식편대숙주병, 이식편거부증, T세포를 갖는 특정 자가면역질환 치료에의 사용(US96155414) 및 관절질환치료제(WO9959603)등에 사용되고 있다. 그러나 피부 등에 대한 투과성이 요구되는 외용제 등의 용도에서는, 상기와 같은 거대분자인 히알루론산 또는 그 염의 사용은 제약을 받게 된다.

저분자량 히알루론산은 종래의 분자량의 것에 비해 고농도로 사용이 가능하고, 끈적임이 없는 등의 특성을 가짐이 알려졌고, 당의 중합도가 10~14당의 저분자량 히알루론산과 그의 염이 혈관형성촉진작용이 있는 것이 보고 되어있다. 이런 배경에서 저분자량의 히알루론산 및 그의 염, 특히 평균분자량 10,000 이하의 올리고히알루론산의 개발에 관심이 모아지고 있다.

고분자량 히알루론산의 저분자량화 방법으로는 여러 가지 방법들이 공지 되어 있는데, 고온가열 및 초음파를 이용하는 방법(Motohashi et al., Journal of Chromatography, 435, pp335-342, 1988, Bothner et al., Int. J. Biol. Macrmol., p10, 1998), 산 또는 염기 촉매에 의한 방법(특개소63-57602, 특개평1-266102), 차아염소산등의 염소계 산화제를 이용한 방법 (특개평2-245193), 과황산암모늄등의 분해촉매를 이용한 방법(등록특허10-0369517) 및 히알루로니다아제 효소를 사용한 저분자량 히알루론산을 수득하는 방법(A. Sattor et al., J. Invest. Dermato1. 103, pp576-579, 1994, 특개소62-79790, 특개평11-124401) 등이 공지되어 있다.

그러나 상기의 무기산 또는 유기산을 사용한 산성조건에서의 가수분해는 단당이 많이 생성되어 분자량 분포가 넓고, 변환효율이 낮으며, 중화과정에 수반되는 염의 생성으로 인하여, 투석 또는 한외여과 등의 탈염 공정이 추가적으로 필요한 단점 등이 있다. 더욱이 이러한 강한 무기산에 의한 가수분해의 경우 당의 고리열림반응이 진행되어 부생성물이 생성되어진다고 보고 되어져 있어(Y. Tokita & A. Okamoto., polymer degradation and stability. 48, pp269-273, 1995), 완전한 의미에서의 올리고 히알루론산이 생성되어졌다고 볼 수는 없다.

한편, 효소에 의한 분해의 경우에는 사용되는 효소활성 및 반응시간을 선택함으로써 분자량분포가 좁은 올리고 히알루론산을 얻을 수 있다는 장점이 있으나, 효소의 가격이 비싸서 제조단가가 높게 되며, 생성물로부터 분해효소를 제거하는 조작이 어렵고 투석 등을 통한 분리공정이 추가되므로 제조원가가 높아 대량생산에 제약이 따르는 단점이 있다. 게다가 효소 분해법에 의해 수득한 저분자량 히알루론산은 구조상으로 말단기에 이중결합의 형태를 하고 있음이 보고 되어 있어(J. A. Alkrad et al. J. Pharm. Biomed. Anal. 31, pp545-550, 2003), 이 또한 엄밀한 의 미에서 히알루론산과는 구조적 차이가 있다.

이에 따라, 본 발명자들은 고분자량 히알루론산 나트륨으로부터 부생성물의 생성이 적고, 간편한 반응과 조작 및 저렴한 생산단가로서 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 제조하는 개발 필요성을 느끼고 지속적인 연구 개발을 통해 본 발명을 완성하였다. 본원 발명의 경우, 고분자량의 히알루론산을 이온교환수지를 촉매로 사용하여 저분자량 히알루론산으로 가수분해시 반응 진행이 불균일상(heterogeneous phase)에서 진행되어짐에 따라 히알루론산 분자의 변형을 억제시키고, 따라서 상기의 발표되어진 무기산과 염기를 사용한 가수분해 또는 효소를 이용한 가수분해 방법과 달리 부생성물의 생성을 방지할 수 있으며, 또한 불균일상 촉매를 이용함으로서 반응종료 후 반응에 사용된 촉매를 여과공정만으로 손쉽게 분리 및 회수한 후 중화과정을 거쳐, 간단하고 저렴하게 저분자량의 히알루론산 및 그 염을 제조할 수 있다. 또한 회수된 이온교환수지 촉매를 재사용함으로서 추가적인 생산원가 절감을 이룰 수 있다.

본 발명에서는 고분자량의 히알루론산을 이온교환수지를 촉매로 사용하여 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적에 따라, 본 발명은 고분자량의 히알루론산을 수용액 또는 혼합용매 상에서 이온교환수지로 가수분해함을 특징으로 하는 저분자량 히알루론산 및 그 염을 제조하는 방법을 제공한다.

본원에서 정의되는 목적하는 저분자량 히알루론산 및 그 염은 구체적으로는 하기 일반식 (I)으로 표기되는 화합물 및 그 염을 포함한다.

(Ⅰ)

상기 식에서 n은 1내지 120의 정수이고;

R은 수소원자 또는 약학적으로 허용 가능한 염이다.

본 발명의 바람직한 화합물군으로는 n이 1내지 80의 정수, 보다 바람직하게는 n이 1내지 25의 정수인 화합물군들을 포함하고, 상기 R치환기는 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

상기의 일반식 (Ⅰ)의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 일반식 (Ⅰ)의 화합물에 존재할 수 있는 산성기의 염을 포함하며, 산성기의 염으 로는 리튬, 나트륨, 칼륨 등의 알카리 금속류염, 마그네슘, 칼슘 등의 알카리토 금속류염, 암모니아 또는 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아닐린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민, 이소프로필아민 등의 유기아민류와의 염 등을 들 수 있다.

바람직하게는 나트륨, 칼륨, 칼슘과의 염 또는 암모니아, 생리학적으로 허용 가능한 아민과의 염 등을 들 수 있으며, 이들 염들은 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

본 발명의 상기 화합물의 분자량은 500 내지 50,000의 저분자량 히알루론산 및 그의 염, 바람직하게는 500 내지 30,000의 저분자량 히알루론산 및 그의 염, 보다 바람직하게는 500 내지 10,000의 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 포함한다.

본 발명의 상기 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 제조하는 구체적인 제조공정은 하기와 같다.

예를 들어, 고분자량의 히알루론산 나트륨염의 중량대비 50 내지 150 배, 바람직하게는 80 내지 120배, 보다 바람직하게는 90 내지 110배 중량의 정제수 또는 저급알콜과의 혼합용매에 가하여 용해시키는 제 1단계;

이 용해물에 고분자량 히알루론산 나트륨염 중량의 0.01 내지 50%, 바람직하게는 1 내지 20%의 이온교환수지를 가한 후, 20 내지 130℃, 바람직하게는 50 내지 100℃의 온도에서 24 내지 120시간, 바람직하게는 48 내지 72시간 동안 교반하는 반응시키는 제 2단계;

제 2단계의 반응 종결 후, 이온교환수지를 여과하여 제거하고 탄산수소나트륨을 사용하여 중화시킨 후, 반응액을 동결 건조하는 제 3단계를 포함하는 일련의 연속 공정을 통하여 저분자량 히알루론산 나트륨 및 그의 염을 제조할 수 있다.

본 발명의 상기 제 1단계에서 반응 용매는 정제수 단독 또는 저급알콜과의 혼합용매를 사용할 수 있는데, 혼합 비율로는 1내지 50%의 사용이 가능하고, 바람직하게는 1내지 5%의 사용이 권장된다. 사용할 수 있는 저급알콜로는 메탄올, 에탄올, 부탄올, 글리세롤, 1,3-부탄디올, 1,2-프로판디올, 이소프로판올, 이소부탄올, 에틸렌글리콜 등이 있다.

본 발명의 상기 제 2단계에서 사용되는 이온교환수지로는 양이온 교환수지, 음이온 교환수지 또는 이들의 조합을 사용 가능하며, 양이온교환수지로는 술폰기를 교환기로 하는 저가교도(low crosslinking)에서 고가교도(high crosslinking)까지의 겔(gel)타입과 다공성(porous) 타입의 스티렌계 강산성 양이온 교환수지, 술폰기와 페놀기를 교환기로 하는 강산성 양이온교환수지, 카복실산을 교환기(exchanging group)로 하는 메타크릴계 다공성 타입의 약산성 양이온 교환수지, 카복실산을 교환기로 하는 아크릴계 고다공성(high porous) 타입의 약산성 양이온교환수지, 이미노아세틱산을 교환기로 하는 약산성 양이온교환수지가 사용가능하며, 음이온교환수지로는 트리에틸암모늄을 교환기로 하는 겔타입과 다공성타입의 스티렌계 강염기성 음이온 교환수지와 디메틸 에탄올 암모늄을 교환기로 하는 겔타입과 다공성타입의 스티렌계 강염기성 음이온교환수지, 벤질디메틸(2-하이드록시에틸) 암모늄을 교환기로 하는 강염기성 음이온교환수지, 트리메틸암모늄을 교환기로 하 는 아크릴계 약염기성 음이온교환수지, 3급아민을 교환기로 하는 스티렌계 약염기성 음이온 교환수지, 트리메틸암모늄을 교환기로 하는 스티렌계 약염기성 음이온교환수지, 벤질트리알킬암모늄을 교환기로 하는 스티렌계 약염기성 음이온교환수지 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 상기 제 3단계에서 사용되는 반응액을 중화시키는 중화제로서는 소듐 메톡사이드, 소듐 에톡사이드, 칼륨 3차 부틸레이트, 수산화나트륨, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 수산화칼슘, 수산화칼륨, 수산화리튬, 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아니린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민, 이소프로필아민 등이 사용될 수 있다.

상기한 본 발명에서 제공되는 저분자량 히알루론산 및 그 염을 제조하는 방법은 일반적으로 행하여지는 산에 의한 화학적 가수분해 또는 효소분해법에 의해 가수분해 시에 일어나는 불순물 생성 등의 문제점과 높은 생산원가, 대량생산의 어려운 점을 극복하고 값이 싸고 대량생산이 용이하고 목표하는 평균분자량 500 ~ 50,000의 저분자량 히알루론산 및 그의 염을 제조할 수 있다.

부가적으로, 본 발명의 제조방법은 무기산에 의해 히알루론산 구성당의 고리가 열리거나, 효소분해법에서와 같이 당고리에 이중결합이 생성되는 부반응이 없는 저분자량 히알루론산임을 확인할 수 있다.

본 발명의 제조방법으로부터 얻은 평균분자량 500 ~ 50,000을 갖는 저분자량 히알루론산 및 그 염은 의약품, 화장품, 의료용 소재, 식품첨가제 등에 광범위하게 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 고분자량 히알루론산의 저분자량화

1-1. 저분자량화물(1)

고분자량 히알루론산 나트륨염(바이오랜드사) 10 g을 1,000 g의 정제수에 가하여 용해시킨 후, 강산성양이온교환수지(Amberlite IR120, 알드리치사) 80 g을 가하고 80-90℃의 온도에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후 이온교환수지를 여과하여 제거하고 1 N 탄산수소나트륨을 사용하여 중화시켰다. 반응액을 동결 건조하여 저분자량히알루론산 나트륨염을 수득하였으며, 수득량은 표 1에 나타내었다.

1-2. 저분자량화물(2) 내지 (22)

실시예 1-1의 이온교환수지의 종류와 사용량, 반응시간, 용매조성을 달리 하면서, 실시예 1-1의 공정과 동일한 방법으로 저분자량 히알루론산 나트륨염을 수득하였고, 그 결과는 표 1과 같다.

	이온교환수지 종류	이온교환 수지양(g)	반응시간(hr)	용매조성	수득량(g)
저분자량화물 1	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	80	48	물	9.2
저분자량화물 2	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	48	물	9.1
저분자량화물 3	약산성양이온교환수지 (Amberlite IRP64, 알드리치사)	100	48	물	9.5
저분자량화물 4	약산성양이온교환수지 (Amberlite IRP64, 알드리치사)	200	48	물	9.0
저분자량화물 5	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	80	72	물	8.8
저분자량화물 6	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	72	물	8.9
저분자량화물 7	약산성양이온교환수지 (Amberlite IRP64, 알드리치사)	100	72	물	9.2
저분자량화물 8	약산성양이온교환수지 (Amberlite IRP64, 알드리치사)	200	72	물	9.2
저분자량화물 9	강염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA400, 알드리치사)	120	48	물	9.1
저분자량화물 10	강염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA400, 알드리치사)	200	48	물	8.8
저분자량화물 11	약염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA67, 알드리치사)	120	48	물	9.3
저분자량화물 12	약염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA67, 알드리치사)	200	48	물	9.0
저분자량화물 13	강염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA400, 알드리치사)	120	72	물	8.7
저분자량화물 14	강염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA400, 알드리치사)	200	72	물	9.4
저분자량화물 15	약염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA67, 알드리치사)	120	72	물	9.1
저분자량화물 16	약염기성 음이온교환수지 (Amberlite IRA67, 알드리치사)	200	72	물	9.3
저분자량화물 17	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	96	물	9.0
저분자량화물 18	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	120	물	8.8
저분자량화물 19	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	72	5% 에탄올 수용액	8.5
저분자량화물 20	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	72	5% 메탄올 수용액	8.3
저분자량화물 21	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	72	20% 에탄올 수용액	7.4
저분자량화물 22	강산성양이온교환수지 (Amberlite IR120, 알드리치사)	160	72	40% 에탄올 수용액	7.2

실험예 1. GPC에 의한 절대 분자량의 측정

상기 실시예 1에서 수득한 올리고히알루론산나트륨염 저분자량화물(1) 내지 (22)의 평균분자량을 GPC로 분석하였다. 사용한 컬럼은 울트라하이드로겔(UltrahydrogelTM)120. 250 (7.8× 300 mm, WATERS)을 사용하였고, 용출액은 0.1M 질산나트륨용액을 사용하였으며 유속은 0.8 ㎖/분으로 하였으며, 그 결과는 표 2 에 나타내었고, 그 크로마토그램은 도 1에 나타내었다.

	무게평균분자량 (Mw)	수평균분자량 (Mn)	PDI^*
저분자량화물 1	5,710	3,270	1.746
저분자량화물 2	5,123	3,582	1.430
저분자량화물 3	15,204	10,856	1.401
저분자량화물 4	12,534	9,254	1.354
저분자량화물 5	4,234	2,948	1.436
저분자량화물 6	3,823	2,623	1.457
저분자량화물 7	9,872	6,562	1.504
저분자량화물 8	8,923	6,189	1.442
저분자량화물 9	15,845	9.857	1.607
저분자량화물 10	12,856	8.102	1.587
저분자량화물 11	18,023	9,758	1.847
저분자량화물 12	16,654	11,025	1.511
저분자량화물 13	13,007	7,634	1.704
저분자량화물 14	9,924	5,997	1.655
저분자량화물 15	17,752	9.241	1.921
저분자량화물 16	15,546	8.534	1.822
저분자량화물 17	2,062	1,246	1.654
저분자량화물 18	1,409	924	1.525
저분자량화물 19	18,599	9,865	1.885
저분자량화물 20	20,032	12,252	1.635
저분자량화물 21	29,133	17,476	1.667
저분자량화물 22	30,409	19,720	1.542

^* PDI: 다분산성지수(poly dispersity index)

실험예 2. ¹³ C-NMR 분석

상기 실시예 1에서 수득한 올리고 히알루론산 나트륨염 저분자량화물(1) 내지 (22)의 구조를 ¹³C-NMR (Varian Mercury plus 400 spectrometer)로 분석하였다. 용매로는 D₂O(Deuterium oxide 99.9 atom %D, 알드리치사)를 사용하였으며, 그 스펙트럼은 도 2에 나타낸 바와 같이 히알루론산 구성당의 고리가 열리거나 당고리에 이중결합이 생성되는 부반응이 없는 저분자량 히알루론산임을 확인할 수 있었다.

본 발명의 저분자량 히알루론산 및 그 염을 제조하는 방법은 일반적으로 행하여지는 산에 의한 화학적 가수분해 또는 효소분해법에 의해 가수분해 시에 일어나는 불순물 생성 등의 문제점과 높은 생산원가, 대량생산의 어려운 점을 극복하고, 값이 싸며 대량생산이 쉬운 이온교환수지를 이용하여, 종래의 히알루론산 구성당의 고리가 열리거나 효소분해법에서와 같이 당고리에 이중결합이 생성되는 부반응이 없는 의약품, 화장품, 의료용 소재 및 식품첨가제 등에 사용 가능한 저분자량의 히알루론산 및 그 염을 제조할 수 있다.

Claims

삭제
중량평균분자량 50만 내지 200만의 고분자량의 히알루론산을 중량대비 50 내지 150 배 중량의 정제수 단독 또는 메탄올, 에탄올, 부탄올, 글리세롤, 1,3-부탄디올, 1,2-프로판디올, 이소프로판올, 이소부탄올 및 에틸렌글리콜로부터 선택된 저급 알콜과의 혼합용매에 가하여 용해시키는 제 1단계;

이 용해물에 상기 고분자량 히알루론산 중량의 1내지 20 중량배의 이온교환수지를 가한 후, 70 내지 100℃에서 24 내지 120시간 동안 교반하여 반응시키는 제 2단계;

제 2단계의 반응 종결 후, 이온교환수지를 여과하여 제거하고 탄산수소나트륨을 사용하여 중화시킨 후, 반응액을 동결 건조하는 제 3단계를 포함하는 일련의 연속 공정을 포함하는 중량평균분자량 500 내지 50,000의 저분자량 히알루론산 및 그의 염의 제조방법.
제2항에 있어서, 상기 저분자량 히알루론산 및 그 염은 하기 일반식 (I)으로 표기되는 화합물 및 그 염인 제조방법:

(Ⅰ)

상기 식에서 n은 1내지 25의 정수이고,

R은 수소원자 또는 약학적으로 허용 가능한 염이다.
삭제
삭제
제2항에 있어서, 상기 중량평균분자량 500 내지 50,000의 저분자량 히알루론산의 염은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘의 금속염 또는 암모니아 또는 에틸렌디아민, 사이클로헥실아민, 아닐린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸아민, 프로필아민, 아릴아민, 디에틸아민, 부틸아민, 이소부틸아민, 트리에틸아민, 펜틸아민, t-부틸아민 또는 이소프로필아민의 염기성 염임을 특징으로 하는 제조방법.
삭제
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제 2항에 있어서, 상기 제 2단계에서 사용되는 이온교환수지로는 양이온 교환수지, 음이온 교환수지 또는 이들의 조합을 사용함을 특징으로 하는 제조방법.
제 9항에 있어서, 상기 양이온교환수지로는 술폰기를 교환기로 하는 저가교도(low crosslinking)에서 고가교도까지의 겔(gel)타입 또는 다공성(porous) 타입의 스티렌계 강산성 양이온 교환수지, 술폰기와 페놀기를 교환기로 하는 강산성 양이온교환수지, 카복실산을 교환기 (exchanging group)로 하는 메타크릴계 다공성 타입의 약산성 양이온 교환수지, 카복실산을 교환기로 하는 아크릴계 고다공성(high porous) 타입의 약산성 양이온교환수지, 이미노아세틱산을 교환기로 하는 약산성 양이온교환수지임을 특징으로 하는 제조방법.
제 9항에 있어서, 상기 음이온교환수지로는 트리에틸암모늄을 교환기로 하는 겔타입 또는 다공성타입의 스티렌계 강염기성 음이온 교환수지, 디메틸 에탄올 암모늄을 교환기로 하는 겔타입 또는 다공성타입의 스티렌계 강염기성 음이온교환수지, 벤질디메틸(2-하이드록시에틸) 암모늄을 교환기로 하는 강염기성 음이온교환수지, 트리메틸암모늄을 교환기로 하는 아크릴계 약염기성 음이온교환수지, 3급 아민을 교환기로 하는 스티렌계 약염기성 음이온 교환수지, 트리메틸암모늄을 교환기로 하는 스티렌계 약염기성 음이온교환수지, 또는 벤질트리알킬암모늄을 교환기로 하는 스티렌계 약염기성 음이온교환수지임을 특징으로 하는 제조방법.
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제 2항에 있어서, 상기 제 1단계에서 저급알콜과의 혼합용매에 있어 혼합 비율은 중량기준으로 1 내지 5%임을 특징으로 하는 제조방법.
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