KR100354048B1 - 백혈구분류방법 - Google Patents

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Abstract

1. 청구범위에 기재된 발명이속한 기술분야
본발명은 백혈구분류방법에 관한것이다.
2. 발명이 해결하려고하는 기술적과제
본발명은 값싸고 간단한 구성의 장치로 백혈구를 적어도 5분류하는 방법을 제공하는 것을 목적으로하고있다.
3. 발명의 해결방법의요지
(i), (a) 적혈구를 용해시킬수있으나 백혈구의 세포막의 일부에 손상을 주는데 충분한 양의 적어도 1종류의 이온성계면활성제와, (b) 백혈구내의 양이온하전성분과 결합해서 백혈구간에 형태적차이를 부여하는데 충분한 양의 적어도 1종류의 음이온기를 갖는 유기화합물과, (c) 비이온계면활성제와, (d) pH조정용의 완충제로된 백혈구 4분류용시약을 전체혈액시료의 일부에 첨가하고, 세포의 크기정보와 형태정보를 측정해서 백혈구를 적어도 림프구, 단 구, 및 호산구에 각각 대응하는 3집단과 호중구 및 호염기구에 대응하는 1집단과의 4집단으로 분류계수하고,
(ii) 호염기구측정용시약을 전체혈액시료의 다른 일부에 첨가하여 적어도 세포의 크기정보를 측정해서 호염기구를 분류계수하고,
(iii) 각각 얻어진 계수치에 기초해서 백혈구를 적어도 5분류하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
4. 발명의 중요한 용도
본발명은 다른 시약에의해 처리한 백혈구를 따로따로 측정하므로서 백혈구를 5분류하는 백혈구 분류방법에 관한것이다.

Description

백혈구 분류방법
본발명은 백혈구분류방법에 관한것이며 보다 상세하게는 다른 시약에의해 처리한 백혈구를 따로따로 측정하므로서 백혈구를 5분류하는 백혈구 분류방법에 관한것이다.
지금까지에 백혈구분류를 행하는 많은 장치, 방법이 발표되어왔다.
이들 장치에서는 혈액을 용혈제나 염색액등으로 적당히 처리하여 물리적 및/또는 전기적특성, 혹은 광학적특성에 기초하여 분류계수를 행하고있었다.
또 범용적으로 사용되고있는 플로우사이트미터라도 백혈구분류가 가능한것은 잘 알려져있다.
예를들면 적혈구를 용해시켜 백혈구를 형광염료를 사용해서 염색해서 염색된 백혈구로부터의 형광을 검출하므로서 백혈구를 분류하는방법이있다.
또 백혈구의 서브타이프중 호염기구를 검출하여 다른 백혈구의 서브타이프를 별도의 검출계통으로 측정하여 각각의 계수치를 기초로해서 백혈구를 5분류하는방법이 알려져있다.
상기와같이 백혈구를 5분류할수있는 종래의 장치는 고가이며 또 대형의 장치이다.
특히 종래의 플로우사이트미터는 광원이나 광전자증배관(PMT)이 고가이며 또 광원으로서 아르곤레이저를 사용하는것때문에 유지보수비용이 필요함과 동시에 광축조정등도 항상 필요하게된다.
또 상기한 백혈구를 5분류하는 방법에서는 2가지의 검출계통이 필요하며 장치의 구성이 복잡하게된다.
예를들면 종래의 2가지 각도의 전방산란광을 검출하는경우에 사용되어온 빔스프리터와 핀홀의 조합에의한 검출장치에 있어서는 검출되는 2가지의 각도의 제한은 핀홀의 형상에 의존하고있었다.
본발명은 상기한것을 감안하여 이루어진것으로서 값싸고 간단한 구성의 장치로 백혈구를 적어도 5분류하는 방법을 제공하는것을 목적으로하고있다.
본발명의 방법에의하면
(i) (a) 적혈구를 용해시킬수있으나 백혈구의 세포막의 일부에 손상을 주는데 충분한 양의 적어도 1종류의 이온성계면활성제와, (b) 백혈구내의 양이온하전성분과 결합해서 백혈구간에 형태적차이를 부여하는데 충분한 양의 적어도 1종류의 음이온기를 갖는 유기화합물과, (c) 비이온계면활성제와, (d) pH조정용의 완충제로된 백혈구 4분류용시약을 전체혈액시료의 일부에 첨가하고 세포의 크기정보와 형태정보를 측정해서 백혈구를 적어도 림프구, 단구, 및 호산구에 각각 대응하는 3집단과 호중구 및 호염기구에 대응하는 1집단과의 4집단으로 분류계수하고,
(ii) 호염기구 측정용시약을 전체혈액시료의 다른 일부에 첨가하여 적어도 세포의 크기정보를 측정해서 호염기구를 분류계수하고,
(iii) 각각 얻어진 계수치에 기초해서 백혈구를 적어도 5분류하는 백혈구 분류방법이 제공된다.
본발명의 백혈구분류방법의 공정(i)에 있어서 사용되는 백혈구4분류용시약중, (a)의 이온성계면활성제는 양이온성계면활성제 및 양성계면활성제의 적어도 1종을 함유한다.
양이온성 계면활성제로서는 4급암모늄염형 계면활성제 및 피리디늄염형 계면활성제가 바람직하다.
4급암모늄염형 및 피리디늄염형 계면활성제는,
[R1및 R1' 는 탄소수 6∼18의 알킬기 또는 알케닐기, R2및 R3는 탄소수 1∼4의 알킬기 또는 알케닐기, R4는 탄소수 1∼4의 알킬기 및 알케닐기, 또는 벤질기, X는 할로겐원자이다.]
로 표시되는 전체탄소수 9∼30의 계면활성제를 들수가있다.
R1및 R1' 의 탄소수 6∼18의 알킬기 또는 알케닐기로서는 헥실기, 옥틸기, 데실기, 도데실기, 테트라데실기, 헥세닐기, 헵테닐기등을 들수가있으나 특히 옥틸기, 데실기, 도데실기등의 곧은사슬의 알킬기가 바람직하다.
또 R2및 R3의 탄소수 1∼4의 알킬기 또는 알케닐기로서는 메틸기, 에틸기, 프로필기, 부틸기, 부테닐기등을 들수가있으나 특히 메틸기, 에틸기, 프로필기등의 탄소수 1∼3의 알킬기가 바람직하다.
또 R4의 탄소수 1∼4의 알킬기 또는 알케닐기로서는 메틸기, 에틸기, 프로필기, 부틸기, 부테닐기등을 들수가있으나 특히 메틸기, 에틸기, 프로필기등의 탄소수 1∼3의 알킬기가 바람직하다.
또 양성계면활성제로서는, 예를들면 하기식,
[R1", R2" 및 R3" 는 상기한 정의 R1, R2, R3과 각각 동일하다.]
로표시되는 전체탄소수 9∼30의 양성계면활성제를 들수가있다.
상기한 (a)의 이온성계면활성제는 적혈구를 용해시킬수가있으나 백혈구의 세포막의 일부에 손상을 주는데 충분한 양으로 사용된다.
구체적으로는 약 30∼5000mg/l, 보다바람직하게는 약 50∼3000mg/l, 다시 또바람직하게는 약 100∼2000mg/l 이지만 계면활성제의 종류에의해 적절히 조정할수가있다.
각 계면활성제의 아주 적당한 사용량을 표1에 나타낸다.
또한 이들 계면활성제는 1종 또는 1종이상을 조합해서 사용할수도있다.
[표1]
결국 이온성계면활성제는 특히 백혈구에 대해서 후술하는 유기화합물을 통과할수 있는정도의 세공을 뚫는 정도의 용혈력이면되고 세포를 나핵화하는 것과같은 강력한 용혈력은 필요하지않다.
따라서 통상 사용되는 양이온성계면활성제(예를들면 LTAC, MTAB, CTAC)가 사용가능하지만 용혈력을 억제하기위해 통상 백혈구를 나핵화하는 때에 사용되는 양보다도 훨씬 적은양이 아주 적당하다.
또 세포막의 일부를 빼내는것만으로 되기때문에 용혈력이 적은 계면활성제도 사용할수있다.
계면활성제의 용혈작용은 소수기의 탄소수와 비례관계에있고 탄소수가 많을수록 용혈력은 강하게 되는것으로부터 용혈력이 낮은 예를들면 DTAB, OTAB 등의 양이온성계면활성제 혹은 양성계면활성제가 아주 적당하게 사용된다.
상기한 백혈구 4분류용시약은 이온성계면활성제 이외에 다시또 백혈구내의 양이온하전성분과 결합해서 백혈구간에 형태적차이를 부여하는 음이온기를 갖는 (b)유기화합물을 함유한다.
즉 소수성기(예를들면 방향족으로된 기, 탄소수 6이상의 탄화수소로된기, 및 탄소수 6이상의 복소환등)와 산성관능기(음이온기: 카르복실기, 술폰산기 등)와를 갖고 또한 수용액중에서 음전하를 대전하고 백혈구와 결합하므로써 백혈구의 형태를 변화시키는 물질을 들수가있다.
그 종류에 대해서는 특히 한정되는것은 아니며 거의 모든 산성색소가 사용가능하다.
또 흡광도나 형광강도를 측정할필요가 없기때문에 색소이외의 유기화합물도 사용가능하다.
산성색소의 예로서는 아미드블랙[Colour Index No. 20470],아리잘린시아닌그린F[CINo.61570], 아시드그린-27[CI No.61580],아시드블루-62[CI No.62045], 다이렉트레드31[CI No. 29100], 브릴리안트설파프라빈[CI No. 56205], 아리잘린옐로우-R[CI No.14030], 아시드블루-129[CI No.62058], 아시드그린25[CI No. 61570], 크로모트로프2R[CI No. 16570], 코마시브릴리안트블루-R250[CI No. 42660], 카루민산[CI No. 75470], 코마시브릴리안트블루-G250[CI No. 42655], 카루모이신B[CI No. 14720], 다이렉트블루-86[CI No. 74180], 에틸레드[2-(4-디에틸아미노페닐아조)벤조익아시드], 파라로사리닌[CI No. 42500], 비오라민R[CI No. 45190], 아시드옐로우-34[CI No. 18890], 아시드오렌지51[CI No. 26550], 브릴리안트크로세인MOO[CI No. 27290], 귀네아그린B[CI No. 42085], 아시드블루-29[CI No. 20460], 로다민B[CI No. 45170], 술포로다민B[CI No. 45100], 리자민그린B[CI No. 44090], 아시드블루-9[CI No. 42090], 퍼스트그린FCF[CI No. 42053], 아조카르민B[CI No. 50090], 아닐린블루[CI No. 42780], 알파스린A[CI No. 42080], 아리잘린바이오렛3R[CI No. 61710], 아시드블루-41[CI No. 62130], 바이브리드스카렛 [CI No. 26905], 엘리스로신B[CI No. 45430], 메틸레드[CI No. 13020], 메틸오렌지[CI No. 13025], 오렌지 I [CI No. 14600] 등의 산성색소로부터 선택된 적어도 1종을 들수가있다.
또 색소이외의 유기화합물의 예로서는 소수성의 관능기와 산성관능기를 갖는 방향족유기산, 탄소수 6이상의 탄화수소 및 복소환을 갖는 산등을 사용할 수있다.
구체적으로는 8-아닐리노-1-나프탈렌술폰산 또는 그염류, 6-(p-톨루이디노)-2-나프탈렌술폰산등을 들수가있다.
이들 유기화합물의 사용량은 사용하는 계면활성제의 종류등에의해 적절히 선택할수가있으나 50∼5000mg/l가 바람직하고 다시 또 100∼3000mg/l가 바람직하다.
또 상기한 백혈구 4분류용시약은 다시또 (c) 비이온계면활성제를 함유한다.
비이온계면활성제로서는 특히 한정되는것은없고 일반적으로 가용화제로서 사용되는 거의 모든 비이온성계면활성제를 사용할수가있다.
구체적으로는 폴리옥시에틸렌글리콜(POE), 폴리프로필렌글리콜(POP), 폴리옥시에틸렌글리콜-폴리프로필렌글리콜(POE-POP)블록혼성중합체를 친수기로서 갖는 비이온성계면활성제가 아주 적당하다.
1종류의 비이온성계면활성제를 사용한경우에는 이온성계면활성제와 상기한 유기화합물과의 결합에 의해 형성되는 불용화물 및 세포구성성분과 이온성계면활성제와의 결합에의해 형성되는 불용화물을 가용화하는 효과와 함께 백혈구도 용해시키는 부작용이 나오는 경우가있다.
이경우에는 복수의 비이온성계면활성제, 예를들면 친수기의 부가중합몰수가 다른 비이온성계면활성제를 조합하는것이 바람직하다.
혹은 친유기의 구조가 다른 비이온성계면활성제를 조합해서 사용하면 부작용을 억제할수가있다.
불용화물을 가용화시키기 위해서는 필요한 비이온성계면활성제의 양은 사용하는 이온성계면활성제의 종류에 따라 다르지만 0.5∼10g/l 바람직하게는 1∼8g/l 이다.
상기한 백혈구4분류용시약은 다시또 (d) pH조정용의 완충제를 함유하고있다.
완충제로서는 통상 pH를 일정하게 유지하기위해 사용하는것이면 특히 한정되는것은 아니고 소정의 pH±2.0에 pKa를 갖는 완충제를 사용할수가있다.
구체적으로는 MES, TRIS, HEPES, 숙신산, 프탈산, 시트르산 완충액등을 들수가있다.
본발명에 있어서는 pH 5∼11의 범위로 조제되는것이 바람직하다.
이때의 사용량은 5∼100mM정도이다.
다시또 상기한 백혈구4분류용시약은 알코올 또는 금속염류를 함유하고 있어도된다.
알코올로서는 특히 한정되는것은없고 공업적으로 값싸게 입수용이한 알코올이 바람직하다.
예를들면 메틸알코올, 에틸알코올등의 알칸올, 페네틸알코올, 2-페녹시에탄올등의 방향환을갖는 알코올등을 들수가있다.
이때의 사용량은 메틸알코올에서는 시약조성물 전량에대해 5∼20%정도의 양이 바람직하고 대체적인 목표로서 탄소수가 1개 증가할때마다에 약 절반 분의 양이 바람직하다.
또 2-페녹시 에탄올에서는 0.05∼1%가 바람직하다.
금속염류로서는 특히 한정되는것은 아니고 예를들면 염화나트륨, 염화칼륨, 염화리튬등의 알칼리금속염이 아주적당하다.
알칼리금속염은 통상은 필요없으나 후술하는바와같이 전기저항신호를 사용해서 측정을 행하는장치에서는 시료의 전기전도도의 측정을 행하는데 아주 적당한 값으로 조정하기위해 필요하다.
이때의 사용량은 용액의 전기전도도가 5∼20mS/cm의 범위로하는 양이 바람직하다.
상기한 백혈구4분류용시약은 물 또는 수성매체에 상기한 이온성계면활성제와 유기화합물과 비이온계면활성제와 완충제가 소망의 양으로 함유되어있는 것이며 이 백혈구분석용시약을 혈액시료 1용량에대해 2∼100용량으로 사용하는것이 바람직하다.
본발명의 백혈구분류방법의 공정(ii)에서 사용되는 호염기구측정시약으로서는 특히 한정되는것은 없으나 예를들면
(1) 폴리옥시에틸렌의 부가중합몰수가 3∼10의 적어도 1종의 비이온성계면활성제와,
(2) 적어도 1종의 양이온성계면활성제와,
(3) pH를 2.5∼4.0으로 하기위한 완충제로된 백혈구 분석용시약을 들수가있다.
상기한 호염기구측정시약에 함유되는 (1) 비이온성계면활성제로서는 다음의 구조식으로 표시되는것을 사용할수가있다.
R1a-R2a-(CH2CH2O)n-H
[식중 R1a는 탄소수 8∼18의 알킬기 또는 알케닐기, R2a는 -O- 또는 -(C6H4)-O-, n 은 폴리옥시에틸렌의 평균부가중합몰수로서 3∼10의 실수]
상기한 식에 있어서 탄소수 8∼18의 알킬기 또는 알케닐기로서는 예를들면 옥틸기, 노닐기, 데실기, 운데실기, 라우릴(도데실기,) 트리데실기, 미리스틸기(테트라데실기), 펜타데실기, 세틸기(헥사데실기), 헵타데실기, 스테아릴기(옥타데실기)등을 들수가있다.
그중에서도 도데실기가 바람직하다.
비이온성계면활성제의 구체적인 예로서는 폴리옥시에틸렌(4.2)도데실에테르[BL 4.2 니꼬케미컬스(주)], 폴리옥시에틸렌(9)도데실에테르[BL9, 니꼬케미컬스(주)], 폴리옥시에틸렌(5)도데실에테르[니꼬케미컬스(주)], 폴리옥시에틸렌(5.5)세틸에테르[ 니꼬케미컬스(주)], 폴리옥시에틸렌(7)세틸에테르[니꼬케미컬스(주)], 폴리옥시에틸렌(7)오레일에테르[니꼬케미컬스(주)], 등을 들수가있다.
비이온성계면활성제는 300∼20000mg/l 의 농도로 사용할수있고 보다 바람직하게는 500∼10000mg/l 이다.
구체적으로는 폴리옥시에틸렌(3∼10)도데실에테르를 500∼8000mg/l 로 사용하는것이 바람직하다.
농도가 지나치게 낮은경우 호염기구이외의 과립구를 완전히 나핵화 할수없고 농도가 지나치게 높은경우에는 양이온성계면활성제에의한 호염기구이외의 과립구의 나핵화를 저해한다.
상기한 이외의 비이온성계면활성제에서는 예를들면 폴리옥시에틸렌의 부가중합몰수가 지나치게 큰경우 호염기구이외의 과립구를 완전히 나핵화할수가 없다.
또 폴리옥시에틸렌의 부가중합몰수가 지나치게 적은경우 물에용해되기 어렵게되어 사용이 곤란해진다.
또 (2) 양이온성계면활성제로서는 다음의 구조를 갖는 4급암모늄염과 피리디늄염형계면활성제로된 군으로부터 선택되는 양이온성계면활성제의 적어도 1종을 함유한다.
[식중 R1b는 탄소수 10∼18의 알킬기 또는 알케닐기, R2b, R3b, 또는 R4b는 탄소수 1∼3의 알킬기 또는 알케닐기, X는 할로겐이다.] 또는
[식중 R1c는 상기한 R1b와 동일의미이며, X는 상기와 동일한의미이다.]
상기한식에 있어서 탄소수 10∼18의 알킬기 또는 알케닐기로서는 예를들면 데실기, 운데실기, 라우릴기(도데실기), 트리데실기, 미리스틸기(테트라데실기), 펜타데실기, 세틸기(헥사데실기), 헵타데실기, 스테아릴기(옥타데실기)등을 들수가있다.
그중에서도 데실기, 라우릴기, 미리스틸기, 세틸기 또는 스테아릴기등이 바람직하다.
또 탄소수 1∼3의 알킬기 또는 알케닐기로서는 메틸기, 에틸기, 프로필기, 에티닐기, 프로피닐기등을 들수가있다.
양이온의 구체예로서는 데실트리메틸암모늄, 라우릴트리메틸암모늄, 미스틸트리메틸암모늄, 세틸트리메틸암모늄, 세틸디메틸에틸암모늄, 라우릴디메틸에틸암모늄, 미스틸디메틸암모늄, 라우릴피리디늄, 세틸피리디늄등을 들수가있다.
다시또 할로겐으로서는 불소, 염소, 브롬, 요오드등을 들수가있다.
상기한 양이온성계면활성제는 적혈구, 혈소판을 거의 완전히 용해시키고 적어도 호염기구이외의 과립구를 거의 나핵화시키는데 충분한 농도로사용된다.
이 농도는 예를들면 통상의 광학현미경으로 나핵화의 상태를 관찰하므로써 아주적당한 농도가 간단히 결정된다.
구체적으로는 약 100mg/l∼1000mg/l, 바람직하게는 300mg/l∼5000mg/l의 농도이지만 양이온성계면활성제의 종류에의해 적절히 조제할수가있다.
지나치게 적으면 적혈구, 혈소판을 완전히 용해시킬수가없고 또 과잉량의 양이온성계면활성제의 존재는 단핵구의 나핵화를 촉진하기때문에 바람직하지않다.
각 양이온성계면활성제의 종류 및 아주 적당한양을 표2에 나타낸다.
또한 이들 계면활성제는 1종 또는 그이상을 조합해서 사용할수가있다.
[표2]
양이온성계면활성제의 종류는 특히 한정되는것은 아니지만 전기한 구조식으로 표시되는 양이온성계면활성제가 아주 적당하다.
양이온성계면활성제의 용혈력은 그 주사슬의 길이에 의존하고있다.
주사슬이 긴것은 용혈력이 강하고 따라서 소량으로 효과가 얻어진다.
상기한 호염기구측정시약의 pH는 (3)완충제에 의해 2.5∼4.0 바람직하게는 3.0∼4.0의 범위로 유지된다.
pH가 2.5 미만의경우 유약과립구, 단핵구가 나핵화하기쉽게되고 각 백혈구를 판별하기가 곤란해진다.
pH 가 4.0을 초과하는 경우에는 백혈구를 수축, 나핵화시키는것이 곤란하게되고 또한 적혈구, 혈소판의 수축, 용해가 곤란해진다.
본시약에서 사용되는 완층제는 특히 한정되지않고 pKa가 2.0∼5.0의 범위에있는 완충제가 아주적당히 사용된다.
예를들면 시트르산, 말산, 디글리콜산, 숙신산, 포름산, 주석산등이 아주 적당히 사용된다.
완충제의 농도는 특히 한정되지 않고 pH를 소정의 pH범위로 조정할수있는 농도가 사용된다.
본발명에서 사용되는 호염기구측정용 시약에 있어서는 상기한 비이온성계면활성제, 양이온성계면활성제, 및 완충제를 적절히 선택하여 소망의 비율로 혼합하므로서 조제할수가있다.
그중에서도 DTBA, BL4.2 및시트르산을 조합한시약, LTAC, BL 4.2 및 시트르산을 조합한시약, MTAB, BL 4.2 및 시트르산을 조합한시약, CTCA, BL 4.2 및 시트르산을 조합한시약, STAC, BL 4.2 및 시트르산을 조합한시약, CDMEB, BL 4.2 및 시트르산을 조합한시약, CPyC, BL 4.2 및 시트르산을 조합한시약, DTAB,BL9 및시트르산을 조합한시약, LTAC, BL 9 및 시트르산을 조합한 시약, MTAB, BL 9 및 시트르산을 조합한시약, CTAC, BL9 및 시트르산을 조합한시약, STAC, BL 9 및 시트르산을 조합한시약, CDMEB, BL 9 및 시트르산을 조합한시약, CPyC, BL 9 및 시트르산을 조합한시약, 및 DTBA, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, LTAC, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, MTAB, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, CTAC, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, STAC, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, COMEB, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, CPyC, BL 4.2 및 숙신산을 조합한시약, DTAB, BL 9 및 숙신산을 조합한시약, LTAC, BL 9 및 숙신산을 조합한시약, MTAB, BL 9 및 숙신산을 조합한시약, CTAC, BL 9 및 숙신산을 조합한시약, STAC, BL 9 및 숙신산을 조합한시약, CDMEB, BL 9 및 숙신산을 조합한 시약, CPyC, BL 9 및 숙신산을 조합한시약등이 바람직하다.
또 상기한 호염기구측정용시약에 있어서는 다시또 금속염을 첨가해도된다.
통상 금속염은 필요하지않으나 전기임피이던스신호를 검출하므로서 측정을 행하는 장치를 사용하여 시료의 전기전도도가 낮은경우에 측정을 행하기위해서는 아주 적당한 값으로 조정하기위해 필요하기때문이다.
사용할수있는 금속염으로서는 특히 한정되는것이 아니고 예를들면 염화나트륨, 염화칼륨, 염화리튬등의 알칼리금속염이 아주 적당하다.
이때의 사용량은 용액의 전기전도도가 3∼20mS/cm의 범위로하는 양이 바람직하다.
다시 또 상기한 호염기구측정용시약을 사용해서 백혈구를 분류하기위해서는 본발명의 시약과 혈액시료와를 혼합하는것만의 간단한 조작으로 측정시료를 조제할수가있다.
시약과 혈액시료와의 혼합은 시약을 구성하는 성분과 혈액시료가 거의 동시에 접촉하는것이 바람직하지만 시약의 구성성분의 종류 또는 농도등에의해 순차로 혈액시료와 혼합해도된다.
혈액시료와 본발명의 시약과의 혼합비율은 특히 한정되지 않지만 1 : 2 ∼ 1: 100정도의 비율로 혼합하는 것이 아주 적당하다.
반응은 거의 순시에 진행하고 혼합후 약 10초로부터 적어도 120초 정도까지 안정해서 측정할수가있다.
반응온도는 10∼40℃정도 까지는 특히 문제없이 측정할수가있다.
반응온도가 높은경우에는 약간 단시간에 낮은경우에는 약간 장시간에 반응을 진행하는것이 필요하다.
또 본발명의 방법에 있어서 사용하는 호염기구 측정용시약은 상기한 시약이외에 예를들면 폴리옥시에틸렌부가중합몰수 12∼30의 비이온성계면활성제와 양이온성계면활성제로된 pH 3.0∼4.0의 호염기구측정용시약(일본국 특개평 3-20667호공보) 및 희박산과 수용성계면활성제로된 pH 1.8∼2.3의 수용액으로된 호염기구측정용시약(일본국 특개소 61-88896호공보) 등을 사용할수가 있다.
본발명에서 사용되는 백혈구4분류용시약 및 호염기구측정용시약은 각각 상기한 조성에 한정되는것은 아니지만 각각의 시약으로 처리된 혈액시료가 동일한 파라미터로 측정될수있는것이 바람직하다.
또 계수의 신뢰성을 향상시키기위해서는 적어도 백혈구수가 양쪽의 시약을 사용한때에 측정될수있는것이 바람직하다.
상기한 백혈구4분류용시약을 첨가한 전체혈액시료의 일부는 세포의 크기정보와 형태정보가 측정되고 백혈구를 적어도 림프구, 단구, 및 호산구에 각각 대응하는 3집단과 호중구 및 호염기구에 대응하는 1집단과의 4집단으로 분류계수된다.
또 상기한 호염기구측정용시약을 첨가한 전체혈액시료의 다른일부는 적어도세포의 크기정보가 측정되고 호염기구가 분류계수된다.
세포의 크기정보와 형태정보를 측정하는방법, 또는 세포의 크기정보만을 측정하는방법은 특히 한정되지않지만 예를들면 저각산란광 및 광각산란광의 양쪽 혹은 적어도 저각산란광을 측정하는방법을 들수가있다.
저각산란광은 세포의 크기정보를 반영하고 광각산란광은 형태정보를 반영한다.
세포의 크기정보를 반영하는 다른 측정의 파라미터로서는 전기저항을 들수가있다.
또 형태정보를 반영하는 다른 측정파라미터로서는 측방(90°)산란광을 들수가있다.
측정파라미터를 저각산란광과 광각산란광의 조합으로하면 제3도에 나타낸 것과같은 간단한 장치를 사용할수있기때문에 바람직하다.
측정하는순서는 백혈구4분류시약으로 처리된 혈액시료를 측정한후 호염기구측정시약으로 처리된 혈액시료를 측정해도되고 혹은 그 역이라도된다.
전체혈액시료와 백혈구4분류시약과를 혼합하므로서 적혈구는 용해하고 다시또 백혈구의 서브타이프간에 형태적 차이가 생긴다.
이 결과 2가지의 산란광을 측정하므로서 적어도 백혈구를 적어도 림프구, 단구, 및 호산구에 각각 대응하는 3집단과 호중구 및 호염기구에 대응하는 1집단과의 4집단으로 분류계수된다.
한편 전체혈액시료와 호염기구측정시약을 혼합하므로서 적혈구는 용해되고호염기구는 거의 변화하지않은채로 남고 다른 백혈구는 수축된다.
이결과 적어도 크기정보를 반영하는 저각산란광을 측정하므로서 백혈구를 호염기구와 호염기구이외의 백혈구와의 2종류로 분류할수가있다.
또한 백혈구수가 많은경우나 유약과립구가 출현한 검사체등에서는 호염기구와 호염기구이외의 백혈구와의 경계가 불명료하게됨과 동시에 좌측이동의 정보도 얻어지지않기때문에 세포의 크기정보와 형태정보와의 양쪽을 측정하는것이 바람직하다.
또 호염기구측정시약중 (1) 폴리옥시에틸렌의 부가중합몰수가 3∼10의 적어도 1종의 비이온성계면활성제와 (2) 적어도 1종의 양이온성계면활성제와 (3) pH를 2.5∼4.0으로 하기위한 완충제로된 백혈구분석용시약을 사용한경우에는 적어도 호염기구, 단핵구,(림프구 및 단구), 호염기구이외의 과립구의 3가지로 분류할수있고 유약과립구도 분류계수할수 있기때문에 특히 바람직하다.
따라서 백혈구4분류시약으로 처리하므로서 얻어진 계수치와 호염기구측정용시약으로 처리하므로서 얻어진 계수치를 기초로해서 백혈구의 5분류가 가능해진다.
예를들면 백혈구4분류시약에의해 림프구, 단구, 호산구의 분류계수치를 구한다.
또 호염기구측정용시약에의해 호염기구의 분류계수치를 구한다.
호중구의 분류계수치는 백혈구분류시약으로 얻어진 호중구 및 호염기구의 분류계수치로부터 호염기구의 분류계수치를 차감하므로서 구해진다.
또는 상기한 호염기구측정용시약을 사용한경우에는 호염기구이외의 과립구의분류계수치로부터 백혈구분류시약으로 얻어진 호산구의 분류계수치를 차감하므로서 호중구의 분류계수치를 구할수도있다.
본발명의 방법에 있어서 각 시약으로 처리한 전체혈액시료는 형광을 검출할필요가 없고 다시또 공통하는 측정파라미터로 측정할수가있다.
따라서 공지의 백혈구측정장치를 사용할수가있으나 예를들면 값싸고 간단한 장치인 반도체레이저를 사용한 소형의 분석장치를 사용하는것이 바람직하다.
이와같은 반도체레이저를 사용한 소형의 분석장치에의해 저작 및 고각전방산란광의 2가지의 파라미터를 수광하는것만으로 백혈구를 분류계수할수가있다.
예를들면 제3도에 반도체레이저를 사용한 장치의 일예를나타낸다.
검출부는 플로우셀(CELL)의 전방에 콘덴서렌즈(L2) 및 콜리미터렌즈(L1)을 거쳐서 반도체레이저(LD)가 직선적으로 배치되어있다.
또 플로우셀(CELL)의 후방에는 비임스토퍼(BS)가 병설된 콘덴서렌즈(L3)를 거쳐서 포토다이오우드(P[))가 반도체레이저(LD)및 플로우셀(CELL)과 직선적으로 배치되어 구성되어있다.
이 검출부의 특징으로서는 반도체레이저를 사용하고있는것, 2가지각도 산란광의 판별을 1개의 포토다이오우드(PD)센서 자신으로 행하는것, 직선적인 간단한 광학적구조를 들수가있다.
또 제3도의 장치에서 사용되는 포토다이오우드(PD)의 일예를 제4도에 나타낸다.
제4도는 PD의 외관이며 제5도는 PD의 수광센서의 배치를 나타낸다.
PD는 일반적인 PD와같은 캔타이프의 용기에 넣어저있다.
중심부에있는 적은 원형의 센서부분 C 가 전방저각(1∼5°)산란광을, 그 상부에있는 반원형의 센서부분 A 가 전방광각(6∼20°)산란광을 각각 판별검출한다.
각각의 센서감도는 일반적인 PD와 같은정도의 감도를 갖고있다.
센서부분이 분할되어 있기때문에 2가지의 산란광신호를 동시에 측정할수가 있다.
또 상기한 장치 및 포토다이오우드이외에도 공지의 장치 및 포토다이오우드를 사용할수가있다.
또 세포의 크기정보는 저각산란광을 측정하지않고 전기저항을 측정하므로서도 측정할 수가 있다.
[실시예]
본발명의 백혈구분류방법의 실시예를 다음에 나타낸다.
실시예1
백혈구4분류용 시약으로서
데실트리메틸암모늄브로바이드 1.5g/l
8-아닐리노-1-나프탈렌술폰산마그네슘염 2.0g/l
HCO-50(비이온성계면활성제, 니꼬케미컬스(주)) 4g/l
PEN4630(비이온성계면활성제, 니꼬케미컬스(주)) 1g/l
프탈산 50mM
2-페녹시에탄올 2.5ml/l
수산화나트륨 pH 5.5가 되는양
염화나트륨 30mM
을 사용해서 시약을 조제했다.
또 호염기구 측적용시약으로서
미리스틸트리메틸암모늄브로마이드 1g/l
BL9(비이온성계면활성제, 니꼬케미컬스(주)) 4g/l
시트르산 10mM
수산화나트륨 pH 3.3이 되는양
을 사용해서 시약을 조제했다.
상기한 백혈구4분류용시약 1.0ml에 정상인혈액 30μl를 첨가하여 10초후에 제3도에 나타내는 플로우사이트미터로 전방저각산란광과 광각산란광을 측정했다.
그 결과를 제1도 및 제3표에 나타낸다.
또 호염기구측정용시약 1.0ml에 정상인혈액 30μl를 첨가하여 30초후에 제3도에 나타내는 플로우사이트미터로 전방저각산란광과 광각산란광을 측정했다.
그 결과를 제2도 및 표3에 나타낸다.
[표3]
제1도, 제2도 및 제3도로부터 명백한바와같이 백혈구수, 백혈구4분류용시약을 사용한경우의 림프구 및 단구의 비율과 호염기구시약을 사용한경우의 림프구및 단구의 비율, 및 백혈구4분류용시약을 사용한 경우의 호염기구, 호중구 및 호산구의 비율과 호염기구시약을 사용한경우의 호염기구, 호중구 및 호산구의 비율은 어느것이나 양호하게 일치하고있다.
본발명의 방법에의하면 백혈구4분류시약과 호염기구측정시약과를 사용하므로서 값싼 시스템으로 신속히 백혈구를 5분류로 계수할수가있다.
또 백혈구4분류측정과 호염기구측정을 동일한 검출계에서 2회 측정하고 있기때문에 각각의 세포의 비율, 개수를 양측정에서 비교하므로서 계수의 신뢰성을 향상시킬수가있다.
즉 양측정의 결과에 차이가 확인된 경우에는 무엇인가의 경보를 발신시킬 수가있고 이상세포의 검지력을 향상시킬수가있다.
제1도는 본발명의 백혈구 분류방법에 있어서 백혈구 4분류용시약을 사용해서 백혈구를 분류계수한경우의 저각산란광과 광각산란광을 나타내는 산포도.
제2도는 본발명의 백혈구 분류방법에 있어서 호염기구측정용시약을 사용해서 백혈구를 분류계수한경우의 저각산란광과 광각산란광을 나타내는 산포도.
제3도는 본발명의 백혈구분류방법에 있어서 아주 적당히 사용되는 측정장치의 구성을 나타내는 개략도.
제4도는 제3도의 측정장치에 사용되는 포토다이오드를 나타내는 사시도
제5도는 포토다이오드의 수광센서의 배치를 나타내는 개략도.
* 도면의 주요부분에대한 부호의 설명
Lym 림프구
Mono 단구
GRAN 호중구+호염기구
Eo 호산구
LM 림프구+단구
Baso 호염기구
GRAN2 호중구+호산구
CELL 플로우셀
L1 콜리미터렌즈
L2 콘덴서렌즈
L3 콘덴서렌즈
LD 반도체레이저
PD 포토다이오드
BS 빔스토퍼

Claims (9)

  1. (i) (a) 적혈구를 용해시킬수있으나 백혈구의 세포막의 일부에 손상을 주는데 충분한 양의 적어도 1종류의 이온성계면활성제와, (b) 백혈구내의 양이온하전성분과 결합해서 백혈구간에 형태적차이를 부여하는데 충분한 양의 적어도 1종류의 음이온기를 갖는 유기화합물과, (c) 비이온계면활성제와, (d) pH조정용의 완충제로된 백혈구 4분류용시약을 전체혈액시료의 일부에 첨가하고, 세포의 크기정보와 형태정보를 측정해서 백혈구를 적어도 림프구(Lym), 단구(Mono), 및 호산구(Eo)에 각각 대응하는 3집단과 호중구 및 호염기구(GRAN)에 대응하는 1집단과의 4집단으로 분류계수하고,
    (ii) 호염기구측정용시약을 전체혈액시료의 다른 일부에 첨가하여 적어도 세포의 크기정보를 측정해서 호염기구(Baso)를 분류계수하고,
    (iii) 각각 얻어진 계수치에 기초해서 백혈구를 적어도 5분류하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  2. 제1항에 있어서,
    세포의 크기정보를 측정하는공정이 저각산란광을 측정하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  3. 제2항에 있어서,
    저각산란광의 측정각도가 1∼5°인것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  4. 제1항에 있어서,
    형태정보를 측정하는공정이 광각산란광을 측정하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  5. 제4항에 있어서,
    광각산란광의 측정각도가 6∼20°인것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  6. 제1항에 있어서,
    세포의 크기정보와 형태정보를 측정하는공정이 저각과 광각의 2가지의 산란광을 측정하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  7. 제6항에 있어서,
    측정하는 저각과 광각의 2가지의 산란광의 각도가 1∼5°및 6∼20°인것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    2가지의 각도의 산란광의 검출을 1개의 포토다이오드(PD)센서로 행하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
  9. 제1항에 있어서,
    공정(i)의 적어도 4집단의 분류계수와 공정(ii)의 호염기구(Baso)의 분류계수를 동일한 검출기를 사용해서 행하는것을 특징으로하는 백혈구분류방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101244501B1 (ko) * 2007-09-27 2013-03-18 시스멕스 가부시키가이샤 시료 분석용 시약 키트 및 시료 분석 방법

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5843608A (en) * 1995-06-08 1998-12-01 Coulter International Corp. Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood
US5786224A (en) * 1995-06-29 1998-07-28 Coulter Corporation Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood
JP4042925B2 (ja) * 1996-11-20 2008-02-06 シスメックス株式会社 幼若白血球の分類計数法
US5830701A (en) * 1997-03-28 1998-11-03 Tao Medical Electronics Co., Ltd. Method of detecting hematopoietic progenitor cells
CA2309281A1 (en) * 1997-11-11 1999-05-20 Kowa Company, Ltd. Method of counting leukocytes and leukocyte counter
US5952192A (en) * 1998-01-07 1999-09-14 Western Michigan University Method of fluorescent analysis of biological sample utilizing biebrich scarlet
FR2791138B1 (fr) * 1999-03-19 2001-04-27 Abx Sa Reactif pour la determination des leucocytes et la mesure de l'hemoglobine dans un echantillon de sang
US6214625B1 (en) 1999-04-28 2001-04-10 Coulter International Corp. Composition and method for differentiation of basophils and eosinophils in blood
US6210969B1 (en) 1999-04-28 2001-04-03 Coulter International Corp. Composition and method for differentiation of basophil and eosinophil subpopulations of leukocytes in blood
US6485923B1 (en) * 2000-02-02 2002-11-26 Lifescan, Inc. Reagent test strip for analyte determination having hemolyzing agent
DE60218074T2 (de) * 2001-03-29 2008-02-07 Sysmex Corp. Durchflusszytometer
US6979570B2 (en) * 2001-07-26 2005-12-27 Sysmex Corporation Particle analyzer and particle analyzing method
JP3600231B1 (ja) * 2003-09-30 2004-12-15 森永製菓株式会社 イムノアッセイ
JP2006313151A (ja) * 2005-04-07 2006-11-16 Sysmex Corp 血液分析装置、試料分析装置及びフローサイトメータ
JP4964446B2 (ja) * 2005-09-14 2012-06-27 シスメックス株式会社 分析装置及び検体情報処理プログラム
CN101078720B (zh) * 2006-05-22 2010-12-01 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种改进的用于对白细胞进行分类的试剂及方法
CN101078721B (zh) 2006-05-23 2010-12-22 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 对白细胞进行分类的试剂及方法
JP4796443B2 (ja) * 2006-06-08 2011-10-19 シスメックス株式会社 試料分析用試薬、試料分析用試薬キット及び試料分析方法
JP4914656B2 (ja) * 2006-06-26 2012-04-11 シスメックス株式会社 試料分析用試薬、試料分析用試薬キット及び試料分析方法
CN101236192B (zh) * 2007-01-29 2015-05-13 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 溶血剂、白细胞分类试剂体系及分类方法
CN101349644B (zh) 2007-07-20 2012-06-27 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种白细胞分类试剂和其使用方法
CN101424614B (zh) * 2007-10-29 2011-04-13 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 嗜碱性粒细胞分析试剂及测定方法
CN101464454B (zh) * 2007-12-18 2016-08-03 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类试剂及方法
CN101470108B (zh) * 2007-12-24 2013-11-27 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种对白细胞进行分类的试剂和方法
CN101475754A (zh) 2008-01-04 2009-07-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类荧光染料,组合物及在生物样品染色中的用途
WO2009136570A1 (ja) * 2008-05-09 2009-11-12 シスメックス株式会社 血液分析装置、血液分析方法および溶血剤
CN101602762B (zh) 2008-06-10 2013-10-16 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类化合物、其制备方法及应用
CN101726579B (zh) 2008-10-17 2014-06-18 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血液检测试剂和方法
US8842900B2 (en) * 2008-10-28 2014-09-23 Sysmex Corporation Specimen processing system and blood cell image classifying apparatus
JP5557994B2 (ja) * 2008-10-28 2014-07-23 シスメックス株式会社 検体処理システムおよび血球画像分類装置
CN101723874B (zh) * 2008-10-31 2013-09-11 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 花菁类化合物及其在生物样品染色中的用途
CN101750476B (zh) * 2008-12-08 2015-06-03 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血液分析试剂及其使用方法
US8367358B2 (en) 2008-12-17 2013-02-05 Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd. Reagent, kit and method for differentiating and counting leukocytes
JP5452058B2 (ja) * 2009-03-31 2014-03-26 シスメックス株式会社 血液分析装置
CN101988082B (zh) 2009-07-31 2015-04-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类计数试剂、试剂盒及其制备方法和白细胞分类计数的方法
CN102115456B (zh) * 2009-12-30 2014-08-20 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 花菁类化合物，包含所述化合物的组合物及其在细胞检测中的用途
ES2720151T3 (es) * 2011-04-07 2019-07-18 Beckman Coulter Inc Identificación y enumeración de células granuladas tempranas (EGC)
EP2520926B1 (en) * 2011-05-05 2022-06-15 Sysmex Corporation Blood analyzer, blood analysis method, and computer program product
WO2012174535A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Constitution Medical, Inc. Solutions for histoprocessing of biological samples
WO2015129863A1 (ja) * 2014-02-28 2015-09-03 シスメックス株式会社 尿試料分析方法、尿試料分析用試薬及び尿試料分析用試薬キット
CN109991052A (zh) * 2019-03-12 2019-07-09 迪瑞医疗科技股份有限公司 一种用于白细胞、嗜碱性粒细胞计数和血红蛋白测定的溶血剂
CN110031383A (zh) * 2019-04-22 2019-07-19 深圳开立生物医疗科技股份有限公司 一种白细胞分类试剂及方法
KR102264612B1 (ko) 2019-06-24 2021-06-14 국민대학교산학협력단 혈액영상을 이용한 백혈구 감별방법
CN111006990A (zh) * 2019-12-31 2020-04-14 山东博科生物产业有限公司 血细胞分析用试剂及其应用
CN114047109B (zh) * 2022-01-11 2022-06-21 深圳市帝迈生物技术有限公司 一种样本分析仪及其计数方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1255197A (en) 1984-09-24 1989-06-06 Joseph L. Orlik Leukocyte differentiation composition and method
JPH06100596B2 (ja) * 1986-09-10 1994-12-12 東亜医用電子株式会社 フロ−サイトメトリ−による白血球の分類方法
KR970007077B1 (ko) * 1987-03-13 1997-05-02 코울터 일렉트로닉스 인커퍼레이티드 광산란 기술을 이용한 다중-부분식별 분석 방법
US5155044A (en) * 1987-03-13 1992-10-13 Coulter Electronics, Inc. Lysing reagent system for isolation, identification and/or analysis of leukocytes from whole blood samples
US5389549A (en) * 1987-05-29 1995-02-14 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Method for classifying leukocytes and a reagent used therefor
JP2619900B2 (ja) * 1988-01-27 1997-06-11 東亜医用電子株式会社 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬および方法
CA2016699C (en) * 1989-05-15 2003-11-18 Paul N. Marshall Lytic agents and uses thereof
JP2778745B2 (ja) * 1989-06-19 1998-07-23 東亜医用電子株式会社 血液中の白血球弁別測定用試薬
JP2836865B2 (ja) * 1989-10-23 1998-12-14 東亜医用電子株式会社 血液中の白血球およびヘモグロビンの測定用試薬
FR2654744B1 (fr) * 1989-11-20 1992-03-13 Abx Sa Reactif et methode d'utilisation de celui-ci pour la determination automatique en cytometrie de flux d'au moins une sous-population leucocytaire a partir du sang total.
US5242832A (en) * 1990-03-01 1993-09-07 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Reagent for measurement of leukocytes and hemoglobin in blood
US5316725A (en) * 1991-06-07 1994-05-31 Edward Lawrence Carver, Jr. Reagent system for the improved determination of white blood cell subpopulations
DE69327775T2 (de) * 1992-11-19 2000-06-21 Sysmex Corp Verfahren zur Vorbehandlung für Blutanalyse

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101244501B1 (ko) * 2007-09-27 2013-03-18 시스멕스 가부시키가이샤 시료 분석용 시약 키트 및 시료 분석 방법

Also Published As

Publication number Publication date
EP0695936A2 (en) 1996-02-07
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DE69528022D1 (de) 2002-10-10

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