CN101236192B - 溶血剂、白细胞分类试剂体系及分类方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种血液细胞分析装置用的溶血剂。此溶血剂可将血液中的红细胞裂解，裂解红细胞后的血液可用于血红蛋白浓度的测定。此外，本发明还涉及一种白细胞分类试剂体系，包括前述溶血剂和一种抑制剂。溶血剂裂解红细胞后，加入抑制剂可以阻止溶血剂对白细胞形态和结构的破坏。此外，本发明还涉及采用前述试剂体系对白细胞进行分类的方法。

Description

溶血剂、白细胞分类试剂体系及分类方法

技术领域

本发明涉及一种血液细胞分析用试剂及分析方法，特别是涉及一种可用于血红蛋白浓度测定的溶血剂、一种用于白细胞分类的试剂体系以及使用该试剂对白细胞进行分类的方法。

背景技术

在临床检验领域中，对患者血液进行血红蛋白浓度测定和白细胞分类在多种血液疾病的诊断和治疗中具有重要意义。

在全自动血液分析装置上进行血红蛋白浓度测定和白细胞分类都涉及到溶血剂的使用。一方面溶血剂可以溶解红细胞，使细胞内的血红蛋白释放，用于血红蛋白的测定。另一方面，溶血剂破坏红细胞后可以消除红细胞以及红细胞碎片对白细胞分析的干扰，方便后续的白细胞计数和分类。

血红蛋白的测定方法很多，其中氰化高铁血红蛋白(HiCN)法为国际血液标准化委员会推荐使用的参考性方法。在这一方法中使用了非离子表面活性剂Triton X-100作为溶血剂。红细胞被破坏后，释放出的血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰(CN^-)离子结合形成稳定的氰化高铁血红蛋白(HiCN)。HiCN在波长540nm处有吸收峰，可用分光光度计进行直接测定或用HiCN参考液进行比色法测定。但是HiCN法中使用了剧毒品氰化钾，试剂常温下不稳定，易受多种因素的干扰，并且由于反应时间过长(约5分钟)，因此并不适用于全自动血液分析装置。

由于测定血红蛋白的HiCN法中的氰化物有剧毒，因此一些无氰血红蛋白测定的方法陆续被公布出来。例如，Oshiro等(Clin Biochem.1982Apr；15(2)：83-8.)介绍了一种无氰血红蛋白测定的方法。在这一方法中使用了阴离子表面活性剂月桂基硫酸钠(SLS，又称十二烷基硫酸钠，SDS)和非离子表面活性剂Triton X-100。SLS不仅可以与Triton X-100一同起到溶血剂作用，还可以与血红蛋白结合形成SLS-血红蛋白复合物。此复合物在535nm左右有吸收峰，但由于其摩尔消光系数还未确定，不能直接用吸光度值直接计算血红蛋白浓度，需用HiCN法定值的血液标本绘制标准曲线后间接计算血红蛋白浓度。另外，Zander等(Clin Chim Acta.1984Jan16；136(1):83-93)介绍了一种无氰血红蛋白测定的方法。这一方法中使用了非离子表面活性剂Triton X-100作为溶血剂。反应的最终产物为碱性高铁血红蛋白D-575(alkaline haematin D-575，AHD-575)，其在575nm有吸收峰，可用分光光度计进行直接测定。此外，Benazra等(美国专利4,853，338)也公开了一种无氰血红蛋白测定法。在这一方法中使用了季铵盐类阳离子表面活性剂作为溶血剂。

不过，由于表面活性剂的浓度过高或由于试剂体系的pH值过于极端，以上三种方法在溶解红细胞的同时也会对白细胞产生强烈的破坏作用。因此，虽然这些溶血剂可用于血红蛋白浓度的测定，但并不适用于对白细胞进行分类分析。

近年来，一些能同时测定血红蛋白浓度和对白细胞进行分类的方法被陆续公布出来。如美国专利6632676、2002/0098589、2004/0241769、RE38131、5958781、5882934、5866428、5834315、5612223、5242832、5250437等应用一种或多种季铵盐类、吡啶盐类阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和两性离子表面活性剂作为溶血剂，对血红蛋白浓度和白细胞分类进行分析。此类试剂仅能裂解红细胞，对白细胞有损伤但不严重。同时，由于表面活性剂对各类白细胞的损伤程度不同，因此会造成细胞的大小出现差异，从而通过细胞大小这个参数对白细胞进行两类或三类细胞分群。不过，这些方法中表面活性剂的使用浓度仍然偏高(几克到几十克)，并且有些方法中试剂体系的pH过于极端，可能会对自动血液分析装置的管路和器件造成损害。

然而，随着医学的不断进步，对白细胞进行两类或三类细胞分群已有些不能适应临床的需要，一些对白细胞进行四类或五类分群的方法已经被公布出来。

例如，Sakata等(美国专利5618733)公开了用于白细胞四分类的测定方法。方法中同样采用了季胺盐类阳离子表面活性剂作为溶血剂。溶血剂对各类白细胞的损伤不同，会使各类细胞皱缩的情况产生差异，从而使各类白细胞低角度散射光强度产生差异。同时，试剂中还使用芳香族有机酸或酸性色素对各类白细胞进行染色，从而使各类白细胞的高角度散射光强度也产生差异。通过高、低角度散射光的组合，可以对白细胞进行四类细胞分群。不过化学染料的使用不仅会增加试剂的成本，而且增加了仪器和试剂的复杂性。

Li等(美国专利5843608)公开了同时测定血红蛋白浓度和对白细胞进行四分类的方法。该方法中使用了两个试剂：溶血剂和抑制剂。溶血剂的主要成份为长链乙氧基胺(ethoxylated long chain amine)，呈强酸性(pH值2.0-3.6)，当其与血液混合后可迅速将红细胞溶解。加入的抑制剂呈碱性，它会中和强酸性的溶血剂，抑制溶血剂对白细胞的损害。反应完成后，通过测定直流电(DC)、射频(RF)、光散射等参数可将细胞进行四类甚至五类细胞分群。不过这个方法的测定技术较复杂，需要特定的仪器和设备。另外，试剂体系的pH值过于极端，可能会对自动血液分析装置的管路和器件造成损害。

Provost(美国专利5840515)公开了以皂甙为主要组分的用于白细胞四分类的试剂。分析试剂为双试剂：第一个试剂为溶血剂，皂甙(saponin)为其主要组分。皂甙的使用浓度恰好使红细胞全部溶解，但白细胞未受或仅受轻微损害。第二试剂为终止液，主要组分为鞘流液，可以终止皂甙对白细胞的进一步损害。终止反应后对细胞大小、复杂度或荧光进行分析即可将细胞分为四个亚群。但由于皂甙可以来源于多种植物，不同来源的皂甙其纯度、对细胞的损害程度等理化性质会有很大不同。因此，选择何种来源的皂甙作为溶血剂是一个难以解决的问题。

Crews等(美国专利6632676、2002/0098589、2004/0241769)公开了多种对白细胞进行五分类的方法。这个方法中采用了双试剂：第一试剂为溶血剂，其主要成分为皂甙，溶液的pH值为2.9-3.2。第二试剂为抑制剂，其中含HEPES盐，溶液的pH值为9.75。反应完成后，对细胞的大小、光散射、不透明度(opacity)等指标进行分析即可对白细胞进行分类。但专利中第一试剂体系的pH值偏低，这可能会对自动血液分析装置的管路和器件造成损害。另外，方法中还使用了皂甙，如上所述，皂甙的来源是一个难以解决的问题。

发明内容

本发明的目的就是为了针对现有技术的上述问题，提供一种既能用于血红蛋白浓度测定又适用于对白细胞进行分类分析的新的溶血剂。

本发明的另一目的在于提供一种采用本发明的新的溶血剂对白细胞进行分类的试剂体系及方法。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种溶血剂，所述溶血剂含有季铵盐阳离子表面活性剂，所述季铵盐阳离子表面活性剂具有如下式(I)所示的结构，

其中，n为3～5的整数。

所述季铵盐阳离子表面活性剂在溶血剂中的浓度为0.1～10g/L，优选为0.5～2g/L。

所述溶血剂中还含有缓冲剂，缓冲剂调节溶血剂的pH值为8～12，优选为9～11。

所述溶血剂中还含有增溶剂。

所述增溶剂为非离子表面活性剂，浓度为0.1～5g/L。

所述溶血剂中还含有渗透压调节剂，所述渗透压调节剂调节溶血剂的渗透压为200～400mOsm/kg。

所述渗透压调节剂优选为碱金属氯化物，并且所述渗透压调节剂调节溶血剂的渗透压优选为250～350mOsm/kg。

所述溶血剂中还含有稳定剂，优选为乙二胺四乙酸或其钠盐或钾盐。

所述稳定剂的浓度为5～20mM。

所述溶血剂中还含有防腐剂，防腐剂的使用浓度为0.02～0.4％，所述为重量百分浓度。

本发明还公开了一种白细胞分类试剂体系，所述试剂体系包括：

a、上述的溶血剂；

b、用于抑制溶血剂对血液中的白细胞进一步损害的抑制剂。

所述抑制剂中含有缓冲剂，该缓冲剂调节抑制剂的pH值为3～7。

白细胞分类试剂体系中，所述抑制剂中的缓冲剂调节抑制剂的pH值优选为3～5。

所述抑制剂中还含有碱金属氯化物作为渗透压调节剂，该碱金属氯化物调节抑制剂的渗透压为200～400mOsm/kg，优选为250～350mOsm/kg。

本发明还公开了一种采用上述的白细胞分类试剂体系对白细胞进行分类的方法，所述方法包括步骤：

A、将血液标本与足量的所述溶血剂混合适当时间，使红细胞完全裂解；

B、在步骤A得到的混合液中加入所述抑制剂，阻止溶血剂对白细胞的进一步损害；

C、将步骤B得到的产物在血液分析装置上进行分析。

所述步骤A中，血液标本与所述溶血剂混合的比例为1:40～60，混合时间为5～20秒，混合温度为18～28℃。

由于采用了以上的方案，使本发明具备的有益效果在于：

本发明的溶血剂可同时用于血红蛋白浓度测定和白细胞分类，该溶血剂组分中包含的新型季铵盐阳离子表面活性剂与已有专利中使用的传统表面活性剂相比，该季铵盐阳离子表面活性剂裂解红细胞的能力更强，在溶血剂中的使用量更少(最少仅需0.1g/L)，因此对白细胞的伤害更小。当一定量血液样本与足量溶血剂混合后，红细胞被选择性地裂解，而白细胞的形态和结构仍保持完整。在血液分析装置上测定血红蛋白浓度的同时，还可以对白细胞进行三类或四类细胞分群。并且，利用本发明的溶血剂进行血红蛋白浓度测定时，能够避免使用剧毒的氰化物，提高了试剂的安全性；同时大大缩短了测定所需时间，使利用仪器进行自动化分析成为可能。

本发明的白细胞分类试剂体系中含有抑制剂，该抑制剂组分中包括中性或偏酸性的缓冲剂。由于本发明溶血剂中的季铵盐阳离子表面活性剂对pH值极其敏感，只有在pH≥9时才具有较高的活性。因此，在溶血剂裂解红细胞后，通过加入抑制剂可以很容易地调节溶血剂的pH值小于9，从而终止溶血剂对白细胞的损害，以达到对白细胞进行三类甚至四类细胞分群的目的。

此外，本发明的溶血剂和抑制剂的pH值范围较温和，通常在3～11范围内，因此避免了对血液分析装置的管路或器件造成损害。

附图说明

图1是本发明实施例1的溶血剂裂解红细胞后生成的血红蛋白衍生物的吸收光谱图。

图2是本发明实施例1的溶血剂与迈瑞-3000溶血剂分别测定临床血液标本的血红蛋白浓度的相关性分析图。

图3是本发明实施例2的溶血剂与迈瑞-3000溶血剂分别测定临床血液标本的血红蛋白浓度的相关性分析图。

图4是本发明实施例3的白细胞分类试剂体系对白细胞进行四类细胞分群的散点图。

图5是本发明实施例4的白细胞分类试剂体系对白细胞进行四类细胞分群的散点图。

具体实施方式

本发明提供一种溶血剂，该溶血剂可裂解红细胞从而用于血红蛋白浓度测定，并且由于对白细胞伤害较小且易于控制因此还可用于白细胞的分类测定。该溶血剂的组分包括：

1)具有下式(I)所示结构的季铵盐阳离子表面活性剂：

其中，式中的n为3～5的整数。

本发明溶血剂中的季铵盐阳离子表面活性剂，其主要作用是裂解红细胞，使红细胞中的血红蛋白得以释放，用于血红蛋白浓度的测定。此外，由于消除了红细胞的干扰，因此经上述溶血剂处理后的白细胞还可以用于白细胞的分类测定。

本发明所述溶血剂采用了一种新型季铵盐表面活性剂作为主要成分。与普通的季铵盐阳离子表面活性剂相比，由于这种季铵盐具有更长的分支，因此其裂解红细胞的能力更强，在溶血剂中的使用量更低(最少仅需0.1g/L)，因此对白细胞的伤害更小。此外，这种季铵盐还有一个显著特点就是对pH很敏感，只有在pH≥9时才具有较强的裂解细胞的能力，而在pH<9时对细胞的损伤能力有限。因此，利用这一特点很容易终止溶血剂对白细胞的损害，使白细胞的形态保持完整。

在pH值为8～12的条件下，在合适的浓度范围和作用时间内，血液样本中的红细胞可被这种季铵盐选择性地裂解，而白细胞仍保持完整。这种季铵盐的使用浓度通常为0.1～10g/L，优选为0.5～2g/L。

2)缓冲剂

如上所述，为了保持溶血剂中的季铵盐对红细胞的裂解能力，必须将溶血剂的pH值保持在合适范围。本发明所述溶血剂的合适pH范围为8-12，优选为9-11。为了将溶血剂的pH值稳定在合适范围，本发明所述的溶血剂组分中包括一种缓冲剂。采用的缓冲剂通常呈偏碱性，其成分没有特别限定，如常用的Tris、TAPS、AMPSO、CHES和CAPS等都可以使用。这类缓冲剂的使用浓度通常为10～200mM，优选为10～50mM。同时，为了将溶血剂的pH值调节到合适范围，还需使用一定量的NaOH或HCl。

3)增溶剂

季铵盐裂解红细胞后会产生大量细胞碎片，这些碎片会聚集成团干扰血红蛋白和白细胞的测定。本发明所述的溶血剂成分中使用了一种增溶剂，目的是为了溶解由于裂解红细胞而产生的细胞碎片。此外，增溶剂还会增强溶血剂中其它成分的溶解性，防止试剂中产生结晶或沉淀。本发明所述溶血剂中使用的增溶剂多为非离子表面活性剂，其成分没有特别限定，如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脂肪酸酯等都可使用。溶血剂中非离子表面活性剂的使用浓度通常为0.1～5g/L，优选为0.1～2g/L。

4)碱金属氯化物

为了使溶血过程中白细胞的形态不受影响，必须将溶血剂的渗透压保持在合适范围内。本发明溶血剂的合适渗透压通常为200～400mOsm/kg，优选为250～350mOsm/kg。本发明的溶血剂成分中使用了一种碱金属氯化物作为渗透压调节剂。碱金属氯化物的成分没有特别限定，常用的如氯化钠、氯化钾和氯化锂等都可使用，其使用量为使溶血剂的渗透压保持在合适范围的量。

5)稳定剂

本发明所述溶血剂成分中还包括一种稳定剂。通常使用的稳定剂是乙二胺四乙酸(EDTA)及其钠盐或钾盐。EDTA的加入一方面可以防止血细胞或血小板的聚集，另一方面可以螯合溶血剂中的多价离子，避免多价离子与溶血剂中其它成分结合，干扰试剂体系的稳定性。溶血剂中稳定剂的使用浓度通常为5～20mM。

6)防腐剂

本发明的溶血剂成分中还包括一种防腐剂。加入防腐剂是为了有效杀火和抑制多种微生物防止试剂的霉变，并延长试剂的贮存和使用时间。防腐剂的成分没有特别限定，常用的如乙内酰脲类和异噻唑啉酮类化合物等都可使用。防腐剂的使用浓度通常为0.02～0.4％，优选为0.02～0.1％。

除了上述溶血剂外，本发明还提供一种用于白细胞分类的试剂体系，体系中包括一种溶血剂和一种抑制剂。

溶血剂即为以上描述的溶血剂，其组分包括：所述的季铵盐、缓冲剂、增溶剂、碱金属氯化物、稳定剂和防腐剂。

抑制剂的组分包括：

1)中性或偏酸性的缓冲剂

加入缓冲剂的目的是为了将抑制剂的pH稳定在合适范围。此外，中性或偏酸性的抑制剂还可以中和溶血剂中偏碱的缓冲剂，调节溶血剂的pH值小于9，从而终止溶血剂对白细胞的进一步损害。中性或偏酸性缓冲剂的成分没有特别限定，常用的如磷酸盐、柠檬酸盐和醋酸盐等都可使用。缓冲剂的使用浓度通常为0.01～0.2M，优选为0.01～0.05M，其pH值范围通常为3～7，优选为3～5；

2)碱金属氯化物

加入碱金属氯化物是为了调节抑制剂的渗透压。抑制剂的渗透压通常为200～400mOsm/kg，优选为250～350mOsm/kg。碱金属氯化物的成分没有特别限定，常用的如氯化钠、氯化钾和氯化锂等都可使用，其使用量为使溶血剂的渗透压保持在合适范围的量。

此外，本发明还提供了一种对白细胞进行三类或四类细胞分群的方法。该方法包括：

1)取一定量血液样本与足量的溶血剂混合(混合比例通常为1:40～60)，混合时间通常在20秒以内，以保证红细胞完全裂解，而白细胞形态保持完整。反应温度通常控制在18～28℃。

2)血液样本与溶血剂混合一定时间后，加入一定量的抑制剂，以阻止溶血剂对白细胞的进一步损害。抑制剂的加入量为使体系中pH值调整为小于9的量。

3)将这些白细胞在血液分析装置上进行分析。通过测定细胞大小、光散射等参数，至少可以将白细胞进行两类分群，更优的情况下可以进行白细胞三类分群，最优的情况下可以进行白细胞四类分群。

下面通过具体的实施例并结合附图对本发明作进一步详细的描述。

实施例1

血红蛋白衍生物的吸收光谱

一种溶血剂的试剂组成如下：

季铵盐表面活性剂31551                0.5g/L

(河南省道纯化工技术有限公司)

聚氧乙烯十六烷醚                     0.1g/L

EDTA·Na₂                            5mM

NaCl                                 8g/L

异噻唑啉酮类防腐剂                    0.05％

Tris                                 0.02M

HCl                                  调节pH至9的量

其中，季铵盐表面活性剂31551是以下结构中n取3～5的整数的混合物：

取6μL血液样本与1994μL上述的溶血剂混合，30秒后在岛津-1240分光光度计上测定其450～700nm的吸收光谱。如图1所示，溶血剂溶解红细胞后产生的血红蛋白衍生物在540nm左右有最大吸收峰，在580nm左右还有一个肩峰。

血红蛋白浓度的测定

取临床血液样本12份，使用本实施例中所述溶血剂，在迈瑞BC-3000全自动血液分析仪上进行血红蛋白浓度测定。同时，在迈瑞BC-3000全自动血液分析仪上，使用原装溶血剂对上述样本的血红蛋白浓度进行平行测定。结果如图2所示，本实施例的溶血剂测定值与迈瑞BC-3000溶血剂的测定值具有良好的相关性。

实施例2

血红蛋白浓度的测定

一种溶血剂的试剂组成如下：

季铵盐表面活性剂31551              0.1g/L

(河南省道纯化工技术有限公司)

聚氧乙烯十六烷醚                   0.1g/L

EDTA·Na₂                          5mM

NaCl                               8g/L

异噻唑啉酮类防腐剂                 0.05％

CAPS                               0.02M

NaOH                               调节pH至11的量

取临床血液样本12份，使用上述溶血剂，在迈瑞BC-3000全自动血液分析仪上进行血红蛋白浓度测定。同时，在迈瑞BC-3000全自动血液分析仪上，使用原装溶血剂对上述样本的血红蛋白浓度进行平行测定。结果如图3所示，本实施例溶血剂的测定值与迈瑞BC-3000溶血剂的测定值具有良好的相关性。

实施例3

白细胞计数

一种溶血剂的试剂组成如下：

季铵盐表面活性剂31551                 0.5g/L

(河南省道纯化工技术有限公司)

聚氧乙烯十二烷醚                      0.1g/L

EDTA·Na₂                             5mM

NaCl                                  8g/L

异噻唑啉酮类防腐剂                    0.05％

TriS                                 0.02M

NaOH                                 调节pH至9的量

一种抑制剂的试剂组成如下，其pH值为5：

柠檬酸三钠                            0.065M

柠檬酸                                0.035M

NaCl                                  8g/L

临床血液样本12份，各取20μL与980μL上述的溶血剂混合，6秒后加入300μL上述的抑制剂终止反应。然后，在迈瑞BC-5500全自动血液分析仪上进行白细胞计数。同时，在迈瑞BC-5500全自动血液分析仪上，使用原装试剂对上述样本的白细胞进行平行测定。如表1所示，本实施例溶血剂的白细胞测定值与迈瑞BC-5500原装试剂的测定值具有良好的相关性(Y＝0.99119X+0.08055，r＝0.99946)。

表1 实施例3的溶血剂与迈瑞BC-5500溶血剂的白细胞测定值

白细胞四分类试剂体系

取20μL血液样本与980μL上述的溶血剂混合，6秒后加入300μL上述的抑制剂终止反应。然后，在迈瑞BC-5500全自动血液细胞分析仪上对细胞的前向低角散射光和侧向散射光进行测定。结果如图4所示，上述试剂体系可将白细胞进行四类细胞分群。图中，L表示淋巴细胞，M表示单核细胞，N表示中性和嗜碱性粒细胞，E表示嗜酸性粒细胞。

实施例4

白细胞四分类试剂体系

一种溶血剂的试剂组成如下：

季铵盐表面活性剂31551                     0.1g/L

(河南省道纯化工技术有限公司)

聚氧乙烯十六烷醚                          0.1g/L

EDTA·Na₂                                 5mM

NaCl                                      8g/L

异噻唑啉酮类防腐剂                         0.05％

CAPS                                      0.02M

NaOH                                      调节pH至11的量

一种抑制剂的试剂组成如下，其pH值为3：

醋酸                                      0.164M

醋酸钠                                    0.036M

NaCl                                      8g/L

取20μL血液样本与980μL上述的溶血剂混合，6秒后加入300μL上述的抑制剂终止反应。然后，在迈瑞BC-5500全自动血液细胞分析仪上对细胞的前向低角散射光和侧向散光射进行测定。如图5所示，本实施例中的试剂体系可将白细胞进行四类细胞分群。

实验例

白细胞分类相关性分析

取临床血液标本20份，分别用显微镜及实施例3中所述试剂体系进行白细胞分类计数。如表2所示，中性粒及嗜碱粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞的相关系数分别为0.97523、0.97294、0.85937和0.81643。两种检测方法具有良好的相关性。

表2 本发明白细胞分类试剂体系与镜检的相关性分析

Claims (11)

1.一种溶血剂，其特征在于：所述溶血剂含有季铵盐阳离子表面活性剂，所述季铵盐阳离子表面活性剂具有如下式（I）所示的结构，

其中，n为3～5的整数；所述季铵盐阳离子表面活性剂在溶血剂中的浓度为0.1～0.5g/L；

所述溶血剂中还含有缓冲剂，所述缓冲剂调节溶血剂的pH值为9～11；

所述溶血剂中还含有增溶剂；

所述溶血剂中还含有渗透压调节剂，所述渗透压调节剂调节溶血剂的渗透压为200～400mOsm/kg；

所述溶血剂中还含有稳定剂。

2.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述增溶剂为非离子表面活性剂，浓度为0.1～5g/L。

3.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述渗透压调节剂为碱金属氯化物，并且所述渗透压调节剂调节溶血剂的渗透压为250～350mOsm/g。

4.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述稳定剂为乙二胺四乙酸或其钠盐或钾盐。

5.根据权利要求4所述的溶血剂，其特征在于：所述稳定剂的浓度为5～20mM。

6.根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于：所述溶血剂中还含有防腐剂，防腐剂的使用浓度为0.02～0.4%，所述为重量百分浓度。

7.一种白细胞分类试剂体系，所述试剂体系包括：

a、权利要求1～6任意一项所述的溶血剂；

b、用于抑制溶血剂对血液中的白细胞进一步损害的抑制剂；

所述抑制剂中含有缓冲剂，该缓冲剂调节抑制剂的pH值为3～7；

所述抑制剂的渗透压为200～400mOsm/kg。

8.根据权利要求7所述的白细胞分类试剂体系，其特征在于：所述抑制剂中的缓冲剂调节抑制剂的pH值为3～5。

9.根据权利要求7所述的白细胞分类试剂体系，其特征在于：所述抑制剂中还含有碱金属氯化物作为渗透压调节剂，该碱金属氯化物调节抑制剂的渗透压为200～400mOsm/kg。

10.一种采用权利要求7所述的白细胞分类试剂体系对白细胞进行分类的方法，所述方法包括步骤：

A、将血液标本与足量的所述溶血剂混合适当时间，使红细胞完全裂解；

B、在步骤A得到的混合液中加入所述抑制剂，阻止溶血剂对白细胞的进一步损害；

C、将步骤B得到的产物在血液分析装置上进行分析。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述步骤A中，血液标本与所述溶血剂混合的比例为1:40～60，混合时间为5～20秒。