CN109735484A - 一种细胞保护剂、一种试剂及试剂的用途 - Google Patents

一种细胞保护剂、一种试剂及试剂的用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种细胞保护剂，一种试剂及试剂的用途，试剂中包括如下成分的细胞保护剂：0.1‑25g/L Prcolin系列产品或者0.1‑25g/L 1,3‑丙二醇或者0.1‑25g/L Proclin系列产品和1,3‑丙二醇的混合溶液，这种试剂能够用于白细胞分类计数或者用于制备白细胞分类计数产品，采用包含有本发明中的细胞保护剂的试剂能够对白细胞进行很好的保护，能够显著提高检测结果的准确度。

Description

一种细胞保护剂、一种试剂及试剂的用途
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及用于血液检测的试剂。
背景技术
白细胞亦称白血球，血液细胞成分之一，为无色圆形细胞，比红细胞大，有细胞核，在机体发生炎症或疾病时，白细胞数往往发生变化，故白细胞分析时医学实验室血液检验中最常采用的检测项目之一，白细胞激素和分类不仅对疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后分析均有重要意义，而且对健康状态的评估也有一定的价值。根据对白细胞的不同分类，可以分为三分类血细胞分析仪和五分类血细胞分析仪，其中，三分类血细胞分析仪作为比较早出现的全自动血细胞分析仪器，可以解放很多镜检细胞的人力，提高临检效率，同时由于技术比较成熟，性能比较稳定，价格低，在基层或急诊等场景仍具有很大的市场。
在对白细胞分析时，需要先将红细胞溶解，再对白细胞进行分析，所以要得到准确的检测结果，就需要在对红细胞进行溶解的时候，对白细胞进行充分的保护，在现有技术中，对白细胞进行分类的试剂中有采用聚氧乙烯型非离子表面活性剂来达到裂解红细胞的同时，降低对白细胞的伤害，但是这种试剂成分复杂并且需要在特定的pH值下进行操作，增加了操作人员的操作程序，在病人需要立即出检测结果来确定治疗方案的时候，采用这种试剂是不允许的，也有采用以皂苷为主要组分的血细胞分析试剂，以皂苷为主要成分的溶血剂，皂苷的使用浓度恰好使红细胞全部溶解，以鞘流液为主要成分的终止液，可以终止皂苷对白细胞的进一步损坏，但是这种试剂同样存在试剂成分复杂，试剂成分复杂的情况下，容易存在试剂的保存不便，检测步骤复杂等问题，所以，急需一种成分简单、成本低、操作方便并且检测结果准确的白细胞分类试剂。
发明内容
为了克服上述技术问题，本发明提供了一种成分简单、成本低、操作方便并且检测结果准确的白细胞分类试剂。
本发明提供了一种细胞保护剂，主要由如下成分组成：
0.1-25g/L Prcolin系列产品、0.1-25g/L 1,3-丙二醇、0.1-25g/L Proclin系列产品和1,3- 丙二醇的混合溶液。
进一步的，所述的Proclin系列产品选自Proclin150、Proclin200、Proclin300、Proclin950 和Proclin5000。
进一步的，所述所述Proclin系列产品为Proclin300。
本发明提供了一种试剂，所述试剂包括稀释液，所述稀释液中包括前述的细胞保护剂。
进一步的，所述的稀释液中的细胞保护剂主要由如下成分组成：7.5g/L Prcolin系列产品、7.5g/L 1,3-丙二醇、7.5g/L Proclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液。
更进一步的，所述的稀释液中的细胞保护剂主要由如下成分组成：7.5g/LPrcolin系列产品。
进一步的，所述稀释液还包括0.2-10g/L缓冲液、2-40g/L无机盐和0.1-2g/L防腐剂。
进一步的，所述稀释液还包括1.2g/L缓冲液、3.8g/L无机盐和0.3g/L防腐剂。
本发明提供了一种试剂，所述试剂包括溶血剂，所述溶血剂中包括前述的细胞保护剂。
进一步的，所述溶血剂中的细胞保护剂主要由如下成分组成：1.26g/L Prcolin系列产品、1.26g/L 1,3-丙二醇、1.26g/L Proclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液。
更进一步的，所述溶血剂中的细胞保护剂主要由如下成分组成：1.26g/L 1,3-丙二醇。
进一步的，所述溶血剂还包括0.5-12g/L缓冲液、5-50g/L表面活性剂、2-20g/L无机盐和0.1-3g/L防腐剂。
进一步的，所述溶血液还包括0.9g/L缓冲液、30g/L表面活性剂、2.3g/L无机盐和0.2g/L防腐剂。
进一步的，前述的表面活性剂选自十烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵和十六烷基三甲基溴化铵。
进一步的，前述的缓冲液选自苹果酸、丁二酸、邻苯二甲酸、柠檬酸、酒石酸、草酸、甲酸、磷酸、马来酸及它们各自的盐。
进一步的，前述的无机盐选自硫酸钠、硫酸钾、氯化钠和氯化钾。
进一步的，前述的防腐剂选自异噻唑啉酮、吡啶硫酮钠和叠氮钠。
本发明提供了一种试剂，所述试剂包括稀释液和溶血剂，所述稀释液中的细胞保护剂成分如下：0.1-25g/L Proclin系列产品、0.1-25g/L 1,3-丙二醇、0.1-25g/L Proclin系列产品和 1,3-丙二醇的混合溶液，进一步的，所述稀释液中的细胞保护剂成分如下：0.2g/L Prcolin 系列产品、0.2g/L 1,3-丙二醇、0.2g/L Proclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液；所述溶血剂中的细胞保护剂成分如下:0.1-25g/L Prcolin系列产品、0.1-25g/L 1,3-丙二醇、0.1-25g/L Proclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液，进一步的，所述稀释液中的细胞保护剂成分如下：1.26g/L Prcolin系列产品、1.26g/L 1,3-丙二醇、1.26g/L Proclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液。
本发明还提供了前述的稀释液、溶血液或者稀释液和溶血液两者一起使用的用途，该用途包括用于白细胞分类计数和用于制备白细胞分类计数产品。
相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
1)本发明在稀释液、溶血液中都加入成分简单的细胞保护剂，可以在将红细胞完全溶解的情况下，对白细胞进行最大的保护，更有利于白细胞的分类，检测的准确度也大大提高，而且操作方便、试剂成分简单、试剂成本低；
2)采用本发明中的稀释液与现有技术中的溶血液来对白细胞进行分类计数，检测准确度也能够得到提高；
3)采用本发明中的溶血液与现有技术中的稀释液来对白细胞进行分类计数，检测准确度也能够得到提高；
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1采用试剂A分析的白细胞分布图；
图2采用试剂B分析的白细胞分布图；
图3采用试剂C分析的白细胞分布图；
图4采用试剂D分析的白细胞分布图；
图5采用试剂E分析的白细胞分布图；
图6采用试剂A1分析的白细胞分布图；
图7采用试剂B1分析的白细胞分布图；
图8采用试剂C1分析的白细胞分布图；
图9采用试剂D1分析的白细胞分布图；
图10采用试剂E1分析的白细胞分布图；
图11采用试剂A2分析的白细胞分布图；
图12采用试剂B2分析的白细胞分布图；
图13采用试剂C2分析的白细胞分布图；
图14采用试剂D2分析的白细胞分布图；
图15采用试剂E2分析的白细胞分布图；
图16采用试剂F2分析的白细胞分布图；
图17采用试剂G2分析的白细胞分布图；
图18采用试剂A3分析的白细胞分布图；
图19采用试剂B3分析的白细胞分布图；
图20采用试剂C3分析的白细胞分布图；
图21采用试剂D3分析的白细胞分布图；
图22采用试剂E3分析的白细胞分布图；
图23采用试剂F3分析的白细胞分布图；
图24采用试剂G3分析的白细胞分布图；
图25采用试剂A5分析的白细胞分布图；
图26采用试剂B5分析的白细胞分布图；
图27采用试剂C5分析的白细胞分布图；
图28采用试剂D5分析的白细胞分布图。
具体实施方式
实施例1本发明中细胞保护剂1，3-丙二醇的确定
一、试剂配方
按照以下配方配置A、B、C、D、E试剂，具体配方如下：
试剂A
稀释液：7.5g/L乙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L乙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂B
稀释液：7.5g/L异丙醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血剂：1.26g/L异丙醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂C
稀释液：7.5g/L正丙醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L丙醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂D
稀释液：7.5g/L丙三醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L丙三醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂E
稀释液：7.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
二、实验过程
1、试剂A、B、C、D、E中溶血液与稀释液的配置过程都为以下过程：在纯化水中，该纯化水的体积为配置溶血液或者稀释液体积的五分之三，在纯化水中加入稀释液或者溶血液中的其他成分，其中加入的这些成分的顺序没有限定，最后配置成稀释液或者溶血液，将配置好的溶血液或者稀释液应用于血细胞分析仪；
2、对比实验：将试剂A、B、C、D、E分别与对比试剂的检测性能进行对比，以此筛选出所使用的试剂。
三、实验结果
采用试剂A、B、C、D、E对白细胞进行分析的白细胞分布图分别如图1、图2、图3、图4和图5所示，对图1、图2、图3、图4和图5进行分析得出表1与表2。
表1图1-图6的数据表
试剂A 试剂B 试剂C 试剂D 试剂E 对比试剂
WBC 18.88 16.89 15.57 16.9 19.26 19.2
LYM％ 4.1 3 3.1 2.9 3.9 3.8
MID％ 2.6 2.1 1.9 3.9 2.6 2.8
GRAN％ 93.3 94.9 95 93.2 93.5 93.6
RBC 4.28 4.11 4.06 4.13 4.48 4.44
HGB 133 127 125 128 139 139
HCT 40.7 37.6 37.3 38.1 42.5 42.4
MCV 95.1 91.6 91.9 92.2 95 95
PLT 127 121 114 121 133 134
表2试剂A-E与对比试剂性能比较数据表
试剂A 试剂B 试剂C 试剂D 试剂E
WBC -1.67％ -12.03％ -18.91％ -11.98％ 0.31％
LYM％ 0.30 -0.80 -0.70 -0.90 0.10
MID％ -0.20 -0.70 -0.90 1.10 -0.20
GRAN％ -0.30 1.30 1.40 -0.40 -0.10
RBC -3.60％ -7.43％ -8.56％ -6.98％ 0.90％
HGB -4.32％ -8.63％ -10.07％ -7.91％ 0.00％
HCT -4.01％ -11.32％ -12.03％ -10.14％ 0.24％
MCV 0.11％ -3.58％ -3.26％ -2.95％ 0.00％
PLT -5.22％ -9.70％ -14.93％ -9.70％ -0.75％
注：其中LYM％、MID％、GRAN％为绝对偏差(绝对值)，其余为相对偏差
结果分析：将图5分别与图1、图2、图3和图4进行对比，可以看出运用含有1,3- 丙二醇的试剂进行白细胞分析，能够将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞进行清楚准确分类，确保最后得到的检测结果的准确性，并且从表2中也可以看出采用含有1,3- 丙二醇的试剂进行白细胞分析，最后检测到的白细胞中的具体的细胞的检测数值与采用对比试剂检测到的具体的细胞的检测数值相比，其绝对偏差和相对偏差都明显小于采用其他试剂所得出的绝对偏差和相对偏差，由此得出运用含有1,3-丙二醇的试剂进行白细胞分析，能够大大的保障检测结果的准确性。
实施例2本发明中细胞保护剂Proclin300的确定
一、试剂配方
按照以下配方配置A1、B1、C1、D1、E1试剂，具体配方如下：
试剂A1
稀释液：7.5g/L Proclin150 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin150 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂B1
稀释液：7.5g/L Proclin200 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血剂：1.26g/L Proclin200 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂C1
稀释液：7.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂D1
稀释液：7.5g/L Proclin950 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin950 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂E1
稀释液：7.5g/L Proclin5000 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin5000 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
二、实验过程
1、试剂A1、B1、C1、D1、E1中溶血液与稀释液的配置过程都为以下过程：在纯化水中，该纯化水的体积为配置溶血液或者稀释液体积的五分之三，再加入稀释液或者溶血液中的其他成分，其中加入的这些成分的顺序没有限定，最后配置成稀释液或者溶血液，将配置好的溶血液或者稀释液应用于血细胞分析仪；
2、对比实验：将试剂A1、B1、C1、D1、E1分别与对比试剂的检测性能进行对比，以此筛选出所使用的试剂。
三、实验结果
采用试剂A1、B1、C1、D1、E1对白细胞进行分析的白细胞分布图分别如图6、图7、图8、图9和图10所示，对图6、图7、图8、图9和图10进行分析得出表3与表4。
表3图6-图10的数据表
试剂A1 试剂B1 试剂C1 试剂D1 试剂E1 对比试剂
WBC 11.91 11.75 11.64 12.09 12.11 11.48
LYM％ 11.5 11.9 13.3 11.8 11.4 13.5
MID％ 4.8 4.6 4.2 4.3 4 4.3
GRAN％ 83.7 83.5 82.5 83.9 84.6 82.2
RBC 4.43 4.42 4.14 4.41 4.44 4.11
HGB 117 118 115 118 119 114
HCT 35.4 35.3 32.2 35 35.6 32.1
MCV 79.9 79.9 77.7 79.4 80.1 78.1
PLT 218 221 237 228 245 233
表4试剂A1-E1与对比试剂性能比较数据表
试剂A1 试剂B1 试剂C1 试剂D1 试剂E1
WBC 3.75％ 2.35％ 1.39％ 5.31％ 5.49％
LYM％ -2.00 -1.60 -0.20 -1.70 -2.10
MID％ 0.50 0.30 0.10 0.50 0.30
GRAN％ 1.50 1.30 0.30 1.20 2.40
RBC 7.79％ 7.54％ 0.73％ 7.30％ 8.03％
HGB 2.63％ 3.51％ 0.88％ 3.51％ 4.39％
HCT 10.28％ 9.97％ 0.31％ 9.03％ 10.90％
MCV 2.30％ 2.30％ -0.51％ 1.66％ 2.56％
PLT -6.44％ -5.15％ 1.72％ -2.15％ 5.15％
注：其中LYM％、MID％、GRAN％为绝对偏差(绝对值)，其余为相对偏差
结果分析：将图8分别与图6、图7、图9和图10进行对比，可以看出运用含有Proclin300的试剂进行白细胞分析，能够将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞进行清楚准确分类，确保最后得到的检测结果的准确性，并且从表4中也可以看出采用含有Proclin300(试剂C1)的试剂进行白细胞分析，最后检测到的白细胞中的具体的细胞的检测数值与采用对比试剂检测到的具体的细胞的检测数值相比，其绝对偏差和相对偏差都明显小于采用其他试剂所得出的绝对偏差和相对偏差，由此得出采用含有Proclin300的试剂进行白细胞分析，能够显著保障检测结果的准确性。
实施例3本发明中细胞保护剂(Proclin300)的用量的确定
一、试剂配方
按照以下配方配置A2、B2、C2、D2、E2试剂，具体配方如下：
试剂A2
稀释液：0g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L 叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂B2
稀释液：0.1g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血剂：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂C2
稀释液：0.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂D2
稀释液：2.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂E2
稀释液：7.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂F2
稀释液：12.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂G2
稀释液：25g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
二、实验过程
1、试剂A2、B2、C2、D2、E2、F2与G2中溶血液与稀释液的配置过程都为以下过程：在纯化水中，该纯化水的体积为配置溶血液或者稀释液体积的五分之三，再加入稀释液或者溶血液中的其他成分，其中加入的这些成分的顺序没有限定，最后配置成稀释液或者溶血液，将配置好的溶血液或者稀释液应用于血细胞分析仪；
2、对比实验：将试剂A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2分别与对比试剂的检测性能进行对比，以此筛选出所使用的试剂。
三、实验结果
采用试剂A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2对白细胞进行分析的白细胞分布图分别如图11、图12、图13、图14、图15、图16和图17所示，对图11、图12、图13、图14、图 15、图16和图17进行分析得出表5与表6。
表5图11-图17的数据表
表6试剂A2-G2与对比试剂性能比较数据表
偏差 0g/L 0.1g/L 0.5g/L 2.5g/L 7.5g/L 12.5g/L 25g/L
WBC -2.39％ -1.34％ -1.06％ -0.28％ -0.11％ -1.78％ -0.22％
LYM％ 8.50 6.90 3.20 2.40 0.20 1.80 3.90
MID％ 7.90 6.20 0.50 2.00 0.20 3.80 2.00
GRAN％ -16.40 -13.10 -3.70 -0.40 0.00 -5.60 -5.90
RBC 2.02％ 1.57％ -0.22％ -7.64％ 0.00％ -4.04％ -5.39％
HGB 6.34％ 6.34％ 4.93％ 1.41％ 0.00％ 4.93％ 4.93％
HCT -0.89％ -2.23％ -4.02％ -5.58％ -1.56％ -2.23％ -1.56％
MCV -2.78％ -3.78％ -3.58％ -5.57％ -1.09％ -2.19％ -2.09％
PLT 17.62％ 13.52％ 10.25％ 5.33％ -2.87％ -9.43％ -5.33％
注：其中LYM％、MID％、GRAN％为绝对偏差(绝对值)，其余为相对偏差
结果分析：将图15分别与图11、图12、图13、图14、图16和图17进行对比，可以看出运用含有0.1-25g/L Proclin 300的试剂进行白细胞分析，能够将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞进行清楚准确分类，确保最后得到的检测结果的准确性，其中采用含有7.5g/L Proclin300的试剂对白细胞进行分析，效果最好，并且从表5中看出，采用含有7.5g/L Proclin 300的试剂对白细胞进行检测得出的检测结果与对比试剂最接近，并且从表6中也可以看出采用含有7.5g/L Proclin 300的试剂进行白细胞分析，最后检测到的白细胞中的具体的细胞的检测数值与采用对比试剂检测到的具体的细胞的检测数值相比，其绝对偏差和相对偏差都明显小于采用其他试剂所得出的绝对偏差和相对偏差，由此得出7.5g/L为最优值，可行值为0.1-25g/L。
实施例4本发明中细胞保护剂(1,3-丙二醇)的用量的确定
一、试剂配方
按照以下配方配置A3、B3、C3、D3、E3、F3与G3试剂，具体配方如下：
试剂A3
稀释液：0g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L 叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂B3
稀释液：0.1g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血剂：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂C3
稀释液：0.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂D3
稀释液：2.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂E3
稀释液：7.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂F3
稀释液：12.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂G3
稀释液：25g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
二、实验过程
1、试剂A3、B3、C3、D3、E3、F3和G3中溶血液与稀释液的配置过程都为以下过程：在纯化水中，该纯化水的体积为配置溶血液或者稀释液体积的五分之三，再加入稀释液或者溶血液中的其他成分，其中加入的这些成分的顺序没有限定，最后配置成稀释液或者溶血液，将配置好的溶血液或者稀释液应用于血细胞分析仪；
2、对比实验：将试剂A3、B3、C3、D3、E3、F3、G3分别与对比试剂的检测性能进行对比，以此筛选出所使用的试剂。
三、实验结果
采用试剂A3、B3、C3、D3、E3、F3、G3对白细胞进行分析的白细胞分布图分别如图18、图19、图20、图21、图22、图23和图24所示，对图18、图19、图20、图21、图 22、图23和图24进行分析得出表7与表8。
表7图18-图24的数据表
图8试剂A3-G3对比试剂性能比较数据表
注：其中LYM％、MID％、GRAN％为绝对偏差(绝对值)，其余为相对偏差
结果分析：将图22分别与图18、图19、图20、图21、图23和图24进行对比，可以看出运用含有0.1-25g/L 1,3-丙二醇的试剂进行白细胞分析，能够将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞、中性粒细胞进行清楚准确分类，确保最后得到的检测结果的准确性；从表7中看出，采用含有7.5g/L 1,3-丙二醇的试剂对白细胞进行检测得到的数据与对比试剂检测得到的数据最接近，并且从表8中也可以看出采用含有7.5g/L 1,3-丙二醇的试剂进行白细胞分析，最后检测到的白细胞中的具体的细胞的检测数值与采用对比试剂检测到的具体的细胞的检测数值相比，其绝对偏差和相对偏差都明显小于采用其他试剂所得出的绝对偏差和相对偏差，由此得出7.5g/L为最优值，可行值为0.1-25g/L。
其中溶血剂中的细胞保护剂的最优值也是采用实施例3与实施例4中的方法进行筛选。
实施例5本发明中细胞保护剂Proclin300和1,3-丙二醇混合溶液浓度的确定
一、试剂配方
按照以下配方配置A、B、C、D、E试剂，具体配方如下：
试剂A4
稀释液：0g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂B4
稀释液：0.1g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂C4
稀释液：0.5g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂D4
稀释液：2.5g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂E4
稀释液：7.5g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂F4
稀释液：12.5g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂G4
稀释液：25g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
二、实验过程
1、试剂A4、B4、C4、D4、E4、F4与G4中溶血液与稀释液的配置过程都为以下过程：在纯化水中，该纯化水的体积为配置溶血液或者稀释液体积的五分之三，再加入稀释液或者溶血液中的其他成分，其中加入的这些成分的顺序没有限定，最后配置成稀释液或者溶血液，将配置好的溶血液或者稀释液应用于血细胞分析仪；
2、对比实验：将试剂A4、B4、C4、D4、E4、F4、G4分别与对比试剂的检测性能进行对比，以此筛选出所使用的试剂的最优的浓度。
三、实验结果
采用试剂A4、B4、C4、D4、E4、F4、G4对白细胞进行分析后得出表9与表10。
表9采用试剂A4-G4对白细胞进行分析得出的数据
表10试剂A4-G4与对比试剂性能比较数据表
偏差 0g/L 0.1g/L 0.5g/L 2.5g/L 7.5g/L 12.5g/L 25g/L
WBC -5.02％ -3.50％ -2.45％ -1.52％ 0.23％ -2.22％ -4.79％
LYM％ 15.5 9.8 5.1 1.8 0.7 -1.6 13.2
MID％ 11.1 9.2 5.2 3.3 0.3 6.2 8
GRAN％ -23.6 -19.5 -12.7 -4.8 1 -6.4 -22.2
RBC 40.79％ 29.60％ 25.09％ 9.66％ -0.72％ 15.97％ 29.51％
HGB 7.46％ 5.74％ 4.78％ 3.06％ 0.96％ 2.87％ 1.53％
HCT 8.43％ 5.34％ 3.37％ 1.69％ 0.56％ 3.37％ 5.34％
MCV 11.15％ 9.70％ 6.58％ 3.12％ -0.11％ 9.03％ 7.80％
PLT 19.67％ 15.48％ 10.88％ 2.09％ -1.67％ 7.11％ 15.06％
注：其中LYM％、MID％、GRAN％为绝对偏差(绝对值)，其余为相对偏差
结果分析：从表9中看出，采用不含有Proclin300和1,3丙二醇混合溶液的试剂对白细胞进行检测得到的数据与对比试剂检测得到的数据相差最大，并且不能将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞和中性粒细胞进行清除准确的分析，采用含有7.5g/L Proclin300和1,3丙二醇混合溶液对白细胞进行检测得到的数据与对比试剂检测得到的数据最接近，并且从表10中也可以得出以上结论，因此，Proclin300和1,3丙二醇混合溶液在0.1-25g/L 这个区域内都可行，并且最优值为7.5g/L。
实施例6对比实施例
一、试剂配方
按照以下配方配置A5、B5、C5、D5、E5试剂，具体配方如下：
试剂A5
稀释液：7.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：0g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂B5
稀释液：0g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂C5
稀释液：7.5g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
试剂D5
稀释液：0g/L Proclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠0.3g/L叠氮钠
溶血液：0g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵 2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
二、实验结果
采用试剂A5、B5、C5、D5对白细胞进行分析的白细胞分布图分别如图25、图26、图27和图28所示，对图25、图26、图27和图28进行分析得出表11。
表11图25-图28的数据表
注：其中LYM％、MID％、GRAN％为绝对偏差(绝对值)，其余为相对偏差
结果分析：从图25-图28中进行分析，采用试剂D5(稀释液和溶血液中都不添加细胞保护剂)对白细胞进行分析，不能将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞和中性粒细胞进行清楚准确的分类，而采用试剂A5、B5和C5对白细胞进行分析，能够将白细胞中的淋巴细胞、中间细胞和中性粒细胞进行清除准确的分类，并且从表11中的绝对偏差和相对偏差值也可以得出以上结论。
实施例7一种试剂
一种试剂，包括稀释液，此稀释液主要成分如下：
7.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
一种试剂，包括溶血液，此溶血液成分如下：
1.26g/L Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
一种试剂，包括稀释液和溶血液，其中稀释液和溶血液主要成分如下：
稀释液：
7.5g/L 1,3-丙二醇 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：
1.26Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
实施例8一种试剂
一种试剂，包括稀释液，此稀释液主要成分如下：
7.5g/Lproclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
一种试剂，包括溶血液，此溶血液成分如下：
1.26g/L 1,3-丙二醇 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
一种试剂，包括稀释液和溶血液，其中稀释液和溶血液主要成分如下：
稀释液：
7.5g/Lproclin300 1.2g/L十二水合磷酸氢二钠 3.8g/L氯化钠 0.3g/L叠氮钠
溶血液：
1.26Proclin300 0.9g/L十二水合磷酸氢二钠 30g/L十二烷基三甲基氯化铵
2.3g/L无水硫酸钠 0.2g/L吡啶硫酮钠
实施例9一种试剂
一种溶液，包括稀释液，此稀释液主要成分如下：
25g/L Proclin300 10g/L柠檬酸 40g/L硫酸钾 2g/L异噻唑啉酮
一种试剂，包括溶血液，此溶血液成分如下：
25g/L 1,3-丙二醇 12g/L邻苯二甲酸 50g/L十烷基三甲基氯化铵
20g/L氯化钾 3g/L咪唑
一种试剂，包括稀释液和溶血液，其中稀释液和溶血液主要成分如下：
稀释液：
25g/L Proclin300 10g/L柠檬酸 40g/L硫酸钾 2g/L异噻唑啉酮
溶血液：
25g/L 1,3-丙二醇 12g/L邻苯二甲酸 50g/L十烷基三甲基氯化铵
20g/L氯化钾 3g/L咪唑
实施例10一种试剂
一种溶液，包括稀释液，此稀释液主要成分如下：
0.1g/L Proclin300和1,3-丙二醇混合溶液 0.2g/L甲酸 2g/L硫酸钾
0.1g/L叠氮钠
一种试剂，包括溶血液，此溶血液成分如下：
0.1g/L Proclin200和1,3-丙二醇混合溶液 0.5g/L苹果酸
5g/L十六烷基三甲基溴化铵 2g/L氯化钾
0.1g/L咪唑
一种试剂，包括稀释液和溶血液，其中稀释液和溶血液主要成分如下：
稀释液：
0.1g/L Proclin300和1,3-丙二醇混合溶液 0.2g/L甲酸 2g/L硫酸钾
0.1g/L叠氮钠
溶血液：
0.1g/L Proclin200和1,3-丙二醇混合溶液 0.5g/L苹果酸
5g/L十六烷基三甲基溴化铵 2g/L氯化钾
0.1g/L咪唑。

Claims (10)

1.一种细胞保护剂，其特征在于：主要由如下成分组成：
0.1-25g/L Prcolin系列产品、0.1-25g/L 1,3-丙二醇、0.1-25g/L Proclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液。
2.一种试剂，其特征在于：所述试剂包括稀释液，所述稀释液包括如权利要求1所述的细胞保护剂，优选的，所述稀释液中的细胞保护剂主要由如下成分组成：7.5g/L Prcolin系列产品、7.5g/L 1,3-丙二醇、7.5g/LProclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液，更优选的，所述稀释液中的细胞保护剂主要由如下成分组成：7.5g/Lproclin系列产品。
3.如权利要求2所述的试剂，其特征在于：所述稀释液还包括0.2-10g/L缓冲液、2-40g/L无机盐和0.1-2g/L防腐剂，优选的，所述稀释液还包括1.2g/L缓冲液，3.8g/L无机盐和0.3g/L防腐剂。
4.一种试剂，其特征在于：所述试剂包括溶血液，所述溶血液包括如权利要求1所述的细胞保护剂，优选的，所述溶血液中的细胞保护剂主要由如下成分组成：1.26g/L Prcolin系列产品、1.26g/L 1,3-丙二醇、1.26g/LProclin系列产品和1,3-丙二醇的混合溶液，更优选的，所述溶血液中的细胞保护剂主要由如下成分组成：1.26g/L 1,3-丙二醇。
5.如权利要求5所述的试剂，其特征在于：所述溶血液还包括0.5-12g/L缓冲液、5-50g/L表面活性剂、2-20g/L无机盐和0.1-3g/L防腐剂，优选的，所述溶血液还包括0.9g/L缓冲液、30g/L表面活性剂、2.3g/L无机盐和0.2g/L防腐剂。
6.如权利要求6所述的试剂，其特征在于：所述表面活性剂选自十烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵和十六烷基三甲基溴化铵。
7.如权利要求4、6、7任意一项所述的试剂，其特征在于：所述缓冲液选自苹果酸、丁二酸、邻苯二甲酸、柠檬酸、酒石酸、草酸、甲酸、磷酸、马来酸及它们各自的盐，优选的，所述无机盐选自无水硫酸钠、硫酸钾、氯化钠和氯化钾，更优选的，所述防腐剂选自异噻唑啉酮、吡啶硫酮钠、咪唑和叠氮钠。
8.一种试剂，其特征在于：所述试剂包括稀释液和溶血液，所述稀释液包括如权利要求1或2所述的细胞保护剂，所述溶血液包括如权利要求1或4所述的细胞保护剂。
9.如权利要求1-8任意一项所述的试剂，其特征在于：所述的Proclin系列产品选自Proclin150、Proclin200、Proclin300、Proclin950和Proclin5000，优选的，所述Proclin系列产品为Proclin300。
10.权利要求3-9任意一项所述的试剂在白细胞分类计数中的用途或在制备白细胞分类计数产品中的用途。
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