KR0132567B1

KR0132567B1 - 펩티드유도체

Info

Publication number: KR0132567B1
Application number: KR1019890004430A
Authority: KR
Inventors: 토루 기노; 모토아키 니시가와; 마사미 에자기; 수미오 키요토; 마사쿠니 오쿠하라; 시케히로 다가시; 사토시 오까다; 노부하라 시케마츄
Original assignee: 후지사와 도모키찌로; 후지사와 야쿠힝 고오교오 가부시기가이샤
Priority date: 1988-04-05
Filing date: 1989-04-04
Publication date: 1998-04-14
Also published as: DK161789D0; UA26845C2; DE68927759T2; EP0336230A3; JPH02204499A; CN1036795A; NO177714B; JP2551142B2; NO891389D0; GR3023353T3; KR890016061A; DE68927759D1; HU204853B; HUT49631A; RU1826970C; ES2097736T3; RU2043365C1; IL89734A0; FI891581A; IL89734A

Abstract

내용 없음.

Description

펩티드유도체

제1도는 KBr에서의 WS-9326A의 적외선 흡광 스펙트럼이고,

제2도는 CD₃OD 중에서의 WS-9326A의¹³C 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제3도는 CD₃OD 중의 WS-9326A의¹H 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제4도는 CDCl₃-CD₃OH(10:1) 중의 트리아세틸-WS-9326A의¹³C 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제5도는 CDCl₃-CD₃OH(10:1)중의 트리아세틸-WS-9326A의¹H 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제6도는 CD₃OD 중의 WS-9326B의¹³C 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제7도는 CD₃OD 중의 WS-9326B의¹H 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제8도는 CDCl₃-CD₃OD(5:1) 중의 모노아세틸-WS-9326A의¹H 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제9도는 CDCl₃-CD₃OD(5:1) 중의 디아세틸-WS-9326A의¹H 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제10도는 CD₃OD 중의 테트라히드로-WS-9326A의¹³C 핵자기 공명 스펙트럼이고,

제11도는 CD₃OD 중의 테트라히드로-WS-9326A의¹H 핵자기 공명 스펙트럼이다.

본 발명은 약리학적 활성을 갖는 신규 펩티드 유도체 및 그들의 약학적 허용염에 관한 것이다.

특히 물질 P 길항작용, 뉴로키닌 A(물질 K) 길항작용 등과 같은 약리학적 활성이 있는 신규한 펩티드 유도체 및 그들의 약학적 허용염, 그들의 제조 방법 및 이를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

따라서 본 발명의 한 가지 목적은 천식 등의 예방 및 치료에 유용한 펩티드 유도체 및 그들의 약학적 허용염을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 펩티드 유도체 및 그들의 약학적 허용염의 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 활성 성분으로 펩티드 유도체 또는 그들의 약학적 혀용염을 함유하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 천식 등의 치료 및 예방을 위한 펩티드 유도체 및 그들의 약학적 허용염의 사용 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 목적 화합물인 펩티드 유도체는 하기 일반식(I)로 표시된다.

상기 식에서, R¹은 수소 또는 아실기;

R²는 히드록시이며;

R³는 카르복시 또는 보호된 카르복시이거나, 또는 R2 및 R3가 함께 연결되어

식

로 표시되는 기를 나타내며;

R⁴는 히드록시 또는 보호된 히드록시이고;

R⁵는 히드록시 또는 보호된 히드록시이고;

R⁶은 히드록시, 보호된 히드록시 또는 저급 알콕시이고;

는 단일 결합 또는 이중결합이다.

본 발명에 있어서, 신규 펩티드 유도체 (I)는 여러 가지 방법으로 제조될 수 있다.

[합성 방법에 의한 제조]

제법 1

제법 2

제법3

제법 4

제법 5

제법 6

제법 7

제법 8

제법 9

상기 식에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및는 각각 상술한 바와 같고 Ra¹은 아실기이며

Ra⁶은 아실옥시이며

Ra³은 에스테르화된 카르복시이고

Rb¹은 저급 알케닐기로 치환된 아르(저급)알케노일,

Rc¹은 저급 알킬기로 치환된 아르(저급)알카노일,

Rb⁶은 저급 알콕시이다.

출발 화합물(II) 및 (III)은 신규한 것으로 하기 방법에 의해 제조될 수 있다.

제법 A

제법 B

상기 식에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶및

는 각각 상술한 바와 같고

R⁷은 보호된 카르복시이며

R⁸은 보호된 아미노

R⁹은 보호된 아미노

R¹⁰은 보호된 아미노

R¹¹은 보호된 카르복시이며

R¹²은 보호된 아미노

R¹³은 보호된 아미노

R¹⁴은 보호된 아미노

본 발명의 출발 및 목적 화합물을 제조하는 방법은 다음에서 설명한다.

제법 1

화합물 (Ia) 또는 그들의 염은 화합물(II) 또는 그들의 염을 사이클화 반응시켜 제조할 수 있다.

이 반응은 시클릭 펩티드 합성을 위한 통상의 방법인 혼합된 산무수물 방법, 활성화된 에스테르 방법, 카르보디이미드 방법 같은 것에 의해 실시된다.

본 반응은 알코올, 테트라히드로푸란, 에틸 아세테이트, N,N-디메틸 포름아미드, 디클로로메탄, 클로로포름 또는 반응에 역영향을 주지 않는 다른 용매같은 통상의 용매중에서 실시한다.

반응 온도는 중요하지는 않으며 이 반응은 냉각 내지 가온하에 실시된다.

제법 2

화합물 (Ia) 또는 그들의 염은 화합물(III) 또는 그들의 염을 사이클화 반응시켜 제조할 수 있다.

본 반응은 혼합된 산무수물, 활성화된 에스테르 방법, 카르보디이미드 방법 등과 같은 통상의 시클릭펩티드 합성방법에 의해 실시된다.

이 반응은 알코올, 테트라히드로푸란, 에틸 아세테이트, N,N-디메틸 포름아미드, 디클로로메탄, 클로로포름 또는 반응에 역영향을 주지 않는 다른 용매와 같은 통상의 용매중에서 실시된다.

반응 온도는 중요하지 않으며 반응은 냉각 내지 가온하에서 실시된다.

제법 3

화합물 (Ic) 또는 그들의 염은 화합물 (Ib) 또는 그들의 염을 탈아실화 반응시켜 제조할 수 있다. 이 반응의 적절한 가수분해, 환원등과 같은 통상적인 것을 포함한다.

(i) 가수분해에 대해;

가수분해는 루이스산을 포함한 산 또는 염기 존재하에 실시되는 것이 바람직하다.

적절한 염기는 알칼리 금속[즉 나트륨, 칼륨 등], 알칼리 토금속[즉 마그네슘, 칼슘 등], 그들의 수산화물 또는 탄산염 또는 중탄산염, 트리알킬아민[즉 트리메틸아민, 트리에틸 아민 등], 피콜린, 1,5-디아자 비시클로[4.3.0]-논-5-엔, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔 등과 같은 무기 염기 및 유기 염기를 포함한다.

적절한 산은 유기산[포름산, 아세트산, 프로피온산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산 등] 및 무기산[즉, 염산, 브롬산, 황산, 염화수소, 브롬화수소 등]이 해당된다. 트리할로아세트산[즉 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산 등] 등과 같은 루이스산을 사용한 제거 반응은 양이온 트래핑제(cation trapping agent)[즉 아니솔, 페놀 등]의 존재하에 실시되는 것이 바람직하다.

반응은 통산 물, 알코올[즉 메탄올, 에탄올 등], 메틸렌 클로라이드, 테트라히드로푸란, 그들의 혼합물과 같은 용매 또는 반응에 역영향을 주지 않는 다른 용매중에서 실시된다. 액체 염기 또는 산이 용매로 사용될 수 있다. 반응 온도는 중요하지 않으며 반응은 통상 냉각 내지 가온에서 실시된다.

(ii) 환원에 대해

환원은 화학적 환원 및 촉매적 환원을 포함한 통상의 방법으로 실시된다.

화학적 환원으로 사용되는 적절한 환원제는 금속(즉 주석, 아연, 철 등) 도는 금속성 화합물(즉 염화크롬, 아세트산크롬 등),

유기 또는 무기산(즉 포름산, 아세트산, 프로피온산, 트리플루오로 아세트산, p-톨루엔설폰산, 염산, 브롬산 등)의 조합물이다.

촉매적 환원에 사용되는 적절한 촉매는 백금 촉매(즉 플래티늄판, 스폰지 플래티늄, 플래티늄 블랙, 콜로이드성 플래티늄, 산화 플래티늄, 플래티늄 와이어 등), 팔라듐 촉매(즉 스폰지 팔라듐, 팔라듐 블랙, 산화 팔라듐, 탄소상의 팔라듐, 콜로이드성 팔라듐, 황산바륨상의 팔라듐, 탄산바륨상의 팔라듐 등), 닉켈 촉매(즉 환원된 닉켈, 산화닉켈, 라니닉켈 등), 코발트 촉매(즉, 환원된 코발트, 라니코발트 등), 철 촉매(즉 환원철, 라니철 등), 구리 촉매(환원 구리, 라니구리, 울만구리 등) 등이 통상적인 것들이다. 환원은 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, N,N-디메틸 포름아미드, 테트라히드로푸란 또는 그들의 혼합물 같은 반응에 역영향을 주지않는 통상의 용매중에서 실시된다. 첨가적으로 화학적 환원에 사용된 상술된 산의 경우 액체 상태이므로 용매로도 사용될 수 있다.

이 환원반응 온도는 중효하지 않으며 반응은 냉각 내지 가온하에 실시된다.

제법 4

화합물 (Ib) 또는 그들의 염은 화합물 (Ic) 또는 아미노기에서 반응성인 그것의 유도체 또는 그들의 염을 아실화 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화합물 (Ic)의 아미노기에서 반응성인 유도체로 적절한 것은 쉬프(schiff) 염기형의 아미노 또는 화합물 (Ic)와 알데히드, 케톤 등과 같은 카르보닐 화합물을 반응시킴으로써 수득된 그것의 토오토머(tautomer) 엔아민 유형 이성질체; 화합물 (Ic)와 비스(트리메틸실릴) 아세트아미드, 모노(트리메틸실릴) 우레아 등과 같은 실릴 화합물을 반응시켜 수득된 실릴 유도체; 화합물 (Ic)와 포스포러스 트리클로라이드 또는 포스겐 등과 반응하여 수득된 유도체 등이 해당된다.

본 아실화 반응에 사용된 적절한 아실화제는 통상적인 것들로 일반식(XIV)Ra1-OH(여기에서 Ra1은 상술한 것임) 또는 그것의 반응성 유도체 또는 그들의 염에 해당된다.

화합물 (XIV)의 적절한 반응성 유도체는 산 할로겐화물, 산 무수물, 활성화된 아미드, 활성화된 에스테르 등이 해당된다. 적절한 예는 산 클로라이드; 산 아지드; 치환된 인산9즉 디알킬 인산, 페닐인산, 디페닐인산, 디벤질인산, 할로겐화된 인산 등), 디알킬인산, 아황산, 티오황산, 황산, 설폰산(즉 메탄설폰산 등), 알킬 카르본산, 지방족 카르복실산(즉 피발산, 펜타논산, 이소펜타논산, 2-에틸부티르산 또는 트리클로로 초산 등) 또는 방향족 카르복실산(즉 벤조산 등)과 같은 산과 산 무수물의 혼합물; 대칭 산 무수물; 이미다졸, 4-치환된 이미다졸, 디메틸피라졸, 트리아졸 또는 테트라졸로 활성화된 아미드; 또는 활성화된 에스테르(즉 시아노메틸 에스테르, 메톡시 메틸 에스테르, 디메틸 이미노메틸[(CH₃)₂+N=CH-]에스테르, 비닐 에스테르, 프로파길 에스테르, p-니트로페닐 에스테르, 2,4-디니트로페닐 에스테르, 트리클로로페닐 에스테르, 펜타클로로페닐 에스테르, 메실페닐 에스테르, 페닐아조페닐 에스테르, 페닐티오 에스테르, p-니트로페닐티오 에스테르, p-크레실티오 에스테르, 카르복시메틸티오 에스테르, 피라닐 에스테르, 피리딜 에스테르, 피페리딜 에스테르, 8-퀴놀릴티오 에스테르 등) 또는 에스테와 N-히드록시 화합물(즉 N,N-디메틸 히드록실아민, 1-히드록시-2-(1H)-피리돈, N-히드록시 숙신이미드, N-히드록시 프탈이미드, 1-히드록시-6-클로로-1H-벤조트리아졸 등) 등의 혼합물이 해당된다. 이들 반응성 유도체는 임의로 사용되는 화합물 (XIV)의 종류에 의해 선택된다.

반응은 알코올(즉 메탄올, 에탄올 등), 아세톤, 이옥산, 아세트니트릴, 메틸렌 클로라이드, 에틸렌 클로라이드, 테트라히드로푸란, N,N-디메틸포름 아미드, 피리딘 같은 통상의 용매 또는 반응에 역으로 영향을 주지 않는 다른 용매중에서 실시된다. 이들 통상적인 용매는 물과의 혼합물중에서 사용된다.

화합물 (XIV)이 반응에서 유리산 형태 또는 그것의 염 형태로 사용될 대 반응은, N,N'-디시클로헥실 카르보디이미드, N-시클로헥실-N'-모르폴리노에틸 카르보디이미드; N-시클로헥실-N'-94-디에틸아미노 시클로헥실)카르보디이미드, N,N'-디에틸 카르보디이미드, N,N'-디이소프로필 카르보디이미드; N-이틸-N'-(3-디메틸아미노 프로필)카르보디이미드; N,N-카르보닐 비스-(2-메틸 이미다졸); 펜타메틸렌 케톤-N-시클로헥실이민; 디페닐케텐-N-시클로헥실이민; 에톡시 아세틸렌; 1-알콕시-1-클로로에틸렌, 트리알킬 포스파이트; 에틸폴리포스페이트; 이소프로필 폴리포스페이트; 포스포러스 옥시클로라이드(포스포릴 클로라이드); 포스포러스 트리클로라이드; 티오닐 클로라이드; 옥살릴클로라이드; 트리페닐포스파인; 2-에틸-7-히드록시 벤즈이속사졸륨 염; 2-에틸-5-(m-설포페닐)이속사졸륨 히드록사이드 분자내염; 1-(p-클로로벤젠 설포닐옥시)-6-클로로-1H-벤조트리아졸; 소위 N,N-디메틸 포름아미드와 티오닐 클로라이드, 포스겐, 트리클로로메틸 클로로 프로메이트, 포스포러스 옥시클로라이드 등과의 반응에 의해 제조된 빌스마이어시제 등과 같은 통상의 축합제 존재하에 실시된다.

반응은 또한 알칼리금속중탄산염, 트리(저급)알킬아민, 피리딘, N-(저급)알킬모르포린, N,N-디(저급)알킬벤질아민 등과 같은 무기 또는 유기 염기 존재중에 실시된다. 반응온도는 중요하지 않으며, 반응은 냉각 또는 실온에서 실시된다.

제법 5

화합물 (Ie) 또는 그들의 염은 화합물 (Id) 또는 그들의 염을 아실화 반응시켜 제조할 수 있다.

이 반응은 후에 기술되는 실시예 2, 4, 5, 7, 17 및 18을 참고로 설명한다.

제법 6

화합물 (If) 또는 그들의 염은 화합물 (Ia) 또는 그들의 염을 가수분해 반응시켜 제조할 수 있다.

가수분해 반응은 전술한 제법 3에서 기술한 대로 실시한다.

제법 7

화합물 (Ig) 또는 그들의 염은 화합물 (If) 도는 그들의 염을 에스테르화 반응시켜 제조할 수 있다. 이 반응에 사용되는 에스테르화제는 알코올 또는 그 반응성 동등물(즉 할로겐화물, 설포네이트, 설페이트, 디아조 화합물 등) 등과 같은 통상적인 것이 해당된다.

이 반응은 통상의 용매인 아세톤, 디옥산, 알코올, 메틸렌 클로라이드, 에틸렌 클로라이드, n-헥산, 테트라히드로포란, 초산에틸, N,N-디메틸 포름아미드, 또는 반응에 역영향을 주지 않는 다른 용매중에서 실시된다.

제법 8

화합물 (Ii) 도는 그들의 염은 화합물 (Ih) 또는 그들의 염을 환원시켜 제조할 수 있다.

본 발명에 적용할 수 있는 환원방법은 촉매적 환원이 포함된다.

촉매적 환원방법에 사용되는 적절한 촉매는 플래티늄 촉매[즉 플래티늄판, 스폰지 플래티늄, 플래티늄 블랙, 콜로이드성 플래티늄, 산화 플래티늄, 플래티늄 와이어 등], 팔라듐 촉매[즉 스폰지 팔라듐, 팔라듐 블랙, 산화 팔라듐, 탄소상의 팔라듐, 콜로이드성 팔라듐, 바륨 설페이트상의 팔라듐, 바륨 카르보네이트상의 팔라듐 등], 닉켈 촉매(즉 환원된 닉켈, 산화 닉켈, 라니닉켈 등), 코발트 촉매(즉, 환원된 코발트, 라니코발트 등), 철 촉매(즉 환원철, 라니철 등), 구리 촉매(환원 구리, 라니구리, 울만구리 등) 등과 같은 촉매가 해당된다.

반응은 아세톤, 디옥산, 알코올, 테트라히드로푸란, 에틸 아세테이트, N,N-디메틸 포름아미드, 이메틸 설폭사이드 같은 통상의 용매 또는 반응에 역영향을 주지 않는 다른 용매중에서 실시된다.

반응 온도는 중요하지 않으며 반응은 냉각 내지 가열하에 실시된다.

제법 9

화합물 (Ij) 또는 그들의 염은 화합물 (Id) 또는 그들이 염을 알킬화 반응시켜 제조할 수 있다. 이 반응은 후술하는 실시예 19에 의해 설명된다.

제법 A

화합물 (II) 또는 그들의 염은 화합물 (IV) 또는 그들의 염을 제법 A에 나타낸 합성 개요도에 의해 반응시켜 제조할 수 있다. 상기 개요도 내의 각 반응은 펩티드 합성을 위한 통상적인 방법으로 실시될 수 있다. 출발 화합물 (IV) 또는 그들의 염은 후술하는 제법에 기술된 방법 또는 그와 유사한 방법으로 제조될 수 있다.

제법 B

화합물 (III) 또는 그들의 염은 제법 (B)에 도시한 반응 개요도에 의해 화합물 (IX) 또는 그들의 염을 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 상기 개요도 내의 각 반응은 펩티드 합성을 위한 통상적인 방법으로 실시될 수 있다. 출발 화합물 (IX) 또는 그들의 염을 후술하는 제법에 기술된 방법 또는 그와 유사한 방법으로 제조할 수 있다.

[발효에 의한 생산]

본 발명의 WS-9326A와 WS-9326B는 스트렙토 마이시스 속에 속하는 스트렙토마이시스 비올라세오니거(Streptomyces violaceoniger) No. 9326 같은 WS-9326A 및/또는 WS-9326B-생산 균주를 영양배지 중에서 발효시켜 제조할 수 있다.

WS-9326A 및 WS-9326B의 생산에 사용되는 미생물의 특징은 다음에 설명된다.

미생물

WS-9326A 및 WS-9326B의 생산에 사용될 수 있는 미생물은 스트렙토마이시스 속에 속하는 WS-9326A 및/또는 WS-9326B-생산균주중 스트렙토 마이시스 비올라세오니거 9326으로 일본국 나가노군 수와시에서 수거된 토양 샘플로부터 새롭게 분리되었다.

새롭게 분리된 스트렙토 마이시스 비올라세오니거 9326호의 동결 건조된 샘플이 기탁번호 FERM BP-1667 하에 인더스트리얼 사이언스 앤드 테크놀로지의 에이전시(Agency of Industrial Science and Technology)인 퍼멘테이션 리서치 인스티튜트(Fermentation Research Institute)(일본국, 이바라키켄 305, 츄쿠바시, 히가시 1-쵸오메, 1-3)에 기탁되었다(기탁일:1988. 1. 20).

신규한 WS-9326A 및 WS-9326B의 생산은 본 명세서에 기술된 특정 유기체의 사용에 국한되는 것이 아니며, 이유기체는 단순히 설명을 목적으로만 기술된 것이다.

본 발명은 또한 WS-9326A 및 WS-9326B를 생산할 수 있는 돌연변이체를 사용하는 방법을 포함하는데 이들 돌연변이체는 천연 돌연변이체 외에도 X-레이 조사, 자외선 조사, N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘, 2-아미노퓨린 등으로의 처리와 같은 통상의 방법으로 상술한 유기체를 처리하여 생산되는 인공 돌연변이체를 포함한다

스트렙토마이시스 비올라세오니거 9326호는 하기 형태학적, 배양학적, 생물학적 및 생리학적 특성을 갖는다.

[1] 형태학적 특성 :

셔링 및 고트리브에 의해 설명된 방법(셔링, 이.비. 및 디. 고트리브:스트렙토마이시스 종의 선별화 방법. International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313-340, 1966)을 이 분류 연구에 사용했다.

형태학적 관찰연구는 오트밀 아가, 이스트-말트 추출물 아가 및 무기염-전분 아가상에서 14일동안 30℃에서 발육시킨 배양체에 대해 광학 및 전자 현미경으로 실시했다.

증식성 균사체는 발효없이 잘 발달되었다. 호기성 균사체는 단축으로 측쇄를 이루었고 한 사슬당 10 내지 30개의 포자를 갖는 포자로 구성된 나선형 사슬을 형성했다. 포자는 매끄러운 표면을 갖으며, 모양은 0.6-0.8×0.8-1.3㎛ 크기의 타원형이다. 경성과립(sclerotic granule), 포자낭 및 유주자는 관찰되지 않았다.

[2] 배양특성 :

배양특성은 상술한 바 있는 셔링 및 고트리브와 왁스맨(왁스맨, 에스.에이. ; The actinomycetes Vol. 2; Classification, identification and description of genera and species. The williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961)에 의해 기술된 10종류의 배지에서 관찰되었다.

21일동안 30℃에서 배양을 실시했다.

본 연구에 사용된 색깔명칭은 매튜엔 핸드북 오브 컬러(코르네르업, 에이.와 제이.에이치. 반쉐르; Methuen Handbook of Colour, Methun, London, 1978)에서 인용했다. 결과는 표 1에 나타내었다.

약어 : G = 생장, A = 호기성균사체, R = 뒷면 색깔, S = 용해색소

호기성 균사체는 회색 내지 회갈색이었다. 일부 콜로니는 검정색으로 습기를 갖으며 대부분의 아가 배지상에서 흡습성을 나타내었다. 증식체의 뒷면은 황갈색, 갈색 및 흑갈색이었다. 균사체 뒷면 색소는 pH에 민감하지 않다. 멜라닌계 색소 및 다른 용해성 색소는 생산되지 않았다.

세포벽 분석은 백커 등에 의한 방법(벡커, 비., 엠.피.레쉐 발리에, 알.이. 고든 및 에이취, 에이.레쉐발리에; Rapid defferentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates; Appl. Microbiol., 12,421-423, 1964) 및 야마구치(야마구치, 티. ; Comparison of the　cell wall composition of morphologically distinct actinomycetes; J. Bacteriol, 89, 444-453, 1965)에 의한 방법으로 실시했다. 균주 번호 9326의 전체 세포 가수분해물의 분석결과 LL-디아미노 피멜산이 존재함이 관찰되었다. 따라서 이 균주의 세포벽은 유형 1의 형태임이 알려졌다.

[3] 생물학적 및 생리학적 특성

생리학적 특성 및 탄소원이 이용은 각기 표 2와 3에 나타내었다.

탄소원의 이용은 프리담과 고트리브의 방법(프리담, 티.지.와 디.고트리브; The untilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination; J. Bacteriol., 56, 107-114, 1948)에 의해 조사되었다.

균주번호 9326의 형태학 및 화학적 특성으로부터 이 유기체가 스트렙토마이시스속에 속한다는 것이 명백해졌다. 균주 번호 9326은 베르게이의 매뉴얼 8판에 기술된 스트렙토마이시스 종(부캐난, 알.이.와 엔.이.기본스 : Bergey's manual of determinative bacteriology, 8판. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1974), 셔링의 아이 에스피 리포트에 기술된 스트렙토마이시스 종 [(셔링, 이.비.와 디.고트리브 ; 스트렙토마이시스의 배양형태에 대한 공동 설명. 2. 일차 연구에 의한 종에 관한 설명. Intern, J.Syst. Bacteriol. 18;69-189, 1968), (셔링, 이.비.와 디.고트리브 ; 스트렙토마이시스의 배양형태에 대한 공동 설명. 3. 일차 및 이차 연구로 부터의 첨가적인 종 설명. Intern, J. Syst. Bacteriol. 18:279-392, 1968) 및 (셔링, 이.비.와 디.고트리브; 스트렙토마이시스의 배양형태에 대한 공동설명. 4. 이차 삼차 및 4차 연구에 의한 종설명. Intern, J. Syst. Bacteriol. 19: 391-512, 1969)]. 박테리아 명칭에 관한 승인 목록에 수록된 종(스커맨, 브이.비.디.; 브이.맥고반 피.에이치, 에이.스니스; 박테리아 명칭에 대한 승인 목록 Intern. J. Syst. Bacteroil 30:225-420, 1980) 및 다른 참고문헌에 기술된 종 [(윌리엄스, 에스.티; 엠.좀펠로우, 지.앨더슨, 이.엠.에이치, 웰링톤, 피.에이치.에이.스니스와 엠.제이.색킨; 스트렙토마이시스 및 관련 속의 숫적 분류. J.Gen. Microbiol. 129:1743-1813, 1983)과 (디에즈, 에이.; 흡수성 균주의 선별화 기준. Actinomycetes ; The Boundary Microoganisms pp 183-191. 티. 아라이에 의해 1976년 편집)]에 기술된 스트렙토마이시스종과 비교되었다.

결과적으로 균주번호 9326은 스트렙토마이시스 비올라세오니거와 매우 유사한 것으로 인정되었다. 따라서 균주번호 9326은 스트렙토마이시스 비올라세오니거로 분류되었으며 스트렙토마이시스 비올라세오니거 균주번호 9326으로 명명되었다.

WS-9326A 와 WS-9326B의 생산

본 발명의 신규한 WS-9326A 와 WS-9326B는 영양배지 중에서 스트렙토마이시스 속(이를테면 스트렙토마이시스 비올라세오니거 번호 9326, FERM BP-1667)에 속하는 WS-9326A 및/또는 WS-9326B 생산균주를 배양함으로써 생산될 수 있다.

일반적으로 WS-9326A 및/또는 WS-9326B는 동화성 탄소 및 질소원을 포함하는 수용성 영양배지 중에서 바람직하게는 호기 조건하에 WS-9326A 및/또는 WS-9326B 생산균주를 배양함으로써 생산될 수 있다.(즉 진탕배양, 심부배양 등).

영양배지 중의 바람직한 탄소원은 글루코즈, 크실로즈, 갈락토즈, 글리세린, 전분, 덱스트린 등과 같은 탄수화물이다.

해당되는 다른 원료로 말토즈, 람노즈, 라피노즈, 아라비노즈, 만노즈, 살리신, 숙신산나트륨 등이 있다.

바람직한 질소원은 이스트 추출물, 펩톤, 글루텐 밀(meal), 면 시이드 밀, 콩밀, 콘스팁 액, 건조 이스트, 밀 배아, 패더 밀(feather meal), 땅콩 분말 등이 있으며 암모늄 염(즉 암모늄 니트레이트, 암모늄 설페이트, 암모늄 포스페이트 등), 우레아, 아미노산 등과 같은 무기 및 유기 질소화합물이 있다.

조합상태로 사용하는 것이 유용하기는 하나 탄소 및 질소원은 순수한 형태로 사용될 필요는 없는 데 미량의 성장인자 및 상당량의 미네랄 성분을 포함하는 덜 순수한 물질들이 사용에 적합하기 때문이다. 바람직하다면 이 배지에 나트륨 또는 칼슘 카르보네이트, 나트륨 또는 칼륨 포스페이트, 나트륨 또는 칼륨 클로라이드, 나트륨 또는 칼륨 요오드화물, 마그네슘 염, 구리 염, 코발트 염 등의 미네랄 염을 첨가할 수도 있다. 필요한 경우, 배양배지가 상당한 거품을 형성한다면, 액체 파라핀, 지방유, 플랜트유, 광물유 또는 실리콘 같은 거품방지제를 첨가할 수도 있다.

대규모적인 양으로 WS-9362A 및 WS-9326B를 생산하기 위한 조건으로는 심부 호기성 배양조건이 바람직하다.소량을 제조하기 위해서는 플라스크 또는 병 중에서 진탕 배양하거나 표면 배양 하는 것이 좋다. 또한 큰 탱크에서 생장이 실시될 때는 제조 탱크내의 접종용으로 유기체의 증식형을 사용하는 것이 WS-9326A 및 WS-9326B의 제조과정에서 생장 잠복기(growth lag)를 피할 수 있게 하므로 바람직하다. 따라서 먼저 유기체의 스포어 또는 균사체를 갖는 배양 배지 비교적 소량을 접종하고 접종된 이 배지를 배양하여 유기체의 증식성 접종체를 만들고, 그 뒤 배양된 이 증식형 접종체를 무균적으로 큰 탱크에 옮긴다. 증식성 접종체를 생산하는 비재는 대체로 WS-9326A 및 WS-9326B의 생산에 이용되는 배지나 동일하거나 다르다.

배양체 혼합물의 교반 및 탈기는 다양한 방법으로 이루어질 수 있다. 교반은 프로펠러 또는 유사한 기계적 교반장치에 의해, 또는 발효조를 회전시키거나 흔들어 줌으로써, 또는 배지를 통한 다양한 펌핑장치 또는 멸균 공기를 통과시킴으로써 제공된다. 탈기는 발효 혼합물을 통해 멸균 공기를 통과시킴으로써 실시된다.

발효는 통상 약 20℃ 내지 40℃ 사이의 온도, 바람직하게는 25-35℃에서 약 50시간 내지 150시간동안 실시되며, 발효 조건 및 스케일에 따라 변화시킬 수 있다.

생산된 WS-9326A 및 WS-9326B는 다른 종류의 공지된 생물학적 활성물질의 회수에 사용된 통상의 방법에 의해 배양배지로부터 회수할 수 있다. 생산된 WS-9326A 및 WS-9326B는 배양된 여액 및 균사체에서 발견되며, 따라서 WS-9326A 및 WS-9326B가 분리되고 여액 및 균사체로부터 정제되는 데 이때 배양된 브로쓰를 여과 또는 원심분리하여 여액 및 균사체를 얻고 감압하 농축, 동결건조, 통상의 용매에 의한 추출, pH조절, 통상적인 수지로의 처리(즉 음이온 또는 양이온 교환수지, 비이온성 흡착수지 등), 통상의 흡착제로의 처리(즉 활성화된 목탄, 규산, 실리카겔 셀룰로오즈, 알루미나 등), 결정화, 재결정 등과 같은 통상의 방법으로 정제했다.

전술된 방법에 의해 생산된 WS-9326A는 하기 물리적 및 화학적 특성을 갖는다.

(1) 형태 및 색깔 :

무색 분말

(2) 색깔 반응 :

양성 : 세륨 설페이트 반응,

요오드 증기 반응,

염화제이철

칼륨 페리시아나이드 반응,

음성 : 닌히드린 반응, 몰리쉬(Molish)반응, 염화 제이철 반응, 에르리히(Ehrlich)반응, 파울리(Pauli)반응.

(3) 용해성 :

용해 : 메탄올, 에탄올

약간 용해 : 아세톤, 에틸 아세테이트,

불용성 : 물, 클로로포름

(4) 용융점 : 187-190℃

(5) 비회전 :

[α]D²³: -84℃(C-1.0, 메탄올)

(6) 자외선 흡광 스펙트럼

메탄올 = 280㎚ (ε =34,700)

λmax

(7) 적외선 흡광 스펙트럼

이에 관한 챠트는 제 1 도에 나타내었다.

(8) 원소분석 :

실측치 : C 60.18, H6.61, N10.32

C₅₄H₆₈N₈O₁₃·H₂O에 대한 계산치:

C 60.43, H 6.76, N 10.44

(9) 얇은 막 크로마토그래피

(10) 분자식 : C₅₄H₆₈N₈O₁₃

(11) 분자량 :

FAB-MS : m/z 1037 (M+H)⁺

(12) 물질의 특성 : 산성 물질

(13)¹³C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CD₃OD) δ

관련 챠트는 제2도에 나타내었다.

(14)¹H NMR 스펙트럼 :

(400 MHz, CD₃CD) δ

관련챠트는 제3도에 나타내었다.

(15) 아미노산 분석 :

WS-9326A (5mg)을 110℃의 밀폐된 튜브에 넣고 염산(2ml)을 사용하여 20시간동안 가수분해 했다. 이 혼합물은 건조상태로 증발시켜 가수분해 생성물을 얻고 이를 히다지 839 자동 아미노산 분석기에서 분석했다.

아미노산 분석결과 :

트레오닌(2), 로이신(1), 페닐알라닌(1), 아스파르트산(1), 세린(1), 메틸아민(1) 및 암모니아(1).

WS-9326A에 대해, 제 2 도 및 제 3 도에 타나낸¹³C 및¹H 핵자기 공명 스펙트럼들은 WS-9326A 가 CD₃OD 용액중에서 최소한 2개의 안정한 배열로 존재하며 상기 (13) 및 (14)에 기술된 화학적 전이(chemical shift)가 WS-9326A의 중요한 이형태체(conformer)임을 나타내주고 있다.

전술된 방법에 의해 제조돈 WS-9326B는 하기의 물리적 및 화학적 특성을 갖는다.

(1) 형태 및 색깔 : 무색 무정형 분말

(2) 색깔 반응 :

양성 : 세륨 설페이트 반응,

요오드 증기 반응

음성 : 닌히드린 반응

(3) 용해도 :

용해 : 메탄올

약간 용해 : 에탄올

불용 : 물, 아세튼, 에틸 아세테이트, 클로로포름.

(4) 융점 : 165-170℃ (분해)

(5) 비회전 :

[α]D²³: -64℃(C-1.0, MeOH)

(6) 자외선 흡광 스펙트럼

(7) 분자식 : C₅₄H₇₀N₈O₁₃

(8) 원소분석 :

실측치 : C 59.97 H 6.87 N 10.29

C₅₄H₇₀N₈O₁₃·2H₂O에 대한 계산치:

C 60.32 H 6.94 N 10.42

(9) 분자량 :

FAB-MS: m/z 1061.6 (M+Na)⁺

(10) 얇은 막 크로마토그래피:

(11) 적외선 흡광 스펙트럼 :

= 3300, 3050, 2950, 1735, 1660, 1530, 1510, 1450, 1400, 1380, 1340, 1260, 1220, 1080, 980, 920 cm^-1

(12)¹³C 핵자기 공명 스펙트럼 :

(1000 MHz, CD3OD) ξ

관련 챠트는 제 6 도에 나타내었다.

(13)¹H 핵자기 공명 스펙트럼

(400 MHz, CD₃OD) δ

관련 챠트는 제 7 도에 나타나 있다.

WS-9326B에 대해 제 6 도 및 제 7 도에 나타낸¹³C 및¹H 핵자기 공명 스펙트럼은 WS-9326A가 CD₃OD 용액중에서 최소한 2개의 안정한 배열로 존재하며 상기(12) 및 (13)에 기술된 화학적 전이는 WS-9326B 의 주요한 이형태체가 존재함을 나타내주고 있다.

상기 물리적 및 화학적 특성의 분석 및 화학적 구조의 확인을 위한 조사결과로부터, WS-9326A 및 WS-9326B의 화학적 구조는 다음과 같이 확인되었다.

[(E)-3-[2-((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페노일]

R- : [(E)-3-[2((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페노일]

목적 화합물(I)의 적절한 약학적 허용염은 통상적인 비독성 염이며, 예를들면 알칼리 금속염(즉 리튬염, 나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염(즉 칼슘염, 마그네슘염), 암모늄염 같은 무기 염기와의 염; 유기 아민염(즉 트리에틸 아민염, 피리딘염, 피콜린염, 에탄올 아민염, 트리에탄올 아민염, 디시클로헥실 아민염, N,N'-디벤질 에틸렌 디아민염 등) 등과 같은 유기 염기와의 염; 무기산 부가염(즉, 히드로 클로라이드, 히드로 브로마이드, 설페이트, 포스페이트 등); 유기 카르복실 또는 설폰산 부가염(즉 포름산염, 아세테이트, 트리플루오로 아세테이트, 말레산염, 타르타르산염, 메탄 설포네이트, 벤젠 설포네이트, p-톨루인 설포네이트 등); 염기성 또는 산성 아미노산과의 염(즉 아르기닌, 아스파라트산, 글루탐산 등) 등과 같은 염기와의 염 또는 산 부가염을 포함한다.

화합물 (Ia)-(Ij), (II) 및 (III)의 적절한 염은 화합물 (I)에 대해 예시된 것과 같은 것중 하나이다.

본 명세서의 상기 및 연속되는 설명에서, 본 발명의 범주내에 포함되는 적절한 실시예 및 여러 정의에 대한 설명은 하기에 상세히 설명한다.

저급이란 용어는 특별한 언급이 없는 한 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함한다.

고급이란 용어는 특별한 언급이 없는 한 7 내지 20개의 탄소 원자를 포함한다. 아실옥시라는 용어내의적절한 아실 및 아실 부분은 카르바모일, 지방족 아실기 및 방향족 아실로 언급되는 방향족 고리를 포함하는 아실기 또는 헤테로시클릭 아실로 언급되는 헤테로 시클릭고리가 해당된다.

상기 아실의 적절한 예는 다음과 같이 설명된다.;

저급 또는 고급 알카노일(즉 포르밀, 아세틸, 프로파노일, 부타노일, 2-메틸프로파노일, 펜타노일, 2,2-디메틸 프로파노일, 헥사노일, 헵타노일, 옥타노일, 노나노일, 데카노일, 운데카노일, 도데카노일, 트리데카노일, 테트라 데카노일, 펜타데카노일, 헥사데카노일, 헵타데카노일, 옥타데카노일, 노나데카노일, 아이코사노일등); 저급 또는 고급 알콕시 카르보닐(즉 메톡시 카르보닐, 에톡시 카르보닐, t-부톡시 카르보닐, t-펜틸 옥시카르보닐, 헵틸옥시 카르보닐 등); 저급 또는 고급 알칸설포닐(즉 메탄설포닐, 에탄설포닐 등); 저급 또는 고급 알콕시 설포닐(즉 메톡시 설포닐, 에톡시 설포닐 등) 등과 같은 지방족 아실;

아로일(즉 벤조일, 톨루오일, 나프토일 등); 아르(저급) 알카노일[즉 페닐(저급) 알카노일(즉 페닐 아세틸, 페닐 프로파노일, 페닐 부타노일, 페닐 이소부티릴, 페닐 펜타노일, 페닐 헥사노일 등), 나프틸(저급)알케노일(즉 나프틸 아세틸, 나프틸 프로파노일, 나프틸 부타노일 등)]; 아르(저급)알케노일[즉 페닐(저급)알케노일(즉 페닐 프로페노일, 페닐 부테노일, 페닐 메타크릴로일, 페닐 펜테노일, 페닐 헥세노일 등), 나프틸(저급) 알케노일(즉 나프틸 프로페노일, 나프틸 부테노일, 나프틸 펜테노일 등), 등]; 아릴(저급)알콕시 카르보닐[즉 페닐(저급)알콕시 카르보닐(즉 벤질옥시 카르보닐 등), 등]; 아릴 옥시 카르보닐(즉 페녹시 카르보닐, 나프틸옥시 카르보닐 등); 아릴옥시(저급)알카노일 (즉 페녹시아세틸, 페녹시프로피오닐 등); 아릴글리옥실오일(즉 페닐글리옥실오일, 나프틸글리옥실로일 등); 아렌 설포닐(즉 벤젠설포닐, p-톨루엔 설포닐 등) 등과 같은 방향족 아실;

헤테로시클릭 카르보닐(즉 테오닐, 푸로일, 니코티노일, 등); 헤테로시클릭(저급)알카노일(즉 티에닐 아세틸, 티에닐 프로파노일, 티에닐 부타노일, 티에닐 판테노일, 티에닐 헥사노일, 티아졸릴 아세틸, 티아디아졸릴 아세틸, 테트라졸릴 아세틸 등); 헤테로시클릭 글리옥실오일(즉 타이졸릴 글리옥실로일, 티에닐글리옥실로일 등); 등과 같은 헤테로시클릭 아실로 여기에서 헤테로시클릭카르보닐, 헤테로시클릭(저급)알카노일 및 헤네토시클릭 글리옥실로일이란 용어에서 적절한 헤테로시클릭부분은 상세히는 산소, 황, 질소 원자 등과 같은 최소한 한 개의 헤테로 원자를 포함하는 포화 또는 불포화된 모노시클릭 또는 폴리시클릭 헤테로시클릭기를 의미한다. 그리고 특히 바람직한 헤테로시클릭기는 1 내지 4개의 질소원자를 포함하는 불포화된 3 내지 8 원소로 구성된, 더 바람직하게는 5 또는 6 원소로 구성된 헤테로 모노시클릭기 같은 헤테로시클릭기로 예를들면 피롤릴, 피롤리딜, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리딜 및 그것의 N-산화물, 디히드로피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 피리다지닐, 트리아졸릴(즉 4H-1,2,4-트리아졸릴, 1H-1,2,3-트리아졸릴, 2H-1,2,3-트리아졸릴등), 테트라졸릴(즉 1H-테트라졸릴 등), 등; 1 내지 4 개의 질소원자를 포함하는 포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6 원소로 구성된) 헤테로 모노시클릭기로 예를들면 피롤리디닐, 이미아졸리디닐, 피페리디노, 피페라지닐 등과 같은 헤테로 시클릭기; 1 내기 4개의 질소원자를 포함하는 불포화 축합된 헤테로시클릭기로 예를들면 인돌릴, 이소인돌릴, 인돌리지닐, 벤즈암다졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 인다졸릴, 벤조트리아졸릴 등과 같은 헤테로 시클릭기; 1 내지 2개의 산소원자 및 1 내지 3 개의 질소원자를 포함하는 불포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6 원소로 구성된) 헤테로 모노시클릭기로 예를들면 옥사졸릴, 이소옥사졸릴, 옥사디아졸릴(즉 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴 등)과 같은 헤테로 시클릭기; 1 내지 2 개의 산소원자 및 1 내지 3 개의 질소원자를 포함하는 포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6원소로 구성된) 헤테로 모노시클릭기로 예를들면 모르폴리닐, 시드노닐 등; 1 내지 2 개의 산소원자 및 1 내지 3 개의 질소원자를 포함하는 불포화 축합된 헤테로 시클릭기로 예를들면 벤족사졸릴, 벤족사디아졸릴 등; 1 내지 2 개의 황원자와 1 내지 3 개의 질소원자를 포함하는 불포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6원소로 구성된) 헤테로 모노시클릭기로 예를들면 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴(즉, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴 등), 디히드로 티아지닐 등; 1 내지 2 개의 황원자 및 1 내지 3 개의 질소원자를 포함하는 포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6원소로 구성된) 헤테로모노시클릭기로 예를들면 티아졸리디닐 등; 1 내지 2 개의 황원자로 구성된 포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6원소로 구성된) 헤테로모노시클릭기로 예를들면 티에닐, 디히드로디티닐, 디히드로디티오닐 등; 1 내지 2 개의 황원자 및 1 내지 3 개의 질소원자를 포함하는 불포화 축합된 헤테로 시클릭기로 예를들면 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴 등; 산소 원자를 포함하는 불포화된 3 내지 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6원소로 구성된) 헤테로 모노시클리기로 예를들면 푸릴 등; 산소원자 및 1 내지 2 개의 황원자를 포함하는 불포화된 3 내기 8 원소로 구성된(더 바람직하게는 5 또는 6원소로 구성된) 헤테로 모노시클릭기로 예를들면 디히드로옥사티닐 등; 1 내지 2 개의 황원자를 포함하는 불포화 축합된 헤테로 시클릭기로 예를들면 벤조티에닐, 벤조디티닐 등; 산소원자 및 1 내지 2 개의 황원자를 포함하는 불포화 축합된 헤테로시클릭기로 예를들면 벤족사티닐 등과 같은 헤테로시클릭기이다. 상술된 아실 부분은 저급알킬(이를테면, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸, 헥실 등); 저급 알케닐(즉 비닐, 알킬, 1-프로페닐, 1 또는 2 또는 3-부테닐, 1 또는 2 또는 3 또는 4-펜테닐, 1 또는 2 또는 3 또는 4 또는 5-헥세닐 등); 저급 알콕시(즉 메톡시, 에톡시, 프로폭시 등); 저급 알킬티오(즉 메틸티오, 에틸티오 등); 저급알킬 아미노(즉 메틸아미노 등); 시클로(저급)알킬(즉 시클로펜틸, 시클로헥실 등); 시클로(저급)알케닐(즉 시클로 헥세닐 등); 할로겐; 아미노; 보호된 아미노; 히드록시; 보호된 히드록시; 시아노; 니트로; 카르복시; 보호된 카르복시; 설포; 설파모일; 이미노; 옥소; 아미노(저급)알킬(즉 아미노메틸, 아미노에틸 등); 카르바모일옥시; 히드록시(저급)알킬(즉 히드록시 메틸, 1 또는 2-히드록시에틸, 1 또는 2 또는 3-히드록시 프로필 등); 시아노(저급) 알케닐티오(즉 시아노 비닐티오 등); 등과 같은 적절한 치환체를 동일한 것 또는 다른 것으로 한 개 내지 10개를 갖는다.

보호된 히드록시라는 용어내의 적절한 히드록시 보호성기는 상술된 바와 같은 아실, 페닐(저급)알킬(즉 벤질 등) 등이 해당된다.

적절한 보호된 카르복시는 에스테르화된 카르복시가 해당된다.

에스테르화된 카르복시의 에스테르 부분의 적절한 예는 최소한 한 개의 적절한 치화체를 갖는 저급알킬 에스테르 같은 것(메틸 에스테르, 에틸 에스테르, 프로필 에스테르, 이소프로필 에스테르, 부틸 에스테르, 이소부틸 에스테르, 3차-부틸 에스테르, 펜틸 에스테르, 헥실 에스테르, 1-시클로프로필 에틸 에스테르 등)으로 예를들면 저급 알카노일옥시(저급)알킬 에스테르[즉 아세톡시 메틸 에스테르, 프로피오닐 옥시 메틸 에스테르, 부티릴옥시메틸에스테르, 발레릴옥시메틸 에스테르, 피발로일옥시메틸 에스테르, 헥사노일옥시메틸 에스테르, 1(또는 2)-아세톡시에틸 에스테르, 1(또는 2 또는 3)-아세톡시프로필 에스테르, 1(또는 2 또는 3 또는 4)아세톡시부틸 에스테르, 1(또는 2)-프로피오닐옥시에틸 에스테르, 1(또는 2 또는 3)-프로피오닐옥시프로필 에스테르, 1(또는 2) 부티릴 옥시에틸 에스테르, 1(또는 2)-이소부티릴옥시에틸 에스테르, 1(또는 2)-피발로일옥시에틸 에스테르, 1(또는 2)헥사노일옥시에틸 에스테르, 이소부티릴옥시메틸 에스테르, 2-에틸부티릴옥시메틸 에스테르, 3,3-디메틸부티릴옥시메틸 에스테르, 1(또는 2)-펜타노일옥시에틸 에스테르 등.], 저급 알칸설포닐(저급)알킬에스테르(즉 2-메실 에틸 에스테르 등), 모노(또는 디 또는 트리)-할로(저급) 알킬 에스테르(즉 2-아이오도에틸 에스테르, 2,2,2-트리클로로에틸 에스테르 등), 저급 알콕시 카르보닐옥시(저급)알킬 에스테르(즉, 메톡시 카르보닐옥시메틸 에스테르, 에톡시 카르보닐메틸 에스테르, 2-메톡시 카르보닐옥시에틸 에스테르, 1-에톡시 카르보닐 옥시에틸 에스테르, 1-이소프로폭시 카르보닐 옥시에틸 에스테르 등.), 프탈리딜리덴(저급)알킬 에스테르, 또는(5-저급 알킬 2-옥소-1,3-디옥솔-4-일)(저급)알킬 에스테르 [즉 (5-메틸-2-옥소-1,3-디옥솔-4-일)메틸 에스테르, (5-에틸-2-옥소-1,3-디옥솔-4-일)메틸 에스테르, (5-프로필-2-오소-1,3-디옥솔-4-일)에틸 에스테르 등.]; 저급 알케닐 에스테르(즉 비닐 에스테르, 알릴 에스테르 등); 저급 알키닐 에스테르 (즉 에티닐 에스테르, 프로피닐 에스테르 등); 최소한 한 개의 적절한 치환체를 갖는 모노(또는 디 또는 트리)페닐 (저급) 알킬 에스테르 같은 최소한 한 개의 적절한 치환체를 갖는 아르(저급)알킬 에스테르(즉 벤질 에스테르, 4-메톡시벤질 에스테르, 4-니트로벤질 에스테르, 펜에틸에스테르, 트리틸에스테르, 벤즈히드릴 에스테르, 비스(메톡시 페닐)메틸 에스테르, 3,4-디메톡시벤질 에스테르, 4-히드록시-3,5-디-3차-부틸벤질 에스테르 등); 최소한 하나의 적절한 치환체를 갖는 아릴 에스테르(즉 페닐 에스테르, 4-클로로페닐 에스테르, 톨릴 에스테르, 3차-부틸페닐 에스테르, 크실릴 에스테르, 메시틸 에스테르, 큐메닐 에스테르 등); 프탈리딜 에스테르 등이 해당된다.

적절한 저급 알콕시는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소부톡시, 3차-부톡시, 펜틸 옥시, 헥시 옥시 등이 해당된다.

보호된 아미노라는 용어내의 적절한 아미노 보호성기는 상술된 것과 같은 아실 등이 해당된다.

저급 알케닐기로 치환된 아르(저급)알케노일이란 용어 내의 아르(저급)알케노일은 페닐(저급)알케노일(즉 페닐 프로페노일, 페닐 부티노일, 페닐메타크릴로일, 페닐 펜테노일, 페닐헥세노일 등), 나프틸(저급)알케노일(즉 나프틸 프로페노일, 나프틸 부테노일, 나프틸 펜테노일) 등이 해당된다.

저급 알케닐기로 치환된 아르(저급)알케노일이란 용어내의 저급 알케닐은 비닐, 알릴, 1-프로페닐, 1 또는 2 또는 3-부테닐, 1 또는 2 또는 3 또는 4-펜테닐, 1 또는 2 또는 3 또는 4 또는 5-헥시닐 등이 해당된다.

저급 알킬기를 갖는 치환된 아르(저급)알카노일이란 용어내의 적절한 아르(저급)알카노일은 페닐(저급)알카노일(즉 페닐 아세틸, 페닐 프로파노일, 페닐 부타노일, 페닐 이소부티릴, 페닐 펜타노일, 페닐 헥사노일 등), 나프틸(저급)알카노일(즉 나프틸 아세틸, 나프틸 프로파노일, 나프틸 부타노일 등) 등이 해당된다.

저급 알킬기를 갖는 치환된 아르(저급)알카노일이란 용어내의 저급 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3차-부틸, 펜틸, 헥실 등이 해당된다.

목적 화합물(I)의 바람직한 구체화는 다음과 같다.

R¹은 수소, 아르(저급)알콕시 카르보닐(더 바람직하게는 페닐(저급)알콕시 카르보닐), 저급 알카노일, 고급 알카노일(더 바람직하게는 C₁₅-C₂₀알카노일), 아로일(더 바람직하게는 벤조일), 헤테로 시클릭(저급)알카노일(더 바람직하게는 저급 알케닐기를 갖는 치환된 페닐(저급)알케노일) 또는 저급 알킬기를 갖는 치환된 아르(저급)알카노일(더 바람직하게는 저급 알케닐기를 갖는 치환된 페닐(저급)알케노일);

R²는 히드록시;

R³는 카르복시 또는 에스테르화된 카르복시(더 바람직하게는 저급 알콕시 카르보닐) 또는 R²및 R³가 함께 연결되어

인 기를 나타내며;

R⁴는 히드록시, 아르(저급)알콕시(더 바람직하게는 페닐(저급)알콕시) 또는 아실옥시(더 바람직하게는 저급 알카노일 옥시);

R⁵는 히드록시, 아르(저급)알콕시(더 바람직하게는 페닐(저급)알콕시) 또는 아실옥시(더 바람직하게는 저급 알카노일옥시);

R⁶은 히드록시, 저급 알콕시, 아르(저급)알콕시(더 바람직하게는 페닐(저급)알콕시) 또는 아실옥시(더 바람직하게는 저급 알카노일옥시);이며

는 단일결합 또는 이중결합이다.

펩티드 유도체의 생물학적 특성

펩티드 유도체(I) 및 그들의 약학적 허용염은 물질 p 길한 작용, 뉴로키닌 A(물질 K) 길항작용 등과 같은 약리학적 활성을 소유하며, 그로 인해 천식 등의 예방 및 치료에 유용하다.

이같은 약리학적 활성을 나타내는 실시예로서, 몇몇 약리적 시험자료들이 하기에 설명되었다.

(1) 방사선 리간드 결합 분석법

(a) 조악한 멤브레인 제조

뇌

암컷 비스타 래트(200g)를 사용하였으며 모든 시약은 시그마 케미칼 컴패니에서 구입했다. 모든 뇌들(4g)을 작은 조각으로 나누고 이를 8배 부피의 방냉배지 I 중에서(50mM 트리스-HCl pH7.5, 5mM MnCl₂, 0.02% BSA, 2㎍/ml 키모스타틴, 4㎍/ml 류펩틴 및 40㎍/ml 박시트라신) 울트라-디스퍼저(야마토 모델 LK-21)를 사용하여 마쇄시켰다. 마쇄물을 -20℃에서 보관하거나, 즉각 결합 시험에 사용하였다.

폐

숫컷 알비노 하틀리계 기니아 피그(600g)를 단두시켜 죽였다. 기관 및 폐를 제거하여 사용할 때까지 -80℃에서 보관했다. 이 조직(150g)들을 해동시켜 콤팩트 믹서(메츄덴 MJ-761)를 사용하여 500ml 완충액(0.25M 수크로즈, 50mM 트리스-HCl, pH7.5, 0.1mM EDTA)중에서 마쇄했다. 조직은 울트라-디스퍼저(야마토 모델 LK-21)를 사용하여 10초 간격으로 10초 동안 마쇄하여 마쇄 실시 사이마다 냉각시키면서 행했다(전체 마쇄 시간: 60초). 마쇄물은 원심분리(10분 동안 900xg)하여 조직 덩어리를 제거하고 상등액을 20분동안 1400g로 원심분리하여 펠릿을 얻었는데, 이것이 조악한 멤브레인 분획이다. 펠릿은 배지 I에 재현탁시켜 테프론 마쇄기로 마쇄한 뒤 1400xg에서 20분동안 원심분리했다. 펠릿은 -20℃에서 저장했다.

(b) 제조 멤브레인에 대한 3H-물질 p 결합

³H-물질 p(1mM, 뉴잉글랜드 뉴클리어)는 배지 I중에서 멤브레인 제조물 50μl와 함께 30분간 4℃에서 최종 부피를 250μl로하여 배양했다. 배양 말기에, 그 내용물을 세포 하비스터(브란델 M-24S)를 사용하여 와트만 GF/B 유리 섬유 필터(사용전에 3시간 동안 0.1% 폴리에틸렌이민으로 에처리)에서 여과했다. 필터는 0℃에서 세척 완충액(50mM 트리스-HCl pH 7.5) 3ml로 10회 세척했다. 방사능 활성은 팩카드 신틸레이션 카운터(팩카드 TRI-CARB 4530)내의 아쿠아졸 -2 3ml 내에서 카운팅했다.

(2) 기니아피그 기관상에서의 WS-9326A 또는 테트라히드로-WS-9326A의 효과.

기관 나선 스트립을 표준 기법에 의해 성체인 숫컷 알비노 하틀리계 기니아 피그(600g)에서 얻어, 피복시킨 30ml 유리조직 배스내에 위치시켰다. 기관 스트립의 장력은 폴리 그래프(바이오 피지오 그래프 180시스템, 산-에어 인스트루먼트)에 연결된 힘전환 변환기를 사용하여 같은 크기로 측정했다. 기관 스트립(2mm 폭 및 50mm 길이)은 따뜻한(37℃) 산소 포환된(95% O₂:5% CO₂) 티로드 용액(이 용액 조성은 NaCl 137mM(8g/ℓ) KCl 2.7mM(0.2g/ℓ), CaCl₂·2H₂O 1.8mM(0.264g/ℓ), MgCl₂·6H₂O 1.02mM(0.208g/ℓ) NaHCO₃11.9mM(1g/ℓ), NaH₂PO₄·2H₂O 0.42mM(0.066g/ℓ), 및 글루코즈 5.5mM(1g/ℓ))을 포함하는 30ml 기관 배스중에 500mg의 휴지 장력하에 현탁시켰다. 조직은 90분동안 평형시킨 뒤 WS-9326A 또는 테트라히드로-WS-9326A를 여러 가지 기관지수착제(물질 P 10-8M 및 뉴로키닌 A 10-9M) 대해 시험했다. 장력은 산-에이렉티 그래프-8S 레코더(산-에이 인스트루먼트)로 기록했다.

(3) 뉴로키닌 A 및 캡사이신에 의해 유발된 기관지 협착증에 대한 WS-9326A 또는 테트라히드로-WS-9326A의 효과

300-500g의 숫컷 하틀리계 기니아피그를 나트륨 펜토바르비탈(10mg/동물 복강내 투여)로 움직이지 못하게 하였다. 경정맥에 뉴로키닌 A(또는 캡사이신) 및 약의 투여를 위해 캐뉼라를 삽입했다. 카테테르를 기관내로 삽입하여 인공호흡이 가능하게 했다. 동물은 소형 호흡 펌프(하바드 B-34, 5ml/스트로크, 60스트로크/분)로 호흡시켰다. 폐염증에 대한 내성은 콘제트-뢰슬러 오버플루오 기법의 변형법으로 측정했다.

동근에 하기 나타낸 바와 같이 정맥 주사로 투여하고 길항근 약제(0.1% 메틸 셀룰로즈-식염수 중에서 제조)를 정맥주살 투여했다.

↑ : 동근(뉴로키닌 A 또는 캡사이신)

: 길항근(WS-9326A 또는 테트라히드로-WS-9326A)

(4) 기니아 피그내에 뉴로키닌 A로 유도된 기관지 협착증에 대한 WS-9326A 또는 테트라히드로-WS-9326A의 기관내 투여 효과

기관지 협착에 대해 WS-9326A 또는 테트라히드로 WS-9326A를 흡입시킨 효과를 시험하기 위해 WS-9326A 또는 테트라히드로-WS-9326A를 DMSO 내에 용해시키고 기관내에 투여했다. 이 방법은 상술한 것과 거의 동일하다.

표 8 및 9에 나타낸 바와 같이, WS-9326A 및 테트라히드로-WS-9326A는 상당한 효능이 있다.

*:WS-9326A은 DMSO중에 용해되었다.

**:1n몰/kg 정맥주사

*:테트라히드로 WS-9326A가 DMSO중에 용해되었다.

**:10n몰/kg 정맥내주사

(5) 급성 독성

WS-9326A의 급성 독성은 5마리와 ddr 마우스를 일정량의 투여 단위인 시험 화합물로 일회 복강내 주사하여 측정했다. WS-9326A의 LD50은 250mg/kg 이상 500mg/kg 이하(500mg/kg LD₅₀250mg/kg)였다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 제제형태로 사용될 수 있는데, 예를 들면 고체, 반고체 또는 액체 형태이며 그들의 펩티드 유도체(I) 또는 약학적 허용염을 활성성분으로하여 유기 또는 무기산 담체와 혼합되거나 또는 외부, 장내 또는 비경우적 적용에 적합한 부형제와 혼합상태로 제조된다. 활성성분은 통상의 비독성 약학적 허용 담체와 혼합되어 정제 펠릿, 캡슐, 용액, 현탁액, 유화액 또는 다른 사용이 적합한 형태로 제제된다. 사용될 수 있는 담체는 물, 글루코즈, 락토즈, 검아카시아, 젤라틴, 만니톨, 전분 페이스트, 마그네슘 트리실리케이트, 탈크, 콘스타치, 케라틴, 콜로이드성 실리카 감자 전분, 우레아 및 제제를 제조하는데 사용이 적절한 담체들로 고체, 반고체 또는 액체 형태이며 첨가 보조제, 안정제, 증량제, 및 착색제와 방향제를 사용할 수 있다. 활성 목적 화합물은 질병의 상태 또는 진행에 바람직한 효과를 얻을 수 있을 정도의 충분한 양으로 약학적 조성물내에 포함된다.

펩티드 유도체(I) 또는 그들의 약학적 허용염의 치료학적 유효량의 투여량은 치료를 요하는 각 개인 환자의 연령 및 상태에 의존하여 변화될 수 있는 반면, 일일 투여량은 활성 성분 약 0.01-1000mg, 바람직하게는 0.1-500mg 및 더 바람직하게는 0.5-100mg을 질병 치료에 사용하여 평균 일회 투여량으로 약 0.5mg, 1mg, 5mg, 10mg, 50mg, 100mg, 250mg 및 500mg을 투여한다.

본 명세서에서, 아미노산, 펩티드, 보호성기들은 본 기술 분야에 공통으로 사용되는 IUPAC-IUB (Cominission on Biological Nomenclature)에 의한 약어로 표시한다.

또한 하기 실시예 및 제조예에는 IPUAC-IUB에서 채택된 약어 이외의 다른 약어를 사용했다.

본 명세서에 사용된 약어는 다음과 같다.

Thr : L-트레오닌

Ser : L-세린

Tyr : L-티로신

Asn : L-아스파라긴

알로-Thr : L-알로트레오닌

D-Phe : D-페닐알라닌

Leu : L-로이신

Z : 벤질옥시카르보닐

Pac : 페나실

Bzl : 벤질

Boc : t-부톡시 카르보닐

Me : 메틸

Tce : 2,2,2-트리클로로에틸

Mmp : 4-메톡시메톡시페닐

Sit : t-부틸디메틸실릴

Ac : 아세틸

Et : 에틸

n-Hex : n-헥산

하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 상세히 설명할 목적으로 기술한다.

실시예 1

발효

용해성 전분(1%), 수크로즈(1%), 글루코즈(1%), 면시도 분말(1%), 펩톤(0.5%), 소이빈 밀(0.5%) 및 탄산칼슘(0.2%)(pH는 6N 수산화 나트륨으로 7.0으로 조절되었다)로 구성된 수용성 시드(seed) 배지(160ml)를 20개의 50ml 얼렌마이어 플라스크내에 각각 쏟아넣어 30분간 120℃에서 멸균시켰다.

스트렙토마이시스 비올라세오니거 9326의 슬랜트 배양체 한 루프를 각각의 배지에 접종시켜 로타리 쉐이커(220rpm, 5.1cm)상에서 30일간 30℃로 배양했다. 수득된 종균을 200ℓ 용량의 스테인레스 스틸자-발효조내에 있는 글리세린(3%), 소이빈 밀(0.5%), 소이빈 분말(1.0%), 탄산칼슘(0.2%) 및 요오드화 나트륨(NaI)(0.001%)로 구성된 멸균 발효 배지 160ℓ에 접종했다. 발효는 160ℓ/분의 통기와 200rpm의 교반 조건하에서 30℃로 3일간 실시했다. 발효 브로쓰 내의 WS-9326A의 양은 히다찌 모델 655 펌프를 사용한 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)로 정량했다. R-ODS-5(YMC-팩킹된 칼럼)로 팩킹된 스틸 칼럼(4.6mm 내경, 250mm 길이)을 1.0ml/분의 유속에서 사용했다.

사용된 이동상은 메탄올 및 물(8:2)의 혼합물이다. HPLC 분석용 샘플은 다음과 같이 제조했다: 동 부피의 아세톤을 격렬한 교반과 함께 브로쓰에 가하여 1시간 동안 방치한 뒤 원심 분리했다. 5μl의 상등액을 히다찌 모델 655 샘플 주입기로 주입했다.

분리 및 정제

동 부피의 아세톤을 교반과 함께 배양체 브로쓰(150ℓ)에 가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 방치한 뒤 여과했다. 여액을 감압하에서 80ℓ로 농축하고 1N 염산을 사용하여 pH 7.0으로 조절한 뒤 80ℓ의 초산 에틸로 추출했다. 추출물을 감압하에 건조상태로 농축시키고 실라카겔 칼럼에 적용했다(키젤겔 60, 70-230메쉬, 메르크, 3ℓ). 이 칼럼을 n-헥산(10ℓ), n-헥산-초산에틸[1:1](10ℓ), 초산 에틸(20ℓ)로 세척하고 활성 물질은 아세톤(6ℓ)을 사용하여 칼럼에서 용출시켰다. 활성 분획분을 감압하에 건조시키고 실리카겔 상에서 칼럼 크로마토 그래피시켰다(키젤겔 60, 70-230메쉬, 메르크, 1.2ℓ). 칼럼은 클로로포름-메탄올[20:1](5ℓ)로 세척하고 목적물질을 클로로포름-메탄올[10:1](6ℓ)의 용액으로 용출시켰다. 분획분을 감압하에서 건조시켜 분말을 얻었다. 이 분말을 소량 부피의 메탄올에 용해시켜 NS 겔(니혼세이 미츄, 500ml) 칼럼에 적용했다. 목적 물질은 메탄올-물[8:2](2ℓ)로 용출시키고 감압하에서 300ml로 농축한 뒤 500ml의 초산 에틸로 추출했다. 추출물은 감압하에서 건조상태로 농축시켜 분말을 얻었다(5g). 이 분말(5g)을 10ml의 메탄올(500mg/ml)에 용해시켜 D-ODS-5로 팩킹된 스틸 칼럼(20mm 내부직경, 250mm 길이)(YMC-팩킹된 칼럼)을 사용하여 HPLC에 적용한 뒤, 메탄올 및 물[8:2]의 혼합물을 사용하여 9.9ml/분의 유속으로 용출시켰다. 얻어진 활성 분획을 감압하에서 농축시켜 초산에틸로 추출했다. 추출물은 감압하에서 건조 상태로 농축시켜 WS-9326A의 순수한 백색 분말(150mg)을 얻었다.

실시예 2

피리딘(4.5ml)중의 WS-9326A(300mg)용액에 무수 초산(1.5ml) 및 4-디메틸아미노피리딘(1mg)을 가하고 이 반응 혼합물을 밤새 실온에서 방치했다. 반응 혼합물을 건조 상태로 증발시켜 유분을 얻고, 이를 예비용 TLC로 정제했다(클로로포름-메탄올(10:1)).

산출된 생성물은 디에틸 에테르에서 마쇄하여 무색 분말상태의 트리아세틸-WS-9326A(332mg)를 수득했다. 트리아세틸-WS-9326A의 물리화학적 특성은 다음과 같다.

(1) 형태 및 색깔 : 무색 분말.

(2) 색깔 반응 :

양성 : 세륨 설페이트 반응, 황산반응, 요오드 증기 반응

음성 : 닌히드린 반응

(3) 용해도 :

용해성 : 메탄올, 디메틸설폭사이드

약간 용해 : 클로로포름, 디에틸에테르

불용성 : n-헥산

(4) 융점 : 141-143℃

(5) 비 회전도 :

[α]D²³:-122℃(C=1.0, MeOH)

(6) 자외선 흡광 스펙트럼 :

(7) 분자식 : C₆₀H₇₄N₈O₁₆

(8) 원소분석 :

실측치 : C 60.19, H 6.42, N 9.27

C₆₀H₇₄N₈O₁₆·2H₂O에 대한 계산치:

C 60.09, H 6.56, N 9.34

(9) 분자량 : FAB-MS : m/z 1163.6(M+B)⁺

(10) 얇은 막 크로마토그래피:

(11) 적외선 흡광 스펙트럼

(12) 물질의 특성 :

중성 물질

(13)¹³C 핵자기공명 스펙트럼 :

(100MHz, CDCl₃-CD₃OH(10:1) δ

174.20(s), 173.23(s),

173.06(s), 171.32(s),

171.02(s), 170.84(s),

169.79(s), 169.59(s),

169.55(s), 168.52(s),

167.03(s), 166.36(s),

151.02(s), 140.74(s),

138.82(s), 138.74(s),

137.12(s), 135.23(s),

133.75(s), 131.31(s),

130.20(d), 129.96(s) x 2,

129.34(d), 129.21(d) x 2,

128.56(d) x 2, 127.24(d),

126.95(d) 126.74(d)

126.63(d) 126.50(d)

122.10(d) x 2 121.29(d)

70.99(d) 69.22(d)

63.73(t) 58.13(d)

56.10(d) 53.22(d)

52.66(d) 52.18(d)

49.93(d) 39.75(t)

39.39(q) 39.06(t)

35.57(t) 30.65(t)

24.26(d) 23.15(q)

22.79(t) 21.42(q)

21.21(q) 20.99(q)

20.83(q) 17.05(q)

16.18(q) 13.82(q)

관련 챠트는 제 4 도에 나타내었다.

(14)¹H 핵자기 공명 스펙트럼 :

(400MHz, CDCl₃-CD₃OH(10:1))δ

8.25(1H, d, J=8Hz),

8.02(1H, d, J=8Hz),

7.88(1H, d, J=16Hz),

7.86(1H, d, J=8Hz),

7.70(1H, d, J=6Hz),

7.61(1H, d, J=8Hz),

7.45(1H, d, J=7Hz),

7.32-7.15(6H, m),

7.03(2H, d, J=8Hz),

7.00-6.94(3H, m),

6.88-6.79(4H, m),

6.70(1H, s),

6.49(1H, d, J=12Hz),

5.76(1H, dt, J=12 및 7.5Hz),

5.54(1H, 넓은 시그날),

5.50-5.45(2H, m),

4.93(1H, m),

4.75(1H, m),

4.65-4.56(2H, m),

4.46(1H, dd, J=6 및 11Hz),

4.31(1H, t, J=6Hz),

4.22(1H, m),

4.18(1H, dd, J=8 및 11Hz),

3.56(3H, s),

2.90(1H, dd, J=6 및 16Hz),

2.85-2.80(2H, m),

2.56(1H, dd, J=4 및 16Hz),

2.26(3H, s),

2.00(3H, s),

1.96-1.89(2H, m),

1.85(3H, s),

1.58(1H, m),

1.35(3H, d, J=6Hz),

1.32-1.20(3H, m),

1.07(3H, d, J=6Hz),

0.84(1H, m),

0.72(3H, d, J=6Hz),

0.71(3H, t, J=7.5Hz),

0.65(3H, d, J=6Hz),

관련 챠트는 제 5 도에 타나내었다.

실시예 3

발효

용해성 전분(1%), 수크로즈(1%), 글루코즈(1%), 면시드 분말(1%), 펩톤(0.5%), 소이빈 밀(0.5%) 및 탄산칼슘(0.2%)으로 구성된 수용성 시드 배지(160ml)를 각 10개의 500ml 용량 얼렌마이어 플라스크에 쏟아넣고 30분동안 120℃에서 멸균시켰다.

스트렙토마이시스 비올라세오니거 9326의 슬랜트 배양체 한 루프로 각 배지에 접종하여 로타리 쉐이커에서 3일간 30℃로 배양했다(220rpm, 5.1cm).

수득된 종균을 미리 30분간 120℃에서 멸균시킨 500 스테인레스 스틸자-발효조내의 용해성 전분(1%), 수크로즈(1%), 글로코즈(1%), 면시드 분말(1%), 펩톤(0.5%), 소이빈 밀(0.5%), 탄산칼슘(0.2%), 아데칸올 LG-109(디포밍제, 상품명:아사히덴까 코포레이션)(0.07%) 및 실리콘 KM-70(디포밍제, 상품명:신에츄 케미칼 코포레이션)(0.05%)으로 구성된 수용성 시드 배지(160ℓ)에 접종하였다. 발효는 160ℓ/분의 통기 및 200rpm의 교반하에 1일동안 30℃에서 실시했다.

수득된 시드 배양 브로쓰(60ℓ)를 미리 30분간 120℃에서 멸균시킨 4,000 리터 용량 스테인레스 스틸자-발효조 글리세린(3.0%), 소이빈 밀(1.0%), 치킨 미트 본밀(1.0%), 탄산칼슘(0.2%), 요오드화 나트륨(0.001%), 아데칸올 LG-109(0.07%), 및 실리콘 KM-70(0.05%)으로 구성된 멸균시킨 제조 배지에 접종하고 3000ℓ/분의 통기 및 100rpm의 교반하에 4일간 30℃에서 배양했다.

발효의 진행은 히다찌 모델 655 펌프를 사용한 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 모니터했다. 가역상 실리카겔로 팩킹된 스틸 칼럼인 YMC-팩킹된 칼럼 R-ODS-5(상품명:야마무라 케미칼 인스티튜트)를 1.0ml/분의 유속에서 사용했다. 사용된 이동상은 45% 아세토니트릴 수용액이었다. HPLC 분석용 샘플은 다음과 같이 제조했다: 동 부피의 아세톤을 격렬한 교반과 함께 브로쓰에 가하고 혼합물을 1시간 동안 방치한 뒤 원심분리시켰다. 상등액 5μl를 히다찌 모델 655 HPLC의 주입기를 사용하여 주입했다.

분리 및 정제

얻어진 배양 브로쓰를 규조토(펄라이트 탑코 #34, 상품명:쇼와 케미칼 인더스트리 코포레이숀, 리미티드) (15kg)를 사용하여 여과했다. 균사 케이크를 초산에틸(1600ℓ)로 추출하고 추출물을 여과했다. 여액(1400ℓ)을 활성 탄소 칼럼(시라사기 KL, 상품명, 다께다 파마슈티칼 코포레이숀 리미티드)(200ℓ)에 적용했다. 칼럼은 초산에틸(120ℓ)로 세척하고, 초산 에틸-메탄올[5:1]로 용출을 실시했다. 활성 분획분(50ℓ 내지 1030ℓ까지의 분획분)을 합하고 감압하에서 45ℓ로 농축했다. n-헥산(120ℓ)을 교반과 함께 산출된 용액에 가했다. 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 방치하고 실리카 #600을 사용하여 여과했다(츄오 실리카 코포레이숀 리미티드)(3kg)을 사용하여 여과했다. 수득된 케이크를 n-헥산(15ℓ)으로 세척하고 목적물질을 메탄올(20ℓ)로 용출했다.

용출액을 감압하에서 건조 상태로 농축시켰다. 잔류분(500g)을 메탄올-초산-디클로로메탄[1:1:2](4ℓ)에 용해시키고 실리카겔 칼럼(키젤겔 60, 70-230메쉬, 70ℓ)에 적용했다. 이 칼럼은 메탄올-초산 디클로로메탄[1:1:2](0.5ℓ)와 디클로로메탄(25ℓ)으로 전개시켰다. 목적 물질은 디클로로메탄-메탄올[10:1]과 디클로로메탄-메탄올[8:1]로 용출시켰다. 활성 분획분을 합해 감압하에서 농축시켰다. 잔여분을 메탄올(1ℓ)로 용해시켰다. 아세토니트릴(9ℓ)을 상기 산출된 용액에 교반하면서 가했다. 이 혼합물을 1시간 동안 실온에서 방치하고, 수득된 침전을 여과하여 수거했다. 이 침전 단계를 3회 반복했다. 수득된 침전을 아세토니트릴(1ℓ)로 세척하고 건조시켜 WS-9326A의 백색 분말(190g)을 얻었다. 이 침전단계에서 얻어진 여액을 합해 감압하에서 건조상태로 농축시켰다. 잔여분(11.7g)을 80% 메탄올 수용액으로 용해시켜 얻어진 용액을 활성 탄소(300ml)의 칼럼에 통과시켰다. 이 칼럼을 80% 메탄올 수용액(1ℓ)으로 세척하고 메탄올(6ℓ)로 용출을 실시했다. 활성 분획분을 합해 감압하에서 건조 상태로 농축시켰다. 잔류분(3.4g)을 메탄올(12ml)로 용해시켰다. 산출된 용액을 50% 아세토니트릴로 평형을 유지시킨 가역상 실리카겔 칼럼(YMC로 팩킹된 칼럼 R-354 S-1S/30(ODS), Φ50×ℓ300mm×2; 제조자, 야마무라 케미칼 인스티튜트)에 적용했다. 이 칼럼을 워터스 HPLC(시스템 500)를 사용하여 50% 아세토니트릴 수용액으로 전개시켰다. WS-9326B를 포함하는 용출액(3ℓ에서 3.5ℓ까지의 분획분)을 합해 건조상태로 농축시켜 WS9326B의 백색 분말(790mg)을 산출했다.

실시예 4

피리딘(1ml)중의 WS-9326A(100mg) 용액을 무수초산(0.01ml)을 가하고 그 혼합물을 밤새 실온에서 방치했다. 이 혼합물을 증발시켜 건조하여 유분을 수득하고 이를 예비용 TLC를 사용하여 정제했다(클로로포름-메탄올:9-1). 산출된 생성물을 디에틸에테르로 마쇄하여 무색 분말 상태의 모노 아세틸-WS-9326A (55mg)를 산출했다. 모노아세틸-WS-9326A의 물리화학적 특성은 다음과 같다.

(1) 형태 및 색깔 : 무색 분말

(2) 분자식 : C₅₆H₇₀N₈O₁₄

(3) 분자량 :

FAB-MS:m/z 1079.4(M+H)⁺

(4) 얇은막 크로마토그래피 :

(5) 적외선 흡광 스펙트럼

(6) 물질의 특성:

중성 물질

(7)¹H 핵자기 공명 스펙트럼

(400MHz, CDCl₃-CD₃OD(5:1):

관련 챠트는 제 8 도에 도시했다.

실시예 5

피리딘(1ml)중의 WS-9326A(100mg) 용액에 무수 초산(0.03ml)을 가하고 그 혼합물을 실온에서 밤새 방치했다. 이 혼합물을 건조 상태로 증발시켜 유분을 수득하고 예비용 TLC(클로로포름-메탄올(9:1))로 정제하여 무색분말 상태의 디아세틸-WS-9326A(72mg)을 산출했다. 디아세틸-WS-9326A의 물리화학적 특성은 다음과 같다.

(1) 형태 및 색깔 : 무색 분말

(2) 분자식 : C₅₈H₇₂N₈O₁₅

(3) 분자량 :

FAB-MS:m/z 1121.4(M+H)⁺

(4) 얇은 막 크로마토그래피 :

(5) 적외선 흡광 스펙트럼

(6) 물질의 특성:

중성 물질

(7)¹H 핵자기 공명 스펙트럼

(400MHz, CDCl₃-CD₃OD(5:1):

관련 챠트는 제 9 도에 도시했다.

실시예 6

WS-9326A(100mg)을 메탄올(2ml)중에 용해시켜 용액을 실온에서 4시간 동안 1대기압의 수소하에서 과량의 팔라듐 블랙 존재하에 수소 첨가했다. 혼합물을 여과하고 감압하에서 여액을 건조상태로 농축시켰다. 산출된 생성물을 디에틸 에테르로 마쇄하여 무색분말 상태의 테트라히드로-WS-9326A(92mg)를 산출했다. 테트라히드로-WS-9326A의 물리화학적 특성은 다음과 같다.

(1) 형태 및 색깔 : 무색 분말

(2) 자외선 흡광 스펙트럼 :

(3) 분자식 : C₅₄H₇₂N₈O¹³

(4) 분자량 :

FAB-MS:m/z 1041.6(M+H)⁺

(5)¹³C 핵자기 공명 스펙트럼

(100MHz, CD₃OD):

관련 챠트는 제 10 도에 도시했다.

(6)¹H 핵자기 공명 스펙트럼

(400Mz, CD3OD):

관련 챠트는 제 11 도에 도시했다.

실시예 7

피리딘(10ml)중의 테트라히드로-WS-9326A(1100mg)의 용액에 무수 초산(3ml)과 4-디메틸 아미노 피리딘(3mg)을 가하고 그 반응 혼합물을 밤새 실온에서 방치했다. 이 용액을 건조상태로 증발시킨 후 얻어진 유분을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제시켰다(클로로포름-메탄올(20:1)). 산출된 순수 생성물을 디에틸 에테르로 마쇄하여 무색 분말 상태의 테트라히드로-트라아세틸-WS-9326A (998mg)를 산출했다. 테트라히드로-트리아세틸-WS-9326A의 물리화학적 특징은 다음과 같다.

(1) 형태 및 색깔 : 무색 분말

(2) 자외선 흡광 스펙트럼 :

(3) 분자식 : C₆₀H₇₈N₈O₁₆

(4) 원소 분석 :

실측치 : C 61.03, H 6.70, N 9.41

C₆₀H₇₈N₈O₁₆·H₂O에 대한 계산치:

C 60.80, H 6.80, N 9.45

(5) 분자량:

FAB-MS:m/z 1167.6(M+H)⁺

(6)¹³C 핵자기 공명 스펙트럼

(100MHz, CDCl₃): δ

173.30(s), 129.23(d),

172.96(s), 128.95(d) x 2,

172.90(s), 128.61(d) x 2,

172.81(s), 128.52(d),

170.81(s), 126.80(d),

170.56(s), 126.07(d),

170.50(s), 126.01(d),

169.46(s), 125.85(d),

169.16(s), 121.87(d) x 2,

167.48(s), 70.46(d),

167.99(s), 69.10(d),

165.52(s), 63.32(d),

150.70(s), 58.28(d),

140.84(s), 56.19(d),

138.93(s), 52.63(d),

138.58(s), 52.07(d),

136.83(s), 51.63(d),

131.04(s), 49.23(d),

129.71(d) x 2, 39.30(t),

39.17(q), 22.50(t),

38.31(t), 21.46(q),

36.52(t), 21.00(q),

35.22(t), 20.74(q),

32.60(t), 20.63(q),

31.77(t), 16.77(q),

30.74(t), 16.22(q),

27.66(t), 13.97(q),

24.08(d),

22.82(q),

(7)¹H 핵자기 공명 스펙트럼:

(400MHz, CDCl₃) δ

8.18(1H, d, J=8Hz),

7.66(1H, d, J=8Hz),

7.65(1H, d, J=8Hz),

7.29(2H, d, J=8Hz),

7.22(1H, d, J=8Hz),

7.15-7.02(12H, m),

6.96(1H, d, J=7Hz),

6.67(1H, s),

6.21(1H, 넓은 시그날),

5.51(1H, 넓은 시그날),

5.43(1H, m),

5.36(1H, 넓은 시그날 d, J=8Hz),

4.85-4.75(2H, m),

4.66-4.58(2H, m),

4.40(1H, dd, J=11 및 6Hz),

4.34(1H, m),

4.23(1H, dd, J=11 및 9Hz),

4.07(1H, m),

3.53(3H, s),

3.04-2.84(5H, m),

2.75-2.50(4H, m),

2.46(1H, dd, J=16 및 5Hz),

2.28(3H, s),

1.99(3H, s),

1.87(3H, s),

1.66-1.50(3H, m),

1.37-1.27(4H, m),

1.27(3H, d, J=7Hz),

1.19(1H, m),

1.03(3H, d, J=7Hz),

0.88(1H, m),

0.86(3H, t, J=6Hz),

0.72(3H, d, J=6Hz),

0.65(3H, d, J=6Hz),

실시예 8

트리아세틸-WS-9326A(100mg)을 메탄올(3ml)중에 용해시키고 이 용액을 실온, 수소 1 대기압 하에서 3시간동안 과량의 팔라듐 블랙(35mg) 존재하에 수소 첨가 시켰다.

혼합물을 여과하고 여액을 건조상태로 감압하에 증발시켰다. 잔류분을 디에틸에테르로 마쇄하여 무색 분말상태의 화합물(90mg)을 산출했다.

이 화합물은 모든 면에서 실시예 7에서 산출된 테트라히드로-트리아세틸-WS-9326A와 동일하다.

상기 물리화학적 특성의 분석 및 화학적 구조 확인 과정에 따르면, 트리아세틸-WS-9326A, 모노아세틸-WS-9362A, 디아세틸-WS-9326A, 테트라히드로-WS-9326A 및 테트라히드로-트리아세틸-WS-9326A의 화학적 구조는 다음과 같이 확인되었다.

트리아세틸-WS-9326A

R- : (E)-3-[2-((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페노일

모노아세틸-WS-9326A

R- : (E)-3-[2-((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페노일

디아세틸-WS-9326A

R- : (E)-3-[2-((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페노일

테트라히드로-WS-9326A

R- : [3-2-(펜틸페닐)]프로페노일

테트라히드로-트리아세틸-WS-9326A

R- : 3-(2-펜틸페님)프로파노일

실시예 9

디클로로메탄(100ml)중의 출발 화합물(a)(3.24g) 용액에 트리에틸 아민(350㎕)과 1-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드로퀴놀린(6.17g)을 실온에서 가했다. 혼합물을 실온에서 24시간동안 교반한 후 용매를 증발시켰다. 클로로포름을 잔류분에 가하고, 이 혼합물을 물, 1N 염산, 물, 중탄산 나트륨 포화 수용액 및 물로 세척했다. 혼합물을 과량의 마그네슘으로 건조하여 여과시킨 후 용매를 증발시켰다. 잔류분을 로버컬럼(크기 C)크로마토그래피시켜 클로로포름중의 3% 메탄올로 용출시켰다. 목적화합물을 포함하는 분획분을 증발시켜 목적 화합물(1)을 산출했다(1.06g).

[α]D¹⁸: -95.3°(C=0.33 CHCl₃)

IR(CHCl₃) : 1660, 1600, 1510cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 0.88(3H,d,J=6Hz), 0.93(3H,d,J=6Hz), 1.09(3H,d,J=6.5Hz), 1.37(3H,d,J=6.5), 2.82(3H,s), 4.87(2H,s), 6.93(2H,d,J=8Hz).

실시예 10

N,N-디메틸포름아미드(0.1ml)와 디클로로메탄(4ml)중의 출발 화합물(a)(42mg) 용액에 N-히드록시 숙신이미드(20.4g) 및 수용성 카르보디이미드 히드로클로라이드(8.2mg)를 가했다.

15시간 동안 실온에서 교반한 후 수용성 카르보디이미드 히드로 클로라이드(4mg)를 상기 혼합물에 1.5시간 간격으로 출발 화합물(a)이 사라질 때까지 가했다.

용매를 진공에서 제거하고 잔류분을 초산에틸(10ml)중에 용해시킨 뒤, 묽은 염산 및 물로 세척했다.

과량의 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 용매를 진공에서 제거하고, 그 잔류분을 트리플루오로 초산(1ml) 및 아니솔(0.1ml)중에 용해시켰다.

실온에서 30분동안 교반한 후 용매를 진공에서 제거하고, 그 잔류분을 트리플루오로 초산(1ml) 및 아니솔(0.1ml)중에 용해시켰다.

실온에서 16시간동안 교반한 후 용매를 진공에서 제거했다. 잔여분을 예비용 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5744)시키고 디클로로포름-메탄올(10:1)로 전개시켜 목적화합물(1) (15.2mg)을 산출했다.

IR(KBr) : 1635, 1510cm^-1

NMR(CD₃OD,§) : 6.24(1H, S)

[α]D²³: +18.0°(C=0.1 MeOH)

실시예 11

출발 화합물(a) (240mg)를 포름산 및 에탄올(1:24, 10ml) 혼합물중의 팔라듐(200ml)으로 4psi에서 7시간동안 수소 첨가시켰다.

혼합물을 여과한 후, 여액을 증발시켜 목적화합물(1)(140mg)을 산출했다.

IR(KBr): 1730, 1650, 1510cm^-1

[α]D²¹: -21.04°(C=0.1 MeOH)

실시예 12

출발물질 화합물(a) (22mg)를 질소기체 백내의 불화수소-피리딘(0.8ml)와 아니솔(0.2ml)의 용액에 용해시켰다. 1 시간동안 실온에서 교반한 후 몇 조각의 얼음을 혼합물에 가하고 용액을 중탄산 나트륨 수용액으로 pH8로 조정했다. 이 혼합물을 다이온 HP-20의 칼럼(10ml)상에 올리고 물로 세척했다. 생성물을 메탄올로 용출시키고 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5715, 클로로포름-메탄올-물(3:1:0.1, V/V))시켜 정제하여 목적 화합물(1) (13.0mg)을 산출했다.

IR(KBr) : 1635, 1510cm^-1

NMR(CD3OD,δ) : 7.05(1H,s)

[α]D²⁰: -90.6°(C=0.1 MeOH)

TLC : Rf=0.35 [Merck Art 5715, CHCl3-MeOH-H2O (3:1:0.1)]

실시예 13

R-:(E)-3-[2-((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페노일

디클로로메탄(1.5ml)중의 출발 화합물(a) (6.0mg), 비스(디메틸실릴)아세트아미드(30㎕) 및 N,N-디메틸포름 아미드(0.3ml)용액에 출발 화합물(b) (0.4ml)의 0.02M용액을 가했다. 1시간동안 실온에서 교반한 후, 이 혼합물에 4-디메틸아미노피리딘(0.1mg)을 가했다. 출발 화합물(b)을 출발 화합물(a)가 사라질 때까지 30분 간격으로 혼합물에 가했다. 희석된 염산을 혼합물에 가하고, 유기층을 물로 세척했다. 진공에서 증발시킨 후, 잔류분을 제조용 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5715)시키고 클로로포름-메탄올-물(65:25:4 V/V)로 세척하여 목적 화합물(1) (0.2mg)을 얻었다.

이 화합물은 실시예 1에서 산출된 WS-9326A와 동일하다.

실시예14

R-:스테아로일(옥타데카노일)

피리딘(1ml)중의 출발 화합물(a)(11mg)의 용액에 디클로로메탄(0.6ml)중의 출발 화합물(b) 0.02M 용액을 가했다. 실온에서 1시간동안 교반한 후 출발 화합물(b)를 출발 화합물(a)가 사라질 때까지 1시간 간격으로 혼합물에 가하고 용매를 진공중에서 제거했다. 잔류분을 초산에틸(10ml)중에 용해시켜 묽은 염산 및 물로 세척했다. 과량의 황산 마그네슘으로 건조시킨 뒤 용매를 진공중에서 제거했다. 잔류분을 예비 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5715)시켜 클로로포름-메탄올-물(3:1:0.1 v/v)로 전개하여 목적 화합물(1) (2.0mg)을 산출했다.

IR(KBr) : 1640,1510cm^-1

실시예15

R-:(E)-3-[2-((Z)-1-펜티닐)페닐]프로페노일

피리딘(1ml)중의 출발 화합물(a) (49.7mg)용액에 질소 대기하에서 디클로로메탄(1.2ml)중의 출발 화합물(b) 0.1M 용액을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에 초산 에틸을 가하고 이 혼합물을 물. 7% 초산, 물 및 염화나트륨의 포화수용액을 세척했다. 과량의 황산 마그네슘으로 건조시킨후 여과하여 증발시키고 그 잔여분을 예비 얇은 막 크로마토그래피(0.5mm×2)시켜 클로로포름중의 20% 메탄올로 전개해서 목적 화합물(1) (20.6mg)을 산출했다. 이 화합물은 실시예 3에서 산출된 WS-9326B와 동일하다.

실시예16

하기 화합물은 실시예 15의 방법과 유사한 방법으로 산출되었다.

(1)

R-:벤조일

[α]D²¹: -45.8 (C=0.74, MeOH)

mp : 176-178 C

TLC : Rf = 0.48 [Merck Art 5715, CHCl₃-MeOH(5:1)]

IR(KBr) : 1720(쇼울더), 1655, 1640cm^-1

(2)

R- : 2-(2-티에닐)아세틸

[α]D²³: -16.8 (C=0.73, MeOH)

mp : 160-163 C

TLC : Rf = 0.24[메르크제품 5715, CHCl₃-MeOH(5:1)]

IR(KBr) : 1720(쇼울더), 1650cm^-1

(3)

R- : 아세틸

[α]D²¹: -37.4 (C=0.72, MeOH)

mp : 231-233 C

TLC : Rf = 0.41 [메르크제품 5715, CHCl₃-MeOH(5:1)]

IR(KBr) : 1720(쇼울더), 1650cm^-1

실시예17

피리딘(1ml)중의 출발 화합물(a) (100mg) 용액에 무수초산(11㎕)을 가하고 이 혼합물을 실온에서 밤새 방치했다.

혼합물을 건조상태로 증발시켜 예비 TLC(CHCl₃-MeOH(9:1))로 정제하여 목적 화합물(1) (52mg)을 산출했다.

TLC : Rf = 0.17 [메르크제품 5715, CHCl₃-MeOH(10:1)]

IR(Nujol) : 3300,1760,1730,1650,1530,1510,1200,1160,1070,910cm^-1

실시예18

R- : 3-(2-펜닐페닐)프로파노일

피리딘(1ml)중의 출발 화합물(a)(100mg)용액에 무수초산(25μl)를 가하고 그 혼합물을 실온에서 밤새 방치했다.

혼합물을 건조상태로 증발시켜 얻어진 유분을 예비TLC(CHCl₃-MeOH(9:1))로 정제하여 목적 화합물을(1)(78mg)을 산출했다.

TLC : Rf = 0.36 [메르크제품 5715, CHCl₃-MeOH(10:1)]

IR(Nujol): 3300,1760,1740,1650,1540,1510,1300,1220,1200,1170,1050,920cm^-1

실시예19

R- : 3-(2-펜틸페닐)프로파노일

메탄올(3ml)중의 출발 화합물(a)(0.21g)용액에, 디에틸에테르 중의 디아조메탄 용액(3ml)을 가했다. 5분 동안 교반후 용매를 진공중에서 제거했다. 잔류분을 예비 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5744)시켜 클로로포름중의 20% 메탄올로 전개시킴으로써 목적 화합물(1)을 (45mg)산출했다.

IR(Nujol) : 3300, 1730, 1645, 1530, 1510 cm^-1

실시예20

R- : 3-(2-펜틴페닐)프로파노일

메탄올(15ml)중의 출발 화합물(a) (1.0g)용액에 0 C에서 1 N-수산화나트륨(5ml)를 가했다. 1시간동안 교반한후, 1N-염산(5ml)을 용액에 가했다. 용매를 진공에서 제거하여, 그 잔여분을 초산에틸(20ml) 및 희석염산(10ml)의 혼합물에 용해시켰다. 유기층을 함수로 세척하고 과량의 황산 마그네슘으로 건조시킨 뒤 진공에서 증발시켰다. 수득된 고체를 초산 에틸로 세척하여 목적 화합물(1) (0.95g)을 얻었다.

IR(Nujol) : 3300, 1710(쇼올더), 1645, 1510cm^-1

실시예21

R- : 3-(2-펜틴페닐)프로파노일

메탄올(2ml)과 초산 에틸(20ml)중의 출발 화합물(a) (1.0g) 용액에 n-헥산중의 10% 트리메틸실릴디아조메탄 용액(2ml)을 가했다. 5분동안 교반한 후 용매를 진공하에서 제거했다. 잔류분을 실리카겔 컬럼(메르크7734)(20g)에 올리고 클로로포름-메탄올(10:1 v/v)로 용출시켜 고체상태의 목적 화합물(1)(0.55g)을 얻었다.

IR(Nujol) : 3300, 1735, 1645, 1530, 1510 cm^-1

제조예1

Z-Thr → Z-Thr-OPac

출발 화합물(a) 목적화합물(1)

출발 화합물(a)(2.53g), 메탄올(10ml) 및 물(3ml)의 용액에 탄산세슘(1.63g)을 가했다.

용매를 제거한후, 잔여분을 N,N-디메틸포름아미드중에 용해시켜 혼합물을 페나실 브로마이드(1.92g)에 가했다. 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 용매를 증류제거하고 잔류분을 초산에틸에 용매시켜 물로 세척했다. 혼합물을 과량의 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 뒤, 용매를 증발시켜 결정형의 목적 화합물(1)(3.7g)을 산출했다

[α]D²⁰: -20.3 (C=1, CHCl₃)

IR(Nujol) : 1745, 1690, 1545cm^-1

제조예2

디클로로메탄(80ml) 중의 출발 화합물(b)(1.48g)와 출발 화합물(b)(2.5g)의 용액에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드(0.764g)와 4-디메틸아미노피리딘(0.488g)을 0 C에서 가했다. 6시간동안 교반한 후 용매를 증발시켰다.

잔류분을 초산에틸에 용해시키고 혼합물을 물, 1N-염산, 중탄산나트륨 포화수용액 및 물로 세척했다.

과량의 황산 마그네슘으로 건조하고 여과한후 용매를 증발시켜 목적 화합물(1)(2.58g)을 얻었다.

[α]D²⁰: +9.76 (C=0.3, CHCl₃)

IR(CDCl₃) : 1755, 1720, 1705, 1505 cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 1.37(3H, d, J=6Hz), 1.45(9H, s), 3.70(1H, m), 3.88(1H, m),

4.52(2H, m), 4.23(1H, m), 5.17(2H, s), 5.37(2H, s)

제조예3

90%의 초산 수용액(100ml)중의 출발 화합물(a) 용액에 교반하에서 아연 분말(11g)을 가하고 이 혼합물을 빙냉하에서 2시간 및 실온에서 1시간 동안 교반했다.

혼합물을 여과한 후, 여액을 농축하고 초산을 사용하여 pH2로 조절한 뒤 초산에틸로 추출했다.

추출물을 과량의 황산 마그네슘으로 건조시켜 여과한 뒤, 용매를 증발시켰다. 잔여분을 석유 에테르로 세척하여 목적 화합물(1)(5.4g)을 산출했다.

NMR(CDCl₃,δ):1.30(3H,d, J=6Hz),1.40(9H,s),3.60(1H,m),3.82(1H, m)

제조예4

디클로로메탄(60ml)중의 출발화합물(a)(7.7g) 용액에 2,2,2-트리클로로에탄올(2.105ml), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드(4.2g)와 4-디메틸아미노피리딘(244mg)을 0 C 교반하에서 가하고 이 혼합물을 0 C에서 1시간동안 교반하고 이를 증발시켰다. 잔류분을 초산에틸에 용해시키고 물, 1N염산, 물 및 중탄산 나트륨의 포화 수용액으로 세척했다.

혼합물을 과량의 황산 마그네슘으로 건조시켜 여과한 뒤, 여액을 증발시켜 목적 화합물(1)(9.37g)을 산출했다.

[α]D¹⁹: -29.84 (C=0.4, CHCl₃)

IR(CHCl₃) : 1755, 1690, 1610, 1510cm^-1

제조예5

발화합물(a)(9.3g)을 0℃로 냉각하여 트리플루오로초산(15ml)에 가했다. 혼합물을 0 C에서 30분동안 교반한 뒤 증발시켰다. 잔류분을 초산 에틸에 용해시켜 물, 중탄산나트륨 포화수용액 및 물로 세척했다. 과량의 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 용매를 증류 제거시켜 목적 화합물(6g)을 얻었다.

NMR(CDCl₃, δ) : 2.45(3H, s), 3.03(2H, m), 3.62(1H, t, J=7Hz), 4.75(2H, m), 5.06(2H, s)

6.94(2H, d, J=8Hz), 7.15(2H, d, J=8Hz), 7.3-7.5(5H, m)

제조예6

디클로로메탄(40ml)중의 출발 화합물(a)(4.07g)과 출발 화합물(b)(4.70g)의 용액에 1-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드로퀴놀린(2.8g)을 가하고 그 혼합물을 24시간동안 실온에서 교반했다. 용매를 증발시키고 잔류분을 초산 에틸에 용해시킨 뒤, 1N염산, 물, 중탄산 나트륨의 포화수용액 및 물로 세척했다.

과량의 황산 마그네슘으로 건조시켜 여과한 뒤 용매를 증발시켜 목적 화합물(1) (4.35g)을 얻었다.

[α]D²⁰: -27.88°(C=0.12, CHCl₃)

IR(CHCl₃) : 1750, 1710, 1655, 1510cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 1.18(3H, d, J=6Hz), 1.36(9H, s), 2.92(3H, s), 4.69(2H, s), 4.91(2H,s)

5.01(2H, s), 6.80(2H, s, J=8Hz), 7.02(2H, d, J=8Hz)

제조예7

출발 화합물(a)(4.35g)를 0°C로 냉각시켜 트리플루오로초산(20ml)에 가했다. 이 혼합물을 0°C에서 45분동안 교반한 후 용매를 증발시켰다. 잔류분을 초산 에틸에 용해시키고 중탄산 나트륨의 포화수용액 및 물로 세척했다. 이 용액을 과량의 황산 마그네슘으로 건조시켜 여과한 후, 용매를 증발시켰다. 잔류분을 디클로로메탄(100ml)중에 용해시켰다.

상기용액에 Boc-Asn(1.2g), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드(990mg)와 1-히드로 벤조트리아졸(700mg)을 가했다. 이 혼합물을 0°C에서 4시간동안 교반하고 1N 염산, 물, 중탄산 나트륨의 포화 수용액 및 물로 세척하고 용매를 증발시켜 목적 화합물(1)(4.75g)을 산출했다.

[α]D²⁰: -15.7°(C=0.1, CHCl₃)

IR(KBr) : 1740, 1690, 1645, 1510cm^-1

NMR(CDCl₃,δ) : 1.25(3H, d, J=6Hz), 1.43(9H, s), 3.00(3H, s), 2.55(1H, m), 2.80(1H, m), 3.05(1H, m), 3.37(1H, m), 3.62(1H, m), 3.82(1H, m), 6.88(2H, d, J=8.5Hz), 7.09(2H, d, J=8.5Hz)

제조예8

목적 화합물(1)은 제조예7과 유사한 방법에 의해 출발 화합물(a)를 반응시켜 얻었다.

[α]D²⁰: -13.04°(C=0.11, CHCl₃)

IR(KBr) : 1740, 1700, 1655, 1510cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 1.18, 1.27(각각 3H, d, J=6Hz), 1.43(9H, s), 2.52(1H), 2.80(1H, m)

3.00(3H,s), 3.36(1H.m), 4.99(2H,s), 6.87(2H,d,J=8Hz), 7.10(2H,d,J=8Hz)

제조예9

목적화합물(1)은 출발 화합물(a)를 제조예 7과 유사한 방법으로 반응시켜 산출했다.

[α]D²¹: -15.19°(C=0.1, CHCl₃)

IR(KBr) : 1740, 1650, 1635, 1510cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 1.11(3H,d,J=6Hz), 1.27(2H,d,J=6Hz), 1.33(9H,s), 3.01(3H,s), 4.72(2H.s)

4.98(2H.s), 6.87(2H,d,J=8Hz), 7.10(2H,d,J=8Hz)

제조예10

목적 화합물(1)은 제조예 7과 동일한 방법에 의해 출발 화합물(a)를 반응시켜 산출했다.

[α]D²¹: -19.07°(C=0.1, CHCl₃)

IR(KBr) : 1740, 1635, 1510 cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 0.81(6H,m), 1.13, 1.28(각각 3H,d,J=6Hz), 1.40(9H,s), 3.02(3H,s), 4.96(2H,s), 6.87, 7.09(각각 2H,d,J=8Hz)

제조예11

90% 초산 수용액(80ml)중의 출발 화합물(a)(4.2g)의 용액에 0°C에서 아연 분말(9g)을 가하고 그 혼합물을 2시간동안 0°C 및 1시간동안 실온에서 교반했다.

혼합물을 여과한 후 여액을 농출 시켰다. 클로로포름을 잔여분에 가하고 혼합물을 1N염산 및 물로 세척했다.

혼합물을 과량의 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 용매를 증발시켰다.

잔류분을 실리카겔(150g) 상에서 컬럼 크로마토그래피시켜 클로로포름중의 2% 메탄올 및 클로로포름중의 8% 메탄올로 용출을 실시했다.

목적 화합물을 포함하는 분획분을 증발시켜 목적화합물(1) (3.4g)을 산출했다.

[α]D²¹: -23.42°(C=0.1, MeOH)

IR(KBr) : 1635, 1510cm^-1

제조예12

출발화합물(a) (3.4g)을 0°C로 냉각시켜 트리플루오로초산(20ml)에 가했다.

혼합물을 1시간동안 0°C에서 교반한 후 용매를 증발시켰다. 잔류분을 디옥산중의 염화수소용액에 용해시키고 이를 증발시켰다. 잔류분을 클로로포름중에 용해시켜 물로 세척했다. 용액을 과량의 황산마그네슘으로 건조시켜 여과한 후 용매를 증발시켜 목적 화합물(1) (3.27g)을 얻었다.

[α]D²¹: -18.87°(C=0.12, MeOH)

IR(KBr) : 1650, 1510cm^-1

제조예13

에탄올(500ml)중의 수산화칼륨(26.8g)용액에 글리신(14.6g) 및 4-메톡시메톡시벤즈 알데히드(48.5g)을 실온에서 가했다. 19시간동안 교반한 후 용매를 진공에서 제거했다. 잔여분을 물에 용해시키고 염산으로 산성화시켰다. 이 용액을 초산에틸로 세척하고 중탄산나트륨을 사용하여 pH6.0으로 조절했다. 백색고체가 침전되며, 이를 수거하여 O-메톡시메틸-β-히드록시티로신(9.2g)을 얻었다.

mp : 164-166°C

IR(KBr) : 1610cm^-1

제조예14

1N 수산화나트륨(250ml)중의 O-메톡시-β-히드록시티로신 용액에 디메틸 설페이트(16.5g)을 가했다. 20분동안 90°C에서 교반한 후 이 용액을 얼음배스중에서 희석된 염산을 사용하여 산성화시켰다. 산성용액을 디에틸에테르로 세척하고 1N 수산화나트륨을 사용하여 pH 6.0으로 조절했다. 증발후 고체를 여과로 수거하여 O-메톡시메틸-β-히드록시티로신(5.2g)을 얻었다.

mp : 177-178°C

IR(KBr) : 3100, 1600cm^-1

제조예15

디클로로메탄(150ml)중의 O-메톡시메틸-β-히드록시티로신(15.1g)과 비스(트리메틸실릴)아세트아미드(25ml)용액에 디클로로메탄(50ml)중의 2-니트로페닐설페닐클로라이드(11.2g) 용액을 가했다. 0°C에서 2시간 동안 교반한 후, 비스(트리메틸실릴)아세트아미드(10ml)와 2-니트로페닐설페닐 클로라이드(5.6g)를 상기 용액에 가했다. 이 혼합물을 실온에서 3시간동안 교반하고 1N 수산화나트륨(200ml)에 가했다. 유기층을 물(300ml)로 세척해 수용액을 합했다. 수용액을 묽은 염산으로 산성화 시킨 후 생성물을 초산에틸(300ml)로 추출하여 그 추출물을 물(100ml × 3)로 세척했다. 용액을 과량의 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 용매를 진공에서 제거시켜 O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-히드록시티로신(20.5g)을 얻었다.

mp : 59-60°C

IR(KBr) : 3400, 1700cm^-1

제조예16

초산에틸(100ml)중의 O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-히드록시티로신(20.0g)의 용액에 디에틸에테르(80ml)중의 디아조메탄을 가했다. 10분동안 교반한후 용매를 진공에서 제거했다. 잔류분을 실리카겔 칼럼(메르크7734:500g)에 올리고 클로로포름으로 용출시켜 O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-히드록시티로신 메틸에스테르(트레오 이성질체 : 8.82g, 에리트로 이성질체 : 6.63g)를 산출했다.

트레오 이성질체

IR(필름) : 3500, 2950, 1735 cm^-1

TLC : Rf = 0.40 [ 메르크 제품 5715, AcOEt-n-Hex(1:1)]

에리트로 이성질체

IR(필름) : 3500, 2950, 1735 cm^-1

TLC : Rf = 0.31 [ 메르크 제품 5715, AcOEt-n-Hex(1:1)]

제조예17

디클로로메탄(30ml)중의 O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-히드록시티로신메틸에스테르(에리트로 이성질체)(3.85g)의 용액에, 트리에틸아민(1.38g), 4-디메틸아미노피리딘(0.45g) 및 벤조일 클로라이드(1.92g)을 가했다. 실온에서 16시간 교반한 후, 3-디메틸 아미노프로필 아민(3.3g)을 혼합물에 가하고 용매를 진공중에서 제거했다. 잔류분을 초산에틸(30ml) 중에 용해시켜 묽은 염산, 중탄산나트륨 수용액 및 물로 세척했다. 증발시킨 후, 잔류분을 실리카겔 칼럼상(메르크 7734, 150g)에 올리고, n-헥산-초산에틸(5:2, v/v)로 용출시켜 O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-벤조일옥시티로신 메틸에스테르(에리트로 이성질체 : 4.49g)를 산출했다.

IR(필름) : 2950, 1740 cm^-1

TLC : Rf = 0.23 [ 메르크제품 5715, 초산에틸:n-헥산 =1:2 ]

제조예18

하기화합물은 제조예17과 유사한 방법에 의해 얻어졌다.

O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-벤조일옥시티로신 메틸에스테르(트레오 이성질체)

mp : 114-115°C

IR(CHCl₃) : 2950, 1740cm^-1

TLC : Rf = 0.26[ 메르크제품 5715, 초산에틸:n-헥산 =1:2 ]

제조예19

디클로로메탄(50ml)중의 O-메톡시메틸-N-메틸-N-(2-니트로페닐티오)-β-벤조일옥시티로신 메틸에스테르(트레오 이성질체)(4.94g) 용액에 티오페놀(4.8ml)과 트리플루오르초산(2.5ml)을 0°C에서 가했다. 30분동안 교반한 후, 중탄산나트륨 수용액을 혼합물에 가했다. 유기층을 중탄산 나트륨 수용액 및 함수로 세척했다. 증발 시킨 후 잔류물을 실리카겔 칼럼(메르크 7734, 100g)에 올리고 클로로포름중의 5% 메탄올로 용출시켜 O-메톡시메틸-N-메틸-β-벤조일옥시티로신메틸에스테르(트레오 이성질체)(0.32g)가 얻어졌다.

TLC : Rf = 0.31 [ 메르크제품 5715, AcOEt:n-헥산(1:1)]

제조예20

하기 화합물은 제조예19의 방법과 유사한 방법으로 얻어졌다.

O-메톡시메틸-N-메틸-β-벤조일옥시티로신 메틸 에스테르(에리트로 이성질체)

TLC : Rf = 0.25 [ 메르크제품 5715, AcOEt:n-헥산(1:1)]

제조예21

디클로로메탄중의 (50ml) N-벤질옥시카르보닐-L-트레오닌(3.7g)과 O-메톡시메틸-N-메틸-β-벤조일옥시티로신 메틸 에스테르(트레오 이성질체)(3.1g) 용액에 에틸 1,2-디히드로-2-에톡시-1-퀴놀린 카르복실레이트(2.9g)를 가했다. 실온에서 20시간동안 교반한 후 용매를 진공에서 제거했다. 잔류물은 초산에틸(50ml)에 용해시키고 묽은 염산, 중탄산나트륨 수용액 및 물로 세척했다. 증발시킨후 잔류분을 실리카겔 컬럼(메르크 7734, 100g)에 올려 n-헥산-초산에틸(1:1 v/v)로 용출시켜 N-CN-벤질옥시카르보닐-L-트레오닐-O-메톡시메틸-N-메틸-β-벤조일옥시티로신 메틸에스테르(트레오 이성질체)(2.04g)를 얻었다.

IR(필름) : 3400, 2950, 1740(쇼울더), 1720 cm^-1

TLC : Rf = 0.36 (메르크제품 5715, MeOH:CHCl₃= 3:97)

제조예22

하기 화합물은 제조예 21과 유사한 방법으로 산출되었다.

N-(N-벤질옥시카르보닐-L-트레오닐)-O-메톡시메틸-N-메틸-β-벤조일옥시티로신 메틸 에스테르(에리트로 이성질체)IR(필름) : 2950, 1740, 1730(쇼울더) cm^-1

TLC : Rf = 0.23 [ 메르크제품 5715, AcOEt:n-헥산(1:2)]

제조예23

목적 화합물(1)

톨루엔(20ml)중의 β-벤조일옥시-N-(N-벤질옥시카르보닐-L-티레오닐-O-메톡시메틸-N-메틸티로신 메틸 에스테르(트레오 이성질체)(1.20g) 용액에 1,8-디아조바이시클로[5,4,0]운데크-7-엔(0.30g)을 가했다. 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 7% 염산(10ml)을 혼합물에 가했다. 유기층을 물 및 중탄산 나트륨 수용액으로 세척했다. 유기 용액을 과량의 황산마그네슘으로 건조시킨 후, 용매를 진공에서 제거하여 목적 화합물(1)(0.95g)을 얻었다.

IR(필름) : 3400, 2950, 1720cm^-1

[α]_D ²²: -7.7°(C=0.64, MeOH)

목적화합물(1)은 β-벤조일옥시-N-(N-벤질옥시카르보닐-L-티레오닐-O-메톡시메틸-N-메틸티로신 메틸에스테르(트레오 이성질체)대신에 β-벤조일옥시-N-(N-벤질옥시카르보닐-L-티레오닐-O-메톡시메틸-N-메틸티로신 메틸에스테르(에리트로 이성질체)를 반응시킴으로써 산출되었다.

제조예24

N,N-디메틸포름아미드(10ml)중의 출발화합물(a)(1.0g) 용액에 3차-부틸디메틸 실릴클로라이드(0.75g)와 이미다졸(0.34g)을 가했다. 실온에서 16시간동안 교반한 후, 초산에틸(30ml)과 얼음(50g)을 혼합물에 가했다. 유기층을 묽은 염산, 중탄산 나트륨 수용액 및 물로 세척했다. 용매를 진공에서 제거했다. 잔류분을 실리카겔 칼럼(메르크 7734, 30g)에 올리고 클로로포름으로 용출시켜 목적 화합물(1)(1.21g)을 얻었다.

IR(필름) : 2950, 1720cm^-1

[α]_D ²²: -55.9°(C=0.56, MeOH)

제조예25

출발 화합물(a)(0.95g) 용액에 1N-수산화나트륨 수용액(4.8ml)을 가했다. 30°C에서 2일동안 교반한 후 용매를 진공에서 제거했다. 잔류분을 초산에틸(20ml)중에서 용해시키고 묽은 염산 및 물로 세척했다. 목적 화합물(1)은 용매를 증발시켜 얻어졌다(0.81g)

IR(필름) : 3300, 2950, 1720, 1700(쇼올더)cm^-1

[α]_D ²²: -82.9°(C=1.06, MeOH)

제조예26

디클로로메탄(50ml)중의 출발 화합물(a)(1.60g)와 출발 화합물(b)(5.50g)의 혼합물에 트리에틸아민(1.25g)과 에틸 1,2-디히드로-2-에톡시-1-퀴놀린 카르복실레이트(3.04g)를 가했다.실온에서 15시간 동안 교반한 후, 백색 고체를 여과하고, 출발화합물(b)(2.23g), 트리에틸아민(0.50g) 및 에틸-1,2-디히드로-2-에톡시-1-퀴놀린 카르복실레이트(1.24g)을 여액에 가했다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고 용매는 진공에서 제거했다. 잔류분을 초산에틸(50ml)에 용해시키고 붉은 염산, 중탄산 나트륨 수용액 및 물로 세척했다. 진공에서 증발시킨 후 잔류분을 실리카겔 칼럼(메르크 7734, 100g)상에 올리고 n-헥산-초산에틸(2:1, v/v)로 용출시켜 목적 화합물(1)(0.87g)을 산출했다.

IR(필름) : 2950, 1760, 1740(쇼울더), 1720, 1660cm^-1

[α]_D ²²: -31.5°(C=1.07, MeOH)

제조예27

톨루엔(100ml) 및 아세톤(10ml)중의 출발 화합물(a)(0.85g) 용액을 0°C에서 1.5시간 동안 UV 램프(100V)로 조사했다. 증발시킨 후 잔류분을 실리카겔 칼럼(메르크 77.34, 50g)상 올리고 n-헥산-초산에틸(2:1, v/v)을 사용하여 용출시켜 목적화합물(1)(0.18g)을 산출했다.

TLC : Rf = 0.22 (메르크 제품 5715, n-헥산:AcOEt=2:1)

IR(KBr) : 3300, 1740(쇼울더), 1640cm^-1

제조예28

출발 화합물(a)(0.17g)를 67% 초산 수용액(10ml)중에 용해시켰다. 25°C에서 28시간 동안 교반한 후, 용매를 진공중에서 제거했다. 잔류분을 초산에틸(20ml)중에 용해시키고 중탄산 나트륨 수용액 및 물로 세척했다. 농축후에 잔류분을 n-헥산으로 세척하고 용매를 진공중에서 제거하여 목적화합물(1)(0.15g)을 산출했다.

IR(KBr) : 3250, 1740(쇼울더), 1635cm-1

TLC : Rf = 0.18 (메르크 제품 5715, n-헥산:AcOEt=1:1)

제조예29

디클로로메탄(5ml)중의 출발 화합물(a)(0.14g)의 용액에 출발 화합물(b)(0,10g), 수용성 카르보디아미드 히드로 클로라이드(65mg)와 4-디메틸 아미노 피리딘(4mg)을 가했다. 실온에서 12시간동안 교반한 후, N,N-디메틸아미노프로필아민(50mg)을 혼합물에 가하고 용매를 진공중에서 제거했다. 잔여분을 초산에틸(20ml)중에서 용해시키고 묽은 염산 및 물로 세척했다. 증발시킨 후 얻어진 잔류분을 실리카겔 칼럼(메르크 7734, 10g)에 올리고 n-헥산-초산에틸(1:1, v/v)로 용출시켜 목적 화합물(1)(1.06g)을 산출했다.

IR(KBr) : 3300, 1700, 1640, 1495cm^-1

TLC : Rf = 0.38 (메르크 제품 5715, n-헥산:AcOEt=2:1)

제조예30

출발 화합물(a)(145mg)를 디옥산(3ml) 및 아니솔(0.1ml)중의 4N-염화수소혼합물중에 용해시켰다. 실온에서 30분동안 교반한 후, 용매를 진공중에서 제거했다. 잔류분을 디클로로메탄(3ml)중에 용해시켰다. 용액에 N-3차-부톡시카르복실-L-아스파라긴(35mg), 트리메틸아민(13mg), 1-히드록시벤조트리아졸(18mg) 및 수용성 카르보디이미드 히드로클로라이드(29mg)을 가했다. 실온에서 1시간동안 교반 한 후, 7%염산(5ml)을 혼합물에 가했다. 유기층을 물로 세척했다. 증발시킨 후 잔류분을 예비 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5744)시키고 클로로포름중의 6% 메탄올로 전개시켜 목적 화합물(1)을 산출했다.(110mg)

IR(KBr) : 3300, 1650, 1505cm^-1

TLC : Rf = 0.44 (메르크 제품 5715, CHCl3:MeOH=10:1)

제조예31

출발화합물(a)(105mg)를 디옥산(3ml) 및 아니솔(0.1ml)중의 염화수소의 혼합물중에 용해시켰다. 실온에서 30분동안 교반 후, 용매를 진공에서 제거했다. 잔류분을 디클로로메탄(3ml)중에 용해시켰다. 이 용액에 N-3차-부톡시카르보닐-L-알로트레오닌(22mg), 트리에틸아민(9mg), 1-히드록시벤조트리아졸(12mg)과 수용성 카르보디이미드 히드로클로라이드(19mg)를 가했다. 실온에서 8시간 교반한 후, 7%의 염산(5ml)을 혼합물에 가했다. 유기층을 물로 세척했다. 증발시킨 후 잔류분은 예비 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5744)시켜 클로로포름중의 6% 메탄올로 전개시켜 목적 화합물(1)을 산출했다.

TLC : Rf = 0.73 (메르크 제품 5715, CHCl₃:MeOH=5:1)

IR(KBr) : 3300, 1740(쇼울더), 1650, 1500cm^-1

제조예32

90%의 초산수용액(1ml)중의 출발 화합물(a)(58.5mg) 용액에 아연 분말(30mg)을 가했다. 실온에서 9시간 동안 교반한 후, 아연 분말(30mg)을 출발 화합물(a)가 사라질때까지 1시간 간격으로 혼합물에 가했다. 여과후 용매를 진공에서 제거했다. 잔류분은 초산에틸(10ml)에 용해시키고 물로 세척한 뒤 진공중에서 증발시켰다. 잔류분은 예비 얇은 막 크로마토그래피(메르크 5744)시키며 초산에틸-아세톤-초산-물(6:3:1:1, v/v)로 전개시켜 목적 화합물(1)(43.5mg)을 얻었다.

IR(KBr) : 3330, 1650, 1505cm^-1

TLC : Rf = 0.16 (메르크 제품 5715, CHCl₃-MeOH-AcOH(10:1:0.1)

제조예33

디클로로메탄(30ml)중의 프탈알데히드(6.7g) 용액에 에톡시카르보닐 메틸렌트리페닐포스포란(17.42g)을 가하고, 이 혼합물을 실온에서 30분동안 교반했다. 용매를 증발시키고 잔류물을 디에틸에테르중에 용해시켰다. 혼합물을 여과한후 여액을 증발시켰다. 잔류분을 진공하에(125℃, 0.6mmHg) 증류시켜 (E)-3-(2-포르밀페닐)프로페논산 에틸 에스테르(6g)를 산출했다.

NMR(CDCl₃,δ):1.24(3H,t,J=6.5Hz),4.19(2H,q,J=6.5Hz),6.28(1H,d,J=15Hz), 7.5(3H,m),7.77(1H,m), 8.43(1H,d,J=15Hz), 10.18(1H.s)

제조예34

테트라히드로푸란(50ml)중의 부틸트리페닐포스포늄 브로마이드(3.2g) 용액에 칼륨 3차-부톡사이드(900mg)를 질소대기하에 가하고 혼합물을 실온에서 30분동안 교반했다. 테트라히드로푸란(30ml)중의 (E)-3-(2-포르밀페닐)프로페논산 에틸 에스테르(2.0g) 용액을 상기 혼합물에 가했다. 혼합물은 1시간동안 교반했다. 용매를 증발시킨 후 잔류분을 디에틸 에테르 중에 용해시키고 함수 및 물로 세척했다.

용액은 과량의 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과한 뒤 증발시켰다. 잔류분은 실리카겔(100g)상에서 칼럼 크로마토그래피시키며 n-헥산 및 초산에틸(3:1)의 혼합물을 사용하여 용출시켰다. 목적 화합물을 포함하는 분획분을 증발시켜 (E)-3-[2-((Z)-1-펜테닐)페닐]프로페논산 에틸 에스테르(2.00g)를 산출했다.

NMR(CDCl₃, δ) : 0.88(3H.t.J=7Hz), 1.34(3H,t,J=6.5Hz), 1.42(2H,m) 2.05(2H,m), 4.27(2H,q,J=6.5Hz), 5.85(1H,dt,J=7.11Hz), 6.39(1H,d,J=16Hz), 6.56(1H,d,J=11Hz), 7.3(3H,m) 7.61(1H,m), 7.92(1H,d,J=16Hz)

제조예35

20% 메탄올 수용액중의 (E)-3-[2((Z)-1-펜티닐)페닐]프로페논산 에틸 에스테르(2g) 용액에 수산화 칼륨(2.3g)을 가했다. 혼합물을 60°C에서 2시간동안 교반하고 염산을 사용하여 pH1로 조절한 뒤 초산 에틸로 추출했다. 추출물을 과량의 황산 마그네슘으로 건조시켜 여과한 후 용매를 증발시켰다. 잔류분을 n-헥산 및 초산 에틸(4:1)의 혼합물중에 용해시켰다. 이 용액을 디시클로헥실아민(1.63ml)에 가해 결정을 산출했다. 결정은 초산에틸중에 용해시키고 1N 황산으로 세척했다. 용액은 과량의 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과한 뒤 증발시켜 (E)-3-[2((Z)-1-펜티닐)페닐]프로페논산(0.92g)을 산출했다.

IR(누졸) : 1690, 1680, 1620cm^-1

제조예36

(E)-3-[2((Z)-1-펜티닐)페닐]프로페논산 (1.08g)을 디클로로메탄(10ml), 옥살릴클로라이드(0.5ml)와 N,N-디메틸포름아미드(0.05ml)의 혼합물중에 용해시켰다. 실온에서 질소 대기하에 1시간동안 교반한 후 용매를 증발시켰다. 잔류분을 n-헥산 중에 용해시키고 혼합물을 여과했다. 여액을 증발시켜 (E)-3-[2((Z)-1-펜티닐)페닐]프로페노일 클로라이드(1.15g)을 산출했다.

IR(니트) : 1750, 1730, 1605, 1585cm^-1

NMR(CDCl₃, δ) : 0.88(3H.t.J=6.5Hz), 1.45(2H,m) 2.06(2H,m), 5.95(1H,dt,J=11.7Hz), 6.58(1H,d,J=11Hz), 6.66(1H,d,J=16Hz), 7.4(3H,m) 7.69(1H,m), 8.12(1H,d,J=16Hz)

실시예22

하기 화합물은 실시예14의 방법과 유사한 방법에 의해 산출되었다.

R- : 3-(2-페틸페닐)프로피노일

분자량 : FAB-MS : m/z 1041.6 (M+H)⁺

Claims

하기 일반식(I)의 화합물 및 그들의 약학적 허용염 :

상기식에서 R¹은 수소 또는 아실기 R²는 히드록시이고, R³는 카르복시 또는 보호된 카르복시이거나,

R²및 R³가 함께 연결되어 식 :
로 표시되는 기를 나타내며:

R⁴는 히드록시 또는 보호된 히드록시; R⁵는 히드록시 또는 보호된 히드록시;

R⁶는 히드록시, 보호된 히드록시 또는 저급알콕시이며,
는 단일결합 또는 이중결합이다.
제 1항에 있어서, R¹이 수소, 아르(저급) 알콕시 카르보닐, 저급알카노일, 고급 알카노일, 아로일, 헤테로시클릭(저급)알카노일, 저급 알케닐기로 치환된 아르(저급)알케노일, 또는 저급 알킬기로 치환된 아르(저급) 알카노일인 화합물.
제 2항에 있어서, R¹이 수소, 페닐(저급) 알콕시카르보닐, 저급알카노일, C_15-20알카노일, 벤조일, 티에닐(저급)알카노일, 저급 알케닐기로 치환된 페닐(저급) 알케노일 또는 저급알킬기로 치환된 페닐(저급) 알카노일인 화합물.
제 3항에 있어서, R¹은 저급 알킬기로 치환된 페닐(저급) 알카노일이며,

R²및 R³는 함께 연결되어 식
로 표시되는 기이며 ;

R⁴는 히드록시, R⁵는 히드록시, R⁶은 히드록시이고,
는 이중결합이다.
제 4항에 있어서, R¹은 3-(2-펜틸페닐)프로파노일인 화합물
제 5항에 있어서, 하기 구조식으로 표시되는 화합물

(상기식에서 R¹은 제5항에서 정의된 것과 동일하다.)
(1) 하기 일반식(II)의 화합물 또는 그들의 염을 고리화 반응시켜 하기 일반식(Ia) 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (2) 하기 일반식(III)의 화합물 또는 그들의 염을 고리화 반응시켜 하기 일반식(Ia) 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (3) 하기 일반식(Ib)의 화합물 또는 그들의 염을 탈아실화 반응시켜 하기 일반식(Ic)의 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (4) 하기 일반식(Ic)의 화합물 또는 아미노기에서 반응성인 그것의 유도체또는 그들의 염을 아실화 반응시켜 하기 일반식(Ib)의 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (5) 하기 일반식(Id)의 화합물 또는 그들의 염을 아실화 반응시켜 하기 일반식(Ie)의 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (6) 하기 일반식(Ia)의 화합물 또는 그들의 염을 가수분해 반응시켜 하기 일반식(If)의 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (7) 하기 일반식(If)의 화합물 또는 그들의 염을 에스테르화 반응시켜 하기 일반식(Ig)의 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (8) 하기 일반식(Ih)의 화합물 또는 그들의 염을 환원 반응시켜 하기 일반식(Ii)의 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (9) 하기 일반식(Id)의 화합물 또는 그들의 염을 알킬화 반응시켜 하기 일반식(Ij) 화합물 또는 그들의 염을 산출하거나, (10) 스트렙토 마이시스(streptomyces) 속에 속하는 WS-9326A, WS-9326B, 또는 WS-9326A 및 WS-9326B를 생산하는 균주를 영양배지중에서 배양하고, 얻어진 배양 브로쓰로부터 WS-9326A 및 WS-9326B에서 선택된 화합물 또는 그들의 염을 회수하는 단계를 포함하는 하기 일반식(I)의 화합물 또는 그들의 염을 제조하는 방법 :

상기식에서

R¹은 수소 또는 아실기이고 R²는 히드록시이고, R³는 카르복시 또는 보호된 카르복시이거나,

R²및 R³가 함께 연결되어 식 :
로 표시되는 기이고:

R⁴는 히드록시 또는 보호된 히드록시이고;

R⁵는 히드록시 또는 보호된 히드록시이고;

R⁶는 히드록시, 보호된히드록시 또는 저급알콕시이며,

는 단일결합 또는 이중결합이고

R¹a 은 아실기이고 ;

R⁶a 은 아실옥시이고 ;

R³a 은 에스테르화된 카르복시이고 ;

R¹b 은 저급 알케닐기로 치환된 아르(저급)알케노일이고,

R¹c 은 저급 알킬기로 치환된 아르(저급)알카노일이고,

R⁶b 은 저급 알콕시이다.
미생물 스트렙토마이시스 비올라세오니거(Streptomyces violaceoniger) 균주 번호 9326 (FERM BP-1667)