MXPA02000321A - Analogos de cadena lateral de n-acilo de pseudomicina. - Google Patents

Abstract

La presente invencion describe compuesto de pseudomicina semi-sinteticos que tienen la estructura (I) que podrian utiles como agentes o intermediarios antifungicos en el diseno de agentes antifungicos.

Description

ANÁLOGOS DE CADENA LATERAL DE N-ACILO DE PSEÜDOMICINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos de pseudomicina, en particular, compuestos de pseudomicina semisintéticos que tienen nuevas cadenas laterales de N-acilo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las pseudomicinas son productos naturales aislados de cultivos líquidos de Pseudomonas syringae (bacteria asociada con plantas) y se ha mostrado que tienen actividades antifúngicas . (ver i.e., Harrison, L., et al., "Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungical activity", J. Gen. Microbiology, 137(12), 2857-65 (1991) y Patentes U.S. Nos. 5,576,298 y 5,837,685). A diferencia de los antimicóticos descritos previamente de P. syringae (e.g., siringomicinas, siringotoxinas y siringostatinas) , las pseudomicinas A-C contienen ácido hidroxiaspártico, ácido aspártico, serina, ácido deshidroaminobutirico, lisina y ácido diaminobutirico.

El radical peptidico para las pseudomicinas A, A' , B, B' , C, C corresponde a L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z- Dhb-L-Asp (3-OH) -L-Thr (4-C1) con el grupo carboxilo terminal REF. : 134819 que cierra un anillo macrociclico en el grupo OH del Ser N terminal. Los análogos se distinguen por la cadena lateral N-acilo, i.e., la pseudomicina A se N-acila por 3,4-dihidroxitetradeconoilo, la pseudomicina A' por 3,4-dihidroxipentadecanoilo, la pseudomicina B por 3-hidroxitetradecanoilo, la pseudomicina B' por 3-hidroxidodecanoilo, la pseudomicina C por 3,4-dihidroxihexadecanoilo y la pseudomicina C por 3-hidroxihexadecanoilo. (ver i.e., Ballio, A., et al., "Novel bioactive lipodepsipeptides from Pseudomonas syringae : the pseudomycins", FEBS Letters, 355(1), 96-100, (1994) y Coiro, V.M., et al., "Solution conformation of the Pseudomonas syringae MSÜ 16H phytotoxic lipodepsipeptide Pseudomycin A determined by computer simulations using distance geometry and molecular dynamics from NMR data", Eur. J. Biochem. , 257(2), 449-456 (1998) ) . Las pseudomicinas se conoce que tienen ciertos efectos biológicos adversos. Por ejemplo, destrucción del endotelio de la vena, destrucción de tejido, inflamación y toxicidad local a los tejidos huésped, se han observado cuando la pseudomicina se administra intravenosamente. Por lo tanto, existe una necesidad para identificar compuestos dentro de esta clase que sean útiles para el tratamiento de infecciones fúngicas sin los efectos colaterales adversos observados comúnmente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de pseudomicina representados por la siguiente estructura, los cuales son útiles como agentes antifúngi.cos o en el diseño de agentes antifúngicos . en donde R es en donde R y R_a' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o un enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi, con la condición de que R' no sea hidroxi cuando R, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidrógeno y Rf es n-hexilo, n-octilo o n-decilo o Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidroxi y Rf es n-octilo, n-nonilo o n-decilo; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C_.-C4, hidroxialcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo Cs-Ce; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con R es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C5-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C5-C14, y Rf es alquilo C8-C?8, alcoxi C5-Cn o bifenilo; o R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo C_.-C?3, y Rh es alquilo C1-C15, alcoxi C4-C15, (alquilo C1-C10) fenilo, - (CH2)n-arilo o - (CH2) n- (cicloalquilo C5-C6) , en donde n = 1 o 2; o R es en donde R1 es uñ hidrógeno, halógeno o alcoxi C5-C8, y m es 1, 2 o 3; R es en donde Rj es alcoxi C5-C14 o alquilo C5-C14, y p = 0 , 1 o 2 ; R es ? en donde Rk es alcoxi C5-C14; o R es -(CH2)-NRm- (alquilo C?3-C?8) , en donde Rm es H, -CH3 o -C(0)CH3; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otra modalidad de la presente invención, se proporciona una formulación farmacéutica que incluye el compuesto de pseudomicina representado por la estructura I anterior y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En aún otra modalidad de la presente invención, se proporciona un método para tratar una infección fúngica en un animal en n cesidad del mismo, que comprende administrar al animal el compuesto I de pseudomicina descrito anteriormente. En aún otra modalidad de la presente invención, se proporciona un proceso para producir el núcleo de amina libre de un compuesto de pseudomicina que podria acilarse para formar los compuestos representados por la estructura I anterior. El proceso incluye las etapas de tratar un compuesto de pseudomicina que contiene una cadena lateral de N-acil alquilo que tiene al menos un grupo gama o delta hidroxilo (e.g., pseudomicina A, A' o C) con ácido trifluoroacético o ácido acético.

Definí ci ones Como se usa en la presente, el término "núcleo de pseudomicina de amina libre" o "núcleo de pseudomicina" se refiere a la estructura I-A posterior: I-X en donde R' es -NH o -NHp-Pg en donde Pg es un grupo protector amino y p es 0 o 1. El término "alquilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de la fórmula general CnH2n+? que contiene de 1 a 30 átomos de carbono a menos que se indique lo contrario. El radical alcano podria ser lineal (e.g. metilo, etilo, propilo, butilo, etc.), ramificado (e.g., isopropilo, isobutilo, butilo terciario, neopentilo, etc.), cíclico (e.g., ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, metilciclopentilo, ciclohexilo, etc.), o multi-ciclico (e.g., biciclo [2.2.1] heptano, espiro [2.2]pentano, etc.). El radical alcano podria ser sustituido o no sustituido. Similarmente, la porción alquilo de un grupo alcoxi, alcanoilo o alcanoato tienen la misma definición como anteriormente. El término "alquenilo" se refiere a un hidrocarburo aciclico que contiene al menos un doble enlace carbono carbono. El radical alqueno podria ser lineal, ramificado, cíclico o multi-ciclico. El radical alqueno podria ser sustituido o no sustituido. La porción alquenilo de un grupo alquenoxi, alquenoilo o alquenoato tiene la definición como anteriormente . El término "alquinilo" se refiere a un hidrocarburo aciclico que contiene al menos un enlace triple carbono carbono. El radical alquino podria ser lineal o ramificado. El radical alquino podria ser sustituido o no sustituido. La porción alquinilo de un grupo alquinoxi, alquinoilo o alquinoato tiene la misma definición como anteriormente. El término "arilo" se refiere a radicales aromáticos que tienen sistemas de anillos simples (e.g. fenilo) o fusionados (e.g., naftaleno, antraceno, fenantreno, etc.). Los grupos arilo podrían ser sustituidos o no sustituidos. El término "heteroarilo" se refiere a radicales aromáticos que contienen al menos un heteroátomo dentro del sistema de anillo aromático (e.g., pirrol, piridina, indol, tiofeno, furano, benzofurano, imidazol, pirimidina, purina, benzimidazol, quinolina, etc.). El radical aromático podria consistir de un sistema de anillo simple o fusionado. Los grupos heteroarilo podrían ser sustituidos o no sustituidos. NHP-Pg" y 'grupo amino protector" se refieren a un sustituyente del grupo amino empleado comúnmente para bloquear o proteger la funcionalidad amino mientras que reaccionan otros grupos funcionales en el compuesto. Cuando p es 0, el grupo protector amino, cuando se toma con el nitrógeno al cual se enlaza, forma una imida cíclica, e.g., ftalimido y tetracloroftalimido. Cuando p es 1, el grupo protector, cuando se toma con el nitrógeno al cual se enlaza, puede formar un carbamato, e_. g., metilo, etilo y 9-fluorenilmetilcarbamato; o una amida, e.g., N-formilo y N-acetilamida. Dentro del campo de la química orgánica y particularmente dentro del campo de la bioquímica orgánica, se entiende ampliamente que la sustitución significativa de los compuestos se tolera o aun es útil. En la presente invención, por ejemplo, el término grupo alquilo toma en cuenta sustituyentes, el cual es un alquilo clásico, tal como metilo, etilo, propilo, hexilo, isooctilo, dodecilo, estearilo, etc. El término 'grupo" contempla y toma en cuenta específicamente sustituyentes sobre alquilos, que son comunes en el arte, tal como hidroxi, halógeno, alcoxi, carbonilo, ceto, éster, carbamato, etc., asi como incluye el radical alquilo no sustituido. Sin embargo, se entiende en general, por los expertos en el arte que los sustituyentes deberían seleccionarse para no afectar adversamente las características farmacológicas del compuesto o interferir adversamente con el uso del medicamento. Los sustituyentes apropiados para cualquiera de los grupos definidos anteriormente incluyen alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, halo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, mono- y di-alquil amino, sales de amonio cuaternarias, a inoalcoxi, hidroxialquilamino, aminoalquiltio, carbamilo, carbonilo, carboxi, glicolilo, glicilo, hidrazino, guanilo y combinaciones de los mismos. El término "solvato" se refiere a un agregado que comprende una o más moléculas del soluto, tal como un compuesto de estructura I, con una o más moléculas de un disolvente farmacéutico, tal como agua, etanol y similares. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales orgánicas o inorgánicas de los compuestos representados por la estructura I que son sustancialmente no tóxicas para el receptor a las dosis administradas. El término "animal" se refiere a humanos, animales acompañantes (e.g., perros, gatos y caballos), animales de fuente alimenticia (e.g., vacas, puercos, ovejas y pollo), animales de zoológico, animales marinos, aves y otras especies animales similares.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los Solicitantes han descubierto que la desacilación del grupo N-acilo de la unidad L-serina de un compuesto de pseudomicina seguido por la reacilación con un nuevo grupo N-acilo proporciona compuestos que tienen indicaciones in vi tro que sugieren que los nuevos compuestos podrían ser activos contra C. albican, C. neoformans y/o Aspergill us fumiga tus .

El Esquema de Reacción I posterior ilustra los procedimientos generales para sintetizar el Compuesto I a partir de cualquiera de las pseudomicinas que se presentan naturalmente. Aunque un compuesto de pseudomicina que se presenta naturalmente se representa en el Esquema de reacción I, los expertos en el arte entenderán que la modificación de la cadena lateral de los derivados semi-sintéticos de los compuestos de pseudomicina que se presentan naturalmente podria realizarse de una manera similar. En general, se usan cuatro etapas de síntesis para producir el Compuesto I: (1) protección amino selectiva; (2) desacilación química o enzimática de la cadena lateral de N-acilo; (3) reacilación con una cadena lateral diferente; y (4) desprotección de los grupos amino. |(2) Esquema de Reacción I Los grupos amino colgantes en los residuos 2, 4 y 5 podrían protegerse usando cualquier medio estándar conocido por los expertos en el arte para la protección amino. El género y especie exacto del grupo protector amino empleado no es critico con tal de que el grupo amino derivado sea estable a las condiciones de la o las reacciones subsecuentes sobre otras posiciones de la molécula intermediaria y el grupo protector puede removerse selectivamente en el punto apropiado sin romper el resto de la molécula, incluyendo cualquier otro grupo o grupos protectores amino. Los grupos protectores amino apropiados incluyen benciloxicarbonilo, p-nitrobenciloxicarbonilo, p-bromobenciloxicarbonilo, p-metoxibenciloxicarbonilo, p-metoxifenilazobenciloxicarbonilo, p-fenilazobenciloxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo y ftalimido. Los grupos amino protectores apropiados son t-butoxicarbonilo (t-Boc) , aliloxicarbonilo (Alloc) , ftalimido y benciloxicarbonilo (CbZ o CBZ) . El más preferido es aliloxicarbonilo y benciloxicarbonilo. Ejemplos adicionales de los grupos protectores apropiados se describen en T. . Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y. (2nd ed., 1991), capitulo 7. La desacilación de un grupo N-acilo que tiene una cadena lateral gama o delta hidroxilada (e.g., 3, 4-dihidroxitetra-deconoato) podria realizarse tratando el compuesto de pseudomicina amino-protegido con una solución acida acuosa al 5-20%. Los ácidos apropiados incluyen ácido acético y ácido trifluoroacético. Un ácido preferido es ácido trifluoroacético. Si se usa ácido trifluoroacético, la reacción podria realizarse a o cerca de la temperatura ambiente. Sin embargo, Cuando se usa ácido acético, la reacción se corre en general a aproximadamente 40 °C. Un disolvente orgánico soluble en agua podria usarse para ayudar a la solubilización del compuesto de pseudomicina. Los sistemas de disolventes acuosos apropiados incluyen acetonitrilo, agua y mezclas de los mismos. Fue particularmente útil acetonitrilo cuando se desaciló un compuesto de pseudomicina protegido. Una solución acida preferida para desacilar un compuesto de pseudomicina protegido es ácido trifluoroacético acuoso al 8% en acetonitrilo. Los disolventes orgánicos aceleran la reacción; sin embargo, la adición de un disolvente orgánico podria llevar a otros subproductos. Los compuestos de pseudomicina que carecen de un grupo hidroxi delta en la cadena lateral (e.g., Pseudomicina B y C ) podrían desacilarse enzimáticamente. Las enzimas desacilasas apropiadas incluyen Polimixin Acilasa (164-16081 Fatty Acylase (cruda) o 161-16091 Fatty Acylase (pura) disponibles en Wako Puré Chemical Industries, Ltd.), o ECB desacilasa (ver, e.g., Patente U.S. No. 5,573,936). La desacilación enzimática podria realizarse usando los procedimientos de desacilación estándares bien conocidos para los expertos en el arte. Por ejemplo, los procedimientos generales para usar polimixin acilasa podrían encontrarse en Yasuda, N., et al, Agrie . Biol . . Chem . , 53, 3245 (1989) y Kimura, Y., et al., Agrie. Biol . . Chem . r 53, 497 (1989) . El producto desacilado (también conocido como el núcleo de pseudomicina o "PSN") se reacila usando el ácido correspondiente del grupo acilo deseado en presencia de un agente de activación carbonilo. "Grupo de activación carbonilo" se refiere a un sustituyente de un carbonilo que promueve las reacciones de adición nucleofilica en tal carbonilo. Los sustituyentes de activación apropiados son los que tienen un efecto de extracción de electrones neto sobre el carbonilo. Tales grupos incluyen, pero no se limitan a, alcoxi, ariloxi, heterociclos aromáticos que contienen nitrógeno o grupos amino (e.g., oxibenzotriazol, imidazolilo, nitrofenoxi, pentaclorofenoxi, N-oxisuccinimida, N,N'-diciclohexilisour-O-ilo y N-hidroxi-N-metoxiamino) ; acetatos, formatos; sulfonatos (e.g., metansulfonato, etansulfonato, bencensulfonato y p-tolilsulfonato) ; y haluros (e.g., cloruro, bromuro y yoduro) . Alternativamente, podria usarse una síntesis en fase sólida, en donde un hidroxibenzotriazol-resina (HOBt-resina) sirve como el agente de acoplamiento para la reacción de acilación. Podrían usarse una variedad de ácidos en el proceso de acilación. Los ácidos apropiados incluyen ácidos alifáticos que contienen uno o más grupos arilo, alquilo, amino (que incluyen aminas primarias, secundarias y terciarias) , hidroxi, alcoxi y amido colgantes; ácidos alifáticos que contienen nitrógeno u oxigeno dentro de la cadena alifática; ácidos aromáticos sustituidos con grupos alquilo, hidroxi, alcoxi y/o alquil amino; y ácidos heteroaromáticos sustituidos con grupos alquilo, hidroxi, alcoxi y/o alquil amino. El producto acilado podria ser útil como un agente antifúngico activo o como un intermediario para la producción de un compuesto activo. Aunque algunos compuestos no fueron tan útiles como otros, los perfiles de actividad proporcionan ideas valiosas en las tendencias de diseño necesitadas para alcanzar la actividad óptima . Una vez que se acila el grupo amino, entonces los grupos protectores amino (en las posiciones 2, 4 y 5) podrían removerse por hidrogenación en presencia de un catalizador de hidrogenación (e.g., 10% de Pd/C). Cuando el grupo protector amino es aliloxicarbonilo, entonces el grupo protector podria removerse usando hidruro de tributilestaño y dicloruro de trifenilfosfina paladio. Este esquema de protección/desprotección particular tiene la ventaja de reducir el potencial para la hidrogenación del grupo vinilo de la unidad Z-Dhb de la estructura pseudomicina. Como se discutió previamente, las pseudomicinas son productos naturales aislados de la bacteria Pseudomonas syringae que se han caracterizado como lipodepsinonapéptidos que contienen una porción de péptido cíclico cerrada por un enlace lactona y que incluyen los aminoácidos inusuales 4-clorotreonina (CIThr) , ácido 3-hidroxiaspártico (HOAsp) , ácido 2, 3-deshidro-2-aminobutirico (Dhb) y ácido 2, 4-diaminobutirico (Dab) . Los métodos para el crecimiento de varias cepas de P. syringae para producir los diferentes análogos de pseudomicina (A, A' , B, B' , C y C ) se describen posteriormente en mayor detalle en la Solicitud de Patente del PCT No. de serie PCT/US00/08728 presentada por Hilton, et al, el 14 de abril de 2000, titulada "Pseudomycin Production by Pseudomonas Syringae", incorporada en la presente por referencia, Solicitud de Patente del PCT No. de Serie PCT/US00/08727 presentada por Kulanthaivel, et al., el 14 de abril de 2000, titulada "Pseudomycin Natural Products", incorporada en la presente por referencia y Patentes U.S. Nos. 5,576,298 y 5,837,685, cada una de las cuales se incorporan en la presente por referencia. Las cepas aisladas de P. syringae que producen una o más pseudomicinas se conocen en el arte. La cepa de tipo silvestre MSU 174 y una mutante de esta cepa generada por mutagenesis de transposón, MSU 16H (ATCC 67028) se describen en las Patentes U.S. Nos. 5,576,298 y 5,837,685; Harrison et al., "Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungical activity", J. Gen. Microbiology, 137, 2857-2865 (1991); y Lamb et al., "Transposon mutagenesis and tagging of fluorescent pseudomonas; Antimycoctic production is necessary for control of Dutch elm disease", Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 6447-6451 (1987) . Una cepa de P. syringae que es apropiada para la producción de una o más pseudomicinas puede aislarse a partir de las fuentes ambientales que incluyen plantas (e.g., plantas de cebada, plantas cítricas y plantas de lila) asi como, fuentes tal como suelo, agua, aire y polvo. Una cepa preferida se aisla de plantas. Las cepas de P. syringae que se aislan de fuentes ambientales pueden referirse como tipo silvestre. Como se usa en la presente, "tipo silvestre" se refiere a un genotipo dominante que se presenta naturalmente en la población normal de P. syringae (e.g., cepas o aislados de P. syringae que se encuentran en la naturaleza y no se producen por manipulación en el laboratorio) . Como la mayoría de los organismos, las características de los cultivos que producen pseudomicina empleados (cepas de P. syringae, tal como MSU 174, MSU 16H, MSU 206, 25-B1, 7H9-1) se someten a variación. Por esto, la progenie de estas cepas (e.g., recombinantes, mutantes y variantes) podrían obtenerse por los métodos conocidos en el arte. MSU 16H de P. syringae está disponible públicamente a partir de American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockville, MD, USA como No. de acceso ATCC 67028. Las cepas de P. syringae 25-Bl, 7H9-1 y 67 Hl se depositaron con American Type Culture Collection el 23 de marzo de 2000 y fueron asignados los siguientes Nos. de Acceso: 25-B1 No. de Acceso PTA-1622 7H9-1 No. de Acceso PTA-1623 67 Hl No. de Acceso PTA-1621 Las cepas mutantes de P. syringae también son apropiadas para la producción de una o más pseudomicinas. Como se usa en la presente, ""mutante" se refiere a un cambio heredable súbito en el fenotipo de una cepa, el cual puede ser espontáneo o inducido por agentes mutagénicos conocidos, tal como radiación (e.g., radiación ultravioleta o rayos X), mutágenos químicos (e.g., metansulfonato de etilo (EMS), diepoxioctano, N-metil- N-nitro-N' -nitrosoguanina (NTG) y ácido nitroso), mutagenesis de sitio especifico y mutagenesis mediada por transposón. Los mutantes que producen pseudomicina de P. syringae pueden producirse tratando las bacterias con una cantidad de un agente mutagénico efectivo para producir mutantes que sobreproducen una o más pseudomicinas, que producen una pseudomicina (e.g., pseudomicina B) en exceso sobre otras pseudomicinas, o que producen una o más pseudomicinas bajo condiciones de crecimiento ventajosas. Mientras que el tipo y la cantidad de agente mutagénico a usarse pueden variar, un método preferido es diluir serialmente NTG a niveles en el intervalo de 1 a 100 µg/ml. Los mutantes preferidos son los que sobreproducen pseudomicina B y crecen en medios definidos mínimos . Los aislados, cepas mutantes y otras cepas deseables ambientales de P. syringae pueden someterse a selección para rasgos deseables del hábito de crecimiento, fuente de nutrimentos del medio de crecimiento, fuente de carbono, condiciones de crecimiento, requerimientos de aminoácidos y similares. De preferencia, una cepa que produce pseudomicina de P. syringae se selecciona para crecimiento sobre medio definido minimo, tal como medio N21 y/o para la producción de una o más pseudomicinas a niveles mayores de aproximadamente 10 µm/ml . Las cepas preferidas exhiben la característica de producir una o más pseudomicinas cuando crecen en un medio que incluye tres o menos residuos de aminoácidos y opcionalmente, ya sea un lipido, un producto de papa o combinaciones de los mismos. Las cepas recombinantes pueden desarrollarse transformando las cepas de P. syringae, usando los procedimientos conocidos en el arte. A través del uso de la tecnología de ADN recombinante, las cepas de P. syringae pueden transformarse para expresar una variedad de productos de genes además de antibióticos que estas cepas producen. Por ejemplo, se pueden modificar las cepas al introducir copias múltiples de los genes de biosintesis de pseudomicina endógenos para lograr mayor rendimiento de pseudomicina. Para producir una o más pseudomicinas de una cepa de tipo silvestre o mutante de P. syringae, el organismo se cultiva con agitación en un medio de nutriente acuoso que incluye una cantidad efectiva de tres o menos aminoácidos, de preferencia ácido glutámico, glicina, histidina o una combinación de los mismos. Alternativamente, se combina glicina con uno o más de un producto de papa y un lipido. El cultivo se lleva a cabo bajo condici'Ones efectivas para el crecimiento de P. syringae y la producción de la pseudomicina o pseudomicinas deseadas. Las condiciones efectivas incluyen temperaturas de aproximadamente 22°C a aproximadamente 27 °C, y una duración de aproximadamente 36 horas a aproximadamente 96 horas. El control de la concentración de oxigeno en el medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de una pseudomicina. De preferencia, los niveles de oxigeno se mantienen a aproximadamente 5 a 50% de saturación, más preferentemente aproximadamente 30% de saturación. El rociado con aire, oxigeno puro o mezclas de gases que incluyen oxigeno puede regular la concentración de oxigeno en el medio. El control del pH del medio durante el cultivo de P. syringae también es ventajoso. Las pseudomicinas son lábiles a pH básico y puede presentase una degradación significativa si el pH del medio de cultivo está por encima de aproximadamente 6 durante más de aproximadamente 12 horas. De preferencia, el pH del medio de cultivo se mantiene entre 6 y 4. P. syringae puede producir una o más pseudomicinas cuando crece en cultivo por lotes. Sin embargo, la alimentación por lotes o semi-continua de glucosa y opcionalmente, un ácido o base (e.g., hidróxido de amonio) para controlar el pH, mejora la producción. La producción de pseudomicina puede mejorarse además usando métodos de cultivo continuos en los que se alimentan automáticamente glucosa e hidróxido de amonio. La elección de la cepa de P. syringae puede afectar la cantidad y la distribución de la pseudomicina o pseudomicinas producidas. Por ejemplo, las cepas MSU 16H y 67 Hl producen cada una predominantemente pseudomicina A, pero también producen pseudomicina B y C, típicamente en relaciones de 4:2:1. La cepa 67 Hl produce típicamente niveles de pseudomicinas de aproximadamente tres a cinco veces mayor que los que se producen por la cepa MSU 16H. Comparado con las cepas MSU 16H y 67 Hl, la cepa 25-B1 produce más pseudomicina B y menos pseudomicina C. La cepa 7H9-1 es distintiva predominantemente en la producción de pseudomicina B y mayor cantidad de pseudomicina B que otras cepas. Por ejemplo, esta cepa puede producir pseudomicina B en al menos un exceso de diez veces sobre la pseudomicina A o C. Cada pseudomicina, intermediario de pseudomicina y mezclas pueden detectarse, determinarse aislarse y/o purificarse mediante cualquier variedad de métodos conocidos para los expertos en el arte. Por ejemplo, el nivel de la actividad de pseudomicina en un caldo o en una composición aislada o purificada puede determinarse mediante la acción antifúngica contra un hongo tal como Candida y puede aislarse y purificarse por cromatografía liquida de alto desarrollo. El compuesto de pseudomicina podria aislarse y usarse per se o en la forma de su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición acida no tóxicas derivadas de ácidos inorgánicos y orgánicos. Los derivados de las sales apropiadas incluyen haluros, tiocianatos, sulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, arilsulfonatos, alquilsulfatos, fosfonatos, monohidrógeno-fosfatos, dihidrógenofosfatos, metafosfatos, pirofosfonatos, alcanoatos, cicloalquilalcanoatos, arilalcanoatos, adipatos, alginatos, aspartatos, benzoatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, lactatos, maleatos, nicotinatos, oxalatos, palmitatos, pectinatos, picratos, pivalatos, succinatos, tartaratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, digluconatos, trifluoroacetatos, y similares. El término "solvato" se refiere a un agregado que comprende una o más moléculas del soluto (i.e., compuesto de profármaco de pseudomicina) con una o más moléculas de un disolvente farmacéutico, tal como agua, etanol y similares. Cuando el disolvente es agua, entonces el agregado se refiere como un hidrato. Los solvatos se forman en general disolviendo el compuesto en el disolvente apropiado con calor y enfriando lentamente para generar una forma de solvato amorfa o cristalina . El ingrediente activo (i.e., derivado de pseudomicina) se formula típicamente en formas de dosificación farmacéutica para proporcionar una dosificación fácilmente' controlable del fármaco y para dar al paciente, médico o veterinario un producto elegante y fácil de manejar. Las formulaciones podrían comprender de 0.1% a 99.9% en peso del ingrediente activo, más en general, de aproximadamente 10% a aproximadamente 30% en peso. Como se usa en la presente, el término "dosis unitaria" o "dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir un efecto terapéutico deseado. Cuando una dosis unitaria se administra oral o parenteralmente, se proporciona típicamente en la forma de una tableta, cápsula, pildora, paquete en polvo, composición tópica, supositorio, oblea, unidades medidas en ampolletas o en recipientes multidosis, etc. Alternativamente, una dosis unitaria podria administrarse en la forma de un aerosol seco o liquido que podria inhalarse o atomizarse. La dosificación que va a administrarse podria variar dependiendo de las características físicas del animal, la severidad de los síntomas del animal, el medio usado para administrar el fármaco. La dosis especifica para un animal dado se establece usualmente por el juicio del médico o veterinario de atención. Los vehículos, diluyentes y excipientes apropiados son bien conocidos para los expertos en el arte e incluyen materiales, tal como carbohidratos, ceras, polímeros solubles y/o que se hinchan en agua, materiales hidrofilicos o hidrofóbicos' gelatina, aceites, disolventes, agua y similares. El vehículo, diluyente o excipiente particular usado dependerá del medio y propósito para el cual el ingrediente activo está siendo aplicado. Las formulaciones también podrían incluir agentes humectantes, agentes lubricantes, surfactantes, amortiguadores, agentes de tonicidad, agentes de volumen, estabilizadores, emulsificantes, agentes de suspensión, preservativos, edulcorantes, agentes de perfumado, agentes saborizantes y combinaciones de los mismos. Una composición farmacéutica podria administrarse usando una variedad de métodos. Los métodos apropiados incluyen tópica (e.g., ungüentos o atomizadores), oral, inyección e inhalación. El método de tratamiento particular usado dependerá del tipo de infección que está siendo tratada. En aplicaciones parenterales iv, las formulaciones se diluyen o reconstituyen típicamente (si se seca por congelado) y se diluyen adicionalmente si es necesario, antes de la administración. Un ejemplo de instrucciones de reconstitución para el producto secado por congelado son adicionar diez ml de agua para inyección (siglas en inglés WFI) a la ampolleta y agitar suavemente hasta disolver. Los tiempos de reconstitución típicos son menores de un minuto. La solución resultante después se diluye adicionalmente en una solución de infusión tal como dextrosa al 5% en agua (siglas en inglés D5W) , antes de la administración. Los compuestos de pseudomicina se han mostrado que exhiben actividad antifúngica, tal como inhibición del crecimiento de varios hongos infecciosos que incluyen Candida spp. (i.e., C. albicans, C. parapsilosis, C. Krusei , C. glabra ta , C. tropicalis o C. lusi tania) ; Torulopus spp. (i.e., T. glabra ta ) ; Aspergillus spp. (i.e., A. fumiga tus) ; Histoplasma spp. (i.e., H. capsula tum) ; Crypotococcus spp. (i.e., C. neoformans) ; Blastomyces spp. (i.e., B . derma ti tidis) ; Fusarium spp.; Trichophyton spp., Pseudallescheria boydii , Coccidioides immi ts, Sporothrix schenckii, etc. Consecuentemente, los compuestos y formulaciones de la presente invención son útiles en la preparación de medicamentos para el uso para combatir infecciones fúngicas sistémicas o infecciones de la piel fúngicas. Por lo tanto, se proporciona un método para inhibir la actividad fúngica, que comprende poner en contacto el compuesto I de la presente invención con un hongo. Un método preferido incluye inhibir la actividad de Candida albicans, Cryotococcus neoformans o Aspergillus fumiga tus.. El término "poner en contacto" incluye una unión o enlace o toque aparente o tangencia mutua de un compuesto de la invención con un hongo. El término no implica ninguna limitación adicional al proceso, tal como mediante el mecanismo de inhibición. Los métodos se definen para abarcar la inhibición de la actividad fúngica mediante la acción de los compuestos y sus propiedades antifúngicas inherentes. También se proporciona un método para tratar una infección fúngica que comprende administrar una cantidad efectiva de una formulación farmacéutica de la presente invención a un huésped animal con la necesidad de tal tratamiento. Un método preferido incluye tratar una infección por Candida albicans , Cryptococcus neoformans o Aspergill us fumigatus. El término "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad de compuesto activo que es capaz de inhibir la actividad fúngica. La dosis administrada variará dependiendo de tales factores como la naturaleza y severidad de la infección, la edad y la salud general del huésped, la tolerancia del huésped al agente antifúngico y la especie de huésped. El régimen de dosis particular probablemente podria variar de acuerdo con estos factores. El medicamento podria ser dado en una dosis diaria simple o en dosis múltiples durante el dia. El régimen podria durar de aproximadamente 2-3 dias a aproximadamente 2-3 semanas o más. Una dosis diaria tipica (administrada en dosis simples o divididas) contiene un nivel de dosificación entre aproximadamente 0.01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal de un compuesto activo. Las dosis diarias preferidas son en general entre aproximadamente 0.1 mg/kg a 60 mg/kg y más preferentemente entre aproximadamente 2.5 mg/kg a 40 mg/kg. El huésped podria ser cualquier animal incluyendo humanos, animales de compañía (e.g., perros, gatos y caballos), animales de fuente alimenticia (e.g., vacas, cerdos, ovejas y pollo), animales de zoológico, animales marinos, pájaros y otras especies animales similares.

EJEMPLOS A menos que se indique lo contrario, todos los químicos pueden adquirirse de Aldrich Chemical (Milwaukee, Wl).

Muestras Biológicas MSU 16H de P. syringae está públicamente disponible en American Type Culture Collection, Parklawn • Drive, Rockville, MS, USA como No. de Acceso ATCC 67028. Las cepas de P. syringae 25-B1, 7H9-1 y 67 Hl se depositaron con el American type Culture Collection el 23 de marzo de 2000 y se asignaron los siguientes Nos. de Acceso: 25-B1 No. de Acceso PTA-1622 7H9-1 No. de Acceso PTA-1623 67 Hl No. de Acceso PTA-1621 Abreviaciones químicas Se usan las siguientes abreviaciones a través de los ejemplos para representar los materiales listados respectivos: ACN - acetonitrilo TFA - ácido trifluoroacético DMF - dimetilformamida DEAD - Dietilazodicarboxilato EDCI - clorhidrato de 1- [3- (dimetilamino) propil] -3-etilcarbodiimida BOC = t-butoxicarbonilo, (CH3) 3C-O-C (O) -CBZ = benciloxicarbonilo, C6H5CH2-0-C (0) -FMOC = fluorenilmetiloxicarbonilo Condiciones de HPLC A menos que se indique lo contrario, el trabajo de HPLC de fase inversa analítica se hizo usando los sistemas Waters 600E equipados con columna Waters µBondapak (C18, 3.9 x 300 mm) . El eluyente usado fue sistema de disolvente acetonitrilo/TFA acuoso al 0.1% 65:35 a acetonitrilo al 100% durante 20 minutos con una velocidad de flujo de 1.5 ml/minuto y usando detección UV a 230 nm. El trabajo de HPLC preparativa se realizó con un sistema Waters Prep 2000 usando columna Dynamax 60 angstrom C18 y los sistemas de disolventes idénticos como se usaron en el sistema de HPLC analítica, pero con una velocidad de flujo de 40 ml/min.

Análisis Biológico Detección y Cuantificación de la Actividad Anti xíngica : Se determinó la actividad antifúngica in vi tro obteniendo la concentración inhibidora minima (MIC) del compuesto usando una prueba de dilución en agar estándar o una prueba de difusión de disco. Un hongo tipico empleado en la prueba de la actividad antifúngica es Candida albicans . La actividad antifúngica se considera significativa cuando la muestra de prueba (50 µl) causa zonas de inhibición de 10-12 mm de diámetro en C. albicans x657 sembrada en placas de agar.

Toxicidad de la Vena de la Cola : Se trataron ratones intravenosamente (IV) por medio de la vena de la cola lateral con 0.1 ml del compuesto de prueba (20 mg/kg) a 0, 24, 48 y 72 horas. Se incluyeron dos ratones en cada grupo. Los compuestos se formularon en dextrosa al 5.0% y agua estéril para inyección. Los ratones se monitorearon durante 7 dias siguiendo el primer tratamiento y se observaron estrictamente para los signos de irritación que incluyen eritema, hinchazón, decoloración, necrosis, pérdida de la cola y cualquier otro signo de efectos adversos que indican toxicidad. Los ratones usados en el estudio se criaron, ratones ICR macho teniendo un peso promedio entre 18-20 g (disponibles en Harían Sprague Dawley, Indianapolis, IN) .

Procedimientos Generales Procedí mi entós generales usados para proteger los grupos amino colgantes en las posiciones 2, 4 y 5 de Pseudomicina A, A' , B, B ' , C o C . El compuesto de pseudomicina disuelto/suspendido (R1=H) en DMF (20 mg/ml, Aldrich Sure Seal) . Mientras que se agitaba a temperatura ambiente se adicionó N-(Benciloxicarboniloxi) succinimida (6 eq) . Se dejó agitar a temperatura ambiente durante 32 horas. Se monitoreó la reacción por HPLC (columna 4.6x50 mm, 3.5 µm, 300-SB, CB, Zorbax) . Se concentró la reacción hasta 10 ml en el rotavapor a alto vacio a temperatura ambiente. Se colocó el material en el congelador hasta que estuvo listo para preparar la cromatografía. La HPLC preparativa de fase inversa produjo un sólido blanco amorfo después de la liofilización.

Procedimientos generales usados para desacilar químicamente el grupo N-acilo de la unidad L-serina La Pseudomicina A disuelta/suspendida se protegió en agua/acetonitrilo (H20/ACN 2:1, aproximadamente 3.5 mg/ml) y se adicionó TFA (8% en volumen) lentamente a temperatura ambiente. Se permitió que la reacción se agitara a temperatura ambiente hasta que se consumió el material iniciador. Se removió en acetonitrilo bajo vacio a temperatura ambiente y se liofilizó el material. Se disolvió el sólido resultante en una pequeña cantidad de DMF (se adicionó agua y después una cantidad igual de ACN si es necesario) . Después de la HPLC preparativa y liofilización, en general se observa un sólido blanco, amorfo (presumiblemente sal de TFA) .

Acilación en fase sólida del núcleo de Pseudomicina usando resina de HOBt . El siguiente ejemplo usa ácido miristoilo; sin embargo, podria usarse el mismo procedimiento general con otros ácidos orgánicos. En un tubo de reacción fritado de vidrio de doble extremo de 100 ml, se disolvió ácido miristoilo (1.03 g, 3.62 mmol) en 50 ml de DMF/THF 1:1. A esta solución se adicionó resina HOBt (1.94 g, 2.9 mmol) y EDCI (0.556 g, 2.9 mmol) y se agitó durante toda la noche. El disolvente se drenó y la resina se lavó con 2xDMF, 2xTHF y 2x con DMF/THF 1:1. El núcleo de Pseudomicina CBZ protegido (1.0 gramos, 0.723 mmol) se disolvió en 50 ml de DMF/THF (20 mg/ml), y se adicionó a la resina enlazada al éster activado y se mezcló durante toda la noche en un rotador o agitador. El producto se drenó fuera de la resina y la resina restante se lavó con 2xDMF, 2xTHF y DMF/THF 2x1:1. Los filtrados combinados se aislaron por HPLC de fase inversa y se liofilizó para producir (129 mg, 10%) del producto de Pseudomicina CBZ protegido acilado de Miristoilo.

Acilación del núcleo de Pseudomicina usando un éster activado (HOBt-mesiláto) . El siguiente ejemplo usa ácido glicin miristoilo; sin embargo, los procedimientos generales podrían usarse con otros ácidos orgánicos. En un matraz de fondo redondo de 500 ml, se disolvió ácido glicin miristoilo (0.309 g, 1.1 mmol) en 100 ml de DMF. A esta solución se adicionó HOBt-mesilato (0.229 g, 1.1 mmol) y trietilamina (0.081 g, 0.8 mmol). La solución se agitó rápidamente durante toda la noche bajo 1.033 kg/cm2 (1 atm) de N2. Se secaron DMF y TEA usando alto vacio. El aceite residual se sometió a azeotropia 3x con Tolueno hasta que se formó un sólido blanco. Al sólido se adicionó 100 ml de DMF y 1 g de núcleo de Pseudomicina CBZ protegido. La solución se agitó durante toda la noche y se secó en alto vacio. El producto se aisló por HPLC de fase inversa y se liofilizó para producir (233 mg, 20%) del producto de Pseudomicina CBZ protegido acilado de Miristoilo.

Procedi i entos generales usados para desproteger los grupos amino colgantes en la posición 2, 4 y 5 por hidrogenación. Se disuelve el derivado acilado CBZ protegido en una solución de acético al 13% frio/metanol (5 mg/ml) y se adiciona una cantidad equivalente de 10% de Pd/C. Se carga la reacción con hidrógeno desgasificando la reacción y desplazando el volumen con H2, 4-7 veces. Se deja que proceda la reacción a temperatura ambiente. Se monitorea la reacción por HPLC y espectrometría de masa cada 15 minutos hasta que se consume el material iniciador. Cuando se completa la reacción, se remueve el balón y la reacción se filtra con 0.45 µm de disco de filtro (Acrodisk GHP, GF por Gelman) . Se concentra a aproximadamente l/10th volumen y se prepara por HPLC. Se liofilizan las fracciones que contienen el producto.

Preparaciones Preparación de Precursor de Cadena La teral (l e) : la lb le Un matraz de fondo redondo de 250 ml que contiene 100 ml de ACN desgasificado se cargó con m-bromobenzaldehido (5.000 g, 27.02 mmol), trietilamina (5.490 g, 54.25 mmol) y 1-dodecino (5.000 g, 30.06 mmol). A esta mezcla se adicionó PdCl2 (243.1 mg, 1.370 mmol), trifenilfosfina (718.8 mg, 2.740 mmol) y Cul (173.8 mg, 0.9120 mmol). La reacción después se calentó a reflujo y se dejó reaccionar durante toda la noche. La reacción después se enfrió a temperatura ambiente y el disolvente se removió in vacuo . El residuo resultante se colocó en cloruro de metileno y se lavó HCl ÍN 2X y salmuera IX. Se secó la capa orgánica con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo . La purificación' en una columna de gel de silice eluyendo con EtOAc al 3%/hexanos produjo 3.73 gramos de un compuesto de titulo como un aceite café. Los resultados espectrales fueron consistentes con la estructura para m-(l-Dodecinil) benzaldehido (la) . A 100 mL de EtOAc se adicionó el compuesto anterior (1.00 g, 3.70 mmol) y 0.1 g de 5% de Pd/Al203. La mezcla de reacción se sometió a 3.51 kg/cm2 (50 psi) de H2 a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró sobre celita para remover el catalizador y la celita se enjuagó con cantidades copiosas de EtOAc. La remoción del EtOAc por via de un rotavapor produjo 882.1 mg del producto. Este se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Los resultados espectrales fueron consistentes con m-Dodecilbenzaldehido (lb) . Un matraz de fondo redondo de 50 ml secado en el horno se cargó con 6.0 ml de THF anhidro bajo una atmósfera de nitrógeno a -78 °C y después se adicionó diisopropil amina de litio (1.2 mL de una solución 2M en heptano/THF/etilbenceno, 2.41 mmol). A esta se adicionó acetato de t-butilo (0.331 ml, 2.45 mmol) y la solución resultante se enjuagó a aproximadamente -40 °C y se mantuvo a esta temperatura durante 1 hora. El compuesto anterior (501.9 mg, 1.83 mmol), se disolvió en 4 mL de THF anhidro y se pre-enfrió a -40 °C, después se adicionó gota a gota al anión. La mezcla de reacción se "dejó agitar durante 1 hora antes de apagar con 2 ml de cloruro de amonio acuoso saturado y 10 ml de agua. La mezcla de reacción se dividió entre éter y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera IX y se secó con sulfato de sodio. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo. La purificación en una columna de gel de silice eluyendo con 5% de EtOAc/hexanos produjo 238.1 mg de un aceite amarillo. Los resultados espectrales fueron consistentes con 3-hidroxi-3- (m-dodecilbencil) propionato de t-butilo. Una solución de 4 ml de TFA pre-enfriada (0°C) se adicionó a un matraz de fondo redondo de 50 ml que contenia 3-hidroxi-3- (m-dodecilbencil) propionato de t-butilo. La reacción se dejó agitar a esta temperatura durante 25 min, tiempo en el que la TLC (10% de EtOAc/hexanos) indicó el consumo del éster iniciador. El TFA se removió in vacuo produciendo un aceite (le) .

Preparación del Precursor de Cadena La teral (2c) 2a 2b 2c El compuesto 2a se sintetiza usando los mismos procedimientos como se describieron anteriormente para el Compuesto la usando 1-octino en lugar de 1-dodecino. Los compuestos 2b y 2c se sintetizan usando los mismos procedimientos descritos anteriormente para lb y le, respectivamente .

Preparación del Precursor de Cadena La teral (3b) 3a 3b Un matraz de fondo redondo de 500 mL que contenia 100 mL de acetona se cargó con m-hidroxibenzaldehido (5.00 g, 40.94 mmol), 1-bromoundecano (9.65 g, 41.02 mmol) y K2C03 (8.48 g, 61.36 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo y se dejó reaccionar durante 10 h. La reacción después se enfrió y la acetona se removió in vacuo. El residuo resultante se dividió entre éter/agua. La capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado 2X y salmuera IX. La capa orgánica se secó con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo . La purificación en una columna de gel de silice eluyendo con EtOAc al 3%/hexanos produjo 1.6876 de un aceite amarillo. El resultado espectral fue consistente con el Compuesto 3a. Este aldehido después se llevó a cabo usando los procedimientos descritos en la preparación de le para producir el Compuesto 3b. Preparación del Precursor de Cadena La teral (4c) : Se sintetiza el compuesto 4a usando los mismos procedimientos como se describieron anteriormente para el Compuesto le con la excepción de que el Compuesto la no se. hidrogena antes de la condensación con acetato de t-butilo. Se cargó un matraz de fondo redondo de 50 ml con 3-hidroxi-3- (m-dodecinilbencil) propionato de t-butilo 4a (346.8 mg, 0.897) y se disolvió en 10 ml de MeOH/1 mL de AcOH glacial. Hidrogenólisis estándar con 10% de Pd/C (304.5 mg) durante 24 h. La remoción del catalizador por via de filtración y la remoción del disolvente in vacuo produjo 302.4 mg de 3- (m-dodecilbencil) propionato de t-butilo. El t-butil éster después se removió por tratamiento con TFA para producir el Compuesto 4b.

Preparación del Precursor de Cadena La teral (5a) : 5a A un matraz de fondo redondo de 50 ml que contiene 5 mL de THF a -78°C se adicionó sec-BuLi (1.56 mmol, 1.2 L de solución 1.3M en ciciohexano). A esta mezcla se adicionó bromoisobutirato de t-butilo (en 2 mL de THF a -78 °C) gota a gota. Esta mezcla de reacción se dejó agitar durante 30 min, tiempo en el cual el Compuesto lb (318.9 mg, 1.16 mmol) en 2 ml de THF a -78 °C) después se adicionó a la mezcla de reacción gota a gota. La mezcla de reacción resultante se dejó agitar a -78 °C durante 30 min y después se enjuagó a 0°C durante un periodo de 30 min y se dejó agitar a tal temperatura durante 1.75 h. La reacción después se apagó con 2 ml de cloruro de amonio acuoso saturado y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción después se dividió entre éter/agua y los orgánicos se lavaron con salmuera lx y se secaron con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 370.5 mg del material crudo como una mezcla racémica. El t-butil éster después se removió por tratamiento con TFA para producir el Compuesto 5a.

Preparación del Precursor de Cadena Lateral (6a) : 6a A un matraz de fondo redondo de 250 mL que contiene 100 mL de MeOH y 1 mL de H2S04 concentrado se adicionó ácido m-bromoanisico (5.00 g, 21.6 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo y se dejó agitar durante 24 h. La reacción se enfrió y el disolvente se removió in vacuo. El sólido resultante después se colocó en éter y los orgánicos se lavaron con agua 2x, NaHC03 acuoso saturado Ix y salmuera lx y se secaron con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 4.72 g del material crudo que se usó sin purificación adicional. Este después se acopló con 1-tetradecino y se sometió a hidrogenólisis al alqueno análogamente a los ejemplos previos. Se convirtió el metil éster al ácido carboxilico suspendiendo el metil éster (538.4 mg, 1.48 mmol) en 20 ml de HBr al 30% en solución de AcOH y calentando al reflujo. Después de 24 h a reflujo, la solución se vertió en 150 ml de agua y se extrajo con 200 ml de CH2C12 2x. Los orgánicos se lavaron con cantidades copiosas de agua y se secaron con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 398.7 g del material crudo 6a que se usó sin purificación adicional.

Preparación del Precursor de Cadena La teral (la) El Compuesto 6a (385.2 mg) se adicionó a clorhidrato de piridinio sólido. Los 2 sólidos se fundieron por calentamiento a -220°C y se dejó la mezcla reaccionar durante 3 h. La reacción después se enfrió y se dividió entre CH2C12/HC1 ÍN. Los orgánicos después se lavaron con HCl ÍN 5x y se secaron con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 158.8 mg del material crudo (7a) que se usó sin purificación adicional.

Preparación del Precursor de Cadena La teral (Sb) : 8a 8b Un matraz de fondo redondo de 250 mL se cargó con ácido bifenil borónico (2.00 g, 10.1 mmol) y Pd(PPh)4 (980.0 mg, 0.848 mmol) "en 60 mL de Tolueno/30 mL de Na2C03 acuoso 2M. A esta suspensión se adicionó m-bromobenzaldehido (en 10 mL de MeOH) . La reacción se calentó a reflujo y se dejó reaccionar durante 20 h. La reacción se enfrió y la capa orgánica se lavó con agua 2x, salmuera lx y se secó con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo. Los sólidos resultantes se enjuagaron con hexanos fríos para remover cualquier m-bromobenzaldehido residual. El sólido después se suspendió en hexanos calientes y se filtró en caliente para remover cualquier sólido. El filtrado después se removió in vacuo para producir el aldehido deseado 8a. El Compuesto 8a se convirtió a 8b usando los mismos procedimientos como se describieron en la preparación de le para producir una mezcla de diastereómeros inseparable.

Preparación del Precursor de Cadena La teral (9a) 9a Una solución de acetato de t-butilo (2.02 ml, 0.015 mol) en THF anhidro (25 ml) se enfrió a -78°C y se adicionó gota a gota n-butil litio (1.6 m en hexano) (9.35 ml, 0.015 mol). Después de 45 min, se adicionó gota a gota una solución de THF de 2-tridecanona (2.0 g, 0.01 mol). La agitación se continuó a temperatura baja durante 1 h y después la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 15 min. Se adicionó exceso de HCl ÍN para apagar la reacción y la solución acuosa se extrajo con éter (2x) . Los extractos de éter se secaron con MgS0 y se redujeron in vacuo para dar un aceite crudo. La purificación por cromatografía de columna sobre silice (acetato de etilo al 5%/hexano) dio 1.01 g (32% de rendimiento) de t-butil éster. La RMN fue consistente con el producto deseado. El t-butil éster después se trató con ácido trifluoroacético para cortar el t-butil éster para producir el Compuesto 9a con un rendimiento cuantitativo.

Preparación del Precursor de Cadena La teral (l Oe) : °HC ^. OH OHC. -<f^_,OR XX "^ T ififi Iflb A una solución de THF (16 mL) de m-hidroxibenzaldehido (1.00 g, 8.20 mmol) se adicionó a temperatura ambiente DEAD (1.29 mL, 8.20 mmol), PPh3 (2.15 g, 8.20 mmol) y n-pentanol (723 mg, 8.20 mmol). La reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. Después de la purificación en gel de silice, se obtuvo 1.02 g (65%) del producto deseado 10a. A una solución de THF de 10a (6.70 g, 34.90 mmol) se adicionó a 0°C Ph3P=CHO (10.6 g, 34.90 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante toda la noche, la mezcla de reacción se filtró y se concentró in vacuo para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en gel de silice para dar 3.57 g (47%) del aldehido no saturado deseado 10b.

Una solución de EtOAc (30 mL) de 10b (3.37 g, 15.5 mmol) se sometió a hidrogenación 1.54 kg/cm2 (1.5 atm) usando 10% de Pd/C (1.64 g, 1.55 mmol). La reacción se agitó durante toda la noche. En este punto, la mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celita. Los filtrados y enjuagados se concentraron in vacuo . El residuo de esta manera obtenido se purificó por cromatografía en gel de silice (10% de EtOAc/Hexanos) para proporcionar 2.37 g (70%) de 10c. A una solución de diclorometano (23 mL) del aldehido 10c (1.26 g, 5.71 mmol) se adicionó a 0°C aliltrimetilsilano (0.91 mL, 5.71 mmol), seguido de TiCl4 (0.63 mL, 5.71 mmol). Después de agitar durante 1 h a 0°C, la reacción se apagó con solución de NaHC03 saturado. La mezcla se diluyó con diclorometano (75 mL) . La capa orgánica se lavó secuencialmente con NaHC03 saturado, agua y salmuera. La capa orgánica de esta manera obtenida se secó, se concentró y se purificó por via de cromatografía en gel de silice (10% de EtOAc/Hexanos) para proporcionar 0.91 g (61%) del alcohol alilico deseado lOd. El alcohol alilico lOd (0.91 g, 3.47 mmol) se disolvió en acetona acuosa (7 mL cada una) . A esta solución se adicionó NMO (704 mg, 5.21 mmol) y una solución de THF de Os04 (44 mg, 0.17 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, la reacción se apagó con NaHS03 (750 mg) para apagar el exceso de oxidante. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera (10 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL) . Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron in vacuo para proporcionar 850 mg (82%) del intermediario de triol deseado. El triol (850 mg, 2.87 mmol) de esta manera obtenido se disolvió en MeOH (30 mL) y agua (6 mL) . Esta solución se trató con NaI04 (1.38 g, 6.46 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1 h, la mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celita. Los filtrados se concentraron cuidadosamente in vacuo para producir el beta-hidroxi aldehido correspondiente. Este material se disolvió en una mezcla de t-BuOH (14 mL) y ciciohexeno (2 mL) . A la solución anterior se adicionó una solución acuosa (15 mL de H20) que contenia KH2P04 (2.33 g, 17.7 mmol) y NaC102 (2.08 g, 23.0 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y después se acidificó a pH = 3 con HCl ÍN. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL) . Los extractos combinados se lavaron con agua y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró in1 vacuo para dar el ácido crudo lOe (1.5 g, ~3.4 mmol) . Los compuestos donde R es n-C6H?3, n-CH?5, n-CsH? , n-CgHig, n-C?0H2? y n-C?4H2g también se hicieron usando los mismos procedimientos como se describieron anteriormente.

Preparación del Precursor de Cadena La teral (lid) XX (CH^CH, A una solución de diclorometano (190 mL) de acetal quiral lia (6.22 g, 19.1 mmol) se adicionó a -78°C trimetilalilsilano (10.9 mL, 68.69 mmol), seguido por TiCl4 puro (2.94 mL, 26.71 mmol). La reacción se agitó a -78 °C durante 1 h y después a -40 °C durante 2 h. En este punto, la reacción se apagó con metanol (15 mL) y se diluyó con diclorometano (200 mL) . La mezcla de reacción resultante se lavó con HCl ÍN (2 x 50 mL) , agua y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró in vacuo para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en gel de silice (10% de EtOAc/Hexanos) para dar 5.51 g (78%) del producto deseado llb. XH RMN de lia (CDC13) : d 4.73 (m, 1H) , 4.21 (m, 1H) , 3.86 (m, 1H) , 1.75 (m, 1H) , 1.60-1.10 (m, 35H) , 0.80 (m, 3H) , tR RMN de llb (CDC13) : d 5.81 (m, 1H) , 5.05 ( , 2H) , 4.12 (m, 1H) , 3.86 (m, 1H) , 3.41 (m, 1H) , 2.22 (m, 2H) , 1.67-1.18 (m, 36H) , 0.88 (m, 3H) . A una solución de diclorometano (155 mL) de llb (8.56 g, 23.3 mmol) se adicionó PCC (10.0 g, 46.5 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h, y después se filtró a través de una almohadilla de Celita. Los filtrados se concentraron in vacuo para dar un residuo rojizo, que se purificó por cromatografía en gel de silice (10% de EtOAc/Hexanos) para dar 8.36 g (80%) del intermediario metil cetona (estructura no mostrada) . El intermediario obtenido aqui (8.36 g, 22.8 mmol) se disolvió en THF (60 mL) y MeOH (30 mL) . A esta solución se adicionó KOH 7.5 M (15 mL) . Después de agitar 3 h a temperatura ambiente, el disolvente se removió parcialmente. Las mezclas de reacción restantes se diluyeron con EtOAc/Et20 (relación 3:1, 350 mL) . La capa orgánica se lavó con agua (3x50 mL) y salmuera. La capa orgánica resultante se secó y se concentró in vacuo para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en gel de silice (10% de EtOAc/Hexanos) para proporcionar 6.22 g (96%) del producto deseado 11c como sólidos blancos. 1ti RMN de 11c (CDC13) : d 5.75 (m, 1H) , 5.06 (m, 2H) , 3.56 (m, 1H) , 2.23 (m, 1H) , 2.07 (m, 1H) , 1.75-1.17 (m, 28H) , 0.80 (m, 3H) . Se disolvió carbinol 11c (6.22 g, 22.0 mmol) en una solución acuosa de THF (5.5 mL de agua y 55 mL de THF) . A esta solución se adicionó NMO (4.42 g, 33.0 mmol), seguido de Os04 (280 mg disuelto en THF, 1.10 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. En este tiempo, se adicionó bisulfuro de sodio (4 g) . La reacción se agitó durante 2 h, y después se diluyó con EtOAc (300 mL) . La mezcla completa se lavó con agua (2 x 40 mL) y salmuera. La capa orgánica resultante se secó y se concentró in vacuo para dar el intermediario de triol correspondiente. Este material se disolvió en MeOH (200 mL) y agua (40 mL) . A esta solución se adicionó NaI04 (10.6 g, 49.5 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 h, la reacción se filtró a través de Celita y se purificó por cromatografía en gel de silice de columna corta (30% de EtOAc/Hexanos) para proporcionar ~10 g (>100%) del beta-hidroxilo aldehido crudo. El aldehido impuro de esta manera obtenido se disolvió en t-BuOH (100 mL) y ciciohexeno (14 mL) . A esta solución a temperatura ambiente se adicionó una solución acuosa (50 mL) de NaC102 (15.97 g, 176 mmol) y KH2P04 (17.8 g, 132 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h y después se apagó a 0°C con HCl 5N a pH=4. La reacción se extrajo con mezcla-disolvente de EtOAc/Et20 3:1 (3 x 250 L) . La capa orgánica se " lavó con salmuera y se secó y concentró para proporcionar 7.3 g (>100%) del ácido crudo lid, que se usó directamente para la reacción de acoplamiento. 2H RMN de lid (CDC13) : d 3 . 95 (m, 1H) , 2 . 60-2 . 35 ( , 2H) , 1 . 40-1 . 10 (m, 28H) , 0 . 82 (m, 3H ) .

Preparación del Precursor de Cadena La teral (12c) 12a 12b 12o Un matraz de fondo redondo de 1 litro se cargó con tridecanal (5.00 g, 25.2 mmol) y sal de HCl de Gly-Ome (12.66 g, 100.8 mmol) en 600 ml de MeOH anhidro. A esta mezcla de reacción se adicionó NaCNBH3 (1.787 g, 28.44 mmol) y la reacción se dejó agitar durante toda la noche a temperatura ambiente. Los sólidos se filtraron y el disolvente se removió in vacuo. El residuo resultante se dividió entre CH2Cl2/NaHC03 acuoso saturado. La capa orgánica se lavó con NaHC03 2x y se secó con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo. La purificación en una columna de gel silice eluyendo con EtOAc al 50%/hexanos produjo 2.94 g de un .sólido blanco (12a) . Un matraz de fondo redondo de 50 mL se cargó con el derivado de glicina 12a (504.6 mg, 1.86 mmol), trietilamina (224.6 mg, 2.22 mmol) en 10 ml de THF anhidro. A este se adicionó (BOC)20 (494.3 mg, 2.26 mmol) en una porción. La reacción se dejó agitar durante 18 h tiempo en el cual el disolvente se removió in vacuo . El aceite resultante se colocó en EtOAc y se lavó con HCl ÍN 2x, agua lx, salmuera lx y se secó con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 463.3 mg de un aceite incoloro (12b) que se usó sin purificación. Un matraz de fondo redondo de 50 ml que contenia 5 ml de THF se cargó con metil éster 12b (463.3 mg, 1.25 mmol). A este se adicionó 1.8 ml de una solución de LiOH 1N. La mezcla de reacción resultante se dejó agitar durante toda la noche. La reacción se apagó por la adición de 1.8 ml de una solución de HCl ÍN. El THF después se removió in vacuo y la capa acuosa resultante se extrajo con CH2C12 2x. Los orgánicos después se secaron con MgS04. El agente de secado después se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 246.2 mg de un aceite incoloro (12c) que se usó sin purificación.

Preparación del Precursor de Cadena Lateral (13a) : 13a El metil éster 12b anterior (499.7 mg/l.84 mmol) se disolvió en una mezcla 1:1 de anhídrido acético/piridina en un matraz de fondo redondo de 50 mL. La reacción se dejó agitar durante toda la noche, tiempo en el cual el disolvente se removió in vacuo. El aceite resultante se colocó en CH2C12 y se lavó con HCl ÍN 2x, agua lx, salmuera lx y se secó con MgS04. El agente de secado se filtró y el disolvente se removió in vacuo para producir 319.9 mg de un aceite incoloro (13a) que se usó sin purificación.

Preparación General para los precursores de cadena la teral de Glicina (14-a) : Por ejemplo el siguiente procedimiento describe la síntesis del ácido tridecanoil-glicina a partir de la resina Fmoc-glicina-wang y ácido tridecanoico. En un tubo de reacción fritado de vidrio de doble extremo de 100 mL, se adicionó la resina Fmoc-glicina-wang (10 g, 4.4 mmol) a 50 mL de Piperidina al 30%/DMF. La reacción se agitó durante 20 minutos, y se lavó con DMF 3x, 3x con isopropanol, y 3x con DMF. A la resina se adicionó una solución de ácido tridecanoico (4.708 g, 22 mmol) en 50 mL de DMF. A esta mezcla se adicionó HOBt (2.97 g, 22 mmol) y DIC (2.77 g, 22 mmol). El recipiente de reacción se puso en un agitador durante toda la noche. La resina después se lavó 3x con DMF, 3x con diclorometano, 3x con MeOH, 3x con THF y 3x con diclorometano. Las cuentas de la resina se secaron en un horno a vacio durante 1 hora. A la resina se adicionó 100 L de TFA al 95%/H20. La reacción se agitó durante 1.5 horas, y el producto no resinoso se lavó con TFA y se colectó. El producto se secó en un horno a vacio hasta un residuo blanco, y se sometió a azeotropia con Tolueno para producir ácido tridecanoil glicina (1.14 g, 95%). XH RMN (THF) 0.82-0.92 (t, J = 7.2, 3H) , 1.2-1.4 (s, 18H), 1.52-1.62 (m, 2H) , 2.10-2.17 (t, J = 7.2, 2H) , 3.83-3.89 (d, J = 7.1, 2H), 7.04-7.17 (s, 1H) , 10.8-10.9 (s, 1H) . La siguiente estructura II se usará para describir los productos observados en los Ejemplos 1 a 17 21 Ejemplo 1 Síntesis de los diastereómeros 1 -1 y 1 -2: CBZ FP-CBZ 1-1 1-2 Se adicionó al Compuesto le en 4 mL de DMF anhidra hidroxibenzotriazol (55.8 mg, 0.413 mmol) y clorhidrato de 1- [3- (dimetilamino) propil] -3-etilcarbodiimida (82.4 mg, 0.430 mmol) . La mezcla de reacción se dejó agitar durante 10 horas a temperatura ambiente, tiempo en el cual después se adicionó Z-PSN (375.2 mg, 0.271 mmol). La HPLC indicó el consumo del núcleo de pseudomicina CBZ protegido (Z-PSN) después de un periodo de 5 horas. El disolvente se removió in vacuo y el residuo resultante se colocó en ACN/H20 1:1 in vacuo y se purificó por via de HPLC preparativa. Esta produjo 2 picos principales cuyo resultado de masa espectral sugiere que estos picos corresponden a los 2 diastereómeros 1-1 (88.3 mg) y 1-2 (166.3 mg) .

Desprotección del Diastereómero 1-1: FP = H 1-3 Un matraz de fondo redondo de 50 ml se cargó con 10 ml de MeOH/1 ml de AcOH glacial y el diastereómero 1-1 (82.0 mg, 0.048 mmol). Después de desgasificar 89.1 mg de 10% de Pd/C se adicionó a la mezcla de reacción y se sometió a 1.033 kg/cm2 (1 atm) de H2 durante 30 minutos. La remoción del catalizador por via de filtración y purificación por HPLC preparativa y la liofilización subsecuente proporcionó 21.7 mg del Compuesto 1^ 3 (R1 = H) . MS (Atomizado iónico) calculado para C58H94CIN1..O19 (M+H)+ 1297.64, encontrado 1297 Preparación del Diastereómero 1 -2 : R'= H R'=H 1-4 1-5 El diastereómero 1-2 (152.8 mg, 0.089 mmol) se sometió a hidrogenólisis como se describió para el diastereómero 1-1 usando 152.8 mg de 10% de Pd/C durante 30 min. La HPLC indicó el consumo del material iniciador y la formación de dos picos del producto que, después de la HPLC preparativa y la liofilización, se encontraron que eran el Compuesto 1-4 (18.0 mg) y el Compuesto 1-5 (11.3 mg) . Compuesto 1-4: MS (Atomizado iónico) calculado para C58H94ClN?2Oi9 (M+H)+ 1297.89, encontrado 1297.8. Compuesto 1-5: MS (Atomizado iónico) calculado para C58H92ClN?2O?8 (M+H)+ 1279.63, encontrado 1281.7. Cada uno de los compuestos listados en la Tabla 1 posterior se sintetizó usando los mismos procedimientos de acilación y desprotección como se describieron anteriormente usando el precursor de cadena lateral indicado. Para cada compuesto listado en la Tabla 1, R1 es un hidrógeno.

Tabla 1 * Aunque este compuesto y el compuesto donde el grupo N-metilo está ausente muestra poca actividad, los Compuestos donde la cadena alquilo se aumenta progresivamente de Cll a C15, muestran actividad aumentada significativa. Las cadenas laterales de esta clase podrían prepararse usando la preparación descrita en la preparación 14-a.

Ejemplo 15 Síntesis del Compuesto 15-1 : 15-1 A un matraz de fondo redondo de 50 ml se adicionó 31.3 mg (0.0237 mmol) del Compuesto 12-1 y 5 ml de TFA (pre-enfriado a 0°C) . La mezcla de reacción se dejó agitar a esta temperatura durante un periodo de 15 min, tiempo en el que se removió el TFA in vacuo. El residuo después se colocó en agua y se liofilizó para producir 24.3 mg del Compuesto 15-1. No fue necesaria purificación adicional.

Ejemplo 16 El Ejemplo 16 ilustra la unión de una cadena lateral Beta-amino sustituida Preparación de los Compuestos 16a , 16b, 16c y 16d: lía IfiE Una solución de t-butoxicarbonilmetilentrifenil-fosforano (5.0 g, 13.3 mmol) y dodecil aldehido (2.2 ml, 10 mmol) en tolueno (50 ml) se sometió a reflujo durante 1 h 20 min. La solución se filtró a través de un tapón de silice para remover los reactivos de fósforo y después se redujo in vacuo para dar un aceite crudo. El aceite se purificó sobre una columna de silice por elución con acetato de etilo al 2% en hexano para dar 2.36 g (84% de rendimiento) del compuesto 16a. MS- 283.4 (M+l) RMN consistente con la estructura. Se adicionó lentamente butil litio (1.6M en hexano) (1.19 ml, 1.9 mmol) a una solución de (R) -bencilmetil bencilamina (0.42 ml, 2.0 mmol) en THF (5 ml) enfriada a -78°C. Después se adicionó gota a gota una solución de THF de 16a (500 mg, 1.77 mmol) . La mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h. La mezcla de reacción después se vertió en solución de NH4C1 saturado y se extrajo con éter (2x) . La solución de éter se secó con MgS04 y se redujo in vacuo para dar 0.95 g de 16b como un aceite crudo que se llevó a la siguiente etapa sin purificación. Una solución de etanol (25 ml) de 16b (0.95 g) y Pd(OH)2/C (0.47 g) se colocó bajo 4.21 kg/cm2 (60 psi) de H2 a 55°C durante 18 h. La suspensión se filtró y después se redujo in vacuo para dar 280 mg (53% de rendimiento) del crudo 16c que se llevó directamente a la siguiente etapa. El compuesto 16c (280 mg, 0.93 mmol) y N-benciloxi-carboniloxisuccinimida (274 mg, 1.1 mmol) se mezclaron en THF (10 ml) y se agitaron durante toda la noche. El disolvente se removió in vacuo y el aceite de producto se purificó por cromatografía de columna sobre silice usando acetato de etilo al 5% en hexano como el eluyente para dar 268 mg (66% de rendimiento) de t-butil éster de 16d. La RMN fue apropiada para la estructura esperada. El éster (97 mg, 0.224 mmol) se disolvió en ácido trifluoroacético (2 ml) a 0°C durante 0.5 h para remover el t-butil éster (16d) con un rendimiento cuantitativo.

Síntesis del Compuesto 16-1 : El Compuesto 16d se disolvió en DMF (2 ml) . Se adicionaron hidroxibenzotriazol (36.4 mg, 0.269 mmol) y clorhidrato de 1- [3- (dimetilamino) propil] -3-etilcarbodiimida (47.1 mg, 0.246 mmol) y la solución se agitó 18 h. El núcleo de pseudomicina CBZ protegido (Z-PSN) (277 mg, 0.185 mmol) se adicionó y la reacción se agitó durante un adicional de 18 h. El producto de reacción se purificó por HPLC y la liofilización dio 136.3 mg (42% de rendimiento) del derivado de pseudomicina CBZ protegido acilado como un sólido blanco. MS- 1743 (M) y la RMN fue consistente con la estructura propuesta. Una solución de metanol (10 ml) y ácido acético (1.5 ml) del compuesto acilado (130 mg, 0.0746 mmol) con 10% de Pd/C (120 mg) se puso bajo un balón de hidrógeno durante 20 min. La solución se filtró y se purificó por HPLC preparativa. La liofilización dio 23 mg (rendimiento de 18%) de la sal de ácido trifluoroacético de 16-1 como un sólido blanco. MS-1206.8 (M) y la RMN fue consistente con la estructura propuesta. El Compuesto 16-1 mostró poca o no mostró actividad contra Candida. Albicans y Cryptococcus neoformans que es una reducción significativa en actividad comparado con el análogo ß-hidroxi .

Ejemplo 17 El Ejemplo 17 ilustra la unión de una cadena lateral quiral .

Preparación del precursor de cadena la teral l id: IZft 17b 12c 12A A una solución de THF de (S)-binaftol (240 mg, 0.84 mmol) se adicionó cribas moleculares de 4A (4 g) , seguido por la adición de Ti(Opr-I)4 puro (0.25 mL, 0.84 mmol). La mezcla de reacción cambió a rojo inmediatamente y permaneció roja. El catalizador quiral (17b) de esta manera preparado se usó para la reacción subsecuente. A una solución de THF preparada frescamente (4 mL) de catalizador (S) -binaftol-Ti 17b (0.42 mmol) se adicionó a -78 °C una solución de THF que contiene trimetilsilildimetilceteno acetal (0.43 mL, 2.1 mmol) y el aldehido no saturado 17a (500 mg, 2.1 mmol) durante 15 min. La reacción se agitó a -78 °C durante 1 h y después a temperatura ambiente durante toda la noche. En este punto, la reacción se apagó con solución de NaHC03 saturado y se extrajo con EtOAc (100 mL) . La capa orgánica se lavó con NaHC03, salmuera y se secó con MgS0 anhidro. Debido a la filtración y concentración in vacuo el residuo se purificó con cromatografía en gel de silice (10% de EtOAc/Hexanos) para dar 257 mg (36%) del producto deseado 17c. XH RMN de 17c (CDC13) : d 5.29 (m, 2H) , 3.65 (s, 3H) , 3.53 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 2.33 (d, J = 6.3 Hz, 1H, 3' -OH), 1.97 (m, 4H) , 1.65-1.22 (m, 20H) , 1.13 (s, 3H) , 1.12 (s, 3H) , 0.84 (m, 3H) . Una solución de THF (5 mL) de 17c (259 mg, 0.76 mmol) se trató con una solución acuosa de NaOH (0.30 mL, 5N, 1.52 mmol) . La reacción se calentó durante toda la noche a 50 °C. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se acidificó a pH=3 usando HCl 5N. La reacción después se extrajo con EtOAc (75 mL) . La capa orgánica se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica de esta manera obtenida se secó y concentró in vacuo para proporcionar 222 mg (90%) del ácido crudo 17d, que se usó directamente para la reacción de acoplamiento de cadena lateral. XR RMN de 17d (CDC13) : d 5.28 (m, 2H) , 3.56 (m, 1H) , 1.95 (m, 4H) , 1.60-1.10 (m, 26H) , 0.83 ( , 3H) .

Preparación de 1 7-1 y 1 1-2: R1 - H R1 = H 17-.*- 17-2 Una solución de THF (7 mL) del ácido crudo 17d (240 mg, 0.74 mmol) se trató con HOBt (90.5 mg, 0.67 mmol) y EDCI (128 mg, 0.67 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitar durante 1.5 h, se adicionó DMAP (41 mg, 0.33 mmol) . Después de agitar durante otras 2 h, se adicionó una DMF (4 mL) de núcleo de pseudomicina CBZ protegido (614 mg, 0.44 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla de reacción se purificó con HPLC preparativa para dar, después de la liofilización, (160 mg, 21%) del producto deseado. Una solución de acetonitrilo (2 mL) del compuesto CBZ protegido (53.4 mg, 0.032 mmol) se trató con TMSI (77 mg, 0.38 mmol) a 0°C. Después de 100 min, la reacción se apagó con CH3CN/H20 1:1. La mezcla de reacción resultante se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para dar 25.8 mg (65%) del producto final deseado 17-1. El Compuesto 17-2 se hace usando los mismos procedimientos descritos anteriormente, usando los materiales iniciadores apropiados, en donde R es un hidrógeno.

.Ejemplo 18 El Ejemplo 18 ilustra la unión de una cadena lateral de alquenilo quiral.

Preparación del precursor de cadena la teral 18d: A una solución de diclorometano (25 mL) de 18a (993 mg, 3.73 mmol) se adicionó a -78 °C metil trimetilsilil dimetilceten acetal (2.27 mL, 11.2 mmol) y TiCl4 puro (0.49 mL, 4.48 mmol). Después de 2 h, la reacción se apagó a -78°C con MeOH (5 mL) . La mezcla de reacción se extrajo con diclorometano (3 x 40 mL) . Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró in vacuo para producir un residuo, que se purificó con cromatografía (EtOAc al 15-20%/Hexanos) para proporcionar 837 mg (61%) del producto deseado 18b. XH RMN de 18a (CDC13) : d 6.28-5.87 (m, 2H) , 5.62-5.43 (m, 2H) , 4.75 (m, 1H) , 4.22 (m, 1H) , 3.87 (m, 1H) , 2.08-1.93 (m, 2H) , 1.80-1.60 (m, 3H) , 1.60-1.40 (m, 3H) , 1.38-1.10 (m, 15H) LH RMN de 18b (CDC13) : d 5.98-5.90 (m, 2H) , 5.55-5.47 (m, 2H) , 4.08 (m, 1H) , 3.86 (m, 1H) , 3.61 (s, 3H) , 3.50 (m, 1H) , 2.00-1.96 (m, 2H), 1.74-1.63 (m, 3H) , 1.50-1.00 (m, 24H) .

A una solución de diclorometano (22 mL) de 18b (837 mg, 2.27 mmol) se adicionó (0.98 g, 4.54 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h, y después se filtró a través de una almohadilla de Celita. Los filtrados se concentraron in vacuo para dar un residuo rojizo, que se purificó por cromatografía en gel de silice (EtOAc al 20%/Hexanos) para dar 441 mg (53%) de la metil cetona 18c deseada . 1H RMN de 18c (CDC13) : d 5.92-5.87 (m, 2H) , 5.48-5.43 (m, 2H) , 3.88 (m, 1H) , 3.56 (s, 3H) , 3.49 (m, 1H) , 2.59 (dd, J = 6.4, 14.7 Hz, 1H), 2.29 (dd, J = 5.9, 15.2 Hz, 1H) , 2.06 (s, 3H) , 1.96 (m, 2H), 1.63 (m, 2H) , 1.40-0.90 (m, 20H) . A una solución de THF (4 mL) y metano (2 mL) de 18c (440 mg, 1.20 mmol) se adicionó a temperatura ambiente KOH 7.5M (1 mL) . Después de agitar a temperatura ambiente durante 4 h, la reacción se acidificó con HCl ÍN a pH = 3. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL) . Los extractos combinados se lavaron con agua (2 x 10 mL) y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró in vacuo para dar 388 mg (>100%) del ácido crudo 18d, que se usó directamente para la reacción de acoplamiento de cadena lateral.

Preparación del Compuesto 18-1 : 18-1 A una solución de THF (10 mL) del ácido crudo 18d (~1.66 mmol) se adicionó HOBt (244 mg, 1.66 mmol) y EDCI (318 mg, 1.66 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 5 h, se adicionó una solución de DMF (5 mL) de núcleo de pseudomicina Alloc protegido (614 mg, 0.50 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante unos cuantos dias, se adicionó DMAP (61 mg, 0.50 mmol) a la mezcla de reacción. Después de agitar durante 12 h adicionales, la mezcla de reacción se purificó por HPLC de fase inversa para proporcionar, después de la liofilización, 225 mg (30%) del derivado acilado alloc protegido. A una solución de THF desgasificado (20 mL) y HOAc (1 mL) del derivado acilado alloc protegido (240 mg, 0.16 mmol) se adicionó PdCl2(PPh3)2 (23 mg, 0.032 mmol) y Bu3SnH (0.87 mL, 3.23 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1.5 h, la mezcla de reacción se purificó por HPLC preparativa para proporcionar 33 mg (17%) del compuesto 18-1. Además de los compuestos listados en los Ejemplos anteriores, los siguientes derivados de N-acilo también se elaboraron, los cuales mostraron actividad limitada o actividad no significativa. Aunque estos compuestos no podrían ser útiles como agentes antifúngicos, proporcionan ideas valiosas en el diseño de compuestos que tienen actividad óptima.

?? OíCH^Ha A menos que se indique lo contrario, cada uno de los compuestos listados en los Ejemplos mostró actividad medible contra Candida Albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus Fumiga tus, Candida Parapsilosis o Histoplasma capsula tum. Sin embargo, las siguientes tendencias básicas en actividad se observaron con base en los compuestos sintetizados. La estereoquímica del grupo ß-hidroxi es preferentemente R. Las longitudes de la cadena alquilo superiores (i.e., C_.2-C20) tienden a tener actividades superiores que las cadenas cortas (e.g., < Cu) a pesar de la estereoquímica o niveles de instauración. La remoción del grupo ß-hidroxi, ,a-disustitución, longitudes de cadena alquilo inferiores en los sustituyentes alquilo y alcoxi, rigidez extrema y ramificación aumentada en la cadena tienden a tener actividad inferior que las cadenas flexibles más largas. Consecuentemente, las cadenas laterales de alquilo representadas por la siguiente estructura se prefieren para el tratamiento antifúngico: donde Ra y Ra son independientemente hidrógeno o metilo o ya sea Ra o Ra es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o un enlace doble o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es hidroxi, con la condición de que Rb' no sea hidroxi cuando Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidrógeno y Rf es n-hexilo, n-octilo o n-decilo o Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidroxi y Rf es n-octilo, n-nonilo o n-decilo; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C1-C4, hidroxialcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo Cs-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C5-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C5-C14, y Rf es alquilo C8-Ci8, alcoxi C5-C11. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (17)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un compuesto representado por la estructura I caracterizado porque R es donde Ra y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o un enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi, con la condición de que Rb' no sea hidroxi cuando Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidrógeno y Rf es n-hexilo, n-octilo o n-decilo o Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidroxi y Rf es n-octilo, n-nonilo o n-decilo; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C1-C4, hidroxialcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C5-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C5-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C5-C14, y Rf es alquilo Cß-Ciß/ alcoxi C5-C11 o bifenilo; o R es en donde Rg es hidrógeno, o alquilo C?-C_.3, y Rh es alquilo Cj-Cis, alcoxi C4-C15, (alquilo C1-C10) fenilo, - (CH2) n-arilo o - (CH2)n- (cicloalquilo Cs-C6) , en donde n = 1-2; o R es en donde R1 es un hidrógeno, halógeno o alcoxi C5-C8, y m es 1, 2 o 3; R es en donde Rj es alcoxi C5-C?4 o alquilo C5-C? , y p = 0, 1 o 2 ; R es en donde Rk es alcoxi C5-C14; o R es -(CH2)-NRm- (alquilo C?3-C18) , en donde Rra es H, -CH3 o -C(0)CH3; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la estructura I tiene la siguiente estereoquímica

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R es en donde Ra y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o un enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi, con la condición de que Rb' no sea hidroxi cuando Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidrógeno y Rf es n-hexilo, n-octilo o n-decilo o Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno, Rc es hidroxi y Rf es n-octilo, n-nonilo o n-decilo; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C?-C, hidroxialcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C5-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C5-C?4, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C5-C?4, y Rf es alquilo C8-C?8 alcoxi C5-Cn o bifenilo.

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque Rb' es hidroxi con la condición de que Rc no sea hidrógeno cuando Ra, Rb, Rd, Re son hidrógeno y Rf es n-hexilo, n-octilo o n-decilo o Rc no sea hidroxi cuando Rf es n-octilo, n-nonilo o n-decilo.

5. El uso de un compuesto como se reivindica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la preparación de un medicamento para el uso para combatir ya sea infecciones fúngicas sistémicas o infecciones de la piel por hongos.

6. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque comprende el compuesto de pseudomicina o la sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo de conformidad con la reivindicación 2 y un vehículo, diluyente, amortiguador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. El juso de un compuesto de pseudomicina o la sal farmacéuticamente aceptable o solvato del mismo de conformidad con la reivindicación 2 para la manufactura de un medicamento para tratar una enfermedad fúngica.

8. Un proceso para producir un núcleo de pseudomicina, caracterizado porque comprende las etapas de proporcionar un compuesto de pseudomicina que tiene una cadena lateral de N-acil alquilo que contiene al menos un grupo gama o delta hidroxi y hacer reaccionar el compuesto de pseudomicina con un ácido para producir el núcleo de pseudomicina.

9. El proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el núcleo de pseudomicina se representa por la estructura I-A: I-A. en donde R' es -NH2 o -NHp-Pg en donde Pg es un grupo protector amino y p es 0 o 1.

10. El proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el compuesto de pseudomicipa que tiene una cadena lateral N-acil alquilo que contiene al menos un grupo gama o delta hidroxi se selecciona del grupo que consiste de pseudomicina A, pseudomicina A' y pseudomicina C.

11. El proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el ácido es ácido trifluoroacético o ácido acético.

12. El proceso de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el ácido es ácido trifluoroacético.

13. Un núcleo de pseudomicina, caracterizado porque se prepara por el proceso de conformidad con la reivindicación 8.

14. El núcleo de pseudomicina de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el núcleo se representa por la estructura I-A: I-A. en donde R' es -NH2 o -NHp-Pg en donde Pg es un grupo protector amino y p es O o 1.

15. Un núcleo de pseudomicina, caracterizado porque se representa por la estructura I-A: I-?. en donde R' es -NH2 o -NHp-Pg en donde Pg es un grupo protector amino y p es 0 o 1.

16. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque comprende el compuesto de pseudomicina o la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 1 y un vehículo, diluyente, amortiguador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

17. El uso de un compuesto de pseudomicina o la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 1 para la manufactura de un medicamento para tratar una infección fúngica en un animal.