MXPA02000312A - Analogos de amida y ester de pseudomicina. - Google Patents

Abstract

La presente invencion describe la modificacion acida de unidades de acido aspartico y/o acido hidroxiaspartico de compuestos de pseudomicina semi-sinteticos o que se presentan naturalmente, asi como metodos de tratamiento contra actividades fungicas.

Description

AN LOGOS DE AMIDA Y ESTER DE PSEUDOMICINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos de pseudomicina, en particular, compuestos de pseudomicina semisintéticos- modificados con ácidos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las pseudomicinas son productos naturales aislados de cultivos líquidos de Pseudomonas syringae (bacteria asociada con plantas) y se ha mostrado que tienen actividades antifúngicas. (ver i.e., Harrison, L., et al., "Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungical activity", J. Gen. Microbioloqy, 137(12), 2857-65 (1991) y Patentes U.S. Nos. 5,576,298 y 5,837,685). A diferencia de los antimicóticos descritos previamente de P. syringae (e.g., siringomicinas, siringotoxinas y siringostatinas) , las pseudomicinas A-C contienen ácido hidroxiaspártico, ácido aspártico, serina, ácido deshidroaminobutírico, lisina y ácido diaminobutírico.

El radical peptídico para las pseudomicinas A, A' , B, B' , C, C corresponde a L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z- Dhb-L-Asp (3-OH) -L-Thr (4-C1) con el grupo carboxilo terminal REF. : 134818 que cierra un anillo macrocíclico en el grupo OH del Ser N terminal. Los análogos se distinguen por la cadena lateral N-acilo, i.e., la pseudomicina A se N-acila por 3,4-dihidroxitetradeconoilo, la pseudomicina A' por 3,4-di idroxipentadecanoilo, la pseudomicina B por 3-hidroxitetradecanoilo, la pseudomicina B' por 3-hidroxidodecanoilo, la pseudomicina C por 3,4-dihidroxihexadecanoilo y la pseudomicina C por 3-hidroxihexadecanoilo . (ver i.e., Ballio, A., et al., "Novel bioactive lipodepsipeptides from Pseudomonas syringae : the pseudomycins", FEBS Letters, 355(1), 96-100, (1994) y Coiro, V.M., et al., "Solution conformation of the Pseudomonas syringae MSU 16H phytotoxic lipodepsipeptide Pseudomycin A determined by computer simulations using distance geometry and molecular dynamics from NMR data", Eur. J. Biochem. , 257(2), 449-456 (1998)). Las pseudomicinas se conoce que tienen ciertos efectos biológicos adversos. Por ejemplo, destrucción del endotelio de la vena, destrucción de tejido, inflamación y toxicidad local a los tejidos huésped, se han observado cuando la pseudomicina se administra intravenosamente. Dado que las pseudomicinas han demostrado actividad antifúngica y química relativamente inexplorada, existe una necesidad para explorar esta clase de compuestos con otros compuestos potenciales que podrían ser útiles como agentes antifúngicos que tengan menos efectos colaterales adversos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de pseudomicina representados por la siguiente estructura, los cuales son útiles como agentes antifúngicos o en el diseño de agentes antifúngicos. en donde R es en donde Ra y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, -acetoacetato, metoxi o hidroxi; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C_.-C , hidroxi (Ci-C ) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo Cs-C6; R es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C5-C?_, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C5-C14, y Rf es alquilo C6-C18, alcoxi C5-C11 o bifenilo; R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo C_-C?3, y Rh es alquilo C_-C?5, alcoxi C4-C?5, (alquilo C_-C?o) fenilo, - (CH2) n-arilo o - (CH2) n- (cicloalquilo C5-C6) , en donde n = 1 o 2; o R es en donde R1 es hidrógeno, halógeno o alcoxi C5-C8, y m es 1, 2 o 3; R es en donde Rj es alcoxi C5-C14 o alquilo C5-C_.4, y p = 0 , 1 o 2 ; R es .

~*"G en donde Rk es alcoxi Cs-C? ; o R es -(CH2)-NRm- (alquilo C_3-C?8) , en donde Rm es H, -CH3 o -C(0)CH3; R1 es independientemente -NH2 o -NHP-Pg, en donde p es 0 o 1; R2 y R3 son independientemente -0R2a, o -N(R2b) (R2c) , en donde R2a y R2b son _nciepen(:iier? emente hidrógeno, alquilo C?-C?o (e.g., metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, s-butilo, t-butilo, n-amilo, i-amilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonanilo, n-decilo, etc.), cicloalquilo C3-Ce (e.g., ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentilmetilo, metilociclopentilo, ciciohexilo, etc.), haloalquilo (e.g., CF3CH2-) , hidroxi (C_-C?o) alquilo, alcoxi (C_-C_o) alquilo (e.g., metoxietilo) , alilo, alquenilo C2-C_.0, amino (Ci-Cio) alquilo, mono- o dialquilamino (Ci-Cio) alquilo, arilo (C_-C_o) alquilo (e.g., bencilo), heteroarilo (Ci-Cio) alquilo (e.g., 3-piridilmetilo, 4-piridilmetilo) o cicloheteroalquil (C?-C_.0) alquilo (e.g., N-tetrahidro-1, -oxaziniletilo y N-piperaziniletilo) , o R2b es un residuo de carboxilato de alquilo de un alquil éster de aminoácido (e.g., -CH2C02CH3, -CH (C02CH3) CH (CH3) 2, -CH (C02CH3)CH (fenilo) , -CH (C02CH3) CH2OH, -CH (C02CH3) CH2 (p-hidroxifenilo), -CH (C02CH3) CH2SH, -CH (C02CH3) CH2 (CH2) 3NH2, CH(C02CH3)CH2(4- o 5-imidazol) , CH (C02CH3) CH2C02CH3, CH(C02CH3)CH2C02NH2 y similares), y R2c es hidrógeno o alquilo C_-C6, con la condición de que ambos R2 y R3 no sean -OH; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otra modalidad de la presente . invención, se proporciona un profármaco de un compuesto de pseudomicina, que tiene la estructura I representada anteriormente en donde R2 y R3 se representan por -0R2a, en donde R2a es alquilo C_-C3. En aún otra modalidad de la presente invención, un derivado de 3-amido de un compuesto de pseudomicina se proporciona, en donde el compuesto se prepara mediante las etapas de (i) proporcionar un compuesto que tiene la estructura I anterior, en donde R1 es -NH2 y R2 y R3 son ambos -OH; (ii) proteger los grupos aminos, R1, en las posiciones 2, 4 y 5 con un grupo protector amino; (iii) formar un enlace amida en la posición 3 usando un tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N,N' , N' -tetrametiluronio como un agente de acoplamiento; y (iv) remover los grupos amino-protectores . También se proporciona un derivado 8-amido, en donde el derivado se prepara usando las etapas descritas anteriormente excepto que se usa hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tripirrolidinofosfonio como el agente de acoplamiento. Se proporciona en otra modalidad de la presente invención, una formulación farmacéutica que incluye el compuesto de pseudomicina representado por la estructura I anterior y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En aún otra modalidad de la presente invención, se proporciona un método para tratar una infección fúngica en un animal en necesidad del mismo, que comprende administrar al animal el compuesto de pseudomicina I descrito anteriormente.

Definí clones Como se usa en la presente, el término "alquilo" se refiere a un radical de hidrocarburo de la fórmula general CnH2n+? que contiene de 1 a 30 átomos de carbono a menos que se indique de otra manera. El radical alcano podría ser lineal (e.g. metilo, etilo, propilo, butilo, etc.), ramificado (e.g., isopropilo, isobutilo, butilo terciario, neopentilo, etc.), cíclico (e.g., ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, metilciclopentilo, ciciohexilo, etc.), o multi-cíclico (e.g., biciclo [2.2.1] heptano, espiro [2.2] pentano, etc.). El radical alcano podría ser sustituido o no sustituido. Similarmente, la porción alquilo de un grupo alcoxi, alcanoilo o alcanoato tienen la misma definición como anteriormente. El término "alquenilo" se refiere a un hidrocarburo acíclico que contiene al menos un doble enlace carbono carbono. El radical alqueno podría ser lineal, ramificado, cíclico o multi-cíclico. El radical alqueno podría ser sustituido o no sustituido. La porción alquenilo de un grupo alquenoxi, alquenoilo o alquenoato tiene la definición como anteriormente . El término "alquinilo" se refiere a un hidrocarburo acíclico que contiene al menos un enlace triple carbono carbono. El radical alquino podría ser lineal o ramificado. El radical alquino podría ser sustituido o no sustituido. La porción alquinilo de un grupo alquinoxi, alquinoilo o alquinoato tiene la misma definición como anteriormente. El término "arilo" se refiere a radicales aromáticos que tienen sistemas de anillos simples (e.g. fenilo) o fusionados (e.g., naftaleno, antraceno, fenantreno, etc.). Los grupos arilo podrían ser sustituidos o no sustituidos. El término "heteroarilo" se refiere a radicales aromáticos que contienen al menos un heteroátomo dentro del sistema de anillo aromático (e.g., pirrol, piridina, indol, tiofeno, furano, benzofurano, imidazol, oxazina, pirimidina, purina, benzimidazol, quinolina, etc.). El radical aromático podría consistir de un sistema de anillo simple o fusionado. Los grupos heteroarilo podrían ser sustituidos o no sustituidos. i / // "NHp-Pg" y "grupo p¿e t&CTOt amino^se refieren a un sustituyente del grupo amino (Pg) empleado comúnmente para bloquear o proteger la funcionalidad amino mientras que reaccionan o£rbsr grupos' funcionales en el compuesto. Cuando p es 0, el grupo protector amino, cuando se toma con el nitrógeno al cual se enlaza, forma una imida cíclica, e.g., ftalimido y tetracloroftalimido. Cuando p es 1, el grupo protector, cuando se toma con el nitrógeno al cual se enlaza, puede formar un carbamato, e.g., metilo, etilo y 9-fluorenilmetilcarbamato; o una amida, e.g., N-formilo y N-acetilamida . Dentro del campo de la química orgánica y particularmente dentro del campo de la bioquímica orgánica, se entiende ampliamente que la sustitución significativa de los compuestos se tolera o aun es útil. En la presente invención, por ejemplo, el término grupo alquilo toma en cuenta sustituyentes, el cual es un alquilo clásico, tal como metilo, etilo, propilo, hexilo, isooctilo, dodecilo, estearilo, etc. El término "grupo" contempla y toma en cuenta específicamente sustituyentes sobre alquilos, que son comunes en el arte, tal como hidroxi, halógeno, alcoxi, carbonilo, ceto, éster, carbamato, etc., así como incluye el radical alquilo no sustituido. Sin embargo, se entiende en general, por los expertos en el arte que los sustituyentes deberían seleccionarse para no afectar adversamente las características farmacológicas del compuesto o interferir adversamente con el uso del medicamento. Los sustituyentes apropiados para cualquiera de los grupos definidos anteriormente incluyen alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, halo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquiltio, ariltio, mono- y di-alquil amino, sales de amonio cuaternarias, aminoalcoxi, idroxialquilamino, aminoalquiltio, carbamilo, carbonilo, carboxi, glicolilo, glicilo, hidrazino, guanilo y combinaciones de los mismos. El término "solvato" se refiere a un agregado que comprende una o más moléculas del soluto, tal como un compuesto de estructura I, con una o más moléculas de un disolvente farmacéutico, tal como agua, etanol y similares. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales orgánicas o inorgánicas de los compuestos representados por la estructura I que son sustancialmente no tóxicas para el receptor a las dosis administradas. El término "profármaco" se refiere a una clase de fármacos que resultan en la acción farmacológica debido a la conversión por procesos metabólicos dentro del cuerpo (i.e., biotransformación) . En la presente invención, los compuestos de profármaco de pseudomicina contienen funcionalidades de éster que pueden cortarse por esterasas en el plasma para producir el fármaco activo. El término "animal" se refiere a humanos, animales acompañantes (e.g., perros, gatos y caballos), animales de fuente alimenticia (e.g., vacas, puercos, ovejas y pollo), animales de zoológico, animales marinos, pájaros y otras especies animales similares.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los Solicitantes han descubierto que la modificación de la funcionalidad acida enlazada a las unidades de ácido hidroxiaspártico y/o ácido aspártico de un producto natural de pseudomicina o derivado semi-sintético proporciona compuestos que tienen indicaciones in vi tro que sugieren que los compuestos nuevos podrían ser activos contra C. Albican , Cr neoformans y/o A. fumiga tus . Algunos bis-ésteres se han mostrado que actúan como un profármaco; por lo tanto, estos compuestos particulares han reducido la actividad in vi tro, pero muestran eficiencia in vivo. El " Esquema de Reacción I posterior ilustra los procedimientos generales para sintetizar el Compuesto I a partir de cualquiera de las pseudomicinas que se presentan naturalmente o derivados de N-acilo modificados. En general, se usan tres etapas de síntesis para producir el Compuesto I: (1) protección amino selectiva; (2) condensación con el alcohol o amina apropiado para producir el éster o amida respectivo; y (3) desprotección de los grupos amino.

Esquema de Reacción I Los grupos amino colgantes en los residuos 2, 4 y 5 podrían protegerse usando cualquier medio estándar conocido por los expertos en el arte para la protección amino. El género y especie exacto del grupo protector amino empleado no es crítico con tal de que el grupo amino derivado sea estable a las condiciones de la o las reacciones subsecuentes sobre otras posiciones de la molécula intermediaria y el grupo protector puede removerse selectivamente en el punto apropiado sin romper el resto de la molécula, incluyendo cualquier otro grupo o grupos protectores amino. Los grupos protectores amino preferidos son t-butoxicarbonilo (t-Boc) , aliloxicarbonilo, ftalimido y benciloxicarbonilo (CBZ) . El más preferido es aliloxicarbonilo (Alloc) y benciloxicarbonilo (CBZ) . Ejemplos adicionales de los grupos protectores apropiados se describen en T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y. (2nd ed. , 1991), capítulo 7. La formación de los grupos esteres podria realizarse usando los procedimientos de esterificación estándares bien conocidos para los expertos en el arte. La esterificación bajo condiciones acidas incluye típicamente disolver o suspender el compuesto de pseudomicina en el alcohol apropiado en presencia de un ácido prótico (e.g., HCl, TFA, ácido p-toluensulfónico, etc.) . Bajo condiciones básicas, el compuesto de pseudomicina se hace reaccionar, en general, con el haluro de alquilo apropiado en presencia de una base débil (e.g., bicarbonato de sodio bajo condiciones anhidras). La formación de los grupos amida podría realizarse usando los procedimientos de amidación estándares bien conocidos para los expertos en el arte. Sin embargo, la elección de los agentes de acoplamiento proporciona la modificación selectiva de los grupos ácidos. Por ejemplo, el uso de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tripirrolidinofosfonio (PyBOP) como el agente de acoplamiento permite aislar mono-amidas puras en el residuo 8 y (en algunos casos) bis amidas puras simultáneamente. Puesto que, los agentes de acoplamiento, tal co o tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-N,N, N' , N' -tetrametiluronio (TBTU) y hexafluorofosfato de 2(1H-benzotriazol-1-il) -1, 1, 3, 3-tetrametiluronio (HBTU) favorecen la formación de monoamidas en el residuo 3. Los Solicitantes también descubrieron que la adición de una amina voluminosa mejora la relación de monoamidas en el residuo 3. La relación de amidación en el residuo 3 vs . Residuo 8 aumentó de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 6:1 y la cantidad de bis-amidas se redujo por medio de la adición de una amina voluminosa. El término "amina voluminosa" se refiere a una amina que tiene sustituyentes múltiples y/o largos en el átomo de nitrógeno. Podría usarse cualquier amina terciaria que sea compatible con las condiciones de reacción. Las aminas voluminosas preferidas incluyen N,N-diisopropiletilamina (DIEA) y N-etildiciclohexilamina . La cantidad de la amina voluminosa adicionada es en general de aproximadamente 1 a 10 equivalentes, de preferencia 3 a 8 equivalentes, más preferentemente 5 a 6 equivalentes. La reacción se corre en general a temperaturas de aproximadamente temperatura ambiente (25 °C) a aproximadamente -20 °C. Sin embargo, los Solicitantes han descubierto que temperaturas inferiores (de aproximadamente 0°C a aproximadamente -20 °C) mejoran adicionalmente. la formación de monoamidas en el residuo 3. La relación de amidación en el residuo 3 vs. El residuo 8 aumentó tanto como 20:1 adicionando una amina voluminosa y disminuyendo la temperatura de la reacción. Sin embargo, se entenderá por los expertos en el arte que el límite de temperatura inferior dependerá de la solubilidad de los componentes reactivos. Una vez que se modifican los grupos ácidos, entonces los grupos protectores amino (en las posiciones 2, 4 y 5) podrían removerse usando los procedimientos estándares apropiados para el grupo protector específico usado. Por ejemplo, los grupos CBZ se remueven por hidrogenación en presencia de un catalizador de hidrogenación (e.g., 10% de Pd/C). Cuando el grupo protector amino es aliloxicarbonilo, entonces el grupo protector podría removerse usando hidruro de tributilestaño y dicloruro de trifenilfosfina paladio. Este esquema de protección/desprotección particular tiene la ventaja de reducir el potencial para la hidrogenación del grupo vinilo de la unidad Z-Dhb de la estructura pseudomicina. Como se discutió previamente, las pseudomicinas son productos naturales aislados de la bacteria Pseudomonas syringae que se han caracterizado como lipodepsinonapéptidos que contienen una porción de péptido cíclico cerrada por un enlace lactona y que incluyen los aminoácidos inusuales 4-clorotreonina (ClThr) , ácido 3-hidroxiaspártico (HOAsp) , ácido 2, 3-deshidro-2-aminobutírico (Dhb) y ácido 2, 4-diaminobutírico (Dab) . Los métodos para el crecimiento de varias cepas de P. syringae para producir los diferentes análogos de pseudomicina (A, ' , B, B' , C y C ) se describen posteriormente en se describen en mayor detalle en la Solicitud de Patente del PCT No. de serie PCT/US00/08728 presentada por Hilton, et al, el 14 de abril de 2000, titulada "Pseudomycin Production by Pseudomonas Syringae", incorporada en la presente por referencia, Solicitud de Patente del PCT No. de Serie PCT/US00/08727 presentada por Kulanthaivel, et al., el 14 de abril de 2000, titulada "Pseudomycin Natural Products", incorporada en la presente por referencia y Patentes U.S. Nos. 5,576,298 y 5,837,685, cada una de las cuales se incorporan en la presente por referencia. Las cepas aisladas de P. syringae que producen una o más pseudomicinas se conocen en el arte. La cepa de tipo silvestre MSU 174 y una mutante de esta cepa generada por mutagenesis de transposón, MSU 16H se describen en las Patentes U.S. Nos. 5,576,298 y 5,837,685; Harrison et al., "Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungical activity", J. Gen. Microbiology, 137, 2857-2865 (1991); y Lamb et al., "Transposon mutagenesis and tagging of fluorescent pseudomonas; Antimycoctic production is necessary for control of Dutch elm disease", Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 6447-6451 (1987).

Una cepa de P. syringae que es apropiada para la producción de una o más pseudomicinas puede aislarse a partir de las fuentes ambientales que incluyen plantas (e.g., plantas de cebada, plantas cítricas y plantas de lila) así como, fuentes tal como suelo, agua, aire y polvo. Una cepa preferida se aisla de plantas. Las cepas de P. syringae que se aislan de fuentes ambientales pueden referirse como tipo silvestre. Como se usa en la presente, "tipo silvestre" se refiere a un genotipo dominante que se presenta naturalmente en la población normal de P. syringae (e.g., cepas o aislados de P. syringae que se encuentran en la naturaleza y no se producen por manipulación en el laboratorio) . Como la mayoría de los organismos, las características de los cultivos que producen pseudomicina empleados (cepas de P. syringae, tal como MSU 174, MSU 16H, MSU 206, 25-B1, 7H9-1) se someten a variación. Por esto, la progenie de estas cepas (e.g., recombinantes, mutantes y variantes) podrían obtenerse por los métodos conocidos en el arte. MSU 16H de P. syringae está disponible públicamente a partir de American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockville, MD, USA como No. de acceso ATCC 67028. Las cepas de P. syringae 25-B1, 7H9-1 y 67 Hl se depositaron con American Type Culture Collection el 23 de marzo de 2000 y fueron asignados los siguientes Nos. de Acceso: 25-B1 No. de Acceso PTA-1622 7H9-1 No. de Acceso PTA-1623 67 Hl No. de Acceso PTA-1621 Las cepas mutantes de P. syringae también son apropiadas para la producción de una o más pseudomicinas. Como se usa en la presente, "mutante" se refiere a un cambio heredable súbito en el fenotipo de una cepa, el cual puede ser espontáneo o inducido por agentes mutagénicos conocidos, tal como radiación (e.g., radiación ultravioleta o rayos X), mutágenos químicos (e.g., Metansulfonato de etilo (EMS) , diepoxioctano, N-metil-N-nitro-N' -nitrosoguanina (NTG) y ácido nitroso), mutagenesis de sitio específico y mutagenesis mediada por transposón. Los mutantes que producen pseudomicina de P. syringae pueden producirse tratando las bacterias con una cantidad de un agente mutagénico efectivo para producir mutantes que sobreproducen una o más pseudomicinas, que producen una pseudomicina (e.g., pseudomicina B) en exceso sobre otras pseudomicinas, o que producen una o más pseudomicinas bajo condiciones de crecimiento ventajosas. Mientras que el tipo y la cantidad de agente mutagénico a usarse pueden variar, un método preferido es diluir serialmente NTG a niveles en el intervalo de 1 a 100 µg/ml. Los mutantes preferidos son los que sobreproducen pseudomicina B y crecen en medios definidos mínimos . Los aislados, cepas mutantes y otras cepas deseables ambientales de P. syringae pueden someterse a selección para rasgos deseables del hábito de crecimiento, fuente de nutrimentos del medio de crecimiento, fuente de carbono, condiciones de crecimiento, requerimientos de aminoácidos y similares. De preferencia, una cepa que produce pseudomicina de P. syringae se selecciona para crecimiento sobre medio definido mínimo, tal como medio N21 y/o para la producción de una o más pseudomicinas a niveles mayores de aproximadamente 10 µm/ml . Las cepas preferidas exhiben la característica de producir una o más pseudomicinas cuando crecen en un medio que incluye tres o menos residuos de aminoácidos y opcionalmente, ya sea un lípido, un producto de papa o combinaciones de los mismos . Las cepas recombinantes pueden desarrollarse transformando las cepas de P. syringae, usando los procedimientos conocidos en el arte. A través del uso de la tecnología de ADN recombinante, las cepas de P. syringae pueden transformarse para expresar una variedad de productos de genes además de antibióticos que estas cepas producen. Por ejemplo, se pueden modificar las cepas al introducir copias múltiples de los genes de biosíntesis de pseudomicina endógenos para lograr mayor rendimiento de pseudomicina. Para producir una o más pseudomicinas de una cepa de tipo silvestre o mutante de P. syringae, el organismo se cultiva con agitación en un medio de nutriente acuoso que incluye una cantidad efectiva de tres o menos aminoácidos, de preferencia ácido glutámico, glicina, histidina o una combinación de los mismos. Alternativamente, se combina glicina con uno o más de un producto de papa y un lípido. El cultivo se lleva a cabo bajo condiciones efectivas para el crecimiento de P. syringae y la producción de la pseudomicina o pseudomicinas deseadas. Las condiciones efectivas incluyen temperaturas de aproximadamente 22 °C a aproximadamente 21 ° C, y una duración de aproximadamente 36 horas a aproximadamente 96 horas. El control de la concentración de oxígeno en el medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de una pseudomicina. De preferencia, los niveles de oxígeno se mantienen a aproximadamente 5 a 50% de saturación, más preferentemente aproximadamente 30% de saturación. El rociado con aire, oxígeno puro o mezclas de gases que incluyen oxígeno puede regular la concentración de oxígeno en el medio. El control del pH del medio durante el cultivo de P. syringae también es ventajoso. Las pseudomicinas son lábiles a pH básico y puede presentase una degradación significativa si el pH del medio de cultivo está por encima de aproximadamente 6 durante más de aproximadamente 12 horas. De preferencia, el pH del medio de cultivo se mantiene entre 6 y 4. P. syringae puede producir una o más pseudomicinas cuando crece en cultivo por lotes. Sin embargo, la alimentación por lotes o semi-continua de glucosa y opcionalmente, un ácido o base (e.g., hidróxido de amonio) para controlar el pH, mejora la producción. La producción de pseudomicina puede mejorarse además usando métodos de cultivo continuos en los que se alimentan automáticamente glucosa e hidróxido de amonio. La elección de la cepa de P. syringae puede afectar la cantidad y la distribución de la pseudomicina o pseudomicinas producidas. Por ejemplo, las cepas MSU 16H y 67 Hl producen cada una predominantemente pseudomicina A, pero también producen pseudomicina B y C, típicamente en relaciones de 4:2:1. La cepa 67 Hl produce típicamente niveles de pseudomicinas de aproximadamente tres a cinco veces mayor que los que se producen por la cepa MSU 16H. Comparado con las cepas MSU 16H y 67 Hl, la cepa 25-Bl produce más pseudomicina B y menos pseudomicina C. La cepa 7H9-1 es distintiva predominantemente en la producción de pseudomicina B y mayor cantidad de pseudomicina B que otras cepas. Por ejemplo, esta cepa puede producir pseudomicina B en al menos un exceso de diez veces sobre la pseudomicina A o C. Cada pseudomícina, intermediario de pseudomicina y mezclas pueden detectarse, determinarse aislarse y/o purificarse mediante cualquier variedad de métodos conocidos para los expertos en el arte. Por ejemplo, el nivel de la actividad de pseudomicina en un caldo o en una composición aislada o purificada puede determinarse mediante la acción antifúngica contra un hongo tal como Candida y puede aislarse y purificarse por cromatografía líquida de alto desarrollo.

Alternativamente, el derivado de amido o éster puede formarse a partir de un compuesto semi-sintético de N-acilo. Los compuestos de pseudomicina semi-sintéticos podrían sintetizarse intercambiando el grupo N-acilo sobre la unidad de L-serina. Ejemplos de varios derivados de N-acilo se describen en la Publicación de Patente del PCT No. de Serie PCT/US00/15017, Belvo, et al., presentada de manera regular aquí, titulada "Pseudomycin N-acyl Side-Chain Analogs" y se incorpora en la presente por referencia. En general, se usan cuatro etapas de síntesis para producir los compuestos semisintéticos a partir de compuestos de pseudomicina que se ' presentan naturalmente: (1) protección amino selectiva; (2) desacilación química o enzimática de la cadena lateral de N- acílo; (3) reacilación con una cadena lateral diferente y (4) desprotección de los grupos amino. Las unidades de ácido aspártico y/o ácido hidroxiaspártico pueden modificarse antes de la desprotección de los grupos amino. La desacilación de un grupo N-acilo que tiene una cadena lateral gama o delta hidroxilada (e.g., 3, -dihidroxitetra- deconoato) podría realizarse tratando el compuesto de pseudomicina amino-protegido con un ácido en un disolvente acuoso. Los ácidos apropiados incluyen ácido acético y ácido trifluoroacético. Un ácido preferido es ácido trifluoroacético. Si se usa ácido trifluoroacético, la reacción podría realizarse a o . cerca de la temperatura ambiente. Sin embargo, Cuando se usa ácido acético, la reacción se corre en general a aproximadamente 40°C. Los sistemas de disolventes acuosos apropiados incluyen acetonitrilo, agua y mezclas de los mismos. Los disolventes orgánicos aceleran la reacción; sin embargo, la adición de un disolvente orgánico podría llevar a otros subproductos. Los compuestos de pseudomicina que carecen de un grupo hidroxi delta o gama en la cadena lateral (e.g., Pseudomicina B y C ) podrían desacilarse enzimáticamente. Las enzimas desacilasas apropiadas incluyen Polimixin Acilasa (164-16081 Fatty Acylase (cruda) o 161-16091 Fatty Acylase (pura) disponibles en Wako Puré Chemical Industries, Ltd.), o ECB desacilasa. La desacilación enzimática podría realizarse usando los procedimientos de desacilación estándares bien conocidos para los expertos en el arte. Por ejemplo, los procedimientos generales para usar polimixin acilasa podrían encontrarse en Yasuda, N., et al, Agrie. Biol . . Chem . , 53, 3245 (1989) y Kimura, Y., et al., Agrie. Biol . . Chem . , 53, 497 (1989). El producto desacilado (también conocido como el núcleo de pseudomicina) se reacila usando el ácido correspondiente del grupo acilo deseado en presencia de un agente de activación carbonilo. "Grupo de activación carbonilo" se refiere a un sustituyente de un carbonilo que promueve las reacciones de adición nucleofílica en tal carbonilo. Los sustituyentes de activación apropiados son los que tienen un efecto de extracción de electrones neto sobre el carbonilo. Tales grupos incluyen, pero no se limitan a, alcoxi, ariloxi, he.terociclos aromáticos que contienen nitrógeno o grupos amino (e.g., oxibenzotriazol, imidazolilo, nitrofenoxi, pentaclorofenoxi, N-oxisuccinimida, N, N' -diciclohexilisour-O-ilo y N-hidroxi-N-metoxiamino) ; acetatos, formatos; sulfonatos (e.g., Metansulfonato, etansulfonato, bencensulfonato y p-tolilsulfonato) ; y haluros (e.g., cloruro, bromuro y yoduro). Podrían usarse una variedad de ácidos en el proceso de acilación. Los ácidos apropiados incluyen ácidos alifáticos que contienen uno o más grupos arilo, alquilo, amino (que incluyen aminas primarias, secundarias y terciarias) , hidroxi, alcoxi y amido colgantes; ácidos alifáticos que contienen nitrógeno u oxígeno dentro de la cadena alifática; ácidos aromáticos sustituidos con grupos alquilo, hidroxi, alcoxi y/o alquil amino; y ácidos heteroaromáticos sustituidos con grupos alquilo, hidroxi, alcoxi y/o alquil amino. Alternativamente, podría usarse una síntesis en fase sólida, en donde un hidroxibenzotriazol-resina (HOBt-resina) sirve como el agente de acoplamiento para la reacción de acilación. La modificación acida del compuesto semi-sintético de N-acilo protegido después se lleva a cabo haciendo reaccionar al menos uno de los grupos carboxilo colgantes enlazados a las unidades del péptido aspártico o hidroxiaspártico del compuesto de pseudomicina semi-sintético modificado con N-acilo para formar los enlaces de amida o éster deseados. Los grupos protectores después se remueven como se describió previamente. El compuesto de pseudomicina podría aislarse y usarse per se o en la forma de su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición acida no tóxicas derivadas de ácidos inorgánicos y orgánicos. Los derivados de las sales apropiadas incluyen haluros, tiocianatos, sulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, arilsulfonatos, alquilsulfatos, fosfonatos, monohidrógeno-fosfatos, dihidrógenofosfatos, metafosfatos, pirofosfonatos, alcanoatos, cicloalquilalcanoatos, arilalcanoatos, adipatos, alginatos, aspartatos, benzoatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, lactatos, maleatos- nicotinatos, oxalatos, palmitatos, pectinatos, picratos, pivalatos, succinatos, tartaratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, digluconatos, trifluoroacetatos, y similares. El término "solvato" se refiere a un agregado que comprende una o más moléculas del soluto (i.e., compuesto de pseudomicina) con una o más moléculas de un disolvente farmacéutico, tal como agua, etanol y similares. Cuando el disolvente es agua, entonces el agregado se refiere como un hidrato. Los solvatos se forman en general disolviendo el compuesto en el disolvente apropiado con calor y enfriando lentamente para generar una forma de solvato amorfa, cristalina. El ingrediente activo (i.e., compuesto de pseudomicina) se formula típicamente en formas de dosificación farmacéutica para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para dar al paciente, médico o veterinario un producto elegante y fácil de manejar. Las formulaciones podrían comprender de 0.1% a 99.9% en peso del ingrediente activo, más en general, de aproximadamente 10% a aproximadamente 30% en peso. Como se usa en la presente, el término "dosis unitaria" o "dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir un efecto terapéutico deseado. Cuando una dosis unitaria se administra oral o parenteralmente, se proporciona típicamente en la forma de una tableta, cápsula, pildora, paquete en polvo, composición tópica, supositorio, oblea, unidades medidas en ampolletas o en recipientes multidosis, etc. Alternativamente, una dosis unitaria podría administrarse en la forma de un aerosol seco o líquido que podría inhalarse o atomizarse. La dosificación que va a administrarse podría variar dependiendo de las características físicas del animal, la severidad de los síntomas del animal, el medio usado para administrar el fármaco y la especie animal. La dosis específica para un animal dado se establece usualmente por el juicio del médico o veterinario de atención. Los vehículos, diluyentes y excipientes apropiados son bien conocidos para los expertos en el arte e incluyen materiales, tal como carbohidratos, ceras, polímeros solubles y/o que se hinchan en agua, materiales hidrofílicos o hidrofóbicos, gelatina, aceites, disolventes, agua y similares. El vehículo, diluyente o excipiente particular usado dependerá del medio y propósito para el cual el ingrediente activo está siendo aplicado. Las formulaciones también podrían incluir agentes humectantes, agentes lubricantes, surfactantes, amortiguadores, agentes de tonicidad, agentes de volumen, estabilizadores, emulsificantes, agentes de suspensión, preservativos, edulcorantes, agentes de perfumado, agentes saborizantes y combinaciones de los mismos. Una composición farmacéutica podría administrarse usando una variedad de métodos. Los* métodos apropiados incluyen tópica (e.g., ungüentos o atomizadores), oral, inyección e inhalación. El método de tratamiento particular usado dependerá del tipo de infección que está siendo tratada. En aplicaciones parenterales iv, las formulaciones se diluyen' o reconstituyen típicamente (si se seca por congelado) y se diluyen adicionalmente si es necesario, antes de la administración. Un ejemplo de instrucciones de reconstitución para el producto secado por congelado son adicionar diez ml de agua para inyección (siglas en inglés WFI) a la ampolleta y agitar suavemente hasta disolver. Los tiempos de reconstitución típicos son menores de un minuto. La solución resultante después se diluye adicionalmente en una solución de infusión tal como dextrosa al 5% en agua (siglas en inglés D5W) , antes de la administración. Los compuestos de pseudomicina se han mostrado que exhiben actividad antifúngica, tal como inhibición del ' crecimiento de varios hongos infecciosos que incluyen Candida spp. (i.e., C. álbicans , C. parapsilosis , C. Krusei , C. glabra ta , C. tropi calis o C. Lusi taniaw) ; Torulopus spp. (i.e., T. glabra ta ) ; Aspergillus spp. (i.e., A. fumiga tus) ; Histoplasma spp. (i.e., H. Capsula tum) ; Crypotococcus spp. (i.e., C. neoformans) ; Blastomyces spp. (i.e., B. derma ti tidis) ; Fusarium spp.; Trichophyton spp., Pseudallescheria boydii , Coccidioides immi ts, Sporothrix schenckii, etc. Consecuentemente, los compuestos y formulaciones de la presente invención son útiles en la preparación de medicamentos para el uso en la combinación de infecciones fúngicas sistémicas o infecciones de la piel fúngicas. Por lo tanto, se proporciona un método para inhibir la actividad fúngica, que comprende poner en contacto el compuesto de pseudomicina de la presente invención con un hongo. Un método preferido incluye inhibir. la actividad de Candida albicans o Aspergillus fumiga tus . El término "poner en contacto" incluye una unión o enlace o toque aparente o tangencia mutua de un compuesto de la invención con un hongo. El término no implica ninguna limitación adicional al proceso, tal como mediante el mecanismo de inhibición. Los métodos se definen para abarcar la inhibición de la actividad fúngica mediante la acción de los compuestos y sus propiedades antifúngicas inherentes. También se proporciona un método para tratar una infección . fúngica que comprende administrar una cantidad efectiva de una formulación farmacéutica de la presente invención a un huésped animal con la necesidad de tal tratamiento. Un método preferido incluye tratar una infección por Candida albicans o Aspergillus fumiga tus . El término "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad de compuesto activo que es capaz de inhibir la actividad fúngica. La dosis administrada variará dependiendo de tales factores como la naturaleza y severidad de la infección, la edad y la salud general del huésped, la tolerancia del huésped al agente antifúngico y la especie de huésped. El régimen de dosis particular probablemente podría variar de acuerdo con estos factores.

El medicamento podría ser dado en una dosis diaria simple o en dosis múltiples durante el día. El régimen podría durar de aproximadamente 2-3 días a aproximadamente 2-3 semanas o más. Una dosis diaria típica (administrada en dosis simples o divididas) contiene un nivel de dosificación entre aproximadamente 0.01 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal de un compuesto activo. Las dosis diarias preferidas son en general entre aproximadamente 0.1 mg/kg a 60 mg/kg y más preferentemente entre aproximadamente 2.5 mg/kg a 40 mg/kg. El huésped podría ser cualquier animal incluyendo humanos, animales de compañía (e.g., perros, gatos y caballos), animales de fuente alimenticia (e.g., vacas, cerdos, ovejas y pollo) , animales de zoológico, animales marinos, pájaros y otras especies animales similares.

EJEMPLOS A menos que se indique lo contrario, todos los químicos pueden adquirirse de Aldrich Chemical (Milwaukee, Wl) . Se usan las siguientes abreviaciones a través de los ejemplos para representar los materiales listados respectivos: ACN - acetonitrilo TFA - ácido trifluoroacético DMF - dimetilformamida EDCI - clorhidrato de 1- [3- (dimetilamino) propil] -3-etilcarbodiimida BOC = t-butoxicarbonilo, (CH3) 3C-0-C (0) -CBZ = benciloxicarbonilo, C6H5CH2-0-C (0) - PyBOP = hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tripirrolidinofosfonio TBTU = tetrafluoroborato de o-benzotriazol-1-il-N, N, N' , N' -tetrametiluronio DIEA = N, N-diisopropiletilamina Condiciones de HPLC A menos que se indique lo contrario, el trabajo de HPLC de fase inversa analítica se hizo usando los sistemas Waters 600E equipados con columna Waters µBondapak (C18, 3.9x300 mm) .

El eluyente usado fue sistema de disolvente acetonitrilo/TFA acuoso al 0.1% 65:35 a acetonitrilo al 100% durante 20 minutos con una velocidad de flujo de 1.5 ml/minuto y usando detección UV a 230 nm. El trabajo de HPLC preparativa se realizó con un sistema Waters Prep 2000 usando columna Dynamax 60 angstrom C18 y los sistemas de disolventes idénticos como se usaron en el sistema de HPLC analítica, pero con una velocidad de flujo de 40 ml/min.

Análisis Biológico Detección y Cuantificación de la. Actividad Anti fúngica: Se determinó la actividad antifúngica in vitro obteniendo la concentración inhibidora mínima (MIC) del compuesto usando una prueba de dilución en agar estándar o una prueba de difusión de disco. Un hongo típico empleado en la prueba de la actividad antifúngica es Candida albicans . La actividad antifúngica se considera significativa cuando la muestra de prueba (50 µl) causa zonas de inhibición de 10-12 mm de diámetro en C. albicans x657 sembrada el placas de agar.

Toxicidad de la Vena de la Cola : Se trataron ratones intravenosamente (IV) por medio de la vena de la cola lateral con 0.1 ml del compuesto de prueba (20 mg/kg) a 0, 24, 48 y 72 horas. Se incluyeron dos ratones en cada grupo. Los compuestos se formularon en dextrosa al 5.0% y agua estéril para inyección. Los ratones se monitorearon durante 7 días siguiendo el primer tratamiento y se observaron estrictamente para los signos de irritación que incluyen eritema, hinchazón, decoloración, necrosis, pérdida de la cola y cualquier otro signo de efectos adversos que indican toxicidad. Los ratones usados en el estudio se criaron, ratones ICR macho teniendo un peso promedio entre 18-20 g (disponibles en Harían Sprague Dawley, Indianapolis, IN) .

Procedimientos Generales Pseudomicina Protegida con CBZ: Procedimientos generales usados para proteger los grupos amino colgantes en las posiciones 2, 4 y 5 de Pseudomicina A, Ar , B, B' , C o Cr con CBZ. El compuesto de pseudomicina disuelto/suspendido (R1=H) en DMF (20 mg/ml, Aldrich Sure Seal) . Mientras que se agitaba a temperatura ambiente se adicionó N- (Benciloxicarboniloxi) succinimida (6 eq) . Se dejó agitar a temperatura ambiente durante 32 horas. Se monitoreó la reacción por HPLC (columna 4.6x50 mm, 3.5 µm, 300-SB, CB, Zorbax) . Se concentró la reacción hasta 10 ml en el rotavapor a alto vacío a temperatura ambiente. Se colocó el material en el congelador hasta que estuvo listo para preparar la cromatografía. La HPLC preparativa de fase inversa produjo un sólido blanco amorfo después de la liofilización (R1 = CBZ en la estructura II posterior) .

Pseudomicina protegida con Alloc: Procedimientos generales usados para proteger los grupos amino colgantes en las posiciones 2, 4 y 5 de Pseudomicina A, A' , B, B ' , C o Cr con Alloc. Se adicionó pirocarbonato de dialilo (558 mg, 3.0 mmol) a una solución de Pseudomicina A (1.22 g, 1.0 mmol) en 600 ml de DMF. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se removió in vacuo para proporcionar un- residuo aceitoso que se lavó con éter tres veces. El residuo aceitoso se volvió a disolver en una mezcla de agua y ACN (~1:1) y se liofilizó para proporcionar un compuesto de pseudomicina A protegida con alloc en rendimiento de 90%. El compuesto de pseudomicina B protegida con alloc se preparó usando los mismos procedimientos en el rendimiento de 90% (R1 = alloc en la estructura II posterior) .

Procedimientos generales usados para remover los grupos protectores CBZ en la posición 2 , 4 y 5 por hidrogenación. Se disolvió el derivado acilado CBZ protegido en una solución de ácido acético frío al 10%/metanol (5 mg/ml) y se adicionó una cantidad equivalente de 10% de Pd/C. Se cargó la reacción con hidrógeno desgasificando la reacción y reemplazando el volumen con H2, 4-7 veces. Se dejó que la reacción procediera a temperatura ambiente. Se monitoreó la reacción por HPLC cada hora hasta que se consumió el material iniciador. Cuando se completa la reacción, se remueve el balón y se filtra la reacción con disco de filtro de 0.45 µm (Acrodisk GHP, GP por Gelman) . Se concentró a volumen de aproximadamente l/10th y se preparó por HPLC. Se liofilizaron las fracciones que contenían el producto.

Procedimientos generales usados para remover los grupos de protección Alloc en las posiciones 2, 4 y 5 con hidruro de tributi les taño y dicloruro de trif enilf os fin paladio. Se adicionó ácido acético (1 ml) a una suspensión de pseudomicina B alloc protegida (0.05 mmol) en 5 ml de cloruro de metileno. Después de desgasificar bajo vacío, se trató la solución con 6.0 mg de PdCl2(PPH3)2 (0.008 mmol) y 0.40 ml de hidruro de tri-n-butilestaño (1.5 mmol) a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se evaporó in vacuo y el residuo se disolvió en agua/ACN (~1:1) y se filtró. La solución resultante se purificó por HPLC preparativa, para proporcionar el compuesto pseudomicina B deseado en 93% de rendimiento. Alternativamente, podrían usarse 5 ml de tetrahidrofurano y 0.1 ml de ácido acético como el disolvente en lugar de 5 ml de cloruro de metileno y 1.0 ml de ácido acético. La siguiente estructura II se usará para describir los productos observados en los Ejemplos 1 a 27. Aunque se usó un producto natural de pseudomicina específico (pseudomicina B) en los Ejemplos posteriores, para los expertos en el arte se apreciará que podrían usarse como materiales iniciadores otros productos naturales de pseudomicina o derivados semisintéticos .

XX Los Ejemplos 1-3 ilustran la formación de bis-ésteres en los residuos 3 y 8.

Ejemplo 1 Síntesis del éster de Bis-Etilo 1 -1 R1 = H R¿ = -OCH2CH3 R3 = -OCH2CH3 1-1 Un matraz de fondo redondo de 50 ml se cargó con 10 ml de etanol absoluto y pseudomicina B CBZ ' protegida (251.7 mg, 0.156 mmol) . A esta mezcla se adicionó ~ 1 ml de etanol acidificado (acidificado previamente usando HCl gas) y la reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante toda la noche. Después se removió el disolvente in vacuo y el residuo se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional disolviéndolo en una solución de 10 ml de MeOH/1.5 ml de AcOH glacial. La hidrogenólisis estándar usando 249.7 mg de 10% de Pd/C durante 30 minutos, remoción del catalizador por vía de filtración y purificación por vía de HPLC preparativa llevó al Compuesto 1-1 (120.9 mg) después de la liofilización. MS (atomizado iónico) calculado para C55H96ClN?2Oi9 (M+H) + 1264.89, encontrado 1264.3. Los monoésteres podrían aislarse siguiendo la reacción cuidadosamente por HPLC. La reacción se detuvo en el tiempo apropiado cuando la relación del material iniciador: monoéster (es) ."bis éster es la más grande. La metodología permanece la misma. La mezcla resultante de mono esteres se aisla cuando algo del éster se forma en el residuo de ácido aspártico y algo en el residuo de ácido hidroxi aspártico. Esta mezcla de mono esteres, protegidos con CBZ se hidrogena usando la metodología estándar para producir una mezcla de mono etil esteres de Pseudomicina B. Los compuestos 1-2 y 1-3 se sintetizaron usando los mismos procedimientos descritos anteriormente. R = -H R = -H R2 = -OCH3 R¿ = -OCH(CH3)2 R3 = -OCH3 R3 = -OCH(CH3)2 1-2 1-3 El Ejemplo 2 ilustra la síntesis de bis-ésteres usando condiciones básicas.

Ejemplo 2 Síntesis de Bis-propil éster 2-1 : R = -H R2 = -OCH2CH2CH3 RJ -OCH2CH2CH3 2-1 La pseudomicina B CBZ protegida (247.3 mg, 0.154 mmol) se disolvió en 5 ml de DMF. Después se adicionaron un gran exceso de yoduro de propilo y un exceso de NaHC03. La reacción se dejó agitar durante 10 h a temperatura ambiente. La purificación por vía de HPLC preparativa después de la liofilización proporcionó 147.6 mg del bis éster protegido. La hidrogenólisis de este compuesto bajo condición estándar usando 149.3 mg de 10% de Pd/C produjo 78.9 mg del Compuesto 2-1 después de purificación por HPLC y liofilización.

Ejemplo 3 R = -H R = -H R2 = -0(CH2)4CH3 R2 = -OH R3 = -OH R3 = -0(CH2)4CH3 3-1 3-2 La pseudomicina B protegida con CBZ (282.3 mg, 0.175 mmol) se disolvió en 5 ml de DMF. Después se adicionaron un gran exceso de yoduro de n-pentilo y un exceso de NaHC03. La reacción después se dejó agitar durante 10 h a temperatura ambiente. La purificación por HPLC preparativa después por liofilización proporcionó 49.1 mg de la mezcla de mono pentil esteres protegidos. La hidrogenólisis de esta mezcla bajo condición estándar usando 47.3 mg de 10% de Pd/C produjo 30.6 mg de los Compuestos 3-1 y 3-2 después de purificación por HPLC y liofilización. R = -H R = -H R = -H R2 = -0(CH2)3CH3 R2 = -0(CH2)3CH3 R2 = -OH R3 = -0(CH2)3CH3 R3 = -OH RJ = -0(CH2)3CH3 3-3 3-4 3-5 La sustitución del yoduro de propilo con yoduro de n-butilo proporcionó el bis-butil éster (3-3) , una mezcla de mono esteres (3-4 + 3-5) y una mezcla de mono éster + el siguiente compuesto de imida cíclico 3-6 : 3 -6 Ejemplo 4 Síntesis de ciclopentilmetil éster 4-1. R = -H R2 = -OCH2 (ciclopentilo) R3 = -OH 4-1 La pseudomicina B CBZ protegida, un gran exceso de ácido p-toluensulfónico y ciclopentanmetanol se mezclan y dejan agitar durante toda la noche. Se adicionó al siguiente día un adicional de 10 equivalentes del alcohol. El éster CBZ protegido se aisló por vía de HPLC preparativa y después se hidrógeno usando la metodología estándar para producir el Compuesto 4-1. Cada uno de los compuestos sintetizados en los Ejemplos 1-4 mostró actividad medible contra Candida Albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus Fumiga tus, Candida Parapsilosis o Histoplasma capsula tum . Sin embargo, se observaron los siguientes tendencias básicas en actividad basadas en los compuestos sintetizados. Los esteres simples (bis-metilo, bis-etilo y mono-etilo) fueron activos y eficaces; sin embargo, los esteres superiores exhibieron menos eficiencia (e.g., propil esteres y superiores). ADME ha mostrado que los Compuestos 1-1 y 2-1 cortan rápidamente al compuesto de pseudomicina B madre. Los Ejemplos 5-11 ilustran la síntesis de los derivados de amida en el residuo 3-.

Ejemplo 5 Síntesis del Compuesto 5-1 ; R = -H R¿ = -NH2 R3 = -OH 5-1 La pseudomicina B CBZ protegida (1.12 g) y 224 mg de TBTU, 0.56 ml de DIEA y 1.0 g de la resina de amida de pista desprotegida, resina (4-2' , 4' -dimetoxifenil-aminometil) -fenoxi, disponible en Advance ChemTech, Inc., Louisville, KY) se mezclaron durante 3 días. La mezcla se filtró y la resina se lavó 3x con DMF y 3x con diclorometano. La resina se trató con 5% de agua en TFA/CH2C12 1:1 durante 3 horas. La mezcla se filtró y la resina se lavó 3x con TFA. El filtrado se colectó y se concentró in vacuo. Debido a la purificación por HPLC, se aisló 60 mg (5.3%) del producto amido CBZ protegido. El compuesto amido protegido (60 mg) se disolvió en 6 ml de AcOH al 1% en metanol y se adicionó 60 mg de 10% de Pd/C. La mezcla se agitó durante 30 minutos bajo hidrógeno a temperatura ambiente. Después de filtrar, la solución se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en 50% de ACN/agua y se liofilizó para producir 45 mg (90%) de rendimiento del Compuesto 5-1.

Ejemplo 6 Síntesis del Compuesto 6-1 : R = -H R2 = -NH (ciclopropilo) R3 = -OH 6-1 La pseudomicina B CBZ protegida (400 mg, 0.25 mmol) se disuelve en 4 ml de DMF seca. Se adicionaron secuencialmente TBTU (79 mg, 0.25 mmol), DIEA (200 µl, 6 equivalentes) y ciclopropilamina (14.2 mg, 0.25 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno mientras que se monitoreó por HPLC. Una vez que se completó la reacción, se concentró in vacuo. El producto crudo se purificó por HPLC. La liofilización produjo 209.2 mg (51.1%) de un polvo incoloro. El compuesto 3-amido (279.1 mg, 0.169 mmol) se hidrógeno bajo balón de hidrógeno catalizado por 10% de Pd/C en 1% de HOAC/MeOH durante 45 minutos. La reacción se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se colocó en una mezcla 1:1 de agua: CN y después se liofilizó para dar 208.3 mg (98.6%) de un polvo incoloro. La estructura se verificó por H1-RMN. El Compuesto 6-1 también puede hacerse a partir de la pseudomicina Alloc protegida usando los siguientes procedimientos . Se adicionó hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (136 mg, 1.0 mmol) y EDCI (211 mg, 1.1 mmol) a una solución de pseudomicina B alloc protegida (730 mg, 0.50 mmol) en 7 ml de DMF. Después de agitar durante toda la noche, se adicionó ciclopropilamina (85.6 mg, 1.5 mmol). El progreso de la reacción se monitoreó por HPLC. Una vez que se completó, el derivado de pseudomicina alloc protegido (334 mg, 50% de rendimiento) se aisló por vía de HPLC preparativa y liofilización. El intermediario alloc protegido (117 mg, 0.078 mmol) se disolvió en 15 ml de cloruro de metileno y 1 ml de ácido acético. Después de desgasificar la mezcla de reacción con nitrógeno seco, se adicionó a la mezcla 1 ml de hidruro de tributilestaño . El progreso de la reacción se monitoreó por HPLC. Una vez que se completó, la mezcla de reacción se purificó por HPLC preparativa de fase inversa para proporcionar 88 mg (rendimiento de 91%) del Compuesto 6-1. La Tabla I posterior lista otros derivados de 3-amido que se sintetizaron usando los mismos procedimientos generales descritos anteriormente, usando el material iniciador de la amina correspondiente apropiada.

Tabla I Ejemplo 7 Síntesis de compuesto 7-1 de 3-amido: R = -H RJ = -OH 7-1 En un matraz de fondo redondo secado de 500 mL, se disolvió Pseudomicina B CBZ protegida (0.5 g, 0.311 mmol) en 25 mL de DMF. A esta solución se adicionó TBTU (0.2 g, 0.622 •mmol), 3- (aminometil) iridina (0.067 g, 0.622 mmol) y N-etildiciclohexilamina (0.391 g, 1.87 mmol). La solución se agitó durante tres horas y después se concentró. El producto se aisló por HPLC preparativa de fase inversa y se liofilizó para producir la amida CBZ protegida (96 mg, rendimiento 18%) . La desprotección de los grupos CBZ se realizó adicionando lentamente una masa equivalente de 10% de Pd/C a una solución de acético al 1% frío/metanol de la amida CBZ protegida. La solución se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó rápidamente durante 3.5 horas bajo 1 atm de H2. Después de la remoción del catalizador por vía de filtración, purificación sobre HPLC de fase inversa y liofilización produjo 40 mg del Compuesto 7-1. Los resultados de MS calculados para C57 H93 Cl NI4 018 peso molecular = 1296.6. ES+ encontrado 1297.15, ES-1294.95.

Ej mplo 8 Síntesis del comOuesto 8 -1 de 3 -amido R = -H R3 = -OH 8-1 Podrían usarse los mismos procedimientos generales como se describieron en el Ejemplo 7. Cuando no se adiciona base, se observan una mezcla de 8 y 3 compuestos amido sustituidos.

Ejemplo 9 Síntesis del compuesto 9-1 de 3 -amido : R -H R = -H R2 = -NH (bencilo) R2 = -NH (bencilo) R3 = -OH R3 = -NH (bencilo 9-1 9-2 Podrían usarse los mismos procedimientos generales como se describieron en el Ejemplo 7. Cuando no se adiciona base, se observan una mezcla de Compuestos 9-1 y 9-2.

Ejemplo 10 Síntesis del compuesto 10 -1 de 3 -amido : R = -H R3 = -OH 10-1 Se usan los mismos procedimientos generales como se describen en el Ejemplo 7 para sintetizar el Compuesto 10-1 usando el material iniciador de la amina correspondiente apropiada .

Ejemplo 11 Síntesis del compuesto 11 -1 de 3 -amido : R -H 11-1 Se usan los mismos procedimientos generales como se describen en el Ejemplo 7 para sintetizar el Compuesto 11-1 usando 4- (aminometil) piridina como el material iniciador de la amina .

Ejemplo 12 Síntesis del Compuesto 12 -1 de 3 -amido : R = -H R¿ = -N(CH3)2 Rj = -OH 12-1 La pseudomicina B CBZ protegida (260 mg, 0.16 mmol), 51.8 mg de TBTU y 152 µl de DIEA se disolvieron en 3 ml de DMF y 320 ml de dimetilamina (0.16 mmol) en THF (solución 2 molar). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se purificó por vía de HPLC. El producto se liofilizó para dar 172 mg (rendimiento de 66%) de la amida CBZ protegida. La amida CBZ protegida se hidrógeno usando el procedimiento general descrito anteriormente para proporcionar el Compuesto 12-1. El Ejemplo 13 ilustra la síntesis de los compuestos de pseudomicina, en donde el grupo ácido carboxílico se hace reaccionar con una variedad de alquil esteres de aminoácidos .

Ej mplo 13 Síntesis del Compuesto 13 -1 de 3 -amido : R = -H R2 = -NHCH (C02CH3) CH2CH,CH2CH2NH. RJ = -OH 13 - 1 El metil éster de Lísina CBZ protegido (164 mg, 0.49 mmol) se adicionó a una solución de la pseudomicina B CBZ protegida (800 mg, 0.49 mmol), TBTU (158 mg, 0.49 mmol) y 400 ml de DIEA (2.51 mmol) en 8 ml de DMF. La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se purificó por vía de HPLC para producir 260 mg (rendimiento de 32%) de la amida CBZ protegida. La amida CBZ protegida se hidrógeno usando los procedimientos generales descritos anteriormente para producir el Compuesto 13-1. Los compuestos 13-2 a 13-4 listados en la Tabla II podrían sintetizarse usando los mismos procedimientos como se describieron anteriormente usando el éster de aminoácido correspondiente apropiado.

Tabla II Los Ejemplos 14-16 ilustran la síntesis de los derivados de amida en el residuo 8.

Ejemplo 14 Síntesis del Compuesto 14 -1 de 8 -amido: R = -H = -OH R3 = -NH, 14-1 El compuesto 14-1 se sintetiza usando los mismos procedimientos como se describieron para el ejemplo 6-1 usando una resina de amida de pista con la excepción de que se usa PyBOP como el agente de acoplamiento en lugar de TBTU.

Ejemplo 15 Síntesis del Compuesto 15-1 de 8 -amido . R = -H R2 = -OH R3 = -NH (CH2) 3CH3 15-1 Se adicionó n-butil amina (45.4 mg, 0.62 mmol) a una solución de la pseudomicina B CBZ protegida (1000 mg, 0.62 mmol) y PyBOP (323 mg, 0.62 mmol) disuelta en 10 ml de DMF. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después se purificó por vía de HPLC. El producto se liofilizó para dar 280 mg (rendimiento de 27%) de la amida CBZ protegida . La amida CBZ protegida (280 mg, 0.17 mmol) se hidrógeno bajo hidrógeno catalizada por 10% de Pd/C en ácido acético al 1%/metanol durante 45 minutos. La mezcla de reacción se filtró y el disolvente se removió in vacuo. El residuo se disolvió en 50% de ACN en agua y se liofilizó para dar 189 mg (rendimiento de 89%) del Compuesto 15-1. Los compuestos de 8-amido listados en la Tabla III podrían sintetizarse usando los mismos procedimientos generales descritos anteriormente usando el material iniciador de la amina correspondiente apropiada.

Tabla III Ej p?o 16 Síntesis del Compuesto 16-1 de 8 -amido: R = -H R2 = -OH 16-1 En un matraz de fondo redondo de 100 ml, se disolvió Pseudomicina B alloc protegida (0.25 g, 0.171 mmol) en 25 ml de DMF. A esta solución se adicionó Pybop (0.089 g, 0.171 mmol) y 4- (2-Aminoetil) morfolina (0.022 g, 0.171 mmol). La solución se agitó rápidamente durante toda la noche bajo 1 atm de N2. La solución se concentró y el producto se aisló por HPLC de fase inversa y se liofilizó para producir (140 mg, 0.089 mmol, 52%) del derivado de Pseudomicina B Morfolina alloc protegido. La desprotección de los grupos alloc se llevó a cabo adicionando Bu3SnH (0.648 g, 2.23 mmol) y (Ph3P) 2PdCl2 (0.009 g, 0.013 mmol) a una solución de acético al 1%/diclorometano del derivado de Pseudomicina B Morfolina alloc protegido (10 mg/mL) . El tiempo de reacción fue de 30 minutos. La reacción se monitoreó por HPLC. La solución se concentró, y el producto se aisló por HPLC preparativa de fase inversa y se liofilizó para producir 38 mg, 32% del Compuesto 16-1. Resultados de MS : Calculado para C57 H99 Cl N14 019 Peso Molecular 1318.7. Encontrado ES+ 1320.0, ES- 1318.0. Los compuestos de 8-amido listados en la Tabla IV se sintetizaron usando los mismos procedimientos generales descritos anteriormente usando el material iniciador de la amina correspondiente apropiada.

Tabla IV Cada uno de los compuestos sintetizados en los Ejemplos 5-16 mostraron actividad medible contra Candida Albicans, Cryptococcus neoformans , Aspergillus Fumiga tus, Candida Parasilosis o Histoplasma capsula tum . Sin embargo, las siguientes tendencias básicas en actividad se observaron con base en los compuestos sintetizados. • Cuando los derivados 8-amino se probaron contra C. albicans, varias tendencias fueron aparentes a partir de los resultados. La potencia in vi tro disminuye el en siguiente orden de la sustitución R3: -NH2 > -NHCH3 > -NHCH2CH3 > -NH(CH2)CH3 > -NH(CH2)3CH3; -NHCH2CH2N (CH3) 2 > -NH (CH2) 3N (CH3) 2; y -NH(GlyOMe) > -NH(PheOMe). En general, se observaron mejores actividades con los grupos amido que tienen grupos alquilo más pequeños. El grupo amida libre se encontró que era el más activo de la serie. Además, las amidas de cicloalquilo demostraron mejor actividad que los grupos alquilo de cadena lineal correspondientes. Los grupos alquilo que tienen una sustitución polar en el extremo de la cadena alquilo mostraron menos actividad que el producto natural correspondiente. A diferencia del producto natural madre, ninguno de los derivados 8-amido mostró irritación de la vena de la cola. Los derivados 3-amido demostraron una tendencia similar como se observó con los derivados 8-amido en comparación con el producto natural padre (e.g., los sustituyentes amida en R2 que tienen cadenas alquilo más cortas fueron más activos que las cadenas alquilo más largas) . A diferencia de los derivados 8-amido, los derivados 3-amido no mostraron una disminución significativa en la actividad in vi tro contra C. albicans hasta que la cadena alquilo alcanzó 7 carbonos o más (el compuesto 3-amido PSB en donde R2 = -NH(CH2)6CH3 tuvo un MIC = 20 µg/ml) contra 4 carbonos o más para los derivados 8-amido (el compuesto 8-amido PSB en donde R3 = -NH(CH2)3CH3 tuvo un MIC = 20 µg/ml) . La mayoría de los derivados 3-amido probados mostraron un mejoramiento en la irritación de la vena de la cola. Las excepciones que son R2 = -NH (iso-amilo) , -NH(n-hexilo), -NH(CH2)2N(CH2CH3)2, y -NH(CH2)3N(CH3)2. Aunque la formación de un enlace amida en los residuos 3 y 8 demostró un perfil de toxicidad mejorado en comparación con el producto natural correspondiente (Pseudomicina B) , en general disminuyó la eficiencia in vivo . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (13)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un compuesto de pseudomicina, caracterizado porque tiene la siguiente estructura I en donde R es en donde Ra y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya •sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C--C4, hidroxi (C-_-C4) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C3-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis 'miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C3-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C3-C14, y Rf es alquilo C8-C18 o alcoxi CS-C1:L; R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo Cx-C13, y Rh es alquilo C.. -C15 , alcoxi C4-C15, (alquilo C?-Cí0) fenilo, - (CH2)n-arilo o - (CH2)n- (cicloalquilo C3-C6) , en donde n = 1 o 2; o R es en donde R1 es hidrógeno, halógeno o alcoxi C3-C8, y m es 1 , 2 o 3 ; R es en donde R3 es alcoxi C5-C14 o alquilo C5-C14 , y p = 0 , 1 o 2 ; R es en donde .Rk es alcoxi C5-C14; o R es '-'CHa) -NRm- (alquilo C13-C18) , en donde Rm es H, -CH3 o -C(0)CH3; R1 es independientemente o -NHp-Pg, en donde p es 0 o 1; R2 y R3 son independientemente -3R2a, o -N(R2b) (R2c) , en donde R2a y R2b son independientemente hidrógeno, alquilo C^C-^, cicloalquilo C3-C6, hidroxi (C-_-C10) alquilo, alcoxi (C-_-C10) alquilo alquenilo C2-C10, amino (C.-C10) alquilo, mono- o di-alquilamino (Cx- C10) alquilo, arilo (Cj.-C._-,) alquilo, heteroarilo CC.--C.-o) alquilo o cicloheteroalquil (C~.-C10) alquilo o R2b es un residuo de carboxilato de alquilo de un alquil éster de aminoácido y Rc es hidrógeno o alquilo C-_-C--, con la condición de que ambos R2 y R3 no sean -OH; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

2. Un profármaco de pseudomicina que tiene la siguiente estructura caracterizado porque R es en donde R y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o R ' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C_,-C4, hidroxi (C--C4) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C3-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C3-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C3-C14, y R£ es alquilo C8-C18 o alcoxi CS-C1:L o bifenilo; R es en' donde R9 es hidrógeno, o alquilo C_-C13, y Rh es alquilo C-_-C15, alcoxi C4-C15, (alquilo C__-C10) fenilo, - (CH2)n-arilo o -(CH2) n- (cicloalquilo C5-C6) , en donde n = 1 o 2; o R es en donde 1 es hidrógeno, halógeno o alcoxi C3-C8, y m es 1, 2 o 3; R es en donde R1 es alcoxi C3-C14 o alquilo C3-C14, y p = 0, 1 o 2; R es en donde Rk es alcoxi C3-C14; o R es - (CH2) -NRm- (alquilo C13-C18) , en donde Rra es H, -CH3 o "C(0)CH3; R1 es independientemente -NH2 o -NHp-Pg, en donde p es 0 o 1; R2 y R3 son independientemente - 0R2a, en donde R2a es alquilo C-_-C3; y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos.

3. Un derivado 3 -amido de un compuesto de pseudomicina, caracterizado porque se prepara por las etapas de: (i) proporcionar un compuesto de pseudomicina que tiene la siguiente estructura en donde R es en donde Ra y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o R' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi; Rc es hidrógeno, 'hidroxi, alcoxi C-_-C4, hidroxi (C_-C4) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C5-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con RE es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C3-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C3-C14, y Rf es alquilo C6-C18 o alcoxi CS-C1;L o bifenilo; R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo C..-C13, y Rh es alquilo C.,-C15, alcoxi C4-C1S, (alquilo C±-C*,) fenilo, - (CH2)n-arilo o - (CH j-- (cicloalquilo C5-C6) , en donde n = 1 o 2; o R es en donde R es hidrógeno, halógeno o alcoxi C5-C8, y m es 1 , 2 o 3 ; R es en donde Rj es a?coxi C5-C14 o alquilo C5-C14 , y p = 0 , 1 o 2 ; R es en donde Rk es alcoxi C5 -C14 ; o R es - (CH2) -NRm- (alquilo C13 -C18 ) , en donde Rm es H, -CH3 o - C (C) CH3 ; R1 es -NH2 ; R2 y R3 son -OH; y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos; (ii) proteger los grupos amino, R1, en las posiciones 2, 4 y 5 con un grupo amino protector; (iii) formar un enlace amida en la posición 3 usando tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?' ,?' -tetrametiluronio o hexafluorofosfato de 2 (lH-benzotriazol-1-il) -1, 1, 3, 3 -tetrametiluronio como un agente de acoplamiento; (iv) remover los grupos protectores amino.

4. Los derivados 3 -amido de conformidad con la reivindicación 3, caracterizados porque la etapa (iii) de formación de un enlace amida se realiza en presencia de una amina voluminosa.

5. El derivado 3 -amido de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la etapa (iii) de formación de un enlace amida se realiza en presencia de una amina voluminosa y a una temperatura entre aproximadamente 0°C y- 20°C.

6. Un derivado 8-amido de un compuesto de pseudomicina preparado mediante las etapas de (i) proporcionar un compuesto de pseudomicina que tiene la siguiente estructura caracterizado porque R es en donde Ra y R' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C-_-C4, hidroxi (C--C4) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o "anillo cicloalquilo C3-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C3-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C5-C14, y Rf es alquilo C6-C?a o alcoxi C5-C-._. o bifenilo; R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo C1-C13, y Rh es alquilo C_-C1S, alcoxi C4-C15, (alquilo C-_-C10) fenilo, - (CH2)n-arilo o -(CH2)n- (cicloalquilo C5-C6) , en donde n = 1 o 2; o R es en donde R1 es hidrógeno, halógeno o alcoxi C3-C8, y m es 1 , 2 o 3 ; R es en donde Rj es alcoxi C5-C14 o alquilo C5-C14 , y p = 0 , 1 o 2 ; R es en donde Rk es alcoxi C5-C14; o R es - CH2) -NRm- (alquilo C13-C18) , en donde Rm es H, -CH3 o -C(C)CH3; R1 es -NH-.; R2 y R3 son - DH; y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos; (ii) proteger los grupos amino en las posiciones 2, 4 y 5 con un grupo amino protector; (iii) formar un enlace amida en la posición 8 usando hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tripirrolidinofosfonio como un agente de acoplamiento; (iv) remover los grupos protectores amino.

7. El uso de un compuesto como se reivindica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque es en la preparación de un medicamento para el uso en combinación ya sea en infecciones por hongos sistémicas o infecciones de la piel por hongos.

8. Un proceso para elaborar un derivado de 3 -amido de un compuest.o. de pseüdomícina, caracterizado porque comprende las etapas de : (i) proporcionar un compuesto de pseudomicina que tiene la siguiente estructura en donde R es en donde Ra y Ra son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' és alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o R' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi ; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C--C4, hidroxi (C.-C-.) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C5-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C5-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C3-C14, y Rf es alquilo C6-C18 o alcoxi C-i-C-.-, o bifenilo; R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo C.-C.J, y Rh es alquilo C1-C1S,' alcoxi C4-C15, (alquilo C-.-C10) fenilo, (CH2)n-arilo o - CH2)n- (cicloalquilo C3-C6) , en donde n = 1 o 2; R es en donde R1 es un hidrógeno, halógeno o alcoxi C5-C8, y m es 1, 2 o 3 ; R es en donde Rj es alcoxi C3-C14 o alquilo C5-C14, y p = 0, 1 o 2; R es en donde R es alcoxi C5-C14; o R es "-.CIL,) -NRm- (alquilo C13-C18) , en donde Rm es H, -CH3 o -C(C)CH3; R1 es -?H2; R2 y R3 son -DH; y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos; (ii) proteger los grupos amino, R1, en las posiciones 2, 4 y 5 con un grupo amino protector; (iii) formar un enlace amida en la posición 3 usando tetrafluoroborato de o-benzotriazol-l-il-?,?,?' ,?' - tetrametiluronio o hexafluorofosfato de 2 (lH-benzotriazol-1-il) -1, 1, 3 , 3-tetrametiluronio como un agente de acoplamiento en presencia de una amina voluminosa y a una temperatura entre aproximadamente 0°C y -20 °C; (iv) remover los grupos protectores amino.

9. Un proceso para elaborar un derivado de 8 -amido de un compuesto de pseudomicina, caracterizado porque comprende las etapas de: (i) proporcionar un compuesto de pseudomicina que tiene la siguiente estructura en donde R es en donde Ra y Ra' son independientemente hidrógeno o metilo, o ya sea Ra o Ra' es alquil amino, tomados juntos con Rb o Rb' forma un anillo cicloalquilo de seis miembros, un anillo aromático de seis miembros o en enlace doble, o tomados juntos con Rc forma un anillo aromático de seis miembros ; Rb y Rb' son independientemente hidrógeno, halógeno o metilo o ya sea Rb o Rb' es amino, alquilamino, a-acetoacetato, metoxi o hidroxi ; Rc es hidrógeno, hidroxi, alcoxi C-.-C4, hidroxi (C.-C4) alcoxi o tomados juntos con Re forma un anillo aromático de 6 miembros o anillo cicloalquilo C3-C6; Rd es hidrógeno; Re es hidrógeno, o tomados juntos con Rf es un anillo aromático de seis miembros, anillo aromático de seis miembros sustituido con alcoxi C3-C14, o anillo aromático de seis miembros sustituido con alquilo C3-Cli r y Rf es alquilo C6-C18 o alcoxi C5-C?:L o bifenilo; R es en donde R9 es hidrógeno, o alquilo C_-C13 , y Rh es alquilo C-.-C-.-- , alcoxi C4-C15, (alquilo C-_-C10) fenilo, - (CH2) n-arilo o -(CH2) n- (cicloalquilo C3-C6) , en donde n = 1 o 2 ; o R es en donde R1 es un hidrógeno, halógeno o alcoxi C5-C8, y m es 1 , 2 o 3 ; R es en donde Rj es alcoxi C3-C14 o alquilo C3-C14, y p = 0, 1 o 2; R es en donde R es alcoxi C3-C14; o R es ^ (CH2) -NRm- (alquilo C13-C18) , en donde Rm es H, -CH, -C(C)CH3; R1 es °~N?2; R2 y R3 son -0H; y sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos; (ii) proteger los grupos amino en las posiciones 2, 4 y 5 con un grupo amino protector; (iii) formar un enlace amida en la posición 8 usando hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tripirrolidinofosfonio como un agente de acoplamiento; (iv) remover los grupos protectores amino.

10. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un vehículo, amortiguador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

11. Una formulación farmacéutica, caracterizada porque comprende el profármaco de conformidad con la reivindicación 2 o la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un vehículo, amortiguador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

12. El uso de un compuesto de pseudomicina, o la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 1 para la manufactura de un medicamento para tratar una infección fúngica en un aminal .

13. El uso de un profármaco o la sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 2 para la manufactura de un medicamento para tratar una infección fúngica en un animal .