JPH0570495A - 環式ヘキサペプチド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 式： 【化３９】 及び 【化４０】 ｛式中、Ｒ₁ は水素またはヒドロキシ；Ｒ₂ は水素、ヒ
ドロキシまたはメチル；Ｒ₃ は水素またはヒドロキシ；
Ｒ₄ はＣ₅ −Ｃ₂₃アルキル、Ｃ₅ −Ｃ₂₃アルケニル、ア
リールまたは置換アリール；Ｒ₅ は−CH₂OH 、−CH(C
H₃)OH または−CH(CH₂−CONH₂)OH；Ｒ₆ は−CH₂OH また
は−CH(CH₃)OH ；Ｒは−CH₂OH または−CH(CH₃)OH ；但
し、Ｒ₄ が−(CH₂)₈CH−(CH₃)CH₂CH(CH₃)C₂H₅ であると
きＲ₅ は−CH₂OH または−CH(CH₃)OHである。｝の化合
物。 【効果】 この化合物は抗微生物剤、特に抗真菌剤とし
て有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は下記構造式によって表される新規
な環式ヘキサペプチド化合物に関する。

【化１２】 上記ならびに以下に記載する式中の符号は下記の意味を
有する。

【０００２】Ｒ₁ は水素またはヒドロキシル、 Ｒ₂ は水素、ヒドロキシルまたはメチル、 Ｒ₃ は水素またはヒドロキシル、 Ｒ₄ はＣ₅ −Ｃ₂₃−アルキル、Ｃ₅ −Ｃ₂₃−アルケニ
ル、アリールまたは置換アリール、 Ｒ₅ は

【化１３】 Ｒ₆ は

【化１４】 Ｒはアミノ酸の残基、好ましくは−CH₂OH または

【化１５】 を意味する、ｘは１または２である。

【０００３】アルキルの代表例は直鎖状または分枝状の
オクタデシル、ヘキサデシル、ドデシル、デシル、テト
ラデシル、トリデシル、ペンタデシルなどである。アル
ケニルの代表例は８，１１−ヘプタデカジエニル、２−
ヘキセニル、４−オクテニル、７−ペンタデセニル、８
−ヘプタデセニル、１０−ヘプタデセニルなどである。

【０００４】アリールおよび置換アリールの代表例はフ
ェニル、トリル、キシリル、２−エチルフェニル、４−
エチルフェニル、４−イソプロピルフェニル、４−イソ
オクチルフェニル、４−tert−ブチルフェニル、４−デ
シルフェニル、３−エトキシフェニル、４−イソプロポ
キシフェニル、４−（ｎ−ノニルオキシ）フェニル、４
−（ｎ−オクチルオキシ）フェニル、４−（ｎ−デシル
オキシ）フェニル、２，４−ジメトキシフェニル、４−
（ｔ−ブトキシ）フェニル、２−メチルチオフェニル、
４−（ｎ−ノニルチオ）フェニル、４−（ｎ−オクチル
チオ）フェニル、メシチル、あるいはその他のアルキル
置換、アルコキシ置換またはアルキルチオ置換フェニル
である。

【０００５】Ｒ₅ およびＲ₆ が

【化１６】 である化合物が好ましい。本明細書で使用される“化合
物Ｉ”という表現は一般的なグループを指すものであ
り、したがって式（Ｉ）（すなわち（Ｉａ）と（Ｉ
ｂ））によって包括されるすべての化合物を含むものと
理解されたい。また、“アミノ酸の残基”という言葉は
任意の中性アミノ酸の残分を意味するものである。好ま
しい酸はセリンとトレオニンである。ペプチド鎖につい
て記載する場合にはアミノ酸について通常使用されて略
号が本明細書においても使用される場合がある。本明細
書においても使用されることのあるアミノ酸の略号の代
表例（包括的例ではない）は以下のものである。 Orn ＝オルニチン、Ser ＝セリン、Glu ＝ドルタミン
酸、Pro ＝プロリン、Thr＝トレオニン。 ペプチド鎖は合成されるものであるから、アミノ酸は天
然アミノ酸と非天然アミノ酸の両方が考慮される。した
がって、上記のものに限定されるものではない。

【０００６】ペプチド合成は通常ラセミ化なしで実施さ
れうるからして生成物は一般に特定立体化学配置で得ら
れる。天然アミノ酸と非天然アミノ酸の両者が考慮され
る。本発明を説明する実施例では一般にＬ−アミノ酸が
使用されているが本発明はこれに限定されるものではな
い。

【０００７】本発明による化合物は通常白色の不定形固
体でありメタノール、ジメチルホルムアミド、ピリジン
など多くの溶剤に可溶である。本発明による化合物は抗
真菌および抗原虫活性を有する。抗真菌剤として、本化
合物は糸状菌ならびにイースト菌の抑制のために使用す
ることができる。本化合物によって抑制される糸状菌と
しては特につぎのものがあげられる。アスペルギルス・
フラバス（Aspergillus flavus) 、アスペルギルス・フ
ミガトス（Aspergillus fumigatus ) のごときコウジカ
ビ種（Aspergillus spe.)；アカパンカビ種（Neurospo
ra spe.)；フザリウム種（Fusarium spe.)；アルテルナ
リア種（Alternaria spe.)およびコクリオボルス・ミヤ
ベアヌス（Cochliobolus miyabeanus) など。本化合物は
さらに真菌症、特にカンジダ属のＣ．アルビカンス
（Ｃ. albicans) やＣ．トロピカリス（Ｃ. tropicali
s) に起因する真菌症の処置のために有用である。抗原
虫剤として本発明の化合物が抑制しうる微生物の例とし
てはつぎのものがあげられる。

【０００８】アメーバ症の原因となる寄生虫たとえばエ
ントアメーバ・ヒストリチカ（Enta-moeba histolytic
a ) マラリアの原因となるマラリア原虫たとえばプラス
モデルューム種（Plasmodium spe.)さらにはトリパノゾ
ーマ種（Trypanosoma spe.)、トキサプラズマ種（Toxap
lasma spe.)、クリプトスポリディア（Cryptosporidia)
など。さらに、本化合物は免疫無防備状態の患者が特
にかかり易いピネウモシスチス・カリニイ（Pneumocyst
is carinii) 感染症の予防および／または処置のために
も有用である。

【０００９】本発明による化合物は線状リポヘキサペプ
チドを合成し、次いでこれを環化することによって製造
することができる。線状ヘキサペプチドの合成は固相法
または液相法のいずれによっても実施することができ
る。合成の出発物質は置換ＰＡＭ（ｐ−アセトアミドメ
チル樹脂）またはメリフィールド（Merrifield) ポリス
チレンベースの樹脂または類似のものである。これらの
方法はよく確立された方法であり、その使用法は下記の
文献に概括記載されている：Int. J. Peptide and Prot
ein Research ３０、７０５−７３９頁（１９８７）所
載のGeorgeBarnay の論文；"The Peptides"第２巻、１
４−２５４頁〔米国、フロリダ州、Academic Press社１
９７９年発行〕のG. Barnay とR. B. Merrifieldによっ
て執筆された章。Ｒ₁ がOH、Ｒ₂ が水素またはメチルで
ある化合物の合成においてはＰＡＭまたはメリフィール
ドポリスチレンベースの樹脂のいずれかを使用すること
ができる。Ｒ₂ がOHである化合物の合成の場合に必要な
樹脂はクロロメチルメリフィールド樹脂およびＯ−Bn−
α−Ｎ−tBOC−（Ｌ）−４−ヒドロキシプロリン（ここ
で、Bnはベンジルを意味し、tBOCはｔ−ブチロキシカル
ボニルを意味する）から製造される。

【００１０】Ｒ₁ がＨである化合物の合成は次ぎの反応
式（ｘ＝１の場合を示す）によって理解される反応順序
を用いて実施することができる。

【化１７】 上記の化学方程式によると所望のペプチド鎖はtBOC化学
作用を使用して固相合成によって段階的に製造すること
ができる。これは適当に保護されたα−Ｎ−tBOCアミノ
酸をＮ−メチルピロリドン中でヒドロキシベンゾトリア
ゾール（HOBt）活性化を使用してジイソプロピルカルボ
ジイミドとカップリングする工程を包含する。この工程
では、適当に保護されたα−Ｎ−tBOCアミノ酸、ジイソ
プロピルカルボジイミド、ヒドロキシベンゾトリアゾー
ルの各４倍過剰が使用される。なお計算量は樹脂上の所
定のアミノ酸置換ならびに使用樹脂の重量を基準とす
る。

【００１１】中間体のtBOC保護ペプチド鎖は、捕捉剤と
して２％アニソールを含有する塩化メチレン中５０％ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の溶液中で脱保護される。こ
れにより得られたペプチド鎖を塩化メチレン中２０％ジ
イソプロピルエチルアミン溶液で塩基洗浄する。このペ
プチド鎖に置かれている最後のアミノ酸はα−Ｎ−ｔ−
ブチロキシカルボニル（クロロベンジルオキシカルボニ
ル）オルニチン（α−Ｎ−tBOC(Cl-Z)Orn)である。ＴＦ
Ａによる脱保護工程の間、Cl−Ｚ基すなわちクロロベン
ゾイルカルボニル基はδ−アミノ基に残留し、α−アミ
ノはｐ−オクチルオキシ安息香酸側鎖によるアシル化の
ため遊離される。完成される線状リポヘキサペプチドは
次ぎに０℃で無水ＨＦで処理することにより樹脂から開
裂される。この工程では通常の脱保護工程の間ＴＦＡに
よって除去されなかった他のすべての保護基が除去され
そしてフッ化水素酸塩としてペプチド生成物が得られ
る。この塩生成物を０．１％ＴＦＡで緩衝されたアセト
ニトリル／水混合物を使用した逆相クロマトグラフィー
によって精製する。

【００１２】次ぎにリポペプチドを低温かつ高希釈度で
ＤＭＦ中ジフェニルホスホリルアジド（ＤＤＰＡ）と炭
酸水素ナトリウムを使用して環化する。環化化合物の精
製は逆相クロマトグラフィーによって実施することがで
きる。

【００１３】３−ヒドロキシ−４−メチルピロリン残基
を含有するペプチドの場合のようにＲ₁ がOHである場合
には、合成法はやや変更され、次ぎの反応図式によって
示されるように行われる。

【化１８】 すなわち、Ｃ−末端トレオニン残基を有する線状ペンタ
ペプチドが前記と同様な固相法によって製造される。第
１アミノ基とフェノール水酸基がそれらのベンジルオキ
シカルボニル誘導体として保護されそしてこの保護され
たペンタペプチドが３−ヒドロキシ−４−メチルプロリ
ンのメチルエステルへカップリングされる。カップリン
グ後、そのペプチドをケン化してエステルを除きそして
次ぎにＣＢＺ基の水素化分解のためＰｄ／Ｃ触媒の存在
で水素で処理して所望の線状リポヘキサペプチドを得
る。

【００１４】このリポペプチドは次ぎに前記した方法で
ジメチルホルムアミド中ジフェニルホスホリルアジドと
炭酸水素ナトリウムを使用して環化することができ、こ
のあと上記と同様にして精製する。本発明による化合物
は抗微生物剤として、特に抗寄生虫剤ならびに抗真菌剤
として有用である。それらの化合物は、カンジダ・アル
ビカンス（Candida albicans) およびガンジダ・トロピ
カリス（Candida tropicalis) のごとき真菌症の作因と
なる一定菌類に対して特に有効である。その活性はイー
スト窒素塩基デキストロース寒天培地を使用した寒天希
釈試験によって確認することができる。すなわち、試験
が次ぎのように実施された。化合物ＩをTween ２０の１
滴を加えた１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中
に溶解させる。殺菌蒸留水／１０％ＤＭＳで２倍に希釈
して上記寒天希釈試験プレート中の最終薬剤濃度を１２
８乃至０．０６μｇ／mlに調整する。

【００１５】イーストマルトース（ＹＭ）ブロス中に保
持されたイースト培養物を新たなＹＭ培地に移しそして
３５℃の温度で、振りまぜながら（２５０rpm.) 一晩イ
ンキュベートした。インキュベーション後、各培養物を
無菌サリンで最終濃度が３×１０⁵ 乃至３×１０⁶ コロ
ニー形成単位（ＣＦＵ＝colony forming units) ／mlに
なるまで希釈した。

【００１６】調製された各プレートをデンレイ多点接種
器（Denley Multipoint Inoculaor,英国サセックス州、
Denley社製) を使用して接種する。この接種器は寒天表
面に約０．００１ミリリットルを供給し、その結果３×
１０² 乃至３×１０³ ＣＦＵ単位の接種がなされる。こ
れらの培養プレートを２８℃で４８時間インキュベート
する。菌の繁殖がゼロまたは３ＣＦＵ単位／スポット以
下を示す最低薬物濃度として最小阻止濃度（ＭＩＣ＝mi
nimum inhibitory concentrations ）を記録した。

【００１７】各種カンジダ菌に対する化合物Ｉの優れた
効果を示す下表の試験結果から本発明による化合物の有
用な抗菌特性がわかる。 C. albicans C. tropicalis 化合物^* R₁ R₂ R₃ R MY1055 MY1208 MY1208 MY1012 Ａ H H OH -- 8 4 4 0.25 Ｂ H H H -- 4 4 NT 4 Ｃ H OH OH -- 8 8 8 8 Ｄ OH CH₃ OH -- 1 2 2 1 Ｅ -- -- OH ** 8 8 8 4 * 実施例１〜５の化合物 ** トレオニンの残基 この優秀な特性は本化合物を公知常用の薬学的調合技術
によって薬物学的に許容される担体との新規な薬剤組成
物に製剤した場合に最も効果的に活用することができ
る。

【００１８】本新規組成物は本発明による活性化合物を
少なくとも治療学的有効量含有する。一般的に、本組成
物は化合物Ｉを少なくとも１重量％含有する。使用前に
希釈して使用するための濃厚組成物は化合物Ｉを９０重
量％またはそれ以上含有することができる。組成物には
直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内、静脈内を含む）、
肺（鼻吸入または喉吸入）、他の鼻投与あるいは吹入れ
法による投与などのために適当な組成物が含まれる。本
組成物は化合物Ｉを所望の媒質のために適当な成分と緊
密に混合することによってプレパックすることができ
る。

【００１９】経口投与が使用される場合には、本組成物
は液体組成物または固体組成物でありうる。固体製剤の
場合には、本活性化合物が水、グリコール、油、アルコ
ールなどの液体担体（キャリヤ）に配合される。カプセ
ルや錠剤のごとき固体製剤の場合は固体担体たとえばス
ターチ、砂糖、カオリン、エチルセルロース、炭酸カル
シウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、タルク、
ラクトースなどが通常ステアリン酸のごとき潤滑剤を加
えて、結合剤、崩壊剤等と一緒に使用される。投与が簡
単であることから錠剤とカプセルが最も有利な経口薬の
形態である。投与の簡便さと投与量の均一性の点から単
位薬量製剤（後に説明される）の形態に組成物を製剤す
るのが特に有利である。

【００２０】注射で投与がなされる場合には、本組成物
はアンプルや多数回用容器に入れたそして必要な場合に
は保存剤を添加した単位薬量製剤の形態でありうる。さ
らに組成物は油性または水性ビヒクルたとえば０．８５
％塩化ナトリウム水溶液または５％デキストロース水溶
液中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をと
ることもできる。この場合、沈澱防止剤、安定化剤およ
び／または分散剤などの調合助剤を含有させることもで
きる。さらに、溶液を等張液にするために緩衝剤ならび
に添加剤たとえばサリンやグルコースを添加することも
できる。また、薬物を静脈内点滴により投与するために
アルコール／プロピレングリコールに溶解することもで
きる。さらにまた、活性成分は投与直前に適当なビヒク
ルで液体に戻すために適当な粉末の形態をとることもで
きる。

【００２１】吸入投与の場合には、本化合物はネブライ
ザーの加圧パックからエーロゾル噴射の形態で送り込む
のが好都合である。吸入のための好ましい送り込みシス
テムは軽量投与吸引（ＭＤＩ＝metered dose inhalatio
n)エーロゾルであり、これはフルオロカーボンまたは炭
化水素のごとき適当な推進剤に化合物Ｉを懸濁または溶
解した製剤でありうる。

【００２２】なお、本明細書で“単位薬量製剤”という
用語は物理的に分離されている複数の単位体を意味し、
各単位体は所定量の活性成分を薬物学的担体に配合して
含有しており、その所定量はその単位体１つでまたは複
数で所望の治療的効果を発揮するような量である。この
ような単位薬量製剤の例は錠剤、カプセル、ピル、粉末
小包、ウエファー、アンプルあるいは多数回分容量の容
器中の正確に計った単位等である。本発明による単位薬
量製剤は一般に化合物Ｉを１００乃至２００mg含有す
る。以下、本発明を説明するための実施例を記載する。
これら実施例は本発明を限定するものではない。

【００２３】実施例１

【化１９】 パートＡ． 線状ヘキサペプチド（Ａ−ｉ）の合成

【化２０】

【００２４】線状ポリペプチドの合成は市販（Biosearc
h SAM 9500) のペプチド合成装置を使用して実施され
た。すなわち、反応器モデュールにアミノ酸支持樹脂を
装填しそしてそのあと適当なアミノ酸をカップリングし
た。順次カップリングされたアミノ酸は以下のものであ
った： Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr (Bachem)、 Ｎ−BOC −Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−ホモチ
ロシン（以下に記載する方法で製造）、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−４−ヒドロキシ−Ｌ−Pro (B
achem)、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −α−２−クロロベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−Orn (Bachem)、 ４−オクチルオキシ安息香酸（以下に記載する方法で製
造）。

【００２５】名目装置量０．７２ミリ当量／ｇ（０．４
５ミリ当量プロリン）でＮ−BOC −Ｌ−Pro −ＰＡＭ樹
脂６２５mgをペプチド合成装置の反応器モデュールに装
填した。各アミノ酸成分の４倍過剰を秤量して溜めに入
れそしてＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）に溶解して
０．６モルの濃度とした。次ぎに各溜めに１当量のヒド
ロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ）を添加し
て超音波処理して溶解した。このあと指示した順序でカ
ップリングを実行するようプログラム化された試薬モジ
ュールに各アミノ酸とオクチルオキシ安息香酸とを装填
した。

【００２６】この手順では保護されたアミノ酸はカップ
リング剤として０．４モルのジイソプロピルカルボジイ
ミドを使用して樹脂上のアミノ基へカルボキシル基を介
してカップリングされる。次いで保護基はカップリング
された樹脂を脱保護剤で洗浄することにより除去され
る。すなわち、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）４５％、ア
ニソール２．５％、塩化メチレン５２．５％からなる脱
保護剤１００mlで洗い、５分間窒素をパーコレートし、
さらに脱保護剤を新たに１００ml再装填しそして１時間
パーコレートした。１時間経過後、脱保護剤を排出し、
樹脂を最初に塩化メチレン１００mlで、次ぎに塩化メチ
レン中２０％ジイソプロピルエチルアミンの塩基洗浄液
１００mlで、最後にまた塩化メチレン１００mlで洗浄し
た。この反応はBiosearch 装置のtBOCプログラムの１時
間１カップリングサイクルを使用して実施された。合成
が完了した時、洗浄液を樹脂から排出しそしてペプチド
支持樹脂を一晩真空乾燥した。これによって、置換樹脂
１．０ｇが得られた（理論値の９５％）。

【００２７】次ぎにそのペプチドを無水ＨＦを使用して
樹脂から分割した（開裂）。すなわち、ペプチド支持樹
脂をＫＥＬ−Ｆ（デュポン社）反応器に移し、アニソー
ル３．０mlを加えそして放置して樹脂を膨潤させた。さ
らに、樹脂が磁気攪拌棒で攪拌可能なコンシステンシー
になるまで０．５mlアリコートのアニソールを追加添加
した。反応器をＨＦ導管に固定し、液体窒素で冷却しそ
して減圧した。この後、フッ化コバルト（III)から無水
ＨＦ１０．０mlを蒸留して反応器の中に送り込んだ。生
じた混合物を０℃まで加温しそして３０分間攪拌した。
この時に、ペプチドが樹脂から開裂された。その後、Ｈ
Ｆを０℃で蒸留して液体窒素冷却捕集器内に追い出し
た。最後に残ったＨＦ痕跡は高真空管で除去した。樹脂
をジエチルエーテルで洗ってアニソールを除去しそして
５０％酢酸水溶液の２０mlアリコートを３つ使用して樹
脂から粗生成物を抽出した。ＨＰＣＬクロマトグラフィ
ー分析の結果は環化のために直接使用するのに十分な純
度を有する線状リポヘキサペプチドの存在を示した。保
持時間Ｒ_T は７．７分であった。ＨＰＬＣクロマトグラ
フィーで精製後の生成物の収量は２５８mg（５８％）で
あった。ＦＡＢ質量分析はＭ＋１が９５４であることを
示した。３００MHz での ¹Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）は所
望の構造と一致した。

【００２８】パートＢ． 環式ヘキサペプチド（Ａ）の
合成 上記により得られた線状ヘキサペプチド（Ａ−ｉ）の２
３４mlを、ふるい乾燥（３Ａ，１３Ｘ）し脱ガスしたジ
メチルホルムアミド３５mlに溶解した。この溶液に−２
０℃の温度かつ窒素雰囲気下でジフェニルホスホリルア
ジド（ＤＰＰＡ）の５８μｌ（０．２７ミリモル、１．
１当量）を注射器で２分間かけて添加し、その後直ちに
固体炭酸水素ナトリウム１０３mg（１．２３ミリモル、
５．０当量）を一度に添加した。生じた混合物を最初−
２０℃で６時間攪拌し、そのあと−５℃で加温して２４
時間攪拌した。２４時間経過後のＨＰＬＣクロマトグラ
フィー〔 "Zorbax" ４．９mm×２５cmＣ８；４０／６０
H₂O／（９／１ CH₃CN／H₂O ）〕は反応の完了を示し
た。ＤＭＦ溶剤を真空除去しそして残留物を移動相溶液
〔４０／６０ H₂O／（９０／１０ CH₃CN／H₂O)共に０．
１％ＴＦＡ含有〕の１０mlに吸収させ、そして２つに分
けて２５mm×２５cm“Zorbax”Ｃ８カラムに注入しそし
て１０ml／分の速度で平等的に溶離した。ＨＰＣＬで純
粋と確認された画分を集めて凍結乾燥した。純生成物９
０mg（収率４０％）が得られた。 実験式計算値：Ｃ₄₈Ｈ₆₇Ｎ₇ Ｏ₁₂（分子量９３５）、 ＦＡＢ質量分析測定値：９３６（Ｍ＋１）。 ¹ ＨＮＭＲ（３００MHz , CD₃OD 中）は以下の通りであ
った； 顕著なシグナル：δ7.84(d)(2H); 7.03(d)(2H); 6.97
(d)(2H); 6.71(d)(2H);4.23(d)(2H); 4.04(t)(2H); 1.2
1(d)(3H); 0.92(t)(3H)。

【００２９】実施例２

【化２１】

【００３０】パートＡ． 線状ヘキサペプチドの合成

【化２２】 実施例１と同様に操作を実施して、ペプチド合成装置の
反応器モデュールに名目装填量０．７２ミリ当量／ｇ
（０．４７ミリ当量プロリン）でＮ−BOC −Ｌ−Pro −
ＰＡＭ樹脂７１２mgを装填した。本実施例のペプチド合
成で使用されるべき各アミノ酸成分の４倍過剰量を実施
例１記載したように準備した。アミノ酸は次ぎの順次で
カップリングされた： Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−ホモチ
ロシン、 Ｎ−BOC −Ｌ−Pro (Bachem)、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −δ−２−クロロベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−Orn 、 ４−オクチルオキシ安息香酸。

【００３１】固相合成が実施例１に記載したように実施
されてヘキサペプチド置換樹脂１．１２ｇ（理論値の９
５％）が得られた。

【００３２】次ぎに実施例１に記載した方法でペプチド
をＫＥＬ−Ｆ反応器中無水ＨＦを使用して樹脂から開裂
させた。ペプチド開裂後、ＨＦを実施例１に記載したよ
うな方法で除去しそして５０％酢酸水溶液の２０mlアリ
コートを３つ使用して樹脂から粗生成物を抽出した。こ
の生成物を凍結乾燥して白色不定形固体２９０mgが得ら
れた。得られた粗生成物を下記の条件でＨＰＬＣクロマ
トグラフィー分析した結果はその粗製線状リポヘキサペ
プチドがいくらかの前端および後端留出不純物を含有し
ていることを示した： Zorbax ４．９mm×２５cm Ｃ８カラム、 ４５／５５ H₂O／（９０／１０ CH₃CN／H₂O ）（共に
０．１％のＴＦＡ含有）移動相、 流量１．０ml／分、環境温度、λ＝２１０nm。

【００３３】この生成物を２５mm×２５cm Zorbax Ｃ８
カラムのＨＰＬＣクロマトグラフィーにかけそして５０
／５０ 水／アセトニトリル（共に０．１％のＴＦＡ含
有）で溶離して精製した。ＨＰＬＣによって純粋である
ことが確認された画分を集めそして集めた画分を凍結乾
燥した。しかして固体１６０mg（収率３６％）が得られ
た。

【００３４】パートＢ． 環式ヘキサペプチド（Ｂ）の
合成 上記により得られた粗製線状ヘキサペプチドの１４３mg
を乾燥ジメチルホルムアミド３５mlに溶解した溶液に−
２０℃の温度かつ窒素雰囲気下でジフェニルホスホリル
アジド３６μｌ（０．１６８ミリモル、１．１当量）を
２分間で添加しそしてその後直ちに固体炭酸水素ナトリ
ウム６５mg（０．７６５ミリモル）を一度に添加した。
得られた混合物を最初−２０℃で６時間攪拌し、そのあ
と０℃または加温しそして下記条件のＨＰＬＣ分析で反
応の完了が確認されるまで反応を進行させた（５６時
間）： Zorbax ４．９mm×２５cm Ｃ８カラム、 ３５／６５ H₂O／（９０／１０ CH₃CN／H₂O ）（共に
０．１％のＴＦＡ含有）で溶離、 流量１．０ml／分、環境温度、λ＝２１０nm。

【００３５】ＤＭＦ溶液を真空濃縮しそしてその残留物
を２５mm×２５cm Zorbax Ｃ８カラムのクロマトグラフ
ィーにかけそして４６％水／５４％ CH₃CNを使用して
７．０ml／分の速度で溶離した。ＨＰＬＣによって純粋
であることが確認された画分を集めそして集めた画分を
凍結乾燥した。しかして７５mg（収率５４％）の純水生
成物が得られた。 実験式計算値：Ｃ₄₈Ｈ₆₇Ｎ₇ Ｏ₁₁（分子量９１９）、 ＦＡＢ質量分析測定値：９２０（Ｍ＋１）。 ¹ ＨＮＭＲ（３００MHz , CD₃OD 中）のデータは以下の
通りであった； δ7.81(d)(2H); 7.01(d)(2H); 6.98(d)(2H); 6.70(d)(2
H); 4.76(d)(1H); 4.02(t)(2H); 1.19(d)(3H); 0.90(t)
(3H)。

【００３６】実施例３

【化２３】

【００３７】パートＡ． 線状ヘキサペプチド（Ｃ−
ｉ）

【化２４】 実施例１と同様に操作を実施して、ペプチド合成装置の
反応器モデュールに後記の出発物質の製造の項に記載さ
れた方法で製造されたＮ−BOC −４−ベンジルオキシ−
Ｌ−Pro −メリフィールド樹脂２５０mgを装填した。本
実施例のペプチド合成で使用されるべき各アミノ酸成分
の４倍過剰量を実施例１に記載したように準備しそして
次ぎの順序でカップリングした： Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−ホモチ
ロシン、 Ｎ−BOC −４−ベンジルオキシ−Ｌ−Pro 、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −δ−２−クロロベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−Orn 、 ４−オクチルオキシ安息香酸（製造法は後記）。 次ぎに保護基を脱離し、樹脂を洗浄して真空乾燥した。
これによって置換樹脂４４０mgが得られた。

【００３８】次ぎに実施例１に記載した方法でペプチド
を無水ＨＦを使用して樹脂から開裂させた。ペプチド開
裂後、樹脂から粗生成物を抽出しそしてその生成物を凍
結乾燥して白色不定形固体１５０mgが得られた。得られ
た粗生成物を２５mm×２５cm“Zorbax”Ｃ８カラムのク
ロマトグラフィーにかけそして５０／５０ H₂O／CH₃CN
混合物（０．１％のＴＦＡ含有）を使用し１０．０ml／
分の速度で溶離して精製した。所望の生成物を含む画分
を集めて凍結乾燥した。しかして線状生成物（Ｃ−ｉ）
８５mg（収率２９％）が得られた。

【００３９】パートＢ． 環式ペプチド（Ｃ） 上記により得られた粗製線状ヘキサペプチドの１２６mg
（０．１３０ミリモル）を乾燥ジメチルホルムアミド３
５mlに溶解した溶液に−２０℃の温度かつ窒素雰囲気下
でジフェニルホスホリルアジド３１μｌ（０．１４３ミ
リモル、１．１当量）を２分間で添加しそしてその後直
ちに固体炭酸水素ナトリウム５５mg（５．０当量）を一
度に添加した。生じた混合物を−２０℃で６時間攪拌
し、そのあと０℃まで加温しそしてさらに４０時間反応
を進行させた。

【００４０】この後、ＤＭＦ溶液を真空濃縮した。その
残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに
かけ、クロロホルム中１３％メタノールで溶離してまだ
不純物を含む生成物９４mgを得た。これを４５／５５ H
₂O／（９０／１０ CH₃CN／H₂O)（共に０．１％ＴＦＡ含
有）５．０mlに溶解し、２５mm×２５０mm“ Zorbax”
Ｃ８カラムに注入しそして７．０ml／分の速度で平等的
に溶離した。この操作をくり返して純粋な生成物２８mg
（収率２２％）が得られた。 実験式計算値：Ｃ₄₈Ｈ₆₇Ｎ₇ Ｏ₁₃（分子量９５１）、 ＦＡＢ質量分析測定値：９５８（Ｍ＋Li）。 ¹ ＨＮＭＲ（３００MHz , CD₃OD 中）のデータは以下の
通りであった； δ7.82(d)(2H); 7.01(d)(2H); 6.96(d)(2H); 6.70(d)(2
H); 4.82(d)(1H); 4.03(t)(2H); 1.20(d)(3H); 0.91(t)
(3H)。

【００４１】実施例４

【化２５】

【００４２】パートＡ． 線状ペンタペプチドの合成

【化２６】 実施例３と同様の操作で、反応器モデュールにＮ−BOC
−Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr −メリフィールド樹脂１．０
mg（０．５７ミルモル／ｇ、Bioserchから入手）を装填
した。各アミノ酸成分の４倍モル過剰量を準備しそして
次ぎの順序でカップリングした： Ｎ−BOC −Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−ホモチ
ロシン、 Ｎ−BOC −４−ベンジルオキシ−Ｌ−Pro 、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −δ−２−クロロベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−Orn 、 ４−オクチルオキシ安息香酸。

【００４３】次ぎに、実施例１に記載したように、それ
ぞれ保護アミノ酸を順次０．４モルのジイソプロピルカ
ルボジイミドで樹脂上にカップリングし、保護基をＴＦ
Ａ脱保護剤溶液で脱離し、樹脂を塩化メチレン中２０％
ジイソプロピルエチルアミン溶液で洗浄し、洗浄された
樹脂を集めて一晩真空乾燥した。これによって置換樹脂
１．５５ｇが得られた。次ぎにこのペプチドを無水ＨＦ
を使用して樹脂から開裂させそして前記した方法で回収
して白色不定形固体３５５mg（７２％）が得られた。得
られた粗生成物を２つの２５mm×２５cm“Zorbax”Ｃ８
カラムに順次通しそして５０／５０ H₂O／CH₃CN 混合物
で溶離する逆相クロマトグラフィーによって精製した。
精製された生成物を含む留分を集めて凍結乾燥した。し
かして１４８mg（収率３０％）の生成物が得られた。

【００４４】パートＢ． 線状ペプチド（モノおよびビ
ス）のＣＢＺ保護

【化２７】

【００４５】化合物（Ｄｉ）１３８mg（０．１６１モ
ル）をｔ−ブタノール２０％水溶液に溶解した０℃の溶
液に２規定 NaOH ８０．５μｌ（０．１６１ミリモル、
１当量）を添加した。このとき、溶液は曇った。pHは
７．０であった。さらに２規定NaOH ４６．３μｌ
（０．０９２５ミリモル、０．５７当量）を添加し、続
いてCBZ塩化物１２．６μｌ（０．０５５当量）を添加
した。次いで２規定NaOH３．０μｌを添加してpHを７と
８の間に保持した。この操作を同じ量のNaOHとＣＢＺ塩
化物とを使用してくり返しそして最後に８μｌのNaOHで
pHを調整した。この混合物をつぎに０℃で１０分間攪拌
した。このあと１アリコートの試料を取り下記によりＨ
ＰＬＣクロマトグラフィー分析を実施した。

【００４６】４．５mm×２５cm“Zorbax”Ｃ８カラム、
移動相、 ７０／３０ H₂O／９：１ CH₃CN／H₂O （共に０．１％Ｔ
ＥＦ含有）で平等溶離、 流量１．０ml／分、λ＝２１０nm、温度＝環境温度。 分析結果はかなりの量の出発物質の存在を示した。そこ
でさらに２規定 NaOH１６μｌとＣＢＺ塩化物３．５μ
ｌを添加しそして０℃で実質的に反応が完了するまで攪
拌を続けた。しかしてモノ−ＣＢＺ保護ペプチドとビス
−ＣＢＺ保護ペプチドとが約３：１の割合で生成され
た。この反応混合物を凍結乾燥してそれら生成物（Ｄ−
iiとＤ−iii)の粗製混合物１８３mgが得られた。

【００４７】パートＣ． ヘキサペプチドを得るための
カップリング

【化２８】

【００４８】ＣＢＺペプチド１２４mg（モノＣＢＺに対
して０．１２５ミリモル）および（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）
−３−ヒドロキシ−４−メチルピロリンメチルエステル
塩酸塩２７mg（０．１３８ミリモル、１．１当量）を窒
素雰囲気下で乾燥ＣＭＦ３．０mlに溶解した０℃の溶液
にトリエチルアミン１９．３μｌ（１４mg、０．１３８
ミリモル）を添加し、続いてヒドロキシベンゾトリアゾ
ール１８mg（０．１３１ミリモル、１．０５当量）およ
び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−２−エチルカ
ルボジイミド塩酸塩２５mg（０．１３１ミリモル、１．
０５当量）を添加した。この反応混合物を０℃で２時間
攪拌し、そのあと室温で一晩攪拌した。この混合物を濾
過して濃縮した。残留物を３．０mlの水と１４．０mlの
酢酸エチルとの間に分配した。その水性層を１０mlの酢
酸エチルで戻し抽出しそして１つに集めた有機抽出物を
１規定硫酸水素ナトリウム３ml、飽和炭酸水素ナトリウ
ム３．０ml、飽和塩化ナトリウム３．０mlの順序で順次
洗浄した。この有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾
過して濃縮した。不定形固体１１３mg（８０％）が得ら
れた。

【００４９】パートＤ． モノＣＢＺ酸生成物（Ｄ−v
i)

【化２９】

【００５０】モノＣＢＺペプチド７９mg（７０．７マイ
クロモル）とビスＣＢＺペプチド３４mg（２７．２マイ
クロモル）（ＨＰＬＣ比率に基づく）をメチルアルコー
ル１．６mlに溶解した溶液に窒素雰囲気下で１規定の N
aOH ２１５．４μｌ（２．２当量）を添加しそしてこの
混合物を４時間攪拌した。さらに１アリコートの１規定
NaOHを添加してさらに８時間反応を進行させた。このあ
と、反応混合物を２５mlの１規定硫酸水素ナトリウムと
７５mlの酢酸エチルとの間に分配した。その有機層を洗
い、乾燥し、濃縮した。しかしてモノＣＢＺ酸生成物
（Ｄ−vi）７８mg（７０％）が得られた。

【００５１】パートＥ． 脱保護線状ヘキサペプチド
（Ｄ−vii)

【化３０】 炭素担体上１０％Ｐｄの触媒３０mgをメチルアルコール
中粗製モノＣＢＺ（７５mg）の脱ガス溶液に窒素雰囲気
下で添加した。つぎにこのフラスコに水素を導入しそし
て水素雰囲気下室温で一晩攪拌させた。この後、触媒を
濾過除去し、濾液を真空濃縮した。その残留物を５０ml
の H₂O／CH₃CN に溶解しそして凍結乾燥した。不定形白
色固体生成物６３mg（９８％）が得られた。そのＦＡＢ
質量分析測定値は９８４（Ｍ＋１）（分子量＝９８３）
であった。

【００５２】パートＦ． 環式ヘキサペプチド（Ｄ） 上記により得られた粗製線状ヘキサペプチド６０mg
（０．０６１ミリモル）を乾燥ＤＭＦ３５mlに溶解した
溶液に−２０℃の温度かつ窒素雰囲気下でジフェニルホ
スホリルアジド３１μｌ（０．１４３ミリモル、１．１
当量）を２分間かけて添加し、その後直ちに固体炭酸水
素ナトリウム５５mg（５．０当量）を一度に添加した。
つぎにこの反応混合物を０℃まで加温しそしてＨＰＬＣ
クロマトグラフィー〔“Zorbox" ４．９mm×２５cm Ｃ
８；４０／６０の H₂O／（９０／１０CH₃CN／H₂O （共
に０．１％ＴＦＡ含有）〕によって反応の完了を示すま
で反応を進行させた。流量は環境温度で０．１ml／分で
あった。検出は２１０nmの波長でなされた。ＤＭＦ溶液
を真空濃縮し、クロロホルム中１３％メタノール液を使
用したフラッシュクロマトグラフィーにかけた。まだ不
純物を含む生成物９４mgが得られた。これを逆相クロマ
トグラフィーにかけた。その物質を５．０mlの４０／６
０ H₂O／（９０／１０ CH₃CN／H₂O ）（共に０．１％Ｔ
ＦＡ含有）に溶解しそして２５mm×２５cm“Zorbox" Ｃ
８カラムに注入しそして７．０ml／分の速度で平等的に
溶離した。これにより純粋な生成物（Ｄ）９．５mg（収
率１６％）が得られた。 実験式計算値：Ｃ₄₉Ｈ₇₁Ｎ₇ Ｏ₁₃（分子量９６５）、 ＦＡＢ質量分析測定値：９６６（Ｍ＋１）。 ¹ ＨＮＭＲ（３００MHz , CD₃OD 中）のデータは以下の
通りであった； δ7.82(d)(2H); 7.01(d)(2H); 6.98(d)(2H); 7.69(d)(2
H); 4.82(d)(1H); 4.02(t)(2H); 1.19(d)(3H); 0.90(t)
(3H)。

【００５３】実施例５

【化３１】 前記実施例１乃至３に記載した操作と同様にして、所定
の装填量が樹脂１ｇ当り０．７２モル当量であるＰＡＭ
−Thr 樹脂から出発して線状ヘキサペプチドを製造し
た。この反応を行うため、ＰＡＭ−Thr 樹脂２０mgを反
応器モデュールに装填しそして試薬モジュールには４倍
過剰のアミノ酸を装填しそして下記の順序でカップリン
グが行なわれるようにプログラムしてカップリングを行
った。 tBOC−Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−tBOC−Ｏ−２，６−ジクロロベンジルホモチロシ
ン、 tBOC−Ｏ−ベンジル−４−ヒドロキシプロリン、 tBOC−Ｏ−ベンジル−Thr 、 Ｏ−ジClＺ−tBOC−Orn 、 ４−オクチルオキシ安息香酸。

【００５４】次ぎに、保護基をＴＦＡ溶液を使用して除
去し、樹脂をジイソプロピルエチルアミンで洗い、そし
て洗浄された樹脂を真空乾燥した。樹脂１．１ｇが得ら
れた。このあとペプチドを樹脂から開裂させた。しかし
て粗製線状ペプチド生成物が３２７mg（収率７６％）得
られた。

【００５５】上記により製造された粗製線状ヘキサペプ
チド３０５mg（０．３２１モル）をＤＭＦ４５mlに溶解
した溶液に、−２０℃の温度でジフェニルホスホリルア
ジド７６μｌ（０．３５３ミリモル）を添加しそしてこ
の反応混合物を６時間攪拌した。このあと、温度を０℃
まで上げそして攪拌を６日間続けた。このあと反応混合
物を濾過し、濾液を真空濃縮した。この残留物を、共に
０．１％ＴＦＡを含有する４７／５２ H₂O／（９０／１
０ CH₃CN／H₂O ）使用したクロマトグラフィーにかけ、
２５mm×２５cm“Zorbox" Ｃ８カラムに１０ml／分の流
速で通して精製した。これにより、精製生成物、化合物
Ｅが５０mg（収率２０％）得られた。 実験式計算値：Ｃ₄₇Ｈ₆₉Ｎ₇ Ｏ₁₃（分子量９３９）、 ＦＡＢ質量分析測定値：９４０（Ｍ＋１）。 ¹ ＨＮＭＲ（３００MHz , CD₃OD 中）のデータは以下の
通りであった。 δ7.85(d)(2H); 7.04(d)(2H); 6.98(d)(2H); 6.72(d)(2
H); 4.05(t)(2H); 1.21(d)(3H); 0.93(t)(3H) 。

【００５６】実施例６

【化３２】 実施例１乃至３に記載したように反応を行って、Ｎ−BO
C −Ｌ−Pro −ＰＡＭ樹脂に下記順序でアミノ酸をカッ
プリングしてまず線状ペプチドを製造した。 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−ホモチ
ロシン、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−４−ヒドロキシ−Ｌ−Pro 、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −δ−２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル
−Lys,および ４−オクチルオキシ安息香酸。

【００５７】このあと、脱保護、洗浄およびＨＦによる
樹脂からの開裂を行った。上記により製造された粗製線
状ヘキサペプチド１４０mgを乾燥ＤＭＦに溶解した溶液
に−２０℃の温度、窒素雰囲気下でジフェニルホスホリ
ルアジド３５μｌを２分間で添加し、続いて炭酸水素ナ
トリウムを一度に添加した。実質的に反応が完了するま
で反応を進行させた。その生成物を４０／５０水／（９
０／１０ CH₃CN／H₂O ）（共に０．１％ＴＦＡ含有）を
溶離剤とした“Zorbox" Ｃ８カラムのクロマトグラフィ
ーにかけて精製した。純粋な画分を集めて凍結乾燥し
た。しかして式（Ｆ）の環化生成物が得られた。

【００５８】実施例７

【化３３】 実施例１乃至３に記載した操作と同様にして、Ｎ−BOC
−Ｌ−Pro−ＰＡＭ樹脂に下記順序でアミノ酸および側
鎖酸をカップリングして最初に線状ペプチドを製造し
た。 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｌ−ホモチ
ロシン、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−４−ヒドロキシ−Ｌ−Pro 、 Ｎ−BOC −Ｏ−ベンジル−Ｌ−Thr 、 Ｎ−BOC −δ−２−クロロベンジルオキシカルボニル−
Orn,および １０，１１−ジメチルテトラデカン酸。

【００５９】このあと、保護基を脱離しそしてペプチド
を樹脂から開裂させた。そのペプチドを次ぎに−２０℃
窒素雰囲気下でＤＭＦ中ジフェニルホスホリルアジドで
処理し、続いて固体炭酸水素ナトリウムを添加しそして
−２０℃で一晩攪拌し、最後に０℃まで温度を上げて１
０時間攪拌することにより環化して所望生成物を得た。

【００６０】実施例８ 上記実施例と同様に操作を実施して下記化合物がさらに
製造された。

【化３４】

【化３５】

【００６１】実施例９

【化３６】

【００６２】実施例１０ 下記調合処方により化合物Ａ各５００mgを含有する硬質
ゼラチンカプセル１０００個が製造された： 成 分 量（ｇ） 化合物Ｉ ５００ スターチ ７５０ 二塩基性リン酸カルシウム、含水 ５０００ ステアリン酸カルシウム ２．５ すなわち、上記成分を混合して均質混合物をつくりそし
て２−ピースの硬質ゼラチンに詰めた。

【００６３】実施例１１ 下記調合処方により常用方法で注射用溶液２５０mlが製
造された： デキストロース １２．５ｇ 水 ２５０ml 化合物Ｂ ４００mg すなわち、上記成分を混合し、そのあと使用のために殺
菌した。

【００６４】実施例１２ 下記調合処方によりエーロゾル組成物が製造された： 成 分 小型金属容器１本当り 化合物Ｃ ２４mg レシチンＮＦ液体濃縮物 １．２mg トリクロロフルオロメタン、ＮＦ ４．０２６ｇ ジクロロフルオロメタン、ＮＦ １２．１５ｇ

【００６５】実施例１３ 下記調合処方により化合物Ｄ各５００mgを含有する圧縮
錠剤１０００個が製造された： 成 分 量（ｇ） 化合物Ｄ ５００ スターチ ７５０ 二塩基性リン酸カルシウム、含水 ５０００ ステアリン酸カルシウム ２．５ すなわち、上記成分を微細に粉砕してよく混合しそして
１０％スターチペーストで顆粒化した。それらの顆粒を
乾燥して圧縮して錠剤に成形した。

【００６６】出発物質の製造 保護されるホモチロシンならびに対応する保護されたホ
モチロシンが下記反応図式に従って製造された。

【化３７】

【００６７】ホモチロシンの製造 （Ｓ）−Ｎ−メチルカルバモイル−ホモチロシンメチル
エーテル〔２０．００ｇ、７４．９０ミリモル、J. Or
g. Chem. ５２、５１４３（１９８７）のMellilo 等の
論文に記載された方法に従って製造〕を酢酸（１００m
l）中３０％ HBi溶液に溶解した溶液を機械攪拌しなが
ら６６時間６０℃に加熱した。この後室温まで放冷す
る。固体が析出した。この反応混合物をエーテル（１０
０ml）で希釈しそして生成物を濾過によって分離し、エ
ーテルで洗った。得られた淡黄色固体を加温しながらメ
タノールに溶解しそしてエーテルで希釈した。この溶液
を不純物からデカントし、そのあと濃縮した。黄色油が
得られ、これを固化する。この固化した油をエーテルと
共にすりつぶした。白色固体としてホモチロシンの臭化
水素酸塩が得られた（１８．２７ｇ、８８％）。 ¹ Ｈ ＮＭＲ（δ）： 7.06(d, 2H, J=8.4Hz) 、6.73
(d, 2H, J=8.4Hz)、3.96(t, 1H, J=6.6Hz)、2.69(m, 2
H) 、2.15(m, 2H) 。

【００６８】Ｏ−２，６−ジクロロベンジルホモチロシ
ンの製造 この製造方法はYamashiro とLiによって記載された方法
〔JACS. ９５、１３１６（１９７３）〕に類似するもの
である。水（５６ml）中NaOH（７．７０ｇ、１７６．８
ミリモル）の溶液に上記により製造されたホモチロシン
臭化水素酸塩（１６．００ｇ、５８．０ミリモル）を添
加した。生じた溶液に水（２８ml）中硫酸銅（II）五水
和物（７．２３６ｇ、２９．００ミリモル）の溶液を添
加した。つぎに、この混合物を５５℃まで加熱し、その
あと室温まで冷却しそしてメタノール（２４０ml）で希
釈した。生じた混合物に２，６−ジクロロベンジルブロ
マイド（１８．５１０ｇ、７７．２ミリモル）を加えそ
してこの反応混合物を室温で２２時間攪拌した。沈澱し
た緑色固体を濾過して集めそしてメタノール中２５％の
水、メタノール、アセトン（それぞれ２００mlアリコー
ト）で順次洗った。空気乾燥後、得られた緑色固体（２
４．０ｇ）を各８ｇの３つのアリコートに分けて水２５
０mlとＥＤＴＡ（二ナトリウム塩として５．０ｇ）含有
エタノール２５０mlとの沸騰溶液に添加した。沸騰温度
で数分間攪拌後、溶液（これは結晶中の少量の微細白色
固体を含む）を重い青色固体からデカントした。３つの
溶液を集めて冷蔵庫に入れて一晩結晶化した。生成物を
濾過して回収しそして水とエタノールで順次洗い、デシ
ケータに入れて真空乾燥した。得られた生成物は淡黄色
固体（９．３８ｇ、４７％）である。 ¹ Ｈ ＮＭＲ（δ）： 7.45(d, 2H, J=9Hz)、7.36(dd,
1H, J=9Hz) 、7.19(d,2H, J=8.4Hz)、6.96(d, 2H) 、2.
70(m, 2H) 、2.12(m, 2H) 。 この生成物はさらに精製することなく使用された。

【００６９】Ｓ−Ｏ−２，６−ジクロロベンジル−Ｎ−
tBOC−ホモチロシンの製造 水（５０ml）中水酸化ナトリウム（１．０１６ｇ、２
５．４２ミリモル）の水溶液とジオキサン（５０ml）と
の混合物にＯ−２，６−ジクロロベンジルホモチロシン
（９．００ｇ、２５．４２ミリモル）を添加しそして生
じた溶液にジ−ｔ−ブチルピロカーボネート（６．１０
ｇ、２８．０ミリモル）を添加した。この混合物を室温
で５時間攪拌する。５時間後、この混合物を濃縮してで
きるだけ多くのジオキサンを除去する。得られた水性混
合物に酢酸エチル（２００ml）を添加しそしてこの混合
物を２規定塩酸（２５ml）で酸性化する。その有機層を
乾燥（MgSO₄)して濃縮する。この物質をフラッシュクロ
マトグラフィーにかけ、１％酢酸を含有する塩化メチレ
ン中３％エタノール液で溶離する。残留酢酸を除去する
ためトルエンから２回濃縮後、淡黄色固体（３．３８
ｇ、７３％）としてＳ−Ｏ−２，６−ジクロロベンジル
−Ｎ−tBOC−ホモチロシンが得られた。 ¹ Ｈ ＮＭＲ（δ）： 7.45(d, 1H, J=8.7Hz) 、7.45
(d, 1H, J=7.2Hz)、7.35(dd, 1H, J=7.2, 8.7Hz)、7.15
(d, 2H, J=8.7Hz)、6.95(d, 2H, J=8.7Hz)、5.26(s, 2
H) 、4.05(m, 1H) 、2.66(m, 2H) 、2.07(m, 1H) 、1.9
2(m, 1H) 、1.46(s,9H) 。

【００７０】Ｎ−BOC −４−ベンジルオキシ−Ｌ−Pro
メリフィールド樹脂の製造

【化３８】 無水エタノール２５ml中Ｎ−BOC −４−ベンジルオキシ
−Ｌ−Pro(Bachem) ３．４５ｇ（１０．７２ミリモル）
の溶液にH₂O ２５mlを加えた。ついでpHを２．０ＭのCs
₂CO₃（２７ml、５．４ミリモル）で７．７に調整した。
この溶液を次ぎに１００mlのエタノールで希釈しそして
乾燥体まで真空濃縮した。この濃縮残留物を５０mlのト
ルエンで３回共沸蒸留しそして真空デシケータに入れP₂
O₅で乾燥する。得られたセシウム塩を乾燥ＤＭＦ（６５
ml）に入れそしてクロロメチルメリフィールド樹脂の８
ｇ（１．３４ミリモルCl／ｇ.,１０．７２ミリモル、２
００乃至４００メッシュ、Bioradから入手）と共に４時
間攪拌する。このあと樹脂をＤＭＦ、１：１のＤＭＦ：
H₂O 、ＤＭＦ、最後にメチルアルコールの順序で洗う。
真空乾燥後の樹脂の最終重量は１０．９ｇであった。

【００７１】ｐ−（ｎ−オクチルオキシ）安息香酸の製
造 ４−ヒドロキシ安息香酸１９．２０ｇ（１５０ミリモ
ル）を水酸化ナトリウム水溶液（水１２０ml中１２．０
０ｇ）に加えそしてこの混合物を固体がすべて溶解する
まで攪拌した。この溶液をあらかじめ８０℃まで加熱し
たジメチルスルホキシド４８０mlに添加する。この添加
は反応混合物の温度が８５℃を超さないように約５分間
かけて少しずつ行った。生じた溶液にｎ−オクチルブロ
マイド２８．９５ｇ（１５０ミリモル）を約５乃至１０
分間かけて滴下添加した。このあと混合物を約４時間か
けて室温まで冷却させ、次いでこの混合物を１２００ml
の氷冷水の中に注入した。濃塩酸（３０ml）を添加して
所望のオクチルオキシ安息香酸を沈澱させた。この沈澱
を濾過して集め、水洗し、そのあとイソプロパノールか
ら再結晶した。しかして融点９７−１０２℃のオクチル
オキシ安息香酸を得た。

【配列表】

【００７２】配列番号：１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ｎｏ フラグメント型：不明 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：３ 他の情報：４Hyp 配列 Xaa Thr Xaa Xaa Thr Pro 1 5

【００７３】配列番号：２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ｎｏ フラグメント型：不明 配列 Xaa Thr Pro Xaa Thr Pro 1 5

【００７４】配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ｎｏ フラグメント型：不明 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：３ 他の情報：４Hyp 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：６ 他の情報：４Hyp 配列 Xaa Thr Xaa Xaa Thr Xaa 1 5

【００７５】配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ｎｏ フラグメント型：不明 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：３ 他の情報：４Hyp 配列 Xaa Thr Xaa Xaa Thr Xaa 1 5

【００７６】配列番号：５ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ｎｏ フラグメント型：不明 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：３ 他の情報：４Ｈｙｐ 配列 Ｘａａ Ｔｈｒ Ｘａａ Ｘａａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ １ 5

【００７７】配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ＹＥＳ フラグメント型：不明 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：３ 他の情報：４Hyp 配列 Xaa Thr Xaa Xaa Thr Pro 1 5

【００７８】配列番号：７ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：環状 配列の種類：ペプチド ハイポセティカル配列：ｎｏ フラグメント型：不明 配列の特徴 特徴を表わす記号：modified site 存在位置：３ 他の情報：４Hyp 配列 Xaa Thr Xaa Xaa Thr Pro 1 ５

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジエームス ヴイ．ヘツク アメリカ合衆国，07076 ニユージヤーシ イ，スコツチ プレインズ，ネパウイン レーン 961 (72)発明者 ロバート エー．ザンビアス アメリカ合衆国，07081 ニユージヤーシ イ，スプリングフイールド，メイプル ア ヴエニユー ４

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記構造式によって表される化合物 【化１】 （式中、 Ｒ₁ は水素またはヒドロキシル、 Ｒ₂ は水素、ヒドロキシルまたはメチル、 Ｒ₃ は水素またはヒドロキシル、 Ｒ₄ はＣ₅ −Ｃ₂₃−アルキル、Ｃ₅ −Ｃ₂₃−アルケニ
   ル、アリールまたは置換アリール、 【化２】 ｘは１または２である）。
2. 【請求項２】 Ｒ₅ とＲ₆ が 【化３】 である請求項１記載の化合物。
3. 【請求項３】 Ｒ₁ がOH、Ｒ₂ が−CH₃ 、Ｒ₃ がOH、Ｒ
   ₄ がｐ−オクチルオキシフェニル、 【化４】 そしてｘが１である請求項２記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｒ₁ がＨ、Ｒ₂ がOH、Ｒ₃ がOH、Ｒ₄ が
   ｐ−オクチルオキシフェニル、 【化５】 そしてｘが１である請求項２記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ｒ₁ がＨ、Ｒ₂ がＨ、Ｒ₃ がOH、Ｒ₄ が
   ｐ−オクチルオキシフェニル、 【化６】 そしてｘが１である請求項２記載の化合物。
6. 【請求項６】 Ｒ₁ がＨ、Ｒ₂ がＨ、Ｒ₃ がＨ、Ｒ₄ が
   ｐ−オクチルオキシフェニル、 【化７】 そしてｘが１である請求項２記載の化合物。
7. 【請求項７】 Ｒが 【化８】 Ｒ₃ がOH、Ｒ₄ がｐ−オクチルオキシフェニル、 【化９】 そしてｘが１である請求項３記載の化合物。
8. 【請求項８】 下記構造式によって表される化合物を含
   有する抗微生物組成物 【化１０】 （式中、 Ｒ₁ は水素またはヒドロキシル、 Ｒ₂ は水素、ヒドロキシルまたはメチル、 Ｒ₃ は水素またはヒドロキシル、 Ｒ₄ はＣ₅ −Ｃ₂₃−アルキル、Ｃ₅ −Ｃ₂₃−アルケニ
   ル、アリールまたは置換アリール、 【化１１】 ｘは１または２である）。
9. 【請求項９】 請求項８記載の組成物の抗真菌量を投与
   することによりなる真菌症の感染を抑制する方法。