JPWO2019065396A1

JPWO2019065396A1 - 精製サラシア属植物抽出物の製造方法および精製サラシア属植物抽出物

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Publication number: JPWO2019065396A1
Application number: JP2019544997A
Authority: JP
Inventors: 篤史飯田; 文教植田; 仁美斎藤
Original assignee: Fujifilm Corp
Current assignee: Fujifilm Corp
Priority date: 2017-09-29
Filing date: 2018-09-19
Publication date: 2020-10-15
Anticipated expiration: 2038-09-19
Also published as: EP3689360A1; WO2019065396A1; US11602702B2; CN111201027A; EP3689360A4; JP6955570B2; AU2018343065A1; US20200222831A1; AU2018343065B2

Abstract

精製に伴う抽出物の回収率を大きく低減させず、抽出物が有するα−グルコシダーゼ阻害活性を高め、風味を改善した精製サラシア属植物抽出物の製造方法および精製サラシア属植物抽出物を提供する。精製サラシア属植物抽出物の製造方法は、サラシア属植物、サラシア属植物抽出物、及びサラシア属植物粉砕物の少なくとも一つからなるサラシア属植物含有原料抽出物に対して抽出溶媒の存在下で０．１〜２０質量％の活性炭と接触させる抽出工程を含む。

Description

本開示は、精製サラシア属植物抽出物の製造方法に関する。

サラシア属植物の根及び幹は、インド及びスリランカの伝統医学アーユルヴェーダにおいて天然薬物として利用されてきた。スリランカでは、サラシア・レティキュラータ（Salacia reticulata）の根皮が、リュウマチ、淋病及び皮膚病の治療に有効であること、そして上記の根皮を初期糖尿病の治療に用いることが伝承されている。

近年、サラシア属植物抽出物が、α−グルコシダーゼ活性阻害に基づく糖吸収抑制作用により血糖値上昇抑制効果を有すること（例えば、非特許文献１）、種々のポリフェノール（及びキサントン配糖体であるマンジフェリン）を含有することが報告されている（例えば、非特許文献２）。
これらの成分は、苦味、渋味、収斂味、エグ味、雑味として感じられ、食品として摂取する際、消費者に不快感を与えるおそれがある。

ところで、サラシア属植物抽出物と同じくポリフェノール類を含有する物質として、例えば、茶抽出物、ギムネマ・シルベスタ抽出物が挙げられる。
特許文献１には、カテキン類の回収率を大きく損なうことなく、フラボノール類を低減して緑茶風味に優れ、かつ飲みやすいカテキン含有飲料の原料として有用な精製緑茶抽出物を提供することを目的として、緑茶抽出物の有機溶媒水溶液を、特定量の活性炭と所定の時間接触させる、精製緑茶抽出物の製造方法が開示されている。特許文献２には、後味及び香味が良好でこくの深い茶抽出液が得られる茶抽出液の製造方法を提供することを目的として、茶葉を特定量の活性炭の存在下で抽出する抽出工程を有する、茶抽出液の製造方法が開示されている。特許文献３には、安全性に優れ、ポリフェノール含量を損なうことなく、効果的に脱色が行えるとともに、不快な味が除去され、沈殿の少ない、風味に優れたポリフェノール含有組成物を提供することを目的とし、ポリフェノールを含有する組成物を、予め低温処理した活性炭に接触させて処理する、ポリフェノール含有組成物の精製方法が開示されている。
また、特許文献４には、ギムネマ・シルベスタの葉またはその抽出エキスを活性炭と接触させ不溶物を除去して得られる風味の改良されたギムネマ・シルベスタエキスが開示されている。

特開２０１２−５５２０５号公報特許第６１１８８８８号公報特開２００８−２８０２８２号公報特開平１１−１３７２１１号公報

ＦＯＯＤＳｔｙｌｅ２１、第６巻、第５号、第７２〜７８頁ＹＡＫＵＧＡＫＵＺＡＳＳＨＩ、１２１（５）、第３７１〜３７８頁

しかしながら、製剤または食品等への加工を要しない、経口摂取用途に適したサラシア属植物抽出物とするために、風味を改善させることを目的として特許文献１〜４に記載されているような処理によりサラシア属植物抽出物を精製した場合、サラシア属植物抽出物の回収率の他、α−グルコシダーゼ活性阻害作用を低減させてしまうこと、風味、特にサラシア属植物特有の臭いおよび苦みの低減が不十分であることがわかった。
精製によるサラシア属植物抽出物の回収率の低下は、製造コストの観点から好ましくない。また、α−グルコシダーゼ活性阻害作用の低下は、サラシア属植物抽出物の活性が低減されることとなるため、1回摂取量が増えてしまうことから、摂取者の負担が増加する恐れがある。さらに、製剤または食品等への加工を行わずにそのまま経口摂取可能な抽出物とするためには、風味を改善し、摂取しやすい抽出物とすることは重要である。

本発明の一実施形態は、上述のような問題点を鑑みて、精製に伴う抽出物の回収率を大きく低減させず、抽出物が有するα−グルコシダーゼ阻害活性を維持しつつ、風味を改善した精製サラシア属植物抽出物の製造方法を提供することを課題とする。

一般的に、精製サラシア属植物抽出物を得るための原料は、茶抽出物等と比べて濃度が高いことから、精製によって回収率が低下しやすいため、精製処理は行わない。
しかしながら、本発明者らの鋭意検討により、サラシア属植物、サラシア属植物抽出物、及びサラシア属植物粉砕物の少なくとも一つからなるサラシア属植物含有原料抽出物に対して０．１〜２０質量％の活性炭と接触させる工程が、上記課題を解決するにあたって有効であることを明らかにした。また、驚くべきことに、本開示の製造方法によれば、α−グルコシダーゼ阻害活性を高めることができることを見出した。

この点について、本発明者らは以下のように推測している。
サラシア属植物特有の風味（臭いおよび苦み）は、サラシア属植物が含有するポリフェノール類、脂質類などの成分（以下、特定成分とも称する）が原因と考えられる。活性炭は、サラシノール等の有効成分との親和性が低い一方、これら特定成分との親和性が高いため、接触させる活性炭の処理を特定量とすることで、上記特定成分が選択的に除去され、得られる精製サラシア属植物抽出物中に含まれる特定成分の含有量が相対的に減少する結果、サラシア属植物抽出物の風味が改善するものと考えられる。
また、特定成分がサラシノール等の有効成分に何らかの作用を及ぼすことでわずかに低減されていたα−グルコシダーゼ阻害活性作用が、特定成分の選択的な除去により高まった結果、精製サラシア属植物抽出物のα−グルコシダーゼ阻害活性を高めることができたと考えられる。

なお、上記の推測は、本発明の一実施形態の効果を限定的に解釈するものではなく、一例として説明するものである。

上記課題を解決するための具体的な手段には、以下の実施態様が含まれる。

［１］サラシア属植物、サラシア属植物抽出物、及びサラシア属植物粉砕物の少なくとも一つからなるサラシア属植物含有原料抽出物に対して０．１〜２０質量％の活性炭と接触させる工程を含む、精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
［２］上記サラシア属植物含有原料抽出物と前記活性炭とを接触させる時間が、５分〜５時間である、［１］に記載の精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
［３］上記抽出溶媒として１０℃〜１００℃の水を用いる［１］または［２］に記載の精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
［４］前記活性炭が、比表面積が５００〜２５００ｍ²／ｇであり、平均細孔直径が、
０．５〜１０ｎｍである［１］〜［３］のいずれか１つに記載の精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
［５］［１］〜［４］のいずれか１つに記載の製造方法により製造される、精製サラシア属植物抽出物。
［６］精製サラシア属植物抽出物全量に対してポリフェノール類および脂質類の合計の含有量が１０質量％未満である、精製サラシア属植物抽出物。
［７］精製サラシア属植物抽出物全量に対するエピカテキンの含有量が０．００４質量％未満である、［６］に記載の精製サラシア属植物抽出物。

本発明の一実施形態によれば、精製に伴う抽出物の回収率を大きく低減させず、抽出物が有するα−グルコシダーゼ阻害活性を維持しつつ、サラシア属植物特有の臭いを改善した精製サラシア属植物抽出物の製造方法および精製サラシア属植物抽出物を提供することができる。

以下、本発明の実施形態の一例について説明する。但し、本発明は、以下の実施形態に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜、変更を加えて実施することができる。

本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を意味する。
本明細書中に段階的に記載されている数値範囲において、一つの数値範囲で記載された上限値又は下限値は、他の段階的な記載の数値範囲の上限値又は下限値に置き換えてもよい。また、本明細書中に記載されている数値範囲において、その数値範囲の上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。

本明細書において、「工程」との語は、独立した工程だけではなく、他の工程と明確に区別できない場合であってもその工程の所期の目的が達成されれば、本用語に含まれる。

［サラシア属植物含有原料抽出物］
サラシア属植物は、主としてスリランカ、インド及び東南アジア地域に自生するデチンムル科の植物である。サラシア属植物の具体例としては、サラシア・レティキュラータ（Ｓａｌａｃｉａｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サラシア・オブロンガ（Ｓａｌａｃｉａｏｂｌｏｎｇａ）、サラシア・プリノイデス（Ｓａｌａｃｉａｐｒｉｎｏｉｄｅｓ）、サラシア・キネンシス（Ｓａｌａｃｉａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、サラシア・ラティフォリア（Ｓａｌａｃｉａｌａｔｉｆｏｌｉａ）、サラシア・ブルノニアーナ（Ｓａｌａｃｉａｂｕｒｕｎｏｎｉａｎａ）、サラシア・グランディフローラ（Ｓａｌａｃｉａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ）、サラシア・マクロスペルマ（Ｓａｌａｃｉａｍａｃｒｏｓｐｅｒｍａ）から選ばれる１種類以上の植物が挙げられる。サラシア属植物としては、サラシア・レティキュラータ（Ｓａｌａｃｉａｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、サラシア・オブロンガ（Ｓａｌａｃｉａｏｂｌｏｎｇａ）、及びサラシア・キネンシス（Ｓａｌａｃｉａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）から選ばれる少なくとも１種の植物であることが好ましい。

本開示においては、「サラシア属植物含有原料抽出物」とは、抽出工程において精製サラシア属植物抽出物を得るための原料のうち、サラシア属植物由来の成分を意味し、抽出物中に含まれるその他の成分（例えば、原料を調製するために用いる抽出溶媒など）は除く。

本開示においては、サラシア属植物含有原料抽出物に用いるサラシア属植物として、サラシア属植物、サラシア属植物抽出物、及びサラシア属植物粉砕物の少なくとも一つを使用すればよい。サラシア属植物としては、サラシア属植物の根、幹、葉、花、果実等の可食部をそのまま使用することができる。

本明細書において、サラシア属植物の抽出物、及びサラシア属植物の粉砕物とは、サラシア属植物の根、幹、葉、花、果実等の可食部の抽出物及び／又は粉砕物、並びに上記抽出物及び／又は粉砕物の乾燥物を包含する意味で用いられる。本明細書において、乾燥物とは、乾燥粉末（エキス末）でもよい。上記したサラシア属植物の抽出物及び／又は粉砕物を調製する際には、サラシア属植物の１種類以上の部位を混合して使用してもよい。効率よく精製サラシア属植物抽出物を製造する観点から、サラシア属植物含有原料抽出物としては、好ましくは、根、及び幹から選ばれる部位から抽出したサラシア属植物抽出物（エキス）またはエキスを乾燥して得られるエキス末が用いられる。

乾燥粉末（エキス末）は、好ましくは、サラシア属植物の可食部等を溶媒によって抽出し、上記で得られた抽出物を乾燥させることによって得ることができる。
抽出に用いる溶媒としては、水、アルコール、又はケトン等が挙げられ、これらを２種以上混合した混合溶媒を用いてもよい。
アルコールとしては、メタノール、又はエタノール等が挙げられ、エタノールが好ましい。
ケトンとしては、アセトン、メチルエチルケトン、又はシクロヘキサン等が好ましい。

上記の中でも、水、アルコール、水とアルコールとの混合溶媒、又は水とケトンとの混合溶媒が好ましく、水、アルコール、又は水とアルコールとの混合溶媒がより好ましく、５０℃〜９８℃の熱水、エタノール、又は水とエタノールとの混合溶媒がさらに好ましい。

水とアルコールとの混合溶媒におけるアルコール含有量は、３０質量％〜９０質量％が好ましく、４０質量％〜７０質量％がより好ましい。
抽出物を乾燥して、乾燥粉末（エキス末）を得る際の乾燥方法は、特に制限はなく、公知の乾燥方法、例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥等の方法が挙げられる。

［抽出工程］
本開示の精製サラシア属植物抽出物の製造方法は、サラシア属植物、サラシア属植物抽出物、及びサラシア属植物粉砕物の少なくとも一つからなるサラシア属植物含有原料抽出物に対して抽出溶媒の存在下で０．１〜２０質量％の活性炭と接触させる抽出工程を含む。
｛活性炭｝
本開示で用いる活性炭は、その種類及び特性等は特に限定されることなく用いることができる。活性炭の炭素質材料としては、椰子殻、パーム椰子、果実の種、鋸屑、ユーカリ、松などの植物系、石炭系、石油系のコークス及びそれらを原料としたピッチの炭化物、フェノール樹脂、塩化ビニル樹脂、塩化ビニリデン樹脂などをあげることができるが、椰子殻、パーム椰子、果実の種、鋸屑、ユーカリ、松などの植物系材料由来のものが好ましい。

活性炭としては、市販品を用いることができ、例えば、白鷺（登録商標）Ｃ、白鷺ＷＨ２ｃ、白鷺Ｗ２ｃ、白鷺ＷＨ２ｘ、白鷺Ｘ７０００Ｈ、白鷺Ｘ７１００Ｈ、白鷺ＬＧＫ−１００、白鷺ＷＨＡ、白鷺Ｍ、白鷺Ａ、白鷺Ｐ、カルボラフィン、強力白鷺、精製白鷺、特性白鷺、粒状白鷺ＬＨ２ｃ、粒状白鷺ＫＬ、粒状白鷺ＭＡＣ−Ｗ（以上、商品名、大阪ガスケミカル（株）製）、太閤Ｓタイプ（太閤Ｓ，太閤ＤＰ，太閤ＳＡ１０００）、太閤Ｋタイプ（太閤Ｋ，太閤Ａ，太閤ＫＡ，太閤Ｍ）（以上、商品名、フタムラ化学（株）製）等が挙げられる。また、これらの活性炭をさらに精製処理したものであってもよい。

活性炭の平均細孔径は、α−グルコシダーゼ活性阻害をより高めた精製サラシア属植物抽出物を得る観点から、０．５〜１０ｎｍが好ましく、１．０〜１０ｎｍがより好ましく、３．０〜８．０ｎｍがさらに好ましく、３．０〜６．０ｎｍがよりさらに好ましい。

活性炭の比表面積は、回収率を高める観点から５００〜２５００ｍ²／ｇが好ましく、１０００〜２０００ｍ²／ｇがより好ましく、１２００〜１８００ｍ²／ｇがさらに好ましい。

詳細な機構は定かではないが、活性炭がサラシア属植物抽出物中に含まれる特定成分を選択的に除去することにより、α−グルコシダーゼ活性阻害を示す化合物の活性をより高めることができるためと考えられる。
活性炭の平均細孔径および比表面積は、活性炭が市販品の場合、カタログに記載されている値を採用することができる。また、市販品の有無に関わらず、これらの値が不明な場合は、ＪＩＳＺ８８３０（２０１３）、ＩＳＯ９２７７（２０１０）に準拠したガス吸着による比表面積測定方法により測定することができる。

接触させる活性炭の量は、苦みを低減させる観点から、サラシア属植物含有原料抽出物に対して０．２０質量％以上が好ましく、１．０質量％以上がより好ましく、３．０質量％以上がさらに好ましい。また、回収率を高める観点からサラシア属植物含有原料抽出物に対して１５．０質量％以下が好ましく、１０．０質量％以下がより好ましい。

｛活性炭との接触時間｝
活性炭との接触時間は、精製サラシア属植物抽出物を効率よく得る観点から、５分以上であることが好ましく、３０分以上がより好ましい。また、α−グルコシダーゼ活性阻害をより高めた精製サラシア属植物抽出物を得る観点から、５時間以下が好ましく、３時間以下がより好ましい。

（抽出溶媒）
抽出溶媒としては、その種類および特性などは特に限定されることなく用いることができ、水および／又は有機溶媒を用いることができるが、製造コストの観点から水であることが好ましい。水の種類は特に限定されず、水道水、蒸留水、イオン交換水、天然水等から適宜選択して使用することができる。
また、有機溶媒を使用する場合、例えば、エタノール、メタノール等のアルコール、アセトン等のケトン、酢酸エチル等のエステルが例示される。アルコール、ケトン等の親水性有機溶媒が好ましく、製剤または食品への使用を考慮すると、アルコールがより好ましく、エタノールがより更に好ましい。
なお、抽出溶媒は、上述したサラシア属含有原料が含む抽出溶媒であってもよい。すなわち、原料となるサラシア属植物抽出物（エキス）を調製するために使用した溶媒をそのまま抽出溶媒として用いてもよい。

（温度）
活性炭と接触させる際の温度は、得られる精製サラシア植物属抽出物のα−グルコシダーゼ活性阻害能を高める観点から１０〜１００℃が好ましく、２５℃〜８０℃がより好ましく、２５〜７５℃がさらに好ましく、３０〜６５℃がより更に好ましい。

｛活性炭と接触させる手段｝
活性炭と接触させる手段としては特に限定されることなく、公知の方法を採用することができる。例えば、サラシア属植物の抽出物、またはサラシア属植物の粉砕物に抽出溶媒、活性炭を添加し、撹拌して吸着後、ろ過操作により活性炭を回収するバッチ方法、又は活性炭を充填したカラムを用いて連続処理により接触させるカラム方法等が挙げられる。

バッチ方式は、長時間の接触を容易に実現できるため生産性の観点から好ましく用いることができる。

サラシア属植物含有原料抽出物に対して抽出溶媒を添加後、抽出溶媒を徐々に加温してから活性炭を添加させる方法が生産性の観点から好ましい。

［分離工程］
抽出工程を経て得られた抽出物を、ろ過、遠心分離、沈殿処理、膜処理等から選択される固液分離処理のうち１種又は２種以上を組合せて行うことにより、サラシア属植物の固形分および活性炭を除去し、精製サラシア属植物抽出物を得ることができる。

ろ過の方法は特に限定されず、例えば、ろ紙、金属製フィルタ、ガスフィルタ等によるフィルタ分離を採用することができる。フィルタのメッシュサイズは、サラシア属植物の固形分および活性炭を確実に除去が可能であれば特に制限はない。

遠心分離は、特に限定されず、例えば、分離板型、円筒型、デカンター型等の公知の機器を使用して行うことができる。遠心分離の使用条件（回転数および時間）は、サラシア属植物の固形分および活性炭を確実に除去が可能であれば特に制限はない。

膜処理は、例えば、細孔径が１０μｍ以下の高分子材料からなる膜を通過させる処理であり、膜の形態としては、平膜、中空糸膜等を挙げることができる。

分離工程において、精製効率を高める観点から、抽出工程で得られた抽出物を濃縮又は乾燥により高濃度化する濃縮工程を加えてもよく、分離工程の途中において濃縮工程を利用してもよい。

上述のような本開示の製造方法により、回収率およびα−グルコシダーゼ活性阻害を維持しつつも、サラシア属植物特有の臭いおよび苦みが低減され、抽出物中におけるサラシア属植物の含有量が高められる。この結果、製剤または食品等への加工を行わずに経口摂取可能な精製サラシア属植物抽出物とすることができる。
なお、精製サラシア属植物抽出物（精製エキス）は、上記の抽出工程を経て得られた後、エキスを濃縮（濃縮精製エキス）または乾燥（精製エキス末）としてもよい。濃縮または乾燥方法は、特に制限はなく、公知の方法が挙げられる。

なお、本明細書において、「サラシア属植物抽出物の回収率」または「回収率」とは、上述した抽出処理をせずに得られるサラシア属植物抽出物の固形分量に対する、精製サラシア属植物抽出物の固形分量を百分率で示したものをいう。なお、回収率の上限は、特に限定されるものではなく、１００質量％であってもよい。

本開示の製造方法により得られた精製サラシア属植物抽出物は、経時保存安定性にも優れる。具体的には、室温保存による着色および臭いの発生を低減することができる。この点について詳細な機構は定かではないが、上述した特定成分が選択的に除去されることにより、経時に伴う空気中の水分の影響による特定成分の変質、または特定成分とサラシア属植物抽出物中の有効成分との反応を抑制することができるため、精製サラシア属植物抽出物の保存安定性が良好になるものと考えられる。

［精製サラシア属植物抽出物］
本開示の精製サラシア属植物抽出物は、風味が改善されているため、製剤または食品等への加工を行わずに経口摂取可能な抽出物である。具体的には、サラシア特有の臭いおよび苦みが低減されており、下記に示す特性を有する。

｛成分｝
精製サラシア属植物抽出物は、ポリフェノール類および脂質類の含有量が、精製サラシア属抽出物全量に対して合計で０質量％以上１０質量％未満となっている。
なお、本明細書において、ポリフェノール類とは、ＩＳＯ１４５０２−１（２００５）に準じてＦＯＬＩＮ−ＣＩＯＣＡＬＴＥＵ法により測定できる化合物を意味し、たとえばカテキン等が挙げられる。また、脂質類とは、食品中の脂質類の分析に用いられる、酸分解法により測定可能な化合物を意味し、たとえばコレステロール、グリセリン等が挙げられる。
本開示の精製サラシア属植物抽出物は、上述したようにポリフェノール類および脂質類が低減されているため、サラシア属植物特有の臭いおよび苦みが低減される他、経時保存に伴う着色および臭いの発生を低減できる。
精製サラシア属植物抽出物は乾燥（精製エキス末）としてもよく、賦形剤等を加えた粉末としてもよく、さらに造粒処理を施して粒径を大きくした造粒物としてもよい。賦形剤としては、その種類及び特性等は特に限定されることなく用いることができる。

精製サラシア属植物抽出物の苦みは、ポリフェノール類の中でもエピカテキンの含有量を指標として判断することができる。苦みをより低減する観点から、精製サラシア属抽出物全量に対してエピカテキンの含有量は０．００４質量％未満が好ましく、０．００３質量％未満がより好ましい。下限値としては、例えば精製サラシア属抽出物全量に対してエピカテキンの含有量は０．０００質量％以上である。

（α−グルコシダーゼ活性阻害能）
本開示の精製サラシア属植物抽出物は、α−グルコシダーゼ活性阻害能を有する。

α−グルコシダーゼ阻害活性の指標としてのスクラーゼ５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀値）は以下の方法で測定することができる。

＜実験法１＞スクラーゼＩＣ₅₀値の測定サンプル溶液の準備：チューブに２ｍｇのサンプルを量り取り、水２ｍＬを加えてよく懸濁し、１ｍｇ／ｍＬ濃度のサンプル溶液を作成する。これをそれぞれ０、５０、１００、２５０、５００μｇ／ｍＬとなるように水で希釈する。

基質液の準備：０．２ｍｏｌ／Ｌマレイン酸バッファー（ｐＨ６．０）にスクロース濃度１００ｍｍｏｌ／Ｌとなるようにスクロースを溶解し、これを基質液とする。
粗酵素液の準備：１０ｍＬの生理食塩水に１ｇのｉｎｔｅｓｔｉｎａｌａｃｅｔｏｎｅｐｏｗｄｅｒｒａｔ（ＳＩＧＭＡ社製）を懸濁した後、遠心分離（３，０００ｒｐｍ，４℃，５分）した。得られた上清を分離し、粗酵素液とする。

上記の各濃度のサンプル溶液５００μＬに対し、基質液４００μＬを添加し、水浴中３７℃にて５分間予備加温した。ここにそれぞれ、粗酵素液を１００μＬ添加し、３７℃にて６０分間反応させた。反応終了後、９５℃にて２分間加温することで酵素を失活させて反応を停止させた。生成したグルコース濃度を市販のキット・ムタロターゼ・グルコースオキシダーゼ法（グルコースＣＩＩテストワコー、和光純薬工業（株））を使用して定量を行う。

ブランクの準備：上記の各濃度のサンプル溶液２５０μＬに対し、基質液２００μＬ、
粗酵素液５０μＬを添加し、直ちに９５℃にて２分間加温することで酵素を熱失活させ、ブランクデータとする。
得られた値より検量線を作成し、酵素活性を５０％阻害する濃度（ＩＣ₅₀値）を求める。

（サラシノールの含有量）
組成物におけるサラシノールの含有量は、高速液体クロマトグラフィーによって以下の条件で検出することにより確認することができる。
カラム：ＳｈｏｄｅｘＡｓａｈｉｐａｋＮＨ２Ｐ−５０４Ｅ
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液：８０％アセトニトリル
オーブン温度：３０℃
インジェクション量：２５μＬ
検出器：荷電化粒子検出器（ＣｈａｒｇｅｄＡｅｒｏｓｏｌＤｅｔｅｃｔｏｒ：ＣＡＤ）

（味覚センサーによる風味の評価結果）
本開示の精製サラシア属植物抽出物の風味は、味覚センサーを用いて評価することができる。

本開示における味覚センサーはヒトの味覚検出システムを模倣して作られているもので、人工脂質膜を用いたセンサーへの呈味物質に対する応答性を測定して評価するものである。
味覚センサーのセンサーに用いられている人工脂質膜は、脂質の種類、可塑剤の配合比等によって応答する呈味物質が変わるため、人工脂質膜の種類を変えることで酸味、塩味、甘味、苦味、旨味等の基本５味に対して異なる応答性を示す。この性質を利用し、各味ごとに対応した味検出を行うことができる他、更に先味と後味を分別するため、味覚センサーは複数の項目で味を数値化して表現することができる。

人工脂質膜は味覚センサー表面に貼り付けてあり、この膜が試料溶液に浸されることによって、脂質膜の膜電位に変化が生じる。このように、試料溶液中に含まれる呈味物質がセンサー表面に吸着する時に生じる膜電位の変化量をセンサー出力値として処理することで測定試料の味を総合的に判断することができる。

測定は、最初に基準となる溶液（以下、「基準溶液」とも称する。）に味覚センサーを浸して膜電位Ｖｒを得、次に試料液に味覚センサーを浸すと、呈味物質との相互作用により変化した膜電位Ｖｓを得ることができる。この差分（Ｖｓ−Ｖｒ）によりセンサー出力の相対値が算出され、先味に相当する値となる。
また後味は、上述した方法で先味を測定した後に、味覚センサーを基準溶液で簡易に共洗いをし、再度基準溶液に浸して膜電位Ｖｒ’を得ることで、この膜電位変化（Ｖｒ’−Ｖｒ）からＣＰＡ（Change of membrane Potential by Adsorption）値として求めることができる。なお、基準溶液として３０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム含有０．３ｍｍｏｌ／Ｌ酒石酸溶液を用いたときの結果を測定値として用いることとする。
測定する際の環境温度に特に制限はないが、日本薬局方で定められる室温（１〜３０℃）、常温（１５〜２５℃）または標準温度（２０℃）等で行うことが好ましい。

本開示において、先味とは食品を口に含んですぐに感じる味のことであり、上述した測定により味覚項目として評価される場合、「酸味」、「苦味雑味」、「渋味刺激」、「旨味」、「塩味」として表現される。一方、後味とは、食品を飲み込んでからも舌に残る味のことで、上述した測定により味覚項目として評価される場合、「苦味」、「渋味」、「旨味コク」として表現される。

本開示に用いることができる味覚センサーとしては特に制限はないが、上述した基本５味に対する応答性が高い味覚センサーを用いることが好ましく、なかでも酸味、塩味、苦味、旨味、渋味に対する応答性が高い味覚センサーを用いることが、風味に大きく影響を与えるサラシア属植物特有の臭いおよび苦味の要因を解析する観点からより好ましい。また、上述の先味および／または後味として得られた味覚項目も併せて評価として用いることができる。
市販されている測定装置としては、例えば、味認識装置ＴＳ−５０００Ｚ（（株）インテリジェントセンサーテクノロジー）等が挙げられる。

本開示の精製サラシア属植物抽出物は、風味に大きく影響を与えるサラシア属植物特有の臭いおよび苦味の要因を低減する観点から、先味における苦味雑味が１７．００以下、先味における渋味刺激が２．６０以下、後味における苦味が７．００以下、かつ、後味における渋味が１．５０以下であることが好ましい。これらの値が小さいほど消費者に不快感を与える味が低減された精製サラシア属植物抽出物となるため、下限値に特に制限はない。

［用途］
本開示の精製サラシア属植物抽出物の用途は、本発明の効果を奏するものである限り特に限定されず、例えば、食品（飲料、及びサプリメントを含む）、食品材料、医薬部外品、医薬品、医薬品材料、及び医薬部外品材料等が挙げられ、具体的には、特開２０１７−１３２７６３号公報の段落００３１〜００６０の記載が挙げられる。本開示の精製サラシア属植物抽出物を、食品、食品材料、経口摂取用途である医薬部外品、医薬品、医薬品材料、及び医薬部外品に適用すると、本開示の効果がより効果的に作用する。

以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明はその主旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。

実施例１：
Ｉ．サラシア属植物抽出物の調製
サラシア・レティキュラータ（Ｓａｌａｃｉａｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）の根の部分を粉砕後、７０℃の熱水にて抽出して得られた溶液を濃縮し、サラシア属植物含有原料抽出物（固形分濃度１０〜１５質量％）を得た。

II．精製サラシア属抽出物の製造
１）Ｉ．の手順にて調製したサラシア属植物含有原料抽出物に対し、表１の実施例１に記載の活性炭１．０質量％を撹拌しながら添加して混合溶液を得た。得られた混合溶液を撹拌しながら５０度まで加温し、６０分間撹拌しながら活性炭と反応させて抽出工程を行った。
２）反応後、ろ過、遠心分離（回転数：１０５０ｒｐｍ、時間：１０分）を行い、混合溶液の上清液を回収した。続いて上清液の濃縮、スプレー乾燥を経て精製サラシア属植物抽出物を得た。

実施例２〜１３並びに比較例２および３は活性炭の種類、濃度、処理温度および処理時間を下記表の通りに変更した以外、実施例１と同じ手順で作製した。
比較例１はII．１）記載の抽出工程を行わない以外は、実施例１と同じ手順で作製した。

［評価］
実施例および比較例の精製サラシア属植物抽出物について、以下の各評価を行った。結果を下記表に示す。

１．回収率
比較例１の回収率を１００質量％として、実施例１〜１３及び比較例２〜３の回収率を算出した。

２．サラシノール濃度
上述した実験法１により、実施例１〜１３、比較例１〜３のサラシノール濃度を測定した。続いて、比較例１のサラシノール濃度を１００質量％として、実施例および比較例のサラシノール濃度を算出した。

３．サラシノール回収率
下記の式にもとづき、実施例および比較例のサラシノール回収率を算出した。
サラシノール回収率（％）＝回収率（％）×サラシノール濃度

４．α−グルコシターゼ阻害活性
上述した実験法１により、実施例および比較例のスクラーゼＩＣ₅₀値を測定した。続いて、以下の式に基づき、実施例および比較例のα−グルコシターゼ阻害活性を算出した。α−グルコシダーゼ阻害活性（％）＝｛（１／各実施例および比較例のスクラーゼＩＣ₅₀値）／（１／比較例１のＩＣ₅₀値）｝×１００

５．臭いの評価
被験者５名により以下の手順にて評価を行った。
１）比較例１を基準５とし、各被験者にて以下の基準に沿って評価した。
１：サラシア属植物特有の臭いが感じられず、経口摂取しやすい
２：サラシア属植物特有の臭いが僅かに感じられるが、経口摂取には全く問題がない
３：サラシア属植物特有の臭いが感じられるが、経口摂取は可能
４：サラシア属植物特有の臭いがやや強く感じられ、経口摂取が難しい
５：サラシア属植物特有の臭いが強く、経口摂取が困難
２）１）の値を、各実施例および比較例について算術平均し、以下の基準に沿って評価した。
Ａ：１．０以上２．０未満
Ｂ：２．０以上３．０未満
Ｃ：３．０以上４．０未満
Ｄ：４．０以上５．０以下
なお、Ａ、ＢまたはＣが製品として許容範囲である。

６．苦みの評価
被験者５名により、以下の手順にて評価を行った。
１）比較例１を基準５とし、各被験者にて以下の基準に沿って評価した。
１：苦みが感じられず、経口摂取しやすい
２：苦みが僅かに感じられるが、経口摂取には全く問題がない
３：苦みが感じられるが、経口摂取は可能
４：苦みがやや強く感じられ、経口摂取が難しい
５：苦みが強く、経口摂取が困難
２）１）の値を、算術平均し、以下の基準に沿って評価した。
Ａ：１．０以上２．０未満
Ｂ：２．０以上３．０未満
Ｃ：３．０以上４．０未満
Ｄ：４．０以上５．０以下
なお、Ａ、ＢまたはＣが製品として許容範囲である。

７．着色の評価
試料を濃度０．７％となるように純水に溶かし、光路長１ｃｍのセルを用いた紫外可視分光法により、波長５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
なお、測定装置は紫外可視分光光度計（機種名：Ｕ−３３１０、（株）日立製作所）、ブランク試験は純水を使用した。

８．ポリフェノール（エピカテキン）の含有比率
ＨＰＬＣ−質量分析法により、実施例１〜１３、及び比較例１〜３のそれぞれのエピカテキンの含有量を測定した。比較例１を１００として、実施例１〜１３、比較例２及び比較例３のエピカテキンの含有比率を算出した。

９．ポリフェノール（エピカテキン）の含有量（質量％）の測定
組成物におけるポリフェノール（エピカテキン）の含有量は、高速液体クロマトグラフィーによって以下の条件で検出することにより定量した。
・カラム：ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂＲＢ−１８
・流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
・溶離液：Ａ液、０．０５Ｍリン酸；Ｂ液、４０％アセトニトリル含有０．０５Ｍリン酸
溶液
・グラジエント：「Ａ：Ｂ＝８０：２０」の溶離液を、１０分後〜６０分後にかけて「Ａ：Ｂ＝３０：７０」とした。
・オーブン温度：３０℃
・インジェクション量：５μＬ
・検出器の条件：２８０ｎｍの吸光度

１０．経時保存安定性の評価
試料をサンプル瓶に封入して４０℃の雰囲気下で１ヶ月保存した後、以下の手順によって、経時後の着色および臭いの発生について評価した。

１０−１．着色発生の評価
保存した後の試料の着色について、上記の「７．着色の評価」と同様の手順で評価した。

１０−２．臭い発生の評価
保存した後の試料の臭いについて、上記の「５．臭いの評価」と同様の手順で評価した。

※クラレコール（登録商標）ＧＬＣ（株式会社クラレ）：平均細孔直径４〜２０ｎｍの混合物

以上の結果より、実施例１〜１３はいずれも高い回収率を示しつつも、サラシア属植物特有の臭いおよび苦みの低減効果が良好であった。また、驚くべきことに、実施例１〜９、１１および１２は、比較例１（本開示の活性炭による抽出工程未処理のサンプル）と比較して良好なα−グルコシダーゼ阻害活性を示した。

実施例１および実施例３〜１３は、ポリフェノールのうち、エピカテキンの含有比率が比較例１と比較して極めて低かった。このため、実施例１〜１３は表に記載したように苦み改善効果が良好となっているものと考えられる。また、実施例１〜１３は、経時後も着色および臭いの発生が抑制され、保存安定性が良好であった。

１１．味覚センサーによる風味の評価
実施例７〜９および比較例１〜３について、味覚センサーを用いて風味の評価を行った。

１）試料溶液の調製
試料１．２ｇに水１００ｇを加えて、攪拌したものを各試験溶液とした。
また、基準溶液として３０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム含有０．３ｍｍｏｌ／Ｌ酒石酸溶液を用意した。

２）味認識装置での測定および評価
以下に示す測定条件に従い、味認識装置を用いて試験溶液の味の分析を行った。すなわち、５種類の味覚センサーを用いて先味５項目(酸味、苦味雑味、渋味刺激、旨味及び塩味)及び後味３項目(苦味、渋味及び旨味コク)を測定した。具体的には、５種類の各味覚センサーの基準溶液中での測定電位をゼロとし、試験溶液中での測定電位との差を先味とした。その後、各味覚センサーを基準溶液で洗浄し、再度基準溶液を測定した時の電位の差を後味とした。
得られた測定結果の解析には装置付属の解析アプリケーションを用いた。
＜測定条件＞
・味認識装置：ＴＳ−５０００Ｚ（（株）インテリジェントセンサーテクノロジー）
・測定温度：室温
・解析アプリケーション：味認識装置ＴＳ−５０００Ｚ解析アプリケーションVer1.6.5（（株）インテリジェントセンサーテクノロジー）
・味覚センサー：ＣＡ０、Ｃ００、ＡＥ１、ＡＡＥ、ＣＴ０（（株）インテリジェントセンサーテクノロジー）
ＣＡ０、Ｃ００、ＡＥ１、ＡＡＥ及びＣＴ０の味覚センサーを用いて、味覚センサーに味を判定させた。判定内容が、以下に記載の各味覚項目への変換として出力をされた。
・各味覚項目への変換
ＣＡ０：酸味(先味)
Ｃ００：苦味雑味(先味)、苦味(後味)
ＡＥ１：渋味刺激(先味)、渋味(後味)
ＡＡＥ：旨味(先味)、旨味コク(後味)
ＣＴ０：塩味（先味）

風味に大きく影響を与えるサラシア属植物特有の臭いおよび苦味の指標として４種の味覚項目（先味における苦味雑味、先味における渋味刺激、後味における苦味、および後味における渋味）に関する測定結果を評価した。結果を表３に示す。

以上の結果より、味覚センサーによる風味の評価結果（４種の味覚項目）と、５．臭いの評価および６．苦味の評価にて評価をした結果に相関性が見られた。具体的には、先味における苦味雑味が１７．００以下、先味における渋味刺激が２．６０以下、後味における苦味が７．００以下、かつ、後味における渋味が１．５０以下である実施例７〜９の精製サラシア属植物抽出物は、ヒトによる臭いまたは苦みの評価結果でも良好であった。
比較例３の試料は、味覚センサーによる風味の評価結果およびヒトによる臭いまたは苦みの評価結果において、サラシア属植物特有の臭いおよび苦味が低減された結果を示したが、活性炭の風味が感じられたことから経口摂取には不適と評価した。

Claims

サラシア属植物、サラシア属植物抽出物、及びサラシア属植物粉砕物の少なくとも一つからなるサラシア属植物含有原料抽出物に対して抽出溶媒の存在下で０．１〜２０質量％の活性炭と接触させる抽出工程を含む、精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
前記サラシア属植物含有原料抽出物と前記活性炭とを接触させる時間が、５分〜５時間である、請求項１に記載の精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
前記抽出溶媒として１０℃〜１００℃の水を用いる請求項１または２に記載の精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
前記活性炭が、比表面積が５００〜２５００ｍ²／ｇであり、平均細孔直径が、０．５〜１０ｎｍである請求項１〜３のいずれか１項に記載の精製サラシア属植物抽出物の製造方法。
請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法により製造される、精製サラシア属植物抽出物。
精製サラシア属植物抽出物全量に対してポリフェノール類および脂質類の合計の含有量が１０質量％未満である、精製サラシア属植物抽出物。
精製サラシア属植物抽出物全量に対するエピカテキンの含有量が０．００４質量％未満である、請求項６に記載の精製サラシア属植物抽出物。
先味における苦味雑味が１７．００以下、先味における渋味刺激が２．６０以下、後味における苦味が７．００以下、かつ、後味における渋味が１．５０以下である、請求項６または請求項７に記載の精製サラシア属植物抽出物。