JPWO2012169435A1

JPWO2012169435A1 - 高純度ｐｔｈ含有凍結乾燥製剤およびその製造方法

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Publication number: JPWO2012169435A1
Application number: JP2013519467A
Authority: JP
Inventors: 文秀西尾; 卓治前島; 佳郎三留
Original assignee: Asahi Kasei Pharma Corp
Current assignee: Asahi Kasei Pharma Corp
Priority date: 2011-06-07
Filing date: 2012-05-31
Publication date: 2015-02-23
Also published as: EP3020409B1; JP2016014042A; CN103561757B; US10683335B2; KR101787956B1; JP2016130254A; KR20170063998A; ES2761635T3; JP2017019865A; US10011643B2; KR101792473B1; KR20140001255A; CN104645318B; EP2719393A1; JP2017025088A; HK1190304A1; JP2015096548A; JP2016179999A; EP2719393B1; KR20150116468A

Abstract

【課題】高純度ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤及びその製造方法を提供する。また、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の純度を確認等するためのＰＴＨ類縁物質の検査方法を提供する【解決手段】本発明において、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造工程中に生成するＰＴＨ類縁物質の存在が確認された。更に、当該ＰＴＨ類縁物質の生成が、ＰＴＨペプチド含有溶液等の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することにより顕著に防止・低減されることを見出した。【選択図】図２

Description

本発明はＰＴＨ（副甲状腺ホルモン）又はその生理学的活性同等物（以下、「ＰＴＨペプチド」と総称する。）を有効成分として含有する凍結乾燥製剤に関する。また、本発明はＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造方法に関する。さらに、本発明はＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の検査乃至品質の保証方法に関する。

副甲状腺ホルモンは、カルシトニン類やビタミンＤ類とともに、血中カルシウム濃度の調節に関与するホルモンである。従って、ＰＴＨペプチドは、副甲状腺機能低下症の診断薬として用いられている。また、副甲状腺ホルモンは、生体内において、腎臓における活性型ビタミンＤ３生成を増加させることにより、腸管でのカルシウム吸収を促進する作用を有することも知られている（非特許文献１）。また、骨粗鬆症患者に対して１週間に１回の頻度で２６週間の投与期間にわたり１回の投与あたり１００又は２００単位のＰＴＨを皮下投与することにより、当該骨粗鬆症患者の海面骨の骨密度を増加させかつ皮質骨の骨密度を減少させない骨粗鬆症の治療方法が開示されている（特許文献７）。

一般に、微量のＰＴＨペプチドを用時溶解型凍結乾燥製剤として製剤化する場合、マンニトール等の糖類あるいはゼラチン等の高分子物質を安定化剤として配合する方法が用いられている（特許文献１、特許文献２）。また、単糖類または二糖類および塩化ナトリウムを含有することを特徴とする凍結乾燥医薬組成物も知られている（特許文献３）。

また、上記のような凍結乾燥製剤を無菌性的に製造して医薬品とする場合、通常の医薬品製造施設は、ＨＥＰＡフィルターを通した一定の風速を有する無菌の空気の流れにより無菌環境を実現したエリアを利用する。つまり、当該無菌環境下の医薬品製造施設内において、典型的には、有効成分含有溶液の調製工程に続く該溶液の無菌ろ過〜容器への充填工程、充填容器の凍結乾燥庫への搬入工程、及び凍結乾燥工程から容器（バイアル等）の封栓工程から成る製造過程が実施される。

特開昭６３−６０９４０号公報特開平２−１１１号公報特開平５−３０６２３５号公報特開昭６４−１６７９９号公報ＷＯ０２／００２１３６特開２００３−０９５９７４号公報特開平８−７３３７６号公報ＷＯ００／１０５９６ＷＯ１０／３０６７０

ＣｕｒｒｅｎｔＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓＲｅｐｏｒｔｓ、Ｖｏｌ．６、１２−１６、２００８Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｖｏｌ．９８、ｎｏ．１２、ｐ４４８５−４５００，２００９ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、３２、２２１−２９６、１９６９Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、ｖｏｌ．２６６、２８３１−２８３５、１９９１Ｍ．Ｔａｋｅｉｅｔａｌ．、ＰｅｐｔｉｄｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ１９８０、１８７−１９２、１９８１

医薬品の有効成分は、原料物質からの化学合成、生物由来物質の単離・精製、或いは遺伝子工学的生産と生成物の単離・精製等により取得される。一般的に、遺伝子組換法を含めいかなる製法の場合でも、原料自体の純度、反応の不完全性、単離・精製過程での分解等により、製造される医薬有効成分として１００％の純度を得るのは困難なことが多い。他方で、診断薬や治療薬が不純物を許容量以上に含んでいた場合、当該診断や治療に好ましくない影響を及ぼす可能性を否定することはできないから、依然として安全で有効な医薬を製造するための重要な因子の一つが高純度の生成物を得ることであることに変わりはない。とりわけ、ＰＴＨペプチドを含有する製剤を骨粗鬆症の治療／予防のために投与する場合、その投与期間が長期に渉ることもあり得るから、ＰＴＨペプチドを含有する製剤は特に高純度であることが必要とされるであろう。

しかしながら、前記のような典型的製造過程により本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を工業的に製造しようとすると、当該有効成分（ＰＴＨペプチド）の化学構造が変化した物質（以下、「ＰＴＨ類縁物質」という。）を含んだ製剤が製造されてしまうことが知見された。とりわけ製造スケールが大きくなると、生産数量の増加に伴って前記ＰＴＨ類縁物質の生成量が実質的に許容できない程度までに増加することさえ危惧されるといった問題に直面した。さらに、当該ＰＴＨ類縁物質の生成量は常に一定でなく、製造場所や時期、時間等の違いによっても変化するものであったが、該ＰＴＨ類縁物質が生成されてしまう原因も特定されていなかったことから、その生成量を管理できないという現実的に重大な問題にも直面した。

しかして、本発明は、高純度、すなわちＰＴＨ類縁物質の含量が許容できるまで低いレベルであるＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を提供することを課題とする。さらに本発明は、当該高純度ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造方法を提供することを課題とする。また、本発明の別の課題は、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の純度を確認するなどの目的のためのＰＴＨ類縁物質の検査方法を提供することにある。

本発明者らは、製造スケールが大きくなり、生産数量の増加に伴ってＰＴＨ類縁物質の生成量が実質的に許容できない程度までに増加することが危惧されるに至り、当該ＰＴＨ類縁物質を単離しキャラクタゼーションすることに成功した。更に、当該ＰＴＨ類縁物質の生成が、ＰＴＨペプチド含有溶液等の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することにより顕著に防止・低減されることを見出した。

また、理論に拘束されるわけではないが、前記でキャラクタリゼーションされたＰＴＨ類縁物質の構造的特徴、および当該類縁物質の生成が医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することにより防止・低減された事実から、それらのＰＴＨ類縁物質の生成が、医薬品製造施設内空気環境内に存在する酸化能を有する物質に起因すると推定された。確かに、医薬品製造施設の空気環境は、高い清浄度（グレードＡ等）であることの他に、屡、酸化能を有する気体性物質を含むことがある。つまり、医薬品製造施設は、より徹底した無菌環境を実現するためにホルムアルデヒドやオゾン等の滅菌剤により燻蒸消毒されることがある。そして、当該燻蒸消毒の残留物としてホルムアルデヒドやオゾンといった酸化能を有する気体を含有する場合があり得ることにも思い至ったのである。更に言えば、燻蒸消毒の有無に拘らずオゾンは大気中にも０．００１〜０．０２ｐｐｍ、場所や時間、季節によっては約０．０２〜０．１ｐｐｍの濃度で存在している。

しかるに、本発明者らは、本発明で明らかとなったＰＴＨ類縁物質の生成が、オゾンを含有する空気に対してＰＴＨペプチドを接触させることにより再現されることも確認した。

したがって本発明は以下の局面及び好適な実施態様を包含する。

［１］高純度のＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤であって、但し高純度とは、当該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下であり、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを少なくとも意味し、該凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前のＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制したことを特徴とする方法により製造される、前記ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［２］前記ＰＴＨ類縁物質が、
１）類縁物質１：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より６４Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（１−ａ）〜（１−ｃ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（１−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、
（１−ｂ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（１−ｃ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
２）類縁物質２：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より３６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（２−ａ）〜（２−ｃ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（２−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、
（２−ｂ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（２−ｃ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
３）類縁物質３：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より３２Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（３−ａ）〜（３−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（３−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（３−ｂ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ；
４）類縁物質４：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より４８Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（４−ａ）〜（４−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（４−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（４−ｂ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
５）類縁物質５：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より４８Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（５−ａ）〜（５−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（５−ａ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（５−ｂ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
６）類縁物質６：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より２０Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（６−ａ）〜（６−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（６−ａ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（６−ｂ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
７）類縁物質７：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より１６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（７−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（７−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ；
８）類縁物質８：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より１６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（８−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（８−ａ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ；
９）類縁物質９：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より３２Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（９−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（９−ａ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
１０）類縁物質１０：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より１６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（１０−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（１０−ａ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋１６Ｄａ；又は
１１）類縁物質１１：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より４Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（１１−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（１１−ａ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ、
のうちの少なくとも１種以上である、［１］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［３］前記ＰＴＨ類縁物質が、
１）類縁物質１’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が下記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物、

；
２）類縁物質２’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が下記構造式（ｂ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物、

；
３）類縁物質３’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
４）類縁物質４’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
５）類縁物質５’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
６）類縁物質６’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造（ｂ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
７）類縁物質７’
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
８）類縁物質８’
ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
９）類縁物質９’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
１０）類縁物質１０’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が下記構造式（ｃ−１）又は（ｃ−２）で示されるトリプトファン一酸化物残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；

；又は
１１）類縁物質１１’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ｂ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
のうちの少なくとも１種以上である、［１］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［４］前記高純度が、製剤中の少なくとも１種以上の上記類縁物質１乃至１１の量が該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下であり、及び／又は上記類縁物質量１乃至１１の合計量がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して５．０％以下であることを意味する、［２］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５］前記高純度が、製剤中の少なくとも１種以上の上記類縁物質１’乃至１１’の量が該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下であり、及び／又は上記類縁物質量１’乃至１１’の合計量がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して５．０％以下であることを意味する、［３］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［６］前記ＰＴＨペプチドがヒトＰＴＨ（１−３４）である、［１］乃至［５］いずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［７］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤がガラス製バイアルに収容された製剤である、［１］乃至［６］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［８］凍結乾燥前のＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露の抑制が、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程、無菌濾過工程、薬液充填工程、及び凍結乾燥手段への搬入工程のいずれか１以上の工程で行われることを特徴とする、［１］乃至［７］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［９］更に、凍結乾燥後のバイアル封栓工程においても凍結乾燥物が医薬品製造施設内空気環境に暴露されることを抑制することを含む方法により製造されることを特徴とする、［８］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１０］凍結乾燥前のＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露の抑制が、凍結乾燥手段への搬入工程で行われることを特徴とする、［１］乃至［９］のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１１］前記暴露の抑制が、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が講じられた凍結乾燥庫を用いることで行われることを特徴とする、［１０］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１２］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を容器搬入時のみ開け且つ搬入後は速やかに閉めることで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［１１］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１３］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有する凍結乾燥庫であり、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が、流動空気の流れを該開口部から庫内に向かわない方向に変える整風カバーである、［１１］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
［１４］前記搬入工程が、凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［１０］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１５］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を容器搬入時のみ開け搬入後は速やかに閉めること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［１０］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１６］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有し、更に該開口部に整風カバーを備える凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該整風カバーが流動空気の流れを庫内に向かわない方向に変えること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［１０］に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
［１７］前記搬入工程が３時間以上にわたる該工程である、［１０］乃至［１６］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１８］ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程の開始から凍結乾燥手段への搬入工程の終了までが３時間以上にわたり、その間の１以上の工程においてＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露が抑制される方法により製造されることを特徴とする、［８］乃至［１７］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［１９］前記不活性ガスが窒素ガスである、［１４］乃至［１８］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［２０］高純度のＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤であって、該凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結乾燥手段へ搬入する際に医薬品製造施設内空気環境に対して暴露されるのを抑制したことを特徴とする方法で製造され、但し前記高純度とは当該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下であり、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを少なくとも意味し、前記搬入工程は３時間以上にわたる工程であり、且つ前記空気環境はＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されている環境であり、該ＨＥＰＡフィルター直下２０ｃｍの位置の気流が０．２〜１．０ｍ／ｓの流速気流である、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
［２１］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造方法であって、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程の開始から凍結乾燥手段への搬入工程終了の間の１以上の工程においてＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする方法。

［２２］更に、凍結乾燥後のバイアル封栓工程においても凍結乾燥物が医薬品製造施設内空気環境に暴露されることを抑制することを含む、［２１］に記載の方法。

［２３］凍結乾燥手段への搬入工程においてＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［２１］又は［２２］に記載の方法。

［２４］前記暴露の抑制が、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が講じられた凍結乾燥庫を用いることを特徴とする、［２３］に記載の方法。

［２５］凍結乾燥手段への搬入工程が３時間以上にわたる該工程である、［２３］又は［２４］に記載の方法。

［２６］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を容器搬入時のみ開け搬入後は速やかに閉めることで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制する、［２４］又は［２５］に記載の方法。

［２７］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有する凍結乾燥庫であり、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が、流動空気の流れを該開口部から庫内に向かわない方向に変える整風カバーである、［２４］又は［２５］に記載の方法。
［２８］凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［２３］又は［２５］に記載の方法。

［２９］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を溶液容器搬入時のみ開け搬入後に速やかに閉めること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［２３］又は［２５］に記載の方法。
［３０］前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有し、更に該開口部に整風カバーを備える凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該整風カバーが流動空気の流れを庫内に向かわない方向に変えること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、［２３］又は［２５］に記載の方法。

［３１］前記不活性ガスが窒素である、［２８］乃至［３０］のいずれか１つに記載の方法。

［３２］前記ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器がガラス製バイアルである、［２１］乃至［３１］のいずれか１つに記載の方法。

［３３］前記ＰＴＨがヒトＰＴＨ（１−３４）である、［２１］乃至［３２］のいずれか１つに記載の方法。

［３４］医薬品製造施設内空気環境が、１）グレードＡの空気であり、２）粒径０．３μｍの粒子を９９．９７％以上の効率で捕らえる性能を有するＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されており、且つ、３）含有オゾン濃度が０．００１〜０．１ｐｐｍの空気環境である、［２１］乃至［３３］のいずれか１つに記載の方法。

［３５］医薬品製造施設内空気環境が、含有ホルムアルデヒド濃度０．１ｐｐｍ以下の空気環境である、［２１］乃至［３４］のいずれか１つに記載の方法。

［３６］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量を１．０％以下とし、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量を５．０％以下とするための、［２１］乃至［３５］のいずれか１つに記載の方法。

［３７］上記［２］に記載のＰＴＨ類縁物質１乃至１１の生成を抑制するための、［２１］乃至［３６］のいずれか１つに記載の方法。

［３８］上記［３］に記載のＰＴＨ類縁物質１’乃至１１’ の生成を抑制するための、［２１］乃至［３６］のいずれか１つに記載の方法。

［３９］上記［２１］〜［３８］のいずれか１つに記載の方法により製造された、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
［４０］高純度のＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤の製造方法であって、該製造方法は、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結乾燥手段へ搬入する際に医薬品製造施設内空気環境に対して暴露されるのを抑制したことを特徴とする方法であり、但し前記高純度とは、当該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下であり、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを少なくとも意味し、前記搬入工程は３時間以上にわたる工程であり、且つ前記空気環境はＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されている環境であり、該ＨＥＰＡフィルター直下２０ｃｍの位置の気流が０．２〜１．０ｍ／ｓの流速気流である、前記製造方法。

更に本発明は、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の医薬品としての適合性の保証及び法令の遵守のために重要である検査方法を意図する。当該検査方法は、前記ＰＴＨ類縁物質のいずれか１つ以上、またはその全ての存在確認、及び／又は存在量を定量することを特徴とする。当該局面及び好適な実施態様として以下のものを包含する。

［４１］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の検査方法であって、該方法は、該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中における［２］に記載のＰＴＨ類縁物質１乃至１１の少なくとも１種以上の存在を確認、及び／又は存在量を定量することを特徴とする方法。

［４２］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の検査方法であって、該方法は、該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中における［３］に記載のＰＴＨ類縁物質１’乃至１１’の少なくとも１種以上の存在を確認、及び／又は存在量を定量することを特徴とする方法。

［４３］前記ＰＴＨ類縁物質の定量が、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤に由来する試料を高速液体クロマトグラフィーに付して紫外部吸収を測定した際のクロマトグラム上における前記ＰＴＨ類縁物質に相当するピークの面積を計算することを含む、［４１］又は［４２］に記載の方法。

［４４］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤に由来する試料を高速液体クロマトグラフィーに付して紫外部吸収を測定した際のクロマトグラム上における前記ＰＴＨ類縁体に相当するピークの面積と、同一クロマトグラム上におけるＰＴＨペプチドに相当するピーク面積或いはＰＴＨペプチドのピーク面積とそれ以外に検出された全てのＰＴＨ類縁物質のピーク面積の和を比較することで当該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチドの純度を算出することを含む、［４３］に記載の方法。

［４５］前記クロマトグラム上で前記ＰＴＨ類縁物質のいずれか２種以上が１又は２以上の単一ピークとして検出されるクロマトグラフィー条件を適用した場合において、当該ピークの面積と、同一クロマトグラム上におけるＰＴＨペプチドに相当するピーク面積或いはＰＴＨペプチドのピーク面積とそれ以外に検出された全てのＰＴＨ類縁物質のピーク面積の和を比較することで当該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチドの純度を算出することを含む、［４４］に記載の方法。

［４６］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを保証するための、［４１］乃至［４５］のいずれか１つに記載の方法。

［４７］更に、高速液体クロマトグラフィー質量分析計を用いて前記ＰＴＨ類縁物質の質量数を検出することを含む、［４１］乃至［４６］のいずれか１つに記載の方法。

［４８］更に、前記クロマトグラム上で単一ピークを与える物質を分取し、当該物質をトリプシン消化して生じるフラグメントの質量数を同定することを含む、［４１］乃至［４７］のいずれか１つに記載の方法。

［４９］上記［４１］乃至［４８］のいずれか１つに記載の検査方法を実施する工程を含む、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤から成る医薬品の製造方法。

更に、本発明の好適なＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤として以下の局面も意図される。

［５０］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤であって、少なくとも１以上のＰＴＨ類縁物質がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下であり、及び／又全ＰＴＨ類縁物質量がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して５．０％以下であることを特徴とするＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５１］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤であって、それぞれのＰＴＨ類縁物質のいずれもがＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下であり、及び／又全ＰＴＨ類縁物質量がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して５．０％以下であることを特徴とするＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５２］ＰＴＨ類縁物質が上記［２］記載の類縁物質である、［５０］又は［５１］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５３］ＰＴＨ類縁物質が上記［３］記載の類縁物質である、［５０］又は［５１］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５４］ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する類縁物質量が少なくとも下記の関係：
類縁物質１量が０．０４％以下；
類縁物質３と類縁物質４の合計量が０．１１％以下；
類縁物質５の量が０．２６％以下；
類縁物質７の量が０．３３％以下；
類縁物質８の量が０．２１〜１．００％から任意に選ばれる百分率以下；及び
類縁物質９の量が０．６８％以下
にある、［５２］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５５］ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する類縁物質量が少なくとも下記の関係：
類縁物質１’量が０．０４％以下；
類縁物質３’と類縁物質４’の合計量が０．１１％以下；
類縁物質５’の量が０．２６％以下；
類縁物質７’の量が０．３３％以下；
類縁物質８’の量が０．２１〜１．００％から任意に選ばれる百分率以下；及び
類縁物質９’の量が０．６８％以下
にある、［５３］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５６］類縁物質１の量、類縁物質２の量、類縁物質３と類縁物質４の合計量、類縁物質５の量、類縁物質６の量、類縁物質７の量、類縁物質８の量、類縁物質９の量、類縁物質１０及び類縁物質１１の合計量のいずれもがＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下である、［５２］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５７］類縁物質１’の量、類縁物質２’の量、類縁物質３’と類縁物質４’の合計量、類縁物質５’の量、類縁物質６’の量、類縁物質７’の量、類縁物質８’の量、類縁物質９’の量、類縁物質１０’及び類縁物質１１’の合計量のいずれもがＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下である、［５３］記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５８］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤が、栓を有するガラス容器に充填された製剤である、［５０］乃至［５７］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［５９］ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤がガラス製バイアル製剤である、［５０］乃至［５８］のいずれか１つに記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。

［６０］ＰＴＨペプチドがヒトＰＴＨ（１−３４）である［５０］乃至［５９］いずれか１つに記載のＰＴＨ含有凍結乾燥製剤。

本発明により高純度ＰＴＨ含有凍結乾燥製剤が提供される。すなわち、本発明においてＰＴＨ含有凍結乾燥製剤中で生成していることが確認され、キャラクタリゼーションされたＰＴＨ類縁物質の、医薬品製造時における好ましくない生成が防止・低減される。また、当該ＰＴＨ類縁物質を定量することで、簡便、迅速、且つ確実にＰＴＨ含有凍結乾燥製剤の品質を確認・検証しつつ、医薬品として適格な当該製剤を製造できる。

実施例及び比較例として製造したＰＴＨペプチド凍結乾燥製剤の原料として用いたＰＴＨペプチドを試料として高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、紫外部（２１４ｎｍ）吸収を測定した際のクロマトグラムを示す。横軸は時間（分）を、縦軸は吸収強度を表す。約２０〜２１分前後に現れた大きなピークはヒトＰＴＨ（１−３４）である。”６（丸囲い数字）”は類縁物質７（類縁物質７’）に、”７（丸囲い数字）”は類縁物質８（類縁物質８’）に対応する。実施例１として製造したＰＴＨペプチド凍結乾燥製剤を試料として高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、紫外部（２１４ｎｍ）吸収を測定した際のクロマトグラムを示す。横軸は時間（分）を、縦軸は吸収強度を表す。２１．１５７分（保持時間）に現れた大きなピークはヒトＰＴＨ（１−３４）である。”１（丸囲い数字）”は類縁物質１（類縁物質１’）に、”２（丸囲い数字）”は類縁物質２（類縁物質２’）に、”３（丸囲い数字）”は類縁物質３と類縁物質４’の混合物（類縁物質３’と類縁物質４’の混合物）に、”４（丸囲い数字）”は類縁物質５（類縁物質５’）に、”６（丸囲い数字）”は類縁物質７（類縁物質７’）に、”７（丸囲い数字）”は類縁物質８（類縁物質８’）に、”８（丸囲い数字）”は類縁物質９（類縁物質９’）に、”９（丸囲い数字）”は類縁物質１０と類縁物質１１の混合物（類縁物質１０’と混合物１１’の混合物）に対応する。比較例１として製造したＰＴＨペプチド凍結乾燥製剤を試料として高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、紫外部（２１４ｎｍ）吸収を測定した際のクロマトグラムを示す。横軸は時間（分）を、縦軸は吸収強度を表す。２０．２７９分（保持時間）に現れた大きなピークはヒトＰＴＨ（１−３４）である。”５（丸囲い数字）”は類縁物質６（類縁物質６’）に、その他の丸囲い数字の意味は図２と同じ。試験例２としてオゾンに暴露したＰＴＨペプチド凍結乾燥製剤を試料として高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付し、紫外部（２１４ｎｍ）吸収を測定した際のクロマトグラムを示す。横軸は時間（分）を、縦軸は吸収強度を表す。２２．６７０分（保持時間）に現れた大きなピークはヒトＰＴＨ（１−３４）である。丸囲い数字の意味は図２と同じ。メチオニン酸化体の構造を示す。トリプトファン変化体の構造を示す。類縁物質１の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質２の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質３と類縁物質４の混合物の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質５の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質６の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質７の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質８の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質９の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。類縁物質１０と１１の混合物の高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）の結果を示す。横軸は時間（分）を、縦軸は検出強度を表す。本発明の好適な凍結乾燥手段の一例を示す模式図である。本発明の好適な凍結乾燥手段の一例を示す模式図である。

本発明について、具体的に説明する。

（１）ＰＴＨペプチド
本発明において「ＰＴＨペプチド」の用語は、天然型のＰＴＨ及びその生理学的活性同等物の総称として用いる。ＰＴＨの生理学的活性は血清カルシウム上昇作用を有するものとして特徴付けられる。好適なＰＴＨペプチドは、天然型ＰＴＨまたはその部分ペプチド類を包含し、分子量約４，０００から１０，０００のペプチド類であってよい。ただしＰＴＨペプチドは、すべての構成アミノ酸残基が天然体と比較して化学修飾されていないものであり、後述する（２）ＰＴＨ類縁物質を含まないものである。部分ペプチドの具体例としては、３４〜８４個のアミノ酸配列を有するヒトＰＴＨ（１−３４）、ヒトＰＴＨ（１−３５）、ヒトＰＴＨ（１−３６）、ヒトＰＴＨ（１−３７）、ヒトＰＴＨ（１−３８）、ヒトＰＴＨ（１−８４）等があげられる。すなわち、ヒトＰＴＨ（１−３４）とは、天然型のヒトＰＴＨのアミノ酸番号１〜３４に対応する当該天然型配列の部分ペプチドである。好適には、ヒトＰＴＨ（１−３４）、ヒトＰＴＨ（１−８４）が好ましく、特に好ましくはヒトＰＴＨ（１−３４）である。ヒト−ＰＴＨ（１−３４）のアミノ酸配列は以下のとおりである：

また、本発明のＰＴＨペプチドは、１種又は２種以上の揮発性有機酸と形成した塩として存在してもよい。揮発性有機酸としては、トリフルオロ酢酸、蟻酸、酢酸などが例示され、好ましくは酢酸を挙げることができるが、それに限定されない。フリー体のＰＴＨペプチドと揮発性有機酸が塩を形成する際の両者の比率も、可能な塩を形成する限りにおいて特に限定されない。例えば、ヒト−ＰＴＨ（１−３４）は、その分子中に９分子の塩基性アミノ酸残基と４分子の酸性アミノ酸残基を有するため、それらの分子内における塩形成を考慮に入れると、塩基性アミノ酸５残基を酢酸の化学当量とすることができる。例えば、酢酸量に酢酸重量×１００（％）／ヒト−ＰＴＨ（１−３４）のペプチド重量、で表される酢酸含量を用いれば、一つの理論として、フリー体であるヒト−ＰＴＨ（１−３４）に対する酢酸の化学当量は約７．３％（重量％）となる。本願明細書において、フリー体であるヒト−ＰＴＨ（１−３４）は「テリパラチド」と称され、またテリパラチドの酢酸塩は「テリパラチド酢酸塩」と称されることもある。テリパラチド酢酸塩における酢酸含量は、テリパラチドと酢酸が塩を形成する限りにおいて特に限定されず、例えば、前記の理論化学等量である７．３％以上であってもよく、場合によっては０％を超えれば１％未満でも差し支えない。典型的には、テリパラチド酢酸塩における酢酸含量として、１〜７％、好ましくは２〜６％が例示され得る。

ただし、本発明のＰＴＨペプチドがフリー体であるかその塩であるかに関わらず、本発明の製剤中のＰＴＨペプチド量、各ＰＴＨ類縁物質量、ＰＴＨ類縁物質混合物量および全ＰＴＨ類縁物質はＨＰＬＣ試験で定量され得、そしてその場合のＰＴＨペプチドやＰＴＨ類縁物質は全てフリー体量として定量されることに留意すべきである。

（２）ＰＴＨ類縁物質
本発明にける「ＰＴＨ類縁物質」は、広義には、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤由来の試料をＨＰＬＣに付した際に、当該クロマトグラム上で有効成分であるＰＴＨペプチドとは異なるピークとして検出されるものとして定義される。従って、当該クロマトグラム上で元来のＰＴＨペプチドと異なる１つのピークとして検出されるならば、そのピーク内において２以上の別個の化学物質が混在している場合でも、当該ピークに含まれる全ての化学物質をまとめて１つの「ＰＴＨ類縁物質」と見做してよい。つまり、一般的な凍結乾燥製剤の純度確認や測定の目的においては、ＨＰＬＣのクロマトグラム上で単一ピークとして検出可能な複数の化学物質の混合物も包括的に「類縁物質」ということがあり、且つそのような混合物から成る単一ピークを便宜的に１つの「類縁物質」と見做して純度確認や純度計算等をすることが広く行われているから、本発明においても所与の条件下のＨＰＬＣにおいて単一ピークとして検出される複数の化学物質の混合物を包括的して１種の「ＰＴＨ類縁物質」と見做すことを妨げられない。

本発明において、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造中に生成することが見出されたＰＴＨ類縁物質は、以下の表１のようにキャラクタリゼーションされた。

上記の表１において、Ｔ１〜Ｔ３は、各類縁物質をトリプシン消化した際に生じる代表的なフラグメントであり、ヒトＰＴＨ（１−３４）配列のアミノ酸番号に基づき記載すると下記のとおりである。

また、表１において被変化アミノ酸の番号は、対応するヒトＰＴＨ（１−３４）配列のアミノ酸番号として表記されており、本明細書において特段の断りがない場合は同様の表記である。

更に、表１の推定構造において、ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］（類縁物質１’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がそれぞれメチオニンスルホキシド残基であり、２３位トリプトファンに対応する残基が以下の構造（ａ）で示される残基（Ｔｒｐ２３酸化（ａ）残基）であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。

また、ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化―ギ酸脱離］（類縁物質２’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がそれぞれメチオニンスルホキシド残基であり、２３位トリプトファンに対応する残基が以下の構造（ｂ）で示される残基（Ｔｒｐ２３酸化（ｂ）残基）であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。

同様に、ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］（類縁物質３’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がそれぞれメチオニンスルホキシド残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。また、ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］（類縁物質４’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基であり、２３位トリプトファンに対応する残基がＴｒｐ２３酸化（ａ）残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。なお、ＨＰＬＣ条件によっては、類縁物質３’と類縁物質４’が単一のピークとして検出され易く、その場合、前記のとおりに当該類縁物質３’と類縁物質４’の混合物としてＰＴＨ類縁物質を定義してもよい。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］（類縁物質５’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基であり、２３位トリプトファンに対応する残基がＴｒｐ２３酸化（ａ）残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化―ギ酸脱離］（類縁物質６’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基であり、２３位トリプトファンに対応する残基がＴｒｐ２３酸化（ｂ）残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］（類縁物質７’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一のＰＴＨ類縁物質を意味する。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ１８［Ｏ］（類縁物質８’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一のＰＴＨ類縁物質を意味する。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｔｒｐ２３［二酸化］（類縁物質９’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基がＴｒｐ２３酸化（ａ）残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｔｒｐ２３［一酸化］（類縁物質１０’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が以下の構造（ｃ）−１または（ｃ）−２で示される残基（Ｔｒｐ２３酸化（ｃ）残基）であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。

ヒトＰＴＨ（１−３４）−Ｔｒｐ２３［二酸化―ギ酸脱離］（類縁物質１１’）とは、ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基がＴｒｐ２３酸化（ｂ）残基であり、その他の構造は元のＰＴＨペプチドと同一であるＰＴＨ類縁物質を意味する。なお、ＨＰＬＣ条件によっては、類縁物質１０’と類縁物質１１’が単一のピークとして検出され易く、その場合、前記のとおりに当該類縁物質１０’と類縁物質１１’の混合物としてＰＴＨ類縁物質が定義できる。

上記の類縁物質１’乃至１１’では、いずれもメチオニンやトリプトファンが酸化して生じる変性アミノ酸残基が導入されるようにＰＴＨペプチドが変化している。従って、本発明のＰＴＨ類縁物質の生成が、酸化能を有する物質とＰＴＨペプチドとの接触により開始されると推論することは合理的と思われる。つまり、本明細書において「酸化能を有する物質」とは、ＰＴＨペプチドの構成アミノ酸、特にメチオニンやトリプトファンを酸化する能力を有する物質を意味する。殊に、前記のとおり医薬品製造施設内の空気にはオゾンやホルムアルデヒドなどの酸化性気体分子が存在する場合があることに鑑みて、本明細書における「酸化能を有する物質」としては、そのような医薬品製造施設内空気に含有されることのある、メチオニンやトリプトファンを酸化し得る物質が興味深い。

なお、上記から明らかなように、有効成分として含有されるＰＴＨペプチドがヒトＰＴＨ（１−３４）以外の場合でも、上記のようなＰＴＨ類縁物質の定義が適用できる。例えば、ヒトＰＴＨ（１−８４）を有効成分として用いた場合、対応する類縁物質１’もヒトＰＴＨ（１−８４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］と表記され得、その場合、ヒトＰＴＨ（１−８４）の８位および１８位メチオニン残基がそれぞれメチオニンスルホキシド残基であり、２３位トリプトファン残基がＴｒｐ２３酸化（ａ）残基であり、その他の構造はヒトＰＴＨ（１−８４）と同一であるＰＴＨ類縁物質が指定できる。

（３）ＰＴＨ類縁物質の検出と定量
ＰＴＨ含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨ類縁物質は、当該製剤を適当な溶媒（塩化ベンザルコニウムを含む燐酸緩衝液など）に溶液して試料を作製し、当該試料を、例えば下記の条件下のＨＰＬＣに付すことにより、検出または定量できる。

＜ＨＰＬＣの条件＞
ａ）検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１４ｎｍ）
ｂ）カラム：内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレス管に３．５μｍの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＺｏｒｂａｘ３００ＳＢ−Ｃ１８、又は同等品）
ｃ）カラム温度：４０℃付近の一定温度
ｄ）移動相：
移動相Ａ：無水硫酸ナトリウム２８．４ｇを水９００ｍＬに溶かし、リン酸を加えてｐＨ２．３に調整した後、水を加えて１０００ｍＬとする。この液９００ｍＬにアセトニトリル１００ｍＬを加える。

移動相Ｂ：無水硫酸ナトリウム２８．４ｇを水９００ｍＬに溶かし、リン酸を加えてｐＨ２．３に調整した後、水を加えて１０００ｍＬとする。この液５００ｍＬにアセトニトリル５００ｍＬを加える。

ｅ）移動相の送液：移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比を表２のように変えて濃度勾配制御する。

ｆ）流量：毎分１．０ｍＬ
ｇ）検出時間：試料溶液注入後４５分間。ただし溶媒ピークの後ろからとする。

本発明のＰＴＨペプチド及びＰＴＨ類縁物質は紫外部領域において実質的な吸光度を有するので、その検出及び定量には紫外部吸収をモニターすることが有利である。測定波長は、ＰＴＨペプチド及びＰＴＨ類縁物質の検出が可能であれば特に限定されないが、例えば２１０〜３６０ｎｍ、好ましくは２１０〜２８０ｎｍ、より好ましくは２１０〜２５４ｎｍの範囲の１以上の波長を選択すればよい。好適な波長の一例は２１４ｎｍである。当該紫外吸収の測定値に基づいてクロマトグラムを作成することが可能である。

上記のＨＰＬＣを実施して得られるクロマトグラムに基づく各ＰＴＨの類縁物質量及びＰＴＨペプチド量は、当該クロマトグラム上の各々のピーク面積を（例えば、自動積分法により）算出することで求めることができる。そして、当該算出値に基づいて、下記の式１および２により、それぞれ、各ＰＴＨ類縁物質量（％）及び全ＰＴＨ類縁物質量（％）を定量及び比較できる。なお、式中の「総ピーク面積」とは、上記クロマトグラム上のＰＴＨペプチドのピーク面積とそれ以外に検出された全てのＰＴＨ類縁物質のピーク面積を足すことで求められる値である。従って、当該「総ピーク面積」は、「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に相当する。また、本発明において特に断りのない場合、「％」は下記式の意味を有する。

＜式１＞
各ＰＴＨ類縁物質量（％）＝（各類縁物質のピーク面積／総ピーク面積）×１００
＜式２＞
全ＰＴＨ類縁物質量（％）＝（各類縁物質のピーク面積の総和／総ピーク面積）×１００
なお、上記の条件下でＨＰＬＣを実施した場合に、前記のとおりヒト−ＰＴＨ（１−３４）から生成する類縁物質３と４（類縁物質３'と４’）は単一のピークとして溶出されてくるが、その場合には当該単一ピークを１つの類縁物質と見做しても製剤の純度確認乃至測定の用に供する際には結果に影響を与えないから、当該類縁物質３と４（類縁物質３'と４’）の混合ピークを１つの類縁物質と見做してもよい。類縁物質１０と１１（類縁物質１０'と１１’）についても同様である。

下記の表３に、ヒトＰＴＨ（１−３４）を含有する凍結乾燥製剤に由来する試料に対し上記の条件下でＨＰＬＣを実施した場合の典型的な測定例を示す。なお、表中で「おおよその相対保持時間」と表記したのは、相対保持時間も使用するカラムや移動相流量により変化する場合があるからであるが、その場合でも、当該相対保持時間を目安としつつクロマトグラムのパターンに基づいて各類縁物質を同定、定量できる。

（４）ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤
本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤とはＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤を意味する。

本発明のＰＴＨ含有凍結乾燥製剤の一態様は、当該製剤中のあるＰＴＨ類縁物質量が「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して１．０％以下であり、及び／又は当該製剤中の全ＰＴＨ類縁物質量も「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して５．０％以下であるＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤、である。

また、本発明のＰＴＨ含有凍結乾燥製剤の別の態様は、当該製剤中のそれぞれのＰＴＨ類縁物質量がいずれも「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して１．０％以下であり、及び／又は当該製剤中の全ＰＴＨ類縁物質量も「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して５．０％以下であるＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤である。なお、「１．０％以下」及び「５．０％以下」という時には、ＰＴＨ類縁物質が本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中に全く含まれない場合も、あるいは当該％以下で含まれる場合もあることを意味する。

好ましくは、本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中において、少なくとも１以上のＰＴＨ類縁物質が「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して１．０％を超えて含まれず、より好ましくは全てのＰＴＨ類縁物質が「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して１．０％を超えて含まれない。また、前記のとおり、２以上の類縁物質がクロマトグラム上で単一のピークを与えた場合に、当該単一ピークを１つの類縁物質と見做し、その見做し類縁物質が「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」に対して１．０％を超えて含まれないことが更に好ましい。また、当該製剤中のそれぞれのＰＴＨ類縁物質量が好ましくは「１．０％以下」であるが、０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下であっても好ましい。さらに、全ＰＴＨ類縁物質量が好ましくは「５．０％以下」であるが、４．５％以下、４．０％以下、３．５％以下、３．０％以下であっても好ましい。

また、下記の表４としても本発明の好適なＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を例示できる。（なお、表中の「ＰＴＨ類総量」は、「ＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和」を意味する。）

本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤について更に説明すると、本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤は各種添加剤を含有することができる。添加剤として例えば、糖類、アミノ酸、又は塩化ナトリウム等を挙げることができる。添加剤として糖類を用いる場合には、糖類として、マンニトール、グルコース、ソルビトール、イノシトール、シュークロース、マルトース、ラクトース、トレハロースをＰＴＨペプチド１重量に対して１重量以上（好ましくは５０〜１０００重量）添加することが好ましい。添加剤として糖類及び塩化ナトリウムを用いる場合には、糖類１重量に対して１／１０００〜１／５重量（好ましくは１／１００〜１／１０重量）の塩化ナトリウムを添加することが好ましい。

（５）ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の容器
本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤に用いる容器は特に限定されないが、当該製剤は栓を有するガラス容器に充填されたＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤であることが好ましい。栓の材質は特に限定されないがゴム製が好ましい。栓が洗浄、滅菌、および／または乾燥されていることが好ましい。

本発明の栓を有するガラス容器に充填されたＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤とは、例えば、ゴム栓を有するガラス製バイアルに充填されたＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤（ガラス製バイアル製剤）、ゴム栓を有するガラス製バイアルに充填されたＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤と溶解用水溶液が無菌充填されたアンプルからなるキット製剤、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤と溶解用水溶液が無菌充填されたプレフィルドシリンジからなるキット製剤、ガラス製ダブルチャンバー製剤（１本のシリンジに２室が存在し、１室にＰＴＨ含有凍結乾燥品、他室に溶解用水溶液が含まれる）である。本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤としてはガラス製バイアル製剤が最も好ましい。ゴム栓の素材としては塩素化ブチルゴム、ノーマルブチルゴム、ブタジエンゴム、イソプレンゴム、シリコーンゴム、エラストマー等が挙げられる。ガラスとしては硼珪酸ガラスが好ましい。

（６）ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造
凍結乾燥製剤は、その用途により、典型的には以下の工程の全て又はいずれかを含む過程により製造される。特に注記されない限り、本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤も以下の工程に準じて製造できる。すなわち、本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造スキームは、少なくとも以下で説明する有効成分含有溶液調製工程と凍結乾燥工程を含み、通常は有効成分含有溶液調製工程、搬入工程、および凍結乾燥工程を含み、好ましくは有効成分含有溶液調製工程、無菌ろ過・薬液充填工程、搬入工程、凍結乾燥工程、および包装工程を含む。

１）有効成分溶液調製工程
本工程は有効成分の原薬と必要により各種添加剤を溶媒（例：注射用水）に溶解させる工程である。また必要に応じて溶解液のｐＨ調整や溶解液の液量調整等を行ってもよい。当該工程の所要時間は、工業生産的に許容される時間内であれば特に限定されないが、場合により０．５〜５時間、通常は１〜３時間程度である。

本発明のＰＴＨペプチドを有効成分とする場合は、ＰＴＨペプチドの原薬を予備溶解しておき、それを各種添加剤を溶解させた溶媒に加えることが好ましい。各種添加剤として、賦形剤、安定化剤、溶解補助剤、酸化防止剤、無痛化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、防腐剤を例示できる。

２）無菌ろ過・薬液充填工程
本工程は、上記の工程で調製した有効成分含有溶を無菌ろ過すること、及び当該無菌ろ過した液（薬液）を以下で説明する凍結乾燥工程の実施に適した容器に充填することを含む。

典型的な本工程における無菌ろ過はフィルターを用いて行われる。無菌ろ過用のフィルターは各種市販品が利用可能である。フィルターの孔径は０．２μｍ以下又は０．２２μｍ以下が好ましい。また無菌ろ過を実施する具体的な装置等も当業者に周知である。このようにして無菌ろ過することで、医薬品として利用される凍結乾燥製剤を製造するための薬液を調製することができる。

典型的な本工程における薬液充填もまた当業者に周知である。通常は、有効成分の溶解液を無菌ろ過した後の薬液が、直接、個々の容器に充填される。或いは、一旦、多量の溶解液を一挙に無菌ろ過しておき、そこから以下の工程で使用するのに適した容器に分注してもよい。それらの容器としては、ゴム栓等で打栓することが可能なガラス製バイアルを例示することができる。そのようなガラス製バイアルを使用すると、ガラス製バイアル入り製剤の製造において好都合である。

本工程の所要時間も、工業生産的に許容される時間内であれば特に限定されないが、場合により、ろ過工程として０．５〜２時間、通常は０．５〜１時間、
充填工程として３〜１０時間、通常は６〜１０時間である。

なお、本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤をガラス製バイアル入り製剤とする場合、１つのガラス製バイアルに対して、例えば、ＰＴＨペプチドを含有した無菌ろ過後の溶液を１ｇ（好ましくは０．３ｇ〜３ｇ、さらに好ましくは０．５ｇ〜０．６ｇ）程度充填することができる。

３）搬入工程
ここでいう搬入工程は、前記のようにして用意された充填後の容器を、次の工程で利用する凍結乾燥手段まで運搬（搬送）し、当該手段内に搬入・配置する一連の工程を意味する。

更に、凍結乾燥製剤の製造においては、以後の工程で凍結させた充填液を真空により乾燥させるため、当該充填容器の栓を開栓又は半開栓しておくことが通常である。つまり、開栓とは栓が全開していることを意味し、半開栓とは栓が開栓してはいないものの閉栓もしていない状態を意味するが、そのようにしておくことで容器中の薬液を凍結後に真空で乾燥させることができるのである。例えば、製造されるものがガラス製バイアル入り製剤の場合、ガラス製バイアルに無菌ろ過液（薬液）を充填した後、ゴム栓で充填済みバイアルを半打栓することで前記のような半開栓状態にできる。しかして、本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤をガラス製バイアル入り製剤等として製造する場合は、そのようにして半打栓するための工程も、本搬入工程に含める。

凍結乾燥手段は、凍結した溶液を真空下で乾燥可能な手段である。工業生産のための当該手段は、溶液を凍結するのに十分な冷却機能も備えていることが好ましく、また凍結乾燥を促進するために当該処理中に被凍結乾燥物を適度に加温する機能を備えていることが好ましい。また、工業生産に適した典型的な凍結乾燥手段は、被凍結乾燥物を庫内へ搬入するための、当該手段の前面のほぼ全体に対応する大きな扉（以下、「大扉」とも言う。）を有する。典型的な凍結乾燥手段は凍結乾燥庫（「凍結乾燥機」とも呼ばれる。）であり、多くの形態のものが市販されている。

本工程を例示的に説明すると、例えば製造しようとする製剤がガラス製バイアル入り製剤の場合、前記「２）」の工程で得られた薬液充填ガラス製バイアルを半打栓し、それを凍結乾燥手段まで搬送し、当該バイアルの各々を順次、或いはある数量単位で纏めていっぺんに凍結乾燥庫に搬入し、配置する過程が本工程に対応する。なお、ここでバイアルの各々を「順次搬入する」場合について注記すると、医薬品製造工場のレイアウトによっては、上記の薬液充填工程により各々のバイアルに薬液が次々と連続的に充填され、その後各バイアルは順次半打栓されて凍結乾燥手段まで運搬（搬送）されることがある。しかしながら、通常は、当該凍結乾燥手段が一回で処理できる数量のバイアル全てが凍結乾燥手段内に搬入されるのを待ってから次の凍結乾燥工程に移行するから、前記のようにして搬送されてきた各バイアルは当該一回で処理できる数量に達するまで凍結乾燥手段内に次々と入れられていき（つまり「順次搬入」され）、そして該手段内に配置されることが多い。しかして、そのように「順次搬入」する場合における本発明の「搬入工程」とは、ある（先頭の）バイアルについて薬液充填工程が完了した後から開始し、そしてその（先頭の）バイアルと一緒に（つまり、一回で）凍結乾燥される最後のバイアルが凍結乾燥手段内に搬入・配置されるまでの工程を意味する。

また、バイアルを「ある数量単位で纏めていっぺんに」搬入するとは、例えば、凍結乾燥庫内への配置に際しては、凍結乾燥庫内が複数の棚を有しており、各棚に複数の薬液充填バイアルを纏めて置くことが可能なことがあり、また、場合により当該棚は薬液充填バイアルの搬入の便宜のために上下動せることができるものもあるが、その場合にも、やはり本発明の「搬入工程」とは、ある（先頭の）バイアルについて薬液充填工程が完了した後から開始し、そしてその（先頭の）バイアルと一緒に凍結乾燥される最後のバイアルが凍結乾燥手段内に搬入・配置されるまでの工程を意味する。いずれにしても、この工程では、薬液充填バイアルが半打栓の状態で後の凍結乾燥工程の開始前までの間放置され、そして以下で説明する医薬品製造施設内空気環境に暴露され得るということである。

本工程の所要時間も、工業生産的に許容される時間内であれば特に限定されないが、場合により３〜１０時間、通常は６〜１０時間程度である。

４）凍結乾燥工程
前記の凍結乾燥手段により、凍結状態の被乾燥物から、減圧下で水を昇華させる工程である。ガラス製バイアル入りの凍結乾燥製剤を製造する場合、減圧中は当該バイアルを開栓又は半開栓状態にして（例えば、バイアルを半打栓しておき）、凍結乾燥の終了時にバイアル空隙を窒素置換した後に封栓することができる。

本工程の所要時間は、凍結乾燥手段の能力や被凍結乾燥物の量などにより変わるが、工業生産的に許容される時間内でればよく、通常は２４〜７２時間程度である。

５）巻き締め工程
ガラス製バイアル入りの凍結乾燥製剤を製造する場合に含めることができる工程である。具体的には、例えば、前記「４）」の工程で得られた凍結乾燥処理後のガラス製バイアルをプレス方式のキャップ巻き締め機等でアルミキャップにて巻き締めする工程である。

６）包装工程
製剤に対してラベルを添付して紙箱等に包装する工程である。

凍結乾燥製剤を医薬品として製造する場合、該製造施設は医薬品ＧＭＰに適合する施設であることが要求されるであろう。当該施設は、上記で説明した工程を実施するための、薬液調製設備、無菌ろ過設備及び凍結乾燥設備（手段）や、それらに加えて注射用水製造設備、バイアル充填・打栓設備、キャップ巻締機、ラベラーなどを有し得る。

また、凍結乾燥製剤を医薬品として製造する場合、上記の工程１）〜６）の全て、或いは少なくとも無菌ろ過工程の終了〜凍結乾燥工程の開始に至るまでの間は、医薬品製造施設内空気環境下で行われるべきである。つまり、医薬品製造施設の空気環境は、単なる外気環境とは異なる。具体的に、無菌注射剤の（医薬品）製造施設内空気環境には、「清浄度の高い重要区域（作業時及び非作業時ともに、空気１ｍ^３あたりに含まれる粒径０．５μｍ以上の浮遊微粒子が３，５２０個以下であること）」であることが要求される。この空気の品質は、汎用されている現行の国内及び国際的な空気の品質に関する基準によるグレードＡ（クラス１００又はＩＳＯ５と称されている。）に相当する。

本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を製造する施設内の空気環境も、少なくとも上記の無菌注射剤製造施設内の空気環境と同等であるか、より好ましくは粒径０．３μｍの粒子を９９．９７％以上の効率で捕らえる性能を有するＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されている環境とすべきである。気流の風速としてはＨＥＰＡフィルター直下２０ｃｍの位置で０．２〜１．０ｍ／ｓ、製造の作業をする位置で０．１〜０．８ｍ／ｓの流速があることが好ましく、ＨＥＰＡフィルター直下２０ｃｍの位置で０．４〜０．７ｍ／ｓ、製造の作業をする位置で０．３〜０．５ｍ／ｓの流速があることがさらに好ましい。

更に、医薬品製造施設内においていっそう無菌的な空気環境を実現するために、通常は、殺菌剤としてオゾンやホルムアルデヒド、或いは過酸化水素、過酢酸、二酸化塩素、グルタルアルデヒドなどの酸化能を有する化学物質を用いて空気中に浮遊する菌や、機械・壁・床等の設備に付着した菌を滅菌することが行われる。但し、ホルムアルデヒドにより燻蒸滅菌した後の残留ホルムアルデヒド濃度は、通常０．１ｐｐｍ以下、好ましくは０．０８ｐｐｍ以下に管理すべきである。なお、オゾンについて言えば、外気中にも通常、一日の平均値として０．００１〜０．０２ｐｐｍの濃度で存在している。また、場所や時間、季節によっては一時的に約０．０２〜０．１ｐｐｍの濃度で存在する場合もある。

本発明の一態様としてのＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造方法は、上記した医薬品製造施設内の空気環境下において、ＰＴＨペプチド（有効成分）含有溶液調製工程開始時、特に薬液充填工程の終了時から該溶液の凍結乾燥工程開始迄（つまり、搬入工程）に実質的な時間経過が要求される場合には、該経過過程においてＰＴＨペプチド含有溶液が医薬品製造施設内空気環境に暴露されるのを抑制することで特徴付けられる。

本発明において「医薬品製造施設内空気環境に暴露されるのを抑制」や「医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制」とは、ＰＴＨペプチド原薬、ＰＴＨペプチド含有溶液、ＰＴＨペプチド凍結乾燥製剤の少なくとも１以上を医薬品製造施設内空気環境に全く接触させないことのほか、その接触を実質的に（例えば、時間や接触量を）制限することを意味する。例えば、前記のＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持（以下、「流動空気」という。）されている環境下の場合、当該流動空気と接触する時間や接触する気流量を抑制する手段を講じることを含む。具体的には以下のものを例示できる。

（Ａ）ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段
上記のとおり、本発明者らは、ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段を講じることにより、ＰＴＨペプチド含有溶液中における不純物（ＰＴＨ類縁物質）の発生も抑制できることを見出した。前記のとおり通常の医薬品製造施設では該施設内空気の気流が維持されているために、該気流として降り注ぐことのある大量の空気がＰＴＨペプチド含有溶液と接触し、そして該気流内に含まれる酸化能を有する気体性物質（オゾン等）が該溶液中のＰＴＨペプチドと反応するなどの原因により溶液中のＰＴＨ類縁物質が増大していると推論できる。

しかるに、本発明におけるＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段は特に限定されず、例えば、ＰＴＨペプチド含有溶液周辺の空気の流動性や流動量を抑制する手段やＰＴＨペプチド含有溶液周辺を不活性化ガスで置換する手段を例示することができる。

また、ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段を凍結乾燥庫への搬入工程において講じるのが有利であることも見出された。

上記の態様を非限定的具体例に基づき説明すると、通常の凍結乾燥庫は、凍結乾燥すべき溶液を充填した容器を搬入するための扉を前面に有しており、該扉が凍結乾燥庫の前面を全て覆うことができる扉（大扉）であることが多いが、本発明の場合は該大扉の一部分において、凍結乾燥庫内に配置された棚の一段（その上に被凍結乾燥物充填容器が載せられる）にほぼ対応する大きさの小扉を更に備えていて、該容器を搬出入する際には容易に小扉が開閉可能な凍結乾燥庫が好ましい。

更に好適には、前記小扉を有する凍結乾燥庫が、被凍結乾燥物充填容器を凍結乾燥庫内に搬出入する際において開く小扉部分に生じる、当該搬入のための開口部（以下、「小扉開口部」ともいう。）に備えられた容易に開閉可能な副扉を有しており、該副扉を常時開放せずに該容器搬入時のみ開けて搬入後に速やかに閉める手段を例示できる。また、該副扉は、小扉開口部に相当する領域のうちで、前記搬入のために必要な部分だけ開けられるように２枚〜５枚に分割されて備えられており、該容器の搬入時に必要な箇所のみ開けることができる該副扉が好ましく、２枚〜３枚に分割されていることが好ましい。容易に開閉可能な副扉の例としては、蝶番（ちょうつがい）を副扉の上部に設けて小扉開口部に備え付けた副扉や、左右にスライドする副扉、上下にスライドする副扉などが挙げられる。

さらに、ＰＴＨペプチド含有溶液等が流動空気と接触することを抑制する手段として、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程において、ＰＴＨペプチドを溶媒に溶解させた後に、その調製用設備（タンクあるいは容器等）を閉封すること、あるいは、その調製時にその調製用器内を不活性ガスに置換しておくことを好ましく例示することができる。

あるいは、ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段として、無菌ろ過・薬液充填工程において、調製したＰＴＨペプチド含有溶液をろ過滅菌する際に調製設備（タンクあるいは容器等）内を加圧し無菌フィルターを通過させて充填用の容器やタンクに液送する場合があるが、そのような場合に加圧用の気体を不活性ガスにすることを好ましく例示することができる。

さらに、ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段として、無菌ろ過・薬液充填工程において、薬液充填設備（タンクあるいは容器等）内の空気をあらかじめ不活性ガスに置換しておくことや、ＰＴＨペプチド含有溶液を充填するガラス製容器をあらかじめ不活性ガスに置換しておくことを好ましく例示することができる。

あるいは、ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段として、無菌ろ過・薬液充填工程において、ＰＴＨペプチド含有溶液を充填したガラス製容器内の空隙部（薬液でない空気の部分）を不活性ガスで置換することを好ましく例示することができる。

さらに、無菌ろ過・薬液充填工程の終了後に、開栓又は半開栓のガラス容器に充填されたＰＴＨペプチド含有溶液を凍結乾燥手段に搬入するまでの間、無菌ろ過・薬液充填施設から凍結乾燥庫付近までＰＴＨペプチド含有溶液を充填したガラス製容器を運搬する場合があるが、このような場合にその運搬中の環境を不活性ガスの気流下にすることなどもＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段として好ましく例示することができる。

あるいは、ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段として、凍結乾燥庫の小扉開口部から凍結乾燥庫内に流動空気が流入することを抑制するために、該開口部から庫内に向かう流動空気の流れを変えるフラップや整風カバー（図１７）を設置することができる。当該フラップや整風カバーの形状は凍結乾燥機および小扉開口部のサイズによって適宜に選択することができ、また、その材質はビニル製シートや金属、樹脂製等であってよい。なお、凍結乾燥庫の小扉開口部から凍結乾燥庫内に流動空気が流入することを抑制するとは、ＰＴＨペプチド含有溶液と流動空気との接触が実質的に抑制される程度に当該流動空気の流入を制御することを意味し、好ましくは小扉開口部からの該流動空気の流入速度が０．２ｍ／ｓ以下、更に好ましくは０．１ｍ／ｓ以下が、特に好ましくは０．０ｍ／ｓ以下となるように制御され得る。当該制御は、好適には、フラップや整風カバー等を前記小扉付近に適宜配置することで行い得る。

ＰＴＨペプチド含有溶液周辺を不活性化ガスで置換する手段は、前述の不活性化ガスによる置換手段の他、凍結乾燥工程で用いられる凍結乾燥庫内の空気を不活性化ガスで置換する手段であることができ、あるいは、凍結乾燥工程で用いられる凍結乾燥庫内にＰＴＨペプチド含有溶液容器を搬入する際に搬入口から不活性化ガスを凍結乾燥庫内に流入させる手段であってもよい。流入する際の不活性ガスの流量は、０．１〜５Ｎｍ^３／ｍｉｎが好ましく、０．２〜３Ｎｍ^３／ｍｉｎが更に好ましく、０．３〜１Ｎｍ^３／ｍｉｎが特に好ましい。前記不活性化ガスで置換する際の不活性化ガスとして窒素やアルゴンを例示でき、好ましくは窒素を例示することできる。

（Ｂ）ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段を講じる工程
上記（Ａ）の「ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段」は、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程開始時から該溶液の凍結乾燥工程開始迄に含まれる工程全てあるいはその一部において講じることができ、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程開始時から講じていてもよい。本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の医薬品としての製造方法が、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程、凍結乾燥庫への開栓又は半開栓のガラス容器に充填された該溶液の搬入工程、および凍結乾燥工程を含む場合、上記（Ａ）の手段は、凍結乾燥庫への開栓又は半開栓のガラス容器に充填された該溶液の搬入工程の一部又は全部で講じることができる。

（Ｃ）ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段を講じる工程の時間
上記（Ａ）の「ＰＴＨペプチド含有溶液が流動空気と接触することを抑制する手段」を講じる工程の時間として、下限として、１時間以上、好ましくは３時間以上、さらに好ましくは６時間以上を例示することができ、上限として、２０時間以下、好ましくは１２時間以下、さらに好ましくは１０時間以下、最も好ましくは９時間以下である。上記（Ａ）の手段を講じる工程の時間として、例えば、１〜２０時間、好ましくは３〜１２時間、さらに好ましくは６〜１０時間、最も好ましくは６〜９時間を挙げることができる。

（７）ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の使用
本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤は、医薬的有効量のＰＴＨペプチドを含有することができ、例えば、用時に適当な溶媒で当該凍結乾燥製剤を溶解して注射剤とし、骨粗鬆症治療に用いることができる。

（８）ＰＴＨペプチド含有溶液におけるＰＴＨ類縁物質の生成を抑制する方法
本発明のＰＴＨ類縁物質の生成を抑制する方法は、ＰＴＨペプチド原薬、ＰＴＨペプチド含有溶液、ＰＴＨペプチド凍結乾燥製剤の少なくとも１以上と酸化能を有する物質、特に当該物質を含有する空気の接触を抑制する手段を講じる方法である。好ましくは、ＰＴＨペプチド含有溶液と接する空気を不活性化ガス（好ましくは窒素）に置換することを手段とする、ＰＴＨ類縁物質の生成を抑制する方法を例示できる。さらに好ましくは、ＰＴＨペプチド含有溶液と流動空気の接触を抑制する手段またはＰＴＨペプチド含有溶液と接する空気を不活性化ガス（好ましくは窒素）に置換する手段による、少なくとも前記類縁物質１乃至１１又は類縁物質１’乃至１１’のいずれか１以上のＰＴＨ類縁物質の生成を抑制する方法を例示することができる。

これらの生成抑制方法は、上述のような医薬品製造施設内空気環境下の凍結乾燥製剤製造施設において実施することができる。例えば、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程開始時から該溶液の凍結乾燥工程開始迄の経過時間が所定時間以上であり、該経過過程において該溶液を流動空気と接触することを抑制する手段により、該溶液におけるこれらの生成を抑制可能である。本手段についての好ましい態様は、対応する本発明のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造方法の好ましい具体的態様と同一である。

以下、実施例、参考例、及び試験例により本発明をさらに具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。

［実施例１］
５０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約１８ｋｇを入れ、そこに秤量した精製白糖５４０ｇおよび塩化ナトリウム２７ｇを加えて溶解し、次いでヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として３５４１ｍｇ（ロットＡ；８６０ｍｇ、ロットＢ；２５９１ｍｇ、ロットＣ；９０ｍｇ）加えて溶解し、その後、注射用水を加え２７ｋｇに重量補正をしてＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を窒素加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、あらかじめ窒素を満たしたステンレス製の５０Ｌ充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有する区域にて、当該無菌ろ過済みＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得て、その約１０００本ずつをステンレス製のトレイに整列させ、整列後のトレイをグレードＡの区域で、あらかじめ窒素で満たしたＵＬＶＡＣ製（型：ＤＦＢ棚面積：２４ｍ^２）凍結乾燥庫の前まで移送した。窒素で凍結乾燥庫内をパージし続けながら、前記凍結乾燥庫の小扉が開いた際の開口部に設けた、トレイの幅に合わせた副扉（図１６の副扉に準ずるものを市販の前記凍結乾燥庫に自作で取り付けた。）を開き、トレイを凍結乾燥庫に搬入した後、速やかに副扉を閉めた。同様の工程を繰り返して半開栓バイアルを約９時間かけて凍結乾燥庫内に搬入した。ＰＴＨ含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後ガラスバイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を得た。

［実施例２］
２０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約１０ｋｇを入れ、そこに秤量した精製白糖２８０ｇおよび塩化ナトリウム１４ｇを加えて溶解し、次に注射用水を加えて１４ｋｇに重量補正をして添加剤溶液を調製した。ヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として１７８０ｍｇ（ロットＤ）量り、前記の添加剤溶液１３ｋｇに溶解してＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を窒素で加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、あらかじめ窒素を満たした５０Ｌの充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有する区域にて、該ＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したガラスバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得て、その約１０００本ずつをステンレス製のトレイに整列させ、整列後のトレイをグレードＡの区域で、あらかじめ窒素で満たしたＵＬＶＡＣ製（型：ＤＦＢ棚面積：２４ｍ^２）凍結乾燥庫の前まで移送した。窒素で凍結乾燥庫内をパージし続けながら、前記凍結乾燥庫の小扉が開いた際の開口部に設けた、トレイの幅に合わせた副扉（図１６の副扉に準ずるものを市販の前記凍結乾燥庫に自作で取り付けた。）を開き、トレイを凍結乾燥庫に搬入した後、速やかに副扉を閉めた。同様の工程を繰り返して、半開栓バイアルを約６時間かけて凍結乾燥庫内に搬入した。ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後ガラスバイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を得た。

［実施例３］
３０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約１９ｋｇを入れ、そこに秤量した精製白糖４６０ｇおよび塩化ナトリウム２３ｇを加えて溶解し、次いで注射用水を加え２３ｋｇに重量補正をしてプラセボ溶液を調製した。ヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として２９７９ｍｇ（ロットＤ）量り、前記のプラセボ溶液２２ｋｇに溶解してＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を、窒素で加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、あらかじめ窒素を満たしたステンレス製の充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有する区域にて、該ＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得た。半開栓バイアルをグレードＡの区域を移送し、あらかじめ窒素で満たした凍結乾燥庫（ＵＬＶＡＣ製（型：ＤＦＢ棚面積：２２ｍ^２））であり、且つ該凍結乾燥庫の小扉の開口部とは逆の方向に流動空気の流れを変えるビニル製シート（図１７の整風カバーに準ずるものを市販の凍結乾燥庫に自作で取り付けた。）を用いて小扉の開口部から凍結乾燥庫内に気流が入らないようにした凍結乾燥庫内に、全てのバイアルを約６時間かけて搬入した。なお、当該流動空気の流れを変えるビニル製シートも、市販の前記凍結乾燥庫に自作で取り付けたものであり、小扉の開口部の上部から斜め下方に向けてビニルシートを張り、上から下に向けて流れる流動空気の方向を変えて開口部から流入することを防いだ。ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後バイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨ含有凍結乾燥製剤を得た。

［実施例４］
５０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約１８ｋｇを入れ、そこに秤量した精製白糖５４０ｇおよび塩化ナトリウム２７ｇを加えて溶解し、次いでヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として３５２５ｍｇ（ロットＣ；１８８０ｍｇ、ロットＥ；１６４５ｍｇ）加えて溶解し、その後、注射用水を加え２７ｋｇに重量補正をしてＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を、窒素で加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、あらかじめ窒素を満たしたステンレス製の５０Ｌ充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有し、ホルマリンの濃度を０．０８ｐｐｍ以下とした区域にて、該ＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得て、その約１０００本ずつをステンレス製のトレイに整列させ、整列後のトレイをグレードＡの区域であらかじめ窒素で満たしたＵＬＶＡＣ製（型：ＤＦＢ棚面積：２４ｍ^２）凍結乾燥庫の前まで移送した。窒素で凍結乾燥庫内をパージし続けながら、前記凍結乾燥庫の小扉が開いた際の開口部に設けた、トレイの幅に合わせた副扉（図１６の副扉に準ずるものを市販の前記凍結乾燥庫に自作で取り付けた。）を開き、トレイを凍結乾燥庫に搬入した後、速やかに副扉を閉めた。同様の工程を繰り返して、半開栓バイアルを約８時間かけて凍結乾燥庫内に搬入した。ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後ガラスバイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨ含有凍結乾燥製剤を得た。

［実施例５］
５０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約１８ｋｇを入れ、そこに秤量した精製白糖５４０ｇおよび塩化ナトリウム２７ｇを加えて溶解し、次いでヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として３５６６ｍｇ（ロットＨ）加えて溶解し、その後、注射用水を加え２７ｋｇに重量補正をしてＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を、窒素で加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、あらかじめ窒素を満たしたステンレス製の５０Ｌ充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有し、ホルマリンの濃度を０．０８ｐｐｍ以下とした区域にて、該ＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得て、その約１０００本ずつをステンレス製のトレイに整列させ、整列後のトレイをグレードＡの区域であらかじめ窒素で満たしたＵＬＶＡＣ製（型：ＤＦＢ棚面積：２４ｍ^２）凍結乾燥庫の前まで移送した。窒素で凍結乾燥庫内をパージし続けながら、前記凍結乾燥庫の小扉が開いた際の開口部に設けた、トレイの幅に合わせた副扉（図１６の副扉に準ずるものを市販の前記凍結乾燥庫に自作で取り付けた。）を開き、トレイを凍結乾燥庫に搬入した後、速やかに副扉を閉めた。同様の工程を繰り返して、半開栓バイアルを約７時間かけて凍結乾燥庫内に搬入した。ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後ガラスバイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨ含有凍結乾燥製剤を得た。

［比較例１］
１０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約５０００ｇを入れ、そこに秤量した精製白糖１２０ｇおよび塩化ナトリウム６ｇを加えて溶解し、次いでヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として９０９ｍｇ（ロットＦ；３３５ｍｇ、ロットＧ；５７４ｍｇ）加えて溶解し、その後、注射用水を加え６０００ｇに重量補正をしてＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を窒素で加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、ステンレス製の充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有する区域にて、該ＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得た。半開栓バイアルをグレードＡの区域を移送し、小扉を有する凍結乾燥機（ＵＬＶＡＣ製（型：ＤＦＢ棚面積：２２ｍ^２））に全体で約４時間かけて順次搬入した。ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後バイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を得た。

［比較例２］
１０Ｌステンレス容器に約２５℃の注射用水約２０００ｇを入れ、そこに秤量した精製白糖１００ｇおよび塩化ナトリウム５ｇを加えて溶解し、次いでヒトＰＴＨ（１−３４）を酢酸塩として５１５ｍｇ（ロットＤ）加えて溶解し、その後、注射用水を加え４０００ｇに重量補正をしてＰＴＨペプチド含有水溶液を得た。得られたＰＴＨペプチド含有水溶液を窒素で加圧しながらろ過フィルターを用いて無菌ろ過し、ステンレス製の５Ｌ充てん用タンクに液送した。医薬品製造施設内のグレードＡ（風速が約０．２〜０．４ｍ／ｓ）の環境を有する区域にて、該ＰＴＨペプチド含有水溶液を、洗浄・乾燥したバイアルに０．５６ｇ充填し、洗浄・乾燥したゴム栓を用いて半開栓バイアルを得た。半開栓バイアルをグレードＡの区域を移送し、小扉を有する凍結乾燥機（共和真空技術製（型：ＲＬ棚面積：９ｍ^２））に全体で約３時間かけて順次搬入した。ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結させて減圧下で水を昇華させる真空凍結乾燥を行い、乾燥終了後バイアル中を窒素で置換した後にゴム栓で封栓し、アルミキャップにて巻き締めてＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤を得た。

［試験例１］
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の純度および類縁物質量を評価する手法としては、ＨＰＬＣ法における面積百分率法が簡便である。塩化ベンザルコニウム０．２５ｇを秤量し、５０ｍＭ硫酸緩衝液（ｐＨ２．３）を加えて５０ｍＬとしたものを添加液とする。実施例及び、比較例の各々の製剤を生理食塩液１ｍＬで溶解し、さらにその溶解液と添加液を９：１の割合で混合したものを試料溶液とする。試料溶液１００μＬにつき、以下に示す条件でＨＰＬＣにより試験を行った。なお、塩化ベンザルコニウムは、測定対象のペプチドが分析操作中に器具等に吸着するのを防止する目的で使用した。

＜試験条件＞
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１４ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレス管に３．５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填する。

カラム温度：４０℃付近の一定温度
移動相：移動相Ａ：無水硫酸ナトリウム２８．４ｇを水９００ｍＬに溶かし、リン酸を加えてｐＨ２．３に調整した後、水を加えて１０００ｍＬとする。この液９００ｍＬにアセトニトリル１００ｍＬを加える
移動相Ｂ：無水硫酸ナトリウム２８．４ｇを水９００ｍＬに溶かし、リン酸を加えてｐＨ２．３に調整した後、水を加えて１０００ｍＬとする。この液５００ｍＬにアセトニトリル５００ｍＬを加える
移動相の送液：移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比を次のように変えて濃度勾配制御する
注入後の時間：

流量：毎分１．０ｍＬ
試料温度：５℃付近の一定温度
検出時間：試料溶液注入後４５分間。ただし溶媒ピークの後ろからとする。

計算方法：各ＰＴＨの類縁物質量とそれらの総量は、上記条件下で液体クロマトグラフィー試験を実施し、各々のピーク面積を自動積分法により測定し、式１および２を用いて算出することにより、定量した。なお、総ピーク面積とは上記条件下で液体クロマトグラフィー試験を実施して検出された全てのピークの面積の総和であった。すなわち総ピーク面積は製剤中のＰＴＨペプチドと全ＰＴＨ類縁物質量の総和を示すことになる。

式１：各ＰＴＨ類縁物質量（％）＝（各類縁物質のピーク面積／総ピーク面積）×１００
式２：全ＰＴＨ類縁物質量（％）＝（各類縁物質のピーク面積の総和／総ピーク面積）×１００
＜結果＞
実施例で用いたヒト−ＰＴＨ（１−３４）の類縁物質量（原薬）を評価した結果を表６に、ＨＰＬＣのチャートを図１に示す。また、試験例で実施したＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の純度および類縁物質量を評価した結果を表７に示す。また、実施例１のＨＰＬＣのチャートを図２に、比較例１のＨＰＬＣのチャートを図３に示す。表６中の各類縁物質の構造は下記試験例２による推定により得られた。

［試験例２］
試験例１で得られた各類縁物質の構造を推定することを目的に、ヒトＰＴＨ（１−３４）類縁物質を生成、分取し、さらに、分取物の分析試験を実施した。

（１）各類縁物質の生成とその分取
精製白糖４．００ｇと塩化ナトリウム０．２０ｇを量り、注射用水を加えて溶解し、プラセボ溶液とした。ヒトＰＴＨ（１−３４）を精密に量り、プラセボ液１００ｍＬを加えて溶解し、反応原液とした。縦４０ｃｍ×横９０ｃｍ×高さ１００ｃｍのガラス戸のついた棚中に、オゾン発生装置およびオゾンを循環させ濃度を均一にする送風機（初期風速が約７．２ｍ／ｓ）を用いて、オゾン濃度計によりオゾン濃度が約０．０８ｐｐｍとなる環境を作製した。反応原液を容量２０ｍＬのバイアルに約１５ｍＬずつ分注し、バイアルに撹拌子を入れてスターラーで撹拌しながら、純度が約２０％（すなわち、ヒトＰＴＨ（１−３４）類縁物質総量が８０％）となるまで、約０．０８ｐｐｍのオゾン雰囲気下に曝露（約２０時間）し劣化させた。なお、純度の確認は試験例１の試験条件に従った。劣化させた溶液を凍結乾燥し、適当量の注射用水で溶解した溶液を、強制劣化溶液とした。この溶液を用いて、以下に示す条件で類縁物質の分取をおこなった。

＜試験条件＞
下記の条件以外は試験例１の試験条件と同じであった。

＜試験例１と異なっていた条件＞
カラム：内径９．４ｍｍ、長さ２５０ｍｍのステンレス管に５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填する。

流量：毎分６．０ｍＬ
なお、上記の条件が試験例１とは異なっていたにも拘らず、クロマトグラムのパターンに大きな差は観察されなかった。

上記のクロマトグラフィー条件下で９つの類縁物質を分取し、それを脱塩・濃縮させ、さらに凍結乾燥させたものを蒸留水溶解し、各類縁物質（未消化品）を得た。試験例１の試験条件で、各類縁物質（未消化品）と強制劣化溶液をＨＰＬＣ分析し、強制劣化溶液のヒトＰＴＨ（１−３４）の保持時間を１として、各類縁物質（未消化品）の相対保持時間を算出した。

＜結果＞
強制劣化溶液中の各類縁物質の相対保持時間とほぼ完全に一致していることを確認した。相対保持時間の結果を表８に、強制劣化溶液のクロマトグラムを図４に示した。図３と図４ではチャージした液の組成が異なるためにヒトＰＴＨ（１−３４）ピークの溶出時間が微妙に異なるが、各チャートにおける各類縁物質の溶出パターン及び量率が同じであることから図３と図４の対応する類縁物質は同じものであると推察された。これらの結果から、ここでのオゾン曝露試験は、医薬品製造施設内の空気環境化においてＰＴＨペプチド含有溶液を製造する際に誘発されるＰＴＨ類縁物質の生成反応を実質的に再現する試験であると考えられた。

（２）各類縁物質の構造推定分析
上記の各類縁物質（未消化品）及びヒトＰＴＨ（１−３４）標準物質をトリプシンで消化し、類縁物質（消化品）及び標準溶液（消化品）とした。これら１０の試料を以下に示す条件でＬＣ／ＭＳ／ＭＳで解析した。

＜ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ試験条件＞
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム：内径１．５ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレス管に５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填する。

カラム温度：４０℃付近の一定温度
移動相：移動相Ａ：トリフルオロ酢酸を含む水混液（１：１０００）
移動相Ｂ：アセトニトリル
移動相の送液：移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比を次のように変えて濃度勾配制御する
注入後の時間：

流量：毎分０．１ｍＬ
試料温度：５℃付近の一定温度
検出時間：試料溶液注入後４５分間。ただし溶媒ピークの後ろからとする。

イオン化モード：ＥＳ＋
各類縁物質（未消化品）を以下に示す条件でＬＣ／ＭＳで解析した。

＜ＬＣ／ＭＳ試験条件＞
下記の条件以外はＬＣ／ＭＳ／ＭＳの試験条件と同じであった。

移動相の送液：移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比を次のように変えて濃度勾配制御する
注入後の時間：

＜結果＞
試験例２において９つの類縁物質を構造解析した結果を以下に示す。

＜ヒトＰＴＨ（１−３４）＞
表１１にトリプシン消化で生じるヒトＰＴＨ（１−３４）の予想フラグメントを示した。

標準溶液（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおいて確認された各フラグメントの質量測定結果を表１２に示した。標準溶液（消化品）の各フラグメントの実測値を理論質量と比較し、ヒトＰＴＨ（１−３４）では推定構造の５つのフラグメントが得られたことが確認された。

＜類縁物質１＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．４３を示す類縁物質を類縁物質１とし、表１３に類縁物質１（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質１（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ２で＋１６Ｄａ、Ｔ３で＋４Ｄａ、Ｔ１で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析をおこなった結果を表１４に示した。標準溶液（消化品）と比較した結果、Ｔ２ではＭｅｔ１８で＋１６Ｄａ、Ｔ３ではＴｒｐ２３で＋４Ｄａ、Ｔ１ではＭｅｔ８で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。

また類縁物質１（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表１５に示した。類縁物質１（未消化品）では、理論質量と比較して＋６４Ｄａ及び＋３６Ｄａのピークが確認され、図７に示すようにピークの大きさから＋６４Ｄａがメインピークと考えられた。未消化品の分子量は約４０００Ｄａであるが、ＬＣ／ＭＳにおいて実測値としては多価イオンの質量が得られるため、多価イオンの質量から未消化品の質量を計算する過程で±１Ｄａ程度の誤差が生じることが予想された。構造解析上、誤差が生じていると推定された質量差については（）内に補正した値を記載した。以降の構造解析でも同様に記載した。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋３６Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）＋（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）と推定された。また、Ｔｒｐにおける＋４Ｄａ変化体の構造は図６のｂ）であり、その前駆体ａ）の質量変化は＋３２Ｄａであると予想された。トリプシン消化等の操作の過程でＴｒｐ２３がａ）→ｂ）へと変化したと仮定し、類縁物質１（未消化品）のメインピークは、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋６４Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｔｒｐ２３＋３２Ｄａ）＋（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）と推定された。すなわち、類縁物質１はヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］であると推定された。

＜類縁物質２＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．４４を示す類縁物質を類縁物質２とし、表１６に類縁物質２（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質２（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ２で＋１６Ｄａ、Ｔ３で＋４Ｄａ、Ｔ１で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析をおこなった結果、類縁物質１と同じく、Ｔ２ではＭｅｔ１８で＋１６Ｄａ、Ｔ３ではＴｒｐ２３で＋４Ｄａ、Ｔ１ではＭｅｔ８で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質２（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表１７に示した。類縁物質２（未消化品）では、理論質量と比較して＋２４Ｄａ及び＋９２Ｄａのピークが確認されたが、図８に示したようにほぼピーク形状をなしていないことや、ＭＳ／ＭＳ解析の結果を支持する質量が得られなかったことから、確認されたこれらの質量の信頼性は低いと考えられた。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、類縁物質２は少なくとも、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋３６Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）＋（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）の質量変化をしたものであると推定された。すなわち、類縁物質２はヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化―ギ酸脱離］であると推定された。

＜類縁物質３及び４＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．４６を示すピークは、以下で説明するとおりに類縁物質３及び４の混合物由来のものであった。表１８に類縁物質３及び４の混合物（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質３及び４の混合物（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ２で＋１６Ｄａ、Ｔ３で＋４Ｄａ、Ｔ１で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。また、質量変化を伴わないＴ２及びＴ３フラグメントも確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析をおこなった結果、類縁物質１と同じく、Ｔ２ではＭｅｔ１８で＋１６Ｄａ、Ｔ３ではＴｒｐ２３で＋４Ｄａ、Ｔ１ではＭｅｔ８で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質３及び４の混合物（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表１９に示した。類縁物質３及び４の混合物（未消化品）では、理論質量と比較して＋３２Ｄａ、＋４８Ｄａ及び＋２０Ｄａのピークが確認され、図９に示すようにピークの大きさから＋３２Ｄａ及び＋４８Ｄａが約１：１の割合でメインピークと考えられた。

類縁物質３及び４の混合物（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳクロマトグラムでは、Ｔ２＋１６Ｄａ：Ｔ２とＴ３＋４Ｄａ：Ｔ３がそれぞれ約１：１の割合で存在し、Ｔ２＋１６Ｄａ：Ｔ３＋４Ｄａ：Ｔ１＋１６Ｄａは約１：１：２の割合で存在していた。従ってＭＳ／ＭＳ解析の結果から、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋３２Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋２０Ｄａ＝（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）＋（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）と推定され、後者に関しては類縁物質１と同じくトリプシン消化等の操作の過程においてＴｒｐ２３でａ）→ｂ）という変化が起きたと仮定し、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋４８Ｄａ＝（Ｔｒｐ２３＋３２Ｄａ）＋（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）と推定された。類縁物質３及び４は、それぞれ、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋３２Ｄａ及びヒトＰＴＨ（１−３４）＋４８Ｄａと推定された。すなわち、表８の相対保持時間＝０．４６のピークは、ヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｍｅｔ１８［Ｏ］とヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］を含む混合物のピークと推定された。

＜類縁物質５＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．４９を示す類縁物質を類縁物質５とし、表２０に類縁物質５（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質５（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ２で＋１６Ｄａ、Ｔ３で＋４Ｄａの質量変化が確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析をおこなった結果、類縁物質１と同じく、Ｔ２ではＭｅｔ１８で＋１６Ｄａ、Ｔ３ではＴｒｐ２３で＋４Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質５（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表２１に示した。類縁物質５（未消化品）では、理論質量と比較して＋４８Ｄａ及び＋２０Ｄａのピークが確認され、図１０に示すようにピークの大きさから＋４８Ｄａがメインピークと考えられた。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋２０Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）と推定された。類縁物質１と同じくトリプシン消化等の操作の過程においてＴｒｐ２３でａ）→ｂ）という変化が起きたと仮定し、類縁物質５（未消化品）のメインピークは、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋４８Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｔｒｐ２３＋３２Ｄａ）と推定された。すなわち、類縁物質５はヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化］と推定された。

＜類縁物質６＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．５１を示す類縁物質を類縁物質６とし、表２２に類縁物質６（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質６（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ２で＋１６Ｄａ、Ｔ３で＋４Ｄａの質量変化が確認された。また、質量変化を伴わないＴ１フラグメントも確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析をおこなった結果、類縁物質１と同じく、Ｔ２ではＭｅｔ１８で＋１６Ｄａ、Ｔ３ではＴｒｐ２３で＋４Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質６（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表２３に示した。類縁物質６（未消化品）では、理論質量と比較して＋２０Ｄａのピークが確認された。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、類縁物質６は、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋２０Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）＋（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）と推定された。すなわち、類縁物質６はヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ１８［Ｏ］−Ｔｒｐ２３［二酸化―ギ酸脱離］と推定された。

＜類縁物質７＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．５５を示す類縁物質を類縁物質７とし、表２４に類縁物質７（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質７（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ１で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析を行った結果、類縁物質１と同じく、Ｔ１ではＭｅｔ８で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質７（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表２５に示した。図１２に示すように、類縁物質７（未消化品）では、理論質量と比較して＋１６Ｄａのピークが確認された。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、類縁物質７は、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋１６Ｄａ＝（Ｍｅｔ８＋１６Ｄａ）と推定された。すなわち、類縁物質７は、ヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ８［Ｏ］と推定された。

＜類縁物質８＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．６２を示す類縁物質を類縁物質８とし、表２６に類縁物質８（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質８（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ２で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析を行った結果、類縁物質１と同じく、Ｔ２ではＭｅｔ１８で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質８（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表２７に示した。図１３に示すように、類縁物質８（未消化品）では、理論質量と比較して＋１６Ｄａのピークが確認された。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、類縁物質８は、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋１６Ｄａ＝（Ｍｅｔ１８＋１６Ｄａ）と推定された。すなわち、類縁物質８は、ヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｍｅｔ１８［Ｏ］と推定された。

＜類縁物質９＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．６５を示す類縁物質を類縁物質９とし、表２８に類縁物質９（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質９（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ３で＋４Ｄａの質量変化が確認された。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析を行った結果、類縁物質１と同じく、Ｔ３ではＴｒｐ２３で＋４Ｄａの質量変化が確認された。また類縁物質９（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表２９に示した。類縁物質９（未消化品）では、理論質量と比較して＋３２Ｄａ、＋４Ｄａのピークが観察され、図１４に示すようにピークの大きさから＋３２Ｄａがメインピークと考えられた。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋４Ｄａ＝（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）と推定された。類縁物質１と同じくトリプシン消化等の操作の過程においてＴｒｐ２３でａ）→ｂ）という変化が起きたと仮定し、類縁物質９（未消化品）のメインピークは、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋３２Ｄａ＝（Ｔｒｐ２３＋３２Ｄａ）と推定された。すなわち、類縁物質９は、ヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｔｒｐ２３［二酸化］と推定された。

＜類縁物質１０及び１１＞
表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．７０を示すピークは、以下で説明するとおりに類縁物質１０及び１１の混合物由来のものであった。表３０に類縁物質１０及び１１の混合物（消化品）のＬＣ／ＭＳ／ＭＳにおける質量測定結果を示した。類縁物質１０及び１１の混合物（消化品）では標準溶液（消化品）の該当フラグメントの実測値と比較して、Ｔ３で＋１６Ｄａ及び＋４Ｄａの質量変化を別々のフラグメントとして確認した。

質量変化が確認されたフラグメントについてＭＳ／ＭＳ解析をおこなった結果を表３１に示した。標準溶液（消化品）と比較した結果、一方のＴ３ではＴｒｐ２３で＋１６Ｄａの質量変化が確認された。Ｔｒｐでの＋１６Ｄａ変化体の構造は図６のｃ）であると予想された。もう一方のＴ３では被変化アミノ酸を特定できるデータが得られなかったが、類縁物質１〜８の解析結果からＴｒｐ２３で＋４Ｄａの質量変化をしていると推定された。

また類縁物質１０及び１１の混合物（未消化品）のＬＣ／ＭＳで得られた質量を、ヒトＰＴＨ（１−３４）の理論質量４１１５．１３０９と比較した結果を表３２に示した。図１５に示すように、類縁物質１０及び１１の混合物（未消化品）では、理論質量と比較して＋１６Ｄａ、＋４Ｄａのピークが観察された。

ＭＳ／ＭＳ解析の結果から、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋１６Ｄａ＝（Ｔｒｐ２３＋１６Ｄａ）、ヒトＰＴＨ（１−３４）＋４Ｄａ＝（Ｔｒｐ２３＋４Ｄａ）と帰属され、表８の「類縁物質（未消化品）」の列で相対保持時間＝０．７０を示すピークは、類縁物質１０及び１１の混合物と推定された。すなわち、類縁物質１０はヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｔｒｐ２３［一酸化］と、類縁物質１１はヒト−ＰＴＨ（１−３４）−Ｔｒｐ２３［二酸化―ギ酸脱離］と推定された。

＜構造解析まとめ＞
各類縁物質の相対保持時間および推定構造結果を表３３に示した。表中のメチオニン残基の酸化は図５に、表中のａ），ｂ），ｃ）は図６に示される。表中の各類縁物質の相対保持時間はヒトＰＴＨ（１−３４）の保持時間を１とした場合の相対的な保持時間を示す。

本発明によれば、高純度ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤が提供されるので、本発明は医薬品製造業において利用できる。

１：大扉
２：小扉
３：副扉（開いた状態）
４：副扉（閉じた状態）
５：整風カバー

Claims

高純度のＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤であって、但し高純度とは、当該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下であり、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを少なくとも意味し、該凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前のＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制したことを特徴とする方法により製造される、前記ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記ＰＴＨ類縁物質が、
１）類縁物質１：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より６４Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（１−ａ）〜（１−ｃ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（１−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、
（１−ｂ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（１−ｃ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
２）類縁物質２：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より３６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（２−ａ）〜（２−ｃ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（２−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、
（２−ｂ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（２−ｃ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
３）類縁物質３：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より３２Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（３−ａ）〜（３−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（３−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（３−ｂ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ；
４）類縁物質４：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より４８Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（４−ａ）〜（４−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（４−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（４−ｂ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
５）類縁物質５：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より４８Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（５−ａ）〜（５−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（５−ａ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（５−ｂ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
６）類縁物質６：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より２０Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（６−ａ）〜（６−ｂ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（６−ａ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ、及び
（６−ｂ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
７）類縁物質７：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より１６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（７−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（７−ａ）Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（配列番号：１）の質量数＋１６Ｄａ；
８）類縁物質８：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より１６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（８−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（８−ａ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ（配列番号：２）の質量数＋１６Ｄａ；
９）類縁物質９：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より３２Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（９−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（９−ａ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ；
１０）類縁物質１０：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より１６Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（１０−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（１０−ａ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋１６Ｄａ；又は
１１）類縁物質１１：
製剤に含有されたＰＴＨペプチドの質量数より４Ｄａ大きな質量数を有し、且つ当該類縁物質をトリプシン消化した際に、以下の（１１−ａ）のフラグメントに対応する消化物を生じる前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
（１１−ａ）Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号：３）の質量数＋４Ｄａ、
のうちの少なくとも１種以上である、請求項１記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記ＰＴＨ類縁物質が、
１）類縁物質１’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が下記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物、

；
２）類縁物質２’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が下記構造式（ｂ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物、

；
３）類縁物質３’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位および１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
４）類縁物質４’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
５）類縁物質５’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
６）類縁物質６’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に、並びに２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造（ｂ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
７）類縁物質７’
ヒトＰＴＨ（１−３４）の８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
８）類縁物質８’
ヒトＰＴＨ（１−３４）の１８位メチオニンに対応する残基がメチオニンスルホキシド残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
９）類縁物質９’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ａ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；
１０）類縁物質１０’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が下記構造式（ｃ−１）又は（ｃ−２）で示されるトリプトファン一酸化物残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物；

；又は
１１）類縁物質１１’：
ヒトＰＴＨ（１−３４）の２３位トリプトファンに対応する残基が上記構造式（ｂ）で示される残基に変化した前記ＰＴＨペプチドの酸化物、
のうちの少なくとも１種以上である、請求項１記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記高純度が、製剤中の少なくとも１種以上の上記類縁物質１乃至１１の量が該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下であり、及び／又は上記類縁物質量１乃至１１の合計量がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して５．０％以下であることを意味する、請求項２に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記高純度が、製剤中の少なくとも１種以上の上記類縁物質１’乃至１１’の量が該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して１．０％以下であり、及び／又は上記類縁物質量１’乃至１１’の合計量がＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対して５．０％以下であることを意味する、請求項３に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記ＰＴＨペプチドがヒトＰＴＨ（１−３４）である、請求項１乃至５いずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤がガラス製バイアルに収容された製剤である、請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
凍結乾燥前のＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露の抑制が、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程、無菌濾過工程、薬液充填工程、及び凍結乾燥手段への搬入工程のいずれか１以上の工程で行われることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
更に、凍結乾燥後のバイアル封栓工程においても凍結乾燥物が医薬品製造施設内空気環境に暴露されることを抑制することを含む方法により製造されることを特徴とする、請求項８に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
凍結乾燥前のＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露の抑制が、凍結乾燥手段への搬入工程で行われることを特徴とする、請求項１乃至９のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記暴露の抑制が、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が講じられた凍結乾燥庫を用いることで行われることを特徴とする、請求項１０に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を容器搬入時のみ開け且つ搬入後は速やかに閉めることで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項１１に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有する凍結乾燥庫であり、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が、流動空気の流れを該開口部から庫内に向かわない方向に変える整風カバーである、請求項１１に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記搬入工程が、凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項１０に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を容器搬入時のみ開け搬入後は速やかに閉めること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項１０に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有し、更に該開口部に整風カバーを備える凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該整風カバーが流動空気の流れを庫内に向かわない方向に変えること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項１０に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記搬入工程が３時間以上にわたる該工程である、請求項１０乃至１６のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程の開始から凍結乾燥手段への搬入工程の終了までが３時間以上にわたる、その間の１以上の工程においてＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露が抑制される方法により製造されることを特徴とする、請求項８乃至１７のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
前記不活性ガスが窒素ガスである、請求項１４乃至１８のいずれか１項に記載のＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
高純度のＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤であって、該凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結乾燥手段へ搬入する際に医薬品製造施設内空気環境に対して暴露されるのを抑制したことを特徴とする方法で製造され、但し前記高純度とは当該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下であり、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを少なくとも意味し、前記搬入工程は３時間以上にわたる工程であり、且つ前記空気環境はＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されている環境であり、該ＨＥＰＡフィルター直下２０ｃｍの位置の気流が０．２〜１．０ｍ／ｓの流速気流である、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の製造方法であって、ＰＴＨペプチド含有溶液調製工程の開始から凍結乾燥手段への搬入工程終了の間の１以上の工程においてＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする方法。
更に、凍結乾燥後のバイアル封栓工程においても凍結乾燥物が医薬品製造施設内空気環境に暴露されることを抑制することを含む、請求項２１に記載の方法。
凍結乾燥手段への搬入工程においてＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項２１又は２２に記載の方法。
前記暴露の抑制が、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が講じられた凍結乾燥庫を用いることを特徴とする、請求項２３に記載の方法。
凍結乾燥手段への搬入工程が３時間以上にわたる該工程である、請求項２３又は２４に記載の方法。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を容器搬入時のみ開け搬入後は速やかに閉めることで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制する、請求項２４又は２５に記載の方法。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有する凍結乾燥庫であり、医薬品製造施設内空気が凍結乾燥手段内へ流入することを抑制する手段が、流動空気の流れを該開口部から庫内に向かわない方向に変える整風カバーである、請求項２４又は２５に記載の方法。
凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項２３又は２５に記載の方法。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部に備えられた容易に開閉可能な副扉を有する凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該副扉を溶液容器搬入時のみ開け搬入後に速やかに閉めること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項２３又は２５に記載の方法。
前記凍結乾燥手段が、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器を該手段に搬出入する際に開く小扉部分に生じる開口部を有し、更に該開口部に整風カバーを備える凍結乾燥庫であり、それにより前記搬入工程において、該整風カバーが流動空気の流れを庫内に向かわない方向に変えること、並びに凍結乾燥手段内を不活性ガスで置換することで凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液の医薬品製造施設内空気環境への暴露を抑制することを特徴とする、請求項２３又は２５に記載の方法。
前記不活性ガスが窒素である、請求項２８乃至３０のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＴＨペプチド含有溶液を収容する容器がガラス製バイアルである、請求項２１乃至３１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＴＨがヒトＰＴＨ（１−３４）である、請求項２１乃至３２のいずれか１項に記載の方法。
医薬品製造施設内空気環境が、１）グレードＡの空気であり、２）粒径０．３μｍの粒子を９９．９７％以上の効率で捕らえる性能を有するＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されており、且つ、３）含有オゾン濃度が０．００１〜０．１ｐｐｍの空気環境である、請求項２１乃至３３のいずれか１項に記載の方法。
医薬品製造施設内空気環境が、含有ホルムアルデヒド濃度０．１ｐｐｍ以下の空気環境である、請求項２１乃至３４のいずれか１項に記載の方法。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量を１．０％以下とし、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量を５．０％以下とするための、請求項２１乃至３５のいずれか１項に記載の方法。
請求項２に記載のＰＴＨ類縁物質１乃至１１の生成を抑制するための、請求項２１乃至３６のいずれか１項に記載の方法。
請求項３に記載のＰＴＨ類縁物質１’乃至１１’の生成を抑制するための、請求項２１乃至３６のいずれか１項に記載の方法。
請求項２１〜３８のいずれか１項に記載の方法により製造された、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤。
高純度のＰＴＨペプチドを有効成分として含有する凍結乾燥製剤の製造方法であって、該製造方法は、凍結乾燥前ＰＴＨペプチド含有溶液を凍結乾燥手段へ搬入する際に医薬品製造施設内空気環境に対して暴露されるのを抑制したことを特徴とする方法であり、但し前記高純度とは、当該製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下であり、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを少なくとも意味し、前記搬入工程は３時間以上にわたる工程であり、且つ前記空気環境はＨＥＰＡフィルターを通過した清浄な空気が上から下方に向かって一方向の気流として維持されている環境であり、該ＨＥＰＡフィルター直下２０ｃｍの位置の気流が０．２〜１．０ｍ／ｓの流速気流である、前記製造方法。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の検査方法であって、該方法は、該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中における請求項２に記載のＰＴＨ類縁物質１乃至１１の少なくとも１種以上の存在を確認、及び／又は存在量を定量することを特徴とする方法。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤の検査方法であって、該方法は、該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中における請求項３に記載のＰＴＨ類縁物質１’乃至１１’の少なくとも１種以上の存在を確認、及び／又は存在量を定量することを特徴とする方法。
前記ＰＴＨ類縁物質の定量が、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤に由来する試料を高速液体クロマトグラフィーに付して紫外部吸収を測定した際のクロマトグラム上における前記ＰＴＨ類縁物質に相当するピークの面積を計算することを含む、請求項４１又は４２に記載の方法。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤に由来する試料を高速液体クロマトグラフィーに付して紫外部吸収を測定した際のクロマトグラム上における前記ＰＴＨ類縁体に相当するピークの面積と、同一クロマトグラム上におけるＰＴＨペプチドに相当するピーク面積或いはＰＴＨペプチドのピーク面積とそれ以外に検出された全てのＰＴＨ類縁物質のピーク面積の和を比較することで当該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチドの純度を算出することを含む、請求項４３に記載の方法。
前記クロマトグラム上で前記ＰＴＨ類縁物質のいずれか２種以上が１又は２以上の単一ピークとして検出されるクロマトグラフィー条件を適用した場合において、当該ピークの面積と、同一クロマトグラム上におけるＰＴＨペプチドに相当するピーク面積或いはＰＴＨペプチドのピーク面積とそれ以外に検出された全てのＰＴＨ類縁物質のピーク面積の和を比較することで当該ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチドの純度を算出することを含む、請求項４４に記載の方法。
ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤中のＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する少なくとも１種のＰＴＨ類縁物質の量が１．０％以下、及び／又はＰＴＨペプチド量と全ＰＴＨ類縁物質量の和に対する全ＰＴＨ類縁物質量が５．０％以下であることを保証するための、請求項４１乃至４５のいずれか１項に記載の方法。
更に、高速液体クロマトグラフィー質量分析計を用いて前記ＰＴＨ類縁物質の質量数を検出することを含む、請求項４１乃至４６のいずれか１項に記載の方法。
更に、前記クロマトグラム上で単一ピークを与える物質を分取し、当該物質をトリプシン消化して生じるフラグメントの質量数を同定することを含む、請求項４１乃至４７のいずれか１項に記載の方法。
請求項４１乃至４８のいずれか１項に記載の検査方法を実施する工程を含む、ＰＴＨペプチド含有凍結乾燥製剤から成る医薬品の製造方法。