JP2505812B2

JP2505812B2 - ｈ―ＰＴＨ（１―３４）凍結乾燥組成物

Info

Publication number: JP2505812B2
Application number: JP62173549A
Authority: JP
Inventors: 香森田; 俊治野田
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1987-07-10
Filing date: 1987-07-10
Publication date: 1996-06-12
Anticipated expiration: 2011-06-12
Also published as: JPS6416799A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、ヒト副甲状腺ホルモン（以下ｈ−PTHと称
することがある）活性を有する新規なヒト副甲状腺ホル
モンペプチド（１−34）〔以下、ｈ−PTH（１−34）と
称する〕凍結乾燥組成物に関する。

〔従来の技術〕

ｈ−PTH（１−34）は、式Ｈ−Ser−Val−Ser−Glu−Ile−Gln−Leu−Met−His−A
sn−Leu−Gly−Lys−His−Leu−Asn−Ser−Met−Glu−A
rg−Val−Glu−Trp−Leu−Arg−Lys−Lys−Leu−Gln−A
sp−Val−His−Asn−Phe−OH で示され、ペプチド固相法により合成され、カラムクロ
マトグラフイーによる分離精製される段階で、ゲル過
により脱塩する場合、0.1M酢酸で溶出され、凍結乾燥に
より精製品が得られることは公知である〔Hoppe−Seyle
r's Z.Physiol.Chem.,Vol.355,415〜421,April 197
4〕。

〔発明が解決しようとする問題点〕

上記の公知の方法により製造されるｈ−PTH（１−3
4）は、精製の段階でゲル過により脱塩する場合、0.1
M酢酸で平衡化したゲル過剤にチヤージされ、0.1M酢
酸で溶出されるため、少なくとも酢酸塩が形成された形
で精製品として採取される。

しかしながら、この精製品の酢酸含量は製造ロツトに
より大きく変化して一定の酢酸含量を有する製品を得る
ことは困難であり、しかも65℃で３週間の放置でｈ−PT
H活性が約30％も低下するという欠点があつた。

上記の精製の段階で酢酸の代りに他の揮発性有機酸、
例えば蟻酸で溶出した得られる精製品も前記酢酸塩と同
様の欠点を有することを知つた。

〔問題を解決するための手段〕

そこで、本発明者らは、上記の問題を解決すべく種々
研究を続けた結果、上記のｈ−PTH（１−34）精製品を
陰イオン交換樹脂で処理して、酢酸塩を形成することに
より存在していた酢酸をできるだけ除去し、次で一定の
酒石酸量をを含む水溶液に溶解して凍結乾燥すると、得
られた乾燥品は製造ロツトに関係なく一定の酒石酸含量
を有するだけでなく、従来の精製品より65℃での安定性
がより優れていることを見出し、本発明を完成したもの
である。

即ち、本発明は、ヒト副甲状腺ホルモンペプチド（１
−34）の酒石酸塩を含有する凍結乾燥組成物であって、
ヒト含甲状腺ホルモンペプチド（１−34）と酒石酸との
合計量に対する酒石酸の含量が1.8〜25重量％の範囲で
あるヒト副甲状腺ホルモンペプチド（１−34）凍結乾燥
組成物である。

本発明のｈ−PTH（１−34）凍結乾燥組成物を調製す
るに際しては、ｈ−PTH（１−34）と酒石酸とを水溶液
として混合し、得られた溶液を凍結乾燥する方法が挙げ
られるが、混合するに際して、ｈ−PTH（１−34）と酒
石酸との合計量に対する酒石酸の含量が1.8〜25重量％
の範囲となるように添加すればよい。

本発明で通常用いられるｈ−PTH（１−34）として
は、前記のｈ−PTH（１−34）の酢酸塩を陰イオン交換
樹脂で処理して酢酸等の揮発性有機酸をできるだけ除去
したｈ−PTH（１−34）が好ましく、場合によっては、
揮発性有機酸含量測定の信頼限界以上から0.5重量％程
度まで揮発性有機酸が含まれていても良い。

上記の陰イオン交換樹脂としては、DowexWGRが好まし
いが、これに限定されことはなく、他の公知の陰イオン
交換樹脂も使用できる。

上記の陰イオン交換樹脂による処理は、ｈ−PTH（１
−34）揮発性有機酸塩をでるだけ少量の水に溶解した溶
液をOH^-型の陰イオン交換樹脂のカラムにチャージし、
水で溶出することにより行なわれる。各フラクションの
ｈ−PTH（１−34）は、280nmにおけるUV吸収により確認
し、ｈ−PTH（１−34）を含有するフラクションを凍結
乾燥することにより、揮発性有機酸をできるだけ除去し
たｈ−PTH（１−34）が得られる。

上記調製の結果、ｈ−PTH（１−34）は酒石酸との酸
付加塩を形成するが、理論的にはｈ−PTH（１−34）１
モルに対し0.5〜９モルの範囲の酒石酸を有し得る。し
かしながら、酸付加塩の形成に関与しない酒石酸が混入
し得るので、酒石酸との酸付加塩は勿論のこと、酸付加
塩の形成し関与しない酒石酸の混入した酸付加塩も、本
発明のｈ−PTH（１−34）凍結乾燥組成物に包含され
る。

〔発明の効果〕

このようにして得られたｈ−PTH（１−34）凍結乾燥
組成物の熱安定性について述べる。

（１）試験方法公知の方法により得られたｈ−PTH（１−34）酢酸塩
および実施例１で得られた本発明のｈ−PTH（１−34）
凍結乾燥組成物を各々約30μｇを秤取し、サンプルチユ
ーブに入れ密栓した後、65℃に放置し、０、１、２、３
週間後に取り出し、各試料（ｎ＝２）を0.1MKH₂PO₄（pH
20）溶液で500μg/mlの濃度となるよう溶解し、このサ
ンプルを次の条件による高速液体クロマトグラフイー
（HPLC）により残存するｈ−PTH（１−34）量を求め
た。

＜HPLC条件＞ HPLC装置；島津LC−4A カラム;4mmid×150mm,Nucleosil₅C₁₈ 移動相;0.1％TFA−アセトニトリル（アセトニトリルを2
0分間に20→40％に変化させるグラジエント法）流速;1ml/分検出;UV280nm 試料;500μg/mlの溶液25μ （２）測定結果０週のピーク面積を100％として各々の試料の残存活
性の平均値を求めた結果は第１表の通りである。

以上の結果から、本発明のｈ−PTH（１−34）凍結乾
燥組成物は、公知のｈ−PTH（１−34）酢酸塩より65℃
での熱安定性がより優れていることを示すものである。

〔実施例〕

次に、参考例および実施例を挙げて本発明を具体的に
説明する。

尚、製品中の酢酸および酒石酸含量の測定は、次の条
件によるHPLCにより行つた。

＜HPLC条件＞ HPLC装置;L−5000HITACHIHPLC カラム;UltronPS−80H 8mmid×300mm 移動相；水（pH2.1、HClO₄で調整）流速;1.0ml/分検出;UV 210nm 試料;5mg/mlの溶液30μ 参考例公知の方法で得たｈ−PTH（１−34）酢酸塩20mgをで
きるだけ少量の水に溶解し、水で平衡化したDowe×WGR
（OH^-型）のカラム（2.5×10cm）にチヤージし、水で溶
出した。各フラクシヨンをUV280nmで確認し、ｈ−PTH
（１−34）を含むフラスシヨンを集めて凍結乾燥してｈ
−PTH（１−34）の凍結乾燥品を得た。

上記の操作を５回行つたが、ｈ−PTH（１−34）の収
率は86.0〜94.0％であつた。

原料のｈ−PTH（１−34）酢酸塩および得られたｈ−P
TH（１−34）凍結乾燥品の酢酸含量を測定すると、第２
表の通りであつた。

実施例１参考例で得たｈ−PTH（１−34）凍結乾燥品9.0mgを1m
M酒石酸水溶液3.5mlに溶解し、凍結乾燥してｈ−PTH
（１−34）酒石酸塩9.3mgを得た。

出発物質のｈ−PTH（１−34）凍結乾燥品および本発
明品のｈ−PTH（１−34）酒石酸塩の酸含量を測定する
と、第３表の通りであつた。

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒト副甲状腺ホルモンペプチド（１−34）
の酒石酸塩を含有する凍結乾燥組成物であって、ヒト副
甲状腺ホルモンペプチド（１−34）と酒石酸との合計量
に対する酒石酸の含量が1.8〜25重量％の範囲であるヒ
ト副甲状腺ホルモンペプチド（１−34）凍結乾燥組成
物。