JPS649000B2 - - Google Patents
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- JPS649000B2 JPS649000B2 JP60268896A JP26889685A JPS649000B2 JP S649000 B2 JPS649000 B2 JP S649000B2 JP 60268896 A JP60268896 A JP 60268896A JP 26889685 A JP26889685 A JP 26889685A JP S649000 B2 JPS649000 B2 JP S649000B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は新規制限酵素およびその製造法に関
し、更に詳細にはアチネトバクター
(Acinetobacter)属の細菌の生産する新規制限
酵素およびその製造法に関する。
し、更に詳細にはアチネトバクター
(Acinetobacter)属の細菌の生産する新規制限
酵素およびその製造法に関する。
制限酵素とはデオキシリボ核酸(DNA)上の
ある特定の塩基配列を認識し、二本鎖を切断する
エンド型ヌクレアーゼである。分子遺伝学や生化
学等の発達により、DNAが遺伝をつかさどるこ
とが明らかになつて以来、制限酵素は遺伝病解明
のための利用や、遺伝子操作による遺伝物質の大
量生産への利用等現在広く用いられている有用な
酵素である。制限酵素は種々の微生物より単離さ
れており、その認識する塩基配列、切断様式によ
り現在までに約100種類が知られている。遺伝子
操作においてはその作用において多様な制限酵素
を必要とする。
ある特定の塩基配列を認識し、二本鎖を切断する
エンド型ヌクレアーゼである。分子遺伝学や生化
学等の発達により、DNAが遺伝をつかさどるこ
とが明らかになつて以来、制限酵素は遺伝病解明
のための利用や、遺伝子操作による遺伝物質の大
量生産への利用等現在広く用いられている有用な
酵素である。制限酵素は種々の微生物より単離さ
れており、その認識する塩基配列、切断様式によ
り現在までに約100種類が知られている。遺伝子
操作においてはその作用において多様な制限酵素
を必要とする。
しかしながら本発明者等の知る限りにおいては
二本鎖デオキシリボ核酸中の塩基配列 (式中Aはアデノシン、Gはグアノシン、Tはチ
ミジン、Cはシチジンを示す)を認識し、かつこ
れを矢印の位置で切断する制限酵素は見出されて
いない。
二本鎖デオキシリボ核酸中の塩基配列 (式中Aはアデノシン、Gはグアノシン、Tはチ
ミジン、Cはシチジンを示す)を認識し、かつこ
れを矢印の位置で切断する制限酵素は見出されて
いない。
従つて本発明は上記二本鎖デオキシリボ核酸中
の塩基配列を認識し、かつこれを上記矢印の位置
で切断する従来知られていなかつた新規制限酵素
を提供することにある。
の塩基配列を認識し、かつこれを上記矢印の位置
で切断する従来知られていなかつた新規制限酵素
を提供することにある。
本発明を概説すれば、本発明の第1の発明は下
記の理化学的性質を有する新規制限酵素にある。
記の理化学的性質を有する新規制限酵素にある。
(イ) 作用および基質特異性:
二本鎖デオキシリボ核酸中の塩基配列
を認識し、かつこれを矢印の位置で切断する。
(式中Aはアデノシン、Gはグアノシン、Tは
チミジン、Cはシチジンを示す) (ロ) 至適PH:8.5 (ハ) 安定PH:6.0〜9.5 (ニ) 至適反応温度:60〜65℃ (ホ) 分子量:37000±8000 なお本発明による上記新規制限酵素は二本鎖デ
オキシリボ核酸λ−DNAを24個所、pBR322
DNAを1箇所、アデノバイラス・タイプ2
DNAを8個所で切断する。φ×174RF DNA、
SV40 DNAは切断しない。
チミジン、Cはシチジンを示す) (ロ) 至適PH:8.5 (ハ) 安定PH:6.0〜9.5 (ニ) 至適反応温度:60〜65℃ (ホ) 分子量:37000±8000 なお本発明による上記新規制限酵素は二本鎖デ
オキシリボ核酸λ−DNAを24個所、pBR322
DNAを1箇所、アデノバイラス・タイプ2
DNAを8個所で切断する。φ×174RF DNA、
SV40 DNAは切断しない。
また本発明の第2の発明は上記新規制限酵素の
製造方法に関し、アチネトバクター属に属する上
記新規制限酵素を生産する細菌を栄養培地で培養
し、培養物より上記新規制限酵素を採取すること
にある。
製造方法に関し、アチネトバクター属に属する上
記新規制限酵素を生産する細菌を栄養培地で培養
し、培養物より上記新規制限酵素を採取すること
にある。
本発明で使用する微生物としては、アチネトバ
クター属に属する上記新規制限酵素生産菌の全て
を使用できるが、一例としてアチネトバクター・
カルコアセテイカス(Acinetobacter
calcoaceticus)がある。上記細菌の菌学的性質
についてはバージーズ・マニユアル・オブ・デイ
ターミネイテイブ・バクテリオロジー(Bergey
’s Manual of Determinative
Bacteriology)第8版第437頁に記載されてい
る。
クター属に属する上記新規制限酵素生産菌の全て
を使用できるが、一例としてアチネトバクター・
カルコアセテイカス(Acinetobacter
calcoaceticus)がある。上記細菌の菌学的性質
についてはバージーズ・マニユアル・オブ・デイ
ターミネイテイブ・バクテリオロジー(Bergey
’s Manual of Determinative
Bacteriology)第8版第437頁に記載されてい
る。
なお本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研条寄第935号(FERM BP−935)とし
て寄託されている。
に微工研条寄第935号(FERM BP−935)とし
て寄託されている。
本発明による新規制限酵素の製造方法について
さらに詳細に説明する。まず培養の際、培地に加
える栄養源は使用する菌株が利用し、新規制限酵
素を生産するものであればよく、炭素源としては
例えばグルコース、窒素源としては酵母エキス、
ペプトン、ブレインハートインフユージヨンなど
が利用できる。
さらに詳細に説明する。まず培養の際、培地に加
える栄養源は使用する菌株が利用し、新規制限酵
素を生産するものであればよく、炭素源としては
例えばグルコース、窒素源としては酵母エキス、
ペプトン、ブレインハートインフユージヨンなど
が利用できる。
本発明による制限酵素の生産量は培養条件によ
り大きく変動するが一般に培養温度は25〜40℃、
培地のPH4〜8が良く、1〜2日間の通気撹拌培
養で本発明による制限酵素の生産は最高に達す
る。培養条件は使用する菌株、培地組成などに応
じ、制限酵素の生産量が最大になるように設定す
るのは当然である。本発明の菌株によつて生成さ
れた制限酵素は主に菌体内に存在する。
り大きく変動するが一般に培養温度は25〜40℃、
培地のPH4〜8が良く、1〜2日間の通気撹拌培
養で本発明による制限酵素の生産は最高に達す
る。培養条件は使用する菌株、培地組成などに応
じ、制限酵素の生産量が最大になるように設定す
るのは当然である。本発明の菌株によつて生成さ
れた制限酵素は主に菌体内に存在する。
培養液からの菌体の分離はたとえば遠心分離に
より行なうことができる。
より行なうことができる。
本発明の酵素の抽出、精製は一般の制限酵素精
製法に従つた方法で行なえる。すなわち、菌体を
緩衝液に懸濁後、超音波処理により破砕し、細胞
内酵素の抽出を行なう。次に細胞残渣を超遠心分
離により除去後、抽出液を硫酸アンモニウムで塩
析する。沈殿物をリン酸カリウム緩衝液(PH7.5)
に溶解し、同緩衝液にて透析を行なう。得られる
透析内液をイオン交換クロマト法、分子ふるいク
ロマト法およびアフイニテイクロマト法を用いた
精製法で本発明の制限酵素を得る。一例を挙げる
と、透析内液をホスホセルロースP11(ワツトマ
ン社製)カラムに吸着させて、次いで0〜1.0M
の塩化カリウムで溶出する。活性画分をDEAE−
セルロースDE52(ワツトマン社製)カラムに吸着
させ、次いで0〜1.0M塩化カリウムで溶出する。
活性画分をヘパリン−セフアロースCL−6B(フ
アルマシア社製)カラムに吸着させ、0.7M塩化
カリウムで洗浄後、1.0Mの塩化カリウムで溶出
する。活性画分をさらにアミノヘキシルアガロー
ス(ベセスダ社製)カラムに吸着させて、次いで
0〜1.5Mの塩化カリウムで溶出することにより
本発明による制限酵素標品を得ることができる。
製法に従つた方法で行なえる。すなわち、菌体を
緩衝液に懸濁後、超音波処理により破砕し、細胞
内酵素の抽出を行なう。次に細胞残渣を超遠心分
離により除去後、抽出液を硫酸アンモニウムで塩
析する。沈殿物をリン酸カリウム緩衝液(PH7.5)
に溶解し、同緩衝液にて透析を行なう。得られる
透析内液をイオン交換クロマト法、分子ふるいク
ロマト法およびアフイニテイクロマト法を用いた
精製法で本発明の制限酵素を得る。一例を挙げる
と、透析内液をホスホセルロースP11(ワツトマ
ン社製)カラムに吸着させて、次いで0〜1.0M
の塩化カリウムで溶出する。活性画分をDEAE−
セルロースDE52(ワツトマン社製)カラムに吸着
させ、次いで0〜1.0M塩化カリウムで溶出する。
活性画分をヘパリン−セフアロースCL−6B(フ
アルマシア社製)カラムに吸着させ、0.7M塩化
カリウムで洗浄後、1.0Mの塩化カリウムで溶出
する。活性画分をさらにアミノヘキシルアガロー
ス(ベセスダ社製)カラムに吸着させて、次いで
0〜1.5Mの塩化カリウムで溶出することにより
本発明による制限酵素標品を得ることができる。
本発明による制限酵素の活性測定方法を示す。
下記表1に示す組成の反応液50μを予め37℃で
予熱した後、本酵素を加え酵素反応を進める。10
分後に酵素反応停止液(1%SDS、50%グリセロ
ール、0.02%ブロムフエノールブルー)を5μ添
加して反応を停止させる。
下記表1に示す組成の反応液50μを予め37℃で
予熱した後、本酵素を加え酵素反応を進める。10
分後に酵素反応停止液(1%SDS、50%グリセロ
ール、0.02%ブロムフエノールブルー)を5μ添
加して反応を停止させる。
表 1
10mM トリス−HCl、PH7.5
7mM MgCl2
7mM 2−メルカプトエタノール
60mM NaCl
0.01% 牛血清アルブミン
1.0μg λ−DNA
反応液を1%アガローススラブゲルに重層し、
10V/cmの定電圧下で約1時間から2時間電気泳
動を行なう。電気泳動用緩衝液は90mMトリス−
ほう酸緩衝液(PH8.3)2.5mM EDTAを用い
る。
10V/cmの定電圧下で約1時間から2時間電気泳
動を行なう。電気泳動用緩衝液は90mMトリス−
ほう酸緩衝液(PH8.3)2.5mM EDTAを用い
る。
ゲルに前もつて0.5μg/mlのエチジウムブロマ
イドを含ませておくことにより、UV照射で
DNAのバンドが検出可能である。DNAフラグメ
ントのバンドの数と量が変化しなくなつた時を終
点とする。
イドを含ませておくことにより、UV照射で
DNAのバンドが検出可能である。DNAフラグメ
ントのバンドの数と量が変化しなくなつた時を終
点とする。
活性の定義は37℃で1時間に1μgのλ−DNA
を完全に分解する酵素活性を1単位とする。
を完全に分解する酵素活性を1単位とする。
本発明により得られた新規制限酵素は以下のよ
うな理化学的性質を持つている。
うな理化学的性質を持つている。
(1) 作用および基質特異性:
本酵素は二本鎖デオキシリボ核酸中の
(式中A、T、C、Gは前述したとおりであ
る)を認識し、かつこれを矢印の位置で切断す
る酵素である。
る)を認識し、かつこれを矢印の位置で切断す
る酵素である。
本発明の新規制限酵素の認識部位の決定は以
下のように行なつた。
下のように行なつた。
本制限酵素はアデノバイラス・タイプ2
DNAを8カ所切断したが、φ×174RF DNA
およびSV40 DNAは分解しなかつた。また
Dam+λ−DNAとDam-λ−DNAを20カ所以上
切断したが、生成フラグメントの数が、
Dam+λ−DNAの場合には3本少なかつた。さ
らにDam-pBR322 DNAは1カ所切断したが
Dam+pBR322 DNAは切断されなかつた。こ
れらの結果よりこの酵素の認識部位は大腸菌の
dam遺伝子により認識され、Aがメチル化を受
ける塩基配列5′−GATC−3′の一部が関係して
いると考えられた。Dam-pBR322を本制限酵
素とHind、Sal、Hinc、Pstのそれぞ
れの酵素と二重分解を行ない本制限酵素の
pBR322上の位置を調べたところ1700bp(ベー
スペアー)付近であることが明らかになつた。
その付近のGATC配列を探したところ1664よ
り1671にTCCGGATCの配列があつた。した
がつて本制限酵素はTCCGGAを認識している
ことが推測される。次にアデノバイラス・タイ
プ2 DNA、φ×174RF DNA、SV40
DNA、λ−DNA中のTCCGGAの数を調べた
ところ8、0、0、24と実験結果と一致した。
λ−DNAの24カ所の内3カ所のTCCGGAのA
がdam遺伝子によりメチル化を受けていて切断
されないことも明らかになつた。
DNAを8カ所切断したが、φ×174RF DNA
およびSV40 DNAは分解しなかつた。また
Dam+λ−DNAとDam-λ−DNAを20カ所以上
切断したが、生成フラグメントの数が、
Dam+λ−DNAの場合には3本少なかつた。さ
らにDam-pBR322 DNAは1カ所切断したが
Dam+pBR322 DNAは切断されなかつた。こ
れらの結果よりこの酵素の認識部位は大腸菌の
dam遺伝子により認識され、Aがメチル化を受
ける塩基配列5′−GATC−3′の一部が関係して
いると考えられた。Dam-pBR322を本制限酵
素とHind、Sal、Hinc、Pstのそれぞ
れの酵素と二重分解を行ない本制限酵素の
pBR322上の位置を調べたところ1700bp(ベー
スペアー)付近であることが明らかになつた。
その付近のGATC配列を探したところ1664よ
り1671にTCCGGATCの配列があつた。した
がつて本制限酵素はTCCGGAを認識している
ことが推測される。次にアデノバイラス・タイ
プ2 DNA、φ×174RF DNA、SV40
DNA、λ−DNA中のTCCGGAの数を調べた
ところ8、0、0、24と実験結果と一致した。
λ−DNAの24カ所の内3カ所のTCCGGAのA
がdam遺伝子によりメチル化を受けていて切断
されないことも明らかになつた。
次に本発明の新規制限酵素の切断部位の決定
は以下のように行なつた。
は以下のように行なつた。
本制限酵素の認識部位を中央に持つた2回転
対称形のオリゴヌクレオチドd
(GTTCCGGAAC)を固相法により合成しポ
リヌクレオチドキナーゼと〔γ− 32P〕アデノ
シン三リン酸を用いて5′末端に放射性リン酸を
付加する。このオリゴヌクレオチドをアニーリ
ングさせて二本鎖DNAとした後、本酵素で切
断しDEAE−セルロース薄層プレート(マシエ
レイ・ナゲル社製品)により分析した。この
時、生成物として鎖長三塩基(5′−pGTT)の
標識されたスポツトが検出された。
対称形のオリゴヌクレオチドd
(GTTCCGGAAC)を固相法により合成しポ
リヌクレオチドキナーゼと〔γ− 32P〕アデノ
シン三リン酸を用いて5′末端に放射性リン酸を
付加する。このオリゴヌクレオチドをアニーリ
ングさせて二本鎖DNAとした後、本酵素で切
断しDEAE−セルロース薄層プレート(マシエ
レイ・ナゲル社製品)により分析した。この
時、生成物として鎖長三塩基(5′−pGTT)の
標識されたスポツトが検出された。
このことから本酵素は
を認識し、矢印の位置で切断していると結論さ
れた。
れた。
(2) 至適酵素活性条件
(i) 至適反応温度:
本酵素の至適反応温度は60〜65℃であつ
た。
た。
(ii) 至適PH:
本酵素の至適PHは8.5であつた。
(iii) KCl、NaCl濃度:
本酵素の至適塩濃度はKCl、NaClとも150
mMであつた。
mMであつた。
(iv) MgCl2濃度:
MgCl2濃度が5mM〜60mMの存在下で酵
素反応が活性化される。
素反応が活性化される。
(v) 安定PH:
本酵素の安定PHは6.0〜9.5である。
以下、本発明を実施例により具体的に説明する
が、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。
が、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。
実施例 1
アチネトバクター・カルコアセテイカス
(FERM BP−935)を下記表2に示す組成の培
地160で32℃にて10時間通気撹拌培養を行ない、
その後、冷却遠心機を用いて菌体を得る。培養液
160から湿重量にして約1280gの菌体が得られ
た。
(FERM BP−935)を下記表2に示す組成の培
地160で32℃にて10時間通気撹拌培養を行ない、
その後、冷却遠心機を用いて菌体を得る。培養液
160から湿重量にして約1280gの菌体が得られ
た。
表 2
ポリペプトン 10g
イーストエキス 5g
グルコース 1g
NaCl 5g
脱イオン水 1
PH 7.2
得られた菌体の内、350gの菌体を700mlの抽出
緩衝液(10mMリン酸カリウム緩衝液、PH7.5、
10mM2−メルカプトエタノール)に懸濁し、超
音波破砕機を用いて破砕後、100000×gで1時間
遠心分離を行ない、残渣を除去、抽出液を得た。
緩衝液(10mMリン酸カリウム緩衝液、PH7.5、
10mM2−メルカプトエタノール)に懸濁し、超
音波破砕機を用いて破砕後、100000×gで1時間
遠心分離を行ない、残渣を除去、抽出液を得た。
この抽出液に硫酸アンモニウムを70%飽和にな
るように加え、沈殿物を遠心分離にて集め、緩衝
液A(10mMリン酸カリウム緩衝液、PH7.5、10m
M2−メルカプトエタノール、5%グリセロール)
に溶解後、同緩衝液Aで一晩透析を行なつた。
るように加え、沈殿物を遠心分離にて集め、緩衝
液A(10mMリン酸カリウム緩衝液、PH7.5、10m
M2−メルカプトエタノール、5%グリセロール)
に溶解後、同緩衝液Aで一晩透析を行なつた。
次に透析内液を、予め緩衝液Aで平衡化させて
おいたホスホセルロースP11(ワツトマン社製)
のカラム(300ml)に吸着させ、緩衝液Aで洗浄
後0〜1.0Mの塩化カリウムの直線濃度勾配を持
つ緩衝液Aで溶出させると0.65〜0.70Mの塩化カ
リウム濃度画分に制限酵素活性が検出できた。
おいたホスホセルロースP11(ワツトマン社製)
のカラム(300ml)に吸着させ、緩衝液Aで洗浄
後0〜1.0Mの塩化カリウムの直線濃度勾配を持
つ緩衝液Aで溶出させると0.65〜0.70Mの塩化カ
リウム濃度画分に制限酵素活性が検出できた。
次にこの活性画分を合わせ、緩衝液Aで一晩透
析後、透析内液を、予め緩衝液Aで平衡化させて
おいたDEAM−セルロースDE52(ワツトマン社
製)のカラム(10ml)に吸着させ、緩衝液Aで洗
浄後、0〜1.0Mの塩化カリウムの直線濃度勾配
を持つ緩衝液Aで溶出させると0.20〜0.25Mの塩
化カリウム濃度画分に制限酵素活性が検出でき
た。
析後、透析内液を、予め緩衝液Aで平衡化させて
おいたDEAM−セルロースDE52(ワツトマン社
製)のカラム(10ml)に吸着させ、緩衝液Aで洗
浄後、0〜1.0Mの塩化カリウムの直線濃度勾配
を持つ緩衝液Aで溶出させると0.20〜0.25Mの塩
化カリウム濃度画分に制限酵素活性が検出でき
た。
次に得られた活性画分を合わせ緩衝液Aで透析
後、透析内液を予め緩衝液Aで平衡化させておい
たヘパリン−セフアロースCL−6B(フアルマシ
ア社製)のカラム(4ml)に吸着させ、0.7Mの
塩化カリウムを含む緩衝液Aで洗浄後、1.0Mの
塩化カリウムを含む緩衝液Aにて溶出させた。
後、透析内液を予め緩衝液Aで平衡化させておい
たヘパリン−セフアロースCL−6B(フアルマシ
ア社製)のカラム(4ml)に吸着させ、0.7Mの
塩化カリウムを含む緩衝液Aで洗浄後、1.0Mの
塩化カリウムを含む緩衝液Aにて溶出させた。
次に得られた活性画分を合わせ緩衝液Aで透析
後、透析内液を予め緩衝液Aで平衡化させておい
たアミノヘキシルアガロース(ベセスダ社製)の
カラム(4ml)に吸着させ、緩衝液Aで洗浄後、
0〜1.5Mの塩化カリウムの直線濃度勾配を持つ
緩衝液Aで溶出させると0.32〜0.65Mの塩化カリ
ウム濃度画分に制限酵素活性が検出できた。
後、透析内液を予め緩衝液Aで平衡化させておい
たアミノヘキシルアガロース(ベセスダ社製)の
カラム(4ml)に吸着させ、緩衝液Aで洗浄後、
0〜1.5Mの塩化カリウムの直線濃度勾配を持つ
緩衝液Aで溶出させると0.32〜0.65Mの塩化カリ
ウム濃度画分に制限酵素活性が検出できた。
次に得られた活性画分を合わせ、ポリエチレン
グライコールにて濃縮を行ない、濃縮液に等量の
グリセロールを加え、制限酵素の最終標品を得
た。
グライコールにて濃縮を行ない、濃縮液に等量の
グリセロールを加え、制限酵素の最終標品を得
た。
この酵素標品には非特異的なDNA分解酵素お
よびホスフアターゼは夾雑していなかつた。
よびホスフアターゼは夾雑していなかつた。
以上、述べた方法により350gの湿菌体より
3000単位の活性単位が得られた。
3000単位の活性単位が得られた。
以上詳細に説明したとおり、本発明により従来
知られていなかつた基質特異性を有する新規制限
酵素およびその工業的に有利な製造法が提供され
た。
知られていなかつた基質特異性を有する新規制限
酵素およびその工業的に有利な製造法が提供され
た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 下記の理化学的性質を有する新規制限酵素。 (イ) 作用および基質特異性: 二本鎖デオキシリボ核酸中の塩基配列 を認識し、かつこれを矢印の位置で切断する。 (式中、Aはアデノシン、Gはグアノシン、T
はチミジン、Cはシチジンを示す) (ロ) 至適PH:8.5 (ハ) 安定PH:6.0〜9.5 (ニ) 至適反応温度:60〜65℃ (ホ) 分子量:37000±8000 2 アチネトバクター属に属する下記の理化学的
性質を有する新規制限酵素生産菌を栄養培地で培
養し、培養物より上記新規制限酵素を採取するこ
とを特徴とする下記の理化学的性質を有する新規
制限酵素の製造法。 (イ) 作用および基質特異性: 二本鎖デオキシリボ核酸中の塩基配列 を認識し、かつこれを矢印の位置で切断する。 (式中、Aはアデノシン、Gはグアノシン、T
はチミジン、Cはシチジンを示す) (ロ) 至適PH:8.5 (ハ) 安定PH:6.0〜9.5 (ニ) 至適反応温度:60〜65℃ (ホ) 分子量:37000±8000 3 アチネトバクター属に属する新規制限酵素生
産菌がアチネトバクター・カルコアセテイカスで
ある特許請求の範囲第2項記載の製造法。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60268896A JPS62126972A (ja) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | 新規制限酵素及びその製造法 |
GB8625652A GB2183657B (en) | 1985-11-28 | 1986-10-27 | New restriction enzyme and process for producing the same |
DE19863640382 DE3640382A1 (de) | 1985-11-28 | 1986-11-26 | Neues restriktionsenzym und verfahren zu seiner herstellung |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60268896A JPS62126972A (ja) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | 新規制限酵素及びその製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62126972A JPS62126972A (ja) | 1987-06-09 |
JPS649000B2 true JPS649000B2 (ja) | 1989-02-15 |
Family
ID=17464770
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60268896A Granted JPS62126972A (ja) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | 新規制限酵素及びその製造法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62126972A (ja) |
DE (1) | DE3640382A1 (ja) |
GB (1) | GB2183657B (ja) |
-
1985
- 1985-11-28 JP JP60268896A patent/JPS62126972A/ja active Granted
-
1986
- 1986-10-27 GB GB8625652A patent/GB2183657B/en not_active Expired
- 1986-11-26 DE DE19863640382 patent/DE3640382A1/de active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB2183657B (en) | 1989-10-04 |
GB2183657A (en) | 1987-06-10 |
JPS62126972A (ja) | 1987-06-09 |
GB8625652D0 (en) | 1986-11-26 |
DE3640382A1 (de) | 1987-06-04 |
DE3640382C2 (ja) | 1989-06-22 |
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Legal Events
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---|---|---|---|
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