JPH0667318B2 - クラスｉｉ−制限酵素、その作成法及び、相補的二本鎖ｄｎａ−配列の認識及び切断法 - Google Patents
クラスｉｉ−制限酵素、その作成法及び、相補的二本鎖ｄｎａ−配列の認識及び切断法Info
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- JPH0667318B2 JPH0667318B2 JP3101183A JP10118391A JPH0667318B2 JP H0667318 B2 JPH0667318 B2 JP H0667318B2 JP 3101183 A JP3101183 A JP 3101183A JP 10118391 A JP10118391 A JP 10118391A JP H0667318 B2 JPH0667318 B2 JP H0667318B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規のクラスＩＩ−制限
酵素ＳｗａＩ、その作成法及びその使用に関する。
酵素ＳｗａＩ、その作成法及びその使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】クラスＩＩ−制限酵素は、特定のＤＮＡ
−配列を認識し、切断することのできるエンドデオキシ
リボヌクレアーゼである。この場合標的配列中の２つの
ホスホジエステル結合、すなわち各ポリヌクレオチド鎖
につき１つずつを加水分解する。従ってクラスＩＩ−制
限酵素はＤＮＡ−分子の解析にとって重要である。多く
のＤＮＡ−配列に対して特異的なクラスＩＩ−制限酵素
はすでに公知であるが、ＤＮＡ−配列に対して特異的で
また公知の制限酵素のいずれからも従来認識し得ない別
のクラスＩＩ−制限酵素を作成することの必要性はなお
依然して存在する。
−配列を認識し、切断することのできるエンドデオキシ
リボヌクレアーゼである。この場合標的配列中の２つの
ホスホジエステル結合、すなわち各ポリヌクレオチド鎖
につき１つずつを加水分解する。従ってクラスＩＩ−制
限酵素はＤＮＡ−分子の解析にとって重要である。多く
のＤＮＡ−配列に対して特異的なクラスＩＩ−制限酵素
はすでに公知であるが、ＤＮＡ−配列に対して特異的で
また公知の制限酵素のいずれからも従来認識し得ない別
のクラスＩＩ−制限酵素を作成することの必要性はなお
依然して存在する。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、従来
この種のいずれの酵素からも認識することのできなかっ
た配列を特異的に認識し、切断することのできる新規の
制限酵素を提供することを根本課題とする。
この種のいずれの酵素からも認識することのできなかっ
た配列を特異的に認識し、切断することのできる新規の
制限酵素を提供することを根本課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この課題は本発明によれ
ば、認識配列及び標識によって特定された切断位置：
ば、認識配列及び標識によって特定された切断位置：
【０００５】
【化４】
【０００６】を有するクラスＩＩ−制限酵素によって解
決される。
決される。
【０００７】本発明による新規制限酵素（以後ＳｗａＩ
と記載する）は２５℃の最適温度を有する。この酵素は
トリス／ＨＣｌ−緩衝液（ＤＴＥ（ジチオトレイトー
ル）１．０ｍモル／ｌ、ＭｇＣｌ１０ｍモル／ｌ及びＮ
ａＣｌ１００ｍモル／ｌを有する）５０ｍモル／ｌ中で
ｐＨ７．０〜ｐＨ８．０間で良好な活性を有する。最適
ｐＨはｐＨ７．５である。
と記載する）は２５℃の最適温度を有する。この酵素は
トリス／ＨＣｌ−緩衝液（ＤＴＥ（ジチオトレイトー
ル）１．０ｍモル／ｌ、ＭｇＣｌ１０ｍモル／ｌ及びＮ
ａＣｌ１００ｍモル／ｌを有する）５０ｍモル／ｌ中で
ｐＨ７．０〜ｐＨ８．０間で良好な活性を有する。最適
ｐＨはｐＨ７．５である。
【０００８】認識配列はウイルス：ＳＶ４０及びアデノ
２、ファージ：ラムダ、Ｔ７及びファイＸ１７４、及び
ファージ誘導体：Ｍ１３ｍｐ７並びにプラスミドｐＢＲ
３２２及びｐＢＲ３２８の各ＤＮＡを完全に消化するこ
とによって確認することができる。これらのＤＮＡ−分
子はＳｗａＩで処理される。
２、ファージ：ラムダ、Ｔ７及びファイＸ１７４、及び
ファージ誘導体：Ｍ１３ｍｐ７並びにプラスミドｐＢＲ
３２２及びｐＢＲ３２８の各ＤＮＡを完全に消化するこ
とによって確認することができる。これらのＤＮＡ−分
子はＳｗａＩで処理される。
【０００９】第Ｉ表は次の配列：５′−ＡＴＴＴＡＡＡ
Ｔ−３′ を認識する酵素に関し、実験的に観察された切断位置特
異性を、コンピュータで決定された切断位置特異性と比
較して示すものである。
Ｔ−３′ を認識する酵素に関し、実験的に観察された切断位置特
異性を、コンピュータで決定された切断位置特異性と比
較して示すものである。
【００１０】
【表１】
【００１１】酵素の認識配列内の切断位置をＭ１３−誘
導体で決定するが、この場合誘導体は普遍的な配列決定
プライマー［メッシング（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇ）その他
の論文（１９８１）、“Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．”９、３０９〜３２１］の結合位置に対して約３０
〜２００塩基の間隔でこの認識配列を有する。まずＭ１
３−誘導体の一本鎖ＤＮＡで普遍的な配列決定プライマ
ーを用いてチエインターミネーター法により配列反応を
行う（サンガー（Ｆ．Ｓａｎｇｅｒ）その他、（１９７
７）、“Ｐｒｏｓ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ”、７４、５６０〜５６４、メッシング（Ｊ．Ｍｅｓ
ｓｉｎｇ）その他、（１９８１）、“Ｎｕｃｌ．Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ．”、９、３０９〜３２１）。
導体で決定するが、この場合誘導体は普遍的な配列決定
プライマー［メッシング（Ｊ．Ｍｅｓｓｉｎｇ）その他
の論文（１９８１）、“Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．”９、３０９〜３２１］の結合位置に対して約３０
〜２００塩基の間隔でこの認識配列を有する。まずＭ１
３−誘導体の一本鎖ＤＮＡで普遍的な配列決定プライマ
ーを用いてチエインターミネーター法により配列反応を
行う（サンガー（Ｆ．Ｓａｎｇｅｒ）その他、（１９７
７）、“Ｐｒｏｓ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ”、７４、５６０〜５６４、メッシング（Ｊ．Ｍｅｓ
ｓｉｎｇ）その他、（１９８１）、“Ｎｕｃｌ．Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ．”、９、３０９〜３２１）。
【００１２】これと並行して配列決定プライマーを、Ｔ
４−ポリヌクレオチド−キナーゼ及び［γ−32Ｐ］ＡＴ
Ｐでその５′−末端を放射能で標識する。５′−末端を
標識した配列決定プライマーを一本鎖Ｍ１３−ＤＮＡに
混成した後、ＤＮＡポリメラーゼＩ、（クレノウ酵素）
及び、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰから
なるデオキシヌクレオチド三リン酸混合物と取込反応を
実施することにより、部分的に二本鎖ＤＮＡを作成す
る。新たに合成された鎖が５′−末端を放射能で標識さ
れているこのＤＮＡを、制限酵素ＳｇｒＡＩで切断す
る。切断産物の半分を付加的に更にＴ４ＤＮＡポリメラ
ーゼで４種のデオキシヌクレオチド三リン酸のすべてか
らなる混合物の存在において処理することにより、平滑
なＤＮＡ−末端を得る。
４−ポリヌクレオチド−キナーゼ及び［γ−32Ｐ］ＡＴ
Ｐでその５′−末端を放射能で標識する。５′−末端を
標識した配列決定プライマーを一本鎖Ｍ１３−ＤＮＡに
混成した後、ＤＮＡポリメラーゼＩ、（クレノウ酵素）
及び、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰから
なるデオキシヌクレオチド三リン酸混合物と取込反応を
実施することにより、部分的に二本鎖ＤＮＡを作成す
る。新たに合成された鎖が５′−末端を放射能で標識さ
れているこのＤＮＡを、制限酵素ＳｇｒＡＩで切断す
る。切断産物の半分を付加的に更にＴ４ＤＮＡポリメラ
ーゼで４種のデオキシヌクレオチド三リン酸のすべてか
らなる混合物の存在において処理することにより、平滑
なＤＮＡ−末端を得る。
【００１３】反応生成物の解析は配列決定ゲル（尿素８
モル／ｌ、５％ポリアクリルアミド）での電気泳動及び
その後のオートラジオグラフィにより行う。その結果の
解説はブラウン（Ｎ．Ｌ．Ｂｒｏｗｎ）及びスミス
（Ｍ．Ｓｍｉｔｈ）（“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ”、６５（１９８０）、３９１〜４０
１）によって行われている。放射能で標識した断片の鎖
長を配列リーダと比較することによって切断位置を決定
する。付加的にＴ４ＤＮＡポリメラーゼで処理したプロ
ーブはＳｗａＩで切断されたプローブと比較した際各バ
ンドの同一鎖長を示す。これによりＳｗａＩは平滑なＤ
ＮＡ−末端を生じることが明らかである。ＳｗａＩの切
断は従って次の特異性を有する標識配列内で行われる：
モル／ｌ、５％ポリアクリルアミド）での電気泳動及び
その後のオートラジオグラフィにより行う。その結果の
解説はブラウン（Ｎ．Ｌ．Ｂｒｏｗｎ）及びスミス
（Ｍ．Ｓｍｉｔｈ）（“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌｏｇｙ”、６５（１９８０）、３９１〜４０
１）によって行われている。放射能で標識した断片の鎖
長を配列リーダと比較することによって切断位置を決定
する。付加的にＴ４ＤＮＡポリメラーゼで処理したプロ
ーブはＳｗａＩで切断されたプローブと比較した際各バ
ンドの同一鎖長を示す。これによりＳｗａＩは平滑なＤ
ＮＡ−末端を生じることが明らかである。ＳｗａＩの切
断は従って次の特異性を有する標識配列内で行われる：
【００１４】
【化５】
【００１５】実験的に決定された切断位置の数は、配列
５′−ＡＴＴＴＡＡＡＴ−３′ に関し種々のＤＮＡでコンピュータ解析することによっ
て得られた切断位置の数と一致する（第Ｉ表）。付加的
にこれらのデータを更に“Ｇｅｎｅ”、１０（１９８
０）３５７〜３７０からの各表と比較した。
５′−ＡＴＴＴＡＡＡＴ−３′ に関し種々のＤＮＡでコンピュータ解析することによっ
て得られた切断位置の数と一致する（第Ｉ表）。付加的
にこれらのデータを更に“Ｇｅｎｅ”、１０（１９８
０）３５７〜３７０からの各表と比較した。
【００１６】ＳｗａＩは、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ）属のスタフィロコッカス・ワルネリ
（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ｗａｒｎｅｒｉ）種
の微生物、特にスタフィロコッカス・ワルネリＤＳＭ５
８７２を培養し、この酵素を細胞から得ることによっ
て、作成することができる。微生物スタフィロコッカス
・ワルネリはドイツ微生物寄託局（ＤＳＭ）（Ｍａｓｃ
ｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇｌ６、３３００Ｂｒａｕｎｓｃ
ｈｗｅｉｇ、ＢＲＤ在）に寄託され、寄託番号ＤＳＭ５
８７２を有する。
ｏｃｏｃｃｕｓ）属のスタフィロコッカス・ワルネリ
（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ｗａｒｎｅｒｉ）種
の微生物、特にスタフィロコッカス・ワルネリＤＳＭ５
８７２を培養し、この酵素を細胞から得ることによっ
て、作成することができる。微生物スタフィロコッカス
・ワルネリはドイツ微生物寄託局（ＤＳＭ）（Ｍａｓｃ
ｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇｌ６、３３００Ｂｒａｕｎｓｃ
ｈｗｅｉｇ、ＢＲＤ在）に寄託され、寄託番号ＤＳＭ５
８７２を有する。
【００１７】この作成には通常の生化学精製法を使用す
ることができ、この場合その都度得られた分画で酵素の
存在を、その認識配列の切断により容易に検出すること
ができる。基質としては例えばアデノ２−ＤＮＡが適し
ている。得られたＤＮＡ−断片はアガロースゲル内で断
片分離に常用の緩衝系において臭化エチジウムの存在で
電気泳動的に分離する。
ることができ、この場合その都度得られた分画で酵素の
存在を、その認識配列の切断により容易に検出すること
ができる。基質としては例えばアデノ２−ＤＮＡが適し
ている。得られたＤＮＡ−断片はアガロースゲル内で断
片分離に常用の緩衝系において臭化エチジウムの存在で
電気泳動的に分離する。
【００１８】酵素を作成するために使用した微生物はＤ
ｉｆｃｏ社製の脳−心臓−浸出培地中で好気的に成長さ
せる。最適の成長条件は３７℃、ｐＨ６．５〜７．５で
ある。倍加時間は約３時間である。
ｉｆｃｏ社製の脳−心臓−浸出培地中で好気的に成長さ
せる。最適の成長条件は３７℃、ｐＨ６．５〜７．５で
ある。倍加時間は約３時間である。
【００１９】酵素を分離し、通常の化学的及び機械的方
法により、例えば高圧分散、超音波又は酵素的破壊によ
って精製する。本発明による方法の１つの優れた実施態
様では細胞をフレンチプレスを介して破壊する。上澄み
の他の精製はアフィニティ−クロマトグラフィ及びイオ
ン交換クロマトグラフィを介して実施するのが有利であ
る。アフィニティクロマトグラフィ用の材料としては例
えばヘパリン−セファロースＣＬ−６Ｂ（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ社製）が適当である。適当な陽イオン交換体は例
えばホスホ−セルロース（Ｗｈａｔｍａｎ社製）であ
る。陰イオン交換体としてはＤＥＡＣファスト−フロー
（ＤＥＡＣ ｆａｓｔ−ｆｌｏｗ）の商品名で市販され
ている生成物（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）が適してい
る。しかし当業者に公知の他のクロマトグラフィ材料も
また適している。
法により、例えば高圧分散、超音波又は酵素的破壊によ
って精製する。本発明による方法の１つの優れた実施態
様では細胞をフレンチプレスを介して破壊する。上澄み
の他の精製はアフィニティ−クロマトグラフィ及びイオ
ン交換クロマトグラフィを介して実施するのが有利であ
る。アフィニティクロマトグラフィ用の材料としては例
えばヘパリン−セファロースＣＬ−６Ｂ（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ社製）が適当である。適当な陽イオン交換体は例
えばホスホ−セルロース（Ｗｈａｔｍａｎ社製）であ
る。陰イオン交換体としてはＤＥＡＣファスト−フロー
（ＤＥＡＣ ｆａｓｔ−ｆｌｏｗ）の商品名で市販され
ている生成物（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）が適してい
る。しかし当業者に公知の他のクロマトグラフィ材料も
また適している。
【００２０】
【実施例】次の各実施例により本発明を更に詳述する。
【００２１】例 １ スタフィロコッカス・ワルネリＤＳＭ５８７２を３７℃
で１２〜１５時間培養し、対数期の終りに収集する。培
地としては脳−心臓培地（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｍ
ｅｄｉｕｍ、Ｄｉｆｃｏ社製）を使用する。
で１２〜１５時間培養し、対数期の終りに収集する。培
地としては脳−心臓培地（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｍ
ｅｄｉｕｍ、Ｄｉｆｃｏ社製）を使用する。
【００２２】細胞パスタ（生重量３０ｇ）を、プロテア
ーゼインヒビターを含む緩衝液Ａ（トリス−ＨＣｌ４０
ｍモル／ｌ、ｐＨ８．０、ＥＤＴＡ０．１ｍモル／ｌ、
２−メルカプトエタノール７ｍモル／ｌ）２．４容量に
再度懸濁させる。引続き細胞をフレンチプレスの反復工
程によって２３，０００ｌｂ／ｉｎ2で破壊し、沈殿を
分離する。上澄みにＮＨ4Ｃｌを加える（最終濃度０．
１モル／ｌ）。ポリミン−沈殿によって核酸を除去す
る。引続き遠心分離した上澄みをヘパリン−セファロー
スカラムで分画する。溶出するためＮａＣｌ０〜１モル
／ｌの勾配を使用する。ＳｗａＩはＮａＣｌ０．４〜
０．６モル／ｌの分画中に認められる。活性分画を緩衝
液Ｂ（トリス−ＨＣｌ４０ｍモル／ｌ、ｐＨ８．０；Ｅ
ＤＴＡ０．１ｍモル／ｌ；２−メルカプトエタノール７
ｍモル／ｌ；１０％（ｗ／ｖ）グリセリン）に対して平
衡化し、ＤＥＡＥ−ファスト−フローカラムで分画す
る。溶出するためＮａＣｌ０〜０．５モル／ｌの勾配を
使用する。活性分画を緩衝液Ｂに対して透析する。
ーゼインヒビターを含む緩衝液Ａ（トリス−ＨＣｌ４０
ｍモル／ｌ、ｐＨ８．０、ＥＤＴＡ０．１ｍモル／ｌ、
２−メルカプトエタノール７ｍモル／ｌ）２．４容量に
再度懸濁させる。引続き細胞をフレンチプレスの反復工
程によって２３，０００ｌｂ／ｉｎ2で破壊し、沈殿を
分離する。上澄みにＮＨ4Ｃｌを加える（最終濃度０．
１モル／ｌ）。ポリミン−沈殿によって核酸を除去す
る。引続き遠心分離した上澄みをヘパリン−セファロー
スカラムで分画する。溶出するためＮａＣｌ０〜１モル
／ｌの勾配を使用する。ＳｗａＩはＮａＣｌ０．４〜
０．６モル／ｌの分画中に認められる。活性分画を緩衝
液Ｂ（トリス−ＨＣｌ４０ｍモル／ｌ、ｐＨ８．０；Ｅ
ＤＴＡ０．１ｍモル／ｌ；２−メルカプトエタノール７
ｍモル／ｌ；１０％（ｗ／ｖ）グリセリン）に対して平
衡化し、ＤＥＡＥ−ファスト−フローカラムで分画す
る。溶出するためＮａＣｌ０〜０．５モル／ｌの勾配を
使用する。活性分画を緩衝液Ｂに対して透析する。
【００２３】引続きこれを、緩衝液Ｂで平衡化したホス
ホセルロース−カラムに装入する。溶出のため緩衝液Ｂ
でＮａＣｌ０〜１モル／ｌの勾配を使用する。ＳｗａＩ
はＮａＣｌ０．３〜０．５モル／ｌの分画中に認められ
る。
ホセルロース−カラムに装入する。溶出のため緩衝液Ｂ
でＮａＣｌ０〜１モル／ｌの勾配を使用する。ＳｗａＩ
はＮａＣｌ０．３〜０．５モル／ｌの分画中に認められ
る。
【００２４】各活性分画を収集し、貯蔵緩衝液（トリス
−ＨＣｌ２０ｍモル／ｌ、ｐＨ８．０；２−メルカプト
エタノール１０ｍモル／ｌ、ＮａＣｌ１００ｍモル／
ｌ、ＥＤＴＡ０．１ｍモル／ｌ及び５０％（ｖ／ｖ）グ
リセリン）に対して透析する。 例 ２ 活性の測定 酵素単位の特定：ＳｗａＩ１Ｕは、最終容量２５μｌで
アデノ２−ＤＮＡ１μｇを２５℃で１時間以内に切断す
る。
−ＨＣｌ２０ｍモル／ｌ、ｐＨ８．０；２−メルカプト
エタノール１０ｍモル／ｌ、ＮａＣｌ１００ｍモル／
ｌ、ＥＤＴＡ０．１ｍモル／ｌ及び５０％（ｖ／ｖ）グ
リセリン）に対して透析する。 例 ２ 活性の測定 酵素単位の特定：ＳｗａＩ１Ｕは、最終容量２５μｌで
アデノ２−ＤＮＡ１μｇを２５℃で１時間以内に切断す
る。
【００２５】インキュベーション緩衝液（トリス−ＨＣ
ｌ５００ｍモル／ｌ、ｐＨ７．５、３７℃、塩化マグネ
シウム１００ｍモル／ｌ、ＮａＣｌ１モル／ｌ及びＤＴ
Ｅ１０ｍモル／ｌ）２．５μｌの混合物に、水１７．９
μｌ及びアデノ２−ＤＮＡ（光学密度：５．６ＯＤ／ｍ
ｌ）３．６μｌ並びにＳｗａＩ−溶液（１Ｕ／μｌ）１
μｌを加える。この溶液を２５℃で１時間インキュベー
トし、氷上で冷却し、尿素７ｍモル／ｌ、２０％（ｗ／
ｖ）サッカロース、ＥＤＴＡ６０ｍモル／ｌ及び０．０
１％（ｗ／ｖ）ブロムフェノールブルーからなる停止−
試薬５μｌを加える。引続き分離を電気泳動法により１
％アガロースゲル中で１００Ｖで３〜４時間行う。得ら
れたバンドをＤＮＡ長さの基準と比較して同定する。
ｌ５００ｍモル／ｌ、ｐＨ７．５、３７℃、塩化マグネ
シウム１００ｍモル／ｌ、ＮａＣｌ１モル／ｌ及びＤＴ
Ｅ１０ｍモル／ｌ）２．５μｌの混合物に、水１７．９
μｌ及びアデノ２−ＤＮＡ（光学密度：５．６ＯＤ／ｍ
ｌ）３．６μｌ並びにＳｗａＩ−溶液（１Ｕ／μｌ）１
μｌを加える。この溶液を２５℃で１時間インキュベー
トし、氷上で冷却し、尿素７ｍモル／ｌ、２０％（ｗ／
ｖ）サッカロース、ＥＤＴＡ６０ｍモル／ｌ及び０．０
１％（ｗ／ｖ）ブロムフェノールブルーからなる停止−
試薬５μｌを加える。引続き分離を電気泳動法により１
％アガロースゲル中で１００Ｖで３〜４時間行う。得ら
れたバンドをＤＮＡ長さの基準と比較して同定する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マックス レヒナー ドイツ連邦共和国 ペンツベルク フィッ シュハーバーシュトラーセ 61 (72)発明者 ブルーノ フライ ドイツ連邦共和国 ペンツベルク ホッホ フェルトシュトラーセ 50 (72)発明者 ミヒャエル ヤルシュ ドイツ連邦共和国 バート ハイルブルン ウンターカルプフゼー 11
Claims (3)
- 【請求項１】 スタフィロコッカス・ワルネリＤＳＭ５
８７２から得られ、認識配列及び標識によって特定され
た切断位置： 【化１】 を有しかつ２５℃の最適温度及びｐＨ７．５の最適ｐＨ
を有するクラスＩＩ−制限酵素。 - 【請求項２】 スタフィロコッカス・ワルネリＤＳＭ５
８７２から得られ、認識配列及び標識によって特定され
た切断位置： 【化６】 を有しかつ２５℃の最適温度及びｐＨ７．５の最適ｐＨ
を有するクラスＩＩ−制限酵素を得るに当り、スタフィ
ロコッカス・ワルネリＤＳＭ５８７２を培養し、酵素を
細胞から得ることを特徴とするクラスｉｉ−制限酵素の
作成法。 - 【請求項３】 スタフィロコッカス・ワルネリＤＳＭ５
８７２から得られ、認識配列及び標識によって特定され
た切断位置： 【化７】 を有しかつ２５℃の最適温度及びｐＨ７．５の最適ｐＨ
を有するクラスＩＩ−制限酵素を使用することを特徴と
する、相補的二本鎖ＤＮＡ−配列：５′ーＡＴＴＴＡＡ
ＡＴ−３′の認識及び切断法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4014524A DE4014524A1 (de) | 1990-05-07 | 1990-05-07 | Typ ii - restriktionsendonuklease swai |
| DE4014524.7 | 1990-05-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04228069A JPH04228069A (ja) | 1992-08-18 |
| JPH0667318B2 true JPH0667318B2 (ja) | 1994-08-31 |
Family
ID=6405825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3101183A Expired - Fee Related JPH0667318B2 (ja) | 1990-05-07 | 1991-05-07 | クラスｉｉ−制限酵素、その作成法及び、相補的二本鎖ｄｎａ−配列の認識及び切断法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5158878A (ja) |
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