JPS6353200B2

JPS6353200B2 -

Info

Publication number: JPS6353200B2
Application number: JP10812480A
Authority: JP
Inventors: Kenzo Tamai; Isamu Saikawa; Takashi Yasuda; Shohachi Murakami; Toyoo Maeda; Hisatsugu Tsuda; Hiroshi Sakai; Masatoshi Sugita; Yoshiko Yamamoto; Takashi Minami; Takako Hori
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Current assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1980-08-06
Filing date: 1980-08-06
Publication date: 1988-10-21
Also published as: JPS5732297A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な制癌性物質、更に詳細にはフソ
バクテリウム属に属する菌を培養し、この培養液
から得られる制癌性物質TF―150に関する。更に
また、本発明はこの制癌性物質TF―150を製造す
る方法並びにこれを含有する制癌剤に関する。近年、各種の癌患者の治療法において、宿主の
免疫機能を亢進させ、免疫機能の助けを借りなが
ら制癌効果を発現させる治療法が盛んとなつて来
た。斯る療法に使用される薬剤としては、各種細
菌の菌体、菌体培養物から得られる成分、あるい
は担子菌の子実体又はその培養菌体から得られる
多糖体が知られている。しかし、これらの薬剤は
効果、副作用及びその製造法等の点で未だ満足し
得るものではない。一方また、フソバクテリウム属に属する菌、例
えばフソバクテリウム・K031―3B、フソバクテ
リウム・フシフオミスＷ―12、フソバクテリウ
ム・ギランス1012及びフソバクテリウム・ヌクレ
アタム1010を培養して得た菌体及び上清液に関す
る報告みられる。〔口科誌，21，534〜539頁
（1972）、口科誌23，322〜333頁（1974）〕しかし
ながら、フソバクテリウム属に属する菌を培養し
て得られる培養液又は上清液から得られる成分並
びにその薬理作用については未だ研究されていな
い。そこで、本発明者は、フソバクテリウム属に属
する菌を培養し、その培養液から菌体を除去した
上清液について、その薬理作用を調べていたとこ
ろ、この上清液から採取される特定の成分が強い
制癌作用を有すること、しかもこれは、コロニー
形成抑制法においては癌細胞の集落形成阻止作用
は極めて小さく、殺細胞による制癌作用ではな
く、宿主介在性あるいは宿主の免疫力を亢進さ
せ、免疫力の助けを借りながら間接的に制癌作用
を発現させる作用を有するものであること、更に
この成分は毒性が極めて低いことを見出し、本発
明を完成した。本発明で利用される菌としては、フソバクテリ
ウム属に属するTF―150生産菌であればよく、フ
ソバクテリウム・ヌクレアタムが好適に挙げられ
る。例えば、フソバクテリウム・ヌクレアタム
TF―031（FARM―5077、ATCC―31647）の菌
株が利用される。フソバクテリウム・ヌクレアタムTF―031の菌
学的性状を記載すれば下記の如くである。 (1) 形態細胞の形：紡錘形（第１図）細胞の多形性の有無：なし運動性の有無：なし胞子の有無：なしグラム染色：グラム陰性抗酸性：陰性 (2) 培地における生育状態 TF―ａ寒天平板及び斜面培地外形：円形大きさ：約１mm 隆起：半球状構造：露滴状表面：平滑辺縁：平滑色：乳黄白色透明度：不透明 TF―ａ液体培地発育の程度：旺盛濁り：凝塊沈澱：なし表面の発育：なし、約５mmまでは発育なしガス：なし (3) 生理学的性質硫化水素の生成：＋硝酸塩の還元：− 酪酸の生成：＋インドールの生成：＋ウレアーゼ：− カタラーゼ：− デンプンの加水分解：− 酸素に対する態度：嫌気性アンモニアの生成：＋炭酸ガスの生成：＋生育の範囲：PH５〜8.5 温度30〜45℃ 糖からのガスの生成Ｌ―アラビノース（−）、Ｄ―キシロース
（−）、Ｄ―グルコース（−）、Ｄ―マンノース
（−）、Ｄ―フラクトース（−）、Ｄ―ガラクトー
ス（−）、麦芽糖（−）、シヨ糖（−）、トレハロ
ース（−）、ソルビツト（−）、マンニトール
（−）、イノシツト（−）、グリセリン（−）、デン
プン（−）以上の諸性状をバージーズ・マニユアル・オ
ブ・デイタミネイテイブ・バクテリオロジー第８
版に照して検討すると、本菌株はフソバクテリウ
ム・ヌクレアタム（Fusobacterium・
nucleatum）に酷似するので、これに属する。本発明の制癌性物質TF―150は、例えば次の如
く製造される。

【表】可溶部←分離

Claims

【特許請求の範囲】１フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―150生産菌を培養し、その培養液から得られる
次の性状を有する制癌性物質TF―150。 (イ) 白灰色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌の増殖を阻止
し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点を示さず、約110℃より分解を始
め、200℃以上で著しく分解する。 (ホ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収末
端に強い吸収があり、また255〜260nm近傍に
吸収ピークを示す。 (ヘ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは、
3600〜3200、2960〜2930、1670〜1640、1550、
1440〜1380、1240、1140〜1000、820cm^-1の近
傍に吸収帯を有する。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社製商
品名）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm溶出液：PH7.0の0.1モルリン酸緩衝液）
で分画すると260nmの紫外線吸光度測定に於い
て、ボイド・ボリウム通過付近から100mlおよ
び100から160mlにかけ吸収帯を有し、フエノー
ル硫酸法における490nmの吸光度測定に於いて
はボイド・ボリウム通過付近から150ml付近に
かけ吸収帯を有する。 (チ) TSK―GEL Ｇ―3000SW（東洋曹達株式会社
製商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）によ
る高速液体クロマトグラム（溶出液：PH7.0の
0.1モルリン酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）
で、220nmの紫外線吸光度測定に於いては、溶
媒先端部分、32分付近、48〜50分にかけてピー
クを有し、260nmでは溶媒先端部分、32分、48
〜50分付近にかけてピークを有する。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反応
は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：31.0〜34.0％、Ｈ：4.0〜4.4％、Ｎ：2.8
〜3.2％（ル）フエノール―硫酸法による糖の含有率は
約40.0〜55.0％（グルコース換算）およびロウ
リー・フオリン法による蛋白質の含有率は約
7.0〜14.0％（牛血清アルブミン換算）である。２フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―150生産菌がフソバクテリウム・ヌクレアタム
である特許請求の範囲第１項記載の制癌性物質
TF―150。３フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―150生産菌を培養して得た培養液又は上清液に
親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を採取し、
その沈澱物の水可溶成分の分離液を、あるいはこ
れを更に透析又は限外過した内液を第４級アン
モニウム塩で処理し、生ずる沈澱物を採取し、こ
れを食塩含有溶液にて溶出処理し、次いで該溶出
液に親水性有機溶媒を加え、生ずる沈澱物を採取
することを特徴とする制癌性物質TF―150の製造
法。４親水性有機溶媒がアルコールである特許請求
の範囲第３項記載の制癌性物質TF―150の製造
法。５親水性有機溶媒をその濃度が30〜70％になる
ように培養液又は上清液に加えることを特徴する
特許請求の範囲第３項又は第４項記載の制癌性物
質TF―150の製造法。６第４級アンモニウム塩処理をセチルピリジニ
ウムクロリドを用いて行なうことを特徴とする特
許請求の範囲第３項記載の制癌性物質TF―150の
製造法。７第４級アンモニウム塩処理をホウ酸緩衝液の
存在下に行なうことを特徴とする特許請求の範囲
第３項又は第６項記載の制癌性物質TF―150の製
造法。８食塩含有溶液が食塩、第４級アンモニウム塩
を含有する溶液である特許請求の範囲第３項記載
の制癌性物質TF―150の製造法。９フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―150生産菌を培養し、その培養液から得られる
次の性状、 (イ) 白灰色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌の増殖を阻止
し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点は示さず、約110℃より分解を始
め、200℃以上で著しく分解する。 (ホ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収末
端に強い吸収があり、また255〜260nm近傍に
吸収ピークを示す。 (ヘ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは
3600〜3200、2960〜2930、1670〜1640、1550、
1440〜1380、1240、1140〜1000、820cm^-1の近
傍に吸収帯を有する。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社製商
品名）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm、溶出液：PH7.0の0.1モルリン酸緩衝液）
で分画すると260nmの紫外線吸光度測定に於い
てボイド・ボリウム通過付近から100mlおよび
100から160mlにかけ吸収帯を有し、フエノール
硫酸法に於ける490nmの吸光度測定に於いては
ボイド・ボリウム通過付近から150ml付近にか
け吸収帯を有する。 (チ) TSK―GEL Ｇ―3000SW（東洋曹達株式会社
製商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）によ
る高速液体クロマトグラム（溶出液：PH7.0の
0.1モルリン酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）
で220nmの紫外線吸光度測定に於いては、溶媒
先端部分、32分付近、48〜50分にかけてピーク
を有し、260nmでは溶媒先端部分、32分、48〜
50分付近にかけてピークを有する。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反応
は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：31.0〜34.0％、Ｈ：4.0〜4.4％、Ｎ：2.8
〜3.2％（ル）フエノール硫酸法による糖の含有率は約
40.0〜55.0％（グルコース換算）およびロウリ
ー・フオリン法による蛋白質の含有率は約7.0
〜14.0％（牛血清アルブミン換算）である。を有する制癌性物質TF―150を含有することを特
徴とする制癌剤。