JPS648637B2

JPS648637B2 -

Info

Publication number: JPS648637B2
Application number: JP10812180A
Authority: JP
Inventors: Kenzo Tamai; Isamu Saikawa; Takashi Yasuda; Shohachi Murakami; Toyoo Maeda; Hisatsugu Tsuda; Hiroshi Sakai; Masatoshi Sugita; Yoshiko Yamamoto; Takashi Minami; Takako Hori
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Current assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1980-08-06
Filing date: 1980-08-06
Publication date: 1989-02-14
Also published as: JPS5732294A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な制癌性物質、更に詳細にはフソ
バクテリウム属に属する菌を培養し、この培養液
から得られる制癌性物質TF―133bに関する。更
にまた、本発明はこの制癌性物質TF―133bを製
造する方法並びにこれを含有する制癌剤に関す
る。近年、各種の癌患者の治療法において、宿主の
免疫機能を亢進させ、免疫機能の助けを借りなが
ら制癌効果を発現させる治療法が盛んとなつて来
た。斯る療法に使用される薬剤としては、各種細
菌の菌体、菌体培養物から得られる成分、あるい
は担子菌の子実体又はその培養菌体から得られる
多糖体が知られている。しかし、これらの薬剤は
効果、副作用及びその製造法等の点で未だ満足し
得るものではない。一方また、フソバクテリウム属に属する菌、例
えばフソバクテリウム・K031―3B、フソバクテ
リウム・フシフオミスＷ―12、フソバクテリウ
ム・ギランス1012及びフソバクテリウム・ヌクレ
アタム1010を培養して得た菌体及び上清液に関す
る報告がみられる。〔口科誌21，534頁〜539頁
（1972）、口科誌23，322〜333頁（1974）〕しかし
ながら、フソバクテリウム属に属する菌を培養し
て得られる培養液又は上清液から得られる成分並
びにその薬理作用については未だ研究されていな
い。そこで、本発明者はフソバクテリウム属に属す
る菌を培養し、その培養液から菌体を除去した上
清液について、その薬理作用を調べていたとこ
ろ、この上清液から採取される特定の成分が強い
制癌作用を有すること、しかもこれは、コロニー
形成抑制法においては癌細胞の集落形成阻止作用
は極めて小さく、殺細胞による制癌作用ではな
く、宿主介在性あるいは宿主の免疫力を亢進さ
せ、免疫力の助けを借りながら間接的に制癌作用
を発現させる作用を有するものであること、更に
この成分は毒性が極めて低いことを見出し、本発
明を完成した。本発明で利用される菌としては、フソバクテリ
ウム属に属するTF―133b生産菌であればよく、
フソバクテリウム・ヌクレアタムが好適に挙げら
れる。例えば、フソバクテリウム・ヌクレアタム
TF―031（FARM―5077，ATCC―31647）等の
菌株が利用される。フソバクテリウム・ヌクレアタムTF―031の菌
学的性状を記載すれば下記の如くである。 (1) 形態細胞の形：紡錘形（第１図）細胞の多形性の有無：なし運動性の有無：なし胞子の有無：なしグラム染色：グラム陰性抗酸性：陰性 (2) 培地における生育状態 TF―ａ寒天平板及び斜面培地外形：円形大きさ：約１mm 隆起：半球状構造：露滴状表面：平滑辺縁：平滑色：乳黄白色透明度：不透明 TF―ａ液体培地発育の程度：旺盛濁り：凝塊沈澱：なし表面の発育：なし、約５mmまでは発育なしガス：なし (3) 生理学的性質硫化水素の生成：＋硝酸塩の還元：− 酪酸の生成：＋インドールの生成：＋ウレアーゼ：− カタラーゼ：− デンプンの加水分解：− 酸素に対する態度：嫌気性アンモニアの生成：＋炭酸ガスの生成：＋生育の範囲：PH５〜8.5 温度30〜45℃ 糖からのガスの生成Ｌ―アラビノース（−）、Ｄ―キシロース
（−）、Ｄ―グルコース（−）、Ｄ―マンノ
ース（−）、Ｄ―フラクトース（−）、Ｄ―
ガラクトース（−）、麦芽糖（−）、シヨ糖
（−）、トレハロース（−）、ソルビツト
（−）、マンニトール（−）、イノシツト
（−）、グリセリン（−）、デンプン（−）以上の諸性状をバージーズ・マニユアル・オ
ブ・デイタミネイテイブ・バクテリオロジー第８
版に照して検討すると、本菌株はフソバクテリウ
ム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）
に酷似し、これに属する。つぎに、本発明の制癌性物質TF―133bの製造
法を図式化して説明すれば、次のとおりである。

【表】

【表】上記の製造法を具体的に示すと次の通りであ
る。 (a) 培養フソバクテリウム属に属する菌の培養は、通常
の嫌気性菌の培養によつて行なわれる。即ち、牛
の脳、心臓抽出物、各種ペプトン類等の窒素源；
イースト・エクストラクト等のビタミン源；塩化
ナトリウム等の無機塩類；グルコース、ラクトー
ス等の炭素源；Ｌ―シスチン、亜硫酸ナトリウ
ム、チオグリコレート等の還元剤を含むような培
地を水酸化ナトリウムでPH６〜8.5好ましくは7.2
〜8.2に調整し、菌を植えつけ、嫌気的条件下、
35〜42℃好ましくは36〜38℃で１〜５日、好まし
くは24〜72時間静置培養を行なう。特に、下記成
分表に記載の培地（以下TF培地と称する）を使
用するのが好ましい。しかし、炭素源として、牛
の脳、心臓抽出物のブレイン・ハート・インヒユ
ージヨンは必ずしも必要ではなく、牛の心臓抽出
物であるハート・インヒユージヨン、牛肉エキ
ス、魚肉エキス、トウモロコシより抽出されたコ
ーンステイプリカ等を代用してもよく、又、各種
ペプトンに於いてプロテオース・ペプトン、フア
イトン・ペプトンは必ずしも必要ではなく、トリ
プトケース・ペプトンはポリペプトンにて代用す
ることもできる。尚、寒天を使用しないときは撹拌培養を行なう
のが好ましい。

【表】 (b) 培養液から上清液の採取（菌体の除去）上で得た培養液から菌体を除去して上清液を得
る。菌体の除去は常法、例えば遠心分離、ハイフ
ロスーパーセル等の過助剤を用いる過法を採
用できるが、特に遠心分離法は操作、菌の除去度
合、上清液の収得量の点で好ましい。又、菌体の
除去はこの段階で行なうのが好ましいが次の(c)の
操作において除去してもよい。 (c) 制癌性物質TF―133bの採取上で得られた上清液又は培養液に親水性有機溶
媒を加えて、生ずる沈澱物を採取する。この際の
上清液又は培養液はPH２〜７に調整するのが好ま
しい。親水性有機溶媒としては、例えばエタノー
ル、メタノール等のアルコール類、アセトン等の
ケトン類が挙げられるが、アルコール類特にエタ
ノールが最もよい結果を与える。この親水性有機
溶媒はその濃度が30〜70％、好ましくは50〜70％
になるように添加するのが好適である。親水性有
機溶媒を加えた後、低温、好ましくは約５℃の温
度で数時間〜数日間放帯置し、沈澱物の生成を完
結させる。このようにして生じた沈澱物をデカンテーシヨ
ン、遠心分離、過等の通常の操作で分離する。次いで、この沈澱物に10〜15倍量の水又はリン
酸緩衝液（食塩）を加え、生ずる水不溶物を遠心
分離、過等の通常の方法で除去する。培養液を
使用したときはこの処理により菌体が除去され
る。更に斯くして得られた水可溶成分の分離液を
そのままイオン交換体処理に付することもできる
が、この水可溶成分を透析又は限外過し、その
内液を又は、更に凍結乾燥等によつて乾燥して粉
末をイオン交換体処理に付してもよい。斯くして得られた上記水可溶成分又は透析又は
限外過した内液成分についてイオ交換体処理す
る。イオン交換体としては、弱塩基性イオン交換
体又は分子篩性を併有するものを使用するのが好
ましく、例えばジエチルアミノエチル―セフアデ
ツクスＡ―50（フアルマシア社製商品名）が好適
に使用される。イオン交換体処理において、制癌
性物質TF―133bは、0.2モル食塩リン酸緩衝液
（この明細書で“モル”とは、モル濃度を意味す
る）で溶出せず、0.3モル食塩リン酸緩衝液で溶
出する画分として採取される。このイオン交換体処理を具体的に説明すれば、
上記沈澱物又は粉末を0.3モル食塩リン酸緩衝液、
好ましくはPH８の0.025モルリン酸緩衝液に溶解
し、これを、0.3モル食塩リン酸緩衝液で平衡化
したイオン交換体カラムを通過させ、通過液を採
取する。このイオン交換体は同緩衝液で洗浄し、
通過液と合わせる。この操作は数回行つてもよ
い。次いで、この溶液を0.025モルリン酸緩衝液で
希釈して食塩濃度が0.2モルになるように調製す
る。この溶液を、0.2モル食塩リン酸緩衝液（好
ましくは、PH８の0.025モルリン酸緩衝液）で平
衡化したイオン交換体カラムに通して吸着させ
る。カラムを同緩衝液で洗浄したのち、0.3モ
ル・食塩リン酸緩衝液で溶出を行い、溶出液を採
取する。以上のイオン交換体処理はバツチ法で行つても
よい。また、上記イオン交換体処理操作にかえ
て、0.2モル食塩リン酸緩衝液で平衡化したイオ
ン交換体に吸着する画分を採取し、これから0.3
モル食塩リン酸緩衝液で平衡化したイオン交換体
に吸着する画分と分離する操作を行つて、0.3モ
ル食塩リン酸緩衝液で溶出する画分を採取する方
法を行うこともできる。次いで、上記のようにして得られた溶出液を、
透析又は限外過等により、濃縮、脱塩、乾燥す
れば、目的の制癌性物質TF―133bが得られる。斯くして得られるTF―133bは次のごとき物性
を有する。 (イ) 白灰色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌、エールリツ
ヒ結節型癌、ザルコーマ180癌細胞の増殖を阻
止し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点を示さず、約110℃より分解を始
め、200℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは
3600〜3200，2960〜2930，1670〜1640，1550，
1440〜1380，1240，1140〜1000及び820cm^-1の
近傍に吸収帯を有する（第２図）。 (ヘ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収末
端に強い吸収があり、また270〜280nmの近傍
にシヨルダーを示す（第３図）。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社の登
録商標）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm、溶出液：PH７の0.1モル燐酸緩衝液）で
分画すると、260nmの紫外線吸光度測定におい
てはボイド・ボリウム通過付近から170ml付近
にかけて吸収帯を有し、フエノール硫酸法によ
る490nmの吸光度測定においてはボイド・ボリ
ウム通過付近から150ml付近にかけて吸収帯を
有する。（第４図）。 (チ) TSK―GEL Ｇ 3000SW（東洋曹達株式会社
の商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）によ
る高速液体クロマトグラム（溶出液：PH７の
0.1モル燐酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）
は、220nmの紫外線吸光度測定においては溶媒
先端部分、49〜50分付近にかけてピークを有
し、260nmでは溶出先端部分、38〜39分、52分
付近にかけてピークを有する（第５図）。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リイー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反
応は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：31.1％〜38.5％，Ｈ：3.9％〜5.2％，
Ｎ：3.4％〜4.7％（ル）フエノール硫酸法による糖の含有率は約
19.0％〜24.5％（グルコース換算）、およびロ
ウリイー・フオリン法による蛋白質の含有率は
約12.9％〜22.9％（牛血清アルブミン換算）で
ある。本発明の制癌性物質TF―133bの薬理作用は次
のとおりである。 (1) 免疫賦活作用一群４匹のＩ―CR系マウスを用い、生理食塩
水0.2mlに溶解させたTF―133bを、腹腔内投与し
た。投与24時間後にPerikan Drawing
Ink17Black（ギユンター・ワグナー社製）１mlと
ゼラチン３％含有生理食塩水２mlを混合して調製
したカーボン浮遊液0.2mlをマウス尾静脈より注
入し、注入後１，５，10および15分後に眼窩より
ヘパリン被覆ヘマトクリツト毛細管を用いて血液
0.02mlを採取し、直ちに0.1％炭酸ナトリウム水
溶液1.6mlに希釈溶血させ、これを波長675nmで
比色し貧食係数（phagocytotic index）：Ｋ値を
Halpernらの数式により求めた。また対照群には生理食塩水0.2mlを投与した。Ｋ＝logCo−logC／ｔ−to （Co＝to時の血中炭末量、Ｃ＝ｔ時の血中炭
末量）その結果は表―１のとおりである。

【表】表―１から明らかなごとく、対照群に比して、
本発明のTF―133b投与群は網内系マクロフアー
ジが活性化され、正常マウスの細胞性免疫が増大
した。 (2) 制癌作用 (a) エールリツヒ腹水型腫瘍に於ける抗腫瘍効果 ICR系マウス（雌、６週令、一群５匹）にエー
ルリツヒ腹水型癌細胞１×10⁵個／匹を腹腔内接
種した。次いで、生理食塩水0.2mlに溶解させた
TF―133bを、癌細胞接種後１日目、３〜７日目
迄１日１回計６日間腹腔内に投与した。また対照
群には同量の生理食塩水を上記と同様に投与し
た。その結果を表―２に示す。Ｔ／Ｃ＝TF―133b投与群の平均生存日数／対照群の平均
生存日数 ×100（％）

【表】表―２から明らかなように、対照群に比し、
TF―133b投与群には延命効果が認められ、40日
目において完全治瘉マウスが多くみられた。 (b) エールリツヒ結節型腫瘍に於ける抗腫瘍効果 ICR系マウス（雌、６週令、１群７匹）にエー
ルリツヒ癌細胞４×10⁶個／匹を腋下部皮下に移
殖した。次いで、生理食塩水0.2mlに溶解させたTF―
133bを癌細胞移殖後１日目および３日目から７
日目迄１日１回計６日間腹腔内に投与した。また
対照群には、同量の生理食塩水を上記と同様に投
与した。癌細胞移殖後、14日目に腫瘍重量を測定
した。その結果を表―３に示す。尚、腫瘍重量は
腫瘍部位の長径(a)mmおよび短径(b)mmをノギスにて
測定し、次式によつて求めた。腫瘍重量＝ａ×b²／２（mg）

【表】表―３から明らかなように、対照群に比し、
TF―133b投与群には腫瘍増殖抑制効果が認めら
れた。 (c) ザルコーマ180癌細胞に対する抗腫瘍効果 ICR系マウス（雌、６週令）にザルコーマ180
癌細胞１×10⁵個／匹を腹腔内に移殖した。次い
で、生理食塩水0.2mlに溶解させたTF―133bを癌
細胞移殖後１日目から腹腔内に１日１回、７日間
連続投与した。また、対照群には同量の生理食塩
水を上記と同様に連続投与した。その結果を表―
４に示す。Ｔ／Ｃは(a)と同様にして求めた。

【表】表―４から明らかなように、対照群に比し、
TF―133b投与群には延命効果が認められ、完全
治瘉マウスが多くみられた。 (3) 急性毒性 ICR系マウス（雌、６週令）に於いて、TF―
133bを静脈内１回投与したときのLD₅₀値は＞200
mg／Kgであつた。以上の薬理実験の結果から明らかなように、本
発明の制癌性物質TF―133bは制癌剤として有用
なものであり、各種の癌疾患に使用され効果が期
待されるものであるが、とりわけ固型癌に対して
著しい効果が期待できる。本発明のTF―133bは常法により経口、注射、
坐薬等の剤形にして使用することができる。経口
剤としては種々の賦形剤を含んでもよく、カプセ
ル剤、錠剤、散剤、顆粒剤とすることができる。
また、注射剤としては皮下、筋肉内、静脈内注射
剤のいずれでもよく、懸濁液、溶液もしくは使用
時溶解させる粉末等の剤形が用いられる。また注
射剤には局所麻酔剤を含んでいてもよい。本発明のTF―133bの投与量は患者の症状に応
じて適宜選択されるが、一般に成人において0.01
〜50mg／Kgを１日１〜数回に分け投与するのが好
ましく、投与方法としては皮下、筋肉内、静脈内
もしくは患部への注射によつてなされるのが好ま
しい。次に本発明の実施例を挙げて説明する。実施例１ (1) ２容のスクリユーキヤツプ付培養瓶15本
に、それぞれ１本につきトリプトケース・ペプ
トン34ｇ、フアイトン・ペプトン６ｇ、プロテ
オース・ペプトン20ｇ、ブレイン・ハート・イ
ンヒユージヨン70ｇ、イースト・エクストラク
ト６ｇ、食塩15ｇ、グルコース12ｇ、ラクトー
ス10ｇ、Ｌ―シスチン0.5ｇ、亜硫酸ソーダ0.2
ｇ、チオグリコレート・ナトリウム1.0ｇ、寒
天1.4ｇを加えPH７に調整した培地２を入れ、
120℃で15分間加圧滅菌したのち、ただちに水
冷冷却し、予め同組成の培地で前培養しておい
たフソバクテリウム・ヌクレアタムTF―031
（微工研受託番号微工研菌寄第5077号）の前培
養液を培養瓶１本につき100mlの割合で滅菌条
件下に接種し、37℃のふ卵器中で48時間静置培
養を行う。培養終了後、５℃で4000r.p.m，20
分間この培養液を遠心分離し菌体を除去して上
清液約27を得た。 (2) (1)で得た上清液に５℃で撹拌下にエタノール
40を加え、無定形の沈澱物が完全に沈澱する
まで低温室で放置する。ついで５℃で、6000r.
p.m，15分間遠心分離し沈澱物を採取し、エタ
ノールで洗浄し、減圧乾燥して約60ｇの粗粉末
を得た。 (3) (2)で得られた粉末44.2ｇを食塩濃度0.3モル
のPH８の0.025モルリン酸緩衝液1.2に溶解さ
せ、浮遊する不溶物をハイフロスーパーセルを
用いて去し、得られた液を、食塩濃度0.3
モルのPH８の0.025モルリン酸緩衝液で平衡化
したジエチルアミノエチルセフアデツクスＡ―
50（フアルマシア社製商品名）500mlのカラム
（直径33cm）にかけ通過液を採取する。カラム
は食塩濃度0.3モルのPH８の0.025モルリン酸緩
衝液で洗浄し、洗浄液と上記通過液を合わせて
1.67の溶液を得る。これを、再び食塩濃度
0.3モルのPH８の0.025モルリン酸緩衝液で平衡
化したジエチルアミノエチルセフアデツクスＡ
―50（フアルマシア社製商品名）400mlのカラム
（直径８cm）にかけ通過液1.68を得る。カラ
ムは食塩濃度0.3モルのPH８の0.025モルリン酸
緩衝液で洗浄して、洗浄液1.64を得る。通過
液および洗浄液を合わせて、これにPH８の
0.025モルリン酸緩衝液を加え、食塩濃度0.2モ
ルのPH８の0.025モルリン酸緩衝液4.98とす
る。この溶液を、食塩濃度0.2モルのPH８の
0.025モルリン酸緩衝液で平衡化したジエチル
アミノエチルセフアデツクスＡ―50（フアルマ
シア社製商品名）500mlのカラム（直径８cm）
にかけ、食塩濃度0.2モルのPH８の0.025モルリ
ン酸緩衝液２でカラムを洗浄した後、食塩濃
度0.3モルのPH８の0.025モルリン酸緩衝液２
を流入し、溶出液を採取する。この溶出液を限
外過システム（使用フイルター；東洋ウルト
ラフイルターuk―10）を用いて濃縮および脱
塩した後、更に、セフアデツクスＧ―25カラム
を用いて脱塩し、活性炭にて脱色させた後、凍
結乾燥させ白灰色〜淡褐色のTF―133bの粉末
590mgを得る。実施例２実施例１で得られた粉末１mgをバイアル瓶に充
填した。これは使用時滅菌生理食塩水又はリドカ
イン0.5％含有溶液等で溶解し注射液として用い
る。

【図面の簡単な説明】

第１図はフソバクテリウム・ヌクレアタムTF
―031の形態を示す顕微鏡写真、第２図は本発明
の制癌性物質TF―133bの赤外線吸収スペクト
ル、第３図は同物質の紫外線吸収スペクトル、第
４図は同物質をセフアデツクスＧ―200を用いて
ゲル過したときの溶出パターン、第５図は同物
質の高速液体クロマトグラムを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―133b生産菌を培養し、その培養液から得られ
る次の性状を有する制癌性物質TF―133b。 (イ) 白灰色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌、エールリツ
ヒ結節型癌、ザルコーマ180癌細胞の増殖を阻
止し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点を示さず、約110℃より分解を始
め、200℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは
3600〜3200，2960〜2930，1670〜1640，1550，
1440〜1380，1240，1140〜1000及び820cm^-1の
近傍に吸収帯を有する。 (ヘ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収末
端に強い吸収があり、また270〜280nmの近傍
にシヨルダーを示す。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社の登
録商標）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm、溶出液：PH７の0.1モル燐酸緩衝液）で
分画すると260nmの紫外線吸光度測定において
は、ボイド・ボリウム通過付近から170ml付近
にかけて吸収帯を有し、フエノール硫酸法によ
る490nmの吸光度測定においてはボイド・ボリ
ウム通過付近から150ml付近にかけて吸収帯を
有する。 (チ) TSK―GEL G3000SW（東洋曹達株式会社の
商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）による
高速液体クロマトグラム（溶出液：PH７の0.1
モル燐酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）は、
220nmの紫外線吸光度測定においては、溶媒先
端部分、49〜50分付近にかけてピークを有し、
260nmでは溶媒先端部分、38〜39分、52分付近
にかけてピークを有する。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リイー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反
応は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：31.1％〜38.5％，Ｈ：3.9％〜5.2％，
Ｎ：3.4％〜4.7％（ル）フエノール硫酸法による糖の含有率は約
19.0％〜24.5％（グルコース換算）、およびロ
ウリイー・フオリン法による蛋白質の含有率は
約12.9％〜22.9％（牛血清アルブミン換算）で
ある。２フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―133b生産菌がフソバクテリウム・ヌクレアタ
ムである特許請求の範囲第１項記載の制癌性物質
TF―133b。３フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―133b生産菌を培養して得た培養液又は上清液
に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を採取
し、その沈澱物の水可溶成分を、所望により透析
又は限外過した後イオン交換体処理して、0.2
モル食塩リン酸緩衝液で溶出せず、0.3モル食塩
リン酸緩衝液で溶出する画分を採取することを特
徴とする制癌性物質TF―133bの製造法。４フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―133b生産菌を培養して得た培養液又は上清液
に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を採取
し、その沈澱物の水可溶成分を、所望により透析
又は限外過した後これを0.3モル食塩リン酸緩
衝液となし、0.3モル食塩リン酸緩衝液で平衡化
したイオン交換体で処理して通過液を採取し、次
いでこれを0.2モル食塩リン酸緩衝液で平衡化し
たイオン交換体で処理し、0.2モル食塩リン酸緩
衝液で溶出せず、0.3モル食塩リン酸緩衝液で溶
出する画分を採取することを特徴とする特許請求
の範囲第３項記載の制癌性物質TF―133bの製造
法。５親水性有機溶媒がアルコールである特許請求
の範囲第３項又は第４項記載の制癌性物質TF―
133bの製造法。６親水性有機溶媒をその濃度が30〜70％になる
ように培養液又は上清液に加えることを特徴とす
る特許請求の範囲第５項記載の制癌性物質TF―
133bの製造法。７イオン交換体が弱塩基性イオン交換体又は分
子篩性を併有するものである特許請求の範囲第３
項又は第４項記載の制癌性物質TF―133bの製造
法。８フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―133b生産菌を培養し、その培養液から得られ
る次の性状、 (イ) 白灰色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌、エールリツ
ヒ結節型癌、ザルコーマ180癌細胞の増殖を阻
止し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点を示さず、約110℃より分解を始
め、200℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは
3600〜3200，2960〜2930，1670〜1640，1550，
1440〜1380，1240，1140〜1000及び820cm^-1の
近傍に吸収帯を有する。 (ヘ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸収
末端に強い吸収があり、又270〜280nmの近傍
にシヨルダーを示す。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社の登
録商標）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm、溶出液：PH7.0の0.1モルリン酸緩衝液）
で分画すると、260nmの紫外線吸光度測定に於
いてはボイド・ボリウム通過付近から170ml付
近にかけて吸収帯を有し、フエノール硫酸法に
於ける490nmの吸光度測定に於いてはボイド・
ボリウム通過付近から150ml付近に吸収帯を有
する。 (チ) TSK―GEL Ｇ 3000SW（東洋曹達株式会社
の商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）によ
る高速液体クロマトグラム（溶出液：PH7.0の
0.1モルリン酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）
は、220nmの紫外線吸光度測定に於いては、溶
媒先端部分、49〜50分付近にかけピークを有
し、260nmでは溶媒先端部分、38〜39分、52分
付近にかけてピークを有する。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リイー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反
応は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：31.1％〜38.5％，Ｈ：3.9％〜5.2％，
Ｎ：3.4％〜4.7％（ル）フエノール硫酸法による糖の含有率は約
19.0％〜24.5％（グルコース換算）、およびロ
ウリイー・フオリン法による蛋白質の含有率は
約12.9％〜22.9％（牛血清アルブミン換算）で
ある。を有する制癌性物質TF―133bを含有することを
特徴とする制癌剤。