BE884864A - Nouvelles substances produites par des bacteries du genre fusobacterium, leur procede de preparation et leur application en therapeutique - Google Patents

Description

   <EMI ID=1.1> 

  
tion de nouvelles substances à action carcinostatique et immunostimulante, qui consiste à cultiver dans des conditions anaërobies des bactéries productrices de substances TF, appartenant au genre Fusobacterium, et à recueillir les

  
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substances résultantes de la culture ou de son liquide surnageant (ladite substance nouvelle étant appelée ci-

  
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substances TF obtenues [elles comprendront ci-après TF-100,
110, 120, 130 (1316, 132a, 132b, 133a, 133b, 1323, 136),
140 et 150], ainsi qu'un agent carcinostatique contenant ces substances.

  
Ces dernières années, on en est venu à utiliser extensivement, pour soignen les patients atteints de différents types de cancer, un traitement reposant sur l'amélioration de la fonction immunologique de l'hôte et sur l'obtention d'un effet carcinostatique avec l'aide de la fonction immunologique. Parmi les agents antitumoraux utilisés dans ce traitement, il y a des constituants connus obtenus à partir d'organismes de diverses bactéries, ou par culture de diverses bactéries ou polysaccharides obtenus à partir de corps de moisissures producteurs de spores de Basidiomycetes ou de leurs corps de champignons cultivés. Cependant, ces agents antitumoraux ne sont pas encore satisfaisants par leur effet thérapeutique, leurs effets secondaires nocifs et leur procédé d'obtention.

  
D'autre part, il existe des comptes-rendus sur un organisme et un liquide surnageant obtenus en cultivant des bactéries appartenant au genre Fusobacterium, par exemple

  
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Fusobacterium girans 1012 et Fusobacterium nucleatum 1010 [Dental Surgery, 23, 322-333 (1974), et 21, 534-539 (1972)
(Japonais);. Cependant, il n'a encore été fait aucune étude sur les constituants obtenus à partir d'une culture ou de son liquide surnageant, préparés en cultivant des bactéries appartenant au genre Fusobacterium, ni sur les activités pharmacologiques de ces constituants.

  
Les auteurs de la présente invention ont étudié l'activité pharmacologique d'un liquide surnageant obtenu en cultivant des bactéries appartenant au genre Fusobacterium et en retirant les organismes de la culture, et ils ont découvert qu'un constituant spécifique obtenu à partir du liquide surnageant avait une action carcinostatique ; que ledit constituant n'avait-pratiquement aucun effet d'inhibition de la formation d'une colonie de cellules cancéreuses dans une méthode d'essai de formation de colonies, et n'avaient pas une action carcinostatique par destruction des

  
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que ledit constituant avait une très faible toxicité et pouvait être obtenu également en traitant la culture.

  
Un objectif de la présente invention est de procurer un procède consistant à cultiver des bactéries appartenant au genre Fusobacterium dans des conditions anaérobies, et à recueillir de la culture résultante ou de son liquide surnageant de nouvelles substances TF à action carcinostatique et immunostimulante.

  
Un autre objectif de l'invention est de procurer lesdites substances TF.

  
Un autre objectif de l'invention est de procurer un agent carcinostatique contenant lesdites substances TF.

  
D'autres objectifs et avantages de l'invention ressortiront de la description qui va suivre.

  
Comme bactéries utilisées dans la présente invention, on peut utiliser n'importe quelle bactérie productrice de substance TF appartenant au genre Fusobacterium et, par exemple, on utilise de préférence Fusobacterium nucleatum. Concrètement, on utilise Fusobacterium nucleatum TF-031
(FARM 5077 ; ATCC 31647).

  
Les propriétés bactériologiques de Fusobacterium nucleatum TF-031 sont les suivantes : 

  
( I ) Forme

  

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(II) Conditions de croissance dans un milieu de cultures

  

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croissance en surface : néant, pas de croissance

  
jusqu'! une profondeur

  
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gaz : Néant

  
(III) Propriétés physiologiques
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 (12) Production de gaz à partir des saccharides :

  

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Les nouvelles substances TF selon l'invention sont obtenues, par exemple, de la manière suivante. 

  

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On va maintenant illustrer le procédé d'obtention susmentionné.

  
(1) Culture des bactéries

  
On procède à la culture de bactéries appartenant au genre Fusobacterium par un procédé usuel de culture des bactéries anaérobies. Autrement dit, on ajuste à un pH de 6 à 8,5, de préférence de 7,2 à 8,2, un milieu de culture

  
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coeur de veau, diverses peptones ou des produits similaires ;

  
une source de vitamines, telle qu'un extrait de levure ou un produit similaire ; un sel minéral tel que le chlorure de sodium ou un sel similaire ; une source de carbone telle que le glucose, le lactose ou un produit similaire ; un agent réducteur tel que la L-cystine, le sulfite de sodium, le thioglycollate, ou un produit similaire, et on inocule les bactéries sur le milieu de culture, après quoi on procède à une culture en régime permanent dans des conditions anaérobies entre 35 et 42[deg.]C, de préférence entre 36 et 38[deg.]C, pendant 1 à 5 jours, de préférence pendant 24 à 72 heures. En particulier, il est souhaitable d'utiliser le milieu de culture décrit dans le Tableau I ci-après (appelé ci-après milieu de culture TF).

   Cependant, l'infusion de cervellecoeur qui est un extrait de cervelle-coeur de veau n'est pas toujours nécessaire comme source de carbone et peut être remplacée par une infusion de coeur qui est un extrait de coeur de veau, un extrait de boeuf, un extrait de poisson, de la liqueur de macération de mais, ou un produit similaire. Parmi les diverses peptones, la peptone de protéose et la peptone de phytone ne sont pas toujours nécessaires, et la peptone de trypticase peut être remplacée par la polypeptone.

  
Quand on n'utilise pas de gélose, il est souhaitable de procéder en culture agitée. 

TABLEAU I

  

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(2) Recueil d'un liquide surnageant de la culture

  
(prélèvement des organismes)

  
On prélève les organismes de la culture obtenue cidessus pour avoir un liquide surnageant. Pour prélever les organismes, on peut utiliser un procédé classique, par exemple la centrifugation et un procédé de filtration faisant appel à un adjuvant de filtration,tel que "Hyflo Super Cel", et en particulier un procédé de centrifugation est préférable du point de vue de la facilité d'opération, du degré de prélèvement des organismes, et du rendementen liquide surnageant. Les organismes sont, de préférence, prélevés dans cette étape, mais ils peuvent l'être dans l'étape suivante (3).

  
(3) Recueil de la substance carcinostatique TF-100

  
On ajoute un solvant organique hydrophile au liquide surnageant obtenu ci-dessus ou à la culture entière, et on recueille le précipité formé. A ce moment là, on ajuste de préférence à un pH de 2 à 7 le liquide surnageant ou la culture. Le solvant organique hydrophile peut être, par exemple, un alcool tel que l'éthanol ou le méthanol, ou une cétone telle que l'acétone, mais ce sont les alcools, en particulier l'éthanol, qui donnent les meilleurs résultats. 

  
Il convient d'ajouter le solvant organique hydrophile de telle sorte que sa concentration soit de 30 à 70 %, de préférence de 50 à 70 %, en volume. Après l'addition du solvant organique hydrophile, on laisse reposer le mélange résultant à basse température, de préférence à 5[deg.]C environ, pendant une période de plusieurs heures à plusieurs jours, pour compléter la formation du précipité.

  
On sépare le précipité ainsi formé par des procédés habituels tels que décantation, centrifugation, filtration, etc...

  
Ensuite, on ajoute au précipité une quantité d'eau représentant de 10 à 15 fois celle du précipité obtenu [l'eau peut être remplacée par un tampon de phosphate ou par un tampon de phosphate contenant du chlorure de sodium lorsque c'est TF-120 ou 130 (1316, 132a, 132b, 133a, 133b,
1323 ou 136) que l'on veut obtenir comme mentionné ci-après] et on élimine les matières insolubles dans l'eau qui se sont formées, par un procédé usuel tel que centrifugation, filtration, etc ..., après quoi on recueille la fraction soluble dans l'eau. Quand c'est la culture entière que l'on  utilise, on prélève les organismes par les modes opératoires susmentionnés. On sèche la fraction soluble dans l'eau ainsi obtenue, par lyophilisation et similaires, pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-100.

  
La substance TF-100 ainsi obtenue a les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(4) Recueil de la substance carcinostatique TF-110

  
On fait subir à la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus une dialyse ou une ultrafiltration ; ou bien on dissout TF-100 dans une quantité d'eau représentant de 10 à 15 fois celle de TF-100, et on fait subir à la solution résultante une dialyse ou une ultrafiltration. On élimine par le procédé susmentionné les substances de bas poids moléculaire telles que les aminoacides et les matières minérales. On recueille la solution interne obtenue par dialyse ou ultrafiltration, puis on la sèche pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-110.

  
La substance TF-110 ainsi obtenue a les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après. 

  
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On traite à l'aide d'un échangeur d'ions la fraction

  
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saire, la solution interne obtenue en faisant subir à la fraction soluble dans l'eau une clause ou une ultrafiltration [la solution interne obtenue en (4) ci-dessus], ou bien une solution d'une poudre de TF-110 dans une petite quantité d'eau. Comme échangeur d'ions, on utilise de

  
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échangeur d'ions faiblement basique ayant les propriétés d'un tamis moléculaire et, par exemple, il convient d'uti-

  
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échangeur d'ions, par exemple à l'aide d'un tampon de phosphate ayant un pH de 8 environ, âpres quoi on fait

  
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-et on recueille la solution éluée, puis on la sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire.; ou bien, on <EMI ID=21.1> 

  
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agite le contenu du récipient, puis on filtre, après quoi on sèche le filtrat. On peut ainsi obtenir une substance carcinostatique appelée TF-120 ayant les propriétés décrites ci-après. On peut également obtenir TF-120 en déminéralisant la solution éluée ou le filtrat, par exemple par dialyse à l'aide d'un tube en 

  
'Cellophane*, ou un moyen similaire, en utilisant du

  
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Ltd.), ou bien par ultrafiltration, puis séchage.

  
La substance TF-120 ainsi obtenue a les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(6) Recueil de la substance carcinostatique TF-130

  
On traite une colonne contenant les constituants adsorbés, dont on a prélevé TF-120 par le traitement indiqué en (5) ci-dessus par un tampon de phosphate, de préférence un tampon de phosphate ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,1 à 0,6 M et un pH de 8 environ (ci-après,

  
le tampon de phosphate ayant une concentration en chlorure

  
 <EMI ID=24.1>  chlorure de sodium 0,1 - 0,6 M) : ou bien on fait subir à la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus, s'il y a lieu, une dialyse ou une ultrafiltration, puis un traitement par.un échangeur d'ions en utilisant un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 - 0,6 M, pour obtenir une fraction que l'on n'élue pas avec un tampon de phosphate dépourvu de chlorure de sodium mais avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 - 0,6 M.

  
On peut mettre en oeuvre ce mode opératoire soit en continu dans une colonne, soit en discontinu. La fraction

  
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pour obtenir une substance

  
carcinostatique appelée TF-130. On peut déminéraliser l'éluat contenant la fraction voulue, que l'on élue avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium, par exemple par dialyse 3 l'aide d'un tube en "Cellophane", par tamisage moléculaire à l'aide de Séphadex G-25, ou bien par ultrafiltration, puis on le sèche. 

  
L'appellation "TF-130" utilisée ici désigne collectivement les fractions éluées voulues obtenues en traitant la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus ou, s'il y a lieu, la solution interne obtenue en faisant subir à la fraction soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration, à l'aide d'un échangeur d'ions, fractions qui ne sont pas éluées avec un tampon de phosphate dépourvu de chlorure de sodium, ïnais éluées avec un tampon de phosphate-

  
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ment, pair exemple, les fractions suivantes.

  
(i) Fraction qui n'a pas été éluée avec un tampon de phosphate dépourvu de chlorure de sodium mais a été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,6 M dans le traitement susmentionné d'échange d'ions [cette fraction est appelée TF-1316].

  
(ii) Fraction qui n'a pas été éluée avec un tampon de

  
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tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M dans le traitement susmentionné d'échange d'ions [cette fraction est appelée TF-132a et b ; on obtient TF-132a en lavant un échangeur d'ions contenant le constituant adsorbé précité avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M, en traitant l'échangeur d'ions avec un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,2 M, puis en recueillant la fraction

  
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et on obtient TF-132b en traitant la fraction soluble dans

  
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(TF-110) obtenue en (4) ci-dessus avec un échangeur d'ions].

  
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phosphate-chlorure de sodium 0,2 M mais a été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M dans le traitement susmentionné d'échange d'ions [cette fraction est appelée TF-133a et b ; les symboles a et b ont les mêmes significations que dans le cas de TF-132a et b, respectivement]. 

  
(iv) Fraction qui n'a pas été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M mais a été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0;3 M dans le traite-

  
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appelée TF-1323].

  
(v) Fraction qui n'a pas été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,5 M mais a été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,6 M dans le traitement susmentionné d'échange d'ions [cette fraction est appelée TF-136]. 

  
Puisque ces substances TF-1316, 132a, 132b, 133a,
133b, 1323 et 136 ont des propriétés communes sur les points suivants, ces substances ayant les propriétés communes sont

  
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TF-130 obtenue de la manière décrite ci-dessus possède les propriétés suivantes :
(a) Poudre blanc-grisâtre à brun clair.
(b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich chez les souris, de la tumeur consistante d'Ehrlich et du carcinome Sarcoma-180, et elle a une action immunostimulante.
(c) Elle est soluble danb l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique.

   (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et elle se décompose remarquablement au-dessus de 200[deg.]C.
(e) Son spectre d'absorption infrarouge obtenu par la méthode de la pastille de KBr présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=33.1> 
(f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, et un pic d'absorption au voisinage de 256-280 nm.

  
(g) Elle est positive. à la réaction de Molisch, à

  
la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthrone-acide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et négative à la réaction de la ninhydrine 

  
(h) Analyse élémentaire :

  

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(i) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode

  
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en poids (exprimée en glucose), et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est au voisinage de 6,0 à 28,0 % en poids (exprimée en albumine de sérum de veau) .

  
Le traitement susmentionné d'échange d'ions est expliqué plus en détail ci-dessous. Comme échangeur d'ions utilisé dans les modes opératoires suivants, on préfère un échangeur d'ions faiblement basique ou un échangeur d'ions faiblement basique ayant les propriétés d'un tamis moléculaire et, par

  
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Séphadex A-50 utilisé en (5) ci-dessus, et le procédé suivant peut être mis en oeuvre en discontinu.

  
(i) On fait passer dans une colonne d'un échangeur d'ions contenant le constituant adsorbé dans laquelle on a fait passer la solution à traiter en (5) ci-dessus, un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,6 M ayant de préférence un pH de 8 environ, et on recueille la fraction éluée, on la concentre éventuellement et on la déminéralise par dialyse, ultrafiltration ou par un procédé similaire, et ensuite on la sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-1316.

  
La substance TF-1316 ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(ii)-l On fait passer dans une colonne d'un échangeur d'ions contenant le constituant adsorbé dans laquelle on a fait passer la solution à traiter en (5) ci-dessus, pour laver la colonne, un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, après quoi on fait passer dans la colonne un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,2 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, et on recueille la fraction éluée, on la concentre facultativement et on la déminéralise par dialyse, par ultrafiltration ou par un procédé similaire, puis on la sèche par lyophilisation ou par.un procédé similaire, pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-132a.

  
. La substance TF-132a ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(ii)-2 On met en oeuvre, de la manière suivante, des modes opératoires de recueil de la fraction qui n'a pas été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M mais a été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M dans le traitement d'échange d'ions, en utilisant la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus ou la solution interne obtenue en (4) ci-dessus, pour obtenir la substance TF-132b. Autrement dit, on équilibre la colonne garnie de l'échangeur d'ions avec un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,2 - 0,3 M ayant de préférence un pH de 8 environ, après quoi on fait passer dans la colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M de la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus

  
 <EMI ID=37.1> 

  
soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration, et on recueille la solution éluée. S'il y a lieu, on lave la colonne avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M, et on réunit la solution éluée et les eaux de lavage. On peut répéter plusieurs fois le traitement d'échange d'ions.

   Ensuite, on fait passer dans une colonne dans laquelle l'échangeur d'ions a été équilibré avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M ayant, de préférence un pH de 8 environ, une solution préparée en diluant la solution éluée précitée avec un tampon de phosphate de telle sorte que la concentration en chlorure de sodium soit égale à 0,1 M, et on sépare la fraction qui a été éluée avec le tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M précité, après quoi on fait passer dans la colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M pour obtenir un éluat. Dans l'exemple concret du traitement susmentionné d'échange d'ions, on recueille une fraction qui n'a pas été adsorbée par un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M,

  
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le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M, on la lave avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M, puis on l'élue avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M pour obtenir un éluat. On peut également faire appel à un procédé selon lequel, inversement, on recueille la fraction qui a été adsorbée par un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M, et ensuite on met en oeuvre un procédé de séparation de ladite fraction d'une

  
fraction qui a été adsorbée pr un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M, et on recueille une fraction qui a été éluée avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2M.

  
On concentre facultativement l'éluat obtenu de la manière décrite ci-dessus et on le déminéralise par dLaly se, par ultrafiltration ou par un procédé similaire, puis on le sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire, pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-132b.

  
La substance TF-132b ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(iii)-l) On fait passer la solution interne obtenue en (4) ci-dessus dans une colonne d'un échangeur d'ions équilibré

  
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environ, et on fait passer dans ladite colonne, pour laver la colonne, un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, puis on fait passer dans ladite colonne un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M ayant de préférence un pH de 8 environ, ou bien on fait passer le tampon précité de phosphate-chlorure

  
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qui contient encore le constituant adsorbé restant. On recueille la fraction éluée, on la concentre facultativement

  
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par un procédé similaire, puis on la sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire, pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-133a. 

  
La substance TF-133a ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(iii)- 2) On recueille de la manière suivante, qui est la

  
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n'a pas été éluée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M mais a été éluée avec un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,3 M dans le traitement d'échange d'ions, pour obtenir TF-133b. Autrement dit, on équilibre la colonne garnie de l'échangeur d'ions avec un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,3 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, après quoi on fait passer dans la colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M de la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus ou la solution interne obtenue en faisant subir à la fraction soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration, et on recueille

  
la solution éluée. Si nécessaire, on lave la colonne avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M, et on réunit la solution éluée et les eaux de lavage. On peut répéter plusieurs fois le traitement d'échange d'ions. Ensuite, on fait passer dans une colonne dans laquelle l'échangeur d'ions a été équilibré avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, une solution préparée en diluant la solution éluée précitée avec un tampon de phosphate de telle sorte que la concentration en chlorure de sodium soit égale à

  
0,2 M, et on sépare la fraction qui a été éluée avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M, après quoi on fait passer dans la colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M pour obtenir un éluat. 

  
Dans l'exemple concret du traitement susmentionné d'échange d'ions, on recueille une fraction qui n'a pas été adsorbée par un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M, on la fait adsorber par un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M, on la lave avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M, puis on l'élue avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M pour obtenir un éluat. On peut également faire appel à un procédé selon lequel, inversement, on recueille une fraction qui a été adsorbée par un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de

  
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ladite fraction d'avec une fraction qui été adsorbée par un échangeur d'ions équilibré avec le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M, et on recueille une fraction qui a été éluée avec le tampon précité de phosphatechlorure de sodium 0,3 M.

  
Ensuite, on concentre facultativement l'éluat obtenu de la manière décrite ci-dessus et on le déminéralise par dialyse, par ultrafiltration ou par un procédé similaire, puis on le sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire, pour obtenir la substance carcinostatique voulue, appelée TF-133b.

  
La substance TF-133b ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau 2 ci-après.

  
(iv) On met la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus ou la solution interne obtenue en (4) ci-dessus, sous la forme d'un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, et on fait passer le tampon obtenu dans une colonne d'échange d'ions qui a été au préalable équilibrée avec un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,3 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ.

   On ajuste la solution éluée par addition d'un tampon de phosphate de telle sorte que la concentration en chlorure de sodium soit de 0,1 M, puis on la fait passer dans une colonne d'échange d'ions qui a été au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, et ensuite on fait passer dans ladite colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M, après quoi on recueille la fraction éluée, on la concentre facultativement et on la déminéralise par dialyse, par ultrafiltration ou par un procédé similaire, puis on la sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire, pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-1323.

  
La substance TF-1323 ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(v) On fait passer la solution interne obtenue en (4) cidessus dans une colonne contenant un échangeur d'ions équilibré avec un tampon de phosphate ayant, de préférence, un pH de 8 environ, et on fait passer dans ladite colonne, pour laver la colonne, un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,5 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, puis on fait passer dans ladite colonne un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,6 M ayant, de préférence, un pH de 8 environ, eu bien on fait passer dans la colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,5 M qui a été

  
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adsorbé restant, après quoi on fait passer dans ladite colonne le tampon précité de phosphate-chlorure de sodium 0,6 M. On recueille la fraction éluée, on la concentre facultativement et on la déminéralise par dialyse, par ultrafiltration ou par un procédé similaire, puis on la sèche par lyophilisation ou par un procédé similaire, pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-136.

  
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priétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(7) Recueil de la substance carcinostatique TF-140

  
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liquide surnageant obtenu en (1) ou en (2) ci-dessus, ou bien à la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) cidessus, ou encore à la solution obtenue en dissolvant TF-100 dans de l'eau, de façon à former un sel de baryum, après quoi on recueille le précipité, puis on procède à l'élimination du baryum, et on recueille la fraction soluble dans l'eau, puis on lui fait subir une dialyse ou une ultrafiltration pour obtenir TF-140. Pour être plus précis, on ajoute une solution aqueuse de baryte, de préférence une

  
 <EMI ID=47.1> 

  
son liquide surnageant obtenu en (1) ou en (2) ci-dessus, ou à la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) cidessus, ou à une solution aqueuse obtenue en dissolvant TF-100 dans une quantité d'eau représentant environ 10 à
15 fois celle de TF-100, et on ajuste de préférence le pH du mélange résultant entre 10 et 13 pour former un sel de baryum. Un précipité se dépose sous l'effet de l'addition d'une solution de baryte, et on ajuste de préférence la quantité ajoutée d'ions baryum de telle sorte que la concentration des ions baryum totaux dans le volume final du mélange soit de 0,005 à 0,1 M. On filtre le mélange ainsi obtenu, et on procède à la séparation du baryum d'avec le sel de baryum obtenu.

   On élimine le baryum de préférence en ajoutant le sel de baryum à du sulfate de sodium, de préférence sous la forme d'une solution aqueuse à 5 - 15 %, en agitant le mélange résultant, puisen procédant à une filtration pour obtenir une solution. On lave à nouveau avec une solution aqueuse de sulfate de sodium le précipite qui a été séparé et éliminé, et on réunit les eaux de lavage à la solution susmentionnée. On fait subir à la solution ainsi obtenue une dialyse, une ultrafiltration ou un traitement similaire pour éliminer l'excès de sulfate de sodium ou de substances à poids moléculaire bas, puis on sèche la solution résultante par lyophilisation ou par un procédé similaire pour obtenir une substance carcinostatique

  
 <EMI ID=48.1> 

  
La substance TF-140 ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après.

  
(8) Recueil de la substance carcinostatique TF-150

  
On traite par un sel d'ammonium quaternaire la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus ou la solution interne obtenue en (4) ci-dessus, et on recueille le précipité ainsi formé, puis on lui fait subir une dissociation à l'aide d'une solution contenant du chlorure de sodium, après quoi on ajoute un solvant organique hydrophile à la fraction soluble, et on recueille le précipité ainsi formé, puis on le sèche pour obtenir TF-150. Le sel d'ammonium quaternaire qui peut être utilisé icien général, peut être sous la forme d'un complexe quelconque avec un polysaccharide, et des exemples particulièrement préférés de ce

  
sel comprennent le chlorure de cétyl-pyridinium, le bromure 

  
 <EMI ID=49.1> 

  
rence, au traitement par un sel d'ammonium quaternaire en  présence d'un tampon tel qu'un tampon de borate ou un tampon similaire. La description concrète du traitement sus-  mentionné par un sel d'ammonium quaternaire et du mode opératoire de dissociation à l'aide d'une solution contenant du chlorure de sodium, est la suivante. Par exemple, on ajoute goutte à goutte une solution aqueuse d'un sel  d'ammonium quaternaire à la fraction soluble dans l'eau obtenue en (3) ci-dessus ou à la solution interne obtenue en (4) ci-dessus, tout en maintenant le pH faiblement basi-

  
 <EMI ID=50.1> 

  
pendant une période 10 minutes à plusieurs heures, après quoi on recueille le précipité qui s'est déposé. On lave ce précipité plusieurs fois avec un tampon, de préférence un

  
 <EMI ID=51.1> 

  
sodium et une petite quantité d'un sel d'ammonium quaternaire, puis on le dissocie avec un tampon, de préférence un tampon de borate à 0,1 %, contenant 0,5 M de chlorure de sodium et une petite quantité d'un sel d'ammonium quaternaire, pour obtenir une fraction soluble, puis on ajuste de préférence à pH .2 - 6 ladite fraction soluble. Ensuite on ajoute à la fraction soluble un soldant organique hydrophile, de préférence un alcool, pour que sa concentration

  
 <EMI ID=52.1> 

  
volume, et on laisse le mélange ainsi obtenu reposer entré

  
 <EMI ID=53.1> 

  
heures, après quoi on recueille le précipité qui s'est déposé pour obtenir une substance carcinostatique appelée TF-150.

  
La substance TF-150 ainsi obtenue possède les propriétés indiquées dans le Tableau II ci-après. 

  

 <EMI ID=54.1> 


  

 <EMI ID=55.1> 
 

  

 <EMI ID=56.1> 


  

 <EMI ID=57.1> 
 

  

 <EMI ID=58.1> 


  

 <EMI ID=59.1> 
 

  

 <EMI ID=60.1> 


  

 <EMI ID=61.1> 
 

  

 <EMI ID=62.1> 


  

 <EMI ID=63.1> 
 

  

 <EMI ID=64.1> 


  

 <EMI ID=65.1> 
 

  

 <EMI ID=66.1> 


  

 <EMI ID=67.1> 
 

  

 <EMI ID=68.1> 


  

 <EMI ID=69.1> 
 

  

 <EMI ID=70.1> 


  

 <EMI ID=71.1> 
 

  

 <EMI ID=72.1> 


  

 <EMI ID=73.1> 
 

  

 <EMI ID=74.1> 


  

 <EMI ID=75.1> 
 

  

 <EMI ID=76.1> 


  

 <EMI ID=77.1> 
 

  

 <EMI ID=78.1> 


  

 <EMI ID=79.1> 
 

  

 <EMI ID=80.1> 


  

 <EMI ID=81.1> 
 

  
Dans le Tableau II, on a utilisé, pour le Séphadex G-50 marqué "*", une colonne de 50 mm de diamètre et de
600 mm de haut, et de l'eau distillée comme éluant. ; pour

  
 <EMI ID=82.1> 

  
sé une colonne de 44 mm de diamètre et de 500 mm de haut pour TF-110, 120, 132a, 133a, 136 et 140, et une colonne de

  
 <EMI ID=83.1> 

  
133b, 1323 et 150, et, comme éluant, on a utilisé pour toutes les substances un tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7 et, pour obtenir le chromatogramme en phase liquide à haute performance, marque "***", on a utilisé une colonne de 7,9 mm de diamètre x 600 mm x 2, contenant du TSK-GEL G300SW (dénomination commerciale d'un produit vendu par la Société Toyo Soda Co., Ltd.), et on a procédé à l'élution à la température ambiante à un débit de 0,8 ml/mn en utilisant comme êluant un tampon de phosphate ayant un pH de 7.

  
Les activités pharmacologiques des présentes substances carcinostatiques TF-100, TF-110, TF-120, TF-1316,

  
 <EMI ID=84.1> 

  
TF-150 sont les suivantes :

  
(1) Effet des substances TF sur la viabilité des cellules

  
(Essai de formation de colonies)

  
Sur la base de la méthode de Kim. J.H. et al. [Cancer Res. 25, 698 (.1965)], on a cultivé des cellules HeLa 8-3 sur MEM Eagle complété -.avec du sérum, de [deg.]veau à 10 %, pendant .

  
3 à 5 jours à 37[deg.]C, dans un incubateur à gaz carbonique, après quoi on a prélevé la culture, et on a ajouté aux cel-  lules adhérant au verre une solution PBS(-} (solution

  
 <EMI ID=85.1> 

  
chlorure de potassium, 1,15 g/1 de phosphate de sodium monobasique et 0,2 g/1 de phosphate de potassium dibasique) contenant 0,01 % en poids d'acide éthylènediaminetétraacétique et 0,1 % de trypsine. On a détaché les cellules de la surface en verre du flacon de culture et on les a dissociées en cellules simples par pipettage, puis on compté le nombre des cellules par microscopie. On a dilué la suspension de cellules avec du MEM Eagle complété avec du sérum

  
 <EMI ID=86.1> 

  
par ml. Après avoir inoculé 1 ml de la suspension de cellules dans des boites de Pétri et l'avoir cultivée dans

  
 <EMI ID=87.1> 

  
a ajouté à la suspension de cellules le liquide surnageant obtenu à l'Exemple 1 (1), qui apparaît ci-après, de telle sorte que la concentration passe de 1/16 à 1/128. Puis, à chacune des fractions de 1 ml de la suspension de cellules cultivée à 37[deg.]C pendant 24 heures, on a ajouté chacune des substances d'essai et dans chaque cas, on a cultivé les cellules HeLa pendant 7 jours. Après cette culture, on a séparé le milieu de culture, après quoi on a lavé les boites de culture avec une solution de Hank, et on a fixé les cellules avec de l'éthanol à 70 % en poids, puis.on les a lavées avec de l'éthanol à 100 % en poids. Après avoir éliminé l'éthanol, on a coloré les cellules avec une solution de

  
 <EMI ID=88.1> 

  
a calculé la viabilité des cellules.

  
 <EMI ID=89.1> 

  
IV ci-après. On a calculé la viabilité des cellules dans les Tableaux à partir de l'équation suivante. La viabilité

  
 <EMI ID=90.1> 

  
sous la forme d'une moyenne de cinq essais identiques.

  

 <EMI ID=91.1> 
 

  

 <EMI ID=92.1> 


  

 <EMI ID=93.1> 
 

  
TABLEAU IV : Effet des substances TF sur la viabilité

  
des cellules
 <EMI ID=94.1> 
 Comme le prouve cette expérience, les substances TF selon la présente invention ont un très faible effet cytotoxique sur les cellules HeLa, par rapport au liquide surnageant.

  
(II) Activité immunostimulante

  
On a utilisé quatre souris de souche ICR pour chaque groupe. On a dissous chacune des substances d'essai dans 0,2 ml d'une solution saline physiologique, puis on les a administrées par voie intrapéritonéale aux souris. Vingtquatre heures après l'administration, on a injecté par voie intraveineuse dans la queue des souris 0,2 ml d'une suspension de carbone préparée en mélangeant 1 ml d'encre à dessin Perikan (fabriquée par GUnther-Wagner Co., Ltd.) et 2 ml d'une solution saline physiologique contenant 3 % en poids

  
 <EMI ID=95.1> 

  
l'injection, on a recueilli 0,02 ml du sang de l'orbite de l'oeil de la souris, à l'aide d'un capillaire à hématocrite revêtu d'héparine, et on a immédiatement dilué et hémolysé le sang avec 1,6 ml d'une solution aqueuse à 0,1 % en poids de carbonate de sodium. On a fait subir à cette suspension une colorimétrie à 675 nm, et on a déterminé l'indice phagocytotique, c'est-à-dire la valeur K, à partir de l'équation de Halpern et al.

  
Aux souris du groupe témoin, on a administré 0,2 ml d'une solution saline physiologique.

  

 <EMI ID=96.1> 


  
 <EMI ID=97.1> 

  
 <EMI ID=98.1> 

  
au temps t.

  
Les résultats sont indiqués dans les Tableaux V à VII ci-après. 

TABLEAU V

  

 <EMI ID=99.1> 
 

TABLEAU VI 

  

 <EMI ID=100.1> 

TABLEAU VII

  

 <EMI ID=101.1> 


  
Comme le prouvent les Tableaux V à VII, les groupes, auxquels on a administré chacune des substances TF selon la présente invention, ont montré une activation des macrophages réticulo-endothéliaux, par rapport au groupe témoin, et l'immunité cellulaire des souris normales était augmentée. 

  
(III) Activité carcinostatique
(a) Activité antitumorale contre la tumeur ascitique d'Ehrlich

  
On a inoculé par voie intrapéritonéale des cellules tumorales d'ascites d'Ehrlich, à des souris de soucheICR
(femelles, âgées de 6 semaines) à raison de 1 x 105 cellules par souris. Enuite, on a dissous chacune des substances d'essai dans 0,2 ml d'une solution saline physiologique, puis on les administrées par voie intrapéritonéale aux souris une fois par jour pendant 7 jours à partir du premier jour suivant l'inoculation des cellules tumorales, ou bien une fois par jour le premier jour et du troisième au septième jour pendant 6 jours au total. Dans le cas des substances d'essai du Tableau IX, on a administré chacune d'elles aux souris une fois par jour le premier jour et du troisième jour au septième jour pendant 6 jours au total après l'inoculation des cellules tumorales. Au groupe témoin, on a administré 0,2 ml d'une solution saline physiologique, de la

  
 <EMI ID=102.1> 

  
Les résultats sont donnés dans les Tableaux VIII et IX ci-après.

  

 <EMI ID=103.1> 
 

  

 <EMI ID=104.1> 


  

 <EMI ID=105.1> 


  

 <EMI ID=106.1> 
 

  

 <EMI ID=107.1> 


  

 <EMI ID=108.1> 


  

 <EMI ID=109.1> 
 

  

 <EMI ID=110.1> 


  

 <EMI ID=111.1> 


  

 <EMI ID=112.1> 
 

  
Comme le prouvent les Tableaux VIII et IX, le groupe auquel on a administré chacune des substances TF selon l'invention a bénéficié de l'effet de prolongation de la vie, par rapport au groupe témoin.

  
 <EMI ID=113.1>  consistante d'Ehrlich

  
(1) On a transplanté par voie sous-cutanée des cellules tumorales d'Ehrlich dans l'aisselle à des souris de soucheICR (femelles, âgées de 6 semaines), à raison de

  
4 x 106 cellules par souris. Ensuite, on a administré chacune des substances d'essai aux souris une fois par jour pendant 7 jours à partir du premier jour suivant la transplantation des cellules tumorales, ou bien une fois par jour le premier jour et du troisième jour au septième jour pendant 6 jours au total. Au groupe témoin, on a administré 0,2 ml d'une solution saline physiologique, de la même manière que décrit ci-dessus. On a déterminé le poids des tumeurs le llème ou le 14ëme jour après la transplantation des cellules tumorales. On a déterminé le poids des tumeurs en mesurant le grand diamètre (a) mm et le petit diamètre(b)

  
 <EMI ID=114.1> 

  
suivante :

  

 <EMI ID=115.1> 


  
Les résultats sont donnés dans le Tableau X ci-après. 

  

 <EMI ID=116.1> 


  

 <EMI ID=117.1> 


  

 <EMI ID=118.1> 
 

  

 <EMI ID=119.1> 


  

 <EMI ID=120.1> 


  

 <EMI ID=121.1> 
 

  
(2) On a transplanté par voie sous-cutanée des cellules tumorales d'Ehrlich dans l'aisselle de souris de soucheICR (femelles, âgées de 6 semaines) à raison de

  
 <EMI ID=122.1> 

  
chacune des substances d'essai aux souris divisées en groupes pour l'administration intraveineuse, l'administration intrapéritonéale, l'administration sous-cutanée et l'administration intramusculaire, à une posologie de

  
10 mg/kg ou 20 mg/kg, une fois par jour le premier jour et du troisième jour au septième jour, soit 6 jours au total, après la transplantation des cellules tumorales. Au groupe témoin, on a administré 0,2 ml d'une solution saline physiologique, de la même manière que ci-dessus. On a déterminé le poids des tumeurs le 13ëme jour après la transplantation des cellules tumorales.

  
Les résultats sont donnés dans le Tableau XI cidessous. 

  

 <EMI ID=123.1> 
 

  
Comme le prouvent les Tableaux X et XI, on observe un effet d'inhibition de la croissance des tumeurs dans les groupes auxquels on a administré l'une des substances TF selon l'invention.

  
(c) Activité antitumorale contre le carcinome

  
Sarcoma 180

  
On a transplanté par voie intrapéritonéale les

  
 <EMI ID=124.1> 

  
(femelles, âgées de 6 semaines) à raison de 1 x 10 cellules par souris. Ensuite, on a administré par voie intrapêritor.éale chacune des substances d'essai aux souris à une dose de mg/kg, 5 mg/kg ou 10 mg/kg, une fois par jour du premier jour au septième jour, soit pendant 7 jours au total, après la transplantation des cellules tumorales ou bien une fois par jour le premier jour et du troisième jour au septième jour pendant 6 jours au total..Au groupe témoin, on a administré 0,2 ml d'une solution saline physiologique, de la même manière que ci-dessus.

  
 <EMI ID=125.1> 

  
dessous. 

  

 <EMI ID=126.1> 


  

 <EMI ID=127.1> 


  

 <EMI ID=128.1> 
 

  

 <EMI ID=129.1> 


  

 <EMI ID=130.1> 


  

 <EMI ID=131.1> 
 

  
Comme le prouvent le Tableau XII, les groupes auxquels on a administré l'une des substances TF selon l'invention avaient bénéficié d'une activité tumorale, par comparaison avec le groupe témoin.

  
(d) Activité antitumorale contre le mélanome B-16
(1) On a transplanté par voie sous-cutanée des cellules tumorales de mélanome B-16 dans l'aisselle de souris de soucheBDFl (mâles, âgés de 7 semaines) à raison de 1 x 106 cellules par souris. Ensuite, on a administré par voie intrapéritonéale aux souris de la substance TF-
133a à une dose de 5 mg/kg ou de 10 mg/kg une fois par jour le premier jour et du troisième jour au septième jour, pendant 6 jours au total, après la transplantation des cellules tumorales. De la même manière que ci-dessus, on a administré au groupe témoin 0,2 ml d'une solution saline physiologique et 20 mg/kg de substance appelée "5-FU" à

  
un autre groupe constitué à cet effet-

  
Les résultats sont donnés dans le Tableau XIII cidessous.

TABLEAU XIII

  

 <EMI ID=132.1> 


  
Comme le prouve le Tableau XIII, les groupes auxquels on a administré la substance TF-133a ont bénéficié d'une apparente activité d'inhibition de la croissance des tumeurs, par comparaison avec le groupe témoin, et les groupes auxquels on a administré soit 5 mg/kg, soit 10 ng/kg de TF-133a, ont bénéficié d'une activité d'inhibition de la croissance des tumeurs égale et plus remarquable respectivement, par comparaison avec,le groupe auquel on a administré la substance 5-FU.

  
(2) On a procédé à la transplantation de

  
 <EMI ID=133.1> 

  
de TF-132a, TF-133a, 5-FU et d'une solution saline physio-

  
 <EMI ID=134.1> 

  
jour après la transplantation des cellules tumorales, on a disséqué les souris, et on a observé la métastase des cellules tumorales de mélanome dans les poumons.

  
Les résultats sont donnés dans le Tableau XIV ciaprès.

  
 <EMI ID=135.1> 

  

 <EMI ID=136.1> 


  
Comme le prouve le Tableau XIV, dans les groupes auxquels on avait administré soit la substance TF-132a, soit la substance TF-133a, la métastase des cellules tumorales de mélanome B-16 était remarquablement inhibée, par comparaison avec le groupe auquel on a administré la

  
 <EMI ID=137.1> 

  
(IV) Toxicité aiguë

  
 <EMI ID=138.1> 

  
dans le Tableau XV ci-après. 

TABLEAU XV

  

 <EMI ID=139.1> 
 

  
Comme le prouvent les expériences pharmacologiques susmentionnées, les substances TF selon l'invention sont utiles comme agents carcinostatiques, on peut s'attendre à ce qu'elles aient des activités contre diverses maladies cancéreuses, et on peut s'attendre à ce qu'elles aient des activités remarquables contre des cancers particulièrement récalcitrants. Toutes les substances TF selon l'invention ont des effets excellents, mais d'un certain nombre de points de vue, c'est la substance TF-130 que l'on préfère, et en particulier les substances 132a, 132b, 133a, 133b et
1323.

  
On peut utiliser les substances TF selon l'invention après les avoir mises sous diverses formes pharmaceutiques

  
 <EMI ID=140.1> 

  
suppositoires, etc ... , mais on les utilise de préférence sous la forme pharmaceutique d'une injection. Quand on les utilise sous la forme de médicaments à prendre par voie orale, ces médicaments peuvent contenir divers excipients, et peuvent être mis sous la forme de capsules, de comprimés, de poudres ou de granules. Lorsqu'on les utilise sous forme d'injections, ces dernières peuvent être des injections sous-cutanées, intramusculaires ou intraveineuses, et on les utilise sous la forme d'une suspension, d'une solution ou

  
 <EMI ID=141.1> 

  
injectables peuvent contenir un anesthésique local-

  
La posologie des substances TF selon l'invention est choisie de manière appropriée en fonction de l'état du patient, mais en général, il est souhaitable de les administrer, pour un adulte, à une dose de 0,01 à 50 mg/kg une fois par jour ou plusieurs fois par jour, et quant au mode d'administration, on les administre de préférence par injections sous-cutanées, intramusculaires ou intraveineuses, ou bien par injections dans la partie malade.

  
L'invention va être mieux expliquée ci-dessous par référence à des Exemples et aux dessins annexés, sur lesquels la Figure 1 représente une photographie microscopique montrant la forme de Fusobacterium nucleatum TF-031 utilisé dans cette invention; la Figure 2 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-100 ; la Figure 3 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 4 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-50 ; la Figure 5 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance ; la Figure 6 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-110 ; la Figure 7 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ;

   la Figure 8 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure 9 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance.; la Figure 10 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-120 ; la Figure 11 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 12 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-2ûû la Figure 13 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 14 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-1316 ; la Figure 15 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ;

   la Figure 16 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure 17 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 18 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-132a ; la Figure 19 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite <EMI ID=142.1> 

  
obtenu lorsqu'on a fait subir 3 ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure 21 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 22 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-132b ; la Figure 23 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 24 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure 25 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 26 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-133a ; la Figure 27 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 28 représente un diagramme <EMI ID=143.1> 

  
une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ;' la Figure 29 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 30 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-133b ; la Figure 31 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 32 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure 33 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 34 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-1323 ; la figure 35 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ;

   la Figure 36 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure 37 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 3R représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-136 ; la Figure 39 représente un spectie d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 40 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; la Figure
41 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 42 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-14&#65533; ; la figure 43 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance :

   la Figure 44 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; et la Figure 45 représente un chromatQgramme en phase liquide à haute performance de ladite substance ; la Figure 46 représente un spectre d'absorption infrarouge de la substance carcinostatique TF-150 ; la Figure 47 représente un spectre d'absorption ultraviolet de ladite substance ; la Figure 48 représente un diagramme d'élution obtenu lorsqu'on a fait subir à ladite substance une filtration sur gel en utilisant du Séphadex G-200 ; et la Figure 49 représente un chromatogramme en phase liquide à haute performance de ladite substance.

Exemple 1

  
(1) Dans chacune de 15 bouteilles de culture de 2 litres équipé chacune d'un bouchon fileté, on a placé deux litres d'un milieu de culture contenant 34 g de peptone de try.pticase, 6 g de peptone de phytone ; 20 g de peptone protéose,
70 g d'une infusion de cervelle et de coeur, 6 g d'extrait de levure, 15 q de chlorure de sodium, 12 g de glucose,

  
10 g de lactose, 0,5 g de L-cystine, 0,2 g de sulfite de sodium, 1,0 g de thioglycollate de sodium et 1,4 g de gélose, et on a ajusté le milieu de culture à un pH de 7.

  
 <EMI ID=144.1> 

  
pendant 15 minutes, on l'a réchauffé dans un bain d'eau bouillante pendant 20 minutes et immédiatement après on

  
l'a refroidi à l'eau, après quoi on a inoculé dans le milieu de culture refroidi à l'eau ci-dessus, dans des conditions stériles, une solution de pré-culture de Fusobacterium

  
 <EMI ID=145.1> 

  
milieu ayant la même composition que ci-dessus, dans une quantité de 100 ml par bouteille de culture, et on lui a fait subir une culture en régime permanent dans un incubateur à 37[deg.]C pendant 48 heures. Après l'achèvement de la culture, on a centrifugé la culture, pour enlever les organismes, à 4000 tours/mn à 5[deg.]C pendant 20 minutes. Le volume du liquide surnageant obtenu était de 27 litres environ.

  
(2) Au liquide surnageant obtenu en (1) ci-dessus, 'on a ajouté 40 litres d'éthanol, en agitant, à 5[deg.]C, et on a laissé reposer le mélange résultant dans une pièce à basse température jusqu'à ce que le précipité amorphe soit complètement déposé. Ensuite, on a centrifugé le mélange à 6000 tours/mn à 5[deg.]C pendant 15 minutes, et on a recueilli

  
 <EMI ID=146.1> 

  
sous pression réduite pour obtenir environ 60 g de poudre bcute.

  
(3) Dans 120 ml d'eau, on a dissout 20 g de la poudre brute obtenue en (2) ci-dessus, et on a séparé les matières insolubles dans l'eau formées à ce moment là, par centrifu-

  
 <EMI ID=147.1> 

  
la fraction soluble dans l'eau ainsi obtenue aux eaux de lavage obtenues par lavage des matières insolubles dans l'eau deux fois avec des fractions de 60 ml d'eau, et on a séché la solution résultante sous pression réduite pour obtenir 14 g d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-100. 

Exemple 2

  
On a fait subir à la solution décrite à l'Exemple 1-

  
(3), que l'on avait préparée en réunissant la fraction soluble dans l'eau dépourvue des matières insolubles dans

  
 <EMI ID=148.1> 

  
insolubles dans l'eau, une ultrafiltration en utilisant un dispositif d'ultrafiltration du type à fibres creuses
(membrane N[deg.] HI-1 : fabriquée par Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha), et on a fait subir à la solution interne une lyophilisation pour obtenir 10 g d'une poudre blancgrisâtre à brun clair de TF-110 

Exemple 3

  
Dans une petite quantité d'eau, on a dissous 10 g de

  
 <EMI ID=149.1> 

  
solution résultante dans une colonne garnie de diéthylamino-

  
 <EMI ID=150.1> 

  
0,025 M ayant un pH de 8, et on a recueilli la solution

  
 <EMI ID=151.1> 

  
 <EMI ID=152.1> 

  
solution éluée obtenue à la solution éluée préalablement recueillie, après quoi on a déminéralisé la solution résultante à l'aide d'un dispositif d'ultrafiltration à fibres creuses (Membrane N[deg.] HI-1), on l'a concentrée sous pression réduite, puis on lui a fait subir une lyophilisation pour obtenir 470 mg d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair

  
de TF-120.

Exemple 4

  
Dans 24 ml d'eau, on a dissous 2 g de la poudre obtenue à l'Exemple 1-(2), et on a séparé les matières insolubles dans l'eau par centrifugation à 7500 tours/mn pendant
10 minutes. On a dialyse la fraction soluble dans l'eau pendant une nuit par échange avec de l'eau distillée à 5[deg.]C en utilisant un tube en "Cellophane" et on a concentré la solution interne sous pression réduite. Ensuite, on a fait passer la solution concentrée dans une colonne garnie

  
 <EMI ID=153.1> 

  
au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8, et on a lavé la colonne en y faisant passer 600 ml d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8, après quoi on a fait passer dans la colonne un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,6 M et un pH de 8, pour obtenir un éluat. On a concentré cet éluat sous pression réduite à 100 ml environ, on l'a dialysé par échange avec de l'eau distillée à 5[deg.]C, on l'a à nouveau concentré sous pression réduite, on l'a déminéralisé en utilisant une colonne de Séphadex G-25, puis on lui a fait subir une lyophilisation pour obtenir
470 mg d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-1316.

Exemple 5

  
On a dialyse pendant une nuit la solution décrite à l'Exemple 1-(3) que l'on avait préparée en réunissant la fraction soluble dans l'eau dépourvue de matières insolubles dans l'eau, aux eaux de lavage obtenues en lavant les matières insolubles dans l'eau, par échange avec de l'eau distillée à 5[deg.]C en utilisant un tube en "Cellophane", et on a concentré la solution interne sous pression réduite.

   On a ensuite fait passer la solution concentrée dans une colonne garnie de 50 g de diéthylaminoéthyl-Séphadex A-50 que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8, et on a fait passer successivement dans la colonne 2 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8 et 2,5 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,1 M et un pH de 8, après quoi on a fait passer dans la colonne 2,5 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8, afin d'éluer la substance active adsorbée dans la colonne, et on a déminéralisé la solution éluée obtenue en utilisant un dispositif d'ultrafiltration à fibres creuses (Membrane N[deg.] HI-1) ,

   puis on lui a fait subir une lyophilisation pour obtenir 600 mg d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-132a.

Exemple 6 

  
Dans 1,2 litre d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de

  
 <EMI ID=154.1> 

  
et on a séparé les matières insolubles en suspension par filtration en utilisant du "Hyflo Super Cel", après quoi on a fait passer le filtrat obtenu dans une colonne de 33 cm de

  
 <EMI ID=155.1> 

  
que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, et on a recueilli la solution éluée. On a lavé la colonne avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de

  
0,3 M et un pH de 8, et on a réuni les eaux de lavage à la solution éluée susmentionnée pour obtenir 1,67 litre d'une solution. On a à nouveau fait passer cette solution dans une colonne de 8 cm de diamètre garnie de 400 ml de diéthylamino-

  
 <EMI ID=156.1> 

  
avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, pour obtenir 1,68 litre d'une solution éluée. On a lavé la colonne avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8 , pour obtenir

  
 <EMI ID=157.1> 

  
et les eaux de lavage, et on a ajouté à l'ensemble un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8 pour obtenir 4,98 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8. On a fait passer la solution tampon ainsi obtenue dans une colonne de B cm de diamètre garnie de 500 ml de diéthylaminoéthyl-Sêphadex A-50 que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8, et on a lavé la colonne avec 2 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8. -A 7 litres d'une solution préparée en réunissant les eaux de lavage à la solution éluée, on a ajouté

  
un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8, pour obtenir 14 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,1 M et un pH de 8.

  
On a fait passer la solution éluée ainsi obtenue dans une colonne de 8 cm de diamètre, garnie de 500 ml de diéthyl-

  
 <EMI ID=158.1> 

  
librée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,1 .1 et un pH de 8,

  
et on a séparé la solution éluée. On a lavé la colonne avec 2 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,1 M et un pH de 8, après quoi on a fait passer dans la colonne 2 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8, et on a recueilli la solution éluée. On a concentré la solution éluée et on l'a déminéralisée en utilisant un dispositif d'ultrafiltration (filtre utilisé : Toyo Ultrafilter UK-10), on l'a à nouveau déminéralisée en utilisant une colonne garnie de Séphadex G-25, on l'a décolorée à l'aide de charbon actif, puis on lui a fait subir une lyophilisation pour obtenir 880 mg d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-132b.

Exemple 7

  
Dans une petite quantité d'eau, on a dissous 10 g de la poudre obtenue à l'Exemple 2, et on a fait passer la solution résultante dans une colonne garnie de diéthylaminoéthyl-Séphadex A-50, que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de8. Ensuite, on a fait passer dans la colonne 5 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8, après quoi on a fait passer dans la colonne 2,5 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, afin d'éluer la substance active adsorbée dans la colonne, et on a concentré sous pression réduite la solution éluée obtenue.

   On a déminéralisé la solution concentrée en utilisant un tube en "Cellophane", on l'a déminéralisée complètement à l'aide de Séphadex G-25, puis on lui a fait subir une lyophilisation pour obtenir 600 mg d'une poudre

  
 <EMI ID=159.1> 

Exemple 8

  
 <EMI ID=160.1> 

  
une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, on a dissous 44, 2 g de la poudre obtenue à l'Exemple 1-(2), et on a séparé les matières insolubles en suspension

  
 <EMI ID=161.1> 

  
A-50 que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, et on a recueilli la solution éluée. On a lavé la colonne avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, et on a réuni les eaux de lavage à la solution éluée précitée pour obtenir 1,67 litre d'une solu-

  
 <EMI ID=162.1> 

  
avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, pour obtenir 1,68 litre d'une solution éluée. On a lavé la colonne avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en

  
 <EMI ID=163.1> 

  
1,64 litre d'eaux de lavage. On a réuni la solution éluée et les eaux de lavage et on a ajouté à l'ensemble un tampon de phosphate 0, 025 M ayant un pH de 8 pour obtenir 4, 98 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8. On a fait passer la solution éluée ainsi obtenue dans une colonne de 8 cm de diamètre garnie de 500 ml de diéthylaminoéthyl-Séphadex A-50, que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8, et on a lavé la colonne avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,2 M et un pH de 8, après quoi on a fait passer dans la colonne 2 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8,

   et on a recueillie la solution éluée. On a concentré la solution éluée et on l'a déminéralisée à l'aide d'un dispositif d'ultrafiltration (Filtre

  
 <EMI ID=164.1> 

  
ralisée à l'aide d'une colonne garnie de Séphadex G-25, on l'a décolorée à l'aide de charbon actif, puis on lui a fait subir une lyophilisation pour obtenir 590 mg d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-133b.

Exemple 9

  
(1) Dans 120 ml d'eau, on a dissous 20 g de la poudre brute obtenue à l'Exemple 1-(2), et on a séparé les matières insolubles dans l'eau formées à ce moment là, par centrifugation à 7500 tours/mn pendant 10 mn, après quoi on a réuni

  
 <EMI ID=165.1> 

  
lavage obtenues en lavant les matières insolubles dans l'eau deux fois avec des fractions de 60 ml d'eau, puis on lui a fait subir une ultrafiltration en utilisant un dispositif d'ultrafiltration à fibres creuses (Membrane N[deg.] HI-1), et on a fait subir à la solution interne une lyophilisation pour obtenir 10 g d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair.

  
(2) Dans 1 litre d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, on a dissous 25 g de la poudre obtenue par le traitement indiqué en (1) ci-dessus et on a fait passer la solution résultante dans une colonne de 33 cm de diamètre garnie de

  
 <EMI ID=166.1> 

  
préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8. On a de même lavé la colonne avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, et on a réuni la solution éluée et les eaux de lavage pour obtenir 1,6 litre d'un mélange. On a fait passer ce mélange dans une colonne de

  
 <EMI ID=167.1>  Séphadex A-50, que l'on avait de même équilibrée avec un tampon de phosphate 0, 025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0, 3 M et un pH de 8, pour obtenir 1, 65 litre d'une solution éluée. On a réuni la solution éluêe à 1,7 litre des eaux de lavage obtenues en lavant la colonne avec un tampon de phosphate 0, 025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0, 3 M et un pH de 8, eton a dilué le mélange résultant avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8, pour obtenir 10,35 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en  chlorure de sodium de 0,1 M et un pH de 8.

  
On a ensuite fait passer la solution tampon ainsi obtenue dans une colonne de 8 cm de diamètre garnie de

  
500 ml de diéthylaminoéthyl-Séphadex A-50, que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,1 M et un pH de 8, et on a lavé la colonne avec 2 litres d'un

  
 <EMI ID=168.1> 

  
chlorure de sodium de 0,1 M et un pH de 8, âpres quoi on a fait passer dans la colonne 2 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,3 M et un pH de 8, et on a recueilli la solution êluêe. On a déminéralise et concentré la solution éluée obtenue,en utilisant un dispositif d'ultrafiltration (Filtre utilisé :

  
 <EMI ID=169.1> 

  
sur Séphadex G-25, on l'a décolorée à l'aide de charbon actif, puis on lui a fait subir une lyophilisation pour

  
 <EMI ID=170.1> 

  
TF-1323.

Exemple 10

  
Dans une petite quantité d'eau, on a dissous 10 g de la poudre obtenue à l'Exemple 2, et on a fait passer la solution résultante dans une colonne garnie de diêthylaminoéthyl-Sêphadex A-50 que l'on avait au préalable équilibrée avec un tampon de phosphate 0,025 M ayant un pH de 8. On a ensuite fait passer dans la colonne 6 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de

  
 <EMI ID=171.1> 

  
la colonne 2,5 litres d'un tampon de phosphate 0,025 M ayant une concentration en chlorure de sodium de 0,6 M et un pH de 8, afin d'éluer la substance active adsorbée dans la colonne, et on a déminéralisé la solution intermédiaire obtenue en utilisant un dispositif d'ultrafiltration à fibres creuses (Membrane ? HI-1), on l'a concentrée sous pression réduite, puis on.lui a fait subir'une lyophilisa-

  
 <EMI ID=172.1> 

  
clair de TF-136.

Exemple Il

  
Dans 200 ml d'eau, on a dissous 15 g de poudre brute

  
 <EMI ID=173.1> 

  
insolubles dans l'eau par centrifugation à 7500 tours/mn pendant 10 minutes, après quoi on a ajusté à pH 10 la fraction soluble dans l'eau ainsi obtenue, en lui ajoutant goutte à goutte une solution aqueuse de baryte 0,2 M. Un précipité blanc s'est déposé sous l'effet de l'addition de la solution de baryte aqueuse. On a ajouté des ions baryum de telle sorte que la concentration des ions baryum totaux dans le volume final soit égale à 0,01 M, après quoi on a agité la solution pendant 30 minutes, et on a recueilli le précipité par filtration. On a mis le précipité de sel de baryum ainsi obtenu en suspension dans 10 ml d'une solution aqueuse à 10 % en poids de sulfate de sodium, on a agité suffisamment, puis on a filtré et on a recueilli le filtrat. On a à nouveau mis en suspension le précipité, on l'a agité puis on l'a filtré de la même manière que ci-dessus, 

  
une fois avec 10 ml d'une solution aqueuse à 10 % en poids de sulfate de sodium, puis deux fois avec des frac-

  
 <EMI ID=174.1> 

  
filtrat. En outre, on a lavé le précipité restant deux fois avec des fractions de 10 ml d'eau, puis on a filtré pour obtenir des eaux de lavage. On a réuni le filtrat recueilli susmentionné et les eaux de lavage, on a dialysé le tout par échange avec de l'eau distillée, on a concentré sous pression réduite, puis on a procédé à une lyophilisation pour obtenir 0,45 g d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-140. 

Exemple 12

  
Dans 450 ml d'eau, on a dissous 32 g de la poudre obtenue à l'Exemple 1-(2), et on a séparé les matières insolubles en suspension par filtration à l'aide de "Hyflo Super Cel", après quoi on a dialyse le filtrat obtenu pendant une nuit par échange avec de l'eau courante en utilisant un tube en "Cellophane". A la solution dialysée, on a ajouté goutte &#65533; goutte 80 ml d'une solution

  
 <EMI ID=175.1> 

  
en agitant, tout en lui ajoutant 200 ml d'un tampon de borate à 10 % en poids (pH 9,0), et on agité le mélange résultant à la température ambiante pendant 30 minutes,  après quoi on a recueilli le précipité par filtration. On a mis le précipité en suspension dans 150 ml d'un tampon de

  
 <EMI ID=176.1> 

  
de sodium et 0,2 % en poids de chlorure de cétyl pyridinium, et on a agité la suspension résultante pendant 30 minutes. , On a ensuite recueilli le précipité de la suspension par

  
filtration, et on l'a à nouveau mis en suspension dans
150 ml d'un tampon de borate (pH 9,0) ayant la composition

  
 <EMI ID=177.1> 

  
sion ainsi obtenue, après quoi on a recueilli le précipité par filtration. On a mis le précipité recueilli en suspension dans 150 ml d'un tampon de borate à 0,1 % en poids

  
 <EMI ID=178.1> 

  
chlorure de cétyl pyridinium, et on a agité et dissocie la suspension résultante pendant 30 minutes. On a ensuite séparé le précipité de la suspension par filtration pour obtenir

  
 <EMI ID=179.1> 

  
précipité séparé par filtration la même dissociation que ci-dessus pour obtenir une fraction soluble. On a réuni les deux fractions solubles, et on a ajusté la fraction soluble résultante à un pH de 3 à 4 à l'aide d'acide chlorhydrique

  
à 10 %, après quoi on lui a ajouté de l'éthanol pour que

  
sa concentration soit finalement de 80 % en volume. On a

  
 <EMI ID=180.1> 

  
 <EMI ID=181.1> 

  
pour obtenir 5,5 g d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair de TF-150. 

  
Exemple de Préparation 1

  
On a garni chaque fiole de 1 mg ou de 5 mg de chacune des poudres de TF-100, 110 et 120 obtenues aux Exemples 1, 2 et 3. Ces poudres sont dissoutes dans une solution saline physiologique stérilisée, une solution contenant 0,5 % de lidocaïne, ou une solution similaire, au moment de l'utilisation, puis elles sont utilisées sous forme d'injections.

  
Exemple de Préparation 2

  
On a garni chaque fiole de 1 mg ou de 5 mg de chacune des poudres de TF-1316, 132a et 132b obtenues aux Exemples 4, 5 et 6. Ces poudres sont dissoutes dans une solution saline physiologique stérilisée, une solution contenant 0,5 % de lidocaïne, ou une solution similaire, au moment de l'utilisation, puis elles sont utilisées sous forme d'injections.

  
Exemple de Préparation 3

  
On a garni une fiole de 1 mg ou de 5 mg de la poudre de TF-133a obtenue à l'Exemple 7. On dissout cette poudre dans une solution saline physiologique stérilisée, une solution contenant 0,5 % de lidocaine, ou une solution similaire, au moment de l'utilisation, puis on l'utilise sous la forme d'injection.

  
Exemple de Préparation 4

  
On a garni une fiole de 1 mg ou de 5 mg de la poudre de TF-133b obtenue à l'Exemple 8. On dissout cette poudre dans une solution saline physiologique stérilisée, une solution contenant 0,5 % de lidocaine, ou une solution similaire, au moment de l'utilisation, puis on l'utilise sous la forme d'injection.

  
Exemple de Préparation 5

  
On a garni une fiole de 1 mg ou de 5 mg de la poudre de TF-1323 obtenue à l'Exemple 9. On dissout cette poudre dans une solution saline physiologique stérilisée, une solution contenant 0,5 % de lidocaine, ou une solution similaire, au moment de l'utilisation, puis on l'utilise sous la forme d'une injection. 

  
Exemple de Préparation 6

  
On a garni chaque fiole de 1 mg ou de 5 mg de chacune des poudres TF-136, 140 et 150 obtenues aux Exemples 10, Il et 12. Ces poudres sont dissoutes dans une solution saline physiologique stérilisée, une solution contenant 0,5 % de lidocaine, ou une solution similaire,

  
au moment de l'utilisation, puis elles sont utilisées sous la forme d'injections. 

REVENDICATIONS

  
1. Procédé de préparation de substances à action carcinostatique et immunostimulante, caractérise en ce qu'il consiste à cultiver, dans des conditions anaérobies, des bactéries productrices de substance TF, appartenant au genre Fusobacterium, et à recueillir lesdites substances de la culture ou de son liquide surnageant.

Claims (1)

1. 2. Procédé selon la revendication I, caractérisé en ce qu'on cultive les bactéries productrices de substance

   TF appartenant au genre Fusobacterium, dans des conditions anaérobies, on ajoute un solvant organique hydrophile à la culture ou à son liquide surnageant, après quoi on sépare du précipité formé les substances à action carcinostatique <EMI ID=182.1>

   3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on sépare du précipité la fraction soluble dans l'eau du précipite puis on la sèche.

   <EMI ID=183.1>

   ce qu'on recueille le précipité formé, on fait subir à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration, et on recueille de la solution interne les substances à action carcinostatique et immunostimulante.

   5. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on recueille le précipité formé, on fait subir, s'il y a lieu, à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, une dialyse ou une ultrafiltration, puis on la traite par un échangeur d'ions, et on recueille la fraction non adsorbée.

   6. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on recueille le précipité formé, on fait subir, s'il y a lieu, à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, une dialyse ou une ultrafiltration, puis on la traite par un échangeur d'ions, et on recueille de la fraction

   <EMI ID=184.1>

   stimulante.

   7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on traite la fraction adsorbée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,6 M, et on recueille la fraction éluée.

   8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on recueille de la fraction adsorbée une fraction qui n'a pas été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M mais a été éluée par un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,2 M.

   9. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on recueille une fraction qui n'a pas été êluêe par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 M, mais a été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M.

   10. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on recueille une fraction qui n'a pas été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M mais a été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M.

   11. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on recueille une fraction qui n'a pas été ëluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,5 M mais a été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,6 M.

   12. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on recueille le précipité formé ; s'il y a lieu, on fait subir à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration ; on prépare un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M de la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, ou bien un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M de la solution interne obtenue par la dialyse ou l'ultrafiltration, puis on traite le tampon par un échangeur d'ions équilibré avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M; on recueille une fraction qui a traversé l'échangeur d'ions ;

   on ajuste ensuite cette solution éluée de telle sorte que sa concentration en chlorure de sodium soit 0,1 M, et on la traite ensuite par un échangeur d'ions équilibré avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M pour être adsorbée par l'échangeur d'ions ; et ensuite on recueille une fraction qui n'a pas été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 M mais a été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 ou 0,3 M.

   13. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on recueille le précipité formé ; s'il y a lieu, on fait subir à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration , on prépare un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M de la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau ou un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M de la solution interne obtenue par la dialyse ou l'ultrafiltration, puis on traite ce tampon par un échangeur d'ions équilibré avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,3 M ; on recueille une fraction qui a traversé l'échangeur d'ions ; on ajuste ensuite à 0,2 M la concentration en chlorure de sodium de cette solution éluée et on traite ensuite la solution par un échangeur d'ions équilibré avec un tampon de phosphate-

   <EMI ID=185.1>

   l'échangeur d'ions ; et ensuite on recueille une fraction qui n'a pas été éluée par un tampon dé phosphate-chlorure de sodium 0,2 M mais a été éluée par un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,3 M.

   14. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en

   <EMI ID=186.1>

   liquide surnageant pour former un sel de baryum, ou bien on ajoute à la culture ou à son liquide surnageant un solvant organique hydrophile, et on recueille le précipité formé, puis on ajoute des ions baryum à la fraction soluble dans l'eau du précipité ainsi recueilli, ou bien on ajoute des ions baryum à une solution d'une poudre obtenue en séchant ladite fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, de façon à former un sel de baryum ; on recueille le sel de baryum ainsi formé puis on en élimine le baryum ; on recueille la fraction soluble dans l'eau et on lui rait subir une dialyse ou une ultrafiltration.

   15. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on ajoute un solvant organique hydrophile à la culture ou à son liquide surnageant ; on recueille le précipité formé ; on traite par un sel d'ammonium quaternaire la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, ou la solution interne obtenue en faisant subir à la fraction soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration ; on recueille le précipité formé puis on lui fait subir une dissociation en utilisant une solution contenant du chlorure de sodium ; on ajoute un solvant organique hydrophile à la fraction soluble obtenue, pour former un précipité : et on recueille le précipité ainsi formé.

   16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérise en ce que le milieu de culture utilisé pour cultiver les bactéries contient des sources d'azote, des sources de carbone, des sources de vitamines, des agents.

   <EMI ID=187.1>

   de la gélose.

   17. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que le milieu de culture utilisé pour cultiver les bactéries comprend de la peptone de trypticase, de la peptone de phytone, de la peptone de protéose, une infusion de cervelle et de coeur ou une infusion de coeui , un extrait de levure, du chlorure de sodium, du glucose, du lactose, de la L-cystine, du sulfite de sodium et du thioglycollate de sodium, éventuellement associés à de la gélose.

   <EMI ID=188.1>

   1 à 15, caractérisé en ce qu'on procède à la culture entre 35[deg.] et 42[deg.]C pendant 1 à 5 jours dans un milieu de culture ajusté à un pH de 6,0 à 8,5.

   19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisé en ce qu'on procède à la culture entre

   <EMI ID=189.1>

   ajusté à un pH de 7,2 à 8,2.

   20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que les bactéries appartenant au

   <EMI ID=190.1>

   nucleatum.

   21. Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 15, caractérisé en ce que le solvant organique hydrophile que l'on ajoute à la culture ou à son liquide surnageant est un alcool.

   22. Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 15, caractérisé en ce qu'on ajoute le solvant organique hydrophile à la culture ou à son liquide surnageant avec

   <EMI ID=191.1> 23. Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 13, caractérisé en ce que l'échangeur d'ions est un échangeur d'ions faiblement basique ou un échangeur d'ions faiblement basique ayant les propriétés d'un tamis moléculaire.

   24. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on utilise un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 - 0,6 M pour éluer la fraction adsorbée par l'échangeur d'ions.

   25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 13 ou selon la revendication 24, caractérisé en ce que le pH du tampon de phosphate contenant du chlorure de sodium que l'on utilise pour traiter la fraction adsorbée est de

   8 environ.

   26. Procédé selon l'une quelconque des revendications

   <EMI ID=192.1>

   centration, une déminéralisation et un séchage à la fraction à laquelle on a fait subir le traitement d'échange d'ions.

   , 27. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en

   <EMI ID=193.1>

   cétyl pyridinium.

   28. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'on procède au traitement par le sel d'ammonium quaternaire en présence d'un tampon de borate.

   29. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la solution contenant du chlorure de sodium est un tampon de borate contenant du chlorure du sodium et un sel d'ammonium quaternaire.

   30. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en

   <EMI ID=194.1>

   un milieu de culture ajusté à un pH de 7,2 à 8,2 comprenant de la peptone de trypticase, de la peptone de phytone, de

   la peptone de protéose, une infusion de cervelle et de coeur ou une infusion de coeur , de l'extrait de levure,

   du chlorure de sodium, du glucose, du lactose, de la Lcystine, du sulfite de sodium et du thioglycollate de sodium, ou bien à un milieu de culture comprenant les mêmes composants et de la gélose, puis on procède à la culture dans des

   <EMI ID=195.1> on ajoute un alcool à la culture ou à son liquide surnageant, à une concentration de 50 à 70 % en volume ; on recueille le précipité formé : on fait subir, s'il y a lieu, à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, une dialyse ou une ultrafiltration, puis on la traite par un échangeur d'ions faiblement basique ou par un échangeur d'ions faiblement basique ayant les propriétés d'un tamis moléculaire, pour séparer la fraction non adsorbée ; on sépare de la fraction adsorbée une fraction qui a été éluée par un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,1 ou 0,2 M ;

   et ensuite on recueille, on concentre, on déminéralise puis on sèche une fraction qui a été éluée par un tampon phosphate-chlorure de sodium 0,3 M.

   31. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'on inocule des bactéries de Fusobacterium nucleatum

   à un milieu de culture ajusté à un pH de 7,2 à 8,2, comprenant de la peptone de trypticase, de la peptone de phytone, de la peptone de protéose, une infusion de cervelle et de coeur ou une infusion de coeur , de l'extrait de levure, du chlorure de sodium, du glucose, du lactose, de la Lcystine, du sulfite de sodium et du thioglycollate de sodium, ou bien à un milieu de culture comprenant les mêmes constituants et de la gélose, puis on procède à la culture dans des conditions anaérobies entre 36[deg.] et 38[deg.]C pendant

   1 à 3 jours ; on ajoute un alcool à la culture ou à son liquide surnageant, à une concentration de 50 à 70 % en volume; on recueille le précipité formé ; s'il y a lieu, on fait subir à la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau une dialyse ou une ultrafiltration. puis on traite un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M de la fraction du précipité qui est soluble dans l'eau, ou un

   <EMI ID=196.1>

   solution interne obtenue par dialyse ou ultrafiltration, par un échangeur d'ions faiblement basique ou par un échangeur d'ions faiblement basique ayant les propriétés d'un tamis moléculaire, que l'on a au prélable équilibré avec un tampon de phosphate-chlorure de sodium 0,2 - 0,3 M ; on recueille la fraction qui a traversé l'échangeur d'ions ; or_ ajuste cette solution éluée de façon qu'elle ait une concentration en chlorure de sodium de 0,1 à 0,2 M, puis on la traite par un échangeur d'ions faiblement basique ou par un échangeur d'ions faiblement basique ayant les propriétés d'un tamis moléculaire, que l'on a au préalable équilibré avec un tampon de phosphate-

   <EMI ID=197.1>

   l'échangeur d'ions ; et on recueille de la fraction adsorbée une fraction qui a été éluée par un tampon de phosphatechlorure de sodium 0,2 - 0,3 M, on la concentre, on la déminéralise, puis on la sèche.

   32. Procédé selon la revendication 20, 30 ou 31, caractérisé en ce que les bactéries de Fusobacterium nucleatum proviennent d'une souche de TF-031.

   33. Substance carcinostatique appelée TF-100, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun-clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur asciti' que et de la tumeur consistante d'Ehrlich chez les souris et <EMI ID=198.1> (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle <EMI ID=199.1>

   se nettement au-dessus de 200[deg.]C.

   (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670-1640, 1550, <EMI ID=200.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption et un pic d'absorption au voisinage de 256 - 260 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 50 mm de 0 x 600 mm, éluant : eau distillée) en,

   de Pharmacia Co., Ltd. utilisant du Séphadex G-50 (marque déposée!), elle présente des bandes d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 400, 430 - 530, 700 - 800, et 840 - 870 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm ; et aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 390, et 410 - 430 ml dans la mesure d'absorption

   à 620 nm, selon la méthode anthrone-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (dénomination commerciale d'un produit vendu par Toyo Soda Co., Ltd., colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2) présente des pics au voisinage du front du solvant, à 38 - 60, et à 65 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm et 260 nm.

   <EMI ID=201.1>

   réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique,

   <EMI ID=202.1>

   Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=203.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 40,0 à environ 46,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 20,0

   à environ 23,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum

   de veau.

   34. Substance carcinostatique appelée TF-110, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich chez les souris, et elle possède une action <EMI ID=204.1> (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle <EMI ID=205.1> nettement au-dessus de 200[deg.]C.

   (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=206.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, et un pic d'absorption au voisinage de 256 - 260 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 44 mm de 0 x 500 mm, éluant : tampon de phosphate

   <EMI ID=207.1>

   <EMI ID=208.1>

   (marque déposé ), elle présente des bandes d'absorption aux

   <EMI ID=209.1>

   à 600 - 920 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm, aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 380, 420 - 520, et 630 - 760 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm, par la méthode phénol-acide sulfurique ; et au volumes d'élution au voisinage du volume vide - 380, 420 -520, et 620 - 760 ml dans la mesure

   <EMI ID=210.1>

   sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW (dénomination commerciale d'un produit vendu par Toyo Soda Co.. Ltd. colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2) présente des pics au voisinage du front du solvant, à 38 - 60 et 65 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm et à 260 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molish, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la

   <EMI ID=211.1>

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=212.1>

   (k) sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 30,0 à environ 69,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 18,0 à environ 22,0 % en poids, exprimée en

   <EMI ID=213.1>

   35. Substance carcinostatique appelée TF-120, caractérisée par ses propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich chez les souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, <EMI ID=214.1> (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et elle se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670-1640, 1550, <EMI ID=215.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, et un pic d'absorption au voisinage de 268 - 272 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 44 mm de 0 x 500 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200, elle présente des bandes d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 325, et à 775 - 875 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm ; aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 360, à 360 - 480, et à 510 - 760 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique ; et aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 380, à 420 -

   <EMI ID=216.1>

   par la méthode anthrone-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2), présente des pics au voisinage du front du solvant et à 38 - 60 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm et à 260 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique et 3 la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son.analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=217.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 56,0 à environ 73,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 9,0 à environ 13,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   36. Substance carcinostatique appelée TF-130, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur asciti- <EMI ID=218.1>

   carcinome Sarcoma 180 chez les souris et elle possède une action immunostimulante.

   (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et elle se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de BKr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670-1640, 1550, 1440-1380, 1240, 1140-1000 et 820 en-1. (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, et un pic d'absorption au voisinage de 256 - 280 nm.

   (g) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (h) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=219.1>

   (i) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 19,0 &#65533; environ 64,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin; est d'environ 6,0 à environ 28,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   37. Substance carcinostatique appelée TF-1316, caractérisée par les propriétés cuisantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich et du carcinome Sarcoma-180 chez les souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, <EMI ID=220.1> (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et elle se décom- <EMI ID=221.1> (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670-1640, 1550,

   <EMI ID=222.1>

   (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, <EMI ID=223.1>

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 21 mm de 0 x 400 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200,

   <EMI ID=224.1>

   au voisinage du volume vide - 160 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm ; et une bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 160 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm, par la méthode phénol-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2) , présente des pics au voisinage du front du solvant et à 40 - 60 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm, et au voisinage du front du solvant, et à 40 - 60 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm.

   (i) Elle est positive &#65533; la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide- sulfurique,. à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=225.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 35,0 à environ 50,0 %

   <EMI ID=226.1>

   mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 10,0 à environ 23,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   38. Substance carcinostatique appelée TF-132a, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'un poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur a'scitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich et du carcinome Sarcoma-180 chez les souris, et elle possède une <EMI ID=227.1> (c) ELle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et elle se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=228.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption,

   et un pic d'absorption au voisinage de 270 - 280 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 44 mm de 0 x 500 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant -un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200, elle présente des bandes d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 340, 600 - 700, et

   <EMI ID=229.1>

   260 nm ; aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 340, 340 - 580, et 720 - 900 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm, par la méthode phénolacide sulfurique ; et aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 340, et 340 - 580 ml dans la mesure d'absorption à 620 nm par la méthode anthroneacide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit . 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x

   600 mm x 2), présente des pics au voisinage du front du solvant, à 30, à 38 - 60 et à 65 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm ; et au voisinage du front du solvant, à 62 et à 65 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 2 60 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch,, à la

   <EMI ID=230.1>

   acide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=231.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 55,0 à environ 64,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 18,0 à environ 28,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   39. Substance carcinostatique appelée TF-132b, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous.la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich et du carcinome Sarcoma-180 chez la souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, <EMI ID=232.1> (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ et elle se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption d'infrarouge, obtenue par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=233.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption,

   et un épaulement au voisinage de 265 - 280 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 21 mm de0 x 400 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7), en utilisant du Sêphadex G-200, "elle présente une faible bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 150 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm ; et une bande <EMI ID=234.1>

   vide - 150 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu

   <EMI ID=235.1>

   x 600 mm x 2), présente des pics au voisinage du front du solvant, à 36 - 37 et à 48 - 50 mn, dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm, et des pics très bas au voisinage du front du solvant, à 32 - 39, et à 45 - 52 mn, dans la mesure d'absorption ultraviolette à 26 0 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=236.1>

   (k). Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 23,6 à environ 45,5 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Iowry-Folin, est d'environ 15,5 à environ 28,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   40. Substance carcinostatique appelée TF-133a, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich, du carcinome Sarcoma-180 chez la souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau, et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, elle commence à se décomposer à 110[deg.]C environ et se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=237.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption,

   et un pic d'absorption au voisinage de 258 - 262 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 44 mm de 0 x 500 mm, éluant : tampon de phosphate 0,<1> M ayant un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200,

   <EMI ID=238.1>

   au voisinage du volume vide - 300, et de 630 - 940 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm ; une bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 420 ml dans la mesure d&#65533;absorption à

   490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique ; et une bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 420 ml dans la mesure d'absorption à

   620 nm parla méthode anthrone-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu

   <EMI ID=239.1>

   600 mm x 2) présente des pics au voisinage du front du ' solvant, à 38 et à 50 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm ; et au voisinage du front du solvant, à 50 - 60, et à 62 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=240.1> (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 26,0 à environ 35,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 22,0 à environ 28,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   41. Substance carcinostatique appelée TF-133b, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich et du <EMI ID=241.1>

   stimulante.

   (c) Elle est soluble dans l'eau'et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle, et l'éther diéthylique. (d) Elle ne possède pas de point de fusion bien défini, commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=242.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, et un épaulement au voisinage de 270 - 280 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 21 mm de 0 x 400 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200, elle présente une bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 170 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm ; et une bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 150 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2) présente des pics au voisinage du front du solvant, et à 49 - 50 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm ; et au voisinage du front du solvant, à 38 - 39 et à 52 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique,

   <EMI ID=243.1>

   réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=244.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 19,0 à environ 24,5 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines,

   <EMI ID=245.1>

   environ 22,9 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   42. Substance carcinostatique appelée TF-1323, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich et du carcinome Sarcoma-180 chez la souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, commence à se décomposer à 110*C environ, et se décompose nettement au-dessus de 220[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=246.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption,

   <EMI ID=247.1> (a) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne . 21 mm de 0 x 400 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200, elle présente une bande d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 160 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 mm ; et une bande d'absorption aux volumes d'élutions au voisinage du volume vide

   - 150 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (êluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2) présente des pics au voisinage du front du solvant, à 36 et à 48 - 50 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm ; et des pics au voisinage du front du solvant, il 36 et à 50 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm.

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, a la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et elle est négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants ;

   <EMI ID=248.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 19,0 à environ 25,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 11,0 à

   <EMI ID=249.1>

   veau.

   43. Substance carcinostatique appelée TF-136, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blanc-grisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich, de la tumeur consistante d'Ehrlich, et du carcinome Sarcoma-180 chez la souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, commence à se décomposer à 110[deg.]C environ et se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorption au voisinage de 3600-3200, 2960-2930, 1670- <EMI ID=250.1> (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption,

   et un pic d'absorption au voisinage de 256 - 260 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel

   <EMI ID=251.1>

   0,1 M ayant un pH de 7) en utilisant du Séphadex G-200, elle présente des bandes d'absorption aux volumes d'élution au voisinage de 540 - 930 ml dans la mesure d'absorption ultraviolette à 260 nm, et toutes les fractions ont une légère bande d'absorption dans la mesure d'absorption à

   490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique et dans la mesure d'absorption à 620 nm par la méthode anthrone-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute perfor-

   <EMI ID=252.1>

   débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante), obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x

   600 mm x 2),présente des pics au voisinage du front du solvant, à 28 - 40, et à 42 - 60 mn dans la mesure d'absorption ultraviolette à 220 nm ; et des pics au voisinage du front du solvant et à 42 - 60 mn dans la mesure d'absorption

   <EMI ID=253.1>

   <EMI ID=254.1>

   réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthrone-acide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants :

   <EMI ID=255.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 19,0 à environ 30,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 6,0 à environ 12,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   44. Substance carcinostatique appelée TF-140, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blancgrisâtre à brun clair. (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich chez la souris, et elle possède une action immunostimulante. (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le benzène, le chloroforme, l'acétate d'éthyle, et l'éther diéthylique. (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, <EMI ID=256.1>

   nettement au-dessus de 280[deg.]C.

   (e) Son spectre d'absorption infrarouge, obtenu par la méthode de la pastille de KBr, présente des bandes d'absorp- <EMI ID=257.1>

   <EMI ID=258.1>

   (f) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution aqueuse présente une forte absorption au bord d'absorption, et un pic d'absorption au voisinage de 255 - 260 nm.

   (g) Quand on la fractionne par filtration sur gel (colonne : 44 mm de 0 x 500 mm, éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7), en utilisant du Séphadex G-200, elle présente des bandes d'absorption aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 300, 500 - 900, et 900 -

   <EMI ID=259.1> et aux volumes d'élution au voisinage du volume vide - 500, 650 - 850, et 850 - 1000 ml dans la mesure d'absorption à 490 nm par la méthode phénol-acide sulfurique.

   (h) Son chromatogramme en phase liquide à haute performance (éluant : tampon de phosphate 0,1 M ayant un pH de 7, débit : 0,8 ml/mn, à la température ambiante) , obtenu en utilisant du "TSK-GEL G300 SW" (colonne : 7,9 mm de 0 x 600 mm x 2) présente des pics au voisinage du

   front du solvant, et à 40 - 60 mn dans la mesure d'absorp-

   <EMI ID=260.1>

   (i) Elle est positive à la réaction de Molisch, à la réaction phénol-acide sulfurique, à la réaction anthroneacide sulfurique, à la réaction indole-acide chlorhydrique, et à la réaction de Lowry-Folin, et négative à la réaction à la Ninhydrine.

   (j) Son analyse élémentaire donne les résultats suivants

   <EMI ID=261.1>

   (k) Sa teneur en saccharides, mesurée par la méthode phénol-acide sulfurique, est d'environ 5,0 à environ 15,0 % en poids, exprimée en glucose, et sa teneur en protéines, mesurée par la méthode de Lowry-Folin, est d'environ 23,0 % à environ 32,0 % en poids, exprimée en albumine de sérum de veau.

   45. Substance carcinostatique appelée TF-150, caractérisée par les propriétés suivantes :

   (a) Elle se présente sous la forme d'une poudre blanc- <EMI ID=262.1> (b) Elle inhibe la prolifération de la tumeur ascitique d'Ehrlich chez la souris, et elle possède une action <EMI ID=263.1> (c) Elle est soluble dans l'eau et insoluble dans le <EMI ID=264.1>

   l'acétate d'éthyle et l'éther diéthylique.

   (d) Elle n'a pas de point de fusion bien défini, commence à se décomposer à 110[deg.]C environ, et se décompose nettement au-dessus de 200[deg.]C. (e) Le spectre d'absorption ultraviolet de sa solution <EMI ID=265.1>

   47. Agent carcinostatique selon la revendication 46, caractérisé en ce que ladite substance carcinostatique

   volume vide - 150 ml dans la mesure d'absorption à

   <EMI ID=266.1>

   <EMI ID=267.1>

   <EMI ID=268.1>

   <EMI ID=269.1>

   <EMI ID=270.1>

   <EMI ID=271.1>

   <EMI ID=272.1>

   <EMI ID=273.1>

   <EMI ID=274.1>

   vea;: , 46. Agent carcinostatique caractérisé en ce qu'il

   <EMI ID=275.1>

   130, 1316, 132a, 132b, 133a, 133b, 1323, 136, 140 ou 150 selon la revendication 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, ou 45, et un adjuvant pharmaceutiquement acceptable.

   est TF-132a, 132b, 133a, 133b ou 1323 selon la revendication 38, 39, 40, 41 ou 42.