JPS6353198B2

JPS6353198B2 -

Info

Publication number: JPS6353198B2
Application number: JP55108122A
Authority: JP
Inventors: Kenzo Tamai; Isamu Saikawa; Takashi Yasuda; Shohachi Murakami; Toyoo Maeda; Hisatsugu Tsuda; Hiroshi Sakai; Masatoshi Sugita; Yoshiko Yamamoto; Takashi Minami; Takako Hori
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Current assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1980-08-06
Filing date: 1980-08-06
Publication date: 1988-10-21
Also published as: JPS5732295A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な制癌性物質、更に詳細にはフソ
バクテリウム属に属する菌を培養し、この培養液
から得られる制癌性物質TF―1323に関する。更
にまた、本発明はこの制癌性物質TF―1323を製
造する方法並びにこれを含有する制癌剤に関す
る。近年、各種の癌患者の治療法において、宿主の
免疫機能を亢進させ、免疫機能の助けを借りなが
ら制癌効果を発現させる治療法が盛んとなつて来
た。斯る療法に使用される薬剤としては、各種細
菌の菌体、菌体培養物から得られる成分、あるい
は担子菌の子実体又はその培養菌体から得られる
多糖体が知られている。しかし、これらの薬剤は
効果、副作用及びその製造法等の点で未だ満足し
得るものではない。一方また、フソバクテリウム属に属する菌、例
えばフソバクテリウム・K031―3B、フソバクテ
リウム・フシフオミスＷ―12、フソバクテリウ
ム・ギランス1012及びフソバクテリウム・ヌクレ
アタム1010を培養して得た菌体および上清液に関
する報告がみられる。〔口科誌，23，322〜333頁
（1974）、口科誌，21，534〜539頁（1972）〕。しか
しながら、フソバクテリウム属に属する菌を培養
し、この培養液又は上清液から得られる成分並び
にその薬理作用については未だ研究されていな
い。そこで、本発明者は、フソバクテリウム属に属
する菌を培養し、その培養液から菌体を除去した
上清液について、その薬理作用を調べていたとこ
ろ、この上清液から採取される特定の成分が強い
制癌作用を有すること、しかもこれは、コロニー
形成抑制法においては癌細胞の集落形成阻止作用
は極めて小さく、殺細胞による制癌作用ではな
く、宿主介在性あるいは宿主の免疫力を亢進さ
せ、免疫力の助けを借りながら間接的に制癌作用
を発現させる作用を有するものであること、更に
この成分は毒性が極めて低いこと又、培養液を処
理しても得られることを見出し、本発明を完成し
た。本発明で利用される菌としては、フソバクテリ
ウム属に属するTF―1323生産菌であればよく、
フソバクテリウム・ヌクレアタムが好適に挙げら
れる。例えば、フソバクテリウム・ヌクレアタム
TF―031（FARM―5077、ATCC―31647）等の
菌株が利用される。フソバクテリウム・ヌクレアタムTF―031の菌
学的性状を記載すれば下記の如くである。 (1) 形態細胞の形：紡錘形（第１図）細胞の多形性の有無：なし運動性の有無：なし胞子の有無：なしグラム染色：グラム陰性抗酸性：陰性 (2) 培地における生育状態 TF―ａ寒天平板及び斜面培地外形：円形大きさ：約１mm 隆起：半球状構造：露滴状表面：平滑辺縁：平滑色：乳黄白色透明度：不透明 TF―ａ液体培地発育の程度：旺盛濁り：凝塊沈澱：なし表面の発育：なし、約５mmまでは発育なしガス：なし (3) 生理学的性質硫化水素の生成：＋硝酸塩の還元：− 酪酸の生成：＋インドールの生成：＋ウレアーゼ：− カタラーゼ：− デンプンの加水分解：− 酸素に対する態度：嫌気性アンモニアの生成：＋炭酸ガスの生成：＋生育の範囲：PH５〜8.5 温度30〜45℃ 糖からのガスの生成Ｌ―アラビノース（−）、Ｄ―キシロース
（−）、Ｄ―グルコース（−）、Ｄ―マンノース
（−）、Ｄ―フラクトース（−）、Ｄ―ガラクトー
ス（−）、麦芽糖（−）、シヨ糖（−）、トレハロ
ース（−）、ソルビツト（−）、マンニトール
（−）、イノシツト（−）、グリセリン（−）、デン
プン（−）以上の諸性状をバージーズ・マニユアル・オ
ブ・デイタミネイテイブ・バクテリオロジー第８
版に照して検討すると、本菌株はフソバクテリウ
ム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）
に酷似し、これに属する。次に、本発明の制癌性物質TF―1323の製造法
を図式化して説明すれば、次のとおりである。

【表】溶出液

Claims

【特許請求の範囲】１フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―1323生産菌を培養し、その培養液から得られる
次の性状を有する制癌性物質TF―1323。 (イ) 灰白色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌、エールリツ
ヒ結節型癌、ザルコーマー180癌細胞の増殖を
阻止し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点は示さず約110℃より分解を始め、
200℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr法による赤外線吸収スペクトルは、
3600〜3200、2960〜2930、1670〜1640、1550、
1440〜1380、1240、1140〜1000及び820cm^-1の
近傍に吸収帯を有する。 (ヘ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸収
末端に強い吸収があり、また265〜280nmの近
傍に吸収ピークを示す。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社の登
録商標）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm、溶出液PH７の0.1モルリン酸緩衝液）で
分画すると、260nmの紫外線吸光度測定に於い
てはボイド・ボリウム通過付近から160mlにか
けて吸収帯を有し、フエノール硫酸法に於ける
490nmの吸光度測定に於いてはボイド・ボリウ
ム通過付近から150mlに吸収帯を有する。 (チ) TSK―GEL G3000SW（東洋曹達株式会社の
商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）による
高速液体クロマトグラム（溶出液：PH７の0.1
モル燐酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）は、
220nmの紫外線吸光度測定により、溶媒先端部
分、36分、48〜50分付近にかけてピークを有
し、260nmでは、溶媒先端部分、36分、50分付
近にかけてピークを有する。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リイー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反
応は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：29.9％〜39.4％、Ｈ：3.9％〜5.6％、
Ｎ：2.8％〜5.4％（ル）フエノール硫酸法による糖の含有率は約
19.0％〜25.0％（グルコース換算）およびロウ
リイー・フオリン法による蛋白質の含有率は約
11.0％〜17.0％（牛血清アルブミン換算）であ
る。２フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―1323生産菌がフソバクテリウム・ヌクレアタム
である特許請求の範囲第１項記載の制癌性物質
TF―1323。３フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―1323生産菌を培養して得た培養液又は上清液に
親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を採取し、
その沈澱物の水可溶成分を、所望により透析又は
限外過した後、次いでイオン交換体処理して、
0.1モル食塩リン酸緩衝液で溶出せず、0.3モル食
塩リン酸緩衝液で溶出する分画を採取することを
特徴とする制癌性物質TF―1323の製造法。４フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―1323生産菌を培養して得た培養液又は上清液に
親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を採取し、
その沈澱物の水可溶成分を、所望により透析又は
限外過した後、これを0.3モル食塩リン酸緩衝
液に溶解させ、0.3モル食塩リン酸緩衝液で平衡
化したイオン交換体で処理して通過液を採取し、
次いでこれを0.1モル食塩リン酸緩衝液で平衡化
したイオン交換体で処理し、0.1モル食塩リン酸
緩衝液で溶出せず、0.3モル食塩リン酸緩衝液で
溶出する分画を採取することを特徴とする特許請
求の範囲第３項記載の制癌性物質TF―1323の製
造法。５親水性有機溶媒がアルコールである特許請求
の範囲第３項又は第４項記載の制癌性物質TF―
1323の製造法。６親水性有機溶媒をその濃度が30〜70％になる
ように培養液又は上清液に加えることを特徴とす
る特許請求の範囲第５項記載の制癌性物質TF―
1323の製造法。７イオン交換体が弱塩基性イオン交換体又は分
子篩性を併有するものである特許請求の範囲第３
項又は第４項記載の制癌性物質TF―1323の製造
法。８フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―1323生産菌を培養し、その培養液から得られる
次の性状、 (イ) 灰白色〜淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌、エールリツ
ヒ結節型癌、ザルコーマー180癌細胞の増殖を
阻止し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点は示さず約110℃より分解を始め、
200℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr法による赤外線吸収スペクトルは、
3600〜3200、2960〜2930、1670〜1640、1550、
1440〜1380、1240、1140〜1000及び820cm^-1の
近傍に吸収帯を有する。 (ヘ) その水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸収
末端に強い吸収があり、また265〜280nmの近
傍に吸収ピークを示す。 (ト) セフアデツクスＧ―200（フアルマシア社の登
録商標）を用いてゲル過（カラム：21mmφ×
400mm、溶出液PH７の0.1モルリン酸緩衝液）で
分画すると、260nmの紫外線吸光度測定に於い
てはボイド・ボリウム通過付近から160mlにか
けて吸収帯を有し、フエノール硫酸法に於ける
490nmの吸光度測定に於いてはボイド・ボリウ
ム通過付近から150mlに吸収帯を有する。 (チ) TSK―GEL G3000SW（東洋曹達株式会社の
商品名、カラム：7.9mmφ×600mm×２）による
高速液体クロマトグラム（溶出液：PH７の0.1
モル燐酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）は、
220nmの紫外線吸光度測定により、溶媒先端部
分、36分、48〜50分付近にかけてピークを有
し、260nmでは、溶媒先端部分、36分、50分付
近にかけてピークを有する。 (リ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リイー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反
応は陰性。 (ヌ) 元素分析値Ｃ：29.9％〜39.4％、Ｈ：3.9％〜5.6％、
Ｎ：2.8％〜5.4％（ル）フエノール硫酸法による糖の含有率は約
19.0％〜25.0％（グルコース換算）およびロウ
リイー・フオリン法による蛋白質の含有率は約
11.0％〜17.0％（牛血清アルブミン換算）であ
る。を有する制癌性物質TF―1323を含有することを
特徴とする制癌剤。