JPS63237784A

JPS63237784A - ブプレウルム属植物の根の培養方法

Info

Publication number: JPS63237784A
Application number: JP62073708A
Authority: JP
Inventors: Mitsuru Katakura; 片倉　充; Mikio Tsunoda; 角田　幹夫; Takayoshi Kimura; 木村　孝良
Original assignee: Tsumura and Co
Current assignee: Tsumura and Co
Priority date: 1987-03-27
Filing date: 1987-03-27
Publication date: 1988-10-04

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、ブプレウルム属植物の根を効率よく培養する
ための培養方法に関するものである。これにより、生薬
の中でも貴重な柴胡を短期間に効率よく製造することが
できる。

［従来の技術および問題点］ブブレウルム属（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ）に属するミシマ
サイコの根は、古来より生薬柴胡として柴陥渇、柴胡桂
枝湯、小柴胡湯等の処方に用いられている。

更に、その成分であるサポニン類（サイコザボニンユ、
サイコサポニンｂ１サイコサポニンｃ１サイコサポニン
ｄ等）が肝障害改善作用、抗アレルギー作用を有する医
薬品として有用な物質であることは良く知られている。

これらのサポニン類を医薬品として供給する手段として
天然のブプレウルム属の植物体を栽培する方法が考えら
れるが、■植物体に含有されるサポニン類を始めとした
有効成分の含有量が不安定であり、■植物体の栽培に長
期間を要し、■栽培１も少ない等の理由から大量供給に
十分である方法とはいい難い。また、カルス細胞の再分
化を利用した柴胡の製造方法が報告されているが、工業
的規模の製造方法としては生育期間が長すぎるため妥当
ではない。

Ｌ問題点を解決するための手段］本発明者等は、工業的に高品質の柴胡を提供するために
は、効率よく、しかも短期間で安定にブプレウルム属植
物の根を培養する方法を確立すべきであると考え、鋭意
検討を重ねた結果、工業的規模での高品質で安定なブプ
レウルム属植物の根の培養方法を発見した。すなわち本
発明は、ジブ１ノウルム属植物から得た根を、インドー
ル酢酸、α−ナフタレン酢酸およびインドール酪酸から
選ばれる少なくともひとつの植物生長調整物質を含むか
、またはインドール酢酸、α−ナフタレン酢酸およびイ
ンドール酪酸から選ばれる少なくともひとつの植物生長
調整物質およびカイネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチ
ン、ベンジルアデニンおよびイソペンテニルアデニンか
ら選ばれる少なくともひとつの植物生長調整物質を含む
培地に移植し培養し、ブプレウルム属植物の根を得るこ
とを特徴とする不定根の培養方法である。

［実施例］以下に本発明の詳細な説明する。

本１明におけるブプレウルム属植物は、セリ科ブブレウ
ルム属の植物、ミシマサイコ、コホクサイコ、タイゲキ
サイコ、ダフリャザイコ、トウサイコ、ハクサンサイコ
、ポソバミシマサイコ、ホタルサイコ、マンシュウミシ
マサイコ等が挙げられる。

ブプレウルム属植物の組織片等より、原料となる根また
は不定根を得るには、■ブプレウルム属植物の頂部、葉
柄部、茎部、根部、花ＦＦ、種子等の組織を、適当な大
きさに裁断した組織片を、通常用いられる一般的な滅菌
法（例えば、エタノール水溶液、次亜塩素酸水溶液、滅
菌水等を用いる方法）により滅菌した後、培地に置床し
、温度２０〜３０℃、好ましくは２５℃で、３〜５週間
、培養し、誘導したカルス細胞から再分化させて不定根
を得る方法、■ブプレウルム属植物の頂部、葉柄部、茎
部、根部、花舟、種子等の組織を、適当な大きさに裁断
した組織片を、通常用いられる一般的な滅菌法（例えば
、エタノール水溶液、次亜塩素酸水溶液、滅菌水等を用
いる方法）により滅菌した後、培地に置床し、温度２０
〜３０℃、好ましくは２５℃で、２〜８週間、培養を行
い、カルス細胞を経ずに不定根を得る方法、■ブプレウ
ルム属植物の植物体から直接裁断した根を、通常用いら
れる一般的な滅菌法（例えば、エタノール水溶液、次亜
塩素酸水溶液、滅菌水等を用いる方法）により滅菌して
、根を得る方法等が挙げられる。尚、材料が無菌的な植
物体である場合には、■〜■の方法における滅菌処理は
除くことができる。

培地としては、各種既知の無機合成培地を基本とし、こ
れに糖類、植物生長調整物質、ビタミン類および天然物
質等を添加した培地に、寒天またはジェランガム等を加
えて固化させた固体培地を用いることができる。

代表的な合成培地としては、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）の
培地、ムラシゲ・スクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　＆Ｓ
ｋｏｏｇ　）の培地（以下、ＭＳ培地と称する）、ニッ
チ（ｌｌｉｌｓｃｈ）の培地、ニッチ・ニッチ（Ｎ１ｔ
ｓｃｈ＆　Ｎ１ｔｓｃｈ）の培地、ガンボルグ（Ｇａｍ
ｂｏｒｇ）らの培地、ヘラ−（ｌｌｅｌｌｅｒ）の培地
、その他これらの培地を基本として、その組成を変更し
たもの等が挙げられる。

無機合成培地の無機成分の具体例としては、銅、窒素、
リン、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、
鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデン、塩素、ナト
リウム、ヨウ素、コバルト等、更にくわしくは、硝酸カ
リウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、エヂ！ノンジアミン四酢酸ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸すｌ・リ
ウム、硫酸アンモニウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫
酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸
ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化
コバルト等が挙げられる。

糖類の具体例としては、シュークロース、イノシトール
、グルコース等の炭水化物、その誘導体等が挙げられる
。

植物生長調整物質の具体例としては、インドール酢酸（
［ＡＡ）、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２．４−ジ
クロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、インドール酪酸
（ＩＢＡ）等のオーキシン類、カイネチン、ゼアチン、
ジヒドロゼアチン、ベンジルアデニン（Ｂ　Ａ　）、イ
ソペンテニルアデニン等のサイトカイニン類等が挙げら
れる。

またビタミン類の具体例としては、ビオチン、チアミン
（ビタミンＢ、）、ピリドキシン（ビタミンＢ、）、パ
ントテン酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ニコチン
酸等が挙げられ、アミノ酸の具体例としては、グリシン
、アラニン、グルタミン、システィン等が挙げられる。

天然物質の具体例としては、カゼイン加水分解物、ココ
ナツトミルク、酵母エキス等が挙げられ、上述した具体
例の他、適宜培養に必要な物質を加えても良い。

以下に、本発明のブブレウルム属植物の根の培養による
柴胡の製造方法の原料となる根の製造の具体例を示す。

具体例高さ５〜５０■に生長したミシマサイコの葉および茎を
洗浄し、流水でよく濯ぎ、界面活性剤（家庭用合成洗剤
）を数滴たらした水道水中で傷つけないように撹拌しな
がら１５分間洗浄した。この操作を３回繰り返し、更に
流水下にて２時間濯いだ。７０％エタノール中に１分間
浸漬し、更に２％次亜塩素酸ナトリウム水溶液で゛７分
間殺菌した後、滅菌水で３回洗浄した。これを無菌的に
約５１ごとに切断した後、ムラシゲ・スクーグ培地（Ｚ
、４−Ｄ　　１．Ｏｐｐｍ、　ＢＡ　　Ｏ，５ｐｐｍ、
寒天０．８％含有）に置床し、暗黒下、２５℃で培養し
、１週間後に小片の肥大が起こり、４週間後にカルス細
胞を得た（誘導成功率８７．５％）後、約４週間毎に３
回動代培養した。このカルス細胞をＭＳ培地に移植して
、Ｉ　２　Ｏｒｐｍで２〜８週間の間隔で継代培養する
ことで不定根を得た。

以上のようにして得た不定根を、インドール酢酸、α−
ナフタレン酢酸およびインドール酪酸から選ばれる少な
くともひとつの植物生長調整物質を含むか、またはイン
ドール酢酸、α−ナフタレン酢酸およびインドール酪酸
から選ばれる少なくともひとつの植物生長調整物質およ
びカイネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン、ベンジル
アデニンおよびイソペンテニルアデニンから選ばれる少
なくともひとつの植物生長調整物質を含む培地に移植し
、好気的な条件の下で、温度２０〜３０℃、好ましくは
２５°Ｃで６〜１２週間、必要に応じて継代しながら、
培養する。この際、必ずしも光の照射を必要としないが
、場合によっては光を照射してちかまわない。

培地としては、各種既知の無機合成培地を基本とし、こ
れに無機成分、糖類、ビタミン類および天然物質等を添
加した液体培地、またはこれらの液体培地に、寒天また
はジェランガム等を加えて固化さＵ−た固体培地に、イ
ンドール酢酸、α−す７々しソ西Ｉ＋、酊ｐお上がイン
ドール醋酸から選ばれる少なくともひとつの植物生長調
整物質を含有させた培地、またはインドール酢酸、α−
ナフタレン酢酸およびインドール酪酸から選ばれる少な
くともひとつの植物生長調整物質およびカイネチン、ゼ
アチン、ジヒドロゼアチン、ベンジルアデニンおよびイ
ソペンテニルアデニンから選ばれる少なくともひとつの
植物生長調整物質を含有させた培地を用いることができ
る。

代表的な合成培地としては、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）の
培地、ＭＳ培地、リンスマイヤー・スクーグ（Ｌｉｎｓ
ｍｅｉｅｒ　＆　Ｓｋｏｏｇ）の培地、ニッチ（Ｎ１ｔ
ｓｃｈ）の培地、エッチ・エッチ（Ｎ１ｔｓｃｈ＆　Ｎ
１ｔｓｃｈ）の培地、ガンボルグ（Ｇａｍｂｏｒｇ）ら
の培地、ヘラ−（Ｉｌｅｌｌｅｒ）の培地その他これら
の培地を基本として、その組成を変更したもの等が挙げ
られる。

無機合成培地の無機成分の具体例としては、銅、窒素、
リン、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、
鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデン、塩素、ナト
リウム、ヨウ素、コバルト等、更に詳しくは、硝酸カリ
ウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、硝酸アンモニ
ウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム
、エヂレンジアミン四酢酸ナトリウム、塩化カリウム、
塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、
硫酸アンモニウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マン
ガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸鋼、モリブデン酸ナトリ
ウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバル
ト等が挙げられる。

またビタミン類の具体例としては、ビオチン、チアミン
（ビタミンＢ、）、ピリドキシン（ビタミンＩ３　、Ｉ
）、パントテン酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ニ
コチン酸等が挙げられ、アミノ酸の具体例としては、グ
リシジ、アラニン、グルタミン、ンステイン等が挙げら
れる。

天然物質の具体例としては、カゼイン加水分解物、ココ
ナツトミルク、酵母エキス等が挙げられ、上述した具体
例の他、適宜培養に必要な物質を加えてら良い。

以」二の成分を含ｒＴ　６−る培地に植物生長調整物質
を加えるが、植物生長、ｕ７．１整物質どして、インド
ール酢酸、α−ナフタレン酢酸およびインドール醋酸か
ら選ばれる少なくと６ひとつの植物生長調整物質を加え
る場合には、その濃度を１．０×ｌ０−９〜１　、ＯＸ
　１０−’Ｍ、特に５．０Ｘ１０−８〜５．０ｘｉＯ−
’Ｍに設定するのか好適である。

また、インドール酢酸、α−ナフタレン酢酸およびイン
ドール酪酸から選ばれる少なくと乙ひとつの植物生長調
整物質およびカイネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン
、ベンジルアデニンおよびイソペンテニルアデニンから
還ばれる少なくと６ひとつの植物生長調整物質を加える
場合には、インドール酢酸、α−ナフタレン酢酸および
インド−ル酪酸から選ばれる少なくともひとつの植物生
長調整物質の濃度を１．ｏｘｉｏ−８〜Ｉ、０×１０−
’Ｍ、特に５．０ｘｌＯ−”〜５．０ＸＩＯ’Ｍに、カ
イネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン、ベンジルアデ
ニンおよびイソペンテニルアデニンから選ばれる少なく
ともひとつの植物生長調整物質のｍ度を１．０Ｘ１０−
Ｉ０〜５．ＯＸＩＯ−６Ｍ。

特に５．０ＸＩＯ−”〜］、０ＸＩＯ−’Ｍに設定する
のが好適である。

［発明の効果コ本発明によれば、効率良く、短期間に大量かつ安価に安
定してブブレウルム属植物の根を人手することができる
。

［製造例］以下、製造例を示して本発明を具体的に説明するか、本
発明はこれにより何ら制限されるものではない。

製造例１〜２具体例で得た不定根を長さ３．０ｍｍ程度に切断し、こ
のうち０．４９を下記に示す条件の培地に置床し、暗黒
下で２５℃、９０　ｒｐｍで８週間、振盪培養した。こ
の不定根は、下記に示す如く増殖性にすぐれ、天然柴胡
以上にサポニン類を多量に含有（天然柴胡のサイコサポ
ニンｄ含有量は０．２０５％）するものであった。

Claims

【特許請求の範囲】

ブプレウルム属植物の根を、インドール酢酸、α−ナフ
タレン酢酸およびインドール酪酸から選ばれる少なくと
もひとつの植物生長調整物質を含むか、またはインドー
ル酢酸、α−ナフタレン酢酸およびインドール酪酸から
選ばれる少なくともひとつの植物生長調整物質およびカ
イネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン、ベンジルアデ
ニンおよびイソペンテニルアデニンから選ばれる少なく
ともひとつの植物生長調整物質を含む培地に移植し培養
して、ブプレウルム属植物の根を得ることを特徴とする
ブプレウルム属植物の根の培養方法。