JPS6368025A

JPS6368025A - コリダリス属植物の不定胚および／または不定芽の作出方法

Info

Publication number: JPS6368025A
Application number: JP61211419A
Authority: JP
Inventors: 稲垣　伸行; 角　真二; 三木　栄二; 樋口　正視
Original assignee: Tsumura Juntendo Inc
Current assignee: Tsumura and Co
Priority date: 1986-09-10
Filing date: 1986-09-10
Publication date: 1988-03-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明はコリダリス（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ）Ｆｉ植物の
組織培養による増殖方法に関するものである。

［従来の技術および問題点］コリダリス（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ）腐植物であるエンゴ
ザク（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ　ｔｕｒｓｃｈａｎｉｎｏｖ
ｉｉ　ｆ、　ｙｎｎｈｕｓｕｏ）およびその他同属植物
の塊茎は延胡索と呼ばれる生薬で、浄血、鎮痛、鎮痙、
抗消化性潰瘍等の作用を有することが知られており、安
中数などの漢方薬または民間薬に配合されている。また
、エンゴザク、オランダエンゴサク（Ｃｏｒｙｄａｌｉ
ｓ　ｃａｖｙ＋）等の十数種のコリダリス属植物は、往
古植物として現在栽培されている。

延胡索としては、エンゴザクの塊茎が良質とされている
が、その大半を中国からの輸入に依存しているため、供
給は不安定となりがちであり、また、医薬品として重要
な品質の均一性を保つことが難しいといった問題が生じ
ている。このような状況から、近年日本国内でのエンゴ
サクの栽培化が強く望まれ、これに必要な種苗を生産す
る必要性が生じてきた。しかしながら、従来より用いら
れている株分け、分球による塊茎を用いた栄養繁殖法は
、その増殖速度が極めて遅いため、国内栽培に必要な種
苗を確保するのに長い年月を要するばかりでなく、種苗
の生産コストが高くなるなど問題点が多いのが実情であ
る。このような種苗生産の難しさは、エンゴサクに限ら
ず、他の薬用あるいは園芸用のコリダリス属植物を商業
的に栽培する場合にも大きな問題となっている。

従って、本発明の目的は、短期間で効率的かつ大量にコ
リダリス属植物の種苗を生産するためのコリグリス属植
物の増殖方法、更に詳しくは、組織培養により、コリダ
リス属植物の不定胚および／または不定芽を効率的に作
出する方法を提供することにある。

［問題点を解決するための手段］本発明者等は、短期間で効率的かつ大−〔ｎにコリダリ
ス属植物の不定胚および／また（Ｊ不定芽を作出する方
法について研究を重ねた結果、コリグリス属植物の組織
片、より誘導したカルスを、オーキシン類を含まないか
または低濃度のオーキシン類を含む培地に移植し培養し
てコリグリス属植物の不定胚および／または不定芽を作
出すること、またはコリダリス属植物の組織片より誘導
したカルスを、オーキシン類を含まないかまたは低濃度
のオーキシン類を含む培地に移植し培養してコリダリス
属植物の不定胚および／または不定芽を作出し、該不定
胚および／または不定芽を、そのＪ：　Ｊ：または更に
培養した後、オーキシン類を含まないかまたは低濃のオ
ーキシン類を含む培地に移植し培養することにより短期
間で効率的かつ大量にコリダリス属植物の不定胚および
／また（Ｊ不定芽を作出することに成功し、本発明を完
成させ］このである。

［実施例］以下に本発明のコリダリス属植物の不定胚および／また
は不定芽の作出方法について詳細に説明する。

本発明のコリダリス属植物の具体例としてはケシ科コリ
ダリス属のエンゴサク（Ｃ，ｔｕｒｓｃｈａｎｉｎ−ｏ
ｖｉｉ　ｆ、　ｙａｎｈｕｓｕｏ）　、コウライエンゴ
サク（Ｃ，ｎａｋａｉ）、エゾエンゴサク（Ｃ，ａｍｂ
ｉｇｕａ）、ジロボウエンゴサク（Ｃ，ｄｅｃｕｍｂｅ
ｎｓ）　、ヤマエンゴサク（Ｃ，１ｉｎｅａｒｉｌｏｂ
ａ）　、オランダエンゴサク（Ｃ，ｃａｖａ）　、その
他Ｃ，ｎｏｂｉｌｉｓ、　ｃ、　ｗｉｌｓｏｎｉｉ。

Ｃ，ｈｕｍｏｓａＳＣ，ｒｅｐｅｎｓ等が挙げられる。

コリダリス属植物の組織片より、原料となるカルスを誘
導するには、まず、コリダリス属植物の塊茎、葉部、葉
柄部、茎部、花器等の組織を１〜３＋ｎｍ角程度に裁断
した組織片を、通常用いられる一般的な滅菌法（例えば
、エタノール水溶液、次亜塩素酸水溶液、滅菌水等をも
ちいる方法）により滅菌した後、培地に置床し、温度２
０〜３０℃、好ましくは２５℃で、３〜５週間、蛍光灯
程度の明るさの光を、１日１２時間〜２４時間照射する
よう調整して、培養する方法が挙げられる。

培地としては、各種既知の無機合成培地をノ、ξ本とし
、これに糖類、植物成長調整物質、ビタミン類および天
然物質を添加した培地に、寒天またはジェランガム等を
加えて固化させた固体培地を用いることができる。

代表的な合成培地としては、ホワイト（ＷＩｌ＋ＬＯ）
の培地、ムラシゲをスクーグ（ＩＡｕｒａｓｈｉｇｅ　
＆Ｓｋｏｏｇ　）の培地（以下、ＭＳ培地と称する）、
リンスマイヤー・スクーグ（Ｌｉｎｓｍｅｉｅｒ　＆　
Ｓｋｏｏｇ）の培地、ニッチ（Ｎ１ｔｓｃｈ）の培地、
Ｂ５培地、その他これらの培地を基本として、その組成
を変更したもの等が挙げられる。

無機合成培地の無機成分の具体例としては、銅、窒素、
リン、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イ才つ、
鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデン、塩素、ナト
リウム、ヨウ素、コバルト等、更にくわしくは、硝酸カ
リウム、硝酸すトリウム、硝酸カルシウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸二水索カリウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、塩化カリウム
、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム
、硫酸アンモニウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナト
リウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバ
ルト等が挙げられる。

糖類の具体例としては、シュークロース、イノシトール
、グルコース等の炭水化物、その誘導体等が挙げられる
。

植物成長調整物質の具体例としては、インドール酢酸（
ＩＡＡ）、α−ナフタレン酢酸（Ｎ　Ａ　Ａ　）、２．
４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、インドー
ル酪酸（Ｉ　ＢＡ）等のオーキシン類、カイネチン、ゼ
アチン、ジヒドロゼアチン、ベンジルアデニン（ＢＡ）
　、イソペンテニルアデニン等のサイトカイニン類が挙
げられる。

またビタミン類の具体例としては、ビオチン、チアミン
（ビタミンＢ８）、ピリドキシン（ビタミンＢ　１１）
、パントテン酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ニコ
チン酸等が挙げられ、アミノ酸の具体例としては、グリ
シン、アラニン、グルタミン、システィン等が挙げられ
る。

天然物質の具体例としては、カゼイン加水分解物、ココ
ナツトミルク、酵母エキス等が挙げられ、上述した具体
例の他、適宜培養に必要な物質を加。

えても良い。

以下に、本発明のコリダリス属植物の不定胚Ｊ６よび／
または不定芽の作出方法の原料となる、コリグリス属植
物の組織片より誘導したカルスの製造の具体例を示す。

具体例エンゴサクの塊茎を洗浄し、流水でよく濯ぎ、７０％エ
タノール中に１分間浸漬し、更に１％次亜塩素酸ナトリ
ウム水溶液で７分間殺菌した後、滅菌水で３回洗浄した
。この塊茎の表面を２ｍｍの小片に切断し、培地（ナフ
タレン酢酸Ｉ　ＰＰｌｌ１％カイネチン３１）Ｉ）１１
１％シュークロース３％、ジェランガム０．２％含有）
に置床し、２５℃で培養し、１週間後に小片の肥大が起
こり、４週間後に直径１ｌ１７１＋のカルスを得た。

以下に本発明を詳細に述べる。

前述のようにして得たカルスを、オーキシン類を含まな
いかまたは低濃度のオーキシン類を含む培地に移°植し
培養する。カルスを５ｍｍ程度の小片？こ切断培地に置
床し、温度２０〜３０℃、好ましくは２５℃で、２〜８
週間、蛍光灯程度の明るさの光を、１日１２時間〜２４
時間照射するよう調整して、不定胚および／または不定
芽を誘導する。

培地としては、各種既知の無機合成培地を基本とし、こ
れに無機成分、糖類、植物成長調整物質、ビタミン類お
よび天然物質を添加した液体培地、またはこれらの液体
培地に、寒天またはジェランガム等を加えて固化させた
固体培地を用いることができる。

代表的な合成培地としては、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）の
培地、ムラシゲ・スクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　＆Ｓ
ｋｏｏｇ）の培地（以下、ＭＳ培地と称する）、リンス
マイヤー・スクーグ（Ｌｉｎｓｍｅｉｅｒ　＆　Ｓｋｏ
ｏｇ）の培地、ニッチ（Ｎ１ｔｓｃｈ）の培地、Ｂ５培
地、その他これらの培地を基本として、その組成を変更
したもの等が挙げられる。

無機合成培地の無機成分の具体例としては、銅、窒素、
リン、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、
鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデン、塩素、ナト
リウム、ヨウ素、コバルｊ・等、更に詳しくは、硝酸カ
リウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、塩化カリウム
、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸すトリウム
、硫酸アンモニウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナト
リウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバ
ルト等が挙げられる。

植物成長調整物質の具体例としては、インドール酢酸Ｃ
以下、ＩＡＡという）、α−ナフタレン酢酸（以下、Ｎ
ＡＡという）、２．４−ジクロロフェノキシ酢酸（以下
、２．４−Ｄという）、インドール酪酸（以下、ＩＢＡ
という）等のオーキシン類、カイネチン、ゼアチン、ジ
ヒドロゼアチン、ベンジルアデニン（以下、ＢＡという
）、イソペンテニルアデニン等のサイトカイ、エン類が
挙げられる。

また、オーキシン類のうち、インドール酢酸は０〜０．
５　ｐｐｍ、　ａ−ナフタレン酢酸はＯ〜０．ｌｐｐｍ
、２．４−ジクロロフェノキシ酢酸は０〜０．１ｐｐｌ
ｎ１インドール酪酸０〜０　、５　ｐｐｍの濃度に調整
することにより多数の不定胚および／または不定芽を作
出することができる。

またビタミン類の具体例としては、ビオチン、チアミン
（ビタミンＢ、）、ピリドキシン（ビタミンＢ　ｏ）、
パントテン酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ニコチ
ン酸等が挙げられ、アミノ酸の具体例としては、グリシ
ン、アラニン、グルタミン、システィン等が挙げられる
。

天然物質の具体例としては、カゼイン加水分解物、ココ
ナツトミルク、酵母エキス等が挙げられ、上述した具体
例の他、適宜培養に必要な物質を加えても良い。

次に、上述のようにして得た不定胚および／または不定
芽を、そのままオーキシン類を含まないかまたは低濃度
のオーキシンを含む培地で培養することにより、その表
面に多数の不定胚および／または不定芽を作出すること
ができる。

また、上述のようにして得た不定胚Ｊ５よび／または不
定芽を、更に培養を続けることにより、通常１〜２週間
程度で植物体に変化する。この植物体を、オーキシン類
を含まないかまたは低濃度のオーキシン類を含む培地に
移植し培養することにより、植物、体の表面に多数の不
定胚１３よび／または不定芽を作出することができる。

培地、培養条件等は、前述した、オーキシン類を含まな
いかまたは低濃度のオーキシンを含む培地で培養する場
合と同様である。

以上の操作を繰り返すことにより、コリダリス属植物の
不定胚および／または不定芽から、もしくはコリダリス
属植物の不定胚および／または不足芸を培養した植物体
から、恒常的に効率良くコリダリス属植物の不定胚およ
び／または不定芽を作出することができる。

［発明の効果］本発明によれば、短期間で効率良くコリダリス属植物の
不定胚および／または不定芽を作出することができるた
め、恒常的に効率良く多数のコリグリス属植物の苗を得
ることができる。

［製造例］以下、製造例を示して本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれにより何ら制限されるものではない。

製造例１〜６具体例で得たカルスを５ｍｍ程度の小片に切断し、これ
をそれぞれ下記の固体培地（ジェランガム０．２％含有
）に置床した。２５℃、１６時間の日長条件で、２週間
以上培養した結果、それぞれのカルスの表面に多数の不
定胚および／または不定芽を得た。

製造例７前記製造例Ｉで得た不定胚および／または不定芽を、同
じ培地にて２箇月間培養を続けることにより、葉が展開
した多数の植物体を得た。更にこの植物体を、製造例２
および製造例４で用いた培地と同様の培地にそれぞれ置
床し、２５℃で培養して、植物体の表面に多数の不定胚
および／不定芽を得た。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）コリダリス属植物の組織片より誘導したカルスを
、オーキシン類を含まないかまたは低濃度のオーキシン
類を含む培地に移植し培養してコリダリス属植物の不定
胚および／または不定芽を作出することを特徴とするコ
リダリス属植物の不定胚および／または不定芽の作出方
法。
（２）コリダリス属植物の組織片より誘導したカルスを
、オーキシン類を含まないかまたは低濃度のオーキシン
類を含む培地に移植し培養してコリダリス属植物の不定
胚および／または不定芽を作用し、該不定胚および／ま
たは不定芽を、そのまままたは更に培養した後、オーキ
シン類を含まないかまたは低濃度のオーキシン類を含む
培地に移植し培養してコリダリス属植物の不定胚および
／または不定芽を作出することを特徴とするコリダリス
属植物の不定胚および／または不定芽の作出方法。