SU1311673A1 - Способ размножени ча @ @ - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к сельскому хоз йству. Целью изобретени   вл етс  оздоровление исходного материала дл  размножени  при сохранении его жизнеспособности . Вычлен ют эксплантанты и их в водный раствор, содержащий 1,5-2,0% переки-си водорода и 50-60% этанола на с. Затем эксплантанты помещают в 0,05-0,20%-нык водный раствор диоцида на 5-10 мин. Эксплантанты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк, 16-часовом фотопериоде и . 4 табл. со Ч СО

Description

Изобретение относитс  к сельскому хоз йству и может быть использовано в селекции и семеноводстве, в исследовани х по фитопатологии и морфогенезу растений.

Цель изобретени  - оздоровление исходного материала дл  размножени  при сохранении его жизнеспособности.

Пример. Проводитс  размножение и оздоровление ча  сорта Грузинский № 6, Неодревесневшие побеги стерилизуют 12 с в растворе, содержащем по объему 1,5% перекиси водорода и 50% этанола (остальное вода), а затем 6 мин в 0,1%-ном водном растворе диоцида. При этом от 1000 фрагментов с почками получают 937 эксплантаПоложительный эффект достигаетс  только при последовательном применении двух стерилизующихс  растворов: перекиси водорода с этанолом и диоцида. При этом оптимальные концентрации составл ют дл  перекиси водорода 1,5-2,0%, этанола 50-60%, диоцида 0,05-0,2%, а экспозици  дл  первого стерилизующего раствора составл ет 10-15 с, дл  второго 5-10 мин или 300- 600 с (табл. 2). При уменьшении концентрации стерилентов выход асептического материала значительно снижаетс , а жизнетов , свободных от фитопатогенной инфекции, т. е. инфицированность составл ет всего 6,3%. Жизнеспособность неинфицированных эксплантатов, котора  определ етс  по отсутствию повреждений, вызванных стерилен- тами, и способности к пролиферации, составл ет 92,7% (из 937 эксплантатов 869 жизнеспособны). При стерилизации черенков отдельными стерилентами (перекисью

водорода, этанолом и диоцидом) в рекомендуемых дозах и экспозици х получить достаточное количество неинфицированного жизнеспособного материала не удаетс .

Данные о вли нии отдельных стерилен- тов на инфицированность и жизнеспособность эксплантатов ча  приведена в табл. I.

Таблица 1

способность эксплантатов практически не увеличиваетс . Повыщение концентрации

стерилентов или увеличение времени выдерживани  черенков в стерилизующих растворах приводит к резкому снижению и изне- способности эксплантатов без существенного увеличени  выхода асептического мате- риала.

Данные о вли нии концентрации и экспозиции двух стерилизующих растворов на инфицированность и жизнеспособность эксплантатов ча  приведены в табл. 2.

Стерильные эксплантаты культивируют в пробирках с агаризованными средами MS, 85, SN, в которых концентрацию сахарозы довод т до 30 г/л, а рН до 5,5. В среды BS и SH, не содержащие нитрата аммони , добавл ют его в количестве 0,25 г/л. В качестве фитогормона используют БАП в концентрации 1 мг/л. При снижении его конСрок образовани  розеток из почек, сут

Среднее количество побегов на 1 эксплантат

Таблица 2

центрации увеличиваютс  сроки образовани  адвентивных почек и уменьшаетс  их количество (табл. 3). Увеличение концент- рации БАП приводит к ингибированию развити  побегов из почек.

Данные о вли нии различных концентраций БАП на морфогенез в культуре ча  приведена в табл. 3.

Таблица 3

2220

45

2А

30

1,6 5,1 5,7 5,2

.1

Эксплантаты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк. При освещении ниже 2000 лк почкование замедл етс  на 2-3 недели, а при освещенности выще 4000 лк развитие побегов из,почек ингиби- руетс . Эксплантаты культивируют при 16- часовом фотопериоде (8 ч темнота). При 12-14 ч/сут. фотопериоде образование почек и развитие из них побегов замедл етс  на 15-20 дней, а при фотопериоде более 18 ч/сут различий в почковании и развитии побегов по сравнению с 16-18 ч/сут фотопериодом не отмечаетс , однако расход электРасход исходных чере;.:- -ков на получение 1000 саженцов

Коэффициент размножеФрагмент ы с почками помещают дл  дальнейшего размножени  на питательные среды того же состава. Во втором цикле выращивани  (50 сут) каждый эксплантат также образует по 3-6 побегов. Всего за 100 дней культивировани  от каждого исходного эксплантата получают в среднем по 162 побега. Не вы вл ютс  существенные различи  в почковании и развитии побегов при использовании питательных сред различного состава (В., MS, SH).

Дл  получени  растений побеги пересаживают на питательные среды без БАП, где они в течение 3 недель укорен ютс  и образуют по 4-5 листьев. Затем полученные растени  высаживают в почву, укрывают на 2 педели полиэтиленовой пленкой и после этого выращивают в обычных услови х.

Составитель С. Куваева

Редактор О. Ьугир Техред И. ВересКорректор М. Шароши

Заказ 1833/2Тираж 630Подписное

ВЯИИПИ Государственно1-о комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Д1осква, Ж -35, Раушска  .наб., д. 4/5 Производстве 1но-1|о. 1Играфическое предпри тие, г. Ужгород, у.п. Проектна , 4

роэнергии существенно повьипаетс . Эксплантаты инкубируют при 24±1°С. При температуре ниже 22 С развитие почек и побегов замедл етс  на 10-14 дней, а при тем- нературе ниже 6°С полностью прекращаетс . Температура выше 28°С ингибирует развитие почек н побегов,-а при 32-34°С эксплантаты погибают.

Сравнительна  характеристика эффек- тивности размножени  ча  традиционным и предлагаемым способом (в расчете на 1000 саженцев) приведена в табл. 4.

т а Г) л и ц а l

Растени  нор.мально растут и развиваютс , свободны от фитопатогенной инфекции и морфологически не отличаютс  от исходного клона.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ размножени  ча  in vitro, включающий вычленение эксплантатов, их стери-.

   лизацию и культивирование на питательной среде, отличающийс  тем, что, с целью оздоровлени  исходного материала дл  размножени  при сохранении его жизнеспособности стерилизацию эксплантатов осуплествл ют FiyTCM их помещени  в водный раствор, содержащий 1,5-2,0% перекиси водорода н 50-60% этанола, на 10-15 с, а затем в 0,05-0,20%-ный раствор диоцида на 5 10 мин.