JPS63152397A - ヘルベカルデインａおよびｂ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は新物質へルベカルディン（Ｈｅ１ｖｅｃａｒｄ
ｉｎ）ＡおよびＢ１その製造法およびそれを有効成分と
する抗菌剤に関するものである。本発明者らは、土壌か
ら分離したシュウドノカルディア属に属する５ＡＮＫ６
５１８５株が、主としてグラム陽性細菌に対して有効な
新物質へルペカルディンＡおよびＢｉ生産すること全見
出した。

本発明のへルベカルデインＡおよびＢはその諸性状より
パンツマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ　）　、アゴパ
ルシン（Ａｖｏｐａｒｃｉｎ　）あるいはＡ−３５５１
２群物質などと同様のグリコペプチド系抗生物質に類縁
の物質であるが、分子量がそれぞれ１９５５　。

１７９３であることより公知のグリコペプチド系抗生物
質とは明らかに区別され、新物質と判明した。

ヘルペカルデインＡおよびＢはグラム陽性細菌に対して
強い抗菌力全売すことから、ヒトおよび動物のこれらの
靴菌に起因する疾病の予防および治療に用いられる。ま
た、グリコペプチド系公知抗生物質の中には反すう動物
および家畜における飼料効率を増大させるための補足的
手段として利用されているものもあり、本物質について
も同様の効果が期待される。

〔発明の構成〕

本発明のへルベカルデインＡおよびＢは下記の式を有す
る。

ヘルベカルデインＡはＢ１がリストサミン全売し、Ｒ２
がリストサミニルーグルコースニ示シ、Ｒ３がマンノー
スを示し、Ｂ４が２−０−メチルラムノースを示す。

ヘルペカルデインＢはＲ１がリストサミン全売し、Ｂ２
がリストサミニル−グルコースを示し、Ｆｔ３が水素原
子？示し、Ｒ４が２−〇−メチルラムノースを示す。

ここに、ヘルベカルデインＡおよびＢは下記のような理
化学的性状を有する。

１、　ヘルベカルデインへ〇 １）物質の性状：両性水溶性、白色粉末。

２）比旋光度（トリフルオロ酢酸塩として）：［α］ｆ
ｉ５＝＝　−７３，６°（ｃ　Ｏ，９９、０，１ＮＥＣ
Ｌ　）３）元素分析値（鋸：　Ｃ＋５０．５０：Ｈ，５
，６０：Ｎ　、　５．６０　：Ｃ１，３，２５（水和物
として）４）分子式”　９０Ｈ１０５０３６Ｎ９”２ク
ロロバンコマイシン酸、アクチノイシン酸、３−１０ロ
ー４−ヒドロキシフェニルグリシン、４−ヒドロキシフ
ェニルグリシンを、中性糖としてグルコース、マンノー
ス、２−０−メチルラムノースを、アミン糖としてリス
トサミンｔあたえる。

７）紫外線吸収スペクトル：λ。ａｘ（Ｅｌ、、）第１
図に示す通り２８０ｎｍ（４１）に極大吸収を示す。

一４＝ ８）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒＣＴＬ−１ａｘ ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは第２
図に示す通りである。

９）核磁気共鳴スペクトル（δ：　ｐｐｍ　）重水中、
外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）全使用して
測定した核磁気共鳴スペクトル（２７０ＭＨｚ）は第３
図（Ｃ示す通りである。

１０）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不溶。

１１）呈色反応： ニンヒドリン、ライドンスミス、塩化第二鉄反応に陽性
。

１２）薄層クロマトグラフィー： Ｒ８値；０．４０ 吸着剤；イーストマン・クロマグラム・シート扁１３２
５４　（セルロース） 展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２１３
）高速液体クロマトグラフィー： カラム；センシュウパック（６ｘ１５０ｇ。

０ＤＳ−Ｈ−２１５１） 溶媒；１６％アセトニトリル全含む ３０　！ＤＭ燐酸緩衝ｇ（ＰＨ６，８）流速：１ｒｎｉ
／分 保持時間；４４分 ２　ヘルベカルデインＢ０ １）物質の性状二両性水溶性、白色粉末。

２）比旋光度（トリフルオロ酢酸塩として）：〔α〕ｚ
５＝−９５°（Ｃ１，０８、０，ＩＮ　ＥＣ６）３）元
素分析（宜（伺：　Ｃ，５０，６５：Ｈ，５，２３：Ｎ
、５．７５；ＣＬ、３．３０（水和物として）４）分子
式”８４Ｈ９３０３１”９”２６）酸加水分解によりア
ミノ酸としてモノデクロロバンコマイシン酸、アクチノ
イジン酸、３−クロ＝−４−ヒドロそジフェニルグリシ
ン、４−ヒドロキシフェニルグリシンを、中性循として
グルコース、２−０−メチルラムノースを、アミン糖と
してリストサミン′（ｉ−あたえる。

７）紫外線吸収スペクトル’　”ｍａＸ　（Ｅｌｃｍ）
第４図に示す通り２８１Ｄ、Ｄ　（４１，５）に極大吸
収を示す。

８）赤外線吸収スペクトル、νｍａｘ　（ｍＫＢｒディ
スクで測定し次赤外線吸収スペクトルは第５図に示す通
りである。

９）核磁気共鳴スペクトル（δ：　ｐｐｍ　）重水中、
外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を使用して
測定した核磁気共鳴スペクトル（２７０Ｍ）ｌｚ）は第
６図に示す通りである。

１０）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不浴。

１１）呈色反応： ニンヒドリン、ライドンスミス、塩化第二鉄反応に陽性
。

１２）薄層クロマトグラフィー： Ｆｌｆ値；０５６ 吸着剤：イーストマン・クロマグラム・ンートＡ　１３
２５４　（セルロース）展開溶媒ニアＬ−ブタノール：
酢酸：水＝４：１：２ １３）高度液体クロマトグラフイー： カラム：センシュウノぐツク（６Ｘ１５Ｃｈｍ。

０ＤＳ−Ｈ−２１５１） 溶媒；１６％アセトニトリルを含む ３０　ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６，８） 流速；１石／分 保持時間；９．２分 ヘルペカルデインＡおよびＢ物質全生産する５ＡＮＫ６
５１８５株の菌学的性状は次の通りである。

５ＡＮＫ６５１８５株の同定にあたってはＩＳｐ　（イ
ンターナショナル　ストレプトミセス　プロジェクト（
工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ
　ＰｒｏｊｅＣｔ　）　）規定の培地およびワックスマ
ン（Ｓ、　Ａ、　Ｗａｋｓｍａｉ　）著（ジ　アクチノ
ミセテス（Ｔｈｓ　Ａｃｔｔｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）。

２巻〕Ｄ培地等を用いて培養した。培養は通常２８℃で
行った。

１）形態学的特徴 ５ＡＮＫ６５１８５株の形態学的特徴全表１に示す。

表　　１ コロニーの形態　　　　　　平坦ないししわ状気菌糸の
形成　　　　　　　普通に形成する〃　　形態　　　　
　　　直ないし曲線状〃　　伸長法　　　　　　求頂的
（Ａｃｒｏｐｅｔａｌ　）／／　　Ｚｉｇ−Ｚａｇ伸長
　　　　観察されない公募胞子　　　　　　　　　形成
される菌糸の分断　　　　　　　　観察される分断細胞
の表面構造　　　平　滑 〃　　遊走性　　　　　観察されない 〃　　大きさ　　　　　０．４〜０．９　Ｘ　１．０〜
３．Ｏ１ｔｒｎ＊：車軸分岐、胞子のう、菌核など。

２）培養性状 ５ＡＮＫ６５１８５株の２８℃で１４日間培養後の、主
要課天培地上での培養性状全表２に示す。色調の表示は
日本色彩研究所板゛標準色票”のカラーチップナンバー
？表ス。

表　　２ 培地基　　　　　　　性　　　状 Ｇ　：非常に良好、しわ状、薄黄味橙（２−９−９）イ
ースト・麦　ＡＭ：普通、ビロード状、出芽寒天　　　
　Ｒ：鈍黄味橙（８−７−８）（ＩＳＰ　２）　　ＳＰ
　：産生せず 培地基　　　　　　　性　　　状 グリセリン・　Ｇ　：非常に良好、しわ状、薄黄味橙（
２−９−９）アスパラギン　ＡＭ：余り良くない、ビロ
ード状、白寒天　　　　Ｒ：薄黄味茶（６−８−９）Ｃ
ＩＳＰ　５）　　ＳＰ　：産生せず ペプトン・イ　Ｇ　：良好、しわ状、薄黄味橙（２−９
−９）−ストエキス　ＡＭ：形成せず ・鉄寒天　　Ｒ：薄黄味茶（６−８−９）（ＩＳＰ　６
）　　ＳＰ　：産生ぜず Ｇ　：非常に良好、しわ状、薄黄味橙（２−９−９）チ
ロシン寒天　ＡＭ：普通、ビロード状、白（ＩＳＰ７）
　　Ｅｔ　　：黄味茶（６−７−８）ＳＰ：産生ぜず 培地基　　　　　　　性　　　状 ＳＰ：産生せず ＳＰ：産生せず Ｇ　：良好、しわ状、薄黄味橙（２−９−９）栄養寒天
　　ＡＭ：形成せず （Ｄｉｆｃｏ）　　Ｐｉ　　：薄黄味茶（４−８−９）
ＳＰ：産生せず 培地基　　　　　　　性　　　状 Ｇ　：栄り良くない、平坦、薄黄味橙（２−９−９）Ｓ
Ｐ：産生せず ３）生理学的性質 ５ＡＮＫ６５１８５株の生理学的諸性質を表３に示す。

表　　３ 澱粉の水解　　　　　　　　　　− ゼラチンの液化　　　　　　　　十 ミルクの凝固　　　　　　　　　　十 ミルクのペプトン化　　　　　　十 メラノイド様色素 培地ｌ　　　　　　　　　　− 培地２　　　　　　　　　− 培地３　　　　　　　　　− リゾチーム耐性　　　　　　　　　Ｂ ペニシリン耐性　　　　　　　　　Ｒ □セルロース　　　　　　　　　　− 有機酸の貧化性 シトレート（Ｃｉ’ｔｒａｔｅ　）　　　　　　　　＋
ラクテート（Ｌａｃｔａｔ、ｅ　）　　　　　　　−マ
レエート（Ｍａｌａｔｓ　）　　　　　　　　＋オキサ
レート（０ｘａｌａｔｅ　）　、　　　　　＋サクシネ
ート（Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ　）　　　　　＋上地１：イ
ースト・夛芽寒天（ＩＳＰ　２）培地２：　トリプトン
・イーストエキス　ブロス（ＩＳＰＩ）培地３　：ペプ
トン・イーストエキス・鉄寒天（工ＳＰ６）４〕　菌体
内成分について エム・ピー・レシェパリエー（Ｍ、Ｐ。

Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　）らの方法〔エイ畳ディーツ
（Ａ、　Ｄｉｅｔ’ｚ　）ら著、放線菌の分類（Ａｃ＋
、ｉｎｏｍｙｃｅｔｅｔａＸｏｎｏｍｙ　）、２２５頁
、１９８０年〕、内田らの方法〔ジャーナル　オブ　ソ
エネラル　アプライド　マイクロパイオロノー（Ｊ　、
　Ｇｅｎ、　Ａｐｐｌ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）、２３巻、２４９頁、１９７
７年〕に従い、５ＡＮＫ６５１８５株の細胞化学的性状
を調べた結果全表４・て示す。

表　　４ 細胞壁型　　　　　　　■ 全菌体糖量　　　　　　Ａ ミコール酸　　　　　　− アシル基型　　　　アセチル ＬＣＮ−Ａ　　　　　　　　　　　　　　　　−リン脂
５シ　　　　　　ＰＩ［［ 以上から本発明者らは５ＡＮＫ６５１８５株を７ユウド
ノカルデイア・エスピー（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉ
ａｓｐ、　）　　５ＡＮＫ６５１８５　（微工研菌薔第
８６３４号）と命名した。

以上、ヘルペカルデインＡおよびＢの生産菌について説
明したが、放線菌の猪荏質は一定したものでなく、自然
的、人工的に容易に変化することは周知のとおりであり
、本発明で使用しうる菌株はシュウドノカルディア属に
属する咲学聯雫へルベカルデインＡおよびＢを生産する
すべての菌株？包含するものである。

本発明における培養は一般放線菌、・コおける培養方法
に準じて行われ、液体培地中での振盪培養あるいは通気
攪拌培養によるものが好ましい。

培地成分としては、たとえば炭素源としてブドウ糖、マ
ルトース、シュクロース、マンニット、糖蜜、クリセリ
ン、デキストリン、澱粉、大豆油、綿実油などが、窒紫
源としてＸ豆粉、落花生粉、綿実粉、ファーマミン、魚
粉、コーン・スチープ・リカー、ペプトン、肉エキス、
イースト、イーストエキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウムなどが、また、無機塩として食
塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要に
応じて適宜添加される。

液体培養に際してはシリコン油、植物油、界面活性剤等
が消泡剤として適宜使用される。

培地のＰＨは中性付近、培養温度は２４℃から３７℃、
特に２８℃前後が好ましい。

培養の経過に伴って生産されるヘルベカルデインＡおよ
びＢ物質の力価の経時変化は、スタフィロコッカス・ア
ウレウス　ＦＤＡ　２０９Ｐ　ＪＣ−１を被検菌とした
に−・ぐ−ディスク（東洋科学産業■製、直径８　ｖｘ
ｎＸｔｈｉｃｋ　）検定法により測定される。通常５５
〜７０時間の培養でヘルベカルディンＡおよびＢの生産
量は最高値に達する。

主として培養液中の液体部分に存在するヘルベカルデイ
ンＡおよびＢ物質は、培養終了後、菌体その他の固形部
分をけいそう士等を濾過助剤とする濾過操作、あるいは
遠心分離によって除去し、そのろ液または上清中から抽
出、精製す一２〇− ることによって得られる。

ヘルベカルデインＡおよびＢはその物理化学的性状を利
用することによって、例えば、吸着剤上用いて採取する
ことができる。吸着剤としては例えば、活性炭、または
吸着風樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−
４、ＸＡＤ−７等（ローム・アンド・ハース社製）やダ
イヤイオンＨＰ　１０　、　ａｐ２ｏ　、　ｃＢｐ２ｏ
ｐ；Ｈｐｓｏ　　（三菱化成工業■製）、ポリアミドゲ
ル（ウエルム社製）等が使用される。ヘルペカルデイン
ＡおよびＢを含む液を上記の如き吸着剤の層重通過させ
てヘルペカルデインＡおよびＢｋ含む液に含まれる不純
物全吸着させて取り除くか、またはへルペカルデインＡ
およびＢｅ吸着させたのち、メタノール水、アセトン水
、ｎ−ブタノール水などを用いて溶出させることによっ
て得られる。

このようにして得られたヘルべ刀ルデインＡおよびＢｉ
分離、精製するためには、アビてル（無化成工業■尖）
などのセルロース、セファデックスＬＨ−２０（ファル
マシア社製）など七用いた分配カラムクロマトグラフィ
ー、ヘルペカルデインＡおよびＢと混存する不純物との
溶媒に対する分配率の差を利用した抽出法、または向流
分配法などが有効な方法といえる。以上の分離、精製の
手段全単独または適宜組み合わせ、反復用いることによ
りヘルペカルデインＡおよびＢ物質を分離、精製するこ
とができる。ヘルベカルディンＡおよびＢ物質はまた一
般の脂溶性抗生物質と同じく、培養条件によっては培養
液中の菌体部分に存在する。この場合は、アルコール類
、アセトン等の親水性有機溶媒によって抽出し、抽出液
工り溶媒を除去し、次いで水浴液としたのち、培養Ｐ液
からと同様の方法で抽出精製することができる。

また、ヘルペカルデインＡおよびＢは、それ自体既矧の
手順に従いその薬理上許容される酸付加塩および／また
は塩基付加塩に転化することができる。酸付加塩として
は例えば−・ロゲン化水素酸、燐酸、硝酸のような無機
酸、酢酸、クエン酸、アスノ４ラギン酸、メタンスルホ
ン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸のよウナ有
機酸との塩孕挙げることができる。塩基付加塩としては
例えばアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニ
ウム塩、アルなルアンモニウム塩などの有機アンモニウ
ム塩、リジン、アルギニン、グリシン等のアミノ酸付加
塩との塩を挙げることができる。

〔発明の効果〕

このようにして得られたヘルペカルデインＡおよびＢは
下記のような生物学的性状？有する。

１、　ヘルベカルデインＡ０ １）抗菌カニ 一般ダラム陽性、ダラム陰性細菌に対するヘルベカルデ
インＡの最小阻止濃度（ＭＩＣ）はミューラーヒントン
寒天培地〔ディフコ社製〕、嫌気性菌に対してはＧＡｌ
ｖｆ寒天培地（日永製薬■製）ケ用いた寒天培地希釈法
によって測定した。その結果は表５（（示すとおりであ
る。

２）毒　性： マウスに１００　ｍｙＡ！全静脈内投与したが毒性１ま
認められなかった。

表　　５ スタフィロコッカス・アウレウス　５ＡＪＸ７０１７５
　　　　　　　Ｑ、７８スタフイロコツカス・アウレウ
ス　５ＡＮＫ７１０７５　　　　　　１．５６スタフイ
ロコツカス・アウレウス　５ＡＮＫ７１１８３　　　　
　　１．５６スタフイロコツカス・アウレウス　５ＡＮ
Ｋ７１２８３　　　　　　１．５６スタフイロコツカス
・アウレウ、ｒ、　　５−Ａ−ＮＫ７１９８４　　　　
　　３．１３スタフイロコツカス・アウレウス　スミス
　　　　　　　　　　３１３スタフイロコツカス・エビ
デルミガイス　５ＡＮＫ７１５７５　　　１．５６エン
テロコンカス・フェカリス　５ＡＮＫ７１４７８　　　
　　　　０．７８エソシエリヒア・コリ　ＮＩＨＪ　Ｊ
Ｃ−２＞２００プロテウス・ミラビリス　５ＡＮＫ７０
４６１　　　　　　）２００クレブシエラ・ニューモニ
エ　ＰＣ工６０２　　　　　　１００ノユワドモナス・
エルギノーザ　５ＡＮＫ７１８７３　　　＞２００バク
テロイデス・フラソリス　（）Ａ工３０２５　　　　　
　＞５０ユウパクテリウム・シリンドロイデス　ＡＴＣ
Ｃ２７８０３０，２０フンバクテリウム・モルチフェラ
ム　９８１７　　　　　〉５゜ペプトストレプトコッヵ
ス・サンカロリティカス　ＡＴｃｃ１３９５３　　６．
２５ヘフトストレフトコツカスリクーフルス　ＶＰＩＯ
５４６０，３９プロピオニバクテリウム・アクネス　Ａ
ＴＣＣ１１８２８０，２０クロストリノウム・シンビオ
−サム　ＡＴＣＣ１４９４００，３９クロストリソウム
・ラモーサム　ＡＴＣＣ２５５８２１，５６クロス）　
ＩＪ　ノウム・パーフリンゲンス　Ａ’ｒＣＣ１３１２
３０，２０クロストリノウム・ディフィシル　ＡＴＣＣ
９６８９０，３９２、ヘルベカルデインＢ０ １〕　抗菌カニ 一般ダラム陽性、ダラム陰性細菌に対するヘルベカルデ
ィンＢの最小阻止濃度（ＭＩＣ）はミューラーヒントン
寒天培地（ディフッ社Ｍ）、嫌気性菌に対してはＣＡＭ
寒天培地（日永製薬■喪）を用いた寒天培地希釈法Ｌτ
よって測定した。その結果は＄　６４Ｃ示すと３つであ
る。

２）毒　性： マウスに１００・η／Ｋｇを静脈内投与したが毒性は認
められなかった。

表　　６ スタフィロコッカス・アウレウス　ＦＤＡ”２０９Ｐ　
ＪＣ−１０，７８スタフイロコツカス・アウレウス　５
６　　　　　　　　　３．１３スタフイロコツカス・ア
ウレウス　５０７　　ＭＦｔＳＡ　　　　　３．１３ス
タフイロコツカス・アウレウス　スミス　　　　　　　
　１．５６スタフイロコツカス・エビデルミゾイス　Ｉ
ＡＭ　１２９６　　１．５６スタフイロコソカス・エビ
デルミゾイス　エＩＤ　８６６　　　１．５６エソシエ
リヒア・コリ　ＮＩＨＪ　ＪＣ−２，）１００プロテウ
ス・ブルガリス　エＩＤ　８７４−２　　　　　　　１
００クレブシエラ・ニューモニエ　ＩＩＤ　８６５−２
　　　　　）１００シユウトモナス・エルギノーザ　Ｉ
ＩＤ　１１１７−２　　　）１００バクテロイデス・フ
ラノリス　０Ｍ７０００　　　　　　１００ユウパクテ
リウム・シリンドロイデス　ＡＴＣＣ２７８０３０，２
０啄ブトストレプトコツカス・サツカロリティカス　Ａ
ＴＣＣ１３９５３３，１３ｏｆトストンブトコツカス・
ノぐ−ブルス　ＶＰＩＯ５４６０，３９プロピオニバク
テリウム・アクネス　ＡＴＣＣ１１８２８０，２０クロ
ストリジウム・シンビオ−サム　ＡＴＣＣ１４９４００
，３９クロストリジウム・ラモーサム　ＡＴＣＣ２５５
８２、０，３９クロストリノウム・パー７リンゲンス　
ＡＴＣＣ１３１２３０，２０クロストリジウム・デイフ
イシル　ＡＴＣＣ９６８９０，７８以上から、ヘルベカ
ルデインＡおよびＢはスタフィロコッカス・アウレウス
、スタフィロコッカス・エビデルミゾイス等のダラム陽
性ｉ菌及びユウバクテリウム・シリンドロイデス、ベプ
トストレプトコツカス・サツ力ロリチカス、プロピオニ
バクテリウム・アクネス、クロストリジウム・シンビオ
−サム、クロストリジウム・パー７リンゲンス、クロス
トリジウム・デイフイシル等の嫌気性のダラム陽性の細
菌に有効である。

以上ρ）う、ヘルペ刀ルデインＡおよびＢは各種細菌感
染性疾、＠テ対照とする抗菌剤として使用される。その
投与形態としては皮下注射、静脈内注射、筋肉注射、坐
剤彦どによる非経口投４法あるいは錠剤、カプセル剤、
散剤、顆粒剤などによる。軽口投与法があげられる。投
与量は対象疾患、投与経路および投与回数などによって
異なるが、例えば成人に対しては通常は１日０．１７〜
１０２を１回または数回に分けて投与するのが好ましい
。

次に実施例、製剤例をあげて本発明を具体的に説明する
。

実施例１゜ シュウドノカルディア・エスピー　Ｓ　Ａ　Ｎ　Ｋ６５
１８５株會Ａ培地（グルコース３，０％、生イースト１
．０％、大豆粉３．０　％　、　ＣａＣ○３０．４　％
　。

Ｍｇ　ＳＯ４・７Ｂ２００．２チ、ニラサン・ディスフ
オームＣＢ　４２２　０．０１％）８０ｄ會含む５００
　ｒＪ容三角フラスコに一白金耳接種し、２２０’ｒｐ
ｍの回転振盪培養機により２８℃で８４時間培養した。

この培養液２５　ｍ１３７；ｚ　Ａ培地５０　Ｑ　）１
８７；ｚ　含む２１容三角フラスコ４ｔ；、ｒ接慣して
２　’）　ｌ’）　ｒｙ３■回転系盪培養機により２８
℃、２４時間培養した。

この培養液７５０ｍ１ｆ、Ａ培地１５！を含む３０！容
ツヤーファーメンター２基疋接種し、２８℃、回転数１
５Ｏｒｐｍ、通気量１５Ｌ／分で９６時間通気攪拌培養
した。この培養液３０　ＡＶｃ濾過助剤としてセライ）
５４５ｉ加えて濾過する９にの５％アセトン水で洗浄後
３０％アセトン水１８！でヘルペカルデインＡおよびＢ
　ｆ　ｍ出した。溶出ｇｙ５ｚに濃縮しｎ−ブタノール
５ｂで不純物？抽出し水層全濃縮し、凍結乾燥すること
により粉末１８．３ｆｉ得た。同粉末３５ｆ　ｋ　５０
０　ｒｎｌの水に溶解せしめ、予めＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンを結合させたＡｆｆｉ−ｇｅｌ　１０（バイオ
ランド社製）　１００　ｒｒｒｌの入ったカラムに通過
させ吸着させた。同カラムは３００　ｒ、１１の３０％
アセトニ）　ＩＪル水で洗浄後、０．１Ｍの炭２０（三
菱化成工業■製）で用いて吸脱着することにより脱塩し
、凍結乾燥することにより粉末７４８４■を得た。この
粉末１００：ｉｙｉ少量の水に溶解したのち、分取用高
速液体クロマトグラフィー（カラム２０Ｘ２５０７！ｍ
　：　ＹＭＣＳ−３４３（山村科学社製）、溶媒：１５
％アセトニトリ＃−０，ＯＩＭ燐酸緩衝液（Ｐｌ（７，
０）、流速：９．９罰／分）にてヘルベカルデインＡお
よびＢに相当するピークを分取し、同様に脱塩後、凍結
乾燥することによりヘルベカルデインＡ　７８．１　ｍ
ｇおよびヘルペカルデインＢ　２２２７１ｎ９が得られ
た。

実施例２゜ シュウドノカルディア・エスピー　５ＡＮＫ６５１８５
株をＡ培地（グルコース３．０％、化イースト１．０％
、大豆粉３．０％、ＣａＣ０３ｏ、　４％、ＭｇＳＯ４
・７Ｂ２００．２チ、ニラサン・ディスフオームＣＢ４
２２０．０１％）８Ｑ１１１ｉ含む５００　ｒｎｌ容三
角フラスコに一白金耳接種し、２２０ｒｐｍの回転振盪
培養機により２８℃で８４時間培養した。

この培養液２　ｒｎｌ　ｆ　Ａ培地１００ｖｔｌｆ含む
５００ｍ１容三角フラスコ６０本に接種して２２０　ｒ
ｐｍの回転振盪培養機により２８℃、１２０時間培養し
た。この培養液６ｆにセライ）５４５ｉ加せ、２．、．
５７の脱イオン水および２！の１０％アセトン水で洗浄
後、５αチアセトン水１．、５　Ａ　（Ｃで溶出した。

減圧下アセトン會留去、濃縮したのち凍結乾燥す−るこ
とにより粗精製粉末８．２５”ｉさせた。５％アセトン
水にて洗浄後２０チアセトン水にて溶出した。溶出液全
減圧下アセトン？留去したのち凍結乾燥することにより
粗精製粉末１．４２ｆｆｆｉ得た。この粗粉末ｒ少量の
水に溶解しローバーカラム（メルク社製Ｌｉｃｈｒｏｐ
ｒｅｐ。

ＢＰ−８、２５Ｘ３１０ｍｒｎ）　　にかけ、２０　ｒ
ｎｌごとに分画した。フラクション３０までは１３チア
セトニトリル−ｏ、ｏ２Ｍ　燐酸緩衝Ｗ　（ｐＨ７，０
）　ｘ　ｚフラクション３１１Ｊ・らは１５％アセトニ
トリルにて脱塩後、凍結乾燥することによりヘルペカル
デインＡ４５．５ｍｆが得られた。同様にしてフラクシ
ョン７３〜８１．よりヘルペカルデインＢ７５．３ｍグ
が得られた。

この粉末をそれぞれ少量の水に溶解したのち、実施例１
と同様に分取用高速液体クロマトグラフィーにて分取し
、脱塩後、凍結乾燥することにより純品のへルペカルデ
インＡ　２０．３■およびヘルペカルデイン、Ｂ　４７
．９７ＩＩ！が得られた。

実施例３ シュウドノカルディア・エスピー　５ＡＮＫ６５１８５
株全Ａ培地（グルコース３０％、生イースト１０％、大
豆粉３．０　％　、ＣａＣ０＝、　０．４％。

ＭｇＳＯ４・７８２００．２チ、ニラサン・ディスフオ
ームＣＢ４２２０．．０１％）　８０　ｒｎｌｋ含む５
００ｍ１容三角フラスコに一白金耳接種し、２２０ｒｐ
ｍの回転振盪培養機により２８℃で８４時間培養した。

この培養液２５ｉＪをＡ培地５ｏｏｍＱ−含む２！容三
角フラスコ４本に接種して２２０　ｒｐｚの回転振盪培
養機により２８℃、２４時間培養した。

この培養液７５０ｍｇ１、Ａ培地１５！を含む３０！容
ジャーファーメンタ−２基に接種し、２８℃、回転数１
５Ｏｒｐｍ、通気量１５Ｉ！／／分で９６時間通気攪拌
培養した。この培養液３０Ａに濾過助剤としてセライ）
５４５：加えて濾過する９！の５％アセトン水で洗浄後
３０係アセトン水１８！でヘルペカルデインＡおよびＢ
ｉ溶出した。溶出ｉを５．ｅに濃縮しｎ−ブタノール５
！で不純物を抽出し水層全濃縮し、凍結乾燥することに
より粉末１８．４ｆｔ得た。この粉末１８１を１１の脱
イオン水に溶解し、ポリアミド３５０ｄのカラムに吸着
させた。同カラムを７００Ｆ、Ａ！の脱イオン水で洗浄
後、５０チメタノール水１．４！にて溶出した。活性画
分を集め濃縮後、凍結乾燥することによりヘルペカルデ
インＡおよびＢを含む粗粉末１．１６７’ｆｆｉ得た。

この粗粉末ケ実施例１と同様に処理して、純品のへルペ
カルデインＡ１５．３　ｍ９およびヘルペカルディンＢ
３７．４■が得られた。

次Ｋ　ｆｆ剤例を示す。

製剤例１　経口用カプセル剤 ヘルペカルデインＡ　　　　　　１１００Ｉｎ乳　　糖
　　　　　　　　　　　　　　　　　１００トウモロコ
シ澱粉　　　　　　１４８５ステアリン酸マグネシウム
　　　　１−５３５０■ 上記処方の粉末を混合し、３０メツシユのふるいを通し
たのち、この粉末３５０■？ゼラチンカプセルに入れ、
カプセル剤とした。

製剤例２　経口用カプセル剤 ヘルペカルデインＢ１００ｍｇ’ｆｆｉ用いて製剤例１
と同様にして、カプセル剤とした。

製剤例３．注射剤 ヘルペカルデインＡ５００１ダｉｌ／１５Ｍ燐酸緩衝液
（２日−”’　）　５．　Ｏｍｉに加えて溶解し、次い
で、５罰のアンプルに封入し、常法に従って滅菌し注射
剤とした。

製剤例４．注射剤 ヘルペカルデインＢ　５００　ｒｒｑを用いて製剤例３
と同様にして、注射剤とした。

【図面の簡単な説明】

第１図はへルベ刀ルデインＡの紫外線吸収スペクトルを
示し、第２図は同物質の赤外腺吸収スペクトル全売し、
第３図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。 第４図はへルペカルデインＢの紫外線吸収スペクトル？
示し、第５図は同物質の赤外線吸収スペクトル？示し、
第６図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するヘルベカルデインＡおよびＢ並びにその薬理上
   許容される塩。 但し、式中、 ヘルベカルデインＡは、Ｒ＿１がリストサミンを示し、
   Ｒ＿２がリストサミニル−グルコースを示し、Ｒ＿３が
   マンノースを示し、Ｒ＿４が２−Ｏ−メチルラムノース
   を示す。 ヘルベカルデインＢは、Ｒ＿１がリストサミンを示し、
   Ｒ＿２がリストサミニル−グルコースを示し、Ｒ＿３が
   水素原子を示し、Ｒ＿４が２−Ｏ−メチルラムノースを
   示す。 ２、シユウドノカルデイア属に属するヘルベカルデイン
   ＡおよびＢ生産菌を培養し、その培養液よりヘルベカル
   デインＡおよびＢを採取することを特徴とするヘルベカ
   ルデインＡおよびＢの製造法。 ３、シユウドノカルデイア属に属するヘルベカルデイン
   ＡおよびＢ生産菌がシユウドノカルデイア・エスピーＳ
   ＡＮＫ６５１８５株（微工研菌寄第８６３４号）である
   特許請求の範囲第２項記載の製造法。 ４、ヘルベカルデインＡおよび／またはＢあるいはこれ
   （これら）の薬理上許容される塩を有効成分とする抗菌
   剤。