JPH0383594A - 抗生物質ガラカルディンａおよびｂ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は新規抗生物質ガラカルデインＡおよびＢ、その
製造法、それを有効成分とする抗菌剤およびそれを生産
する新菌種に関する。

（発明が解決しようとする課題） 本発明者らは、土壌から分離した放線菌に属するＳＡＮ
Ｋ　６４２８９株が、主としてグラム陽性細菌に対して
有効な新規抗生物質ガラカルデインＡおよびＢを生産す
ることを見出して本発明を完成した。

（課題を解決するための手段） 本発明の新規抗生物質ガラカルデインＡおよびＢは下記
の理化学的性質を有する。

工、抗生物質ガラカルデインＡ １）物質の性状二　両性水溶性、白色粉末。

２）比旋光度：　［α］　ｏ　　　　３８．７゜（Ｃ＝
１．ＯＯ，Ｈ２Ｏ） ３）元素分析値（％）： Ｃ；５０．５５．　Ｈ；５．６２．　Ｎ；５．０６．　
Ｃ１；２．３９゜Ｆ；　１．１６ （但し一部トリフルオロ酢酸、水を含む）４）分子式：
　Ｃ０゜ｘＨｌｌｘｔＯａｒ、Ｎ９Ｃｌ２５）分子量：
　　２２６５　（ＦＡＢ−ＭＡＳ法により測定。

阿＋Ｈ＝２２６６、但し、Ｃｌ＝ ３５として計算） ６）加水分解： 酸加水分解によりアミノ酸としてモノデクロロバンコマ
イシン酸、アクチノイジン酸、３−クロロ−４−ヒドロ
キシフェニルグリシン、４−ヒドロキシグリシンを、中
性栖としてグルコース、マンノース、ラムノース（各１
モル）、ガラクトース（２モル）を、アミノ糖としてリ
ストサミンをあたえる。またガラクトシダーゼ処理によ
りガラカルデインＢもしくはβ−アボパルシンをあたえ
る。

７）紫外線吸収スペクトル：λ＋ｗａｘｎｍ　（Ｅ　ｌ
ｃｊ第１図に示す通り水中で２８０　ｎｎ＞　（３９，
６）に極大吸収を示す。

８）赤外線吸収スペクトルニジ、ａ、　　ｃｍ１ＫＢｒ
にディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは第２図に
示す通りである。

９）核磁気共鳴スペクトル：　（δ：ｐｐｍ）重水中、
外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を使用して
測定した核磁気共鳴スペクトル（２７０ＭＨｚ）は第３
図に示す通りである。

１０）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不溶。

１１）呈色反応： ニンヒドリン、ライドン−スミス、塩化第二鉄反応に陽
性。

１２）薄層クロマトグラフィｍ： Ｒｆ値；　　０．１２ 吸着剤；イーストマン　クロマグラムシートＮｏ．１３
２５４　（セルロース）展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢
酸：水＝４：に２ １３）高速液体クロマトグラフィｍ： 分離カラム；センシューパック　００ＳＨ−２１５１　
（カラムサイズ、φ６ Ｘ　１５０ｎｏｎ、センシュー科学■ 製） 溶媒；１５％アセトニトリル、２．５％酢酸、０．０１
Ｍヘプタンスルホン酸ソーダ （アンモニア水にてｐＨ４，０） 流速；　１．５ｎ＋１／分 保持時間；３．１分 ２、抗生物質ガラカルデインＢ １）物質の性状二　両性水溶性、白色粉末。

２）比旋光度＝　［α］Ｄ２５　　−５２，４゜（ｃ、
０．９７．　ＨｚＯ） ３）元素分析値（％）： Ｃ；４８．３０．　Ｈ；５．２０．　Ｎ；５．０６．　
Ｃ１；２．７５゜Ｆ；１．４３ （但し一部トリフルオロ酢酸、水を含む）４）分子式：
　　Ｃ９５Ｈ１１１０４ｓＮ９Ｃｌ　＝５）分子量：　
　２１０３　（ＦＡＢ−ＭＡＳ法により測定。

阿十〇＝２１０４、但し、Ｃｌ＝ ３５として計算） ６）加水分解： 酸加水分解によりアミノ酸としてモノデクロロバンコマ
イシン酸、アクチノイジン酸、３−クロロ−４−ヒドロ
キシフェニルグリシン、４−ヒドロキシグリシンを、中
性糖としてグルコース、マンノース、ラムノース、ガラ
クトース（各１モル）を、アミノ糖としてリストサミン
をあたえる。またガラクトシダーゼ処理によりβ−アボ
パルシンをあたえる。

７）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（Ｅｌ。、）第４
図に示す通り水中で２７９　ｎｍ　（５０，５）に極大
吸収を示す。

８）赤外線吸収スペクトルニジ＋ｓａｘ　　ＣｒＴＬ−
１ＫＢｒにディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは
第５図に示す通りである。

９）核磁気共鳴スペクトル：　（δ：ｐｐｍ）重水中、
外部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を使用して
測定した核磁気共鳴スペクトル（２７０ＭＨｚ）は第６
図に示す通りである。

１０）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、酢酸エチル、
クロロホルム、ベンゼンに不溶。

１１）呈色反応： ニンヒドリン、ライドン−スミス、塩化第二鉄反応に陽
性。

１２）薄層クロマトグラフィｍ： Ｒｆ値；　　０．２３ 吸着剤；イーストマン　クロマグラムシートＮａ１３２
５４　（セルロース） 展開溶媒：ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：Ｉ：２ 王３）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシューパック　ＯＤＳ　Ｈ−２１５１
（カラムサイズ、φ６ Ｘ　１５０ｍｍ、センシュー科学■ 製） 溶媒；１５％アセトニトリル、　２．５％酢酸、０．０
１Ｍヘプタンスルホン酸ソーダ （アンモニア水にてｐＨ４，０） 流速；　１．５！！ＩＩ／分 保持時間；５．５分 本発明のガラカルデインＡおよびＢには、種々の異性体
が存在する。したがって、本発明にはこれらの異性体お
よび異性体の混合物をも包含する。

本発明のガラカルデインＡおよびＢは塩の形で使用する
ことができる。塩としては、例えば塩酸。

硫酸、燐酸のような無機酸；シュウ酸、酢酸、クエン酸
、酒石酸、マロン酸、マレイン酸、リンゴ酸、フマル酸
、イタコン酸、シトラコン酸、コハダ酸のような有機カ
ルボン酸；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナ
フタレンスルホン酸、ρ−トルエンスルホン酸のような
有機スルホン酸などとの塩をあげることができる。

また、カルボキシル基も塩基と共に塩を形成する。その
ような塩としてはリチウム、ナトリウム、カリウム、カ
ルシウム、マグネシウムのようなアルカリ金属およびア
ルカリ土類金属との金属塩；アンモニウム塩；例えばシ
クロヘキシルアミン、ジイソプロピルアミン、トリエチ
ルアミンのような有機アミンとの塩；リジン、アルギニ
ンのような塩基性アミノ酸との塩などをあげることがで
きる。

本発明のガラカルデインＡおよびＢはその諸性状よりバ
ンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ　）、アボパルシ
ン（Ａｖｏｐａｒｃｉｎ）、あるいはＡ−３５５１２群
物質などと同様のグリコペプチド系抗生物質に類縁の物
質であるが、分子量がそれぞれ２２６５．２１０３であ
ること、分子量が同じ２１０３であるガラクトシル−β
−アボパルシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ−β−ａｖｏｐ
ａｒｃｉｎ）とは高速液体クロマトグラフィーにおいて
明らかに保持時間が異なることなどより公知のグリコペ
プチド系抗生物質とは明らかに区別され、新物質と判明
した。

ガラカルデインＡおよびＢを生産するＳＡＮＫ　６４２
８９株（微工研菌寄第１０９４０号；　ＦＥＲＭ　Ｐ−
１０９４０）の菌学的性状は次の通りである。

ＳＡＮＫ　６４２８９株の同定にあたってはＩＳＰ　［
ジ・インターナショナル・ストレプトミセス・プロジェ
クト（Ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　５ｔｒｅ
　ｔｏｗ　ｃｅｓ　Ｐｒ。

ｊｅｃｔ）　］規定の培地およびワックスマン（Ｓ、　
Ａ。

Ｖａｋｓｍａｎ）著［ジ・アクチノミセテス（Ｔｈｅ　
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）　、　２巻］の培地等を
用いて培養した。

培養は通常２８℃で行なった。

１、形態学的特徴 ＩＳＰ［ジ・インターナショナル・ストレプトミセス・
プロジェクト（Ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　
社匡匹竺匹聾Ｐｒｏｊｅｃｔ）コ規定の培地上、２８℃
、１４日間培養後の顕微鏡下観察ではＳＡＮＫ　６４２
８９株の基生菌糸は分岐して良く伸長する。基生菌糸は
特有のジグザグ状になることもあり、また培養後期には
分断することもある。気菌糸は単純分岐し、直線ないし
曲線状に伸長する。真性の胞子連鎖は通常認められない
が、培養基の種類や培養条件により、楕円形で表面が平
滑の形態が観察されることもある。気菌糸はまた培養後
期には分断することもある。気菌糸の車軸分岐、菌核、
胞子のうなどの特殊器官は観察されない。

２、各種培養基上の性質 ＳＡＮＫ　６４２８９株の２８℃で１４日間培養後の、
主要寒天培地上での培養性状を表１に示す。色調の表示
は日本色彩研究所版”標準色衣“のカラーチップナンバ
ーを表わす。

表１ 培地の種類　　　項目　　ＳＡＮＫ　６４２８９の性状
シュクロース・ 硝酸塩寒天 Ｇ： ＡＭ： Ｒ： ＳＰ： あまりよくない、平坦、 ペースト状、薄黄味橙 （２−９−９） 豊富に形成、ビロード状、 白 薄黄味橙（２−９−９） 産生せず グルコース・ アスパラギン Ｇ： あまりよくない、平坦、 ペースト状、薄黄味橙 寒天 ゛（２−９−９） ＡＭ：　豊富に形成、ビロード状、 白 Ｒ：　薄黄味橙（２−９−９） ＳＰ：　産生せず グリセリン・ アスパラギン 寒天（ＩＳＰ５） Ｇ：　非常に良好、平坦、ペー スト状、薄黄味茶 （４−８−９） ＡＭ：　豊富に形成、ビロード状、 白 Ｒ：　薄黄味茶（４−８−９） 、ＳＰ：　　産生せず 澱粉・無機塩 寒天（ＩＳＰ４） Ｇ：　あまりよくない、平坦、 ペースト状、薄黄味橙 （２−９−９） ＡＭ二　あまりよくない、ビロー ド状、白 Ｒ：　薄黄味橙（２−９−９） ＳＰ： 産生せず チロシン寒天 （ＩＳＰ７） Ｇ： ＡＭ： Ｒ： ＳＰ： 良好、平坦、ペースト状、 薄黄味茶（４−８−９） 豊富に形成、ビロード状、 白 薄黄味茶（６−７−９） 産生せず ペプトン・　　　Ｇ： イーストエキス・ 鉄寒天 （ＩＳＰ６）　　　　ＡＭ　： Ｒ： ＳＰ： 非常に良好、平坦、ペー スト状、薄黄味茶 （６−８−９） 形成せず 黄味基（８−７−９） 産生せず 栄養寒天 （Ｄｉｆｃｏ） Ｇ： ＡＭ： Ｒ： 良好、平坦ないしひだ状、 薄黄味茶（４−８−９） 形成せず 薄黄味茶（４−８−９） ＳＰ： 産生せず イーストエキス・Ｇ： 麦芽エキス 寒天（ＩＳＰ２） ＡＭ： Ｒ： ＳＰ： 非常に良好、しわ状、ペ ースト状、薄黄味茶 （６−８−９） 良好、ビロード状、白 黄味基（８−７−９） 産生せず オートミール　　Ｇ： 寒天（ＩＳＰ３） ＡＭ二 Ｒ： ＳＰ： 良好、平坦、ペースト状、 薄黄味茶（４−８−９） 僅かに形成、白 薄黄味茶（６−７−９） 産生せず 水寒天 Ｇ： ＡＭ： Ｒ： ＳＰ： 良くない、平坦、黄味法 （１−９−１０） 原痕跡的に形成、白 黄味法（１−９−１０） 産生せず ポテト・ 人参エキス 寒天 Ｇ：　あまりよくない、平坦、 黄味法（１−９−１０） ＡＭ二　あまりよくない、ピロ ード状、白 Ｒ：　薄黄味橙（２−９−９） ＳＰ：　産生せず Ｇ：生育　　ＡＭ：気菌糸 ＳＰ：可溶性色素 Ｒ：裏面 ３、生理学的性質 ＳＡＮＫ　６４２８９株の生理学的性質を表２に示す。

表２ 澱粉の氷解 ゼラチンの液化 硝酸塩の還元 ミルクの凝固 ミルクのペプトン化 陰性 陽性 陽性 陽性 陽性 生育温度範囲（培地１）＊ 生育適正温度（培地１） 食塩耐性（培地１） カゼインの分解 チロシンの分解 キサンチンの分解 アデニンの分解 ヒポキサンチンの分解 グアニンの分解 溶菌酵素耐性 嫌気条件下での生育 酸産生； アドニトール アラビノース セロビオース エリスリトール グルコース ラクトース マルトース マンノース ８−３６℃ ２０−３１℃ ３％ 陽性 陽性 陰性 生育せず 陽性 陰性 耐性 弱く生育 陰性 陰性 陰性 陰性 陽性 陰性 陽性 陽性 メレチトース　　　　　　　　　　陰性ラフィノース　
　　　　　　　　　陰性ラムノース　　　　　　　　　
　　陰性シュクロース　　　　　　　　　　陽性トレハ
ロース　　　　　　　　　　　陽性メラニン様色素生産
性（培地２）　　陰性（培地３）　　陰性 （培地４）　　陰性 ＊：培地１；イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ
２） ２；トリプトン・イーストエキスブロス（ＩＳＰＩ） ３；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（ＩＳＰ６） ４：チロシン寒天（ＩＳＰ７） また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地を使用して、１
４日間培養後の炭素源の資化性を表３に示す。

表 ＋：利用する ±：弱く利用する ：利用しない ４、菌体成分について 一ＳＡＮＫ　６４２８９株の細胞壁について、ビー・ベ
ラカーらの方法［Ｂ、　Ｂｅｃｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、
アプライド・マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ　
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）。

１２巻、４２１−４２３頁、１９６４年コに従い検討し
た結果、メソジアミノピメリン酸が検出された。　また
、ＳＡＮＫ　６４２８９株の全細胞中の糖成分を、エム
・ビー・レシュバリエの方法［Ｍ、　Ｐ、　Ｌｅｃｈｅ
ｖａｌｉｅｒ。

ジャーナル・オブ・ラボラトリ−・アンド・クリニカル
・メデイシン（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ　ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）
、　７１巻、９３４頁、１９６８年］に従い検討して結
果、ガラクトース、グルコース、マンノース、キシロー
ス、ラムノースが検出された。　また、ニス・チー・ヘ
クトらの方法［Ｓ、　Ｔ。

Ｈｅｃｈｔ　ｅｔ　ａｌ、、ジャーナル・オブ・クリニ
カル・マイクロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）第４巻
、２８４−２８７頁、１９７６年］に従い、ミコール酸
について検討したところＳＡＮＫ　６４２８９株の全菌
体よりミコール酸が検出された。

以上のことから本菌株は細胞壁タイプＩＶ／Ａを示すも
のである。ＩＶ／Ａ群放線菌の中で菌糸の分断（培養後
期）がおこり、ミコール酸が存在する菌株としてはノカ
ルデイア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属やロドコッカス（Ｒｈ
ｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属等が考えられる。最近これらの
分類には従来の諸性質に加え化学分類学的な方法が重要
視されてきている。　　表４にはＳＡＮＫ　６４２８９
株とノカルデイア属およびロドコッカス属のリン脂質お
よび主なメナキノン型を示した。

表 １［放線菌の同定実験法］日本放線菌研究会編、１９８
５年記載の方法による。

ｕノカルデイア属の中には菌糸の分断が顕著でない株も
存在する。

表４に示されるようにＳＡＮＫ　６４２８９株のリン脂
質およびメナキノン型はノカルデイア属やロドコッカス
属のものと異なっている。しかしリン脂質は環境条件に
よって質的、量的に変動する可能性があり、またメナキ
ノンも属を決定する基準として用いることに対して統一
された見解があるわけではなく、これらの分類の基準と
しての価値については、各研究者の判断に委ねられてい
るのが実情である。また最近ロドコッカス・オーランチ
アカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒａｎｔｉａｃ
ｕｓ　）とコリネバクテリウム・バウロメタボラム（（
４２朋垣回貝１聾匹ｕｒｏｍｅｔａｂｏｌｕｎｓ）とを
同一種と見なし、ツカムレラ（Ｔｓｕｋａｏ＋ｕｒｅｌ
ｌａ）属を新設すべきであるという提唱がなされた［Ｍ
、Ｄ、Ｃｏ１１ｉｎｓ　ｅｔ　ａｔ、、インターナショ
ナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バクテリオ
ロジ−（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ）　３８巻、３８５−３９１頁、１９８８年］。

このような放線菌の分類の現状にかんがみ、現時点で、
　ＳＡＮＫ　６４２８９株を特定の属に属させることは
極めて困難である。今後本菌株の所属にあたっては属お
よび種の基準の動向に常に注意をはらい、適切な対応を
する。

以上、ガラカルデインＡおよびＢの生産菌について説明
したが、衆知のとおり、放線菌は自然界において、また
人工的な操作（たとえば、紫外線照射、放射線照射、化
学薬品処理等）により、変異を起こしやすく１本発明の
ＳＡＮＫ　６４２８９株もこの点は同じである。本発明
にいうＳＡＮＫ　６４２８９株はそのすべての変異株を
包含する。またこれらの変異株のなかには、遺伝学的方
法、たとえば組換え、形質導入、形質転換等により得ら
れたものも包含される。すなわち、本発明では、抗生物
質ガラカルデインＡおよびＢを生産し、ＳＡＮＫ　６４
２８９株およびその変異株と明確に区別されない菌株は
全てＳＡＮＫ　６４２８９株に包含されるものである。

つぎに、本発明の新菌株ＳＡＮＫ　６４２８９の土壌よ
りの分離方法について述べる。本発明の新菌株は常法に
よって分離される。すなわち、長野県大町市より採取し
た土壌をあらかじめ用意した滅菌水で適宜希釈する。つ
いで、これをグリセリン・アスパラギン寒天（ＩＳＰ５
）培地に塗抹し、２８℃にて１０日間培養することによ
り出現してくる放線菌のコロニーの中から分離すること
ができる。本発明の新菌株を分離するに際し使用される
分離培地としては炭素源、窒素源、無機イオンおよび有
機栄養源等より選択されたものを適量含有する培地であ
れば合成または天然培地の何れでも使用可能である。

本発明におけるガラカルデインＡおよびＢの培養は一般
放線菌における培養方法に準じて行なわれ、液体培地中
での振盪培養あるいは通気攪拌培養によるものが好まし
い。培地成分としては、たとえば炭素源としてブドウ糖
、マルトース、シュクロース、マンニット、糖蜜、グリ
セリン、デキストリン、澱粉、大豆油、綿実油などが、
窒素源として大豆粉、綿実粉、ファーマミン、魚粉、コ
ーン・スチープ・リカー、ペプトン、肉エキス、イース
ト、イーストエキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、
硫酸アンモニウムなどが、また、無機塩として食塩、燐
酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要に応じて
適宜添加される。液体培養に際してはシリコン油、植物
油、界面活性剤等が消泡剤として適宜使用される。

培地のｐＨは中性付近、培養温度は２４℃から３７℃、
特に２８℃前後が好ましい。

培養の経過に伴って生産されるガラカルデインＡおよび
Ｂの力価の経時変化は、スタフィロカツカス・アウレウ
ス　ＦＤＡ　２０９Ｐ　ＪＣ−１を被検菌としたペーパ
ーディスク（東洋科学産業（株）製、直径８ｍｍ、　ｔ
ｈｉｃｋ）検定法により測定される。通常１２〇−１６
８時間の培養でガラカルデインＡおよびＢの生産量は最
高値に達する。主として培養液中の液体部分に存在する
ガラカルデインＡおよびＢは、培養終了後、菌体その他
の固形部分をけいそう土等をろ過助剤とするろ過操作、
あるいは、遠心分離によって除去し、そのろ液または上
清中から抽出、精製することによって得ることができる
。

ガラカルデインＡおよびＢはその物理化学的性状を利用
することによって、例えば、吸着剤を用いて採取するこ
とができる。吸着剤としては例えば、活性炭、または吸
着用樹脂であるアンバーライト　ＸＡＤ−２，ＸＡＤ−
４，ＸＡＤ−７等（ローム・アンド・ハース社製）やダ
イヤイオンＨＰＩＯ，ＨＰ２０．ＣＨＰ２０Ｐ、ＨＰ５
０　（三菱化成■社製）、ポリアミドゲル（ウエルム社
製）等が使用される。ガラカルデインＡおよびＢを含む
液を上記のごとき吸着剤の層を通過させて、不純物を吸
着させて取り除くか、またはガラカルデインＡおよびＢ
を吸着させたのち、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブ
タノール水などを用いて溶出させることによって得られ
る。

このようにして得られたガラカルデインＡおよびＢを分
離、精製するためには、アビセル（Ｍ化成工業＠製）な
どのセルロース、セファデックスＬＨ−２０（ファルマ
シア社製）などを用いた分配力ラムクロマトグラフィー
ミガラカルデインＡおよびＢと混在する不純物との溶媒
に対する分配率の差を利用した抽出法、または向流分配
法などが有効な手段といえる。またＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａ
ｌａなどをリガンドしたアフィニティークロマトグラフ
ィーも有効な方法といえる。以上の分離、精製の手段を
単独または適宜組合せ、反復用いることでガラカルデイ
ンＡおよびＢを分離、精製することができる。ガラカル
デインＡおよびＢはまた一般の抗生物質と同じく、培養
条件によっては、培養液中の菌体部分に存在する。この
場合は、アルコール類、アセトン等の親水性有機溶媒に
よって抽出し、抽出液より溶媒を除去し、次いで水溶液
としたのち、培養ろ液からと同様の方法で抽出精製する
ことができる。

このようにして得られる本発明のガラカルデインＡおよ
びＢはグラム陽性細菌に対して強い抗菌力を示すことか
ら、ヒトおよび動物のこれらの細菌に起因する疾病の予
防および治療に用いられる。

また、グリコペプチド系公知抗生物質の中には反すう動
物および家畜における飼料効率を増大させるための捕捉
的手段として利用されているものもあり、本物質につい
ても同様の効果が期待される。

以上からガラカルデインＡおよびＢは各種細菌感染疾患
を対照とする抗菌剤として使用される。

その投与形態としては皮下注射、静脈内注射、筋肉注射
、座剤などによる非経口投与法あるいは錠剤、カプセル
剤、散剤、果粒剤などによる経口投与法があげられる。

投与量は対象疾患、投与経路および投与回数などによっ
て異なるが、例えば成人に対しては通常は１日０．９ｇ
から１０ｇを１回または数回に分けて投与するのが好ま
しい。

（実施例） 次に実施例、製剤例をあげて本発明を更に具体的に説明
する。

１　、ＳＡＮＫ　６４２８９の 長野県大町市より採取した土壌を室温で風乾した後、１
ｇを９ｍｌの滅菌水に懸濁し、ミキサーで充分攪拌し、
約３０分間放置した。このようにして得られた土壌懸濁
液上清１ｍｌをｌ０００倍に希釈した後、その上清０．
０５ｍ１をグリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ
５）上に滅菌コンラージ捧を用いて塗抹し、２８℃にて
１０日間培養した。

放線菌ＳＡＮＫ　６４２８９株は上記のグリセリン・ア
スパラギン寒天（ＩＳＰ５）培地上に出現したコロニー
からイーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ２）の斜
面培地に接種し、２８℃にて１４日間培養して得られた
。このようにして得られた本菌株はモノコロニー処理等
により単一菌株であることを確認した。また純粋培養さ
れた菌株は、分散剤に１０％スキムミルクを用いた凍結
乾燥アンプルとして保存した。

２、ガラカル−インＡおよびＢの ＳＡＮＫ　６４２８９株をＡ培地（グルコース３．０％
。

生イースト１．０％、大豆粉３．０％、　ＣａＣ０ａ　
０．４％。

Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，２％、ニラサン　デイスフオ
ームＣＢ４２２０．０１％）　８０ｍ１を含む５００ｍ
１容三角フラスコに一白金耳接種し、２２０　ｒｐｍの
回転振盪培養機により２８℃で８４時間培養した。この
培養液２５ｍ１をＡ培地５００　ｎｘｌを含む２Ｌ容三
角フラスコ４本に接種して２２０　ｒｐｍの回転振盪培
養機により２８℃で２４時間培養した。この培養液７５
０　ｍｌを、Ａ培地１５　Ｌを含む３０　Ｌ容ジャーフ
ァメンタ−４基に接種し、２８℃、回転数１５０　ｒｐ
ｍ、通気量１５Ｌ／分で１２０時間通気攪はん培養した
。この培養液３０　Ｌにろ過助剤としてセライト５４５
を加えてろ過すると、ろ液５５　Ｌが得られた。このろ
液をダイヤイオンＨＰ２０　（三菱化成■製）　６Ｌに
吸着させ１８　Ｌの水および１８　Ｌの５％アセトン水
で洗浄後３０％アセトン水３６　ＬでガラカルデインＡ
およびＢを溶出した。溶出液を１ＯＬに濃縮しｎ−ブタ
ノール１０　Ｌで不純物を抽出し、水層を濃縮し凍結乾
燥することにより粉末９５．１ｇを得た。同粉末９０　
ｇを１ＯＬの精製水に溶解せしめ、予め、Ｄ−アラニル
−Ｄ−アラニンを結合させたＡｆｆｉ−ｇｅｌ　１０　
（バイオランド社製）５４０ｏ＋１の入ったカラムに通
過させ吸着させた。同カラムは４．５Ｌの３０％アセト
ニトリル水で洗浄後、０．３５　Ｍの重炭酸アンモニウ
ムの入った同溶媒を展開す奥ことにより活性物質を溶出
した。３００　ｍｌのダイヤイオンＨＰ２０　（三菱化
成■製）を用いて吸脱着することにより脱塩し、凍結乾
燥することにより粉末４．９４　ｇを得た。この粉末４
ｇを少量の精製水に溶解したのち、分取用高速液体クロ
マトグラフィー（カラム２０Ｘ　２０１１１１　：　０
０５　Ｈ−５２５１（センシュー科学■製）、溶媒：１
３％アセトニトリル−０，５％トリフルオロ酢酸、流速
：　９．９ｍｌ／分）にてガラカルデインＡおよびＢに
相当するピークを分取し、同様に脱塩後、凍結乾燥する
ことによりガラカルデインＡ　２３５　ｍｇ、　　およ
び８６２０ｍｇが得られた。

（実施例の効果） 本発明のガラカルデインＡおよびＢは下記の生物学的性
状を示す。

跋訣忽上−捩革ガよ 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対する抗生物質ガラ
カルデインＡの最小阻止濃度（ＭＩＣ）はミューラーヒ
ントン寒天培地（Ｄｉｆｃｏ社製）を用いた寒天培地希
釈法によって測定した。

結果を表５に示す。

表 被検菌 ＭＩＣ（μｇ／道１） 力９ラカルテ９インＡ　　　　　ｆＪ’ラカルテ９イン
Ｂスタフィロコッカス　アウレウス Ｆ［）Ａ　　２０９Ｐ　　ＪＣ−１ スタフイロコツカス　アウレウス　５６スタフイロフツ
カス　アウレウス　ＳＭ　　ＳＴｆスタフィロフッ力ス
　アウレウス　３３７スタフイａコツカス　アウレウス ５０７（ＭＲ５Ａ） スタフィロコッカス　アウレウス ’　１−１　（ＭＲ５Ａ） スタフィロコッカス　アウレウス ３６（ＭＲ３Ａ） スタフィロコッカス　アウレウス ５１１（ＭＲ５Ａ） スタフィロコッカス　アウレウス ５３５（ＭＲ５Ａ） ３．１３ ６．２５ ６．２５ ５ １２．５ １２．５ ６．２５ ３、Ｉ３ ５ １．５６ ３．１３ ３．１３ １２．５ ３．１３ ３．１３ ３．１３ １．５６ ６．２５ スタフィロコッカス　アウレウス １６０−１（阿Ｒ８Ａ） ミコハゝクテリウム　スメク９マチス ＡＴＣＣ６０７ エンテロフッカス　フェカリス　Ｓ−２９９ニジエリシ
ア　コリ Ｎ１）［Ｊ　　ＪＣ−２） ニジエリシア　フリ ＪＥ５５０６　　Ｎｔ１６ クレフ９シェラ　ニューモニエ ＰＣｌ　　６０２　　　　　　　　　　　　　）セラチ
ア　マルセセンス ＳＡＮＫ　７３０６０　　　　　　） プロテウス　フゞルカ４リス Ｂ　　３０−８　　　　　　　　　　　　　　＞プロテ
ウス　ミラ上９リス ＳＡＮＫ　　７０４６１　　　　　　　　　　）シュー
ト９モナス　エルＦノーサ゛ ＮＣＴＣ１９４９０＞ １２．５ ５ ６．２５ ００ ０ ００ ００ ００ ００ ００ ３．１３ ５ ３．１３ ）　１００ 〉１００ 〉１００ 〉１００ ００ 〉１００ 以上から、ガラカルデインＡおよびＢはスタフィロコッ
カス　アウレウス等のグラム陽性細菌に有効である。

跋験鮮え一徴性よ マウスに２００　ｍｇ／ｋｇを静脈内投与したが毒性は
認められなかった。

次に、製剤例を示す。

７　１、　　ロ　カプセル 処方 ガラカルデインＡ　　　　　　　１００　　ｍｇ乳糖　
　　　　　　　　　　　　ｉｏ。

トウモロコシ澱粉　　　　　　１４８．５ステアリン酸
マグネシウム　　　１．５３５０　　　ｍｇ 上記処方の粉末を混合し、３０メツシユのふるいを通し
たのち、この粉末３５０　ｏ＋ｇをゼラチンカプセルに
入れ、カプセル剤とした。

２、　　ロ　カプセル 処方 ガラカルデインＢ　　　　　　　１００乳糖　　　　　
　　　　　　　１００ トウモロコシ澱粉　　　　　　１４８．５ステアリン酸
マグネシウム　　　１．５ｇ ３５０　　　ｍｇ 上記処方の粉末を混合し、３０メツシユのふるいを通し
たのち、この粉末３５０　ｒｒｒｇをゼラチンカプセル
に入れ、カプセル剤とした。

災剋旌走−−法丑赳 ガラカルデインＡ　５００　ｒｎｇを１／１５Ｍ燐酸緩
衝液（ｐＨ６，９）　５．０　ｍｌに加えて溶解し、次
いで、５ｍｌのアンプルに封入し、常法に従って、滅菌
し注射剤とした。

災剋忽支−−法剋剋 ガラカルデインＢ　５００　ｍｇを１／１５Ｍ燐酸緩衝
液（ｐＨ６，９）　５．０　ｍｌに加えて溶解し、次い
で、５ｍｌのアンプルに封入し、常法に従って、滅菌し
注射剤とした。

（発明の効果） 本発明のガラカルデインＡおよびＢはグラム陽性細菌に
対して強い抗菌力を示すことから、これらの細菌に起因
する感染性疾患を対象とする抗菌剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図はガラカルデインＡの紫外線吸収スペクトルを示
し、第２図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示し、第
３図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。 第４図はガラカルデインＢの紫外線吸収スペクトルを示
し、第５図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示し、第
６図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性状を有する抗生物質ガラカルデイ
   ンＡ １）物質の性状：両性水溶性、白色粉末。 ２）比旋光度：［α］＿Ｄ＾２＾５−３８．７°（ｃ、
   １．００、Ｈ＿２Ｏ） ３）元素分析値（％）： Ｃ；５０．５５、Ｈ；５．６２、Ｎ；５．０６、Ｃｌ；
   ２．３９、Ｆ；１．１６ （但し一部トリフルオロ酢酸、水を含む） ４）分子式：Ｃ＿１＿０＿１Ｈ＿１＿２＿１Ｏ＿４＿６
   Ｎ＿９Ｃｌ＿２５）分子量：２２６５（ＦＡＢ−ＭＡＳ
   法により測定。 Ｍ＋Ｈ＝２２６６、但し、Ｃｌ＝ ３５として計算） ６）加水分解： 酸加水分解によりアミノ酸としてモノデ クロロバンコマイシン酸、アクチノイジン 酸、３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル グリシン、４−ヒドロキシグリシンを、中 性糖としてグルコース、マンノース、ラム ノース（各１モル）、ガラクトース（２モ ル）を、アミノ糖としてリストサミンをあ たえる。またガラクトシダーゼ処理により ガラカルデインＢもしくはβ−アボパルシ ンをあたえる。 ７）紫外線吸収スペクトル：λ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＿
   １＿ｃ＿ｍ＾１＾％）第１図に示す通り水中で２８０ｎ
   ｍ（３９．６）に極大吸収を示す。 ８）赤外線吸収スペクトル：ν＿ｍ＿ａ＿ｘ＾Ｋ＾Ｂ＾
   ｒｃｍ＾−＾１ＫＢｒにディスクで測定した赤外線吸収
   ス ペクトルは第２図に示す通りである。 ９）核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重水中、外
   部基準にＴＭＳ（テトラメチ ルシラン）を使用して測定した核磁気共鳴 スペクトル（２７０ＭＨｚ）は第３図に示す通りである
   。 １０）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、 酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼンに不 溶。 １１）呈色反応： ニンヒドリン、ライドン−スミス、塩化 第二鉄反応に陽性。 １２）薄層クロマトグラフィー： Ｒｆ値；０．１２ 吸着剤；イーストマンクロマグラムシ ートＮｏ．１３２５４（セルロース） 展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水＝ ４：１：２ １３）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシューパックＯＤＳＨ− ２１５１（カラムサイズ、φ６ ×１５０ｍｍ、センシュー科学（株） 製） 溶媒；１５％アセトニトリル、２．５％酢酸、０．０１
   Ｍヘプタンスルホン酸ソーダ （アンモニア水にてｐＨ４．０） 流速；１．５ｍｌ／分 保持時間；３．１分 ２、下記の理化学的性状を有する抗生物質ガラカルデイ
   ンＢ １）物質の性状：両性水溶性、白色粉末。 ２）比旋光度：［α］＾２＾５＿Ｄ−５２．４°（ｃ、
   ０．９７、Ｈ＿２Ｏ） ３）元素分析値（％）： Ｃ；４８．３０、Ｈ；５．２０、Ｎ；５．０６、Ｃｌ；
   ２．７５、Ｆ；１．４３ （但し一部トリフルオロ酢酸、水を含む） ４）分子式：Ｃ＿９＿５Ｈ＿１＿１＿１Ｏ＿４＿１Ｎ＿
   ９Ｃｌ＿２５）分子量：２１０３（ＦＡＢ−ＭＡＳ法に
   より測定。 Ｍ＋Ｈ＝２１０４、但し、Ｃｌ＝ ３５として計算） ６）加水分解： 酸加水分解によりアミノ酸としてモノデ クロロバンコマイシン酸、アクチノイジン 酸、３−クロロ−４−ヒドロキシフェニル グリシン、４−ヒドロキシグリシンを、中 性糖としてグルコース、マンノース、ラム ノース、ガラクトース（各１モル）を、ア ミノ糖としてリストサミンをあたえる。ま たガラクトシダーゼ処理によりβ−アボパ ルシンをあたえる。 ７）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ（Ｅ＾１＾％＿１
   ＿ｃ＿ｍ）第４図に示す通り水中で２７９ｎｍ（５０．
   ５）に極大吸収を示す。 ８）赤外線吸収スペクトル：ν＾Ｋ＾Ｄ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿
   ｘｃｍ＾−＾１ＫＢｒにディスクで測定した赤外線吸収
   ス ペクトルは第５図に示す通りである。 ９）核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重水中、外
   部基準にＴＭＳ（テトラメチ ルシラン）を使用して測定した核磁気共鳴 スペクトル（２７０ＭＨｚ）は第６図に示す通りである
   。 １０）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトンに難溶、 酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼンに不 溶。 １１）呈色反応： ニンヒドリン、ライドン−スミス、塩化 第二鉄反応に陽性。 １２）薄層クロマトグラフィー： Ｒｆ値；０．２３ 吸着剤；イーストマンクロマグラムシ ートＮｏ．１３２５４（セルロース） 展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水＝ ４：１：２ １３）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシューパックＯＤＳＨ− ２１５１（カラムサイズ、φ６ ×１５０ｍｍ、センシュー科学（株） 製） 溶媒；１５％アセトニトリル、２．５％酢酸、０．０１
   Ｍヘプタンスルホン酸ソーダ （アンモニア水にてｐＨ４．０） 流速；１．５ｍｌ／分 保持時間；５．５分 ３、放線菌に属するガラカルデインＡおよびＢ生産菌を
   培養し、その培養液よりガラカルデインＡおよびＢを採
   取することを特徴とするガラカルデインＡおよびＢの製
   造法。 ４、請求項３、において、放線菌に属するガラカルデイ
   ンＡおよびＢ生産菌がＳＡＮＫ６４２８９株（微工研菌
   寄第１０９４０号；ＦＥＲＭＰ−１０９４０）である製
   造法。 ５、ガラカルデインＡおよび／またはＢあるいはこれら
   の塩を有効成分とする抗菌剤。 ６、放線菌に属し、ガラカルデインＡおよびＢを生産し
   うる能力を有する新菌種。 ７、放線菌に属する新菌株がＳＡＮＫ６４２８９株（微
   工研菌寄第１０９４０号；ＦＥＲＭＰ−１０９４０）で
   ある請求項６記載の新菌株。