JPH08208690A - ペプチド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】本発明は、下記式（Ｉ）で表される新規化合物
Ａ−５３９３０Ａ： 【化１】 等に関する。 【効果】本発明の化合物等は、抗脳梗塞剤、抗てんかん
剤、鎮痛剤として利用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ｎ型カルシウムチャン
ネルの阻害作用を示す新規化合物Ａ−５３９３０Ａ及び
Ａ−５３９３０Ｂ、それらの製法、生産菌並びに用途に
関し、Ｎ型カルシウムチャンネルの阻害作用を示す公知
化合物Ａ−５３９３０Ｃ（＝ストレプトスリシンＢ）の
用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】脳は虚血または虚血再灌流によるダメー
ジに特に脆弱な組織である。脳組織が脳卒中等の一過性
脳虚血による低酸素状態に置かれると、海馬などの記
憶、学習、情緒などに関係する組織が選択的に破壊さ
れ、痴呆をはじめとする種々の後遺症が生ずる。脳虚血
から痴呆に至る過程には、シナプス前膜の脱分極、電位
依存性カルシウムチャンネルの開口によるカルシウムの
神経細胞内への流入、興奮性アミノ酸であるグルタミン
酸をはじめとした神経伝達物質の大量の放出、シナプス
後膜におけるアゴニスト依存性カルシウムチャンネルの
開口による細胞内カルシウムの蓄積等が関与している
（松尾嘉之等、蛋白質・核酸・酵素、第３７巻、１３８
２−１３９３頁、１９９２年）。Ｎ型カルシウムチャン
ネルは神経系に特異的に存在する膜電位依存性カルシウ
ムチャンネルの一種であり、種々の神経伝達物質の放出
に関与している（阿部輝雄、Brain Medical 、第５巻、
２５−３１頁、１９９３年）。従って、Ｎ型カルシウム
チャンネルの機能を阻害すれば脳虚血後に起こる大量の
神経伝達物質の放出が抑制され、これによって脳虚血に
よって生じる神経細胞死を防止することができ、このよ
うな阻害剤は、抗脳梗塞剤として使用できる。

【０００３】また、抗てんかん作用を示すバルビツレー
トがＮ型カルシウムチャンネルを阻害する事が報告され
ており（R. A. Gross 等、Neurology 、第３８巻、４４
３−４５０頁、１９８８年）、てんかんにおけるカルシ
ウムチャンネルの関与が考えられている。したがって、
Ｎ型カルシウムチャンネル阻害剤は、抗てんかん剤とし
て使用できる。

【０００４】さらに、Ｎ型カルシウムチャンネルは脊髄
背側部にも分布し、痛みの伝達に関与することからＮ型
カルシウムチャンネル阻害剤は鎮痛剤にもなりうる（A.
B.Malmberg等、J. Neurosci.、第１４巻、４８８２−
４８９０頁、１９９４年）。現在、Ｎ型カルシウムチャ
ンネルの特異的阻害剤としては不可逆的阻害剤としてω
−コノトキシンＧVIＡ、可逆的阻害剤としてω−コノト
キシンＭVII Ａが知られており、ω−コノトキシンＭVI
I Ａはラットを用いた一過性脳虚血実験において、記憶
固定の場所として重要である海馬領域の神経細胞死を防
止することが報告されている（K.Valentino 等、Proc.
Natl. Acad. Sci.、第９０巻、７８９４−７８９７頁、
１９９３年）。これらω−コノトキシン類は分子量が約
３、０００と比較的大きく、脳内への移行性が良くな
い。したがって、これらの化合物以外に脳内への移行性
の良い低分子のＮ型カルシウムチャンネル阻害剤が望ま
れている。

【０００５】なお、本発明のＡ−５３９３０Ａ及びＡ−
５３９３０ＢはラセモマイシンＡの合成誘導体として文
献に記載されているが（Chem. Pharm. Bull., 25 (6) 1
302-1305 (1977) ）、その出発物質のラセモマイシンＡ
は抗生物質ストレプトスリシンと同一物質であることが
証明されており（Chem. Pharm. Bull., 19 (8) 1627-16
34 (1971) ）、また、ストレプトスリシンの構造が初め
て決定されたのは1961年であるが（J. Am. Chem. Soc.
83 4295-4296 (1961) ）、1982年にその構造は誤りであ
りこと及び正しく決定された構造が報告されている（J.
Antibiotics 35 (7) 925-927 (1982)）。したがって、
上記の Chem. Pharm. Bull., 25 (6) 1302-1305 (1977)
に記載された各誘導体は出発物質の構造が誤って認識さ
れたまま誘導体の構造も誤って記載されていることよ
り、本発明のＡ−５３９３０Ａ及びＡ−５３９３０Ｂは
新規物質である。

【０００６】Ａ−５３９３０Ｃは、抗生物質ストレプト
スリシンＢ（ Chapman & Hall, Dictionary of Nationa
l Product, S-01417 (1994) ）として公知の化合物であ
るが、抗生物質以外の薬効は知られていない。また、上
記の Chem. Pharm. Bull., 25 (6) 1302-1305 (1977)の
構造式を正しい構造式に訂正すると、β−リジン残基が
５個結合した誘導体がＡ−５３９３０Ｃに該当する。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、Ｎ型カ
ルシウムチャンネルの阻害作用を示す生理活性物質を微
生物代謝産物より見出すべく鋭意探索を行った。その結
果、放線菌ＳＡＮＫ６２３９４株の培養液中にＮ型カル
シウムチャンネルに対して阻害作用を示す新規生理活性
物質Ａ−５３９３０Ａ及びＡ−５３９３０Ｂ、及び公知
の生理活性物質Ａ−５３９３０Ｃを見出し本発明を完成
した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）下記式
（Ｉ）で表される新規化合物Ａ−５３９３０Ａ：

【０００９】

【化６】

【００１０】（２）下記式（ＩＩ）で表される新規化合
物Ａ−５３９３０Ｂ：

【００１１】

【化７】

【００１２】（３）ストレプトマイセス属に属するＡ−
５３９３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂ生産菌を
培養し、その培養物よりＡ−５３９３０Ａおよび／また
はＡ−５３９３０Ｂを採取することを特徴とするＡ−５
３９３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂの製造法、
（４）（３）記載のストレプトマイセス属に属するＡ−
５３９３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂ生産菌が
ストレプトマイセス・ビナセウスドラパスＳＡＮＫ６２
３９４（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８１１）であることを特徴
とする、Ａ−５３９３０Ａおよび／またはＡ−５３９３
０Ｂの製造法、（５）Ａ−５３９３０Ａおよび／または
Ａ−５３９３０Ｂ生産能を有するストレプトマイセス・
ビナセウスドラパスＳＡＮＫ６２３９４（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−４８１１）、（６）下記式（ＩＩＩ）で表される化
合物またはその塩を有効成分とする抗脳梗塞剤：

【００１３】

【化８】

【００１４】（式中、Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイ
ル基を示し、Ｒ² は水素原子またはカルバモイル基を示
し、ｎは１乃至７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル
基を示す場合、Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示
し、Ｒ¹ が水素原子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル
基、ｎは１乃至７を示す。）。

【００１５】（７）下記式（ＩＩＩ）で表される化合物
またはその塩を有効成分とする抗てんかん剤：

【００１６】

【化９】

【００１７】（式中、Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイ
ル基を示し、Ｒ² は水素原子またはカルバモイル基を示
し、ｎは１乃至７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル
基を示す場合、Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示
し、Ｒ¹ が水素原子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル
基、ｎは１乃至７を示す。）。

【００１８】（８）下記式（ＩＩＩ）で表される化合物
またはその塩を有効成分とする鎮痛剤：

【００１９】

【化１０】

【００２０】（式中、Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイ
ル基を示し、Ｒ² は水素原子またはカルバモイル基を示
し、ｎは１乃至７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル
基を示す場合、Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示
し、Ｒ¹ が水素原子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル
基、ｎは１乃至７を示す。）。

【００２１】に関する。

【００２２】本発明のＡ−５３９３０ＡまたはＡ−５３
９３０Ｂは下記の構造式及び性状を有する。

【００２３】〔Ａ−５３９３０Ａ〕 （１）構造式

【００２４】

【化１１】

【００２５】（２）物性 １）性質；塩基性の白色、吸湿性粉末。アルカリ性溶液
では室温で不安定。

【００２６】２）溶解性；水、メタノールに易溶、クロ
ロホルム、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルホキシ
ド、ヘキサンに難溶。

【００２７】３）呈色試験；ニンヒドリン反応に陽性。

【００２８】４）分子式；C₃₇H₇₀N₁₄O₁₁ ５）分子量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法により決定 （Ｍ＋Ｈ）⁺ ＝ 887.5433（測定値）、 887.5427 （計
算値） ６）比施光度（測定値）；〔α〕D₂₅ ＝−１５．９°
（Ｃ＝０．５，水） ７）紫外線吸収スペクトル；λmax nm( ε) 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは末端吸収以
外は特性吸収を示さない。

【００２９】８）赤外線吸収スペクトル；νmax(KBr)cm
^-1 KBr ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以下の
極大吸収を示す。 468、521、591、671、818、850、914、949、1023、1078、1132、116
4、1190、1257、 1299、1349、1386、1419、1451、1473、1488、1558、1650、2037、
2349、2936、 3069、3267、3387 ９） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）−ｄ₆ （１％ＴＦ
Ａ：トリフルオロ酢酸）中、内部標準にＴＭＳ（テトラ
メチルシラン）を使用して測定した ¹Ｈ−核磁気共鳴ス
ペクトル（500 MHz)は、以下に示す通りである。

【００３０】1.54〜1.67(m,16H)、 2.48(m,8H)、 2.84(br
s,2H)、 3.11(brs,6H)、 3.18(d,14.0Hz,1H)、 3.42(brs,8H)、 3.60(m,1H)、 3.61
(brs,1H)、 4.01(dd,10.8,6.4Hz,1H)、 4.12(dd,10.8,6.1Hz,1H)、4.2
0(m,1H)、 4.21(m,1H)、 4.39(d,14.7Hz,1H)、 4.49(brs,1H)、 4.98
(d,9.8Hz,1H)、 7.35(brs,1H)、 8.03(d,8.6Hz,1H)、 8.12(brs,2H) １０）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル ＤＭＳＯ−ｄ₆ （１％ＴＦＡ）中、内部標準にＤＭＳＯ
−ｄ₆ のシグナルを４３．５ｐｐｍとして測定した¹³Ｃ
−核磁気共鳴スペクトル（125 MHz ）は、以下に示す通
りである。

【００３１】26.7(t,1C)、 28.6(t,3C)、 33.1(t,1C)、 3
3.6(t,3C)、 41.0(t,4C)、 42.0(t,3C)、 42.2(t,1C)、 51.4(d,1C)、 51.8(d,3C)、 5
2.5(d,1C)、 53.4(t,1C)、 58.3(d,1C)、 64.6(d,2C)、 66.2(t,1C)、 7
1.4(d,1C)、 73.3(d,1C)、 75.7(d,1C)、 82.3(d,1C)、 160.5(s,1C)、 1
65.5(s,1C)、 171.1(s,1C)、 173.1〜173.5(s,4C) １１）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；ＹＭＣ Ａ−３１２ＯＤＳ（カラムサイ
ズ、Φ６×１５０ｍｍ，株式会社ワイエムシイ製） 溶媒； ７％メタノ−ル／０．２％ＴＦＡ 流速； １ｍｌ／分 検出； ＵＶ２１５ｎｍ 保持時間； ７．７分 〔Ａ−５３９３０Ｂ〕 (１）構造式

【００３２】

【化１２】

【００３３】（２）物性 １）性質；塩基性の白色、吸湿性粉末。アルカリ性溶液
では室温で不安定。

【００３４】２）溶解性；水、メタノールに易溶、クロ
ロホルム、アセトン、酢酸エチル、ジメチルスルホキシ
ド、ヘキサンに難溶。

【００３５】３）呈色試験；ニンヒドリン反応に陽性。

【００３６】４）分子式；C₄₃H₈₂N₁₆O₁₂ ５）分子量；ＦＡＢ−ＭＡＳＳ法により決定 （Ｍ＋Ｈ）⁺ ＝ 1015 ６）比施光度（測定値）；〔α〕D₂₅ ＝−４．４°（Ｃ
＝０．５，水） ７）紫外線吸収スペクトル；λmax nm( ε) 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは末端吸収以
外は特性吸収を示さない。

【００３７】８）赤外線吸収スペクトル；νmax(KBr)cm
^-1 KBr ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは以下の
極大吸収を示す。 470、517、592、672、818、850、914、949、1077、1130、1163、119
0、1251、1300、 1349、1387、1450、1473、1487、1558、1651、2029、2350、2929、
3034、3260、 3360 ９） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル ＤＭＳＯ−ｄ₆ （１％ＴＦＡ）中、内部標準にＴＭＳを
使用して測定した ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（500 MH
z)は、以下に示す通りである。

【００３８】1.53〜1.69(m,20H)、 2.50(m,10H)、 2.81(b
rs,2H)、 3.09(brs,8H)、 3.15(d,14.1Hz,1H)、 3.42(brs,10H)、 3.57(m,1H)、 3.57
(brs,1H)、 3.95(dd,10.8,6.4Hz,1H)、 4.09(dd,10.8,6.1Hz,1H)、4.1
6(m,1H)、 4.17(m,1H)、 4.36(d,14.8Hz,1H)、 4.47(brs,1H)、 4.96
(d,9.8Hz,1H)、 7.35(brs,1H)、 8.21(d,8.1Hz,1H)、 8.29(brs,3H) １０）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル ＤＭＳＯ−ｄ₆ （１％ＴＦＡ）中、内部標準にＤＭＳＯ
−ｄ₆ のシグナルを４３．５ｐｐｍとして測定した¹³Ｃ
−核磁気共鳴スペクトル（125 MHz ）は、以下に示す通
りである。

【００３９】26.6(t,1C)、 28.5(t,4C)、 33.0(t,1C)、 3
3.5(t,4C)、 40.8(t,5C)、 41.9(t,5C)、 51.8(d,5C)、 52.5(d,1C)、 53.4(t,1C)、 5
8.3(d,1C)、 64.5(d,2C)、 66.2(t,1C)、 71.4(d,1C)、 73.3(d,1C)、 7
5.7(d,1C)、 82.7(d,1C)、 160.4(s,1C)、 165.5(s,1C)、 171.1(s,1C)、
173.1(s,5C) １１）高速液体クロマトグラフィー 分離カラム；ＹＭＣ Ａ−３１２ＯＤＳ（カラムサイ
ズ、Φ６×１５０ｍｍ，株式会社ワイエムシイ製） 溶媒； ６％メタノ−ル／０．２％ＴＦＡ 流速； １ｍｌ／分 検出； ＵＶ２１５ｎｍ 保持時間； １２．１分 本発明において用いられるストレプトマイセス属に属す
るＡ−５３９３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂ生
産菌の一例として、ストレプトマイセス・ビナセウスド
ラパス（Streptomyces vinaceusdrappus）SANK 62394の
菌学的性状を以下に示す。

【００４０】１．形態学的特徴 ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プ
ロジェクト（International Streptomyces Project）〕
規定の寒天培地上、28℃、14日培養後、顕微鏡下観察で
は、SANK 62394の基生菌糸は良好に伸長、分岐し、薄茶
ないし赤味茶色を示すが、ノカルディア（Nocardia）属
菌株様の断裂やジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は
単純に分岐する。胞子鎖の形態はゆるい螺旋状を示し、
10ないし50 個またはそれ以上の胞子の連鎖を形成す
る。走査型電子顕微鏡による観察では、胞子の表面は平
滑（Smooth）状を示す。胞子は楕円形で、その大きさは
0.5〜0.9 ×0.8 〜1.7 μm である。また気菌糸の車軸
分岐、菌核、菌糸の断裂、胞子のうなどの特殊器官は観
察されない。

【００４１】２．各種培養基上の諸性質 各種培養基上で 28 ℃、14日培養後の性状は表１に示す
とおりである。色調の表示は日本色彩研究所版、”標準
色表”のカラーチップ・ナンバーを表す

【００４２】

【表１】 ──────────────────────────────────── 寒天培地 項目^*1 性状 ──────────────────────────────────── イーストエキス・ Ｇ ： 非常に良好、平坦、赤味茶（10R 4/8 ）^*2 麦芽エキス寒天 ＡＭ： 良好、ビロード状、灰味赤ないし明るい （ISP 2 ） 茶味灰（5R 6/3〜7.5Y 7/1） Ｒ ： 茶（2.5Y 4/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── オートミール寒天 Ｇ ： 非常に良好、平坦、薄茶（2.5Y 8/2） （ISP 3 ） ＡＭ： 豊富に形成、ビロード状、明るい茶味灰 （7.5YR 7/1 ） Ｒ ： 薄茶ないし薄赤（2.5YR 8/2 〜2.5R 6/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── 澱粉・無機塩寒天 Ｇ ： 非常に良好、平坦、明るい茶味灰 （ISP 4) （2.5YR 7/2) ＡＭ： 豊富に形成、ビロード状、明るい茶味灰 （7.5YR 7/1 ） Ｒ ： 薄赤（2.5R 6/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── グリセリン・ Ｇ ： 非常に良好、平坦、薄黄味橙ないし鈍赤 アスパラギン寒天 （2.5Y 9/2〜2.5R 4/6) （ISP 5) ＡＭ： 豊富に形成、ビロード状、明るい茶味灰 ないしピンク白（7.5YR 7/1 〜7.5R 9/1） Ｒ ： 明るい茶味灰ないし茶紫 （10YR 8/2〜2.5R 3/4） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── ペプトン・イ−スト Ｇ ： 非常に良好、平坦、オリ−ブ灰（5Y 7/3) エキス・鉄寒天 ＡＭ： 僅かに形成、白 （ISP 6) Ｒ ： 薄黄味茶（2.5Y 8/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── チロシン寒天 Ｇ ： 非常に良好、平坦、薄茶ないし暗い赤味茶 （ISP 7) （2.5Y 8/2〜7.5R 2/4) ＡＭ： 豊富に形成、ビロード状、明るい茶味灰 ないし薄赤紫（7.5YR 7/1 〜5RP 8/4 ） Ｒ ： 茶紫（10RP 3/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── シュクロ−ス・ Ｇ ： 非常に良好、平坦、薄黄味茶（2.5Y 8/4) 硝酸塩寒天 ＡＭ： 良好、ビロード状、明るい茶味灰 （10YR 8/2） Ｒ ： 薄黄味茶（2.5Y 8/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── グルコ−ス・ Ｇ ： 良好、平坦、薄赤（2.5R 6/6) アスパラギン寒天 ＡＭ： 僅かに形成、白ないし薄ピンク （2.5R 9/2） Ｒ ： 薄赤（2.5R 6/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── 栄養寒天 Ｇ ： 非常に良好、平坦、薄黄味茶（2.5Y 8/4) （ＤＩＦＣＯ） ＡＭ： 余り良くない、ビロード状、白 Ｒ ： 薄黄味茶（2.5Y 8/6） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── ポテトエキス・ Ｇ ： 良くない、平坦、薄黄味橙（2.5Y 9/2) 人参エキス寒天 ＡＭ： 余り良くない、ビロード状、明るい茶味灰 （7.5YR 7/2 ） Ｒ ： 明るい茶味灰（7.5YR 7/2 ） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── 水寒天 Ｇ ： 良くない、平坦、茶味白（2.5Y 9/1) ＡＭ： 余り良くない、ビロード状、明るい茶味灰 （7.5YR 7/2 ） Ｒ ： 明るい茶味灰（7.5YR 7/2 ） ＳＰ： 産生せず ──────────────────────────────────── ＊１ Ｇ；生育、ＡＭ；気菌糸、Ｒ；裏面、ＳＰ；可溶性色素 ＊２ マンセル方式に準拠した色調の表示 ３．生理学的性状 ２８℃で培養後２ないし２１日間に観察した生理学的性
質は表２に示すとおりである。

【００４３】

【表２】 ──────────────────────────────────── 澱粉の水解 陰 性 ゼラチンの液化 疑陽性 硝酸塩の還元 陽 性 ミルクの凝固 陽 性 ミルクのペプトン化 陽 性 メラニン様色素生産性 陰 性 基質分解性：カゼイン 陰 性 チロシン 陽 性 キサンチン 陰 性 生育温度範囲（培地１） １１〜４６℃ 生育適正温度（培地１） ２８〜４２℃ 食塩存在下での生育（培地１） １０％ ──────────────────────────────────── 培地１：イ−ストエキス・麦芽エキス寒天（ISP 2 ） また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地（ＩＳＰ ９）
を使用して、２８℃、１４日間培養後に観察した本菌株
の炭素源の資化性は表３に示すとおりである。

【００４４】

【表３】─────────────────────
─────────────── Ｄ−グルコ−ス ＋ Ｌ−アラビノ−ス ＋ Ｄ−キシロ−ス ＋ イノシト−ル ＋ Ｄ−マンニト−ル ＋ Ｄ−フルクト−ス ＋ Ｌ−ラムノ−ス ＋ シュクロ−ス ＋ ラフィノ−ス ＋ 対照 − ─────────────────────────
─────────── ＋：資化する、−：資化しない ４．菌体成分について SANK 62394の細胞壁および全細胞中の主要構成糖は長谷
川らの方法〔T. Hasegawa et al., ジャーナル・オブ・
ゼネラル・アンド・アプライド・マイクロバイオロジー
（Journal of General and Applied Microbiology ）第
29巻、319 〜322 頁、1983年〕に従い検討した。その結
果、ＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出されたことから細
胞壁タイプはＩ型であること、および主要構成糖に特徴
がなかったことから糖パターンＮＣ型であることが示さ
れた。

【００４５】以上の菌学的諸性状から、本菌株は放線菌
の中でもストレプトマイセス（Streptomyces）属に属す
る放線菌であることが明らかにされた。シャーリングと
ゴトリーブによるＩＳＰ菌学記載〔E. B. Shirling and
D. Gottlieb、インターナショナル・ジャーナル・オブ
・システマティック・バクテリオロジー（Internationa
l Journal of Systematic Bacteriology）第18巻、68-1
89頁（1968年）、第18巻、279-392 頁（1968年）、第19
巻、391-512 頁（1969年）、第22巻、265-394頁（1972
年）〕、ワックスマン著、ジ・アクチノミセテス（S.
A. Waksman, TheActinomycetes）第2 巻、ブキャナンと
ギボンズ編、バージーズ・マニュアル（R. E. Buchanan
and N. E. Gibbons, Bergey's Manual of Determinati
ve Bacteriology ）第8 版（1974年）、ウィリアムス、
シャープとホルト編、バージーズ・マニュアル（S. T.
Williams, M. L. Sharpe and J. G. Holt, Bergey's Ma
nual of Systematic Bacteriology ）第4 巻（1989
年）、本発明の新規化合物 A-53930A および A-53930B
化合物群関連文献およびストレプトマイセス（Streptom
yces）属放線菌に関する最近の文献に記載されている菌
種と比較したところ、ストレプトマイセス・ビナセウス
ドラパス（Streptomyces vinaceusdrappus）に極めて近
縁であることが判明した。

【００４６】しかしながらストレプトマイセス・ビナセ
ウスドラパス（Streptomyces vinaceusdrappus）は生育
色調、特に基生菌糸の色調が薄茶、薄黄味橙ないし明る
いオリーブ灰であること、ミルクの凝固が陰性であるこ
とおよびカゼイン分解性が陽性である点において SANK
62394 との差異が認められた。しかしながらこれらの差
を持って種を区別することは出来ないため本 SANK 6239
4 はストレプトマイセス・ビナセウスドラパス（Strept
omyces vinaceusdrappus）と同定された。SANK62394は
通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に FERM
BP-4811 として寄託されている。

【００４７】以上、ＳＡＮＫ６２３９４株について説明
したが、放線菌の諸性質は一定したものではなく、自然
的、人工的に容易に変化することは周知の通りである。
また、本発明の製造法で使用しうる菌株はストレプトマ
イセス属に属するＡ−５３９３０Ａおよび／またはＡ−
５３９３０Ｂを生産する全ての菌株を包含するものであ
る。

【００４８】なお、本発明で使用する公知化合物Ａ−５
３９３０Ｃは、以下の構造式を有する化合物であり、抗
生物質ストレプトスリシンＢ（ Chapman & Hall, Dicti
onary of National Product, S-01417 (1994) ）として
公知の化合物である。

【００４９】

【化１３】

【００５０】（式中、Ｒ¹ は水素原子、Ｒ² はカルバモ
イル基を示す。） 本発明のＳＡＮＫ６２３９４株は、上記のＡ−５３９３
０Ｃをも生産する。

【００５１】本発明の化合物Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５
３９３０Ｂおよび／またはＡ−５３９３０Ｃの効率的な
工業的製造法は該化合物の生産能を有するＳＡＮＫ６２
３９４株を好適な培地で培養し、その培養物から分離す
る方法である。

【００５２】本発明物質を製造するのに使用される培地
は、一般放線菌における培養方法に準じて行なわれ、液
体培地による振盪培養または通気攪拌培養が最も適して
いるが、これに限定されない。培地成分はＡ−５３９３
０Ａ、Ａ−５３９３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃ生産菌
が生育して培地中に該化合物を蓄積するものが望まし
い。

【００５３】例えば、炭素源としてはグルコース、フラ
クトース、マルトース、シュークロース、マンニトー
ル、グリセリン、デキストリン、デンプン、大豆油、果
実油、糖蜜、有機酸類などが使用できる。また窒素源と
しては、例えば大豆粉、落花生粉、綿実粉、ファーマミ
ン、魚粉、コーン・スチープ・リカー、イースト、イー
ストエキス、肉エキス、ペプトン、アミノ酸類、アンモ
ニウム塩、硝酸塩その他の各種有機あるいは無機窒素化
合物が用いられる。無機塩としては、塩化ナトリウム、
塩化カルシウム、塩化マグネシウム、各種燐酸塩、微量
金属塩等を添加してもよい。また、菌の成育及びＡ−５
３９３０Ａ、Ａ−５３９３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃ
の生産を促進するようなビタミン類、補酵素類等を添加
してもよい。液体培養に際しては、シリコン油、植物
油、界面活性剤等が消泡剤として適宜使用される。培地
のｐＨは５−８、培養温度は11℃から46℃、特に28℃か
ら42℃が好ましい。

【００５４】培養の経過に伴って培養液中に蓄積される
Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０ＢまたはＡ−５３９
３０Ｃの量の経時変化は、後述の阻害活性により測定す
ることができる。通常は、４３時間から６６時間の培養
でその生産量は最大に達する。培養終了後、主としてそ
の液体部分に蓄積するＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３
０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃは、菌体その他の固形部分
を濾過操作または遠心分離によって除去し、その濾液ま
たは上清液から分離するのが好ましいが、必要に応じて
菌体を除去することなく培養液から該化合物を分離する
ことも可能である。培養液からのＡ−５３９３０Ａまた
はＡ−５３９３０Ｂの分離、精製には、その物理化学的
特性に基づく種々の方法を用いることができる。例えば
吸着剤として、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱（株）
製）等が使用される。Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３
０ＢまたはＡ−５３９３０ＣはダイヤイオンＨＰ−２０
に吸着され、０．５％酢酸を含む１０％メタノールで容
出される。また、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂ
またはＡ−５３９３０Ｃは活性炭に吸着され、０．５％
酢酸を含む４０％メタノールで溶出される。更にイオン
交換体のクロマトグラフィーも精製に用いられる。特に
イオン交換体としてカルボン酸を有する弱イオン交換樹
脂が有効であり、例えばＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９
３０ＢまたはＡ−５３９３０ＣはアンバーライトＩＲＣ
−５０に吸着され、１Ｎのアンモニア水で溶出される。
また、逆相シリカゲルカラムも使用でき、ＯＤＳ（オク
タデシル基）カラムを用いた高速液体クロマトグラフィ
ーでＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂ及びＡ−５３
９３０Ｃを相互に分離することができる。

【００５５】さらに、下記の一般式（III ）に示される
化合物のうち、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂ及
びＡ−５３９３０Ｃ以外の化合物は、文献（Chem. Phar
m.Bull., 25, (6) 1302-1305, (1977)）に記載された方
法で製造することができる。

【００５６】

【化１４】

【００５７】（式中、Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイ
ル基を示し、Ｒ² は水素原子またはカルバモイル基を示
し、ｎは１乃至７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル
基を示す場合、Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示
し、Ｒ¹ が水素原子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル
基、ｎは１乃至７を示す。）。

【００５８】この場合、合成の出発材料である化合物ス
トレプトスリシンＦ（一般式（III）のＲ¹ が水素原
子、Ｒ² がカルバモイル基、n=1 である化合物）は、和
光純薬（株）より市販されており、当業者に容易に入手
可能である。

【００５９】Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂ及び
Ａ−５３９３０ＣのＮ型カルシウムチャンネルに対する
阻害活性はＮ型カルシウムチャンネルに対して特異的に
作用する［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシンＧＶＩＡ（アマシ
ャム社製）のモルモット脳膜画分への結合に対する阻害
を定量することにより測定できる。さらにノルエピネフ
ィリン、ドーパミン、グルタミン酸など種々の放射能標
識した神経伝達物質を取り込ませたヒヨコ大脳皮質シナ
プトソームからのＫＣｌによる脱分極刺激によって遊離
される、これら伝達物質の量に対する阻害を定量するこ
とにより測定することができる。Ｎ型カルシウムチャン
ネルを含む膜画分やシナプトソームであれば、測定の際
に用いる動物種あるいは採取部位はこれらに限定される
ものではない。

【００６０】本発明は、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９
３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃを有効成分とする、抗脳
梗塞剤、抗てんかん剤、鎮痛剤に関するものである。

【００６１】本発明のＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３
０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃを抗脳梗塞剤、抗てんかん
剤、鎮痛剤として用いる場合、種々の形態で投与され
る。その投与形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆
粒剤、シロップ剤等による経口投与また注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点眼剤、座薬等による非経口投与
を挙げることができる。

【００６２】これらの各種製剤は、常法に従って主薬に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、矯味矯臭剤、溶解補
助剤、縣濁剤、コーティング剤等既知の医薬製剤技術分
野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化
することができる。その使用量は症状、年齢、体重、投
与方法及び剤形等によって異なるが通常は成人に対して
１日５０ｍｇ乃至１０００ｍｇを投与することができ
る。

【００６３】

【実施例】次に参考例、実施例及び製剤例をあげて本発
明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定さ
れるものではない。

【００６４】（参考例１）Ａ−５３９３０Ｃの精製 （Ａ）培養 ＳＡＮＫ６２３９４株を滅菌した後述の組成の培地７０
０ミリリットルを含む２リットルの三角フラスコ（種フ
ラスコ）に接種した。次いでこれを２８℃で４日間、２
１０ｒｐｍのロータリー振盪機で前培養した。更に同培
地１００リットルを含む２００リットルタンクに、この
種培養液を２．１リットル入れ、２８℃で１１５時間、
通気量１．０ｖｖｍで、攪拌速度を１１０−１４５ｒｐ
ｍにして攪拌培養した。

【００６５】

【表４】 培地組成（ＰＹ培地） グルコ−ス（昭和産業（株）製） ２０ｇ 澱粉（関東化学（株）製） １０ｇ プレスド・イースト（三共（株）製） ９ｇ 肉エキス（極東（株）製） ５ｇ ポリペプトン（日本製薬（株）製） ５ｇ ＣａＣＯ₃ （日東粉化工業（株）製） ３ｇ ＮａＣｌ（日本たばこ産業（株）製） ５ｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ＣＢ４４２（日本油脂（株）製） ０．０２％ ｐＨ ７．４ （Ｂ）単離 Ishiguro, H.らの方法（Biochemistry, vol. ２６，２
８６３−２８７０（１９８７））に準じ、［ ¹²⁵Ｉ］ω
−コノトキシンＧVIＡ（アマシャム社製）のモルモット
脳膜画分への結合に対する阻害活性を測定することによ
り、Ａ−５３９３０Ｃを単離精製した。

【００６６】モルモット由来大脳皮質を５倍量の０．１
ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオライド（ＰＭＳ
Ｆ）を含む氷冷２０ｍＭ ＮａＨＣＯ₃ 緩衝液（ｐＨ
７．２）を用いてホモジナイズ後、４，０００×ｇ、４
℃で１５分間遠心した。得られた沈殿を０．１ｍＭ Ｐ
ＭＳＦを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．
２）を用いて懸濁した後、同様に遠心して膜画分を得、
０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び１ｍＭ Ｅ
ＤＴＡを含む同緩衝液に懸濁した。この膜画分と被検物
質を４℃で１０分間プレインキュベートした後、これに
２０ｐＭの［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシンＧVIＡを加え、
更に１時間インキュベートした。反応液量は２００μｌ
とした。これを０．３％ポリエチレンイミン（シグマ社
製）で処理したＧＦ／Ｃグラスフィルター（ワットマン
社製）で急速吸引濾過した後、膜に結合した［ ¹²⁵Ｉ］
ω−コノトキシンＧVIＡの放射活性をγ−カウンターで
測定した。また、非特異的結合は以下の様に測定した。
上記膜画分と１００ｐＭのω−コノトキシンＧVIＡを４
℃で１０分間プレインキュベートした後、これに２０ｐ
Ｍの［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシンＧVIＡを加え、更に１
時間インキュベートした。これを上記０．３％ポリエチ
レンイミンで処理したＧＦ／Ｃグラスフィルターで急速
吸引濾過した後、膜に結合した［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキ
シンＧVIＡの放射活性をγ−カウンターで測定した。Ａ
−５３９３０Ｃの阻害活性は、上記反応液に被検物質と
してＡ−５３９３０Ｃ水溶液５μｌを添加して同様に測
定し、対照との比較により求め、５０％阻害に必要なＡ
−５３９３０Ｃの濃度を算出し、ＩＣ₅₀（μＭ）値とし
た。

【００６７】ストレプトマイセス属に属するＡ−５３９
３０Ｃ生産菌より得られた培養液２２０リットルにろ過
助剤としてセライト５４５（米国セライト・コーポレー
ション製）１１ｋｇを添加後ろ過し、ろ液２００リット
ルを得た。これを水で洗浄したダイヤイオンＨＰ−２０
（２０リットル）のカラムにかけ、４０リットルの１０
％メタノールで洗浄した。１００リットルの０．５％酢
酸を含む１０％メタノールで活性物質を溶出し、この溶
出液を減圧濃縮し、２０リットルの濃縮液を得た。得ら
れた濃縮液をアンバーライトＩＲＣ−５０（ＮＨ₄ ⁺）カ
ラム（１０リットル）にかけ、４０リットルの水で洗浄
した。４０リットルの１Ｎのアンモニア水で活性物質を
溶出し、この溶出液を減圧濃縮、凍結乾燥して３８．２
ｇの粉末を得た。この半分量１９．１ｇを分取用逆相Ｈ
ＰＬＣに供した。すなわち、一回の操作において１ｇの
粉末を１５ｍｌの０．２％ＴＦＡを含む５％アセトニト
リルー水溶液に溶解した後、分取用逆相ＨＰＬＣ（ＹＭ
Ｃ ＯＤＳ（１５／３０）直径１００ｍｍ×長さ５００
ｍｍ，（株）ワイエムシイ製）に供与し、同溶液を用い
て流速２００ｍｌ／分の流速で溶出すると、Ａ−５３９
３０Ｃは７９分に溶出された。残りの粉末についても同
様な操作を行い、採取した溶出液をそれぞれプールし
た。得られた溶出液を中和後、減圧濃縮し、Ａ−５３９
３０Ｃの濃縮液を５．２リットル得た。この濃縮液を粒
状白鷺ＫＬのカラム（６００ｍｌ）に吸着させ、３リッ
トルの水で洗浄した。この後、３リットルの０．５％酢
酸を含む４０％メタノールで溶出し、この溶出液を減圧
濃縮、凍結乾燥してＡ−５３９３０Ｃの粗粉末をそれぞ
れ１．２ｇ得た。Ａ−５３９３０Ｃの粗粉末１．２ｇを
１５ｍｌの０．２％ＴＦＡを含む７％メタノールー水溶
液に溶解した後、分取用逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ ＯＤＳ
（１５／３０）直径１００ｍｍ×長さ５００ｍｍ，
（株）ワイエムシイ製）に供与し、同溶液を用いて流速
２００ｍｌ／分の流速で溶出した。この溶出液を減圧濃
縮、凍結乾燥してＡ−５３９３０Ｃの粉末を０．６ｇ得
た。Ａ−５３９３０Ｃの粉末０．６ｇを５８ｍｌの水に
溶解し、ダウエックス１×２（Ｃｌ^- ）のカラム（２９
０ｍｌ）にかけ、５０ｍｌの水で溶出した後、さらに２
００ｍｌの水で溶出し、これを減圧濃縮、凍結乾燥した
結果、Ａ−５３９３０Ｃの精製粉末０．２ｇを得た。

【００６８】Ａ−５３９３０Ｃについて構造式及び理化
学的性状を同定したところ、Chapman ＆ Hall 刊、Dict
ionary of Natural Products、Ｓ−０１４１７（１９９
４年）に記載されているストレプトスリシンＢであるこ
とが判明した。

【００６９】（実施例１）Ａ−５３９３０ＡまたはＡ−
５３９３０Ｂの精製 （Ａ）培養 ＳＡＮＫ６２３９４株を滅菌した後述の組成の培地７０
０ミリリットルを含む２リットルの三角フラスコ（種フ
ラスコ）に接種した。次いでこれを２８℃で４日間、２
１０ｒｐｍのロータリー振盪機で前培養した。更に同培
地１００リットルを含む２００リットルタンクに、この
種培養液を２．１リットル入れ、２８℃で１１５時間、
通気量１．０ｖｖｍで、攪拌速度を１１０−１４５ｒｐ
ｍにして攪拌培養した。

【００７０】

【表５】 培地組成（ＰＹ倍地） グルコ−ス（昭和産業（株）製） ２０ｇ 澱粉（関東化学（株）製） １０ｇ プレスド・イースト（三共（株）製） ９ｇ 肉エキス（極東（株）製） ５ｇ ポリペプトン（日本製薬（株）製） ５ｇ ＣａＣＯ₃ （日東粉化工業（株）製） ３ｇ ＮａＣｌ（日本たばこ産業（株）製） ５ｇ 蒸留水 １０００ｍｌ ＣＢ４４２（日本油脂（株）製） ０．０２％ ｐＨ ７．４ （Ｂ）単離 Ishiguro, H.らの方法（Biochemistry, vol. ２６，２
８６３−２８７０（１９８７））に準じ、［ ¹²⁵Ｉ］ω
−コノトキシンＧVIＡ（アマシャム（株）製）のモルモ
ット脳膜画分への結合に対する阻害活性を測定すること
により、Ａ−５３９３０ＡまたはＡ−５３９３０Ｂを単
離精製した。

【００７１】モルモット由来大脳皮質を５倍量の０．１
ｍＭ ＰＭＳＦを含む氷冷２０ｍＭＮａＨＣＯ₃ 緩衝液
（ｐＨ７．２）を用いてホモジナイズ後、４，０００×
ｇ、４℃で１５分間遠心した。得られた沈殿を０．１ｍ
Ｍ ＰＭＳＦを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．２）を用いて懸濁した後、同様に遠心して膜画分を
得、０．１％ＢＳＡ及び１ｍＭ ＥＤＴＡを含む同緩衝
液に懸濁した。この膜画分と被検物質を４℃で１０分間
プレインキュベートした後、これに２０ｐＭの［
¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシンＧVIＡを加え、更に１時間イ
ンキュベートした。反応液量は２００μｌとした。これ
を０．３％ポリエチレンイミン（シグマ（株）製）で処
理したＧＦ／Ｃグラスフィルター（ワットマン（株）
製）で急速吸引濾過した後、膜に結合した［ ¹²⁵Ｉ］ω
−コノトキシンＧVIＡの放射活性をγ−カウンターで測
定した。また、非特異的結合は以下の様に測定した。上
記膜画分と１００ｐＭのω−コノトキシンＧVIＡを４℃
で１０分間プレインキュベートした後、これに２０ｐＭ
の［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシンＧVIＡを加え、更に１時
間インキュベートした。これを上記０．３％ポリエチレ
ンイミンで処理したＧＦ／Ｃグラスフィルターで急速吸
引濾過した後、膜に結合した［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシ
ンＧVIＡの放射活性をγ−カウンターで測定した。Ａ−
５３９３０ＡまたはＡ−５３９３０Ｂの阻害活性は、上
記反応液に被検物質としてＡ−５３９３０ＡまたはＡ−
５３９３０Ｂ水溶液５μｌを添加して同様に測定し、対
照との比較により求め、５０％阻害に必要なＡ−５３９
３０ＡまたはＡ−５３９３０Ｂの濃度を算出し、ＩＣ₅₀
μＭ値とした。

【００７２】ストレプトマイセス属に属するＡ−５３９
３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂ生産菌より得ら
れた培養液２２０リットルにろ過助剤としてセライト５
４５（米国セライト・コーポレーション製）１１ｋｇを
添加後ろ過し、ろ液２００リットルを得た。これを水で
洗浄したダイヤイオンＨＰ−２０（２０リットル）のカ
ラムにかけ、４０リットルの１０％メタノールで洗浄し
た。１００リットルの０．５％酢酸を含む１０％メタノ
ールで活性物質を溶出し、この溶出液を減圧濃縮し、２
０リットルの濃縮液を得た。得られた濃縮液をアンバー
ライトＩＲＣ−５０（ＮＨ₄ ⁺）カラム（１０リットル）
にかけ、４０リットルの水で洗浄した。４０リットルの
１Ｎのアンモニア水で活性物質を溶出し、この溶出液を
減圧濃縮、凍結乾燥して３８．２ｇの粉末を得た。この
半分量１９．１ｇをを分取用逆相ＨＰＬＣに供した。す
なわち、一回の操作において、１ｇの粉末を１５ｍｌの
０．２％ＴＦＡを含む５％アセトニトリルー水溶液に溶
解した後、分取用逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ ＯＤＳ（１５
／３０）直径１００ｍｍ×長さ５００ｍｍ，（株）ワイ
エムシイ製）に供与し、同溶液を用いて流速２００ｍｌ
／分の流速で溶出すると、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３
９３０Ｂはそれぞれ４８分及び９１分に溶出された。残
りの粉末についても同様な操作を行い、採取した溶出液
をそれぞれプールした。得られた溶出液を中和後、減圧
濃縮し、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂの濃縮液
をそれぞれ、５．２リットルずつ得た。それぞれの濃縮
液を粒状白鷺ＫＬのカラム（６００ｍｌ）に吸着させ、
３リットルの水で洗浄した。それぞれ３リットルの０．
５％酢酸を含む４０％メタノールで溶出し、この溶出液
を減圧濃縮、凍結乾燥してＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３
９３０Ｂの粗粉末をそれぞれ５．１ｇ、２．０ｇ得た。
Ａ−５３９３０Ａの粗粉末５．１ｇを１５ｍｌの０．２
％ＴＦＡを含む５％メタノールー水溶液に溶解した後、
分取用逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ ＯＤＳ（１５／３０）直
径１００ｍｍ×長さ５００ｍｍ，（株）ワイエムシイ
製）に供与し、同溶液を用いて流速２００ｍｌ／分の流
速で溶出した。また、Ａ−５３９３０Ｂの粗粉末、２．
０ｇは３０ｍｌの０．２％ＴＦＡを含む７％メタノール
ー水溶液に溶解した後、２回に分けて同溶液を用いて同
様に分取用逆相ＨＰＬＣで精製した。それぞれの溶出液
を減圧濃縮、凍結乾燥してＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３
９３０Ｂ粉末をそれぞれ２．６ｇ、１．４ｇ得た。Ａ−
５３９３０Ａの粉末２．６ｇを２４２ｍｌの水に溶解
し、ダウエックス１×２（Ｃｌ^- ）のカラム（１．２リ
ットル）にかけ、３００ｍｌの水で溶出した後、さらに
５００ｍｌの水で溶出し、これを減圧濃縮、凍結乾燥し
た結果、Ａ−５３９３０Ａの精製粉末１．６ｇを得た。
Ａ−５３９３０Ｂの粉末１．４ｇを１３７ｍｌの水に溶
解し、ダウエックス１×２（Ｃｌ^- ）のカラム（１．４
リットル）にかけ、３５０ｍｌの水で溶出した後、さら
に４００ｍｌの水で溶出し、これを減圧濃縮、凍結乾燥
した結果、Ａ−５３９３０Ｂの精製粉末０．７ｇを得
た。

【００７３】（製剤例１）経口用カプセル剤

【００７４】

【表６】 上記処方の粉末を混合し、３０メッシュのふるいを通し
たのち、この粉末３５０ｍｇをゼラチンカプセルにい
れ、カプセル剤とした。

【００７５】

【発明の効果】次に試験例を挙げて本発明の効果を説明
する。

【００７６】（試験例１）Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３
９３０ＢまたはＡ−５３９３０ＣのＮ型カルシウムチャ
ンネルに対する阻害活性 参考例１または実施例１で得られたＡ−５３９３０Ａ、
Ａ−５３９３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃについて、ω
−コノトキシンＧVIＡ（アマシャム（株）製）のモルモ
ット脳膜画分への結合に対する阻害活性を参考例１およ
び実施例１に記載した方法で測定した。

【００７７】モルモット由来大脳皮質膜画分と試料を４
℃で１０分間プレインキュベートした後、これに２０ｐ
Ｍの［ ¹²⁵Ｉ］ω−コノトキシンＧVIＡを加え、更に１
時間インキュベートした。反応液量は２００μｌとし
た。これを０．３％ポリエチレンイミン（シグマ（株）
製）で処理したＧＦ／Ｃグラスフィルター（ワットマン
（株）製）で急速吸引濾過した後、膜に結合した［ ¹²⁵
Ｉ］ω−コノトキシンＧVIＡの放射活性をγ−カウンタ
ーで測定した。また、１００ｐＭのω−コノトキシンＧ
VIＡ存在下での結合を非特異的結合とした。Ａ−５３９
３０Ａ、Ａ−５３９３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃの阻
害活性は上記反応液に、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９
３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃの水溶液５μｌを添加し
て同様に測定し、対照との比較により求め、５０％阻害
に必要なＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０ＢまたはＡ
−５３９３０Ｃの濃度を算出し、ＩＣ₅₀（μＭ）値とし
た。

【００７８】結果（ＩＣ₅₀値で表す）を以下に示す。

【００７９】

【表７】ω−コノトキシンＧVIＡのモルモット脳膜画分
への結合に対する阻害活性 （ＩＣ₅₀；μＭ） Ａ−５３９３０Ａ ０．３８ Ａ−５３９３０Ｂ ０．２８ Ａ−５３９３０Ｃ ０．２５ （試験例２）Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂまた
はＡ−５３９３０Ｃのヒヨコ大悩皮質シナプトソームか
らの［ ³Ｈ］ノルエピネフィリンの遊離に対する阻害活
性 ヒヨコ大脳皮質シナプトソームの調製はDunkley らの方
法（Brain Research、441巻、59頁、(1988 年) ）に従
って行なった。

【００８０】シナプトソームと９５ｎＭの［ ³Ｈ］ノル
エピネフィリン（アマシャム（株）製）を３７℃１５分
間インキュベートすることにより［ ³Ｈ］ノルエピネフ
ィリンをシナプトソームに取り込ませた。これをＨＰＳ
緩衝液（ＨＥＰＥＳ ２０ｍＭ、ＮａＣｌ １３２ｍ
Ｍ，ＫＣｌ ４．８ｍＭ、ＭｇＳＯ₄ ２．４ｍＭ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．５ｍＭ、グルコース １０ｍＭ、アス
コルビン酸 ０．５ｍＭ、ｐＨ７．４）を用いて４回、
１５，０００×ｇで２分間遠心することにより洗浄した
後、５０μＭパージリン及び０．１μＭデシプラミンを
含むＨＰＳ緩衝液に１ｍｌあたり５００μｇの蛋白質濃
度になるように再懸濁した。遊離反応は５０μｌのシナ
プトソームに４倍量の５０μＭ パージリン、０．１μ
Ｍ デシプラミン、１５ｍＭ ＫＣｌ及び１．５ｍＭ
ＣａＣｌ₂ を含む脱分極用ＨＰＳを加え、３７℃で３．
５分インキュベートすることによって行なった。１．２
ｍＭＥＧＴＡを含むＨＰＳ緩衝液を２ｍｌ加えて反応を
停止し、１５，０００×ｇで５分間遠心した後、上清を
２ｍｌ採取し、遊離した［ ³Ｈ］ノルエピネフィリンの
量を液体シンチレーションカウンターで測定した。Ａ−
５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０ＢまたはＡ−５３９３０
Ｃの阻害活性は上記反応液に、Ａ−５３９３０Ａ、Ａ−
５３９３０ＢまたはＡ−５３９３０Ｃの水溶液５μｌを
添加して同様に測定し、対照との比較により求め、５０
％阻害に必要なＡ−５３９３０Ａ、Ａ−５３９３０Ｂま
たはＡ−５３９３０Ｃの濃度を算出し、ＩＣ₅₀（μＭ）
値とした。結果（ＩＣ₅₀値で表す）を以下に示す。

【００８１】

【表８】ヒヨコ悩シナプトソームからの［ ³Ｈ］ノルエ
ピネフィリンの遊離に対する阻害活性 （ＩＣ₅₀；μＭ） Ａ−５３９３０Ａ ９１．０ Ａ−５３９３０Ｂ ２０．６ Ａ−５３９３０Ｃ ３９．５ 以上のように本発明の新規化合物Ａ−５３９３０Ａ及び
Ａ−５３９３０Ｂ並びに本発明で使用された公知化合物
Ａ−５３９３０Ｃは、優れたＮ型カルシウムチャンネル
阻害活性を有することより、抗脳梗塞剤、抗てんかん
剤、鎮痛剤として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 岡崎 尚夫 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内 (72)発明者 榎田 竜三 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内 (72)発明者 加賀崎 武之 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 (72)発明者 境田 義陽 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 (72)発明者 木下 武 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 春山 英幸 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式（Ｉ）で表される新規化合物Ａ−５
   ３９３０Ａ： 【化１】
2. 【請求項２】下記式（ＩＩ）で表される新規化合物Ａ−
   ５３９３０Ｂ： 【化２】
3. 【請求項３】ストレプトマイセス属に属するＡ−５３９
   ３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂ生産菌を培養
   し、その培養物よりＡ−５３９３０Ａおよび／またはＡ
   −５３９３０Ｂを採取することを特徴とするＡ−５３９
   ３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂの製造法。
4. 【請求項４】請求項３記載のストレプトマイセス属に属
   するＡ−５３９３０Ａおよび／またはＡ−５３９３０Ｂ
   生産菌がストレプトマイセス・ビナセウスドラパスＳＡ
   ＮＫ６２３９４（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８１１）であるこ
   とを特徴とする、Ａ−５３９３０Ａおよび／またはＡ−
   ５３９３０Ｂの製造法。
5. 【請求項５】Ａ−５３９３０Ａおよび／またはＡ−５３
   ９３０Ｂ生産能を有するストレプトマイセス・ビナセウ
   スドラパスＳＡＮＫ６２３９４（ＦＥＲＭ ＢＰ−４８
   １１）。
6. 【請求項６】下記式（ＩＩＩ）で表される化合物または
   その塩を有効成分とする抗脳梗塞剤： 【化３】 （式中Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイル基を示し、Ｒ
   ² は水素原子またはカルバモイル基を示し、ｎは１乃至
   ７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル基を示す場合、
   Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示し、Ｒ¹ が水素原
   子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル基、ｎは１乃至７を
   示す。）。
7. 【請求項７】下記式（ＩＩＩ）で表される化合物または
   その塩を有効成分とする抗てんかん剤： 【化４】 （式中Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイル基を示し、Ｒ
   ² は水素原子またはカルバモイル基を示し、ｎは１乃至
   ７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル基を示す場合、
   Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示し、Ｒ¹ が水素原
   子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル基、ｎは１乃至７を
   示す。）。
8. 【請求項８】下記式（ＩＩＩ）で表される化合物または
   その塩を有効成分とする鎮痛剤： 【化５】 （式中Ｒ¹ は水素原子またはカルバモイル基を示し、Ｒ
   ² は水素原子またはカルバモイル基を示し、ｎは１乃至
   ７を示す。ただし、Ｒ¹ がカルバモイル基を示す場合、
   Ｒ² は水素原子、ｎは４または５を示し、Ｒ¹ が水素原
   子を示す場合、Ｒ² はカルバモイル基、ｎは１乃至７を
   示す。）。