JPS6234041B2

JPS6234041B2 -

Info

Publication number: JPS6234041B2
Application number: JP53096277A
Authority: JP
Inventors: Futsushi Fuerunando; Fuederi Jianfuranko
Original assignee: Hepar Chimie SA
Current assignee: Hepar Chimie SA
Priority date: 1977-08-09
Filing date: 1978-08-09
Publication date: 1987-07-24
Also published as: GB2002406A; CH642979A5; GB2002406B; ES472934A1; IT1083903B; DK349678A; AU3873878A; DE2833898C2; US4757057A; FR2400037B1; FR2400037A1; DK159278B; DE2833898A1; JPS5430277A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、一般に、血栓症の現象の予防におい
て、治療上の用途を見出すヘテロ−ポリサツカラ
イドに関する。

本発明の他の目的は、このようなヘテロ−ポリ
サツカライドの製造法を提供することである。

さらに本発明の他の目的は、活性成分として本
発明のオリゴ−ヘテロポリサツカライドを含有す
る製剤組成物と治療上の用途を指示することであ
る。

血栓症は死傷および苦悶の最も頻度の高い因子
の１つであり、死傷および苦悶は心臓脈管の苦悶
の分野で永久的な廃疾パターンをしばしば示す。

一般的用語「血栓症」は凝血の高い傾向を表わ
す状態を含むことができ、それらの起原は次に帰
することができる： −血栓形成を発生する「危険因子」、たとえば、
タバコの煙り、ストレス、月経誘発性因子タイ
プの避妊剤の長期使用など、 −遺伝性因子、たとえば、凝血抑制因子、とくに
アンチトロンビンの欠乏、 −種々の起原、時々明らかにされない起原、たと
えば、小板の付着などの変異の原因となる因
子、 −たとえば、麻酔状態における外科手術後経験す
るような、血液循環の一時的遅延から誘導され
る因子。

上に列挙した因子の１または２以上によつて引
起こされるような「血栓形成」状態に必然の病理
学的後効果は、次のようなものであることができ
る： −肺動脈、脳、冠状動脈および他の血栓塞栓症、 −深部に横たわる静脈の血栓、 −血栓静脈炎、静脈りゆう症候群、 −脈管内の微細血栓の拡散散乱。

このような関連する多数の現象をみて、現在、
２つのアプローチをとることができる：１血栓溶解剤の使用、２血栓形成状態およびその後効果の予防療法。

起こりうる血栓の発生は重大でありかつ急速で
あるため、２つのアプローチのうちで、第２番目
のものはひじように好ましいことは明らかであ
る。

予防的角度から血栓の問題を処理するため、２
つのクラスの薬剤、すなわち、経口抗凝血剤、た
とえば、クマリンおよびその誘導体とヘパリンを
現在入手できる。

クマリンおよびその誘導体のような経口抗凝血
剤は、肝臓レベルにおいて作用し、２の凝血因
子、すなわち、プロコンベルチンおよびプロトロ
ンビンをブロツクするが、蓄積現象を生じ、かく
して長期処置には不適当であり、その上、それら
は抗凝血剤であつてさえ、血栓の発生に密接に関
係する他の凝血因子、すなわち、Xa因子に作用
しないので、アンチトロンビン活性に劣る。

ヘパリンは、これから見て、凝血のいくつかの
血しよう因子、ことにトロンビン、Xa因子、ま
たＸ因子、Ｘ因子およびＸ因子ならびにい
わゆるPF4小板因子に作用するという利点を与え
る。これらの作用のすべては、前述の凝血因子の
抑制剤を活性化するヘパリンの特別の能力に帰す
る。この抑制剤は、血しよう中に存在し、アンチ
トロンビンと呼ばれ、その作用を発現するため
の共因子としてヘパリンの存在を要求する。

不幸なことには、ヘパリンの療法は２つの理由
で好ましくない：第１に、それは非経口的にのみ
活性であり、そしてその結果は最高８〜12時間続
き、これによつてヘパリンの毎日の２回の注射を
含む、長期にわたる予防を達成することは困難で
ある。第２に、ヘパリンはアンチトロンビン効果
をもつばかりでなく、かつまた全体として抗凝血
作用をも有する。さて、この第２の作用は時には
好都合であるが、ある場合においては、治療が特
定の患者に適合しない場合、血栓の予防が凝いな
く利益を与えた場合でさえ、出血の危険は重大な
問題となる。

低分子量のヘパリン部分は、次の２つの場合に
見出される： (a) 化学的方法または酵素的方法によるヘパリン
の解重合（参照、A.Horner、“HEPARIN”、
Kakkar、Thomas、1976、およびPerhin and
cow.、Carb.Res.、18、185（1971））。

(b) 治療上の使用のためのヘパリン抽出の母液
中。

このような部分は分子量が5000でありかつヘパ
リンより一般に少ない数の硫酸基の価値ある量を
含有し、従来有用な治療上の用途が見出されてき
ていない。

さて、本発明によれば、ヘパリン分子に特有の
量および位置で硫酸基を含有する、このような部
分はヘパリンに類似する薬理的性質と、ヘパリン
より改良された治療上の性質を有することがわか
つた。

さらに詳しくは、次のことが確認された： (i) 分子量が2000〜5000である、ヘパリンの解重
合から誘導されるか、あるいは解重合したヘパ
リンに相当するオリゴポリサツカライド部分
は、活性基を再構成するように適当に処理する
ならば、ヘパリンより改良された生薬理学的性
質をもつ； (ii) ヘパリン自体と異なり、このように処理した
部分は経口投与によつても活性である； (iii) このようにして処理した部分はヘパリンより
もいつそう容易に皮膚によつて吸収される； (iv) さらに詳しくは、解重合しかつ再構成したヘ
パリンは、商用ヘパリンよりも好適なアンチト
ロンビン活性対抗凝血活性の比を付与される。

本発明に従う方法は、次のように要約できる：
出発物質を分子量が2000〜5000であるヘパリンオ
リゴマーおよび低分子量部分の中から選び、等重
量の窒素含有有機基のスルホトリオキシド、たと
えば、ピリジンスルホトリオキシド、トリメチル
アミンスルホトリオキシドなどでアルカリ性環境
中で処理する。

この反応が完了したとき、生成物を水混和性溶
媒、たとえば、エタノール、アセトンなどで沈殿
させ、水溶液中に取り、イオン交換樹脂または分
子ふるいに通して精製する。

溶液から生成物は、水混和性溶媒による沈殿ま
たは凍結乾燥によつて得られる。

このようにして得られた生成物は、次の性質を
もつ：確認 −多少吸湿性の象げ色粉末、 −透明ないし多少不透明の水溶液、 −５％水溶液のPH：７〜８ −確認メタクロム反応：１mlの生成物92％溶液を
１mlの0.0025％のトルイジンブルー溶液に加
え、0.1mlの1N塩酸で酸性にすると、色は青か
ら赤味青に変化する、 −水溶液の比旋光度〔α〕^２０ _Ｄ＝＋40゜／＋50゜、 −酢酸セルロースについての電気泳動（ピリジ
ン／酢酸／水−１／10／229、PH4.5およびトル
イジンブルーを用いる現象）＝陽極移動度Ｕ＝
2.1・10^-4cm²v^-1sec^-1をもつ単一帯。

本発明の他の化学的明細は、次のとおりであ
る：平均分子量（商用ヘパリンと比較したソモギー
（Somogy）法を用いる決定）：2600〜5500ダル
トン。

−加水分解後のヘキソスアミン（カルバゾールと
の反応）：31±４％、 −加水分解後の有機SO₄ ^--（ナフタルソンを用い
る滴定）：30±４％、 −ウロン酸／ヘキソスアミン／SO₄ ^--のモル比＝
１／１／２次の実施例によつて、本発明に従う生成物の製
造法を説明する。これらの実施例に本発明は限定
されない。

実施例１次の基本的分析的特性を有するオリゴポリサツ
カライド500ｇを、500ｇのピリジンスルホトリオ
キシドおよび500ｇの無水炭酸ナトリウムと、粉
末の形で混合した： −５％溶液のPH：5.8 −有機SO₄ ^--：13.6％ −比旋光度〔α〕^２０ _Ｄ＝＋48゜ −分子量（商用ヘパリンと比較したソモギー法に
より決定）＝4850±300ダルトン、 −ヘキソスアミン：33.5％ −ウロン酸：31.8％ −抗凝血活性：実際上ゼロ。

この混合物を10の蒸留水でスラリーとし、室
温において２時間かきまぜた。

その時間がいつたん経過すると、液を20のメ
タノールで処理した。白色沈殿が形成し、これを
遠心によつて分離した後、５の蒸留水中に再溶
解し、20のドウウエツクス・リターデイオン
（Dowex Ritardion）11A8を含有するカラ（直経
16cm、高さ110cm）に通した。

溶離液を20％水酸化ナトリウムでPH６に調節
し、２容積のメタノールで処理した。デカント
し、白色沈殿をメタノールで脱水し、40℃で真空
乾燥した。収量：365ｇ。

生成物は、分析すると、次の性質を示した： −５％溶液のPH：6.5 −有機SO₄ ^--：31％ −比旋光度〔α〕^２０ _Ｄ：＋47゜ −分子量（商用ヘパリンと比較してソモギー法に
より決定）：5300±350ダルトン −ヘキソスアミン：28.5％ −ウロン酸：30％ −抗凝血活性：36U／mg（USP）実施例２ 250ｇのトリメチルアミンスルホトリオキシド
および250ｇの無水炭酸ナトリウムを、粉末の形
で、次の基本的分析的性質をもつ250ｇのオリゴ
ポリサツカライドと混合した： −５％水溶液のPH：6.4 −分子量（商用ヘパリンと比較したソモギー法に
より決定）：3400±400ダルトン −有機SO₄ ^--：11.8％ −ヘキソスアミン：34.2％ −ウロン酸：36％ −抗凝血活性（USP）：0.5U／mg この混合物を５の蒸留水中に分散し、55℃で
12時間かきまぜた。この時間が経過した後、この
溶液を10のドウウエツクス・リターデイオン
11A8の床に通過させた。溶離液を20％水酸化ナ
トリウムでPH６に調節し、３容積のアセトンで処
理した。白色沈殿が形成し、これをデカントした
後、アセトンで脱水、40℃で真空乾燥した。収
量：165ｇ。

この生成物は、次の分析的性質を示した： −５％水溶液のPH：7.1 −比旋光度：〔α〕^２０ _Ｄ＝＋42゜ −分子量（商用ヘパリンと比較したソモギー法に
より決定）：3900±280ダルトン −有機SO₄ ^--：28.5％ −ヘキソスアミン：29％ −ウロン酸：30％ −抗凝血活性：17U／mg（USP）前述の方法で得られた生成物を検定して、その
薬理学的性質とその活性を確認した。

毒物学的活性 1000mg／Kg体重までの投与量で、ねずみ、はつ
かねずみとモルモツトに経口投与したとき、毒性
作用はなかつた。

LD₅₀腹膜内（はつかねずみ）＞3000mg／Kg体
重：LD₅₀静脈内（はつかねずみ）＞1000mg／Kg体
重。

LD₅₀腹膜内（ねずみ）約2000mg／Kg体重：
LD₅₀静脈内（ねずみ）354mg／Kg体重。

清澄活性試験生成物は、トリトンからの実験的過脂肪血症に
よつて影響を受けた動物において、トリグリセリ
ドの血清アルブミンレベルをかなり低下させる。

抗凝血剤活性 USP≧50U／mg カオリン−セフアリン凝血時間試験
（KCCT）：７〜19 試験管内アンチトロンビン活性対抗凝血剤活性
の比（Yin′s／KCCT）：2.5 生体内（犬）アンチトロンビン活性および抗凝血
活性生成物は、静脈内（25IU／Kg）および経口的
（300〜1500U／Kg）に投与したとき、トロンビン
時間とKCCTを延長し、トロンボプラスチンによ
つて誘発されるような血栓症に対して保護する。

生体内（うさぎ）アンチトロンビン活性生成物は20Anti Xa Ｕ／Kgの投与量で静脈内
に抗与すると、トロンビン誘発血栓症から保護す
る。

このように、次の予測できる治療上の用途が、
経口的にまたは非経口的に、提案される： −手術後の血栓塞栓症の予防 −血栓形成状態、たとえば、多産の女性において
月経誘発性因子型の経口避任剤で長期間処置し
たとき起こる状態の結果の血栓の急発作の予防 −静脈の血栓症の予防 −凝血過多の状態の予防 −脱脂肪血過多状態（hyperdislipoproteina−
emias）の矯正。

Claims

【特許請求の範囲】１次の物理化学的性質 −2600〜5500ドルトンの平均分子量［ソモギー
（Somogy）法を用い商用ヘパリンと比較して
決定］ −加水分解後のヘキソスアミン（ｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒドとの反応）：28％±２％ −加水分解後のウロン酸（カルハゾールとの反
応）：31％±４％ −加水分解後の有機SO₄ ^--（ナフタルソンを用い
る滴定）：30％±４％ −ウロン酸／ヘキソスアミン／−SO₄ ^--のモル比
＝１／１／２ −水溶液の比旋光度［α］^２０ _Ｄ＝＋40゜〜＋50゜ −酢酸セルロースについての電気泳動［ピリジ
ン／酢酸／水（１／10／229）、PH4.5およびト
ルイジンブルーを用いる現象］＝陽極移動度Ｕ
＝2.1・10^-4cm²v^-1sec^-1を有する単一帯 −象げ色の非晶質のやや吸湿性の粉末 −透明もしくはやや乳白光の水溶液 −５％水溶液のPH：７〜８ −生成物の２％溶液１mlを１mlの0.0025％のトル
イジンブルー溶液に加え、0.1ｍの1N塩酸で酸
性にするメタクロム確認反応によつて青から赤
味青の色を呈する、を有する、活性基、とくには硫酸基、がヘパリン
に特有の量及び位置で含有されてなるオリゴヘテ
ロポリサツカライド。２ヘパリンを解重合し、ヘパリンに特有の活性
基、とくには硫酸基を再構成することによつて誘
導されたものであることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載のオリゴヘテロポリサツカライ
ド。３ヘパリンを解重合し、ヘパリンの活性基を再
構成することによつて得られたものであることを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載のオリゴヘ
テロポリサツカライド。４次の物理化学的性質 −2600〜5500ドルトンの平均分子量［ソモギー
（Somogy）法を用い商用ヘパリンと比較して
決定］ −加水分解後のヘキソスアミン（ｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒドとの反応）：28％±２％ −加水分解後のウロン酸（カルハゾールとの反
応）：31％±４％ −加水分解後の有機SO₄ ^--（ナフタルソンを用い
る滴定）：30％±４％ −ウロン酸／ヘキソスアミン／−SO₄ ^--のモル比
＝１／１／２ −水溶液の比旋光度［α］^２０ _Ｄ＝＋40゜〜＋50゜ −酢酸セルロースについての電気泳動［ピリジ
ン／酢酸／水（１／10／229）、PH4.5およびト
ルイジンブルーを用いる現象］＝陽極移動度Ｕ
＝2.1／10^-4cm²v^-1sec^-1を有する単一帯 −象げ色の非晶質のやや吸湿性の粉末 −透明もしくはやや乳白光の水溶液 −５％水溶液のPH：７〜８ −生成物の２％溶液１mlを１mlの0.0025％のトル
イジンブルー溶液に加え、0.1ｍの1N塩酸で酸
性にするメタクロム確認反応によつて青から赤
味青の色を呈する、を有する、活性基、とくには硫酸基、がヘパリン
に特有の量及び位置で含有されてなるオリゴヘテ
ロポリサツカライドが分子量が2000〜5000である
ヘパリンオリゴマーおよび低分子量のヘパリンフ
ラクシヨンの中から選ばれた出発物質を窒素含有
有機塩基のスルホトリオキシドの等重量でアルカ
リ性環境において処理し、反応生成物を水混和性
溶媒で沈殿させ、そして精製することにより得ら
れることを特徴とするオリゴヘテロポリサツカラ
イドの製造法。５該スルホトリオキシドはピリジンおよびトリ
メチルアミンのスルホトリオキシドの中から選ば
れる特許請求の範囲第４項記載の方法。６該水混和性溶媒はメタノール、エタノール、
アセトンまたはジオキサンである特許請求の範囲
第４項記載の方法。７精製のため、沈殿した生成物を水溶液中に取
り、イオン交換樹脂または分子ふるいを通過させ
る特許請求の範囲第４項記載の方法。８活性成分として、次の物理化学的性質 −2600〜5500ドルトンの平均分子量［ソモギー
（Somogy）法を用い商用ヘパリンと比較して
決定］ −加水分解後のヘキソスアミン（ｐ−ジメチルア
ミノベンズアルデヒドとの反応）：28％±２％ −加水分解後のウロン酸（カルハゾールとの反
応）：31％±４％ −加水分解後の有機SO₄ ^--（ナフタルソンを用い
る滴定）：30％±４％ −ウロン酸／ヘキソスアミン／−SO₄ ^--のモル比
＝１／１／２ −水溶液の比旋光度［α］^２０ _Ｄ＝＋40゜〜＋50゜ −酢酸セルロースについての電気泳動［ピリジ
ン／酢酸／水（１／10／229）、PH4.5およびト
ルイジンブルーを用いる現象］＝陽極移動度Ｕ
＝2.1・10^-4cm²v^-1sec^-1を有する単一帯 −象げ色の非晶質のやや吸湿性の粉末 −透明もしくはやや乳白光の水溶液 −５％水溶液のPH：７〜８ −生成物の２％溶液１mlを１mlの0.0025％のトル
イジンブルー溶液に加え、0.1ｍの1N塩酸で酸
性にするメタクロム確認反応によつて青から赤
味青の色を呈する、を有する、活性基、とくには硫酸基、がヘパリン
に特有の量及び位置で含有されてなる、オリゴヘ
テロポリサツカライドを含有することを特徴とす
る血栓症予防剤。