JPS62286909A

JPS62286909A - チロジナ−ゼ阻碍剤

Info

Publication number: JPS62286909A
Application number: JP61130481A
Authority: JP
Inventors: Akira Yagi; 晟八木
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1986-06-04
Filing date: 1986-06-04
Publication date: 1987-12-12
Anticipated expiration: 2010-07-12
Also published as: JPH0764703B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】３、発明の詳細な説明（発明の利用分野）本発明は、皮膚の美白、シミ、ソバカスの除去、肝臓障
害による皮！ａの斑点などの改善に有効な天然チロジナ
ーゼ阻碍剤に関する。

（背景）皮ｒａへの色素過沈若症（Ｈｙｐｅｒｐｉｇｍｅｎｔａ
Ｌｉａｎ）の着色の原因となるメラニン色素は、表皮と
真皮との間にあるメラニン細胞（メラノサイト）内のメ
ラニン生成顆粒（メラノサイト）において生産され、生
成したメラニンは、浸透作用により隣接細胞へ拡散する
。このメラノサイト内における生化学的反応は、現在、
一応次のようなものと推定されている（フレグランス　
ジャーナル　８３号、２４頁（＋９８３）他）。

以上の如く、必須アミノ酸であるチロシンが酵素チロジ
ナーゼの作用によりドーパキノンとなり、これが酵素的
又は非酵素的酸化作用により赤色及び無色色素を経て黒
色のメラニンへ変イヒする過程がメラニン色素の生成過
程である。

（従来の技術の問題点）従って、反応の第一段階であるチロジナーゼの作用を抑
制すること或は中間段階のキノン類を一元することがメ
ラニンの生成を抑制しうるものと想像され、既に、例え
ばチロジナーゼの活性中心である銅と結合する物￥１（
例えばチオ尿素、システィン）、チロジナーゼの基質で
あるチロシンと競合基質となりうる物資（例えばＮ−ア
セチルチロシン、γ−ピロン、ヒノキチオール）、チロ
ジナーゼと基質との酵素反応の誘導期を延長する物質（
例えばツイーン２０）、ドーパ等のＯ−ジヒドロキシ基
と選択的に結合する物資（例えばモリブデンイオン）、
Ｏ−キノン類と結合する物質（例えばアニリン）、０−
キノン類に対する還元剤（例えばアスコルビン酸、ヒド
ロキノン及びその誘導体）などが提案されたが、ヒトに
対する毒性、保存性、官能的影響等を考慮すれば、満足
できる程のものはない０例えばヒドロキノンは、各国に
おいて長年に亙り、肝斑の治療に使用されてきたが、多
量投与しなければ効果がなく、しかも有効濃度では紅斑
や疼痛などの副作用を生じる。

またシスティンがドーパ色素の生成を抑制するのは確か
であるが、硫黄臭の点から化粧品として利用するには問
題がある。さらに、アスコルビン酸は酸化に弱く、配合
物を褐変させるため、これまた実用上に問題がある。

さらに近年に至り、植物中のフラボノイド類が注目され
、本発明との関連においてはアロエ中のアントラキノン
グリコシドであるアロイン（パルバロイン）の抗チロジ
ナーゼ作用が発表されている（安藤：特公昭５３−４５
３７６）、Ｌかしその抗チロジナーゼ作用は、後述の如
くそれ程顕著ではない。

（発明の目的）本発明は、民間薬用植物として古来著名なアロエを材料
として、安全かつ確実なチロジナーゼ阻碍剤を開発する
のを目的とする。

（目的達成のための手段）以上の目的を達成するため、本発明は、アロエの透析画
分中のメタノール可溶性成分を有効成分とするチロジナ
ーゼ阻碍剤に存する。

ここに原料のアロエとしては、古来有名なソコトラアｏ
　ｘ　（Ａｌｏｅ　ｐｅｒｒ７ｉ　Ｂａｋｅｒ）の他、
キダチアロエ（Ａ、ａｒｂｏｒｅＳｃｅｎｓ　Ｍｉｌｌ
、　ｖａｒ、ｎａｔａｌｅｎｓｉｓＢｅｒｇｅｒ）　、
キュラソウアロｘ　（Ａ、ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓＭｉ
ｌｌｅｒ）　、ケープ７０ｘ　（Ａ、ｆｅｒｏｘ　Ｍｉ
ｌｌｅｒ又はこれとＡ、ａｆｉｒｉｃａｎｓ　Ｍｉｌｌ
ｅｒ、及びＡ、５ｐｉｃｔａ　Ｂａｋｅｒとの交）Ａ種
）ナタールアロｘ　（Ａ、ｃａｎｄｅｌａｂｒｕｍ　Ｂ
ｅｒ−ｇｅｒ）等の薬用アロエ屈植物を利用することが
できる。

本発明者は、キノコチロジナーゼを利用した阻碍試験に
おいて、特にアロエ透析画分中のメタノール可溶性成分
が顕著なチロジナーゼ活性を有すること、殊に該メタノ
ール可溶性成分中のアロエシン（２−アセトニル−８−
グルコピラノシル−７−ヒトロキシクロモン）（下式Ｉ
）及び工のグルコース基の２”−位酸素がフェルラ酸（
４−ヒドロキシ−３−メトキシ桂皮酸）とエステル結合
した２″−〇−フェルロイルアロエシン（下式１１）が
７スコルビン酸に勝る顕著なチロジナーゼ阻碍作用を有
する゛［）実を見出した。

Ｈ３Ｃ＝ＯＵ目以下、本発明の基礎となった実験゛・１９実につき記述
する。

［材料及び方法］ ○　薄層クロマトグラフィー：メルク製シリカゲル板を
用い、以下の溶媒を使用して実施：酢醜エチルーメタノ
ールー水（２０：　３　：　２）　。

クロロフォルム−エタノール−水（３０ニア：３）。古
い蛍光を直接又は稀薄硫酸水を散布、加熱後、紫外線下
に観察。

○　抽出・キダチアロエの新鮮５１．４　ｋｇを磨砕後
、ａｏｏｏ　ｇで２０分間遠心して上清を集め、これを
ヴイスキングチューブ（ユニオン　カーバイド社製）に
詰め、蒸留水を外液として４８時間透析した。後、外液
を凍結乾燥して薄い黄色の粉末１４ｇを得た。

上の粉末０．４ｇを蒸留水１０ｍ１中に溶かしてアンバ
ライ）ＸＡＤ−２（ローム・アンドΦハース社製）を充
填したクロマトカラム（２，５Ｘ　１４ｃｍ）に負荷後
、蒸留水１見で、次いでメタノール１００１で溶出し、
各溶出液を濃縮、乾燥させて無色粉末３１０　＋ｗｇ及
び黄色粉末４２１を得た。

上の如くにして収集した黄色粉末２０ｇをシリカゲルカ
ラム（２，５Ｘ　４Ｇｃｍ）に負荷し、順次酢酸エチル
１文、酢酸エチル−アセトン（４：１）混液４皇、酢酸
エチルーア七トン（３：ｌ）混液２文及びアセト７２文
を用いて溶出したところ、酢酸エチル単独溶出液からク
リソファノールとアロエーエモジンとを含む黄色粉末０
．０２　ｇが得られた。また酢酸エチル−アセトン（４
：１）混液による溶出液から黄色粉末７．８ｇが得られ
た。この粉末をシリカゲルカラムで再クロマトにかけ、
アセトン−へキサン混液から最結晶したところ、無色粉
末の２“−〇−７エルロイルアロエシン４０１ｇが、ま
た母液からバルパロイン１４ｍ、ｇが得られた。さらに
酢酸エチル−アセトン（３：　ｌ）混液による溶出液か
ら、融点１３５℃の７０工ニン０２ｇが、なおさ９に、
アセトン溶出液から無晶状のアロエシン３１ｇが夫々収
得された。

透析内液は、これを凍結乾燥して無色のポリマー画分２
ｇを得た。

［チロジナーゼの測定］チロジナーゼの測定は、ポメランツ法（Ｐｏｍｅ−ｒａ
ｎｔｚ、Ｓ、Ｈ，、（１１６３）　Ｊ、ＢｉｏＩＪｈｅ
ｍ、、２３８．２３５１）を一部変形して実施した。

試料０．４　＋４１を１０％ジメチルスルフオキシド１
１中に加え、超音波で溶解させる。試験液１１に、１７
１５Ｍリン＃塩バッファー（ＰＨ６，８）　　ｌ　ｍｌ
、キノコ（マシュルーム）チロジナーゼ（９８Ｕ／ＩＩ
１．シグマケミカル社製）０．５ｍｌ及びＬ−ドーパ（
３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン）（１（イ）７
ｍ１）０．５１１を加え、２分間２５℃に保つ、そして
反応混合物中のドーパクローム（紅色）の量を４７５ｎ
ｍにおける吸収量で測定する。試料の存在又は不在下に
おける４７５ｎ■における吸収量の変化は、２分間以内
では直線的である。添付の第１図は、ドーパ−チロジナ
ーゼ及びチロシン−チロジナーゼ反応の時間的経過を示
す。

チロシーゼ反応の阻碍率は、下式に従って計算される。

Ａ：試験試料不在時の４７５ｎｍにおけるインキュベー
ション後の吸収。

Ｂ：試験試料不在時の４？５ｎ＋ｓにおけるインキュベ
ーション前の吸収。

Ｃ：試験試料存在時の４７５ｎ＋ｓにおけるインキュベ
ーション後の吸収。

Ｄ：試験試料存在時の４７５ｎｍにおけるインキュベー
ジ、ン前の吸収。

なお、４７５＋＋ｓ＋におけるドーパクロームの分子吸
収係数は、３．７ＸＩ０３　である。

［高速液体クロマト（ＨＰＬＣ）分析］グラ−７（Ｇｒ
ａｆ、Ｅ、、Ａｌｅｘａ、Ｍ、、（＋９８０）、　Ａｒ
ｃｈｉｖｄｅｒ　Ｐｈａｒ＊ａｚｉｅ、３１３，２８５
）の方法を一部変形して実施した。

透析物のアンパライト　ＸＡＤ−２によるクロマト分離
で得られた黄色の粉末３Ｉ１ｇを５０％メタノール１１
に溶かし、トーヨーパフク（東洋轡達鞠製）で予備処理
後、以下の条件で逆相ＨＰＬＣを行なイ、２”−〇−フ
ェルロイルアロエシンとアロエシンを分析した。

カラム：ＴＳＫ−ゲルＯＤＳ　１２０Ａ−カラム（内径
４．６量■Ｘ　２５ｃｍ）　。

溶媒系：メタ−ルー水（１：　ｌ　、’／Ｊ。

流速：流速１　ｍ１７分。

紫外部モニター波長：２５（ｎｍ。

使用機種＝６５５日立液体クロマトグラフ装こ、日立可
変波長ＵＶモニター及びＳｙｓｔｅｍ　１ｃｏ＋ｗｐｕ
ｔｉｎｇ　ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ（Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｐ
ｙｇｉｃｓ）。

保留時間（分）：アロエシン（３，３６）、７０エニン
（５，０３）　、　２”−ｏ−フェルロイルアロエシン
（８，３５）、　　インパル八ロイン（１４゜８１）、
バルパロイン（１６，５６）。

［結果］Ｌ−ドーパ（１（イ）／１）を基質として使用した場合
、添付第１図が示す通り、最初２分間だけ吸収量が直線
的に増加する。これに反し、Ｌ−チロシン（３…／１）
を、８質とした場合、１０分間の遅延期間を経て始めて
吸収量の増加割合が直線的となる。これは、Ｌ−ドーパ
とＬ−チロシンの競合的阻碍によるものと推測される。

下記第１表は、キノコチロジナーゼによるＬ−ドーパ酸
化に対するアロエ成分の阻碍作用を要約したものである
。因に、全試料は水に溶は難いため、１０％ジメチルス
ルフオキシシト溶液中に超音波を利用して０．４１４″
Ｉ／　ｍ　ｌの割合で溶解させた。　　　　　　　（以
下余白）第１表上表が示すように、上清の透析物は５％の阻碍率を示し
たが、高分子物質を含む非透析物は全く活性を示さない
、炭水化物、カルボン酸、アミノ酸及びフェノール性成
分を含む透析物を非イオン性樹脂アンパライトＸＡ［］
−２に吸着させ、順次木及びメタノールで溶出させた両
両分の中では、フェノール性物質を含む後者のみが５％
の阻＋４：Ｊ−を示す。このメタノール溶出画分を、シ
リカゲルでクロマト分離した種々の成分の中では、２”
−ｏ−フェルロイルアロエシン及びアロエシンカ、夫々
２７％及び３０％の阻碍率を示し、これは対照としたし
一アスコルビン酸の２３％に勝る数字である。これに反
し、上記安藤によるアロインは、僅かに１０％の阻ゲ１
率を示し、これは、上の２”−〇−フェルロイルアロエ
シン及びアロエシンには勿論。

Ｌ−７スコルビン酸にも遥かに劣る。なお、天然には存
しないが、アロエニンのアグリコンが８％の阻碍率を示
したことは興味深い。

因に、上のど−Ｏ−フェルロイルアロエシンは、キノコ
チロジナーゼのＬ−ドーパ酸化に対し非拮抗型ノ阻碍（
阻碍恒数Ｋｉ　＝８．５Ｘ　１０−５Ｍ、Ｖｓａｘ−５
（ｂ４１／ｍｉｎ／ｍｌ　；に＋ａ＝Ｉ１．５Ｘ　１０
−５Ｍ）を示し、フラボノイド類と異なった阻碍形式を
示す、またアロエシンにも同様の阻め性が認められるこ
とから、本２′−〇−フエルロイルアロエシンの活性部
位は、アロエシン骨格に由来するものと推定される。

［製造］本発明に係る阻碍剤は、音通、アロエ葉を上の［材料及
び方法］欄記載の通り処理することにより得られる。し
かしながら、＠近のレイノルズ氏の報文（Ｒａｙｎｏｌ
ｄｓ、Ｔ、、（１９８５）、Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｊ、
ｏｆ　ｔｈｅＬｉｎｎｅａｎ　５ｏｃｉｅｔｙ、９０，
１７９）によれば、２４０種にも及ぶアロエ属植物の滲
出物（樹脂）中には、夫々１４％、３５％及ヒ１２％も
の２”−０−フェルロイルアロエシン、アロエシン及び
アロエニンが含まれているので、本滲出物をそのまま又
は精製して利用することは、最も経済的であると同時に
、アロエ属植物の主産地であるアフリカ諸国に対する救
済の一助ともなるであろう。

［製剤］本発明に係るチロジナーゼ阻碍剤は、外用医薬品、化粧
品等に利用される。剤形としては、軟膏、チンキ剤、石
鹸、クレンジングクリーム、コールドクリーム、／＜ニ
シングクリーム、ファンデーンヨンクリーム、化粧水、
アストリンシェン＋−，ａ液、　　ファンデーンヨノロ
ーション、クレンジングローショ／、白粉、パックなど
がある。これらの製剤化に際しては、公知の外用剤又は
皮ＩＡ用化粧料用基剤乃至添加剤、例えば、インプロピ
ルミリステート、イソプロピルパルミテート、流動パラ
フィン、ヌジョール、ワセリン、固形パラフィン、セレ
シン、ミクロクリスタルワックス、ラノリン、アシル化
ラノリン、カーポワクス、カルボキシビニルポリマー、
各種界面活性剤、蜜蝋、植物油、ホウ砂、晒蜜蝋、植物
揮発油、ソルビトール、セタノール、鯨蝋、ステアリン
酸、プロピレングリコール、グリセリン、メチルセルロ
ース、トリエタノールアミン、シリコン油、オシケライ
ト、二酸化チタン、ランプリトール番ワンクス、エタノ
ール、レモン汁、ペクチン、トラガントゴム、ヘチマ木
、クエン酸、ミョウバン、硫酸亜鉛、ポリエチレングリ
コール脂肪酸エステル、タルク、カオリン、沈降炭酸カ
ルシウム、ステアリン酸亜鉛、炭酸マグネシウム、二酸
化亜鉛、硫黄華、色素、香料、保存料等の成分の他、ア
スコルビン酸又はそのナトリウム塩、ヒノキチオール、
システィン、麹酸、ピロメコン酸、マルトール等の環状
α−ケトール類、ハイドロキノン、カテコールなどの公
知のチロジナーゼ阻碍性化合物を配合することができる
。ざらに、アロエシンのクロモン環の２−位アセトニル
基の２°−ケト基、７−位水酸基及び８−位グルコピラ
ノシル基の２”〜４“−位及びＢ“位水ｌｌ１１ｉ基の
全部又は一部がアシル化されたエステル又はエノールエ
ステル化合物（２”−位水素がフマロイル基で置換され
た２′″−ｐ−フマロイルアロエシンはアロエ葉中に実
存する。）も本発明有効成分として利用されることがで
きる。

［処方例〕以下１本発明阻碍剤を含む数種の処方について示すが１
例示は当然中なる説明用のものとして理解されるべきで
ある。

例１　（栄五クリーム型コールドクリーム）Ｏ油相ラノリンアルコール　　　　　　　　　５゜Ｏアセチル
化ラノリン　　　　　　　　　１０鯨！１ｉｉ４．０晒蜜１！　　　　　　　　　　　　　　　１００流動パ
ラフイン　　　　　　　　　　２００白色ワセリン　　
　　　　　　　　　　２００ソルビタン脂肪酸エステル
　　　　　　３．０ツイーン６０　　　　　　　　　　
　　ＬＯポリエチレングリコール４００　　゛　　　２
．０メチルセルロース　　　　　　　　　　　ｏ、　ｉ
アロエ透析物中のメタノール可溶性成分の凍結乾燥物　　　　　　　　　　０５０水相プロピレングリコール　　　　　　　　５．０パラオキ
シ安息香酸メチル　　　　　　０１香料及び木を加えて
　　　　　　　ｉｏｏ、。

例２（ハンドクリーム） ○油相イソプロピルミリステート　　　　　　、３．０％ミク
ロクリスタルワックス　　　　　　２．０セタノール　
　　　　　　　　　　　　　６０ラノリン　　　　　　
　　　　　　　　　ｌＯソルビタンモノラウレート０８７０工透析物中のメタノール可溶性成分の凍結乾燥物　　　　　　　　　　ｏ５０水相ソルビトール（７０％）５．０ソルビン酸ナトリウム　　　　　　　　０．１木を加え
て　　　　　　　　　　　１００．０例３（バニシング
クリーム）Ｏ油相羊毛蝋ステロール　　　　　　　　　　５．０アセチル
化ラノリンアルコール　　　　２０アセチル化及びエト
キシル化ラノリン　３０ステアリ／酸モンモグリセリト
　　　　５．０ステアリン癩　　　　　　　　　　　　
１５．０アロエ透析物中のメタノールｉＪｆ溶性成分の
凍結乾燥物　　　　　　　　　　０５０水相プロピレングリコール　　　　　　　　５．０香料及び
水を加えて　　　　　　　１００．０例４（ミルクロー
ション）流動パラフィン　　　　　　　　　　２０．０ポリエチ
レングリコール６００モノステアレート　　　　　　　　　　　５．０セチル
トリメチルア／モニウムクロライド　　　　　　　　　　　　　３０イソプロピ
ルミリステート　　　　　　　２０プロピレングリコー
ル　　　　　　　　４゜アロエ透析物中のメタノール可
溶性成分の凍結乾燥物　　　　　　　　　　０５香料、保存
料及び水を加えて　　　１０００（効果）以上、説明した通り、本発明は有効かつ安全なチロジナ
ーゼ阻碍剤を提供しうろことにより、肝阜１．黒皮症そ
の他の病的なメラニン過沈看症の治療並びに皮層の美白
効果を通じて国民の福祉に寄与−しうる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ドーパ−チロジナーゼ及びチロシン−チロジ
ナーゼ反応の時間的経過と反応速度との関係を示すグラ
フである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）アロエの透析画分中のメタノール可溶性成分を有
効成分とするチロジナーゼ阻碍剤。
（２）メタノール可溶性成分が、アロエシン又はアロエ
シンエステルである特許請求の範囲第１項記載のチロジナーゼ阻碍剤。（２）アロエシンエステルが、２″−ｏ−フェルロイル
アロエシンである特許請求の範囲第２項記載のチロジナ
ーゼ阻碍剤。