JPS62277378A - カズサマイシンｂ、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 〔産業上の利用分野〕 本発明は、抗腫瘍作用および抗真菌作用を有する新規な
カズサマイシンＢ１その製造法およびそれを含有してな
る抗腫瘍剤又は抗真菌剤に関するものである。

〔従来の技術〕

抗腫瘍作用および抗真菌作用を有する微生物産生の抗生
物質としては、例えば制癌性抗生物質８１−４８４　（
特開昭６０−１４１２９３号公報、ジャーナル・オプ・
アンティバイオティクス（Ｊ−ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）第３７巻、第７０６頁−第７１
１頁（１９８３年）参照〕が知られている。

またこの抗生物質と類似した構造を有し、かっ抗真菌作
用を有する微生物産生の抗生物質としては、レプトマイ
シン類〔特開昭５５−１１８４９９号公報；ジャーナル
・オブ・アンティバイオティクス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）第３６巻、第６３９頁−
第６５０頁（１９８３年）〕が知られている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は新規で有用な抗腫瘍性抗生物質を提供すること
を目的とするものである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として種々
の土壌から菌株を分離し、その生産する代謝産物につい
て研究を続けた結果、千葉具で採取した土壌から分離し
た菌株８１−４８４の培養物中に、一部の真菌類に対し
て抗菌活性を示し、しかもＰ３８８マウス白血病および
ザルコーマ１８０細胞の増殖抑制作用を有する物質が産
生されるごとを見い出した。さらにまた、本発明のカズ
サマイシンＢは、抗生物質８１−４８４よりも安全域の
広い抗腫瘍剤であることを見い出した。

その理化学的性質を有する物質は他に報告がないことか
ら、この物質をカズサマイシンＢと呼称することにした
。本発明は、かかる知見に基いて完成されたものである
。

本発明は、後記の理化学的性質を有するカズサマイシン
Ｂまたはその塩、ストレプトマイセス属に属するカズサ
マイシンＢ生産菌を栄養培地に培養し、該培養中にカズ
サマイシンＢを蓄積せしめ、該培養物からカズサマイシ
ンＢを採取することを特徴とするカズサマイシンＢまた
はその塩およびカズサマイシンＢまたはその塩を有効成
分として含有することを特徴とする抗腫瘍剤または抗真
菌剤に関するものである。

カズサマイシンＢ生産菌は、ストレプトマイセス属に属
するが、例えば本発明者らが分離したストレプトマイセ
ス属に属する菌株８１−４８４は、本発明に最も有効に
使用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性質を
示すと次ぎの通りである。

（３）、形態的特徴 ８１−４８４菌株は多くの寒天平板培地上で菌糸状で豊
富に発育し、その基間菌糸の分断は観察されない、気菌
糸が形成される場合は、その胞子柄が直線状またはいわ
ゆる不完全型のら線状であり、その先端の２０個以上の
連鎖状の胞子が観察され、胞子のうは観察されない。そ
の胞子の表面は平滑であり、長径約０．８μｍ×短径約
０．　４μの楕円径である。

（ｂ）０次の各培地における生育状態 各培地における生育状態（２７℃で３週間培養後の各培
地における生育状態）の観察は第１表の通りである。

（Ｃ）０次の各生理学的性質 ■生育温度範囲：２０〜３０℃で生育が可能であり、２
７℃付近が最適であ る。

■ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培
地上）　　：陰性 ■スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地上）
　　　　　：陰性 ■脱脂牛乳の凝固、ペプトン化（１０％スキムミルク培
地上）　　：凝固は陰性であり、ペプトン化は陽性であ
る。

■メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地およびペプ
トン・イースト・鉄寒天培地上）：陰性 ■硫化水素の生成（ペプトン・イースト鉄寒天培地上）
　　　　　：陰性 ■亜硫酸塩の生成（硫酸塩培地上） ：陽性 （ｄ）１次の各炭素源の利用性 炭素源の利用性は、プリドハム・コドリープ寒天培地上
２７℃で１ケ月間培養した後に観察した。

なお、→はよく利用する。＋は利用する。−は利用しな
い意味をそれぞれ示す。

■Ｌ−アラビノース　　　　　　− ■Ｄ−キシロース　　　　　　　− ■Ｄ−グルコース　　　　　　　→ ■Ｄ−フラクトース　　　　　　− ■シュクロース　　　　　　　　− ■イノシトール　　　　　　　　＋ ■Ｌ−ラムノース　　　　　　　　＋ ■ラフィノース　　　　　　　　− ■Ｄ−マンニトール　　　　　　− （ｅ）、細胞壁の組成 りｅｃｋｅｒらの方法［Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ、第１３巻、第２３６頁−第２４３頁（１
９６５年）］に基づいて分析した結果、１．ｃ、型のジ
アミノピメリン酸が検出された。

以上の菌学的性質から、零８１−４８４菌株はストレプ
トマイセス属に属する菌株であることは明らかである。

しかしながら、どの種に属するかは明らかにできないの
で、取りあえず本菌株をストレプトマイセス　（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　　８１−４８４と命名すること
にする。なお、本菌株は、通商産業省工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌条寄第５７１号（ＦＥＲＭ−
ＢＦ２７１）として寄託されている。

以上、カズサマイシンＢについて説明したが、放線菌の
一般的性状として蘭学上の性状は極めて変異し易く、一
定したものではなく、自然的にあるいは通常行われる紫
外線照射、Ｘ線照射または変異誘導剤、例えばＮ−メチ
ル−Ｎ”−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホネ
ートなどを用いる人工的変異手段により変異することは
周知の事実であり、このような人工的変異株も含め、ス
トレプトマイセス属に属し、カズサマイシンＢを生産す
る能力を有する菌株はすべて本発明に使用することがで
きる。

本発明において、先ずストレプトマイセス属に属するカ
ズサマイシンＢ生産菌が適当な培地に培養される。本菌
の培養においては、通常放線菌の培養に使用される培地
ならばいずれも使用することができる。培地としては、
微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源、さらに
必要に応じて無機酸塩等を含有させた栄養培地が使用さ
れる。

同化し得る炭素源としては、プ下つ糖、糖蜜、澱粉、デ
キストリン、セルロース、コーン・ステイープ・リカー
、グリセリン、存機酸などが用いられる。同化し得る窒
素源としては、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥
酵母、大豆粉、コーン・ステイープ・リカー、綿実粕、
カゼイン９、大豆、蛍白分解物、アミノ酸、尿素などの
有機窒素源、硝酸塩、アンモニウム塩などの無機窒素化
合物が単独または組み合わせて用いられる。その他、必
要に応じてナトリウム塩、カリウム塩、リン酸塩、カル
シウム塩、マグネシウム塩などの無機塩類が添加される
。さらに、培地には、必要に応じて、木閑の生育やカズ
サマイシンＢの生産を促進する微量栄養素、発育促進物
質を適当に添加してもよい。

培養は通常振盪または通気攪拌培養などの好気的条件下
で行うのが好ましい。工業的には深部通気攪拌培養を行
うのが好ましい。培地のｐＨは中性付近で培養を行うの
が好ましい。培養温度は２０〜３７℃でも行い得るが、
通常は２４〜３０℃、好ましくは２７℃に保つのがよい
。培養時間、液体培養の場合、通常４〜６時間培養を行
うと、本発明によるカズサマイシンＢが生産蓄積される
。

好ましくは、培養液“中の蓄積量が最大に達した時に培
養を終了すればよい。これらの培地組成、培地の液性、
培養温度、攪拌温度、通気量などの培養条件は使用す之
菌株の種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得
られるように適宜調節、選択されることはいうまでもな
い。液体培養において発泡があるときは、シリコン油、
植物油、界面活性剤などの消泡槽を適宜使用してもよい
。

このようにして得られた培養物中に蓄積されたカズサマ
イシンＢは主として培養濾液中に含有されているので、
培養物を必要に応じて濾過補助剤例えばセライト、ハイ
フロス−パーセルなどを加えて濾過するか、又は遠心分
離して培養濾液と菌体とに分離し、その培養濾液からカ
ズサマイシンＢを採取するのが有利である。

また、本発明のカズサマイシンＢは菌体にも含まれるの
で、菌体からメタノールなどの低級アルコール、アセト
ンなどでカズサマイシンＢを抽出し、得られた抽出液を
減圧濃縮して該有機溶媒を除去した後、以下に述べる培
養濾液からの精製を進めることができる。培養濾液から
カズサマイシンＢの分離精製を□行うためには、カズサ
マイシンＢが後述のようにヘキサンおよび水に不溶であ
り、メタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒、
ジクロルメタン、クロロホルムなどの塩素化メタン系溶
媒、アセトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン系
溶媒などの多くの有機溶媒に可溶である酸性物質である
ので、これらの性質を利用した精製法が用いられる。通
常、培養濾液を非親水性有機溶媒、例えばクロロホルム
、メチルイソブチルケトン、酢酸エチル、酢酸ブチルな
どで抽出することにより、カズサマイシンＢが有機溶媒
層に転溶される。上記抽出操作を行う際に、培養濾液を
予め、ｐＨ３，０〜５．０の範囲に調節するのが好まし
い。このようにして得られた有機溶媒層は、必要に応じ
て金属イオンなどを除去するために希薄なエチレンジア
ミン四酢酸塩水溶液で洗浄した後、種々の脱水剤例えば
無水硫酸ナトリウム、無水硫酸マグネシウム、ビーズゲ
ルなどを加えて脱水される。脱水された有機溶媒層を減
圧下で濃縮する。この濃縮操作においてカズサマイシン
Ｂは安定な物質であるが、通常加熱温度を６０℃以下と
なるように行うのが好ましい。残渣にヘキサン、石油エ
ーテルなどの有機溶媒を加えてカズサマイシンＢを沈澱
させることができる。得られた沈澱物は数回ヘキサンな
どで洗浄後、吸引濾過または遠心分離によりカズサマイ
シンＢを褐色の粗製物として採取することができる。

上記の粗製物をさらに精製するためには、カズサマイシ
ンＢと混合物との溶解度の差や、混じり合わない二液層
間の分配率の差や、各種吸着担体に対する吸着力の差を
利用したクロマトグラフィーなど多くの手段が可能であ
るが、特にクロマトグラフィーはカズサマイシンＢの精
製には非常に有効な方法である。カズサマイシンＢの精
製に有効なりロマトグラフィーとしては、例えばシリカ
ゲル、アルミナ、活性炭、セルロース、ヒドロキシアパ
タイト、ＨＰ−２０などの吸着剤による吸着クロマトグ
ラフィー、シラン化シリカゲル、オクタデシルシラン化
シリカゲルなどを用いる逆相分配クロマトグラフィー、
セファデックスＬＨ−２０、トヨバールなどを用いる分
子篩にもとずくゲル濾過クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ
セルロース、ＤＥＡＥセファデックス、ＤＥＡＥ　）ヨ
パールなどを用いるイオン交換クロマトグラフィーなど
があげられる。

カズサマイシンＢは、これらのクロマトグラフィーや電
気泳動、向流分配、限外濾過、蒸溜などの手段を単独あ
るいは任意の順序に組み合わせるか、または反復して用
いることにより分離精製することができる。例えば前記
粗製物を少量のクロロホルム、ベンゼンなどに溶かし、
これを予め充填されたシリカゲルのカラムに吸着させ、
ヘキサン−アセトン系混合溶媒を用いてカラムクロマト
グラフィーを行い、その活性画分を集め、減圧濃縮せし
める。これをさらに少量のクロロホルムなどに溶解し、
シリカゲルに吸着させ、クロロホルム−メタノール系混
合溶媒を用いてカラムクロマトグラフィーを行い、その
活性画分を集め、減圧濃縮後、少量のメタノールに溶か
し、これを逆層シリカゲルカラムに吸着させ、メタノー
ル−水系混合溶媒でカラムクロマトグラフィーを行うこ
とによりカズサマイシンＢを分離精製することができる
。

このようにして得られたカズサマイシンＢは酸性物質で
あるから、公知の方法により塩に変換し得る。

このような塩としては、医薬的に許容し得る非毒性塩が
あげられ、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアル
カリ金属塩、カルシウム塩、公知の有機アミンとの塩な
どがあげられる。

次に、以上の如くして得られたカズサマイシンＢの理化
学的性質について述べる。

■元素組成；Ｃ□ｚＨａｈ０７（高分解能マススペクト
ルによる） ■分子１　　；５４２（ＦＤＳＩマススペクトルによる
〕 ■融点　　；５２〜５５℃ ■比旋光度：　〔α）２８＝−８６，９５℃（ｃ＝０．
１、メタノール） ■紫外線吸収スペクトル ；第１図の通り（メタノール中で測 定） ■赤外線吸収スペクトル ；第２図の通り（ＫＢｒディスク法 で測定） ■’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル ；第３図の通り（重クロロホルム中 ３６０ＭＨｚで測定） ■１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル ；第４図の通り（重クロロホルム中 ９０．５６ＭＨｚで測定） ■溶剤に対する溶解性 ；ジエチルエーテル、メタノール、 エタノール、ジクロロメタン、ク ロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブ チル、アセトンおよびベンゼンに 可溶、ヘキサン、水に不溶。

［株］塩基性、酸性、中性の区別 ；酸性物質 ■物質の色；淡黄色の粉末 ＠呈色反応； ヨード発色、三塩化アンチ モン反応に陽性。

ニンヒドリン反応、アントロン− 硫酸反応、塩化第二鉄反応に陰性 ０シ一リカゲル薄層クロマトグラフィー：　（担体メル
ク社製、シリカゲル６０） 、Ｒｆ値＝０．１７　（展開溶媒：ク ロロホルムー メタノール＝ １０　：　１） ；Ｒｆ値＝０．２３　（展開溶媒：酢 酸エチル−メ タノール＝４ ０：１） 以上の理化学的性質から、本発明のカズサマイシンＢの
化学構造は式（１）の如く推定される。

０　　　　０ＨＣＨ３ ＣＨ−Ｃ、ＣＩｌ　−ＣＨ−Ｃ−ＣＨ−ＣＨ−ＣＩ　　
（１）ＨＯＯＣ−Ｃ）ｌ　＝　Ｃ−ＣＨ：＋ その名称は、１９−　（３，６−シヒドロー３−メチル
−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−６−ヒドロ
キシ−９−ヒドロキシメチル−３゜５．７，１１，１５
．１７−ヘキサメチル−８−オキソ−２，１０，１２，
１６，１８−ノナデカペンタン酸である。

上記の通り、本発明のカズサマイシンＢは、抗真菌作用
および抗腫瘍作用を有することから、真菌感染症および
腫瘍の治療剤として有用である。

前記の理化学的性質を有するカズサマイシンＢと比較的
類似している物質としては抗生物質８１−４８４および
抗生物質レブトマイシン類があげられる。しかしながら
、カズサマイシンＢのＩｎおよび”Ｃ−ＮＭＲスペクト
ルがこれらの物質のものとは明らかに異ることから、本
発明のカズサマイシンＢは新規な抗腫瘍性物質であると
認められる。

本発明のカズサマイシンＢまたはその塩を有効成分とし
て抗腫瘍剤または抗真菌剤として使用する場合は、相容
性の薬学的に許容し得る担体とともに薬学的組成物とす
ることができる。これらの組成物は、所望の投与方法に
対して適当な薬学的形態のいずれかになし得る。このよ
うな形態の例としては、錠剤、カプセル、ピル、粉剤お
よび顆粒のような経口投与に対する固体形態、溶液、懸
濁液、シロップおよびエリキサ−のような局所または経
口投与に対する液状形態および滅菌溶液、懸濁液または
エマルジョンのような非経口投与に適した形態を包含す
る。

本発明の有効成分を用いて薬学的組成物を調整する場合
に使用される相容性の薬学的に許容し得る担体は、固体
または液体である。固体形態の製剤は、粉剤、錠剤、分
散性顆粒、カプセル、カシェ−および串刺を包含する。

面体の担体は希釈剤、風味剤、可溶化剤、結合剤または
錠剤崩壊剤として作用する１種またはそれ以上の物質で
あり得る。

また、それはカプセル化物質であってもよい。粉剤にお
いては、微細な活性化合物と混合される微細な固体であ
る。錠剤においては、活性化合物を必要な結合性を有す
る担体と適当な割合で混合し、そして所望の形状および
大きさに圧搾する。粉剤および錠剤は、好適な有効成分
５ないし７０％を含有する。適当な固体担体は、炭酸マ
グネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、
ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン
、トラガントゴム、メチルセルロース、ナトリウム、カ
ルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバ
ターなどである。

串刺の製造に対しては、脂肪酸グリセライドまたはココ
アバターの混合物のような低融点ワックスを始めに融解
し、そして活性成分を撹拌によってその中に均等に分散
させる。次に融解した均質な混合物を所定の大きさの型
に注入し、冷却し、固化させる。

非経口または経口投与に使用される液状形態の製剤とし
ては、例えば溶液、懸濁液およびエマルジョンがあげら
れる。より具体的にはこの非経口投与に使用される液状
製剤としては、水また水−プロビレングリコールリン容
液をあげることができ、一方経口使用に適した液状製剤
としては、所望に応じて適当な着色剤、風味剤、安定剤
および濃化剤を加えることのある、水溶液、並びに微細
な活性成分を粘稠な物質、例えば天然または合成ゴム、
樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチル
セルロースおよび他の公知の懸濁剤とともに水に分散し
た水性懸濁液があげられる。これらの液状形態の製剤は
、適当な溶剤に分散または溶解させることにより容易に
調整される。

製剤の単位使用における有効成分の量は、約０゜１〜５
０３ｍｇ、好適には１〜１００ｍｇである。

なお。これらの製剤は、必要ならば、他の相容性の治療
剤、例えば他の抗腫瘍剤、抗薗剤または抗真菌剤を含有
することもできる。

治療に供する場合における使用量の範囲は、経口投与の
場合における１日あたり体重１ｋｇに付１〜５００ｍｇ
であり、一方経口投与の場合には１日あたり体重１ｋｇ
に付０．１〜１００ｍｇである。しかしながら、この使
用量は患者の年齢、性別、体重、症状などにより適宜増
減させることができる。

〔発明の効果〕

次に本発明のカズサマイシンＢの生物学的性質について
述べる。

（１）抗菌スペクトル 試験化合物のＭＩＣは寒天希釈法により決定された。即
ち、順次希釈された試験化合物の水溶液１．０ｍｇをシ
ャーレに注ぎ、次に試験菌が細菌である場合にはミュー
ラ・ヒントン寒天培地９．０ｍｊ！を、一方試験菌が真
菌である場合には、サブロー寒天培地９．０ｍｇを注い
で混ぜる。その混合寒天プレート上に、試験菌の混濁液
（約１０”ＣＦＵ／ｍＡりを塗抹する。３７℃で一夜培
養した後、試験菌の増殖を完全に■害する試験化合物の
濃度を、最小生育阻止濃度（Ｍ　Ｉ　Ｃ）とする。その
測定結果を第２表に示す。なお、（＊）印を付した試験
菌については、栄養寒天培地（日本製）を用いて、２８
℃で２日間培養して測定した。

第２表　力ズサマイシンＢの抗菌スペクトル上記の第２
表から明らか　如く、カズサマイシンＢは、一部の真菌
類に対して抗菌活性を示すが、細菌に対しては抗菌活性
を示さない。

（２）Ｐ３８８マウス白血病に対する治療効果ＢＤＦ、
マウス（雌、６週令）の腹腔内Ｐ３８８細胞１×１０ｓ
個を移植後、１日、５日および９日目に１日１回所定の
投与蓋の試験化合物を腹腔内に注射し、移植後の生存日
数を指標に試験化合物の抗腫瘍効果を検討した。なお、
延命率は下記の計算式により求め、その結果を第３表に
示す。

延命率（％）＝ テスト群の平−生存日数一対照群の平均生存日数対照群
の平均生存日数 ×１００ （３）急性毒性試験 ＩＣＲマウス（雌、５週令）に試験化合物を種々の投与
量で腹腔内に注射後、１週間観察し、急性毒性について
検討した。Ｌｉｔｃｈｆ　１ｅｌｄ−Ｗｉ　１ｃｏｘｏ
ｎ法により５０％敗死濃度（ＬＤｓ。）を求めた。その
結果を第４表に示す。

第４表　急性毒性 以上第３表および第４表の結果から、Ｐ３８８白血病マ
ウスの治療効果において、本発明のカズサマイシンＢは
抗生物質８１−４８４よりもすぐれ、さらに、抗生物質
８１−４８４投与群においてマウスの毒性列が観察され
る投与量と同じ投与量の本発明のカズサマイシンＢの投
与群ではマウスの毒性列が観察されないことおよび急性
毒性においても本発明のカズサマイシンＢは抗生物質８
１−４８４よりも低いことから、本発明のカズサマイシ
ンＢは抗生物ｆ８１−４８４よりも広い投与量の安全域
を有する。

上記の通り、本発明のカズサマイシンＢは、抗真菌作用
および抗腫瘍作用を有することから、真菌感染症および
腫瘍の治療剤として有用である。

実施例 次に実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、こ
れにより本発明を限定するものではない。

実施例　１ ８１−４８４菌の培養 ５００ｍｆ容坂ロフラスコにグルコース２．０％、ペプ
トン０．５％、肉エキス０．５％、乾燥酵母０．３％、
食塩０６５％、炭酸カルシウム０゜３％を含む液体培地
（ｐＨ７，０）１００ｍｊ！を滅菌し、これにグルーコ
ース０．４％、麦芽エキス１．０％、イーストエキス０
．４％、寒天１゜５％を含む寒天斜面培地（ｐＨ７，０
）上で、２７℃で６日間培養したストレプ、トマイセス
８１−４８４の斜面培養から一白金耳を接種し、振幅１
７ａｍ毎分１２０回往復するレシプロシェーカーにより
２７℃で７２時間振盪培養して種母を得た。

次に２００１容ジャーファーメンタ−にグルコース３．
０％、肉エキス０．７５％、乾燥酵母０゜３％、硫酸マ
グネシウム０．２％を含む液体培地（ｐＨ７，０）１２
０１を仕込み、滅菌した後、前記方法で得られた種母２
．５１を無菌的に接種し、通気量１３０７！／分、攪拌
２３８ｒｐｍ、２８℃で１４６時間培養し、培養液約１
１０１を得た。

実施例　２ 培　物からのカズサマイシンＢの抽出 実施例１で得た培養液１１０１に濾過補助剤４゜５ｋｇ
を加え濾過し、菌体ケーキ約１２ｋｇと濾液および洗液
１２（Ｈ！を得た。

この濾液および洗液を５２容のアンバーライトＸＡＤ−
７カラムに通過させ、活性成分を吸着させた。このカラ
ムを水１（ｌおよび２０％メタノール−水１０１にて洗
浄した後、６０％メタノール−水で活性成分を溶出させ
た。得られた溶出液２５２を約３１まで減圧濃縮し、溶
出：ａ！ｇｉ液を得た。

他方、該菌体ケーキをメタノール４５１に懸濁し、約１
時間攪拌した後、濾過し、さらに得られたケーキをメタ
ノール５１で洗浄した。得られた濾液および洗液５０１
を３１まで減圧濃縮し、菌体抽出濃縮液を得た。

前記の如くして得られた溶出濃縮液と菌体抽出濃縮液を
合わせて、３０％硫酸を加えてｐＨ６゜８に調節し、次
いで酢酸エチル１２１を加え、充分に攪拌した。生成し
た沈澱物を濾去した後、酢酸エチル層を分取し、無水硫
酸ナトリウムで脱水後減圧濃縮し、カズサマイシンＢを
含む茶褐色の油状物３１．３ｇを得た。

実施例　３ シリカゲルクロマトグラフィーによるカズサマイシンＢ
の精製 実施例２で得られた油状物を予めヘキサンで充填された
シリカゲルＣ−２００（和光紬薬製）カラム（３０６Ｘ
５０ｃｍ）に吸着せしめ、ヘキサン１．５２とヘキサン
−アセトン（１：　１）混液によるグラジェント溶出ク
ロマトグラフィーを行った。得られた活性画分１．３１
を減圧濃縮し、茶褐色の油状残渣４．４９ｇを得た。　
これを予め、酢酸エチルで充填されたシリカゲル（和光
紬薬製。

Ｃ−２００））のカラム（５，ＯＸ５１ｃｍ）に吸着さ
せ、展開液として酢酸エチルを用い、クロマトグラフィ
ーを行い、得られた活性画分１．８１を減圧濃縮して、
純度５０％程度の淡黄色のカズサマイシンＢの粗製固形
物９４５ｍｇを得た。

実施例　４ 実施例３で得たカズサマイシンＢの粗製固形物をさらに
精製して、その純品を得るために、高速液体クロマトグ
ラフィー（日本分光ＴＲｌ１？０ＴＡＲ−Ｖ。

ＵＶＩＤＥＣ−１００−Ｖ）を行った。その際、使用し
たカラムはステンレス製パンクドカラムＹＭＣ−Ａ−３
４３（ＯＤＳ−５，内径２０ｍｍｘ長さ２５０ｍｍ、山
村化学研究所型）を用いた。

実施例３で得たカズサマイシンＢの粗製品１２０ｍｇを
メタノール１．ｍβに溶解した試料を注入し、展開溶媒
として０．０５Ｍリン酸−メタノール混液（１：　３．
高速液体クロマトグラフィー用溶媒）を用いて分画を行
った。２２０ｎｍの紫外部吸収でカズサマイシンＢに該
当するピークを集め、これを減圧下メタノールを留去し
た。残渣に酢酸エチルを加え、５％水酸化ナトリウム水
溶液でｐＨ６，５に調節し酢酸エチル層に転溶させた。

酢酸エチル層を精製水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
脱水した後、濃縮乾固して淡黄色のカズサマイシンＢの
純品４４　ｍ　ｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はメタノール中で測定したカズサマイシンＢの紫
外線吸収スペクトルを、第２図は該物質のＫＢｒディス
ク法で測定した赤外線吸収スペクトルを、第３図は該物
質の重クロロホルム中３６ＯＭＨｚで測定した’）ｌ−
ＮＭＲスペクトルを、第４図は該物質の重クロロホルム
中９０．５６ＭＨｚで測定した”Ｃ−ＮＭＲスペクトル
をそれぞれ示す。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質を有するカズサマイシンＢまた
   はその塩。 ［１］元素組成；Ｃ＿３＿２Ｈ＿４＿６Ｏ＿７（高分解
   能マススペクトルによる） ［２］分子量；５４２〔ＦＤＳＩマススペクトルによる
   〕 ［３］融点；５２〜５５℃ ［４］比旋光度；〔α〕＝−８６．９５°（ｃ＝０．１
   、メタノール） ［５］紫外線吸収スペクトル ；第１図の通り（メタノール中で測 定） ［６］赤外線吸収スペクトル ；第２図の通り（ＫＢｒディスク法 で測定） ［７］溶剤に対する溶解性 ；ヘキサンおよび水に不溶であり、 ジエチルエーテル、メタノール、 エタノール、ジクロロメタン、ク ロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブ チル、アセトンおよびベンゼンに 可溶である。 ［８］呈色反応； ヨード発色、三塩化アンチモン反 応に陽性。 ニンヒドリン反応、アントロン− 硫酸反応、塩化第二鉄反応に陰性 ［９］塩基性、酸性、中性の区別 ；酸性物質 ［１０］物質の色；淡黄色の粉末
2. （２）ストレプトマイセス属に属するカズサマイシンＢ
   生産菌を栄養培地に培養し、培養物中にカズサマイシン
   Ｂを蓄積せしめ、該培養物中からカズサマイシンＢを採
   取することを特徴とするカズサマイシンＢ、またはその
   塩の製造法。
3. （３）ストレプトマイセス属に属するカズサマイシンＢ
   生産菌がストレプトマイセス８１−４８４株（ＦＥＲＭ
   −ＢＰ５７１）である特許請求の範囲第２項記載の製造
   法。
4. （４）カズサマイシンＢまたはその塩を有効成分として
   含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
5. （５）カズサマイシンＢまたはその塩を有効成分として
   含有することを特徴とする抗真菌剤。