JPS62239997A - Ｌ−３，４−ジヒドロキシフエニルアラニン及びその誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 Ｌ　−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（以下Ｌ
−ＤＯＰＡと略す）及びその誘導体は・９−キンソン氏
病あるいはうつ病の治療剤として有用なアミノ酸である
。本発明はＬ−ＤＯＰ人及びその誘導体の製造方法に関
し、さらにくわしくは微生物を用い、３．４−ジヒドロ
キシフェニルピルビン酸、３．４−ジメトキシフェニル
ピルビンｆｆｌ、３．４−メｆレンジオキシフェニルピ
ルビン酸、３−ヒドロキシ−４−メトキンフェニルピル
ビン酸、及び３−メトキシ−４−ヒドロキンフェニルピ
ルビン酸トより成る群よす選ばれる１以上アミノ基供与
体とからＬ−ＤＯＰＡ及びその誘導体を製造する方法に
関するものである。

〔従来の技術〕

Ｌ−ＤＯＰＡの製造法としては化学的には合成法によυ
ラセミ体を製造し、これを光学分割してＬ一体を分離す
る方法が知られている。微生物を用いる方法としては、
（特公昭４７−２６３１７．４９−３８８３９　。

４９−３８８４０　、特開昭４８−１８４７５．４８−
７５７９１．６０−１８４３９４　）が知られている。

しかし、これらの方法は生成物の収率が低く、必ずしも
経済的に有利な方法とはいえない。

〔本発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、Ｌ−ＤＯＰＡ及びその誘導体に対応す
るα−ケト酸からより効率よく、Ｌ−ＤＯＰＡ及びその
誘導体を製造する方法を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは上記の問題点を、解決する為に種楯検豹を
行−）次結果、従来知られている菌株を用いたα−ケト
酸からのＬ−ＤＯＰＡ及びその誘導体の製造法に比らべ
、よシ効率よ（Ｌ−ＤＯＰＡ及びその誘導体を生産する
新しい菌株を見い出した。本発明は、この知見に基づい
てなされたものである。

本発明において使用される微生物は、具体的には以下に
示す様なものがある。

アシネトバクタ−ルオフイ　　ＡＴＣＣ−９０３６（Ａ
ｃｉｎｓｔｏｂａｃｔｅｒ　　１ｗｏｆｆｉｉ）アグロ
バクテリウム　ツメファシェンス　　ＩＦＯ−３０５８
（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ
ａ）ぺ１ジエリンキア　インディカ　　ＡＴＣＣ−９０
３７（Ｂｅ１ｊｅｒｌｎｃｋｉａ　１ｎｄｉｃａ）シト
ロバクタ−インターメディアス　　ＩＦＯ−１３５４４
（Ｃｔｔｒｏｂａｃｔｅｒ　　ｉｎｔｅｒｍａｄｉｕｓ
）エンテロバクタ−エアログネス　　ＡＪ−２６４３Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｓ＋ｒ　ａｓｒｏｇ
ｅｎｅａ）エルビニア　カロトボラ　　ＡＴＣＣ−ＡＴ
ＣＣ−７４０３（Ｅｒ　　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）フラ
ボバクテリウム　アクアタイレ　　ＡＡＴＣＣ−８３７
５（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕ　ａｑｕａｔｉｌｅ）
クレブシェラ　オキ７トカ　　ＡＴＣＣ−８７２４（Ｋ
ｌｅｂａｉｅｌｌａ　　ｏｘｙｔｏｃａ）ム クルイヘ２　シトロバクタ　　ＦＥＲＭ−３１４９（Ｋ
ｌｕｙｖｅｒａ　　ｃｉｔｒｏｐｈｉｌｍ）ミコプラナ
　ブラタ　　ＡＴＣＣ−４２７８ＡＴＣＣ−４２７８（
ｂｕｌｌａｔａ）プロテウス　ミラビリス　　ＡＪ１２
０１５　ＦＥＲＭ−Ｐ　０６９２９（Ｐｒｏｔｅｕｓ　
ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ）ビプ讐オ　チロｒネスＡＪ２８０
７　ＦＥＲＭ−Ｐ　０７０６０（Ｖｉｂｒｉｏ　ｔｙｒ
ｏｇａｎｅｓ）キサントモナスシトリ　　ＡＪ２７８５
　ＦＥＲＭ−Ｐ　０７４４２（Ｘａｎｔｏｍｏｎａａ　
　ｃｉｔｒｉ）デバリオミセス　ハンセニ　　ＩＦＯ−
００２３（Ｄａｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ　ｈａｎｓｅｎｉ
ｉ）エンドミコプシス　オペテンシス　　ＣＢＳ−２５
０８ＣＢ５−２５０８（Ｅｎｄｏ　　ｏｖｅｔａｎｓｉ
ｓ）ジオトリクム　フラグランス　　ＣＢ５−１５２・
２５（Ｇａｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｆｒａｇｒａｎｓ）クル
イベロミセス　ラクティス　　ＩＦＯ−１０９６（Ｋｌ
ｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　　１ａｃｔｉｓ）スポリディ
オデラス　ゾヨンソニ　　ＩＦＯ−６９０３（Ｓｐｏｒ
ｉｄｉｏｂｏｌｕａ　ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）トルロプシ
ス　マグノリエ　　ＩＦＯ−０７０５（Ｔｏｒｕｌｏｐ
ｓｉｓ　ｍａｇｎｏｌｉａｅ）トリコスポロン　セリセ
ウム　　ＩＦＯ−１２０１（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ
　ｓｅｒｉｃｅｕｍ）ディポダスカス　マグヌーシ　　
ＣＢ５−１０７．１２（Ｄｉｐｏｄａｓｃｕｓ　ｍａｇ
ｎｕｓｉｉ）エンドミセス　オペテンシス　　ＩＦＯ−
１２０１（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ　　ｏｖｅｔｅｎｓｉｓ
）Ｌ　−ＤＯＰＡ及びその誘導体とアミノ供与体に、こ
れらの微生物を作用せしめる方法は、本微生物を栄養培
地で培養する際にＬ−ＤＯＰＡ及びその誘導体に対応す
るα−ケト酸とアミノ供与体を添加し、培養しながら反
応させてもよいし、本微生物を、培養した後微生物の培
養物、菌体又は菌体処理物、Ｌ−ＤＯＰＡ及びその誘導
体に対応するα−ケト酸とアミノ供与体に接触反応せし
めても良い。

上記微生物を培養するための培地としては通常の炭素源
、窒累詠、無機イオンを含有する通常の培地である。更
にビタミン、アミノ酸等の有機微量栄養素を添加すると
望ましい結果が得られる場合が多い。

炭素源としては、グルコース、シュクロース等の炭水化
物、酢酸等の有機酸、アルコール類、その他が適宜使用
される。璽素源としては、アンモニアガス、アンモニア
水、アンモニウム塩、その他が用いられる。無機イオン
としては、マグネシウムイオン、燐酸イオン、カリイオ
ン、鉄イオンその他が必要に応じ適宜使用される。培養
は好気条件下にｐＨ５，０から８．５、温度を１５℃か
ら３５°Ｃの適当な範囲に制御しつつ１ないし３日間培
養を行なう。本微生物を用いて、培養中にＬ−ＤＯＰＡ
及びその誘導体に対応するα−ケト酸とアミノ供与体を
添加して反応を行なわしめるには、上記のｐＨ。

温度にて培養すれば良い。また、Ｌ−ＤＯＰＡ及びその
誘導体に対応するα−ケト酸とアミノ供与体は培養の開
始時に添加してもよいし、培養途中に添加してもよい。

本微生物の培養物、菌体又は菌体処理物乞、水性媒体中
にてＬ−ＤＯＰＡ及びその誘導体に対応するα−ケト酸
とアミノ供与体に作用せしめるには、該培養物、菌体又
は画体処理物、及びこれらの固定化物をＬ−ＤＯＰＡ及
びその誘導体に対応するα−ケト酸とアミノ供与体を含
む水性媒体に溶解、又は！ｖ！濁せしめ、各水性媒体を
ｐＨ７，０から９．０、温度を２０°Ｃから５０℃の適
当な条件にｕ１節しつつ漸時静置又は攪拌すればよい。

尚、Ｌ−ＤＯＰＡ及びその誘導体く対応するα−ケト酸
とアミノ供与体からＬ−ＤＯＰＡ及びその誘導体を生成
せしめる反応において、Ｌ−ＤＯＰＡ及びその誘導体に
対応するα−ケト酸の使用量は特に制限されないが、通
常バッチ法で行なう場合には０．０１からＩＭ好ましく
は０．０５から０．５　Ｍ程度である。他方の反応基質
であるアミノ供与体はＬ−アスパラギン酸、Ｌ−グツ［
タミン酸、Ｌ−アラニン、Ｌ−インロイシフ等が用いら
れるが本発明のアミノ供与体になるもの７′あれば何を
用いてもかまわない。アミノ供与体の量は通常上記α−
ケト酸の１から３倍Ｍ程度が用いられる。

また菌体としては、菌体な含む培養液をそのまま用いて
もよい。また、これを一旦培養液よシ分離して洗滌また
は洗滌せずに使用してもよい。菌体処理物としては、機
椋的摩砕菌体、超音波にて処理した菌体、凍結乾燥菌体
、アセトン乾燥菌体、リゾチウム等の酵素で処理した菌
体、界面活性剤、トルエン等で処理した菌体、菌体の蛋
白画分、これらの固定化物又はその他が適宜用いられる
。

このような菌体な得る方法は前記の培地および培養方法
がそのまま採用できる。

Ｌ−ＤＯＰＡ及びその誘導体の定量は高速液体クロマト
グラムを用いる方法により行った。

（実施例１） グルコース０．５９／ｄｔ　、酵母エキス１．０　ｇ／
ｄＬ、滅グトン１．　Ｏｇ／ｄｔ　、　ＫＨ２ＰＯ４０
，１ｇ／ａｔ、　Ｋ２ＨＰＯ４０、３ｆ！／ｄｔ　ＳＭ
ｇＳＯ４・６Ｈ２００，０５，！ｉ’／ｄｔ、　ＦｅＳ
Ｏ４’７Ｈ２００，０ＯＩＪ／ｄｔ、　ＭｎＳＯ４’４
Ｈ２０ｏ、ｏｏ１ｇ／ａＬを含む培地（ｐＨ６，０）を
５００ｍ１容フラスコに５Ｑｍｌ入れ１１５°０で１５
分間殺菌した。これにブイヨン寒天培地で３０°０２４
時間培養した第１表に示す菌株をそれぞれ１白金耳接独
し、それぞれ３０°Ｃ１１６時間振盪培養した。これら
の培養液より、菌体なそれぞれ遠心分離によシ採取し、
培養液と同量の生理食塩水で１回洗浄し、菌体を集めた
。こレラの菌体を３，４−ジヒドロキシフェニルピルビ
ン酸２ｇ、Ｌ−アスパラギン酸２９、亜硫酸ナトリウム
０．２９を含む０．０５　Ｍリン酸・ｑツファー（ｐＨ
８，０）　１００ｄにぞれぞれ５９／ｄｉになる様に添
加し反応容器を蟹累ガスで置換したのち３０°Ｃ１２４
時間反応した。その結果を第１表に示した。

霧　　−−ア　　の　　。　　ト　　の　　ヘ　　ト　
　膿−〇　　ロ　　０　　０　　　ｃｉ　　　ｃｉ　　
　６　　、−ｉ　　　。ｃｉ（実施例２） 実施例１と同様に培養し、実施例１と同様に調整し念エ
ンテロバクタ↑、エアロデネスＡＪ−２６４３Ｆ’ＥＲ
ＭＰ−０２７６４の菌体を、３，４−ジヒドロキシフェ
ニルピルビン酸２ｇ、第２表に示し九アミノ供与体（３
，４−ジヒドロキシフェニルピルビン酸）１．５倍モル
）及び、亜硫酸ナトリウム０．２９／ｌｉｔを含む０．
０５　Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）１００ｍｌに
それぞれ５９７ｄｔになる様に添加し、反応容器を窒素
ガスで置換した後３０°０２４時間反応した。

その結果を第２表に示した。

第　　２　　表 （実施例３） 実施例２と同様に調整したエンテロバクタ−、エアログ
ネスＡＪ−２６４３、ＦＥＲＭ−Ｐ−０２７６４を第３
表に示した。α−ケト酸１，９．Ｌ−アス・ぐラギンｙ
ｔｇを含む０．０５　Ｍリン酸バッファ（ｐＨ８，０）
　１００ｍ１にそれぞれ５ｇ／ｄｔになる様に添加し、
３０°０．２４時間反応した。その結果を第３表に示し
た。

第　　３　　表 （実施例４） 実施例１と同様の培地に、ブイヨン培地に３０’０２４
１時間生育させたエンテロバクターエアロダネス、ＡＪ
−２６４３、ＦＥＲＭ−Ｐ−０２７６４を１白金耳後種
し、３０℃１６時間培養した。この培養液に３，４−ジ
メトキシフェニルピルビン酸とＬ−アスパラギン酸ヲそ
れぞれ１ｇ／ｄｔになる様に無菌的に添加し、さらに３
０°Ｃにて２４時間培養した。この結果培養液中には０
．６　ｐ／ｄ　ｔの３，４−ノメトキシーＬ−７二二ル
アラニンが生成していた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ３，４−ジヒドロキシフェニルピルビン酸、３，４−ジ
   メトキシフェニルピルビン酸、３，４−メチレンジオキ
   シフェニルピルビン酸、３−ヒドロキシ−４−メトキシ
   フェニルピルビン酸、及び３−メトキシ−４−ヒドロキ
   シフェニルピルビン酸から成る群より選ばれる１以上と
   アミノ基供与体とから、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェ
   ニルアラニン又はその誘導体を生成する能力を有するア
   シネトバクター属、アグロバクテリウム属、ベイジェリ
   ンキア属、シトロバクター属、エンテロバクター属、エ
   ルビニア属、フラボバクテリウム属、クレブシエラ属、
   クルイヘラ属、ミコプラナ属、プロテウス属、ビブリオ
   属、キサントモナス属、デバリオミセス属、エンドミコ
   プシス属、ジオトリクム属、クルイヘロミセス属、スポ
   リディオボラス属、トルロプシス属、トリコスボロン属
   、ディボダスカス属、エンドミセス属に属する微生物を
   水性媒体中で３，４−ジヒドロキシフェニルピルビン酸
   、３，４−ジメトキシフェニルピルビン酸、３，４−メ
   チレンジオキシフェニルピルビン酸、３−ヒドロキシ−
   ４−メトキシフェニルピルビン酸、及び３−メトキシ−
   ４−ヒドロキシフェニルピルビン酸から成る群より選ば
   れる１以上とアミノ基供与体に作用させ、３，４−ジヒ
   ドロキシフェニルアラニン又はその誘導体を生成せしめ
   ることを特徴とする３，４−ジヒドロキシフェニルアラ
   ニン又はその誘導体の製造方法。