JPS62181281A - 大環式抗生物質及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は新規な大環式化合物、特にソランギシン（ａ
ｏｒａｎｇｌｅｉｎ）　Ａ、ソランギウムφセルロスム
（Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ　ｃ＠ｌｌｕｌｏｓｕｍ）種の新
規な微生物を使用する前記化合物を製造するための発酵
法、及び新規な微生物それ自体に関する。この発明はさ
らに、前記新規化合物を含有する医薬組成物、抗生物質
としての該化合物の使用を含む医療的方法、及び医薬組
成物の製造のための該化合物の使用に関する。

以下令白 〔発明の概要〕 この発明は特に、次の式（Ｉ）、 （式中、Ｒ４は水素原子又はヒドロキシル基であシ、そ
してＲ２はヒドロキシル基又はβ−グルコピラノシルオ
キシ基である、） で表わされる化合物、並びにそ／ｌｓ螺和物及び塩、特
にその医薬として許容される塩に関する。

キシルＣ−原子における置換基の配置が式（Ｉ）の結晶
化合物ノランギシンＡ　（Ｒ１＝ｏａｔ　Ｒ２＝　ＯＨ
）のＸ−線構造解析によシ確認され、そしてＣａｈｎ　
。

Ｉｎｇｏｌｄ及びｐｒｅｌｏｇのシーケンスルールによ
シ決定された。Ｒ７がヒドロキシル基である場合、ｃ−
２２原子はＳ−配置を有する。

〔具体的な説明〕

この発明は特に、発酵によシ得られそしてソランギシン
（ｓｏｒａｎｇｉｃｉｎ）　Ａ　（Ｒ１０Ｈ，Ｒ２−Ｏ
Ｈ，Ｓ　−２２：Ｓ）と命名される式（Ｉ）の生成物、
並びにンランギシンＢ　（Ｒ，−Ｈ，Ｒ２−０Ｈ）、ソ
２ンギオシド（ｓｏｒａｎｇｉｏｓｉｄ＊）Ａ　（ＡＩ
＝ＯＨ＋Ｒ２＝＝β−グリコピ２ノルオキシ基、Ｃ−２
２：Ｓ）、及びソランギオシ）’　Ｂ　（Ｒ４＝＝Ｈ，
Ｒ２＝β−グリコピラノシルオキシ基）を含んで成る二
次的生＊＊ａ関する。

この発明の他の好ましい対象はン２ンだラム・セルロス
ム種の寄託されている微生物であシ、この微生物は後に
記載され、そして発酵による主成分ソランギシンＡの製
造及び上記の二次成分の製造のために使用される。

離され傅る。

塩は好ましくは式（Ｉ）の化合物の医薬として許容され
る塩又は非毒性塩である。これらの塩は特に適当なアル
カリ金属塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩、
又はアルカリ土類金属塩、例えばマグネシウム塩もしく
はカルシウム塩、そしてさらに亜鉛塩又はアンモニウム
塩であシ、これらには有機アミンと共に形成される塩、
例えば非置換のもしくはヒドロキシ置換されたモノ−、
シーもしくはトリーアルキルアミン、例えばジエチルア
ミン、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリエチ
ルアミン、Ｎ、Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエ
チル）アミン、トリス（２−ヒドロキシエチル）アミン
もしくはＮ−メチル−Ｄ−グルカミンと共に形成される
塩が含まれる。医薬として許容されない程、例えば難溶
性塩及び／又は容易に結晶化する塩を単離及び精製のた
めに使用することができる。

式（Ｉ）の化合物、特に発酵によシ得られる主成分であ
るソランギシンＡ１及びその医薬として許容される塩は
、医薬及び動物薬において丈用するための効果的な抗生
物質である。これらの活性は球菌、細菌及びウィルスに
対して向けられる。抑制可能なウィルスは特に複製のた
めに逆転写酵素を必要とするウィルス（レトロウィルス
）である。

例えば、インビトロ寒天稀釈法（Ｈ，Ｍ。

Ｅｒ１ｃｓｓｏｎ及びＳ、Ｃ，５ｈｅｒｒｉａ、　Ａｃ
ｔａ　Ｐａｔｈ、Ｍｉｃｒｏｂ。

５ｃａｎｄ、　５ｅｃｔｉｏｎ　Ｂ、　５ｕｐｐ１．　
！　２１’Ｌ　１−９０　＋１９７１　）によシ見出さ
れたＭＩＣ（最小阻止濃度）値は、好気性、グラム−陽
性及びグラム−陰性球菌、例えばスタフィロコッカス・
アラレラム（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ−ａｕｒａ
ｕｓ）、ナイゼリアＮ　ｊ”ノルホエアＱセリ５ａｅｒ
ｉ２　ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、Ｎ、メニンギチディ
ス（Ｎ、ｍｅｎｉｎ　ｉｔｉｄｌｇ　　、及びストレプ
トコッカスｓｐｐ・（」μｍｍ脱臼見見８１１ＪＩ）に
ついては０．０１〜２μμの範囲であり、そしてヘモフ
ィルス・イン７　＃　ｘ　：ｙ　ｆ　（小憇四夾Ｕ山り
μ凹型駐す、シュードモナス・アエルギノｆ　（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｓ聾れ社規り腸内細菌、例えばニ
ジエリシャ・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａμ）Ｉｌ　
）、クレブシーラ・ニューモニア［有］ｌｏｂｍｉｅｌ
ｌａｐｎｅｕｍｏｎｌａ＊）、プロテウス、５ｐｐ（Ｐ
ｒｏｔｅｎａ　！ＩＬ、）、エンテロバクタ−・クロー
カー（Ｅｎｔ＠ｒｏｂａｅｔ＠ｒｃｌｏａｃａｅ）、セ
ラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｅｅ
ｓｃｅｎｓ）　、又は嫌気性菌、例えばバクテロイデス
・７ラギリ（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉ
ｍ）もしくはクロストリジウム・ノ量−フインダンス（
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｉｎｇ＠ｎｓ）につ
いては約０．０１〜１６μμである。ミコバクテリウム
、例えばＭ。

ラベルクロシス（Ｍ、ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及び
異型ミコバクテリウムについては０．５〜８μμの範囲
のＭＩＣ値が見出された。

ヒト多形核白血球及びスタフィロコッカス・アウレウス
（Ｓｔａｐｈｙｌｏｅｏａｅｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　５
ｔｒａｉｎ　Ｗｏｏｄ４６におけるインビトロ試験にお
いて、ンランギシンＡは細胞内に存在する細菌、例えば
スタフィロコッカスに対して効果的である。この物質は
白血球内で殺細菌活性を有する。

レトロウィルスに対する式（Ｉ）の化合物の抗ウィルス
活性の証明はインビトロ試験及びインビゲ試験によシ、
シかし特にインビトロ試験によシ示され、この試験にお
いてはこの化合物による逆転写酵素の阻害が定量的に決
定される。

ポリＡ−オリゴ（ｄＴ）上で放射性ラベルされたＴ’ｐ
ｐを逆転写酵素とハイブリダイズせしめる。潜在的放射
能を測定し、これが逆転写酵素の活性の参照として役立
つ。

式（Ｉ）の化合物のより５ｏが異る濃度でのこの試験系
においてこれらを用いて決定される。

ソランギシ／Ａはモロニー・ネ／ｌ”　ミ（Ｍｏｌｏｎ
＠ｙＭｕｒｉｎｅ）白血病ウィルスの逆転写酵素に対し
て活性であシ、■Ｎの逆転写酵素に対するＩＤ５ｏ（Ｒ
Ｔ活性を５０％阻害する量；Ｗｕ等、Ｐｒｏｅ、　Ｎａ
ｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、、６９，３８２０　（Ｉ９７２）
の方法〕は約７μμである。

式（Ｉ）の化合物は、ソランギウム・セルロスム（Ｓｏ
ｒａｎｇｌｕｍ　ｃｅｌｌｕｌｏａｕｍ）のＳｏ　Ｃｓ
　１２株（ＮＣｌＢ１２１３４　）又は該株由米の式（
Ｉ）の化合物を生産する変異株を、炭素及び窒素源並び
に必須無機塩を含有する培地中で、約２０℃〜４０℃の
温度範囲においてそして約４．０〜８．０のｐＨ範囲に
おいて、好気的条件下で培養し、そして所望によシ、式
（Ｉ）の生じた化合物を水和物として単離し、そして得
られた化合物を塩にそして／又は得られた塩を遊離化合
物にもしくは他の塩に転換することを含んで成る方法に
よシ製造される。

フランギウム・セルロスム種の微生物Ｓｏｃ・１２は、
メキシコ、ユカタン半島、キスカレット（Ｘｃａｒｅｔ
）地域の土壌サンプルから得られた。これは、ミコバク
テリウムｓ（ｍｙｘｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ソランギ
ウムーセルロスム（Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ　ｃｏｌｌｕｌ
ｏｓｕｍ）の株として分類することができる。

菌株Ｓｏ　ａｓ　１２は、１９８５年８月１日に、英国
。

スコツトランド、アバーディーン（Ａｂｅｒｄｓ＠ｎ）
のＴｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
ｓ　　ｏｆ　　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　　ａｎｄＭａｒ
ｉｎｅ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｌｔｄ　（ＮＣＩＤ）に１
．［ＮＣＩＢ　１２１３４として、特許手続上の微生物
の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約に基いて寄
託された。この寄託当局によ、９１９８５年８月１２日
生存証明書が発行された。

Ｓｏ　Ｃｌ　１２株の単離及び記載 スタン（Ｓｔａｍ）　２１寒天［：　ｏ、　１％　Ｋ２
ＨＰＯ４，０，１４ＫＮＯ３，０，１％　ＭｇＳＯ４・
７Ｈ２０，０，０１１ＭｎＳＯ４・７Ｈ２ｏ。

００ｌｃＩｂＣａＣ２２・２Ｈ２０，０，０２％Ｆ＊Ｃ
１５、標準微量元素溶液（例えば、２０ｍ９／ｌずつの
Ｎａ２ＭｏＯ４’　２Ｈ２０ｒＮａ２Ｂ４０７−１０Ｈ
２０ｔＭｎＳ０４−Ｈ２Ｏ及びＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏから
成る）、０．００２％酵母ニーＩＦ　ス（テ４７　コ）
、１％寒天、２０ｒｎ９／Ａ’シクロヘキシミド（アク
チジオ／）〕上の戸紙上に土壌サンプルを置き、そして
３０℃にて３週間インキュベートした。

子実体（ｆｒｕｌｔｉｎｇ　ｂｏｄｉ＠ｓ）を有する遊
走細胞（ｓｗａｒｍ　ｃｅｌｌ）コロニーをスタン２１
寒天上の戸紙上で再度インキュベートした。アンモニア
の５％水溶液を伴う通気によりアメーバ−を除去した。

次に、　ＥＢＳ溶液（０，５％ｌＪプシン分解カゼイン
ペプトン（メルク、ダルムスタット、独）、０．５チプ
ロテオースペプトン（ディフコ）、０．１％肉エキスに
グトン（メルク）、０．１％酵母エキス（ディフコ）；
オートクレーブ殺菌〕中の子実体を、ＡＢ−１抗生物質
溶液（２０〜クロラムフエニコール、３０■硫酸ストレ
プトマイシン、２５７ダ塩酸テトラサイクリン、２０ｍ
９セファロチ／；５０ｍＡ！の水に溶解し、そしてｐ過
により無菌化したもの）と共に４℃にて一夜保持し、そ
して次にｖｙ／２寒天〔０，５チノ々ン酵母（湿重量基
準）、０．１１　ＣａＣｌ２−２Ｈ２０，１，５％　Ｍ
天、ｐＨ７，２）上にストリークした。生ずる純粋な遊
走細胞コロニーを同じ培地上でさらに培養し、そしてス
タン２１寒天上の戸紙上で出発単離体との同一性につい
て試験した。

以下７賀白 栄養細胞は丸形の先端を有する円筒状枠形であり、はと
んどが約１μｍの幅及び３〜６μｍの長さを有する。位
相差顕微鏡のもとてこれらは暗く現われる。これらはブ
ライディング（ｇｔｔｄｔｎｇ）によシ運動する。多く
の栄養培地上で例えば無機塩寒天（スタン２１寒天）上
のＰ紙上でこの生物は多くの子実体を形成する。子実体
はさび色の・やラドに類似しており、そして直径２０〜
３０μｍの硬い壁を有する相互偏平化による多面体構造
又は球形構造の実質的に多数の胞子のう（ａｐｏｒａｎ
ｇｉｏｌｅ）から成る。

胞子のう（ｓｐｏｒａｎｇｉｏｌ＋）　ｆ’ｉ、栄養細
胞と類似の形状及び大きさを有するがしかし屈折しゃす
い桿状の永久細胞である粘体胞子（ｍｙｘｏｓｐｏｒｅ
）を収容する。

５ａｃｓ　ｌ　２株は自然に変異株を形成することがで
き（自然変異株）、又は天然法と同様に式（Ｉ）の抗生
物性化合物を生産する人工変異株を調製することができ
る。

このような変異株は、化学的手段により、例えばある種
のグアニン誘導体、例えばＮ−メチル−Ｎ′−二トロー
Ｎ−ニトロソグアニジンで、又はアルカリ金属亜硝酸塩
例えば亜硝酸す）　ＩＪウムで処理することにより、あ
るいは物理的手段により。

例えば紫外線、Ｘ−線又は放射線の照射のごとき高エネ
ルギー照射により調製することができる。

培養例好適な培地は、炭素及び窒素源、並びに必須無機
塩を含有しなければならない。適当な炭素源の例として
資化性炭水化物、例えばＤ−グルコース、Ｄ−キシロー
ス、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース、マルトース
、マルトトリオース及び澱粉が挙げられる。適当な窒素
源はアミノ酸、ペプチド及び蛋白質、並びにその分解生
成物、例えばペプトン又はトリプトン、そしてさらに肉
エキス、穀粉、例えばトウモロコシ又は小麦、豆類、特
に大豆、例えば綿の種子、アルコール製造からの蒸留残
層、酵母エキス等、並びにアンモニウム塩及び硝酸塩で
ある。必須無機塩として、栄養溶液は、アルカリ金属又
はアルカリ土類金属、例えばナトリウム、カリウム、マ
グネシウム、カルシウム、鉄、亜鉛、マンガン、モリブ
デン及び銅の塩化物、炭酸塩、硫酸塩及びリン酸塩を含
有することができる。培養は液体培地中で、最も好まし
くは水性培地中で行われる。

特に好ましい培地は、炭水化物源、例えば、そレソレ０
．１％のグルコース、マルトース、マルトトリオース、
澱粉又はセルロースが富化されたＭＤＩ培地［０，３％
）リプシン分解カゼインペプトン（メルク）、０．０５
％Ｃａ　Ｃｌ　２・２１１２０．０，２嗟ＭｇＳＯ４・
７Ｈ２０〕である。

他の有用な液体培地は、Ｏ１％カゼインＲプトン、０．
０５％ＣａＣｚ２’２Ｈ２０，０，２％ＭｇＳＯ４・７
Ｈ２０，０，４％コーンステイーフッ母ウつ−又ａｈウ
モロコシ蛋白質を含有する。菌株にまた、０゜１．５係
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０，８ｔｒｇ／　ｌ　ＦｅＣｔ、’
６Ｈ２０，０２チＫＮＯ３，０，０２５％　Ｋ２ＨＰＯ
４，０，５％グ／Ｌ＝　コース・Ｈ２Ｏ，及び０．１５
％ｃｃｔ２・２Ｈ２０から成る明確例された培地中で培
養することもできる。００１〜０．０５％の被プトンの
添加が均一な増殖、改良された細胞収量、及び増加した
抗生物質生産をも；ｔらす。

培養は、栄養溶液の１回もしくは反復添加により回分的
に又は栄養溶液の連続添加により連続的に行うことがで
きる。

前培養物（接種物）を例えば前記の培地のいずれかで調
製し、１日又は２日間の発酵の後好ましくＨｌ　：　ｌ
　Ｏの稀釈率をもって前記前培養物を実際の主培地に接
種することにより、幾つかの段階で培養するのが好まし
い。

この前培養物は例えば一連の前培養から得られる。これ
らの内の最初の培養物は問題の菌株を固体又は液体の栄
養培地、例えば寒天子ＭＤＩ＋０．１％の澱粉上ス１４
日間培養することによシ得られる。

次に、栄養溶液にこの培養物を接種し、そして数日間、
例えば４〜５日間インキュベートする。この栄養溶液は
所望により他の栄養溶液、例えば■封＋０．１％澱粉に
、あるいはさらに他の栄養溶液に約３　ｖ　／　ｖ％の
稀釈率で接種するために使用することができる。

発酵の経過は、培養物のｐＨ（発酵中に約７．２から約
６．０〜６．５に・低下し、そして次に約７．５〜８．
０に上昇する）、又は光学濃度（特定の菌株の増殖址を
測定するための参照標準である）を測定することにより
、生成したバイオマスの乾燥重量に基イて重量分析的に
、薄層クロマトグラフィーにより、又は培養Ｆ液中に存
在する成分の抗生物情性を測定することにより、分析的
にモニターすることができる。

発酵液からの式（Ｉ）の化合物の、特に主成分であるン
ランギシンＡの単離は、物質の化学的、物理的及び生物
学的性質に従って、それ自体既知の方法により行われる
。個々の単離段階及び培地中の抗生物質の濃度の決定は
、例えばシリカゲル上での薄層クロマトグラフィー（例
えば塩化メチレン／メタノールで溶出）により、及び／
又は種々の微生物、例えばスタフィロコッカス・アウレ
ウス（Ｓｔｉｐｈｙｌｏｃｏｃｅｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　
）に対する活性により、及び／又は逆転写酵素の阻害に
より行うことができる。

粗発酵液から式（Ｉ）の化合物を単離するために２つの
方法が適当である。

ａ）発酵液をマクロポーラス非イオン性吸着樹脂、Ｉ／
１）えば芳香族性の合成樹脂１例えばポリスチレンを基
礎とした樹脂、例えばスチレン／ジビニル村ンゼンコポ
リマーと共に攪拌する。これらの樹脂は種々の一般的な
統計的データ、例えば孔容積、比表面積、平均孔直径、
最も頻繁な孔直径、孔サイズ分布、ビーズサイス゛分布
等により特徴付けられ得る。

適当な吸着樹脂は約０．５〜４．５ｍｔ／Ｃ１の孔容積
、約１００〜１０００ｍ２／７の比表面積、及び約４〜
１３０　ｎｍの平均孔直径を有し、そして登録商標ＡＭ
ＢＥＲＬＩＴＥ　ＸＡＤ　−１、ＸＡＤ　−２、ＸＡＤ
　−４、ＸＡＤ　−１１８０及びＥ　Ｒ−Ｌ　８０　（
Ｒｏｈｍ　＆Ｈａａａ製）；ＤＩＡＩＯＮ　ＨＰ　−１
０、ＨＰ−２０、Ｉ　Ｐ　−２１、ＩＭＦ−３０、ＨＰ
−４０及びＨＰ−５０（三菱製）；ＤＵＯＬＩＴＥ　Ｓ
　−８６１、Ｓ−８６２、Ｓ−８６３及びＳ　Ｅ　−８
６６（Ｄｉａ−Ｐｒｏｓｉｍ　Ｍ）　；　ＩＭＡＣ８ｙ
ｎ４６及びＳｙｎ　７２　（Ａｋｚｏ　Ｃｈｅｍｉｅ初
；　ＫＡＳ置Ｓ−１１１，８−１１２及びＳ−１１４（
Ｍｏｎｔ５−１１４（製）　；　ＬｌｉＫＶＡＴＩＴ　
ＯＣ−１０３１（Ｂａｙｅｒ製）：並びにＲＥＬＩＴＥ
　ＡＤＳ（Ｒｅａｉｎｄｉｏｎ製）のもとに市販されて
いる。

吸着樹脂から発酵液を例えば篩別によシ分離した後、樹
脂を水で洗浄し、そして次に、吸着樹脂に・対して不活
性な増加する量の有機溶剤、例えば水／メタノールの溶
混物により溶出する。式（Ｉ）の化合物は８０〜１ｏｏ
ｓメタノールにより溶出される。溶出液を真空濃縮し、
そして例えば変法ｂ）に記載するようにしてＨＰＬＣに
より分離する。

ｂ）発酵液をバイオマスから、例えば濾過又は遠心分離
により分離し、そしてｉｊ液を水と非混和性の又は水と
実質的に非混和性の溶剤、例えば塩化メチレン、クロロ
ホルム、又は好ましくは酢酸エチルにより抽出する。有
機相を真空蒸発せしめ、粗抽出物を得る。この粗抽出物
を２種類の非混和性有機溶剤、例えばメタノール／ヘプ
タンからなる２相系中で分配する。発酵生成物、特に式
ＣＩ）の抗生物質は極性相中に濃縮される。極性溶剤を
蒸発により除去した後、残渣を希アンモニア溶液中に溶
解し、そして水非混和性浴剤、例えばジエチルエーテル
で洗浄する。揮発性のアンモニアを真空除去し、そして
水相を有機酸、例えば蟻酸又は酢酸で酸性化した後、水
非混和性の又は実質上水非混和性の上記溶剤の１つ、レ
リえば塩化メチレンにより抽出する。次に、得られた抗
生物質を逆相クロマトグラフィーにより精製して幾つか
の両分を得る。これらはソランギオシドＡ及びＢを混合
物として又は純粋な形で含む両分、及びソランギシンＡ
及びＢを混合物として又は純粋な形で含む画分である。

対応する両分をＨＰＬＣで分離することにより個々の成
分ソランギオシドＡ及びＢ並びにソランギシンＢが得ら
れ、他方主成分であるソランギシンＡは対応する画分か
ら結晶の形で得られる。

主成分であるソランギシンＡはまた、これらの既知の分
離法の他の変法によっても、例えば他の溶剤又は溶剤混
合物を使用し、あるいは他のクロマトグラフ法を用いる
ことによっても得ることができる。

式（Ｉ）の化合物の塩はそれ自体既知の方法により得る
ことができる。すなわち、例えば金属化合物、例えば適
当な有機カル？ン酸のアルカリ金属塩、例えば２−エチ
ルヘキサン酸のナトリウム塩、又は無機アルカリ金属塩
もしくはアルカリ土類金属塩、例えば炭酸水素ナトリウ
ムで処理することにより、あるいはアンモニア又は適当
な有機アミンで処理することにより、好ましくＶ′ｉ理
論量又は小過剰量の塩形成化合物を用いて、式（Ｉ）の
化合物の塩を形成することができる。塩は常法に従って
遊離化合物に転換することができ、金属塩及びアンモニ
ウム塩は例えば適当な酸で処理することによシ遊離化合
物に転換することができる。

立体異性体、特にジアステレオアイソマーの混合物は、
それ自体既知の方法により、例えば分別結晶化、クロマ
トグラフィー等により個々の異性体に分離することがで
きる。

ラセミ体はそれ自体既知の方法により、例えば光学対掌
体を例えば光学活性酸もしくは塩基又は特異的微生物と
の反応によりノアステレオアイソマーに転換した後に、
分割することができる。

この発明はさらに、工程の任意の段階において得られる
中間体を出発材料として使用しそして残りの段階を実施
する変法、又は工程を任意の段階で中断し、又はこの発
明の方法により得られる化合物を工程東件下で調製しそ
してその場できらに処理する変法にも関する。

この発明の医薬として許容される化合物は、例えば、式
（Ｉ）の化合物の有効量を好ましくは有意量の無機又は
有機の固体又は液体の医薬として許容される賦形剤との
混合物として含んで成る医薬組成物の製造のために使用
することができる。この発明はさらに、このような医薬
組成物、並びにその製造及び使用に関する。

この発明の医薬組成物は非経腸的、例えば静脈内又は筋
肉内投与のために、そして必要な場合にはさらに経口投
与又は局所投与のために適当である。

式（Ｉ）の化合物は、汐１１えば、静脈内投与のための
注射用組成物の形で、又は注入溶液の形で使用される。

このような溶液は好ましくは、活性成分を単独で又はマ
ンニトールのごとき担体と共に含んで成る凍結乾燥調製
物から、使用に先立って調製され得る等張水溶液懸濁液
である。経口投与のための医薬組成物は無菌化すること
ができ、そして助剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤及
び／又は乳化剤、溶解剤、浸透圧調製塩、吸収促進剤及
び／又は緩衝剤を含有することができる。所望により他
の有用な薬学的物質、１ｆｌＪえば他の活性成分を含有
することができるこの発明の医薬組成物は約０．１−１
００％、好ましくは約１−１００裂の活性成分を含有す
る。

医薬組成物はそれ自体公知の方法により、例えば薬理学
教科Ｊに記載されている常用の溶解又は凍結乾燥法によ
Ｉ）製造される。

ＪＩ−Ｊ途 式（Ｉ）の化合１吻、及びぞｑ、ｚｙｇ和物又は医薬と
して許容される塩は、ヒト又は動物体の療法的処置のだ
めの医薬組成物の形で抗生物質として、し１１えばグラ
ム−陽性又はグラム−陰性細菌、レリえばナイゼリア・
ゴノルホエア（Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｏ
ｅａｅ）もしくけメニンギチディス（ｍｅｎｉｎｇｉｔ
ｌｄｉａ）、スエンテロコッカス（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃ
ｃａｅ）を包含するストレプトコッカス（５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ　）、ヘモフィルス・インフルエンザ（
Ｈａｅｍｏｐｈｌｌｕｓ　１ｎｆｌｕｅｎｔａｅ）、シ
ュードモナス自アエルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａｅ　）　、又は嫌気性病原体、例
えばバクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄ
ｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉａ）又はクロストリシアｓｐｐ　
、（５ｌｏｓｔｒｌｄｉａ　＠ｐｐ、）により惹起され
る感染、細胞例えば白血球内に生息する細菌、例えばス
タフィロコッカス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｅ）も
しくはリステリア（ｌｉｓｔｅｒｌａａ）により惹起さ
れる感染、又は異形ミコバクテリア。

例えばミコバクテリウム・イントラセルラ・アビウム（
Ｍｙｃｏｂａｅｔｅｒｌｕｍ　１ｎｔｒａｃｅ’１ｌｕ
ｌａｒｅ　ａｖｉｕｍ）により惹起される感染の治療の
ための抗細菌性抗生物質として使用することができる。

この発明の化合物はまた、抗ウイルス性抗生物質として
、特に、逆転写酵素活性を有するウィルス、例えばレト
ロウィルス（ＡＩＤＳを生じさせるＨＴＬＶ　［１を含
む）、又はヘルペスウィルス等により惹起される感染の
治療のために使用される。

ＨＴＬＶ　［１（さらにＬＡＬ　ｌ又はＨＩＶとも称さ
れる）による感染に加えて式（Ｔ）の化合物により治療
され得る他の感染ｄＨＴＬＶ　Ｉ　、　ＨＴＬＶ■、及
びＨＴＬＶＩＶ（ＬＡＹ■とも称される）による感染で
ある。

感染の性質、重症度及び持続期間、患者の状態、及び投
与方法に依存して、約０．３ｇ〜ｉｏ、ｏｙの日用量が
皮下に、節円に、静脈内に、経口的に又は吸入により、
７０ゆの体重を有する“ヒト又は温血動物の治療のため
に投与されるであろう。

他の用途は植物保護の分野に存在し、例えばグリーンハ
ウス植物の細歯病を抑制するため、及び感染を受けた木
の保護のために使用される。このような用途のためには
エーロゾルが適当である。

次に、ｆｌｌによりこの発明をさらに具体的に説明する
。

以下全白 例　　１゜ ＭＤＩ培地〔０，３％トリゾシン分解カゼインペプトン
（メルク、砂製）、０．０５　％　ＣａＣ４２”７Ｈ２
０，０，２チＭｇＳＯ４・７Ｈ２０及び０．１チ澱粉〕
を含有する約１４日培養の寒天プレートからの、１００
ｍｊの液体ＭＤ　Ｉ培地中５ｏｃｅに株細萌を３０℃、
１６０ｒｐｎ（Ｉ分間当り回転数）にて旋回テーブル上
でインキュベートする。５日間の培養の後、この培養物
を新たな培地■Ｍに３　ｖ　／　ｖ　％の稀釈率で加え
る。

各場合において前培養物を４日間インキュベートした後
、必要な回数だけ新たな■Ｈ培地に接種することができ
る。このシリーズの最後の前培養物を、ＭＤＩ培譬培液
溶液む４１の他の前培養のための接種物として１０’／
／Ｖ％の稀釈率で使用する。

この前培養物を３０℃にて短時間攪拌しそして弱い空気
流のもとて通気する。２日間のインキュベーションの後
、前培養物の調製のために、この接種物を７０１の発酵
槽に接種する。

ｂ）前培養物の調製 ノやドル攪拌系を有する７０１の発酵槽（ギオバノラ、
モンセイｖＳ、スイスから入手）を使用する。

０．１％澱粉を含むＭＤＩ培地（Ｉ，０ｍ）ａ温度３０
℃攪拌速度３２０　ｒｐｍ、空気の供給０．３　Ｎｍ’
　７時。

酸素分圧の俤は発酵の経過と共に低下し、そして２日後
に１０〜２０％である。ｏＤ６□３：約２゜この前培養
物を無菌条件下で７ｏｏｌの醗酵槽に接種する。

Ｃ）主培養 ｂ）の場合と同じ会社から入手した・やドル攪拌機付き
７００１発酵槽。培地：０．１５％ＭｇＳＯ４−７１１
２０、８ｍ９／ｌ　ＦｅＣｚ３”６Ｈ２０，ｏ、ｏ　５
　％ペプトン、０．２チＫＮ０３．０．０２５チに２Ｈ
ＰＯ４，０，５多グルコース、０．１５％ＣａＣｔ２　
’　２Ｈ２０、ｐｌ−１７，３，最初の攪拌速度１５０
ｒｐｍ、２３時間後１００　ｒｐｍａ発酵終了時の酸素
分圧のチ：ｌｏチ。発酵は４０時間後に完了３発酵終了
後、上清はスタフィロコッカス・アウレウスに対して１
４〜１５ｍ＋の阻止直径を有する。遠心分離により発酵
液からバイオマスを分離する。培養Ｐ液中に抗生物成分
が存在する。すべての工程段階を無菌条件下で行う。

ｄ）培養Ｐ液の処理 培養Ｐ液を酢＋１エチルで抽出する。次に溶剤を蒸発せ
しめ、粗抽出物を得る。この抽出物をヘプタン／メタノ
ールから成る２相系中で分配する。

式（Ｉ）の化合物はメタノール相に濃縮される。メタノ
ールを蒸発除去し、そして残渣を１２チアンモニア水溶
液に溶解する。アンモニア性溶液をエーテルで：；業り
返し洗浄し、そして真空下でアンモニアを除去する。水
相を蟻酸で酸性にし、そして塩化メチレンで抽出する。

抽出物を蒸発濃縮し、そして逆相クロマトグラフィーに
よシ残渣の分離を行う。カラＡ　Ｌａｂｏｅｈｒｏｍ　
ｐＧＣカラム（６７４Ｘｂ（う７ケマチツクから入手）
　；　Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　ＲＰ−１８（２５−４０
ｚｚｍ）（メルク）が充填されている。

溶離液：メタノール／緩衝液６８：３３；緩衝液：水中
０，５％蝦酸、トリエチルアミングー７に調整したもの
。流速：３０ｍ／分。検出：　３１３　ｎｍにおけるＵ
Ｖｒ！に収。次の画分が得られる。

画分１　：　ｔＲ＝３１分におけるビーク：ソランギオ
ゾドＡ＋Ｂ 画分２　：　ｔ、＝４０分におけるビーク：ノランギオ
ゾドＢ 画分３　：　ｔＲ＝５０分におけるビーク：ノランギシ
ンＡ 画分４　：　ｔＲ＝６９分におけるビーク：ソランギシ
ンＢ０ 有機溶剤を除去した後、個々の画分中に存在する成分を
水性緩衝相からジクロロメタン又は酢酸エチルにより抽
出する。

画分１：ンランギオシドＡ及びＢの混合物をＨＰＬＣに
より分離する。Ｌｉｃｈｒｏａｏｒｂ　Ｓｉ　　ｌ　Ｏ
０（Ｉ０μ）（メルク）を充填したカラム２５０×１６
　ｒｍ　（Ｋｎａｕｅｒ）　；　３１３　ｎｍでのＵＶ
吸収によル検出；溶離液：ノクロロメタン／ヘプタン／
イソグロ・９ノール／濃厚緩衝液（０厚緩衝液はメタノ
ール／＠ＭＩ：２混合物をトリエチルアミンで中和した
もの）；流速１８ｍ１／分。ソランギオシドＢは保持時
間ｔＲ＝９．４分で得られ、そしてソランギオシドＡは
保持時間ｔＲ＝１３．８分で得られる０ソランギオシド
Ａ： ＨＰＬＣ：　Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　７Ｃ６Ｈ５（Ｍａｃ
ｈｅｒｅｙ　Ｎａｇｅｌ）を充填したカラム２５０　Ｘ
　ｌ　６　ｍ　（Ｋｎａｕｅｒ）；溶離液：メタノール
／水（６５／３５　）＋０．５％蟻酸；流速：１Ｑｔｎ
ｌ／分；検出：３１７ｎｍにおける吸収；ｔＲ＝２６．
４分。

薄層クロマトグラフィー： シリカケ９ル５１６０Ｆ２５４（メルク）：溶離液（塩
化メチレン／メタノール（８：　２　）　：　Ｒ，＝０
．４４゜Ｃａ：ｌＤ−＋４２．０（ｃ＝０．９．メタノ
ール中）。

ＵＶ（メタノール中）：λｍａｘ　（”ε）　＝　３０
１（４，３４）。

’　　１３Ｃ−ＮＭＲ：表を参照のこと。

画分２：ソランギオシドＢを含有する両分をＨＰＬＣに
より精製する。Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　７Ｃ６Ｈ５（Ｍａ
ｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ　）　　を充填したカラム２
５０Ｘ１６ｔｒｙｓ　（Ｋｎａｕｅｒ）；　　検出：３
３１ｎｍにおけるＵＶ吸収；溶離液：メタノール／水（
７０：３０）＋０．５チ蟻酸；流速：１４ｍ１／分；ｔ
Ｒ＝１０．２分。

以下７を白 ソランギオシドＢ： 薄膜クロマトグラフィー：シリカダル８１６０Ｆ２５４
（メルク）；溶離液：塩化メチレン／メタノール（８：
２）：Ｒｆ＝０．６２゜ 〔α冗２＝＋５．１　（ｅ＝１．８　、メタノール中）
。

Ｕｖ（メタノール中）：λｒｎ＆ｘ（ＩＩε）＝　３０
１（４，４１）。

”Ｃ−Ｎ！ＩＩＩＩＲ：表を参照のこと。

画分３：酢酸エチルから結晶化。

融点：１０５℃〜１０７℃ 〔α几２＝＋６０．９　（ｃ＝０．７　、メタノール中
）。

ＩＪＶ　（ＭｅＯＨ）　：λ　　（Ｉ，１）＝３０１　
（４，３３）。

ａｘ ”Ｃ−ＮＭＲ：表を参照のこと。

ＦＡＢ−ＭＳ（ｎａｇ、　ｔｏｎｓ、　ｘｅｎｏｎ　ａ
ｔ　９　ｋｅＶ　（Ｉｏｎｔｅｃｔ）。

ａｃｃｅｌｅｒａｔｌｏｎ−８ｋＶ、ｐｏｓｔ−ａｃｃ
ｅｌｅｒａｔｉｏｎ　　１１ＫＶ　）：　ｍ／５＝８０
５　ＣＭ−Ｈ）−、８９７（Ｍ−Ｈ＋ｇｌｙｃａｒｏｌ
　）−。

ＥＩ−ＭＳ　（７０ｅＶ、　２４５°）：ｍ／ｅ％＝８
０６ＣＭ＋。

０．３）、７８９（０，６）、７８８（Ｉ゜５）、７７
０（０，８）、３７３（２）、３０３（２，５）、３０
１（３，５）、２４９（４４）、２３１（５）、１９７
（Ｉ５）、１４９（２０）、１３５（２１）、１３３（
２２）、１２１（３５）、１０９（４０）、１０７（４
３）。

１０５（Ｉ００）。

こｔｙｒ４６合功は耕４摩工４−／シ齋ｈス看功吻ぬ形
ｚ”Ｉｓ丘り。

ごル１謬ア右りン勿巧、ｆｉＦｊ＆ＩｔＪ３こと呑Ｚ１
Ｌ分　析： Ｃ４７Ｈ６６０１，ｃ＋〃Ｓρ 理論値Ｃ６８，４３Ｈ８，３？　　０　２３．λ３測定
値Ｃ６８，１１Ｈ８，３５０２３，６１画分４　：　Ｈ
ＰＬＣによるｊｉＲ＃：　Ｎｕｃｌｓｏｓｌｌ　７Ｃ６
Ｈ５（Ｍａｃｈｅｒｅｙ”Ｎａｇｅｌ製）を充填したカ
ラム２５０Ｘ　１６ｍ（Ｋｎａｕｅｒ）　；検出：　３
１３　ｎｍにおけるＵＶ吸収；ｆｒｊ　＃　７ｆ！　：
メタノール／水（７５：２５）＋０．５％蟻酸；流速：
１４ｍｔ／分；稲＝１１．７分。

ソランギシンＢ： （ＣＩ冗２＝＋４９．１（。＝１．６メタノー中）。

ＵＶ（メタノール）：λｍａｘ　”ε）＝３０１（４，
４１）。

′３Ｃ−ＮＩ’ｉ’ＬＲ：衣を参照のこと。

ＦＡＢ−ＭＳ　（ｎ＠ｇ、　ｔｏｎｓ、　ｘｅｎｏｎ　
ａｔ　９　ｋｅＶ（Ｉｏｎｔｅｅｔ）。

ａｅｃａｌｅｒａｔｌｏｎ　　−８ｋＶ、ｐｏｓｔ−ａ
ｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎｌｌｋＶ）：　ｍ／ｚ＝７８９
（Ｍ−Ｈ）−，８８１（Ｍ−Ｈ＋ｇｌｙｅ＠ｒｏｌ　）
−０・ＥＩ−ＭＳ（７０ｅｖ、　２７０’）　：　ｍ／
ｚ％）＝７９０　（Ｍ”、　１）。

７７３（３）、７７２（５）、７５５（２）、７５４（
３）、６４３（Ｉ）、２５０（２０）、２４９（Ｉ００
）、１９７（２２）。

１９１（Ｉ１）、１８１（Ｉ２）、１６９（Ｉ０）、１
６３（Ｉ１）。

１６１（Ｉ１）、１５９（Ｉ１）、１４９（２２）、１
３３（２２）。

１２３（２３）、１２１（２９）、１０７（３１）、１
０５（６１）。

高解像： Ｃ４７Ｈ６６０，。理論値７９０．４６５６；測定値７
９０．４６１８ 以下令白 円の　−ｅＰ　ｃＱｈ閃ト　　　■呻■づ旬＋０フ’６
４Ｊ　’＋５　’ｔ：Ｉ　’ｌｊ　　　　’Ｑ℃℃−ω
−寸り０■の寸　　　む−［Ｆ］ ｃＱへωトドωトのｔ’−ｃｏ寸美 例２ 活性成分として０．５．９のソランギシンＡを含む乾燥
アンプル又はバイアルを次のようにして製造することが
できる。

組成（Ｉアンプル又はバイアル当り） 活性成分　　　　０．５＃ マンニトール　　　　　　０．０５Ｎ 活性成分及びマンニトールから成る無菌水溶液を無菌条
件下で５４のアンプル又は５ａ／ノパイアルに充填し、
こｎを密封し、そして試験する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１は水素原子又はヒドロキシル基であり、
   そしてＲ＿２はヒドロキシル基又はβ−グルコピラノシ
   ルオキシ基であり、そしてＲ＿２がヒドロキシル基であ
   る場合にはＣ−２２原子はＳ−配置を有する） で表わされる化合物、又はその溶媒和物もしくは塩。 ２、Ｒ＿１がヒドロキシル基であり、そしてＲ＿２がヒ
   ドロキシル基であり（ソランギシンＡ）、そしてＣ−２
   ２原子がＳ−配置を有する、特許請求の範囲第１項に記
   載の式（ I ）の化合物。 ３、酢酸エチル溶媒和物である特許請求の範囲第２項に
   記載の化合物。 ４、Ｒ＿１が水素原子であり、そしてＲ＿２がヒドロキ
   シル基である（ソランギシンＢ）か；Ｒ＿１がヒドロキ
   シル基であり、そしてＲ＿２がβ−グルコピラノシルオ
   キシ基である（ソランギオシドＡ、Ｃ−２２：Ｓ）か；
   あるいはＲ＿１が水素原子であり、そしてＲ＿２がβ−
   グルコピラノシルオキシ基である（ソランギオシドＢ）
   、特許請求の範囲第１項に記載の式（ I ）の化合物。 ５、次の式（ I ） （式中、Ｒ＿１は水素原子又はヒドロキシル基であり）
   そしてＲ＿２はヒドロキシル基又はβ−グルコピラノシ
   ルオキシ基であり、そしてＲ＿２がヒドロキシル基であ
   る場合にはＣ−２２原子はＳ−配置を有する） で表わされる化合物、又はその溶媒和物もしくは塩の製
   造方法であって、ソランギウム・セルロスム（Ｓｏｒａ
   ｎｇｉｕｍ　ｃｅｌｌｕｌｏｓｕｍ）のＳｏ　ｃｅ　１
   ２株（ＮＣＩＢ１２１３４）又は該株由来の式（ I ）
   の化合物を生産する変異株を、炭素及び窒素源並びに必
   須無機塩を含有する培地中で、約２０℃〜４０℃の温度
   範囲においてそして約４．０〜８．０のｐＨ範囲におい
   て、好気的条件下で培養し、そして所望により、式（
   I ）の生じた化合物を溶媒和物として単離し、そして得
   られた化合物を塩にそして／又は得られた塩を遊離化合
   物もしくは他の塩に転換することを含んで成る方法。 ６、ソルンギウム・セルロスム（Ｓｏｒａｎｇｉｕｍｃ
   ｅｌｌｕｌｏｓｕｍ）種のＳｏ　ｃｅ　１２株（ＮＣＩ
   Ｂ　１２１３４）、又は該株由来の式（ I ）の化合物
   を生産する変異株。 ７、特許請求の範囲第５項に記載の方法によって得られ
   る抗生物性を有する化合物。 ８、次の式（ I ）、 （式中、Ｒ＿１は水素原子又はヒドロキシル基であり、
   そしてＲ＿２はヒドロキシル基又はβ−グルコピラノシ
   ルオキシ基であり、そしてＲ＿２がヒドロキシル基であ
   る場合にはＣ−２２原子はＳ−配置を有する） で表わされる化合物、又はその溶媒和物もしくは医薬と
   して許容される塩を含有する医薬組成物。 ９、ヒト又は動物の体を処置する医療的方法において使
   用するための特許請求の範囲第１項に記載の式（ I ）
   の化合物又はその溶媒和物もしくは医薬として許容され
   る塩。 １０、植物の保護において使用するための特許請求の範
   囲第１項に記載の式（ I ）の化合物又はその溶媒和物
   もしくは医薬として許容される塩。 １１、医薬組成物の製造のための、特許請求の範囲第１
   項に記載の式（ I ）の化合物又は溶媒和物もしくは医
   薬として許容される塩の使用。 １２、特許請求の範囲第１１項に記載の抗細菌性組成物
   の製造のための、特許請求の範囲第１項に記載の式（
   I ）の化合物又はその溶媒和物もしくは医薬として許容
   される塩の使用。 １３、特許請求の範囲第１１項に記載の抗ウィルス性組
   成物の製造のための、特許請求の範囲第１項に記載の式
   （ I ）の化合物又は溶媒和物もしくは医薬として使用
   される塩の使用。 １４、植物保護剤の製造のための、特許請求の範囲第１
   項に記載の式（ I ）の化合物又はその溶媒和物もしく
   は医薬として許容される塩の使用。