JPS6192598A - Ａｄｐの定量方法 - Google Patents
Ａｄｐの定量方法Info
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- JPS6192598A JPS6192598A JP21438684A JP21438684A JPS6192598A JP S6192598 A JPS6192598 A JP S6192598A JP 21438684 A JP21438684 A JP 21438684A JP 21438684 A JP21438684 A JP 21438684A JP S6192598 A JPS6192598 A JP S6192598A
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- JP
- Japan
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- adp
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- mmol
- kinase
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の技術分野１
本発明は生体内の各様代謝系に関与しているＡＤＰの定
量方法に関する。
量方法に関する。
［発明の技術的背ｍとその問題点」
ＡＤＰはＡＴＰなどと共に生体内でのエネルギー変換に
関する様々な代謝系に関与しており、その一部を例示す
ると次のようなものがある。
関する様々な代謝系に関与しており、その一部を例示す
ると次のようなものがある。
■クレアチン＋ＡＴＰ ７″−１１−〇−クレアヂンリ
ン酸＋ＡＤＰ ■尿素＋ＡＴＰ二巳ゴもリン酸＋ＣＯ２＋ ２ Ｎ
ＨＪ−）−Ａ Ｄ Ｐ■Ｎ Ｈ，４−Ｌ−グル
タミン酸−トＡＴＰ弘至兵４至呉リン酸＋１−グルタミ
ン＋ＡＤＰ ■Ｎ ＋１．十し−アスパラギン酸十ＡＴＰ子、エエテ
リンＭ ＋、 Ｌ−アスパラギンート△ＤＰ■ Ｎ ト
１．−ト ｃ ｏ、十 八 Ｌ Ｐ ４ソ二４二４≦
≦１υＬコ＝４二！≦ごカルバモイルリン ところでこれらの生体内反応に関与する物質の多くは各
秤疾患の診断において重要な情報を提供する役割をなし
ており、例えばクレアチンおよびクレアチンキナーゼは
筋疾患の、尿素は腎疾患の、アンモニアは肝疾患の各臨
床検査において定量測定されて、これら各疾忠の診断に
寄与している。
ン酸＋ＡＤＰ ■尿素＋ＡＴＰ二巳ゴもリン酸＋ＣＯ２＋ ２ Ｎ
ＨＪ−）−Ａ Ｄ Ｐ■Ｎ Ｈ，４−Ｌ−グル
タミン酸−トＡＴＰ弘至兵４至呉リン酸＋１−グルタミ
ン＋ＡＤＰ ■Ｎ ＋１．十し−アスパラギン酸十ＡＴＰ子、エエテ
リンＭ ＋、 Ｌ−アスパラギンート△ＤＰ■ Ｎ ト
１．−ト ｃ ｏ、十 八 Ｌ Ｐ ４ソ二４二４≦
≦１υＬコ＝４二！≦ごカルバモイルリン ところでこれらの生体内反応に関与する物質の多くは各
秤疾患の診断において重要な情報を提供する役割をなし
ており、例えばクレアチンおよびクレアチンキナーゼは
筋疾患の、尿素は腎疾患の、アンモニアは肝疾患の各臨
床検査において定量測定されて、これら各疾忠の診断に
寄与している。
そしてこれらの検査は、その検査件数が著しく増加して
おり、そのため検査方法は簡便でかつ精度の高いことが
殻望されている。
おり、そのため検査方法は簡便でかつ精度の高いことが
殻望されている。
このような情況を考慮すると、多くの生体内反応に関与
しているＡＤＰに関して簡便でかつ精確な定量法が確立
されれば、各種の臨床検査に広く利用きれて臨床検査分
野に大きく寄与するものと刀えられ、このような見地に
立って本発明者らはＡ Ｄ Ｐの定量法のωｌ究を行な
った。
しているＡＤＰに関して簡便でかつ精確な定量法が確立
されれば、各種の臨床検査に広く利用きれて臨床検査分
野に大きく寄与するものと刀えられ、このような見地に
立って本発明者らはＡ Ｄ Ｐの定量法のωｌ究を行な
った。
従来Ａ Ｄ ＋）の定量法としては、ＡＤＰデアミナ−
１の作用により牛成りるアンモニアの比色法（インドラ
１ノール法Ｔ； ） 、１、！ご覧よグルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼを用いるＵ Ｖ法などが知られているが、
これらは操作が煩肩１でしかも精度が低いなどの欠点が
あった。
１の作用により牛成りるアンモニアの比色法（インドラ
１ノール法Ｔ； ） 、１、！ご覧よグルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼを用いるＵ Ｖ法などが知られているが、
これらは操作が煩肩１でしかも精度が低いなどの欠点が
あった。
［発明の目的１
本発明の目的は、操伯が筒中でかつ粘度の高いＡＤＰの
定量法を提供し、それによって各種臨床検査をより簡便
かつ精確に行なうことにある。
定量法を提供し、それによって各種臨床検査をより簡便
かつ精確に行なうことにある。
［発明の構成］
すなわら本発明は、ＡＤＰを定量する方法において、Ａ
ＤＰを含有する被検液にキナーゼおよびオキシダーゼを
作用させて過酸化水素を発生さ゛け、この過酸化水素を
適当な方法で測定することを特徴とするものである。
ＤＰを含有する被検液にキナーゼおよびオキシダーゼを
作用させて過酸化水素を発生さ゛け、この過酸化水素を
適当な方法で測定することを特徴とするものである。
本発明の定量法を反応式で示すと、キナーゼおよびオキ
シダーぜがそれぞれピルビン酸キナーゼ、ピルビン酸オ
キシダーゼの１易合、次のようになる。
シダーぜがそれぞれピルビン酸キナーゼ、ピルビン酸オ
キシダーゼの１易合、次のようになる。
ＡＤＰ＋ホスホエノールピルビンｙ２ ｃ？＋ｗｗ−：
４５１ｑｙ−ｅ−ピルビン酸＋ＡＴＰ・・・（１） ピルビン酸＋リン酸＋０２互匹」突ｒ上ムもアセチルリ
ン酸＋Ｇ Ｏ，＋ Ｈ，０２・・・（２）本発明の定量
法は、例えば適当なキナーゼおよびオキシダーゼ、これ
らの酵素による反応に必要な薬剤、並びに過酸化水素の
呈色反応に必要な薬剤をすべて緩衝液に溶解してＤＨ
７．０〜７．５程度の試薬を調製し、次にこれに被検液
を加えて約３７℃で１０分間ｆ？度加温した後吸光度を
測定することによって行われる。
４５１ｑｙ−ｅ−ピルビン酸＋ＡＴＰ・・・（１） ピルビン酸＋リン酸＋０２互匹」突ｒ上ムもアセチルリ
ン酸＋Ｇ Ｏ，＋ Ｈ，０２・・・（２）本発明の定量
法は、例えば適当なキナーゼおよびオキシダーゼ、これ
らの酵素による反応に必要な薬剤、並びに過酸化水素の
呈色反応に必要な薬剤をすべて緩衝液に溶解してＤＨ
７．０〜７．５程度の試薬を調製し、次にこれに被検液
を加えて約３７℃で１０分間ｆ？度加温した後吸光度を
測定することによって行われる。
過酸化水素の測定法としては既知°の方法をいずれｂ用
いることがでそ、例えば色原体存在下でベルオキシダー
ゼを作用させて、生成した色素の吸光度を測定する方法
などが挙げられる。例えば、ベルオキシダーぜの存在下
、４−アミノアンチピリンど色原体、例えばＮ−エチル
−Ｎ− （２−ヒドロニ１ニジー３ースルホプロピル トキシアニリン、３−ヒドロキシ−２．４．６トリヨー
ド安急香酸、１−プツト−ルー４−スルホン酸、５−ス
ルホサリチル酸等を作用させて呈色反応を進行させ、生
成した色素を光学的に測定する。
いることがでそ、例えば色原体存在下でベルオキシダー
ゼを作用させて、生成した色素の吸光度を測定する方法
などが挙げられる。例えば、ベルオキシダーぜの存在下
、４−アミノアンチピリンど色原体、例えばＮ−エチル
−Ｎ− （２−ヒドロニ１ニジー３ースルホプロピル トキシアニリン、３−ヒドロキシ−２．４．６トリヨー
ド安急香酸、１−プツト−ルー４−スルホン酸、５−ス
ルホサリチル酸等を作用させて呈色反応を進行させ、生
成した色素を光学的に測定する。
本発明の定量法は△Ｄ ｌ）自体の定量は勿論、被検液
中でＡＤＰを生成させそれを定量することによって、Ａ
ＤＰを生成りるような酵素反応系の基質または酵素、例
′えはクレアチン。クレアチンキナーゼ、尿素．アンモ
ニア等の定量にも広く利用することができる（これらの
定量に関Ｊる反応式は本明細内第２〜３真記載の反応弐
〇〜■参照）。
中でＡＤＰを生成させそれを定量することによって、Ａ
ＤＰを生成りるような酵素反応系の基質または酵素、例
′えはクレアチン。クレアチンキナーゼ、尿素．アンモ
ニア等の定量にも広く利用することができる（これらの
定量に関Ｊる反応式は本明細内第２〜３真記載の反応弐
〇〜■参照）。
またさらに、このようにアンモニアまたはクレアチンが
定量できることによって、下記式％式％（ クレアチニン＋１−１０１−上りニー クレアチン・・・（４） に示すように、フレ）ｌヂニンを定量する口としできる
。
定量できることによって、下記式％式％（ クレアチニン＋１−１０１−上りニー クレアチン・・・（４） に示すように、フレ）ｌヂニンを定量する口としできる
。
このようにＡＤＰの定量を介して他の物７１の定量を行
なう場合には、下記実施例に示すように、試薬中にＡＤ
Ｐを生成物とする反応系の薬剤を加えればよく、ＡＤＰ
自体の定量と同様に簡便に実施ηることができる。
なう場合には、下記実施例に示すように、試薬中にＡＤ
Ｐを生成物とする反応系の薬剤を加えればよく、ＡＤＰ
自体の定量と同様に簡便に実施ηることができる。
［発明の実施例］
本発明を実施例によって説明する。
実施例１． ＡＤＰの定量
ＨＩＥ ｌ） ｌ三 Ｓ′％
３０ｍｍｏｌ／ｌホスホエノールピルビ
ンｆｌ ２ｎ＋ｍｏｌ／ｌ塩化マグネシウム
３ｍｍｏｌ／１チアミンピロリン酸
０．５ｍｍｏｌ／ ｌＵ’Ｊｒ＆−カリウム
１．５ｍｍ０１／ １ピルビン酸キナーゼ
２５ｔＪ／ａ＋１ピルビン酸オキシダーゼ
２Ｕ／１ペルオキシダーゼ ＩＵ／１ｌ１
４−７ミ／７ンチヒ’）ン０，５ｍｍｏｌ／ＩＮ−エチ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３
，５−ジメ トキアニリン ０．５１ｍｏｌ／ １ｐｌ−
１７，０ ＞°ｌ−Ｉ Ｅ ｐ Ｅ Ｓ ＋、ｔＮ −２−ヒドロ
キシエチルピペラジン−Ｎ−２−■タンスルホン酸の商
品名 １記組成の試薬２．Ｏｎ＋ｌにＯ〜５ｍｍｏｌ／Ｉ Ｑ
度のＡＰＤ水溶液を５０μｍ加え、３７℃で１０分間加
温した後、５９５ｎｍで吸光度を測定した。その結果は
第１図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得られた
。
３０ｍｍｏｌ／ｌホスホエノールピルビ
ンｆｌ ２ｎ＋ｍｏｌ／ｌ塩化マグネシウム
３ｍｍｏｌ／１チアミンピロリン酸
０．５ｍｍｏｌ／ ｌＵ’Ｊｒ＆−カリウム
１．５ｍｍ０１／ １ピルビン酸キナーゼ
２５ｔＪ／ａ＋１ピルビン酸オキシダーゼ
２Ｕ／１ペルオキシダーゼ ＩＵ／１ｌ１
４−７ミ／７ンチヒ’）ン０，５ｍｍｏｌ／ＩＮ−エチ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３
，５−ジメ トキアニリン ０．５１ｍｏｌ／ １ｐｌ−
１７，０ ＞°ｌ−Ｉ Ｅ ｐ Ｅ Ｓ ＋、ｔＮ −２−ヒドロ
キシエチルピペラジン−Ｎ−２−■タンスルホン酸の商
品名 １記組成の試薬２．Ｏｎ＋ｌにＯ〜５ｍｍｏｌ／Ｉ Ｑ
度のＡＰＤ水溶液を５０μｍ加え、３７℃で１０分間加
温した後、５９５ｎｍで吸光度を測定した。その結果は
第１図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得られた
。
実施例２． クレアチニンの定量
トリス（ヒドロ１シメｆル）アミノメタン５０ｍｍ０１
／ １ ホスホエノールピルビンｑ ２ｍｍｏｌ／ｌ塩化マ
グネシウム ３ｍｍｏｌ／１チアミンピロ
リン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ ｌリン酸−カリウ
ム １．５ｍｍｏｌ／ ｌＡ Ｔ Ｐ
３ｍｍｏｌ／ ｌピルビン酸キナ
ーゼ ２５Ｕ／ｍｌピルビン酸オキシダーゼ
３ＬＪ／ｍｌクレアチンキナーゼ
３０１Ｊ／ｍｌペルオキシダーゼ ＩＬ
Ｉ／ｍ１４−アミノアンヂビリン ０．５ｍｍ０Ｉ／
１３−ヒドロキシ−２，４，６ 一ドリヨード安息香ＦＡ ２．５ｍｍｏｌ／ １ｐｌ
−１７，５ 上記組成の試薬２．０ｍｌにＯ〜１ ｍｍｏｌ／Ｉ 濃
度のクレアチン水溶液を５０μｍ加え、３７℃で１０分
間加温した後、５１５ｎｍで吸光度を測定した。その結
果は第２図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得ら
れた。
／ １ ホスホエノールピルビンｑ ２ｍｍｏｌ／ｌ塩化マ
グネシウム ３ｍｍｏｌ／１チアミンピロ
リン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ ｌリン酸−カリウ
ム １．５ｍｍｏｌ／ ｌＡ Ｔ Ｐ
３ｍｍｏｌ／ ｌピルビン酸キナ
ーゼ ２５Ｕ／ｍｌピルビン酸オキシダーゼ
３ＬＪ／ｍｌクレアチンキナーゼ
３０１Ｊ／ｍｌペルオキシダーゼ ＩＬ
Ｉ／ｍ１４−アミノアンヂビリン ０．５ｍｍ０Ｉ／
１３−ヒドロキシ−２，４，６ 一ドリヨード安息香ＦＡ ２．５ｍｍｏｌ／ １ｐｌ
−１７，５ 上記組成の試薬２．０ｍｌにＯ〜１ ｍｍｏｌ／Ｉ 濃
度のクレアチン水溶液を５０μｍ加え、３７℃で１０分
間加温した後、５１５ｎｍで吸光度を測定した。その結
果は第２図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得ら
れた。
実施例３． クレアチニンの定量
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン５０ｍｎ＋ｏ
ｌ／ ｌ ホスホ１ノールピルビンＭ ２ｍｍｏｌ／１ｊ、ｉ
化マグネシウム ３ｍｍｏｌ／ Ｉチアミ
ンピロリン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ １リン酸−
カリウム １，５ｎ＋ｍｏｌ／ ＩＡ Ｔ
Ｐ ３ｍｍｏｌ／ １ピルビ
ン酸キナーピ ２５１Ｊ／ｍｌピルビン酸オ
キシダーゼ ３Ｕ／１ク クレアチン水溶液ゼ ３０Ｕ／ｉｆクレアチ
ニナーゼ １２０ＬＪ／ｍｌベルＡキシダー
ゼ １ｕ／１４−アミノアンヂビリン
０．５ｍ１ｌＩＯ＋／ １３−ヒドロキシ−２，４，６ 一ドリヨード安息香酸 ２，５ｍｍｏｌ／ ｌｐＨ７，
５ 上記組成の試薬２．０ｍｌに０〜１ｍｍｏｌ／ ｌ濃度
のクレアチニン水溶液を５０μｍ加え、３７℃で１０分
間加温した後、５１５ｎｍで吸光度を測定しｌζ。その
結果は第３図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得
られた。
ｌ／ ｌ ホスホ１ノールピルビンＭ ２ｍｍｏｌ／１ｊ、ｉ
化マグネシウム ３ｍｍｏｌ／ Ｉチアミ
ンピロリン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ １リン酸−
カリウム １，５ｎ＋ｍｏｌ／ ＩＡ Ｔ
Ｐ ３ｍｍｏｌ／ １ピルビ
ン酸キナーピ ２５１Ｊ／ｍｌピルビン酸オ
キシダーゼ ３Ｕ／１ク クレアチン水溶液ゼ ３０Ｕ／ｉｆクレアチ
ニナーゼ １２０ＬＪ／ｍｌベルＡキシダー
ゼ １ｕ／１４−アミノアンヂビリン
０．５ｍ１ｌＩＯ＋／ １３−ヒドロキシ−２，４，６ 一ドリヨード安息香酸 ２，５ｍｍｏｌ／ ｌｐＨ７，
５ 上記組成の試薬２．０ｍｌに０〜１ｍｍｏｌ／ ｌ濃度
のクレアチニン水溶液を５０μｍ加え、３７℃で１０分
間加温した後、５１５ｎｍで吸光度を測定しｌζ。その
結果は第３図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得
られた。
実施例４． アンモニアの定量
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン５０ｍｍｏｌ
／１ ホスホエノールピルビンＲ２ｍｍｏｌ／ １塩化マグネ
ジ「クム ３ｍｍｏｌ／Ｉチアミンピロリ
ン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ １リン酸−カリウム
１．５１１１ｍ０１／ ＩＡ Ｔ Ｐ
３ｍｍｏｌ／ Ｉし一グルタミ
ンＭ ５ｍｍｏｌ／ｌピルビン酸ギナー
ゼ ２５ＬＪ／ｍｌ 、ピルビンＭ ；
４ ：ｌ：シダーｆ： ３Ｕ／ｍｌグルタミ
ンシンセターゼ ７５Ｕ／ｍｌベルＡキシダーピ
１Ｕ／１４−アミノアンチピリン ０
．５ｍｍｏｌ／ １３−ヒドロキシ−２，４，６ ＝１−リョード安息香ｕ １，５１１１ｍＯｌ／ １
ｐｆ−１７，５ １−記組成の試薬２０ｍ１に０〜１ｍ１１１０１７１１
１１度の塩化）′ン七ニウム水溶液を５０μｍ加え、３
７℃で１０分間加温した後、５１５ｎｍで吸光度を測定
した。その結果は第４図に示ケ如く、原点を通る良好な
検量線が得られた。
／１ ホスホエノールピルビンＲ２ｍｍｏｌ／ １塩化マグネ
ジ「クム ３ｍｍｏｌ／Ｉチアミンピロリ
ン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ １リン酸−カリウム
１．５１１１ｍ０１／ ＩＡ Ｔ Ｐ
３ｍｍｏｌ／ Ｉし一グルタミ
ンＭ ５ｍｍｏｌ／ｌピルビン酸ギナー
ゼ ２５ＬＪ／ｍｌ 、ピルビンＭ ；
４ ：ｌ：シダーｆ： ３Ｕ／ｍｌグルタミ
ンシンセターゼ ７５Ｕ／ｍｌベルＡキシダーピ
１Ｕ／１４−アミノアンチピリン ０
．５ｍｍｏｌ／ １３−ヒドロキシ−２，４，６ ＝１−リョード安息香ｕ １，５１１１ｍＯｌ／ １
ｐｆ−１７，５ １−記組成の試薬２０ｍ１に０〜１ｍ１１１０１７１１
１１度の塩化）′ン七ニウム水溶液を５０μｍ加え、３
７℃で１０分間加温した後、５１５ｎｍで吸光度を測定
した。その結果は第４図に示ケ如く、原点を通る良好な
検量線が得られた。
実施例５． 尿素の定量（１）
ＨＥ Ｐ Ｅ Ｓ ５０ｍｍｏｌ／
１ホスホＪノールビルヒン酸 １０ｍｎ＋ｏｌ／
１ｊよ晶化マグネシウム ３ｊｍｏｌ／Ｉ
チアミンピロリン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ ｌリ
ン酸−カリウム ２ｍｍｏｌ／ ＩＡ Ｔ
Ｐ ６ｍｎ＋ｏｌ／ １炭
酸水素ナトリウム １０ｍｇ＋ｏｌ／ １ピル
ビン酸キナーゼ ２５Ｕ／ｉｆピルビン酸オ
キシダーゼ ３Ｕ／１ペルオキシダーゼ
１Ｕ／ｍｌウレアーぜ（△ＴＰ−ヒドロリジン
グ）５ＬＪ ／ ｍｌ ４−アミノアンチピリン １．５ｍｍｏｌ／ １１
−ナフトール−４スルホン酸 ２ｍｍｏｌ／ｌ ｐＨ７，０ 上記組成の試９３．ＯｍｌにＱ 〜５０ｍｍｏ ｌ ／
Ｉの淵１良の尿素水溶液を２０７１１加え、３７℃で
１０分間加温した後、５１０ｎｍで吸光度を測定した。
１ホスホＪノールビルヒン酸 １０ｍｎ＋ｏｌ／
１ｊよ晶化マグネシウム ３ｊｍｏｌ／Ｉ
チアミンピロリン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ ｌリ
ン酸−カリウム ２ｍｍｏｌ／ ＩＡ Ｔ
Ｐ ６ｍｎ＋ｏｌ／ １炭
酸水素ナトリウム １０ｍｇ＋ｏｌ／ １ピル
ビン酸キナーゼ ２５Ｕ／ｉｆピルビン酸オ
キシダーゼ ３Ｕ／１ペルオキシダーゼ
１Ｕ／ｍｌウレアーぜ（△ＴＰ−ヒドロリジン
グ）５ＬＪ ／ ｍｌ ４−アミノアンチピリン １．５ｍｍｏｌ／ １１
−ナフトール−４スルホン酸 ２ｍｍｏｌ／ｌ ｐＨ７，０ 上記組成の試９３．ＯｍｌにＱ 〜５０ｍｍｏ ｌ ／
Ｉの淵１良の尿素水溶液を２０７１１加え、３７℃で
１０分間加温した後、５１０ｎｍで吸光度を測定した。
その結果は第５図に示す如く、原点を通る良Ｏｒな検量
線が１９られた。
線が１９られた。
実施例６． 尿素の定員（２）
ＨＥ Ｐ Ｅ Ｓ ５０ｎ＋ｍｏｌ
／ １ホスホエノールピルヒンｆｌ １０ｍｍｏｌ
／ ｌ塩化マグネシウム ３ｍｎ＋ｏｌ／
１チアミンピロリン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ １
リン酸−カリウム ２ｍｍｏｌ／ ｌＡ
Ｔ Ｐ ６ｍｍｏｌ／ １し
一グルタミンＢ １０ｍｍｏｌ／ Ｉピル
ビン酸キプーげ ２５Ｕ／ｍｌピルビン酸オ
キシダーゼ ３ｕ／１グルタミンシンセターゼ
１１５Ｕ／ｍｌペルオキシダーゼ
１Ｕ／１４−アミノアンチピリン １．５ｊｍｏｌ
／ Ｉ５−スルホサリチル酸 ２ｊｍｏｌ／１ウ
レアーゼ ４．５Ｕ／ｍ１１）ｌ−
１７，０ 上記組成の試薬３．ＯｍｌにＯ〜５０ｍｍｏｌ／ Ｉの
ｍ度の尿素水溶液を２０μｍ加え、３７℃で１０分間加
温した後、５３０ｎｌｌｌで吸光度を測定した。その結
果は第６図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得ら
れ ｌこ 。
／ １ホスホエノールピルヒンｆｌ １０ｍｍｏｌ
／ ｌ塩化マグネシウム ３ｍｎ＋ｏｌ／
１チアミンピロリン酸 ０．５ｍｍｏｌ／ １
リン酸−カリウム ２ｍｍｏｌ／ ｌＡ
Ｔ Ｐ ６ｍｍｏｌ／ １し
一グルタミンＢ １０ｍｍｏｌ／ Ｉピル
ビン酸キプーげ ２５Ｕ／ｍｌピルビン酸オ
キシダーゼ ３ｕ／１グルタミンシンセターゼ
１１５Ｕ／ｍｌペルオキシダーゼ
１Ｕ／１４−アミノアンチピリン １．５ｊｍｏｌ
／ Ｉ５−スルホサリチル酸 ２ｊｍｏｌ／１ウ
レアーゼ ４．５Ｕ／ｍ１１）ｌ−
１７，０ 上記組成の試薬３．ＯｍｌにＯ〜５０ｍｍｏｌ／ Ｉの
ｍ度の尿素水溶液を２０μｍ加え、３７℃で１０分間加
温した後、５３０ｎｌｌｌで吸光度を測定した。その結
果は第６図に示す如く、原点を通る良好な検量線が得ら
れ ｌこ 。
し発明の効果］
以」−説明したように、本発明によればＡＤＰを簡１１
な操作で精確に定量づ°ることができる。そしてＡＤＰ
は神々の酵素反応の生成物であるので、本発明により、
ＡＤＰそのものの定量は勿論、ＡＤＰを生成物として生
成するような酵素反応の基質または酵素の定量も、被検
液中でＡＤＰを生成させることによって筒中に実／Ｉ１
１！４ることができる。
な操作で精確に定量づ°ることができる。そしてＡＤＰ
は神々の酵素反応の生成物であるので、本発明により、
ＡＤＰそのものの定量は勿論、ＡＤＰを生成物として生
成するような酵素反応の基質または酵素の定量も、被検
液中でＡＤＰを生成させることによって筒中に実／Ｉ１
１！４ることができる。
したがって本発明は、臨床検査の分野において利用範囲
が広く、実用性が８い。
が広く、実用性が８い。
第１図〜第６図はそれぞれ本発明の実施例によ（８７３
３）代理人 弁理」−猪 設 祥 児（ほか１名）
３）代理人 弁理」−猪 設 祥 児（ほか１名）
Claims (7)
- （１）ＡＤＰを含有する被検液にキナーゼおよびオキシ
ダーゼを作用させ、生成する過酸化水素を測定すること
を特徴とするＡＤＰの定量方法。 - （２）キナーゼがピルビン酸キナーゼである特許請求の
範囲第１項記載のＡＤＰの定量方法。 - （３）オキシダーゼがピルビン酸オキシダーゼである特
許請求の範囲第１項記載のＡＤＰの定量方法。 - （４）被検液中に含有されているＡＤＰは初めから被検
液中に存在しているものである特許請求の範囲第１項記
載のＡＤＰの定量方法。 - （５）被検液中に含有されているＡＤＰは被検液中おい
て基質とＡＴＰから酵素反応により生じたものである特
許請求の範囲第１項記載のＡＤＰの定量方法。 - （６）基質がクレアチン、尿素またはアンモニアである
特許請求の範囲第５項記載のＡＤＰの定量方法。 - （７）酵素反応の酵素がクレアチンキナーゼ、ウレアー
ゼ、グルタミンシンセターゼ、アスパラギンシンセター
ゼまたはカルバミンキナーゼである特許請求の範囲第５
項記載のＡＤＰの定量方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21438684A JPS6192598A (ja) | 1984-10-15 | 1984-10-15 | Ａｄｐの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21438684A JPS6192598A (ja) | 1984-10-15 | 1984-10-15 | Ａｄｐの定量方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6192598A true JPS6192598A (ja) | 1986-05-10 |
Family
ID=16654927
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21438684A Pending JPS6192598A (ja) | 1984-10-15 | 1984-10-15 | Ａｄｐの定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6192598A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6777243B2 (en) | 1995-10-30 | 2004-08-17 | Arkray Inc. | Method for measuring substance and testing piece |
| US7098038B2 (en) | 1995-10-30 | 2006-08-29 | Arkray Inc. | Method for measuring substance and testing piece |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5542636A (en) * | 1978-09-19 | 1980-03-26 | Tatsuo Fukuoka | Footwear |
| JPS59140899A (ja) * | 1982-09-29 | 1984-08-13 | Wako Pure Chem Ind Ltd | オキシダ−ゼによる基質の新規定量法 |
-
1984
- 1984-10-15 JP JP21438684A patent/JPS6192598A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5542636A (en) * | 1978-09-19 | 1980-03-26 | Tatsuo Fukuoka | Footwear |
| JPS59140899A (ja) * | 1982-09-29 | 1984-08-13 | Wako Pure Chem Ind Ltd | オキシダ−ゼによる基質の新規定量法 |
Cited By (4)
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| US6777243B2 (en) | 1995-10-30 | 2004-08-17 | Arkray Inc. | Method for measuring substance and testing piece |
| US7098038B2 (en) | 1995-10-30 | 2006-08-29 | Arkray Inc. | Method for measuring substance and testing piece |
| US7153696B2 (en) | 1995-10-30 | 2006-12-26 | Arkray Inc. | Method for measuring substance and testing piece |
| US7189576B2 (en) | 1995-10-30 | 2007-03-13 | Arkray Inc. | Method for measuring substance and testing piece |
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