JPS61285998A - マルトオリゴ糖の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はマルトオリゴ糖の製造方法に関し、詳しくは固
定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼを充填した反応器に
特定の条件で澱粉液化液を供給することを特徴とするマ
ルトオリゴ糖の製造方法に関する。

〔従来技術及び発明が解決しようとする問題点〕澱粉ま
たはアミロースを酸またはアミラーゼで分解すると、各
種のオリゴ糖混合物が得られる。

これらは、水飴や粉飴等の澱粉糖として工業的に大量に
生産され、消費されているが、高純度のマルトオリゴ糖
を工業規模で効率良く製造することはマルトースを除い
ては困難であった。

近年、澱粉またはアミロースに作用してマルトトリオー
ス、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルト
ヘキサオース等のマルトオリゴ糖を特異的に生成する各
種マルトオリゴ糖生成アミラーゼが相ついで発見され、
マルトオリゴ糖の効率的な工業的製造に期待が集まって
いる。

マルトオリゴ糖生成アミラーゼとしてはβ−アミラーゼ
以外に次のものが知られている。

マルトトリオース生成アミラーゼ〔若生勝雄ら：澱粉化
学、２６，１７５．　　（１９７９）、ストレプトミセ
ス・グリセウス（鉦皿■竺と肌士士咀姐）８原のもの；
高崎義幸：昭和５８年度日本農芸化学大会要旨集、Ｐ１
６９　（１９８３）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属
起原のもの〕 マルトテトラオース生成アミラーゼ（Ｊ、Ｆ、Ｒｏｂｙ
ｔａｎｄ　Ｒ，Ｊ、　Ａｃｋｅｒｍａｎ　：　Ａｒｃｈ
、　Ｂｔｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、＋１４５．１
０５　　（１９７１）、シェードモナス・ストツツェリ
　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｔｕｔｚｅｒｉ）起原
のもの〕 マルトペンタオース生成アミラーゼ（Ｎ、　５ａｉｔｏ
：Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、＋
　１５５　、　２９０（１９７３）、バチルス・リケニ
ホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉ
ｓ）起原のもめ；小林昭−ら；昭和５８年度日本澱粉学
会大会要旨集、Ｐ２Ｏ３（１９８３）ｉ吉儀尚浩ら：昭
和５９年度日本農芸化学大会要旨集、Ｐ５８４　（１９
８４））マルトヘキサオース生成アミラーゼ（Ｋ、　Ｋ
ａｉｎｕｍａら：ＦＥＢＳ　　Ｌｅｔｔ、、２６．２８
１　（１９７２）、エアロバクター・エアロゲネス（Ａ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒ７−起原のもの；　Ｊ、　　Ｆ、　
Ｋｅｎｎｅｄｙ　ａｎｄ　Ｃ。

Ａ、　Ｗｈｉｔｅ　：　５ｔＨｒｋｅ、　３上、９３　
（１９７９）；谷口肇ら＝澱粉化学、旦、１０７　（１
９８２）；Ｙ、　　Ｔａｋａｓａｋｉ　：　Ａｇｒｉｃ
、　　Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、＋　　４７　。

しかしながら、これらのマルトオリゴ糖生成アミラーゼ
は一般のアミラーゼに比べて生産性が低い上に非常に高
価である。そのため、これらアミラーゼを用いて製造さ
れる各種マルトオリゴ糖としては試薬ブリード品が少量
生産されているにすぎず、しかも高価である。

また、これら試薬グレード品のマルトオリゴ糖はバッチ
法で生産されており、長時間、例えば２４〜７２時間の
反応時間を必要とすること、マ素と製品との分離工程が
必要になり、精製分離の操作が繁雑で多くの人手がかか
ることなどの欠点を有している。

また、通常用いられているゲル濾過法、カーボンクロマ
トグラフィー等による精製分離は試料の負荷量が小さく
、生産性も低いため、大量生産には不適当であることが
明らかにされている〔鈴木繁男、中村道徳編集；「澱粉
科学実験法」、朝食書店、１９７〜２０２頁〕。

そこで、本発明者らは上記欠点を解消したマルトオリゴ
糖の製造方法を開発すべく研究を重ねた。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明物らは、先にマルトオリゴ糖の連続的製法を前提
にして、各種マルトオリゴ糖生成アミラーゼを固定化し
た固定化酵素を提案したく特願昭６０−８１３４０号）
。

そこで、これら固定化酵素を充填した反応器に、澱粉液
化液を供給して検討したところ、充填した固定化酵素の
活性に対応して該澱粉液化液を特定の条件で供給して加
水分解を行なわせることによって効率良くマルトオリゴ
糖を製造できることを見出し、かかる知見に基いて本発
明を完成した。

すなわち本発明は、固定化マルトオリゴ糖生成アミラー
ゼを充填した反応器に澱粉液化液を固定化酵素単位活性
あたりの重量基準空塔速度１×１０−’〜３　Ｘ　１０
−４〜３×１０　（Ｉ　Ｕ／　ｇ）　−’の条件で供給
することを特徴とするマルトオリゴ糖の製造方法である
。

本発明で使用する原料澱粉としては種々のものが使用で
きるが、通常馬鈴薯澱粉、せ薯澱粉、コーンスターチ、
ワキ名−ンスターチ、キャラサバ澱粉等を用いる。また
、反応器に通液する澱粉液化液のグルコース当量（ＤＥ
）は通常、１〜３５、好ましくは５〜２０の範囲にある
ものを用いるのが良い。ここで、澱粉液化液のＤＥがワ
キシーコーンスターチの場合１以下、それ以外の澱粉で
はＤＥが１０以下のものは老化が激しく、また老化を防
止するために７０〜８０℃以上に加熱保持する必要があ
り、工程上不利である。一方、ＤＥが３５以上になると
、グルコース、マルトース等の低分子糖の生成が増大し
、かつ目的とするマルトオリゴ糖の収量が低下するので
適当でない。

なお、各種澱粉を液化する方法は特に制限はないが、通
常は液化型α−アミラーゼまたは塩酸等の酸で処理する
。

次に、マルトオリゴ糖とはマルトトリオース。

マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキ
サオース等であり、マルトオリゴ糖生成アミラーゼとは
前述の各種マルトオリゴ糖を生成するアミラーゼである
。

酵素の固定化方法としては各種の方法が知られており、
その１つに物理的吸着法、イオン結合法。

共有結合法等を含む担体結合法がある。この中、物理的
吸着法、イオン結合法は操作が簡単であり、酵素タンパ
ク質の活性中心の破壊あるいは高次構造の変化が小さく
、また担体の再生利用も容易であることから適当な担体
を発見できれば工業化に対して有望な方法と云える。

また、本発明者らが先に提案したマルトオリゴ糖生成ア
ミラーゼの固定化手段（特願昭６０−８１３４０号）も
有利な方法の１つである。この方法ではマルトオリゴ糖
生成アミラーゼの担体として、酵素との親和性が８０％
以上であ″す、かつ１００Å以上の細孔径を有する細孔
の比表面積が２０〜３００ｒｒｒ／ｇである多孔性担体
を使用する。

ここで、酵素と担体の親和性は次の方法によって求めた
値を意味する。

担体０．５ｇと２５１Ｕの酵素（ｐ　Ｈ７，０の５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液２．０ｍｌに溶解したもの）を５９ｍｌ
三角フラスコに入れ、室温下で１時間、１２０ストロー
ク、　　４ｃ１ｍ幅で振とうしながら酵素を担体に固定
化したのち濾過を行ない、得られた濾液中の活性を測定
して次式により酵素と担体との親和性を求める。

親和性を求める際に用いる酵素の純度は必ずしも絶対的
なものではないが、好ましくは比活性が３０１Ｕ／■・
タンパク質以上あるものを使用する。なお、上記酵素と
担体の親和性は工業的に利用する場合の酵素活性／担体
重量比よりも低いレベルで求めたものであるが、酵素と
担体の親和性を知る尺度として重要である。すなわち、
実際に高い酵素活性／担体重量比において固定化した酵
素が基質に対し高い発現活性を示すものは上記親和性に
ついても高い値を示すことを本発明者らは見出している
。この親和性については、上記の如く８０％以上である
ことが必要であるが、マルトテトラオース生成アミラー
ゼ用担体の場合は９５％以上であることが好ましく、マ
ルトペンタオース生成アミラーゼ用担体の場合は８０％
以上であることが好ましい。これらの値は使用酵素の起
源および比活性によって決まる。ここで発現活性とは以
下の如く定義されるものである。

固定化酵素の発現する活性がその使用条件によって絶対
値が大きく変わるので、次のような測定条件を設定して
求めた。すなわち、固定化酵素１０　ｗ　（ｗｅｔ）を
９．５　ｍ　ｌの１０ｍＭリン酸バッフｙ−（ｐＨ７，
０）（５０ｍｌ三角フラスコ中）に加え、十分に馴染ま
せた後、１０ｗ／ｖ％可溶性でん粉（Ｍｅｒｃｋ社製）
５．０ｍｌを加えて４０℃で１０分間往復振とう機によ
り１２０ストロ一ク／ｍｉｎ、４ｃｍ幅で振とうしなが
ら酵素反応を行ない、生成還元糖をＳｏｍｏｇｙｉ−Ｎ
ｅｌｓｏｎ法で測定し、発現する活性を求めた。なお、
１単位とは１分間に１μｌｌ１ＯＲのグルコシド結合を
切断する酵素量を意味する。

この担体は、さらに以下の条件を満足するものであるこ
とを要する。すなわち、担体の１００Å以上の細孔径を
有する細孔の比表面積が２０〜３００ｒ＋ｆ／ｇ、好ま
しくは４０〜２００イ／ｇであることが必要である。こ
の比表面積が３０　Ｏｎ？／ｇを越えると、担体１よ強
度が弱いものとなり、好ましくない。なお、マルトテト
ラオース生成アミラーゼ用担体にあっては、さらに４０
０Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が３〜１００
ｎｆ／ｇ１好ましくは５〜５０ｎｆ／ｇであることが望
ましい。ここで、比表面積は水銀圧入法により測定した
値である。

上記の条件は、いずれか一方を満足するだけでは不十分
であり、すべての条件を同時に満たすものだけが基質に
対して高い反応性を示す。

多孔性担体としては上記特性を満足するものであれば、
素材、製法等を問わないが、通常はフェノール系吸着ｍ
脂、スチレンージビニルベンゼン系吸着樹脂、トリアジ
ン系吸着樹脂、アクリルエステル系吸着樹脂２弱塩基性
アニオン交換樹脂などの多孔性合成樹脂が用いられる。

より具体的には、デュオライト系樹脂（ダイヤモンドジ
ャムロック社製）の商品名ｒＳ−７６１Ｊ、ｒＳ−７６
２Ｊ。

ｒＥＳ−７７１Ｊ、ｒＥｓ−８６１０Ｊなど；ダイヤイ
オン系樹脂（三菱化成工業■製）の商品名ｒＨＰ−１０
Ｊ、ｒＨＰ−２０Ｊ、ｒＨＰ−５０Ｊ。

ｒＳＰ−２０６Ｊなど；アンバーライト系樹脂（ローム
・アンド・ハース社製）の商品名ｒＸＡＤ−７Ｊ、ｒＸ
ＡＤ−８Ｊなどを挙げることができる。

また、多孔性担体の粒径については、発現活性が高けれ
ば特に制限はないが、通常は０．０５〜１．５ｆｉ、よ
り好ましくは０．２〜１．０ｆｉのものを用いるのが適
当である。粒径が小さいことは酵素の固定化や発現活性
に対しては好ましい要因であるが、あまり小さいと、固
定化酵素を反応器に充填し、これにでん粉液化液を供給
したときに、圧力損失が大きいため、運転上不都合であ
る。一方、粒径があまり大きいと、酵素の固定化や発現
活性に対して効率的でない。

上記担体への酵素の固定化は各種の方法を適用しうるが
、最も一般的な方法は、前述したように、適当な緩衝液
に酵素を溶解し、この酵素液を担体と混ぜて攪拌する方
法である。次いで、濾過等の操作により固・液分離を行
ない、得られた固定化酵素を適当な緩衝液で洗浄する。

緩衝液としてはリン酸緩衝液（ｐ　Ｈ６〜７）、トリス
塩酸緩衝液（ｐ　Ｈ７〜９）または蒸留水などが好適に
用いられる。

酵素の固定化量は、用いる酵素およびその比活性や担体
の種類等によっても異なるが、通常は担体１ｇ当りタン
パク質として１〜４０■、好ましくは２〜１５■が適当
である。

酵素の固定化量が担体１ｇ当りタンパク質として１■よ
り少ない場合、固定化率が高く、効率的に固定化するこ
とができるが、発現活性の絶対値が小さく、目的成分の
収量が少ない。一方、固定化量が担体１ｇ当りタンパク
質として４０■よりも多い場合、酵素固定化時の固定化
率が低下するため、酵素の使用効率が悪いばかりでなく
、発現活性として利用される割合も減少し、好ましくな
い。

そのほか、上記方法で得られる固定化マルトオリゴ糖生
成アミラーゼに対し、適当な多官能性架橋剤、たとえば
グルタルアルデヒドで処理することによって酵素の固定
化活性の維持性能を改良したものを用いても良い。

本発明者らは、種々の固定化酵素を用いてマルトオリゴ
塘を効率よく生成するため条件について種々検討を重ね
た結果、次のような因子等が大きく影響していることが
判った。すなわち、使用する基質の種類、濃度およびそ
の供給量、固定化担体の種類（物性）、固定化した酵素
量、その充填塔への充填量、反応系の温度、ｐＨ等の条
件などである。

これらを系統的に検討した結果、これら因子等の影響は
以下に示す表現および条件の範囲内において効率よくマ
ルトオリゴ糖を生成することができることを見出した。

すなわち、本発明の方法は、固定化マルトオリゴ糖生成
アミラーゼを反応器に充填し、前述の澱粉液化液を固定
化酵素単位活性あたりの重量基準空塔速度がｌＸｌ０−
’〜３×１０−４〜３×１０−’　（Ｉ　Ｕ／　ｇ　）
−’、好ましくは３Ｘ１０−’〜Ｉ　Ｘ　１０−４〜３
×１０−’　（Ｉ　Ｕ／　ｇ）　−’の条件で供給する
ことによって効率良くマルトオリゴ塘を製造するもので
ある。ここで、固定化酵素の単位活性あたりの重量基準
空塔速度は次のようにして求めた値である。まず、反応
器に充填するものと同じ固定化マルトオリゴ糖生成アミ
ラーゼ１０■（ｗｅｔ）を０．５ｍｆの１０ｒｎＭリン
酸バッフｙ　　　（ｐＨ７，０）（５０ｍ！三角フラス
コ中）に加え、十分に馴染ませた後、反応器に供給する
ものと同じ基質（Ｒ粉の種類、濃度等も同じ）５．０ｍ
ｌを加えて、反応器と同じ温度で往復振とう機により１
２０ストロークス／１ｌｌＩｎ−＋　　４ｃｍ幅で振と
うしながら酵素反応を行ない、生成還元糖をＳｏｍｏｇ
ｙｉ−Ｎｅｌｓｏｎ法で測定するか、高速液体クロマト
グラフィーのような分析機器で直接生成するマルトオリ
ゴ糖を測定して発現する活性を測定する（この発現活性
をＡ　　１０７ｇ−担体とする。）。また、反応器に充
填する固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼをＢ　ｇ　
（ｗｅｔ）、反応器に供給する澱粉液化液量を固形分と
してＣｇ−固形分／ｈｒとするとき、単位活性あたりの
重量基準空塔速度をＣ／　（ＡＸＢ）　ｈｒ−’　（Ｅ
　Ｕ／　ｇ）−’として求める。なお、ＤＢが大きい場
合には原料中に目的とするマルトオリゴ着やそれよりも
小さい糖を含むので、上記Ｃの値としてはそれらを除い
た固形分量を用いるのがより実際的である。単位活性あ
たりの重量基準空塔速度が３　Ｘ　１０−４〜３×１０
−鳳（ＩＵ／ｇ）−’よりも大きいと、すなわち反応器
中での反応時間が短いと、加水分解反応が十分におこな
われないため、マルトオリゴ糖の収率が悪くなり好まし
くない。

また、単位活性あたりの重量基準空塔速度が１×１０−
’ｈｒ−’　（Ｉ　Ｕ／　ｇ）　−’よりも小さくなる
と、すなわち反応器中での反応時間が長くなると、下記
の刊行物に明らかにされているように、生成したマルト
オリゴ糖がさらに過分解されるため、グルコース、マル
トース等の低分子の糖が生成され、製品の純度が著しく
低下するばかりでなく、後に精製分離を行なう場合の効
率を悪くするので好ましくない。

上記したマルトオリゴ糖の過分解については、マルトオ
リゴ穂先ムアミラーゼは、反応初期にはそれぞれのオリ
ゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース等）を特異的に生産
するが、反応後期になるにつれて生成物そのものを分解
することが明らかにされている（Ｔ、　　Ｎａｋａｋｕ
ｋｉ　ｅｔ　ａｌ　；Ｃａｒｂｏｈｙｄｒｏ、　　Ｒｅ
ｓ、、１２８．　２９７　（１９８４）　）。

本発明によれば、固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼ
の使用によって固定化しない元のマルトオリゴ糖生成ア
ミラーゼよりも反応条件の拡大が期待できる。たとえば
、本発明者が提案した固定化マルトテトラオース生成ア
ミラーゼ（特願昭６０−１８３４０号に開示）の場合に
は、温度安定性が１０℃程度高温側に広がると共にｐＨ
安定性も低ｐＨ側に１程度広がる。また、至適温度は固
定化により１０〜１５℃上昇し、至適ｐＨ曲線も酸性側
に広がることを見出しており、固定化酵素の酵素化学的
性質は可成り改善され、元の酵素を用いる場合よりも極
めて有利な条件で反応を行なうことができる。

本発明の方法によりマルトオリゴ糖を製造する場合、マ
ルトオリゴ糖の目的とする純度に応じて様々な製造方式
をとり得る。たとえば、純度２０〜６０％程度のマルト
オリゴ糖は、澱粉液化液を前述の固定化マルトオリゴ糖
アミラーゼを充填した反応器に前述の条件で供給するこ
とによって得られる。また、さらに高純度（６０〜１０
０％）のマルトオリゴ糖は、上記反応器から得られた生
成物をさらに精製分離することにより得られる。

この場合の精製分離手段は特に制限はなく種々の方法を
とりうるが、たとえば限外濾過、ゲル濾過。

カチオン交換樹脂カラムクロマトグラフィー、カーボン
カラムクロマトグラフィー等の手段が有効である。また
、上記精製分離を行なった際に得られる未分解物の一部
または全部を固定化マルトオリゴ糖主減酵素を充填した
反応器へ再循環させて供給原料の一部とすることによっ
て原料澱粉液化液あたりのマルトオリゴ糖収量を増大さ
せることができる。さらに、該未分解物の一部または全
部をそのままリミットデキストリンとして利用すること
もできる。

〔実施例〕

次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例１ 酵素としてマルトテトラオース生成アミラーゼ（シュー
ドモナス・ストツツェリ起源のもの、比活性８０．８１
Ｕ／■・タンパク質）を用い、担体としてダイヤイオン
系吸着樹脂５Ｐ−２０６を使用して固定化酵素を得た。

すなわち、担体２０ｇに対し２００００ＩＵの酵素をｐ
　Ｈ７，０の５０ｍＭリン酸緩衝液で１５０ｍ＃とじた
ものを５００ｍＡ三角フラスコに入れ、室温下１時間、
１２０ストロース、４ｃｍ幅で振とうしながら酵素を担
体に固定化した。次いで、これを濾過して濾液を除き、
さらに１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用いタン
パク質が流出しなくなるまで十分に洗浄して発現活性が
１３７１Ｕ／ｇの固定化酵素を得た。

得られた固定化酵素２０ｇを直径２７１．長さ１３０鶴
のカラムに充填した。当該カラムリアクターに原料とし
て２０−／−％ワキシーコーンスターチ液化液（ＤＥ７
．５）を４０　ｇ／ｈ　ｒ、すなわち単位活性あたりの
重量基準空塔速度２．９２Ｘｉ　ｏ−３，温度４５℃の
条件で供給した。３６０時間経過時点の反応生成物の組
成を第１表に示す。なお、該反応における酵素の半減期
は１６８０時間であった。

実施例２ 担体としてデュオライト系吸着樹脂Ｅ　Ｓ　−８６１０
を用いて実施例１と同様な方法で得た固定化マルトテト
ラオース生成アミラーゼ１０ｇ（発現活性１３９ＩＵ／
ｇ）を反応器に充填し、これに原料として１６．７　ｗ
／ｗ％可溶性澱粉（和光純薬■製）を１０．７ｇ／ｈｒ
（固形分として１．７９　ｇ　／ｈｒ）、温度４０℃の
条件で供給したく単位活性あたりの重量基準空塔速度１
．３　Ｘ　１０−’ｈｒ−’　（Ｉ　Ｕ／ｇ）−’）。

その運転結果を第１図に示す。

図から明らかなように、１５００時間を越えてきわめて
安定して運転を継続している。

また、カラムリアクター出口の反応生成物を膜の分画分
子量１０００の限界濾過装置を用いてマルトテトラオー
スを主成分として含む製品１と分離残の製品２とに分離
した。運転時間１５００時間経過時点の製品１の組成を
第１表に示す。

比較例１ 担体としてダイヤイオン系吸着樹脂ＨＰ−５０を用い、
実施例１と同様な方法で得た固定化マルトテトラオース
生成アミラーゼ７ｇ（発現活性１６７１Ｕ／ｇ）を反応
器に充填した。これに４．１６ｓ／％１％ワキシーコー
ンスターチの液化液（ＤＥ８）を温度４０℃にて１．２
１　ｇ　／ｈｒで供給（単位活性あたりの重量基準空塔
速度４．９Ｘ１０−’ｈｒ　（Ｉ　Ｕ／　ｇ）　−’）
　して反応生成物を得た。この生成物の組成を第１表に
示す。

比較例２ 担体としてダイヤイオン系吸着樹脂ＨＰ−５０を用い、
実施例１と同様な方法で得た固定化マルトテトラオース
生成アミラーゼ７ｇ（発現活性を温度４０℃にて５６．
０　ｇ　／ｈｒで供給（単位活性あたりの重量基準空塔
速度３．８　Ｘ　１０−４〜３×１０　（Ｉ　Ｕ／ｇ）
−’）して反応生成物を得た。この生成物の組成を第１
表に示す。

〔発明の効果〕

本発明の方法による澱粉液化液の供給条件により活性は
長時間保持され、目的のマルトオリゴ糖が効率よく製造
でき、しかも高純度のものが得られる。また、反応器運
転の際に広範囲の反応温度。

ｐＨが適用できる。

それ故、本発明の方法は工業的に有用なマルトオリゴ糖
の製造法である。

【図面の簡単な説明】

第１図は固定化酵素を使用したときの経過時間とマルト
テトラオースの相対活性を示すものである。 特許出願人　　食品産業バイオリアクターシステム技術
研究組合

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼを充填した
   反応器に澱粉液化液を固定化酵素単位活性あたりの重量
   基準空塔速度１×１０＾−＾４〜３×１０＾−＾２ｈｒ
   ＾−＾１（ＩＵ／ｇ）＾−＾１の条件で供給することを
   特徴とするマルトオリゴ糖の製造方法。
2. （２）固定化マルトオリゴ糖生成アミラーゼが、酵素と
   の親和性が８０％以上であり、かつ１００Å以上の細孔
   径を有する細孔の比表面積が２０〜３００ｍ＾２／ｇで
   ある多孔性担体に固定化せしめたものである特許請求の
   範囲第１項記載の方法。