JPS61282088A - 抗生物質ｒｋ−１０６１ａ，ｒｋ−１０６１ｂ、及びｒｋ−１０６１ｃ並びにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の技術分野） 本発明は、抗生物質ＲＫ−１０６１ＡＳＲＫ−１０６１
Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃ並びにその製造・法に関するも
のである。本発明のＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１
Ｂ、ＲＫ−１０６１Ｃはストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ
ＳＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃ生産菌を培養
して、その培養物中から分離採取される文献未載の新規
抗生物質である。

（発明の背景） 近年、抗生物質は、医療用のみならず農薬用としても利
用しろるものが数多く見出されている。

本発明者らは、従来より上記の如き有用な抗生物質の探
索を目的として、多数の土壌中から微生物を分離し、そ
の産出する抗生物質について、精製、同定及び用途の開
発を行ってぎた。

その結果、ストレプトミセス・（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ａｓ　）属に属する微生物の培養物中に文献未載の新規
抗生物質が産出、蓄積されることの知見を得、その単離
、精製に成功した。

（発明の目的） 本発明の目的は、新規な抗生物質および該抗生物質を放
線菌ストレプトミセス属に属する微生物から分離・採取
する方法を提供することにある。

（発明の構成） く使用する微生物〉 まず、本発明において用いる微生物は、抗生物質ＲＫ−
１０６１Δ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃの
生産能を有するものであり、ストレプトミセス属に属す
る菌種である。

その−例として、ストレプトミセス・エスピー・ＲＫ　
−Ｉ　Ｑ　（３１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｓ９．
　　ＲＫ　−１０６１（以下“ＲＫ−１０６１株”とい
う）と呼称される微生物は上記の特性を有し、本発明の
抗生物質ＲＫ−１０６１ＡＳＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ
−１０６１Ｃを有利に生産するものであり、本発明方法
に有効に利用し得るものである。

また、上記ＲＫ−１０６１株の自然的及び人工的変異株
は勿論、ストレプトミセス属に属する菌種で後述の抗生
物質ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１
０６１Ｃの生産能を有する微生物はすべて本発明方法に
おいて使用することができる。

上記ＲＫ−１０６１株は、本発明者により山梨県御坂町
で採取された土壌中より発見された土壌放線菌であり、
工業技術院微生物工業技術研究所に昭和６０年５月２９
日付寄託され、その微生物受託番号は、微工研菌寄第８
２７８号（ＦＢＲＭ　Ｐ−８２７８）である。

ＲＫ−１０６１株は、次の菌学的性質を有する。

■、形　態 ＲＫ−１０６１株は山梨県御坂町で採取した土壌より分
離した放線菌で全細胞の塩酸加水分解物のペーパークロ
マトグラフではり、Ｌ−ジアミノピメリン酸だけを検出
し、メソ−ジアミノピメリン酸は検出されない。各種寒
天培地上での生育試験では、試験した１０種の全ての培
地上に発育するが、スターチ・イーストエキス寒天培地
上での発育は良好で気中菌糸と胞子の着生は豊富だが、
これ以外の寒天培地上での気中菌糸と胞子の着生は良好
でない。１１種の糖を炭素源とする利用試験に於ては、
水頭は全ての糖を利用し発育する。本閑の気中菌糸は灰
色系であり、裏面は淡褐色系であって特徴はない。

脱脂牛乳中での発育では始めに凝固を起すが後にペプト
ン化し茶色の透明液を与える。澱粉を加水分解するが、
ゼラチンを液化しない。ペプトン・イーストエキス・鉄
寒天培地およびチロシン寒天培地上でメラニン色素の生
成が認められるが可溶性色素は淡褐色ないし灰色で特徴
ある色素の生成は認められない。電子顕微鏡の観察によ
ると気中菌糸は直状柔性であり、オートミール・硝酸塩
寒天培地およびポテトエキストラクト・イーストエキス
トラクト硝酸塩寒天培地上では３〜５回のらせん状菌糸
がみられ、前者培地では密ならせん状であるが後者では
オープンスパイラルである。一方イーストエキス、モル
トエキス寒天培地上に発育したものではらせん菌糸は認
め難い。水頭の胞子は菌糸先端より多数連なって形成さ
れらせん菌糸部分は胞子化する。胞子表面は平滑である
がしわ状である。

胞子の大きさは長さ０．５〜１．０マイクロメーター、
巾０，５〜０．７マイクロメーターである。スポランギ
アおよび運動性胞子は観察されなかった。

■、各各種培地−おける生育状態（２７℃　３週間培養
） 色調の記載はディスクリティブ・カラー・ネイムズ・デ
ィクショナリー（Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅｃｏｌｏｒ　
ｎａｍｅｓ　ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ　）第４版の色名記
号による。

１、シュクロース・硝酸塩寒天培地 発　　育：普　通 気　菌　糸：な　し 裏　　　面：２ｂａ（パール） 可溶性色素：な　し ２、グルコース・アスパラギン寒天培地発　　育：普　
通 気　菌　糸：な　し 裏　　　面＝２ｂａ（パール） 可溶性色素：な　し ３、グリセロール・アスパラギン寒天培地発　　育：普
　通 気　菌　糸：な　し 裏　　　面＝２ｂａ（パール） 可溶性色素：な　し ４、スターチ・無機塩寒天培地 発　　育：良　好 気　菌　糸：な　し 裏　　　面＝２ｂａ（パール） 可溶性色素：な　し ５、チロシン寒天培地 発　　育：普　通 気　菌　糸：少量ｂ　＋　３ｎｉ　＋　４ｎｉ（オイス
ターホワイト＋コバードブラウン＋チェストナツトブラ
ウン） 裏　　　面：　３ｐｎ　（ダークブラウン）可溶性色素
：３ｐ！（ディープブラウン）６、栄養寒天培地 発　　育：不　良 気　菌　糸：な　し 裏　　　面：３ｎｇ（イエローメイブル）可溶性色素：
３ｎｇ（イエローメイプル）７、イーストエキス・モル
トエキス寒天培地発　゛育：普　通 気　菌　糸：豊富ｅ（グレー） 裏　　　面：　３ｐｉ　（ゴールドブラウン）可溶性色
素：　３ｐｎ　（ダークブラウン）８、オートミール寒
天培地 発　　育：普　通 気　菌　糸：普通５ｇｅ（ローズウッド）裏　　　面：
４ｇｅ（ローズベイジニ）可溶性色素：な　し ９、ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地発　　育：
不　良 気　菌　糸：な　し 裏　　　　　面：　　２ｂａ　　（）く−ル）可溶性色
素：　５ｐｎ　（ダークブラウン）ｌＯ，スクーチ・イ
ーストエキス寒天培地発　　育：良　好 気　菌　糸：豊富４ｇｅ＋４ｊｌ！ｉ　　（ローズベイ
シュ＋ビーバー） 裏　　　面：４ｇｅ（ローズウッド５）可溶性色素：１
ｉｈ（オリーブグレー）■、炭素源の資化性（プリドハ
ム・ゴツトリーブ寒天培地）（２７℃培養） 発育状況 １、　　Ｌ−アラビノース　　　　＋＋２、　　Ｄ−キ
シロース　　　　　＋＋＋３、　　Ｄ−グルコース　　
　　　＋＋４、　　Ｄ−フルクトース　　　　　＋５、
　シュクロース　　　　　　　＋ ６、　イノシトール　　　　　　＋ ？、　　Ｌ−ラムノース　　　　　　＋８、　ラフィノ
ース　　　　　　　＋ ９、　　Ｄ−マンニトール　　　　　＋１０、　　ラク
トース　　　　　　　＋＋＋１１、　　メリビオース　
　　　　　＋＋＋：発育する 十＋：良く発育する ＋＋＋：非常に良く発育する ■、その他の生理的性質（２７℃培養）１、ゼラチンの
液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） 液化しない。

２・ｚｚ−ｆｏ″０４分Ｍ″（ｘ９−ｆ−ｆｕ慢崇り加
水分解する。

３、脱脂牛乳のＶ固とペプトン化 凝固しペプトン化する。

４、メラニン様色素の形成 チロシン寒天培地、ペプトン・イースト鉄寒天培地上で
の色素の生成がある。

５、生育温度 ２０〜３５℃ 上記の諸性質を有するストレプトミセス属、すなわち、
灰色系でスパイラル菌糸を有し、メラニン様色素を生成
し、胞子平面が平滑であり、前記記載の糖を利用する種
をパージエイズ・マニュアル・オブ・ディタミネイティ
ブ・バクテリ′オロジーΦ第８版（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　
Ｍａｎｎｕａｌｏｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｌｖｅＢａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　８ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ（１
９７４））により調べた。

その結果、水頭は、ストレプトミセス・グリゼオスボレ
ウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｒｉｓｅｏ−ｓｐ
ｏｒｅｕｓ　）か、これに極めて近縁の種と推定される
。

（培養法及び精製法） 本発明の抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ
及びＲＫ−１０６１Ｃを得るに当っては、ストレプトミ
セス属に属する上記抗生物質生産菌を、抗生物質を生産
する通常の方法で培養することができる。培養の形態は
、液体培養でも固体培養でもよく、工業的に有利に培養
するためには、前記生産菌の胞子懸濁液又は培養液を培
地に接種し、通気攪拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中に含有させることができる。炭素源としては、澱粉、
デキストリン、グリセリン、グルコース、シュクロース
、ガラクトース、イノシトール、マンニトールなどが、
また窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、米
ぬか、麩、尿素、コーンステイープリカー、アンモニウ
ム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の窒素化合物が
用いられる。その他、無機塩類、たとえば食塩、燐酸塩
類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄等の金
属塩類等を適宜に添加してもよく、必要に応じて消泡剤
として、動、植、鉱物油等を添加してもよい。培養温度
、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、しかも
ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６
１Ｃの生産が最高となるような条件が選ばれる。たとえ
ば、培地のｐＨは４〜９、特に６〜７付近がよく、培養
の適温は２５−３５℃程度がよい。しかし、これらの培
養組成物、培地の水素イオン濃度、培養温度、攪拌条件
などの培養条件は使用する菌株の種類や、外部の条件な
どに応じて好ましい結果が得られるように適宜調節され
るべきであることはいうまでもない。このようにして得
られる培養物から、ＲＫ−１０６１ＡＳＲＫ−１０６１
Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃを得るには、代謝産物を採取す
るのに通常用いられる手段を適宜に利用して採取し得る
。たとえば、ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及び
ＲＫ−１０６１Ｃと不純吻との溶解度差を利用する手段
、イオン結合力の差を利用する手段、吸着親和力の差を
利用する手段、分子量の差を利用する手段のいずれも、
それぞれ単独、又は、適宜組合わせて、あるいは反復し
て使用される。具体的には、ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−
１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃは、大部分が、その培
養濾液に存在するが、菌体中に存在する活性区分は、含
水アセトン抽出機アセトンを留去して得られる。これを
、前記培養濾液と合わせ、吸着クロマトグラフィー、シ
リカゲルクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー
、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグ
ラフィー等を組合せて精製すると、ＲＫ−１０６１Ａ、
ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃ及びその他の活
性成分を含んだ複合体（ＲＫ−１０６１１合体）を得る
。吸着クロマトグラフィーの担体としては、ダイヤイオ
ンＨＰ−１０が、液体クロマトグラフィーの担体として
は、　ＭＣＩ　　ＧＥＬＣＨＰ−２０Ｐが、イオン交換
クロマトグラフィーの担体としては、ダウエックス（Ｄ
ｏｗｅｘ）　　５０　ＷＸ４が、またゲル濾過クロマト
グラフィーの担体としては、セファデプクスＬＨ−２０
等が好適である。

得られたＲＫ−１０６１複合体を、高速液体クロマトグ
ラフィーに付すと、多成分のピークに分れる。使用カラ
ムは、逆相分配型のものが有利である。

得られたピークのうち、ＲＫ−１０６１Ａ。

ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃに相当するピー
クを、それぞれ分取し、濃縮、凍結乾燥することにより
、純粋なＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ
−１０６１Ｃを、ツレツレ得る。

［ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０
６１Ｃの理化学的性質、生物学的性質〕（１）形　状：
ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６
１Ｃのいずれも白色 粉末である。

（２）融　点：ＲＫ−１０６１ＡＳＲＫ−１０６１Ｂ及
びＲＫ−１０６１Ｃのいずれも１９０℃以上で分解する
。

（３）元素分析： ＲＫ−１０６１Ａ：　　炭素　５１．１３％　　水素　
６．５９％窒素　５．９７％　　硫黄　２．９２％Ｒに
−１０６１８：　　炭素　４９．３１％　　水素　６．
５３％窒素　６．６１％　　硫黄　２．７２％ＲＫ−１
０６１Ｃ：　　炭素　４９．５２％　　水素　６．６２
％窒素　６．６３％　　硫黄　２．９０％（４）分子Ｉ
　：　Ｆ　Ａ　Ｂ・マススペクトルによる。

ＲＫ−１０６１Ａ：１０３３　　Ｃ（Ｍ十Ｉ）　”　　
ｍ／ｚ　　１０３４（Ｍ　＋　Ｎａ）”　　ｍ／ｚ　　
１１０５６（＋Ｋ）”　　ｍ／ｚ　　１０７２）ＲＫ−
１０６１８：１００９　　（（Ｍ＋Ｉ）”　　ｍ／ｚ　
　１０１０（Ｍ　＋　Ｎａ）”　　ｍ／ｚ　　１０３２
（Ｍ＋Ｋ）”　　ｍ／ｚ　　１０４８）ＲＫ−１０６１
Ｃ：１００９　　（（Ｍ　＋　Ｉ）　＋ｍ／ｚ　　１０
１０（Ｍ　＋　Ｎａ）”　　　ｍ／ｚ　　　１１０３２
（＋Ｋ）”　　　ｍ／ｚ　　　１０４８］（５）比旋光
度： １？に一１０６１Ａ：　　Ｃａ　〕ｏ”　　＋１８．７
°（（’０．３、水）ＲＫ−１０６１８：　　Ｃ（２〕
ｏ２４＋　　１７．３°（Ｃ０，４、水）ＲＫ　１０６
１Ｃ：　　（ａ　〕ｏ”　　＋１８．９°（Ｃ０，９、
水）（６）紫外部吸収スペクトル：λ□Ｋｍμ（Ｅ　）
　　Ｃｍ （７）赤外部吸収スペクトル：　ＫＢｒ法によるＲＫ−
１０６１Ａ：　　３４００．　２９３０．　１７３５．
　１７００１６４０、　１４６０．　１４０５．　１２
７０１０８０、　１０２０．　８８５．　８２０７６５
、　５７５　ａｍ−’　（第４図参照）ＲＫ−１０６１
Ｂ：　　　３４５０．　　２９３０．　　１７３０．　
　１７００゜１６５０、　　１４６０．　　１４００．
　　１２６５゜１０７０、　　１０１５．　　　８７０
．　　　８２０゜７６５、　５８０　ｃｍ−’　（第５
図参照）ＲＫ−１０６１Ｃ：　　　３４２５．　　２９
４０．　　１７３５．　　１７００゜１６４０、　　１
４６０．　　１’３９５．　　１２７０゜１１１５、　
１０２０．　　８８５．　　８２０゜７７５、　５８０
　ａｍ−’　（第６図参照）（８）溶解性： ＲＫ−１０６１Ａ：　水に可溶、メタノールに難溶、そ
の他の有機溶媒に不溶。

ＲＫ−１０６１８：同　上 ＲＫ−１０６１Ｃ：同　上 （９）核磁気共鳴スペクトル： ４００ＭＨｚ　、溶媒［’［１，［ｌ［ｌＳｍ準Ｔ　Ｍ
　５ＲＫ−１０６１Ａ：　第７図のとおり。

Ｒに−１０６１８：　第８図のとおり。

Ｒに一１０６１Ｃ：　第９図のとおり。

ａＯＩＲｆ値（シリカゲル薄層クロマトグラフィー）：
溶　　　　　　媒　　　　　　　　Ｒｆ値氷水飽和ブタ
ノール　　　０３０４ ＲＫ−１０６１Ｂ：　　　　　同　　　上　　　　　　
　　　　同　　上ＲＫ−１０６１Ｃ’：　　　　　同　
　　上　　　　　　　　　　同　　上（ｌ０呈色反応：
　ＲＫ−１０６１Ａ、　ＲＫ−１０６１８及びＲＫ−１
０６１Ｃのいずれも過 マンガン酸カリウム溶液を脱色し、 アニスアルデヒド−硫酸試薬、ア ントロン試薬、ニンヒドリン試薬 に陽性である。

（Ｉ２）塩基性、酸性、中性の区別： ＲＫ−１０６１ＡＳＲＫ−１０６１Ｂ 及びＲＫ−１０６１Ｃのいずれも 濾紙電気泳動法による区別では、 酸性物質である。

（１３）抗菌スペクトル： ブイヨン寒天培地を用い、倍数希 釈法によって生育最少阻止濃度 （ＭＩＣ）を求めた。

（Ｉ４）ペプチドグリカン合成酵素阻害活性：大腸菌よ
り調製したペプチドグリカン合成酵素の粗酵素を用い基
質であるＵＤＰ−〔Ｕ−”Ｃ〕−Ｎ−アセチルグルコサ
ミンのペプチドグリカン画分への取りこみを測定し、Ｉ
Ｄ５ｏを求めた。

被験物質　　　ＩＱｓ。（μｇ／ｍ１ ＲＫ−１０６１Ａ　　　　　　　Ｏ，０４ＲＫ−１０６
１８０，０４ ＲＫ−１０６１ＣＯ，０４ 固急性毒性：マウスに対する静脈内投与で、Ａ。

Ｂ、Ｃそれぞれ１８０ｍｇ／ｋｇで異常はＳ忍められな
かった。

以上、本発明の抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ。

ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１Ｃの理化学的性質
及び生物学的性質を、既知の抗生物質と比較すると、分
子内に硫黄を含むこと、グラム陽性、グラム陰性菌に対
して抗菌作用を示し、且つペプチドグリカン合成酵素阻
害活性を示すことから、唯一の類似物質として、抗生物
質ムコペプチンＡ（特公昭５７−４０１６０号公報参照
）及びムコペプチンＣ（特公昭５８−３６７６号公報参
照）が挙げられる。しかしながら、これらは、比旋光度
、分子量、紫外部吸収スペクトルにおいて明らかに相異
が認められる。

又、紫外部吸収スペクトル、抗菌活性の類似している抗
生物質として、ツニカマイシン（Ｔｕｎｉｃａ−ｍｙｃ
ｉｎ）　（ジャーナル・オブ・アンチバイオティクｘ　
（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）Ｖ
ｏｌ、　２４　、　Ｎｏ、　４　。

２１５（１９７１）参照〕及び５Ｆ−１９９９物質〔明
治製菓■研究年報Ｎｏ、　２２．１−８（１９８３）参
照〕が挙げられるが、これらは、分子内に硫黄を含まな
い。

以上の点から、本発明の抗生物質ＲＫ　−１０６１ＡＲ
Ｋ−１０６１Ｂ及びＲＫ−１０６１ＣＬ！、新規物質で
あると結論した。

本発明ノＲＫ−１０６１Ａ、　ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲ
Ｋ−１０６１Ｃは、各種細菌に対して抗菌活性を有する
こと、ペプチドグリカン合成酵素阻害活性を有すること
から、抗菌剤としての利用が期待される。

以下に、本発明を実施例によって説明する。

〈実施例〉 ３０β容積のジャーファーメンタ−に入れたグルコース
２％、可溶性澱粉１％、肉エキス０．１％、酵母０．４
％、大豆粉２．５％、食塩０．２％、第二燐酸力’Ｊ　
Ｏ，ＯＯ５％の組成よりなる培地１８１に、あらかじめ
同一培地に、前記ＲＫ−１０６１株（微工研菌寄第８２
７８号）を接種して４８〜７２時間２８℃で振盪培養し
た培養液１４０ｒｒ＋ｊ！を接種して２８℃で６５〜７
０時間、ｐＨが８．４を越えるまで通気攪拌培養を行う
。こ、のときの通気量は毎分１８１、攪拌回転数は３５
０ｒｐｍである。

培養終了後、培養液に濾過助剤セライトを加えて遠心濾
過し菌体と濾液とに分ける。菌体は８０％アセトン１５
１を用いて抽出し、これを減圧濃縮してアセトンを溜去
し２．５１の水溶液を得る。

濾液７５β（ジャーファーメンタ−６基分）を、１（Ｃ
βでｐＨ７，０に調整した後、先に得られた菌体抽出水
溶液と共にダイヤイオンＨＰ−１０Ｍの樹脂塔に通過し
、吸着させる。２０βの水を用いて洗浄後、３０％含水
メタノール２ＯＡを用いて溶出を行なうと、不純物が溶
出される。次いで、５０％含水アセトン４０βを用いて
溶出を行うと、活性部分が溶出される。これを減圧下に
濃縮し、濃縮液６１を得る。これに３１のｎ−ブタノー
ルを加えてブタノール抽出を行なう。この操作を３回繰
り返し活性成分を含むブタノール層１０１を得る。ブタ
ノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥すると２７．９　ｇの
ＲＫ−１０６１複合体の粗粉末を得る。この粗粉末をク
ロロホルム−メタノールの溶剤系を用いてシリカゲルの
カラム（６，ＯＸ　６５ｃｍ）によりクロマトグラフィ
ーを行なう。活性はクロロホルム−メタノール の溶出区分に現われる。活性画分を減圧濃縮し、凍結乾
燥すると１　６．　０　ｇの粗粉末が得られる。

この粗粉末を少量の１０％含水アセトンに溶解し、予め
同一溶液で調製したＭＣＩ−ゲルのカラム（３．ＯＸ７
５ｃｍ）にチャージして、１０％含水アセトンで十分洗
浄の後、５０％含水アセトンにて活性成分を溶出する。

活性部分を集めて減圧濃縮し、凍結乾燥すると２．５ｇ
の粗粉末が得られる。

水に不溶の不純物を除くために、室温で２８００ｒｐｍ
ｌＯ分間の遠心を行なう。上清を減圧濃縮し、凍結乾燥
すると１．２ｇの粗粉末が得られる。

この粗粉末を少量の０．１Ｍピリジン−酢酸（ｐＨ４．
０）の緩衝液に溶解し、予め同一緩衝液で調製した陽イ
オン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ　　５　０　ＷＸ　４（　１　
０　０　−　２　０　０ｍｅｓｈ）カラム（３．ＯＸ８
０Ｃｍ）を通過させる。同一緩衝液にて素通りしてきた
活性部分を減圧濃縮し、凍結乾燥すると６　２　０　ｍ
ｇの粗粉末が得られる。

さらに、これをセファデックスＬＨ−２０カラム（２。

２Ｘ７２Ｃｍ）にかけ、３０％含水メタノールにて展開
し、活性部分を減圧濃縮し、凍結乾燥することによりＲ
Ｋ−１０６１複合体粉末３２０ｍｇを得る。

このＲＫ−１０６１複合体の精製は、逆相カラム（ヌク
レオジル５Ｃ１６、φ８Ｘ２５０ｍｍ）を用いた高速液
体クロマトグラフィーを、アセトニトリル−０．１％ジ
エチルアミン・ギ酸（ｐＨ４．０）（４０：　　６０）
の溶媒系で流速２ｍＩ！／分ニテ行なうと多成分のピー
クに分かれる（第１０図参照）。

この溶媒系で、保持時間１７分付近のピークを分取し、
アセトンを除去後、混在する塩を除くために少量のＭＣ
Ｉゲルカラムを通過させ、十分水洗後、５０％含水アセ
トンにて活性成分を溶出させる。アセトンを除去後、凍
結乾燥するとＲＫ−１０６１Ａの白色粉末３．　４　ｍ
ｇが得られる。場合によっては、数回ピークの分取を行
なって精製を進める。

同様の方法にて、保持時間１９分付近のピークを分取す
ることにより、ＲＫ−１０６１Ｂ　　１５．７ｍｇが得
られる。

又、保持時間２１分付近のピークを分取することにより
、ＲＫ−１０６１Ｃ　　１６．７ｍｇが得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図は、それぞれ本発明の抗生物質
ＲＫ−１　０　６　１ＡＳＲＫ−１　０　６　１Ｂ。 ＲＫ−１０６１Ｃの紫外部吸収スペクトルを示す図面で
あり、第４図、第５図、第６図は、それぞれＲＫ−１　
０　６　１ＡＳＲＫ−１　０　６　１Ｂ，ＲＫ−１０６
１Ｃの赤外部吸収スペクトルを示す図面であり、第７図
、第８図、第９図は、それぞれ、ＲＫ−１０６１Ａ，Ｒ
Ｋ−１０６１Ｂ，ＲＫ−１０６１Ｃの核磁気共鳴スペク
トルを示す図面であり、第１０図は、高速液体クロマト
グラフィーによるＲＫ−１０６１Ａ，ＲＫ−１０６１Ｂ
及びＲＫ−１０６１Ｃのピークを示すクロマトグラムで
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質及び生物学的性質を有する抗生
   物質ＲＫ−１０６１Ａ。 （１）形状：白色粉末 （２）融点：１９０℃以上で分解 （３）元素分析：炭素５１．１３％　水素６．５９％窒
   素５．９７％　硫黄２．９２％ （４）分子量：１０３３ （ＦＡＢ・マススペクトル： （Ｍ＋１）＾＋　ｍ／ｚ　１０３４、 （Ｍ＋Ｎａ）＾＋　ｍ／ｚ　１０５６、 （Ｍ＋Ｋ）＾＋　ｍ／ｚ　１０７２） （５）比旋光度：〔α〕＾２＾４＿Ｄ＋１８．７°（Ｃ
   ０．３、水）（６）紫外部吸収スペクトル： λｍａｘ　ｍμ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水中：２６
   ０（６０） ０．１Ｎ塩酸中：２５８（４４） ０．１Ｎ苛性ソーダ中：２５９（５８） （７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法による３４００
   、２９３０、１７３５、１７００、１６４０、１４６０
   、１４０５、１２７０、１０８０、１０２０、８８５、
   ８２０、７６５、５７５ｃｍ＾−＾１ （８）溶解性：水、ジメチルスルホキシドに易溶、メタ
   ノール、エタノールに可溶、ア セトン、酢酸エチル、クロロホルム に不溶である。 （９）Ｒｆ値：（薄膜クロマトグラフィー）シリカゲル
   ：ブタノール・メタノール・水 （４：１：２）　０．３６ ：クロロホルム・メタノール （１：３）　０．６８ ：水飽和ブタノール　０．０４ （１０）呈色反応：過マンガン酸カリウム溶液を脱色す
   る。アニスアルデヒド−硫酸 試薬、アントロン試薬、ニンヒ ドリン試薬に陽性である。 （１１）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質（濾紙電
   気泳動法による。） （１２）抗菌スペクトル：グラム陽性菌、グラム陰性菌
   、抗酸性菌に対し、抗菌活性 を示す。 ２、下記の理化学的性質及び生物学的性質を有する抗生
   物質ＲＫ−１０６１Ｂ。 （１）形状：白色粉末 （２）融点：１９０℃以上で分解 （３）元素分析：炭素４９．３１％　水素６．５３％窒
   素６．６１％　硫黄２．７２％ （４）分子量：１００９ （ＦＡＢ・マススペクトル： （Ｍ＋１）＾＋　ｍ／ｚ　１０１０ （Ｍ＋Ｎａ）＾＋　ｍ／ｚ　１０３２ （Ｍ＋Ｋ）＾＋　ｍ／ｚ　１０４８） （５）比旋光度：〔α〕＾２＾４＿Ｄ＋１７．３°（Ｃ
   ０．４、水）（６）紫外部吸収スペクトル： λｍａｘ　ｍμ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水中：２６
   ２（７２） ０．１Ｎ塩酸中：２６０（５１） ０．１Ｎ苛性ソーダ中：２６１（７１） （７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ′法による３４５
   ０、２９３０、１７３０、１７００、１６５０、１４６
   ０、１４００、１２６５、１０７０、１０１５、８７０
   、８２０、７６５、５８０ｃｍ＾−＾１ （８）溶解性：水、ジメチルスルホキシドに易溶、メタ
   ノール、エタノールに可溶、ア セトン、酢酸エチル、クロロホルム に不溶である。 （９）Ｒｆ値：（薄膜クロマトグラフィー）シリカゲル
   ：ブタノール・メタノール・水 （４：１：２）　０．３６ ：クロロホルム・メタノール （１：３）　０．６８ ：水飽和ブタノール　０．０４ （１０）呈色反応：過マンガン酸カリウム溶液を脱色す
   る。アニスアルデヒド−硫酸 試薬、アントロン試薬、ニンヒ ドリン試薬に陽性である。 （１１）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質（濾紙電
   気泳動法による。） （１２）抗菌スペクトル：グラム陽性菌、グラム陰性菌
   、抗酸性菌に対し、抗菌活性 を示す。 ３、下記の理化学的性質及び生物学的性質を有する抗生
   物質ＲＫ−１０６１Ｃ。 （１）形状：白色粉末 （２）融点：１９０℃以上で分解 （３）元素分析：炭素４９．５２％　水素６．６２％窒
   素６．６３％　硫黄２．９０％ （４）分子量：１００９ （ＦＡＢ・マススペクトル： （Ｍ＋１）＾＋　ｍ／ｚ　１０１０、 （Ｍ＋Ｎａ）＾＋　ｍ／ｚ　１０３２、 （Ｍ＋Ｋ）＾＋　ｍ／ｚ　１０４８） （５）比旋光度：〔α〕＾２＾４＿Ｄ＋１８．９°（Ｃ
   ０．９、水）（６）紫外部吸収スペクトル： λｍａｘ　ｍμ（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）水中：２６
   ２（６９） ０．１Ｎ塩酸中：２６０（５１） ０．１Ｎ苛性ソーダ中：２６１（６２） （７）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ法による３４２５
   、２９４０、１７３５、１７００、１６４０、１４６０
   、１３９５、１２７０、１１１５、１０２０、８８５、
   ８２０、７７５、５８０ｃｍ＾−＾１ （８）溶解性：水、ジメチルスルホキシドに易溶、メタ
   ノール、エタノールに可溶、ア セトン、酢酸エチル、クロロホルム に不溶である。 （９）Ｒｆ値：（薄膜クロマトグラフィー）シリカゲル
   ：ブタノール・メタノール・水 （４：１：２）　０．３６ ：クロロホルム・メタノール （１：３）　０．６８ ：水飽和ブタノール　０．０４ （１０）呈色反応：過マンガン酸カリウム溶液を脱色す
   る。アニスアルデヒド−硫酸 試薬、アントロン試薬、ニンヒ ドリン試薬に陽性である。 （１１）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質（濾紙電
   気泳動法による。） （１２）抗菌スペクトル：グラム陽性菌、グラム陰性菌
   、抗酸性菌に対し、抗菌活性 を示す。 ４、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属
   に属する抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ
   及びＲＫ−１０６１Ｃ生産菌を培養し、その培養物から
   抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ
   −１０６１Ｃをそれぞれ分離採取することを特徴とする
   抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及びＲＫ
   − １０６１Ｃの製造法。 ５、抗生物質ＲＫ−１０６１Ａ、ＲＫ−１０６１Ｂ及び
   ＲＫ−１０６１Ｃ生産菌がストレプトミセス・エスピー
   ・ＲＫ−１０６１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｓｐ．
   ＲＫ−１０６１）である特許請求の範囲第４項記載の製
   造法。